專利名稱：穩(wěn)定等滲的凍干蛋白質(zhì)制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種凍干的蛋白質(zhì)制劑。更具體地，本發(fā)明涉及一種穩(wěn)定的凍干蛋白質(zhì)制劑，它可用稀釋劑重建生成一種適用于皮下給藥的穩(wěn)定的重建的制劑。相關(guān)技術(shù)在過去的十年內(nèi)，生物技術(shù)的發(fā)展使得可以用重組DNA技術(shù)來生產(chǎn)各種用于藥物用途的蛋白質(zhì)。由于蛋白質(zhì)比常用的有機(jī)和無機(jī)藥物更大更復(fù)雜(即除了有復(fù)雜的三維空間結(jié)構(gòu)外還有多個官能團(tuán))，因此這些蛋白質(zhì)的制劑引起了一些特殊的問題。為了使蛋白質(zhì)有生物活性，制劑必須保證至少蛋白質(zhì)氨基酸核心序列的構(gòu)象完整性，而且同時還要保護(hù)蛋白質(zhì)的多官能團(tuán)防止其降解。蛋白質(zhì)降解的途徑包括化學(xué)不穩(wěn)定性(即，任何通過鍵的形成或斷裂來修飾蛋白質(zhì)生成新的化學(xué)物質(zhì))或物理不穩(wěn)定性(即，蛋白質(zhì)高級結(jié)構(gòu)的改變)?；瘜W(xué)不穩(wěn)定性可由脫酰胺作用、外消旋化、水解、氧化、β消去或二硫化物交換引起。 物理不穩(wěn)定性是由例如變性、凝聚、沉淀或吸附引起。三種最常見的蛋白質(zhì)降解途徑是蛋白質(zhì)凝聚、脫酉先胺禾口氧化(Cleland 等人，Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems 10(4) :307-377(1993))。冷凍干燥是一種常用的保藏蛋白質(zhì)的技術(shù)，它可將所關(guān)心的蛋白質(zhì)制品中的水除去。冷凍干燥或凍干的方法是先將待干燥的物質(zhì)冷凍，然后在真空環(huán)境下升華除去冰或冷凍的溶劑。在凍干前的制劑中可包括賦形劑，以在冷凍干燥過程中提高穩(wěn)定性和/或在保藏時提高凍干產(chǎn)品的穩(wěn)定性(Pikal, M. Biopharm. 3 (9) 26-30 (1990)和Arakawa等人， Pharm. Res. 8 (3) :285-291 (1991))。本發(fā)明的一個目的是提供一種在保藏和運(yùn)輸時穩(wěn)定的凍干蛋白質(zhì)制劑。還有一個目的是提供一種用于皮下給藥的穩(wěn)定的重建的蛋白質(zhì)制劑。在某些例子中，本發(fā)明的一個目的是提供一種多次性使用的制劑，它至少在對病人給藥的時間內(nèi)是穩(wěn)定的。發(fā)明概述本發(fā)明的根據(jù)是發(fā)現(xiàn)用一種凍干保護(hù)劑(lyoprotectant)(最好是糖類如蔗糖或海藻糖)可制得穩(wěn)定的凍干蛋白質(zhì)制劑，凍干的制劑可重建生成穩(wěn)定的重建制劑，制劑的蛋白質(zhì)濃度比凍干前的制劑內(nèi)的蛋白質(zhì)濃度高的多(如，約高2-40倍，較佳為高3-10倍， 更佳的高3-6倍)。具體地說，如果凍干前的制劑內(nèi)蛋白質(zhì)濃度為5mg/mL或更低，則重建制劑中的蛋白質(zhì)濃度通常為50mg/mL或更多。重建制劑中如此高的蛋白質(zhì)濃度被認(rèn)為特別適用于當(dāng)制劑用于皮下給藥的情況。