專利名稱：一種復(fù)方人參制劑的制備方法及其抗氧化活性的制作方法
一種復(fù)方人參制劑的制備方法及其抗氧化活性技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明所屬醫(yī)藥產(chǎn)品研究開發(fā)技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明涉及一種復(fù)方人參制劑的制備方法及其抗氧化活性。
背景技術(shù)：
人參Panax ginseng C. A. Mey.為五加科植物人參的根，性平、味甘、微苦，微溫。 歸脾、肺經(jīng)。大補(bǔ)元?dú)猓瑥?fù)脈固脫，補(bǔ)脾益肺，生津止渴，安神益智。主要含人參皂苷，尚含有機(jī)酸及酯類、維生素類、留醇、腺苷轉(zhuǎn)化酶、L-天冬氨酸酶、β-淀粉酶、蔗糖轉(zhuǎn)化酶；麥芽醇、山柰酚、人參黃酮苷及銅、鋅、鐵、錳等二十多種微量元素。人參能調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)興奮過程和抑制過程的平衡，對學(xué)習(xí)記憶的影響有雙向性及成分依賴性，能促進(jìn)蛋白質(zhì)的合成、RNA的合成及DNA的合成、對腦血流量和腦能量代謝亦有明顯的影響，能使動物大腦更合理地利用能量物質(zhì)葡萄糖，氧化產(chǎn)能，合成更多的ATP供學(xué)習(xí)記憶等活動之用、可改變機(jī)體的反應(yīng)性，具有“適應(yīng)原”樣作用，即能增強(qiáng)機(jī)體對各種有害刺激的反應(yīng)能力，加強(qiáng)機(jī)體適應(yīng)性，對多種動物的心臟均有先興奮后抑制、小量興奮，大量抑制的作用，對心肌有保護(hù)作用；人參或其提取物，能顯著地提高動物耐缺氧的能力，使耗氧速度減慢，存活時(shí)間延長，并能使心房在缺氧條件下收縮時(shí)間延長。人參或其提取物對骨髓的造血功能有保護(hù)和刺激作用，能使正常和貧血?jiǎng)游锛t細(xì)胞數(shù)、白細(xì)胞數(shù)和血紅蛋白量增加。人參具有抑制血小板聚集的作用，降血脂和抗動脈粥樣硬化作用，能減輕豚鼠血清誘發(fā)的過敏性休克，而延長其生存時(shí)間，能增加肝臟代謝各物質(zhì)的酶活性，使肝臟的解毒能力增強(qiáng)，從而增強(qiáng)機(jī)體對各種化學(xué)物質(zhì)的耐受力，對垂體-腎上腺皮質(zhì)系統(tǒng)有刺激作用，對正常血糖及因注射腎上腺素和高滲葡萄糖引起的高血糖病均有抑制作用，人參及其皂苷對機(jī)體各組織的RNA和蛋白質(zhì)合成均有促進(jìn)作用，人參皂苷可促進(jìn)脂質(zhì)代謝，人參具有推遲細(xì)胞衰老，延長細(xì)胞壽命的功能。 人參皂苷和人參多糖對正常動物網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬功能有刺激作用。人參具有抗腫瘤、抗疲勞、抗衰老作用。
黨參為桔梗科多年生草本植物黨參、素花黨參、川黨參及其同屬多種植物的根。具有補(bǔ)中益氣，健脾益肺之功效。黨參含多種糖類、酚類、留醇、揮發(fā)油、黃芩素葡萄糖苷、皂苷及微量生物堿，具有增強(qiáng)免疫力、擴(kuò)張血管、降壓、改善微循環(huán)、增強(qiáng)造血功能等作用。此外對化療放療引起的白細(xì)胞下降有提升作用。