盡管重建制劑中的蛋白質(zhì)濃度非常高，但是發(fā)現(xiàn)重建制劑在2-8°C在約至少30天內(nèi)是穩(wěn)定的(即，蛋白質(zhì)沒有表現(xiàn)出明顯的或不可接受的化學(xué)或物理不穩(wěn)定性)。在一些例子中，重建制劑是等滲的。盡管使用了較低濃度的凍干保護(hù)劑以在重建時獲得這種等滲制劑，但是發(fā)現(xiàn)凍干制劑中的蛋白質(zhì)基本上在凍干和保藏時保持了其物理和化學(xué)的穩(wěn)定性和完整性。
當(dāng)用包含防腐劑(如用于注射的抑菌劑，BWFI)的稀釋劑來重建時，重建制劑可用作多次性使用的制劑。這種制劑適用于，例如當(dāng)病人需要經(jīng)常進(jìn)行皮下蛋白質(zhì)給藥來治療慢性疾病。多次性使用制劑的優(yōu)點(diǎn)是它能更容易地用于患者，通過瓶內(nèi)含量全部使用可減少浪費(fèi)，并為生產(chǎn)者節(jié)省了很大成本，因為幾劑藥劑被裝在一個小瓶中(減少了裝料和運(yùn)輸成本)。根據(jù)這里描述的發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的一個方面是提供一種穩(wěn)定、等滲的重建制劑，它包括含量至少約為50mg/mL的蛋白質(zhì)和稀釋劑，重建制劑通過蛋白質(zhì)和凍干保護(hù)劑的凍干混合物來制得，其中重建制劑中的蛋白質(zhì)濃度比凍干前混合物中蛋白質(zhì)濃度高約2-40倍。在另一個例子中，本發(fā)明提供一種穩(wěn)定的重建制劑，它包括含量至少約為50mg/mL 的抗體和稀釋劑，重建制劑通過抗體和凍干保護(hù)劑的凍干混合物來制得，其中重建制劑中的抗體濃度比凍干前混合物中抗體濃度高約2-40倍。前段中凍干制劑中的凍干保護(hù)劑與蛋白質(zhì)之比與例如所選的蛋白質(zhì)和凍干保護(hù)劑以及重建制劑中所需的蛋白質(zhì)濃度和等滲性有關(guān)。在用全長抗體(作為蛋白質(zhì))和海藻糖或蔗糖(作為凍干保護(hù)劑)制備高蛋白質(zhì)濃度等滲重建制劑時，比例例如可以是每1摩爾抗體為約100-1500摩爾海藻糖或蔗糖。通常，蛋白質(zhì)和凍干保護(hù)劑的凍干前的制劑(pre-lyophilized)還可包括一種緩沖液來根據(jù)制劑的蛋白質(zhì)為制劑提供合適的PH。為了這個目的，發(fā)現(xiàn)最好用下述的組氨酸緩沖液，它表現(xiàn)出有凍干保護(hù)(lyoprotective)性能。制劑還可包括表面活性劑(如聚山梨醇酯(polysorbate))，發(fā)現(xiàn)它可減少重建蛋白質(zhì)的凝聚和/或減少重建制劑中顆粒的形成。表面活性劑可按需加入凍干前的制劑、凍干制劑和/或重建制劑(reconstituted formulation)(但最好是凍干前的制劑)中。本發(fā)明還提供一種制備穩(wěn)定的等滲重建制劑的方法，它包括對蛋白質(zhì)和凍干保護(hù)劑的凍干混合物在稀釋劑中重建，使得重建制劑中的蛋白質(zhì)濃度至少為50mg/mL，其中重建制劑中的蛋白質(zhì)濃度比凍干前混合物中的蛋白質(zhì)濃度高約2-40倍。在還有一個實施例中，本發(fā)明提供一種制備一種制劑的方法，包括(a)將蛋白質(zhì)和凍干保護(hù)劑的混合物凍干；和(b)在稀釋劑中重建步驟(a)中的混合物，使得重建的制劑是等滲穩(wěn)定的，且蛋白質(zhì)濃度至少約為50mg/mL。例如，重建制劑中的蛋白質(zhì)濃度可以是約為80mg/mL至約300mg/mL。通常，重建制劑中的蛋白質(zhì)濃度比凍干前混合物中的蛋白質(zhì)濃度高約2-40倍。本發(fā)明也提供一種產(chǎn)品，它包括(a)裝有蛋白質(zhì)和凍干保護(hù)劑的凍干混合物的容器；和(b)將凍干混合物在稀釋劑中重建成重建制劑中蛋白質(zhì)濃度至少約為50mg/mL的說明。產(chǎn)品還包括另一個裝有稀釋劑(如包括芳香醇的注射用抑菌劑(BWFI))的容器。本發(fā)明還提供一種治療哺乳動物的方法，包括對哺乳動物施用這里公開的治療有效量的重建制劑，其中哺乳動物患有需要用制劑中的蛋白質(zhì)來治療的疾病。例如，制劑可進(jìn)行皮下給藥。下面詳述的例子中發(fā)現(xiàn)了一種有用的抗HER2抗體的凍干前的制劑，它包括含量為約5-40mg/mL (例如20-30mg/mL)的抗HER2和含量為約IO-IOOmN (例如40_80mM)的蔗糖或海藻糖，緩沖液(例如組氨酸，PH6或琥珀酸鹽緩沖夜，pH5)和表面活性劑(例如聚山梨醇酯)。發(fā)現(xiàn)凍干制劑在40°C在至少3個月內(nèi)保持穩(wěn)定，在30°C在至少6個月內(nèi)保持穩(wěn)定。這種抗HER2制劑可用稀釋劑重建成適用于靜脈內(nèi)給藥的制劑，它包含含量約為10-30mg/ mL的抗HER2，并在2_8°C在至少約30天保持穩(wěn)定。當(dāng)需要更高濃度的抗HER2抗體時(例如，當(dāng)抗體皮下輸遞是對患者給藥的方式時)，凍干制劑可重建生成穩(wěn)定的蛋白質(zhì)濃度為 50mg/mL或更多的重建制劑。這里發(fā)現(xiàn)的一種所需的抗IgE抗體凍干前的制劑包含含量約為5-40mg/mL(如 20-30mg/mL)的抗IgE和含量約為60_300mM(例如80_300mM或80_170mM)的蔗糖或海藻糖，緩沖液(最好是組氨酸，PH6)和表面活性劑(例如聚山梨醇酯)。凍干的抗IgE可在 30°C在至少1年內(nèi)保持穩(wěn)定。該制劑可重建生成一種抗IgE含量約為15-45mg/ml (例如 15-25mg/mL)的制劑，它適用于靜脈內(nèi)給藥，且在2_8°C在至少1年內(nèi)保持穩(wěn)定。或者，當(dāng)制劑中需要更高濃度的抗IgE時，凍干制劑可重建以生成一種抗IgE濃度彡50mg/mL的制劑。本發(fā)明提供了一種穩(wěn)定的等滲重建制劑，它包含含量至少約為50mg/mL的蛋白質(zhì)和稀釋劑，重建制劑是從蛋白質(zhì)和凍干保護(hù)劑的凍干混合物制得的，其中重建制劑中的蛋白質(zhì)濃度比凍干前混合物中的蛋白質(zhì)濃度高約2-40倍，優(yōu)選凍干保護(hù)劑是蔗糖或海藻糖， 優(yōu)選所述制劑中還包含緩沖液，更優(yōu)選所述緩沖液是組氨酸或琥珀酸鹽緩沖夜，優(yōu)選所述制劑還包括表面活性劑。本發(fā)明還提供了上述制劑用于制備治療哺乳動物的藥物的應(yīng)用，其中哺乳動物患有需要用制劑中蛋白質(zhì)來治療的疾病，優(yōu)選所述制劑用于皮下給藥。