紫球藻(Porphyridium cruentum)是屬于紅藻門的一種單細(xì)胞紅藻，在生長過程中能大量合成胞外硫酸酯多糖、藻膽蛋白和多不飽和脂肪酸等生物活性物質(zhì)。紫球藻藻紅蛋白占藻膽蛋白84%，其中以B-藻紅蛋白含量最多。藻紅蛋白用途廣泛，它既可作為天然色素應(yīng)用于食品、化妝品、染料等工業(yè)，又可制成熒光試劑用于臨床醫(yī)學(xué)診斷和免疫化學(xué)及生物工程等領(lǐng)域，藻紅蛋白還是一種具有開發(fā)潛力的光敏劑，用于腫瘤的光動力治療。紫球藻的胞外硫酸化多糖抗病毒特性突出，具有抗腫瘤、抗過敏、抗氧化、降血脂、調(diào)血脂等功能。因此，綜合開發(fā)紫球藻藻紅蛋白、多糖和藻粉系列產(chǎn)品，社會經(jīng)濟(jì)效益明顯。
人體在生命活動的氧化代謝過程中會不斷產(chǎn)生各種自由基，體內(nèi)過多自由基對生物大分子造成損傷，導(dǎo)致細(xì)胞和組織的結(jié)構(gòu)和功能減退，并對機(jī)體的衰老過程產(chǎn)生影響，最終導(dǎo)致疾病的發(fā)生。而人工合成的抗氧化劑具有一定的毒性和致癌作用。所以評價(jià)和篩選具有強(qiáng)抗氧化活性的天然植物已成為醫(yī)學(xué)、生物學(xué)和食品科學(xué)研究的新趨勢。采用典型的體外抗氧化體系，以抗壞血酸為對照，評價(jià)復(fù)方人參制劑的抗氧化活性，為更好的開發(fā)利用復(fù)方人參資源為抗氧化活性產(chǎn)品，提供理論依據(jù)。
DPPH 法DPPH 為 1，1_ 二苯基 _2_ 三硝基苯胼(1，l-Diphenyl-2-picrylhydrazyl radical2, 2-Diphenyl-l-(2,4,6-trinitrophenyl) hydrazyl) DPPH 法于 1958 年被提出，廣泛用于測定食品的抗氧化能力。此法是根據(jù)DPPH自由基有單電子，在517nm處有一強(qiáng)吸收， 其醇溶液呈紫色的特性。當(dāng)有自由基清除劑存在時(shí)，由于與其單電子配對而使其吸收逐漸消失，其褪色程度與其接受的電子數(shù)量成定量關(guān)系，因而可用分光光度計(jì)進(jìn)行快速定量分析。發(fā)明內(nèi)容
1. 一種具有抗氧化作用的復(fù)方人參制劑的制備方法，其特征在于包括以下過程
(1)原料藥的重量配比為人參9g_12g、黨參6g_9g、紫球藻10g_20g ；
(2)將人參和黨參加入8-10倍量70%乙醇室溫下浸提8_10h，再密封超聲30min， 溫度為30°C，功率為80W，然后用紗布過濾，濾渣再分別用6倍量與4倍量70%的乙醇重復(fù)提取各一次，過濾，得濾液；
(3)將⑵中的濾液合并，回收乙醇，得到人參、黨參提取物；
(4)將紫球藻用5000r/min離心機(jī)離心lOmin，然后懸浮于pH7. 4,50mmol/L的磷酸緩沖液中，進(jìn)行超聲破碎，破碎5s，間隔5s，20次，用lOOOOr/min高速冷凍離心機(jī)離心 15min，得上清液，冷凍干燥，得干燥物；
(5)將(4)中的干燥物與(3)中的人參、黨參提取物混合均勻，得復(fù)方人參制劑。
2.將復(fù)方人參制劑進(jìn)行試驗(yàn)，該制劑具有抗氧化作用
根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明中的“ ％，，是重量百分比。
具體實(shí)施方式
本發(fā)明所述的涉及一種復(fù)方人參制劑的制備方法及其抗氧化活性包括以下實(shí)施例，下面的實(shí)施例可進(jìn)一步說明本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。
實(shí)施例1
1. 一種具有抗氧化作用的復(fù)方人參制劑的制備方法，其特征在于包括以下過程
(1)原料藥的重量配比為人參9g、黨參6g、紫球藻IOg ；
(2)將人參和黨參加入8倍量70%乙醇室溫下浸提8，再密封超聲30min，溫度為 30°C，功率為80W，然后用紗布過濾，濾渣再分別用6倍量與4倍量70%的乙醇重復(fù)提取各一次，過濾，得濾液；