本發(fā)明還提供了一種穩(wěn)定的重建制劑，它包含含量至少約為50mg/mL的抗體和稀釋劑，重建制劑是從抗體和凍干保護(hù)劑的凍干混合物制得的，其中重建制劑中抗體濃度比凍干前混合物中抗體濃度高約2-40倍，優(yōu)選所述制劑中抗體是抗IgE抗體或抗HER2抗體。 優(yōu)選所述制劑是等滲性的。本發(fā)明還提供了一種制備穩(wěn)定的重建制劑的方法，包括在稀釋劑中重建蛋白質(zhì)和凍干保護(hù)劑的混合物，使得重建制劑中蛋白質(zhì)濃度至少約為50mg/mL，其中重建制劑中的蛋白質(zhì)濃度比凍干前混合物中的蛋白質(zhì)濃度高約2-40倍。本發(fā)明還提供了一種制備一種制劑的方法，包括步驟(a)對蛋白質(zhì)和凍干保護(hù)劑的混合物進(jìn)行冷凍干燥；和(b)在稀釋劑中重建步驟(a)的凍干混合物，使得重建制劑是等滲性的、穩(wěn)定的， 且蛋白濃度至少約為50mg/mL。優(yōu)選該方法中重建制劑中的蛋白質(zhì)濃度為約80mg/mL至約 300mg/mL，優(yōu)選重建制劑中的蛋白質(zhì)濃度比凍干前混合物中的蛋白質(zhì)濃度高約2-40倍，并優(yōu)選在整個冷凍干燥過程中冷凍干燥是在擱架溫度保持在約15-30°C進(jìn)行的。本發(fā)明還提供了一種產(chǎn)品，包括(a)裝有蛋白質(zhì)和凍干保護(hù)劑的凍干混合物的容器；和(b)關(guān)于凍干混合物在稀釋劑中重建成重建制劑中蛋白質(zhì)濃度至少約為50mg/mL 的說明。優(yōu)選所述產(chǎn)品還包含另一個裝有稀釋劑的容器，優(yōu)選所述產(chǎn)品中稀釋劑是包含芳香醇的注射用抑菌劑BWFI。本發(fā)明還提供了一種包含凍干保護(hù)劑和單克隆抗體的凍干混合物的制劑，其中凍干保護(hù)劑和單克隆抗體的摩爾比為約100至1500摩爾凍干保護(hù)劑比1摩爾抗體。本發(fā)明還提供了一種制劑，包含含量約為5-40mg/mL的抗HER2抗體，含量約為IO-IOOmM的蔗糖或海藻糖，緩沖液和表面活性劑，優(yōu)選還包含填充劑。優(yōu)選所述制劑是凍干的并在30°C至少穩(wěn)定6個月，還優(yōu)選所述制劑用稀釋劑重建，使得重建制劑中的抗體濃度約為10-30mg/mL，其中重建制劑在2_8°C至少穩(wěn)定約30天。本發(fā)明還提供了一種制劑，包含含量約為5-40mg/mL的抗IgE抗體，含量約為 80-300mM的蔗糖或海藻糖，緩沖液和表面活性劑，優(yōu)選所述制劑是凍干的并在30°C至少穩(wěn)定1年。本發(fā)明涉及1. 一種穩(wěn)定的等滲重建制劑，它包含含量至少為50mg/mL的蛋白質(zhì)和稀釋劑，重建制劑是從蛋白質(zhì)和凍干保護(hù)劑的凍干混合物制得的，其中混合物中凍干保護(hù)劑與蛋白質(zhì)的摩爾比為100-600摩爾凍干保護(hù)劑1摩爾蛋白質(zhì)，其中重建制劑中的蛋白質(zhì)濃度比凍干前混合物中的蛋白質(zhì)濃度高2-40倍。2.根據(jù)1所述的制劑，其中凍干保護(hù)劑是蔗糖或海藻糖。3.根據(jù)1所述的制劑，其中還包含緩沖液。4.根據(jù)3所述的制劑，其中緩沖液是組氨酸或琥珀酸鹽。5.根據(jù)1-4任一項所述的制劑，還包括表面活性劑。6. 一種穩(wěn)定的重建制劑，它包含含量至少為50mg/mL的抗體和稀釋劑，重建制劑是從抗體和凍干保護(hù)劑的凍干混合物制得的，其中混合物中凍干保護(hù)劑與抗體的摩爾比為 100-600摩爾凍干保護(hù)劑1摩爾抗體，其中重建制劑中抗體濃度比凍干前混合物中抗體濃度高2-40倍。7.根據(jù)6所述的制劑，其中抗體是抗IgE抗體或抗HER2抗體。8.根據(jù)6或7所述的制劑，它是等滲性的。9. 一種制備一種制劑的方法，包括步驟(a)對蛋白質(zhì)和凍干保護(hù)劑的混合物進(jìn)行冷凍干燥，其中該混合物中凍干保護(hù)劑與蛋白質(zhì)的摩爾比為100-600摩爾凍干保護(hù)劑1摩爾蛋白質(zhì)；和(b)在稀釋劑中重建步驟(a)的凍干混合物，使得重建制劑是等滲性的，穩(wěn)定的， 且蛋白質(zhì)濃度至少為50mg/mL。10.根據(jù)9所述的方法，其中重建制劑中的蛋白質(zhì)濃度比凍干前混合物中的蛋白質(zhì)濃度高2-40倍。11.根據(jù)10所述的方法，其中重建制劑中的蛋白質(zhì)濃度為80mg/mL至300mg/mL。12.根據(jù)10或11所述的方法，其中重建制劑中的蛋白質(zhì)濃度比凍干前混合物中的蛋白質(zhì)濃度高2-40倍。13.根據(jù)10所述的方法，其中在整個冷凍干燥過程中冷凍干燥是在擱架溫度保持在15-30°C下進(jìn)行的。14. 一種產(chǎn)品，包括(a) 一個裝有蛋白質(zhì)和凍干保護(hù)劑的凍干混合物的容器，其中該混合物中凍干保護(hù)劑與蛋白質(zhì)的摩爾比為100-600摩爾凍干保護(hù)劑1摩爾蛋白質(zhì)；和(b)關(guān)于凍干混合物在稀釋劑中重建成重建制劑中蛋白質(zhì)濃度至少為50mg/mL的說明。15.根據(jù)14所述的產(chǎn)品，還包含另一個裝有稀釋劑的容器。
16.根據(jù)15所述的產(chǎn)品，其中稀釋劑是包含芳香醇的注射用抑菌劑。17. 一種包含凍干保護(hù)劑和抗體的凍干混合物的制劑，其中凍干保護(hù)劑和抗體的摩爾比為100至600摩爾凍干保護(hù)劑比1摩爾抗體。18. 1所述的制劑用于制備治療哺乳動物的藥物的應(yīng)用，其中哺乳動物患有需要用制劑中蛋白質(zhì)來治療的疾病。19.根據(jù)18所述的應(yīng)用，其中制劑用于皮下給藥。20. 一種制劑，包含含量為5-40mg/mL的抗HER2抗體，含量為IO-IOOmM的蔗糖或海藻糖，緩沖液和表面活性劑。21.根據(jù)20所述的制劑，還包含一種填充劑。22.根據(jù)20或21所述的制劑，其中制劑是凍干的并在30°C下至少穩(wěn)定6個月。23.根據(jù)20所述的制劑，制劑用稀釋劑重建，使得重建制劑中的抗HER2抗體濃度為10-30mg/mL，其中重建制劑在2_8°C下至少穩(wěn)定30天。24. 一種制劑，包含含量為5-40mg/mL的抗IgE抗體，含量為80_300mM的蔗糖或海藻糖，緩沖液和表面活性劑。25.根據(jù)M所述的制劑，它是凍干的并在30°C下至少穩(wěn)定1年。附圖簡述