(3)將⑵中的濾液合并，回收乙醇，得到人參、黨參提取物；
(4)將紫球藻用5000r/min離心機(jī)離心lOmin，然后懸浮于pH7. 4，50mmol/L的磷酸緩沖液中，進(jìn)行超聲破碎，破碎5s，間隔5s，20次，用lOOOOr/min高速冷凍離心機(jī)離心 15min，得上清液，冷凍干燥，得干燥物；
(5)將(4)中的干燥物與(3)中的人參、黨參提取物混合均勻，得復(fù)方人參制劑。
2.將復(fù)方人參制劑進(jìn)行試驗(yàn)，該制劑具有抗氧化作用
實(shí)施例2
1. 一種具有抗氧化作用的復(fù)方人參制劑的制備方法，其特征在于包括以下過程
(1)原料藥的重量配比為人參12g、黨參9g、紫球藻20g ；
(2)將人參和黨參加入10倍量70%乙醇室溫下浸提10h，再密封超聲30min，溫度為30°C，功率為80W，然后用紗布過濾，濾渣再分別用6倍量與4倍量70%的乙醇重復(fù)提取各一次，過濾，得濾液；
(3)將⑵中的濾液合并，回收乙醇，得到人參、黨參提取物；
(4)將紫球藻用5000r/min離心機(jī)離心lOmin，然后懸浮于pH7. 4，50mmol/L的磷酸緩沖液中，進(jìn)行超聲破碎，破碎5s，間隔5s，20次，用lOOOOr/min高速冷凍離心機(jī)離心 15min，得上清液，冷凍干燥，得干燥物；
(5)將(4)中的干燥物與(3)中的人參、黨參提取物混合均勻，得復(fù)方人參制劑。
2.將復(fù)方人參制劑進(jìn)行試驗(yàn)，該制劑具有抗氧化作用一種復(fù)方人參制劑的的抗氧化試驗(yàn)
1復(fù)方人參制劑對DPPH清除率的測定
1.1DPPH溶液的制備
精密稱定DPPH樣品0. Olg,加入無水乙醇定容至250ml容量瓶中，得到DPPH溶液， 濃度為 0. (Mmg/ml。
1.2樣品溶液的制備
精密稱取復(fù)方人參制劑0. 4g置于50ml具塞容量瓶中，加入適量的蒸餾水，密封超聲30min，待其溶解完全后，再加入蒸餾水定容至50ml，得到樣品母溶液，濃度為8mg/ml，備用。在樣品母溶液中，用移液槍精密移取體積為0. 003125，0. 00625,0. 0125,0. 025,0. 05， 0. 1,0. 2,0. 4ml的樣品母液，用蒸餾水定容于IOml容量瓶中得到濃度為0. 0025,0. 005， 0. 01，0. 02，0. 04，0. 08，0. 16，0. 32mg/ml 的樣品溶液。
1.3樣品對DPPH的清除作用
準(zhǔn)確移取不同濃度的樣品溶液分別與DPPH溶液和無水乙醇溶液等體積混合于不同試管中，搖勻，在黑暗中放置30min，在515nm下測定其吸光度值分別為Ai和Ai。另取蒸餾水與DPPH溶液等體積混合于試管中，測得吸光度值為A。其中以蒸餾水和無水乙醇混合為空白對照試驗(yàn)。并按
下面公式計(jì)算清除率。
清除率=(A-Ai+AJ)/AX100%
2復(fù)方人參制劑對羥自由基清除率的測定
2. 1樣品溶液的制備
精密稱取復(fù)方人參制劑0. 25g置于50ml具塞容量瓶中，加入適量的蒸餾水，密封超聲30min，待其溶解完全后，定容至刻度，得到樣品母溶液，備用。在樣品母溶液中，用移液槍精密移取體積為 5 μ 1，10 μ 1，20 μ 1，40 μ 1，80 μ 1，160 μ 1，320 μ 1，640 μ 1 的樣品母液， 用蒸餾水定容于IOml容量瓶中得到濃度為0. 0025,0. 005,0. 01,0. 02,0. 04,0. 08,0. 16， 0. 32mg/ml的樣品溶液。
2. 2試劑的制備