圖1表示重建體積對凍干的rhuMAb HER2的穩(wěn)定性的影響。凍干制劑是從包含 25mg/mL蛋白質(zhì)、60mM海藻糖、5mM琥珀酸鈉pH5. 0和0. 01%吐溫20 的凍干前的制劑制得的。將凍干餅放在40°C溫育，然后用4. OmL(ο)或20. 0mL( ·)的BWFI重建。用非變性大小排阻色譜測定重建制劑中的完整蛋白質(zhì)的組份(fraction)，并根據(jù)相對于包括凝聚物在內(nèi)的總峰面積的非變性蛋白質(zhì)的峰面積來確定。圖2描述了海藻糖濃度對凍干rhuMAb HER2的穩(wěn)定性的影響。25mg/mL蛋白質(zhì)在 5mM琥珀酸鈉，ρΗ5·0(圓圈)或5mM組氨酸，ρΗ6· 0 (方塊)和濃度為60mM(360摩爾比)至 200mM(1200摩爾比)的海藻糖中凍干。凍干的蛋白質(zhì)放在40°C溫育30天(實心)或91 天(空心)。在用20mL BffFI重建凍干蛋白質(zhì)后測定完整的蛋白質(zhì)的量。圖3描述了海藻糖濃度對于保藏在40°C的凍干rhuMAb HER2的長期穩(wěn)定性的影響。25mg/mL蛋白質(zhì)在5mM琥珀酸鈉，pH5. 0，0. 01%吐溫20 和60mM海藻糖中(■)或5mM 組氨酸，pH6. 0，0. 01%吐溫20 和60mM海藻糖中(□)凍干或21mg/mL蛋白質(zhì)在IOmM琥珀酸鈉，PH5. 0,0. 2%吐溫20 和250mM海藻糖中(·)凍干。凍干的蛋白質(zhì)放在40°C溫育，然后用20mLBWFI重建。重建后測定完整的蛋白質(zhì)的量。圖4 表示在 38. 4mM 甘露糖醇(7mg/mL)、20. 4mM 蔗糖(7mg/mL)、5mM 組氨酸、pH6. 0、 0. 01 %吐溫20 中凍干的rhuMAb HER2穩(wěn)定性。凍干蛋白質(zhì)在40 V溫育，然后用4. OmL (〇) 或20. 0mL(·)的BWFI重建。重建后測定完整的蛋白質(zhì)的量。圖5表示rhuMAb HER2在5mM琥珀酸鈉、pH5. 0、60mM海藻糖、0. 01%吐溫20 中凍干后重建的穩(wěn)定性。樣品用4. OmL(方塊)或20. Oml (圓圈)的BWFI (20mL 0. 9%苯甲醇；4mL 1.1%苯甲醇)重建，然后保藏在5°C (實心)或25°C (空心)下。非變性蛋白質(zhì)％通過相對于總峰面積的非變性(native)(未降解)蛋白質(zhì)的峰面積來確定，峰面積用陽離子交換色譜測定。圖6表示rhuMAb HER2在5mM組氨酸、pH6. 0、60mM海藻糖、0. 01%吐溫20中凍干后重建的穩(wěn)定性。樣品用4. OmL(方塊)或20. Oml (圓圈)的BWFI (20mL 0.9%苯甲醇； 4mL 1.1%苯甲醇)重建，然后保藏在5°C (實心)或25°C (空心)下。非變性蛋白質(zhì)％ 通過相對于總峰面積的非變性(未降解)蛋白質(zhì)的峰面積來確定，峰面積用陽離子交換色譜測定。圖 7 表示 rhuMAb HER2 在 5mM 組氨酸、pH6. 0、38. 4mM 甘露糖醇、20. 4mM 蔗糖、 0.01%吐溫20中凍干后重建的穩(wěn)定性。樣品用4. OmL(方塊)或20. Oml (圓圈)的 BffFI (20mL 0.9%苯甲醇；4mL 1. 苯甲醇)重建，然后保藏在5°C (實心)或25°C (空心)下。非變性蛋白質(zhì)％通過相對于總峰面積的非變性(未降解)蛋白質(zhì)的峰面積來確定， 峰面積用陽離子交換色譜測定。圖8表示rhuMAb HER2在IOmM琥珀酸鈉、pH5. 0、250mM海藻糖、0. 2%吐溫20中凍干后重建的穩(wěn)定性。樣品用20. OmL BffFI (0. 9%苯甲醇)重建，然后保藏在5°C ( ·)或 250C (〇)下。非變性蛋白質(zhì)％通過相對于總峰面積的非變性(未降解)蛋白質(zhì)的峰面積來確定，峰面積用陽離子交換色譜測定。圖9表示rhuMAb E25加入pH5至pH7、緩沖液濃度為10mM、抗體濃度為5mg/mL 的緩沖液中的凝聚情況。凍干樣品并測定保藏在2-8°C時0、4星期、8星期和52星期后的凝聚。緩沖液是磷酸鉀PH7.0(〇)；磷酸鈉pH7.0( □)；組氨酸pH7.0(O)；琥珀酸鈉 ρΗ6· 5 ( ·)；琥珀酸鈉ρΗ6· O ( ■)；琥珀酸鈉ρΗ5· 5 ( )和琥珀酸鈉pH5. O(A)0圖10表示在5mM組氨酸緩沖液中凍干的rhuMAb E25在pH6和pH7時在下列保藏時測定的凝聚情況。緩沖液是為PH6.0，保藏在2-8°C (O) ；pH6，保藏在25°C (□)； PH6，保藏在 40°C ( O ) ；pH7，保藏在 2_8°C ( · ) ；pH7，保藏在 25°C ( ■)；和 pH7，保藏在 40 0C ( )。圖11表示在pH5的IOmM琥珀酸鈉及加入的凍干保護(hù)劑濃度為275mM(等滲的) 中配制的5mg/mL rhuMAb E25的凝聚情況。凍干保護(hù)劑是對照，不含凍干保護(hù)劑(〇)； 甘露糖醇(□)；乳糖( )；麥芽糖(眷)；海藻糖(■)；和蔗糖( )。凍干樣品并測定在2-8°C保藏0、4星期、8星期和52星期后的凝聚情況。圖12表示在pH5的IOmM琥珀酸鈉及加入的凍干保護(hù)劑濃度為275mM(等滲的) 中配制的5mg/mL rhuMAb E25的凝聚情況。凍干保護(hù)劑是對照，不含凍干保護(hù)劑(〇)； 甘露糖醇(□)；乳糖( )；麥芽糖(眷)；海藻糖(■)；和蔗糖( )。凍干樣品并測定在40°C保藏0、4星期、8星期和52星期后的凝聚情況。圖13表示20mg/mL的rhuMAb E25在乳糖等滲濃度(即275mM)、pH6的組氨酸緩沖液中凍干，在2-8°C、25°C或40°C保藏M個星期后重建至20mg/mL的疏水作用色譜結(jié)果。圖14表示20mg/mL的rhuMAb E25在pH6的組氨酸緩沖液中凍干，在2_8°C、25°C 或40°C保藏M個星期后重建至20mg/mL的疏水作用色譜結(jié)果。圖15表示20mg/mL的rhuMAb E25在蔗糖等滲濃度(即275mM)、pH6的組氨酸緩沖液中凍干，在2-8°C、25°C或40°C保藏M個星期后重建至20mg/mL的疏水作用色譜結(jié)果。圖16表示糖濃度對于在5mM組氨酸(ρΗ6. 0)中配制的20mg/mL rhuMAbE25的影響。蔗糖(·)和海藻糖(□)以O(shè)至2010(等滲)的摩爾比加入制劑中(見下表1)。凍干樣品，測定在50°C保藏12星期后的凝聚情況。表 權(quán)利要求
1.一種重建配制劑，包含稀釋劑、量為約10-30mg/mL的單克隆抗HER2抗體、量為約 IO-IOOmM的海藻糖、組氨酸緩沖劑和聚山梨酯20，其中該重建配制劑在2_8°C穩(wěn)定至少約 30天。
2.權(quán)利要求1的配制劑，其中所述稀釋劑是包含芳香醇的注射用抑菌水(BWFI)。
3.權(quán)利要求1或2的配制劑，其中所述單克隆抗HER2抗體是huMAb4D5-8。
4.權(quán)利要求1-3任一項的配制劑，其中所述配制劑的pH是pH6。
5.權(quán)利要求1-4任一項的重建配制劑在制備藥物中的用途，所述藥物用于治療以HER2 受體過表達(dá)為特征的癌癥。