稱取0. 2032g甲基紫用去離子水定容于IOOml容量瓶中，備用。用鹽酸調(diào)Tris緩沖溶液PH為5，備用。取30%的H2A溶液1. OmL，用去離子水定容于IOOmL容量瓶中，備用。 稱取0. 0695gFeS04 · 7H20用水定容于50mL容量瓶中，備用(現(xiàn)用現(xiàn)配)。
2. 3羥自由基· OH的產(chǎn)生及測定
取配制好的甲基紫溶液2mL，Tris緩沖液lmL，按順序放入IOmL的刻度管中。并用去離子水定容至刻度，搖勻靜置三十分鐘，記為A578。
取配制好的甲基紫溶液2mL，Tris緩沖液lmL，F(xiàn)e2+溶液lmL，H2O2溶液ImL按順序放入IOmL的刻度管中。并用去離子水定容至刻度，搖勻靜置三十分鐘，記為A00
取配制好的甲基紫溶液2mL，Tris緩沖液lmL，不同濃度梯度的待測液2mL，F(xiàn)e2+溶液lmL，H2O2溶液ImL按順序放入IOmL的刻度管中。并用去離子水定容至刻度，搖勻靜置三十分鐘。平行三次，記為As。
以去離子水做空白實(shí)驗(yàn)，用721紫外分光光度計(jì)在578的波長下測定其吸光度。
2. 4羥自由基· OH清除率的計(jì)算
利用公式清除率<% = (As-A0)/(A578-A0) X100%,得出樣品提取液對羥自由基的清除率。
63復(fù)方人參制劑的抗氧化結(jié)果3. 1復(fù)方人參制劑對DPPH和羥自由基的清除率見表1。表1復(fù)方人參制劑對DPPH和羥自由基的清除率結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種具有抗氧化作用的復(fù)方人參制劑的制備方法，其特征在于包括以下過程(1)原料藥的重量配比為人參9g-12g、黨參6g-9g、紫球藻10g-20g；(2)將人參和黨參加入8-10倍量70%乙醇室溫下浸提8-10h，再密封超聲30min，溫度為30°C，功率為80W，然后用紗布過濾，濾渣再分別用6倍量與4倍量70%的乙醇重復(fù)提取各一次，過濾，得濾液；(3)將O)中的濾液合并，回收乙醇，得到人參、黨參提取物；(4)將紫球藻用5000r/min離心機(jī)離心lOmin，然后懸浮于pH7.4,50mmol/L的磷酸緩沖液中，進(jìn)行超聲破碎，破碎k，間隔k，20次，用lOOOOr/min高速冷凍離心機(jī)離心15min， 得上清液，冷凍干燥，得干燥物；(5)將中的干燥物與(3)中的人參、黨參提取物混合均勻，得復(fù)方人參制劑。
2.如權(quán)利要求1中所述的一種復(fù)方人參制劑的用途，其特征在于制備抗氧化作用藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明所屬醫(yī)藥產(chǎn)品研究開發(fā)技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明涉及一種復(fù)方人參制劑的制備方法及其抗氧化活性。將人參、黨參加入70％乙醇室溫下浸提，再超聲30min，溫度為30℃，功率為80W，過濾，濾渣再分別用6倍量與4倍量70％的乙醇重復(fù)提取各一次，過濾，得濾液；將濾液合并，回收乙醇，得到人參、黨參提取物；將紫球藻用5000r/min離心機(jī)離心10min，然后懸浮于pH7.4，50mmol/L的磷酸緩沖液中，進(jìn)行超聲破碎，用高速冷凍離心機(jī)離心，得上清液，冷凍干燥，得干燥物，將此干燥物與人參、黨參提取物混合均勻，得復(fù)方人參制劑。本發(fā)明產(chǎn)品具有抗氧化作用。
文檔編號A61K36/344GK102512476SQ20121000987
公開日2012年6月27日 申請日期2012年1月1日 優(yōu)先權(quán)日2012年1月1日
發(fā)明者侯欣池, 張崇禧, 張成城, 鄭友蘭 申請人:山東大學(xué)威海分校