6.依照權(quán)利要求5的用途，其中所述藥物用于靜脈內(nèi)使用且包含濃度為10-30mg/ml的抗HER2抗體。
7.一種穩(wěn)定的重建配制劑，其包含量為約50mg/mL至約400mg/mL的單克隆抗體和稀釋劑，該重建配制劑是直接自單克隆抗體和在凍干和后續(xù)貯存中防止或降低抗體的化學(xué)或物理不穩(wěn)定性的凍干保護(hù)劑的凍干混合物制備的，其中所述凍干保護(hù)劑是蔗糖或海藻糖， 其中該凍干混合物中凍干保護(hù)劑抗體的摩爾比為約100-1500摩爾凍干保護(hù)劑1摩爾抗體，且其中該重建配制劑中抗體的濃度比凍干前混合物中抗體的濃度高約2-40倍。
8.權(quán)利要求7的重建配制劑，其中所述單克隆抗體是抗HER2抗體。
9.權(quán)利要求8的重建配制劑，其中所述重建配制劑是直接自抗HER2抗體、海藻糖、組氨酸緩沖劑和聚山梨酯20的凍干混合物制備的。
10.權(quán)利要求7的重建配制劑，其中所述單克隆抗體是全長人源化抗體。
11.權(quán)利要求7的重建配制劑，其是等滲的。
12.權(quán)利要求7的重建配制劑，其進(jìn)一步包含緩沖劑。
13.權(quán)利要求12的重建配制劑，其中所述緩沖劑是組氨酸或琥珀酸鹽。
14.權(quán)利要求7的重建配制劑，其進(jìn)一步包含表面活性劑。
15.一種在稀釋劑中自凍干保護(hù)劑和單克隆抗體的凍干混合物重建的重建配制劑，其中所述凍干保護(hù)劑是蔗糖或海藻糖，且其中凍干保護(hù)劑與單克隆抗體的摩爾比在200至 600摩爾凍干保護(hù)劑1摩爾單克隆抗體的范圍內(nèi)，其中該重建配制劑中單克隆抗體的濃度在50mg/mL至400mg/mL的范圍內(nèi)。
16.權(quán)利要求15的重建配制劑，其中所述重建配制劑中單克隆抗體的濃度在80mg/mL 至300mg/mL的范圍內(nèi)。
17.權(quán)利要求15或權(quán)利要求16的重建配制劑，其中所述稀釋劑是無菌水或注射用抑菌水(BWFI)。
18.權(quán)利要求15或權(quán)利要求16的重建配制劑，其用于皮下或肌肉內(nèi)使用。
19.權(quán)利要求15或權(quán)利要求16的重建配制劑，其是等滲的。
20.權(quán)利要求15-19任一項的重建配制劑，其中所述單克隆抗體是抗IgE抗體。
21.—種制劑，包含含量為約5-40mg/mL的抗IgE抗體，含量為約80_300mM的蔗糖或海藻糖、緩沖液和表面活性劑。
全文摘要
本發(fā)明描述一種穩(wěn)定的凍干蛋白質(zhì)制劑，它可用合適的稀釋劑重建成高蛋白質(zhì)濃度的重建制劑以適用于皮下給藥。例如，抗IgE和抗HER2抗體制劑可通過在凍干保護(hù)劑存在時對這些抗體冷凍干燥而制得。獲得的凍干混合物可重建成高蛋白質(zhì)濃度的制劑而蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性沒有明顯的喪失。
文檔編號A61K38/00GK102416176SQ20111041028
公開日2012年4月18日 申請日期1996年7月23日 優(yōu)先權(quán)日1995年7月27日
發(fā)明者C.C.赫蘇, D.E.奧維卡謝爾, J.L.克萊倫德, J.Y.楊, J.安德亞, S.J.夏爾, S.S.吳, X.M.拉姆 申請人:基因技術(shù)股份有限公司