專利名稱：用于防治腫瘤的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，特別是一種用于防治腫瘤的藥物組合物。
技術(shù)背景
在近50年，癌癥仍是嚴(yán)重威脅人類健康和生命的惡性疾病。其原因在于1)多數(shù)癌癥由多達(dá)500種不同的基因失調(diào)引起，現(xiàn)有的大多數(shù)防癌和/或抗癌藥物，僅僅是抑制一個基因產(chǎn)物或一個細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，是不能達(dá)到預(yù)防或治療癌癥的目的；而且反復(fù)應(yīng)用后不再敏感或出現(xiàn)耐藥性。2、目前大多數(shù)的抗癌藥物毒性大，而且價格昂貴；患者多次化療后免疫功能低下而不得不中止治療，或者負(fù)擔(dān)不起治療費而放棄治療，使其療效有限。
2-甲氧基雌二醇是雌激素的天然代謝產(chǎn)物，但對雌激素受體的親和力較低，所以并無雌激素內(nèi)在活性。體外和體內(nèi)，2-甲氧基雌二醇顯示了廣泛的抗實體瘤活性，包括肺癌、血管肉瘤、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞、胰腺癌、肝癌、結(jié)腸直腸癌、胃癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌，另外還對白血病、骨髓瘤等有作用。其抗腫瘤活性主要通過抑制腫瘤和內(nèi)皮細(xì)胞增殖、把腫瘤細(xì)胞阻滯于G2/M期，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對輻射的敏感性、微管抑制，提高細(xì)胞內(nèi)R0S、抗血管生成等多個細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路而實現(xiàn)。正是2-甲氧基雌二醇可抗血管新生，即通過抑制傳輸營養(yǎng)物質(zhì)給腫瘤血管發(fā)育，使其可用于多種惡性腫瘤治療， 具有廣譜抗癌性。此外，較低濃度的2-甲氧基雌二醇對腫瘤細(xì)胞還具有促分化作用。故與常規(guī)的化療和放療或其他基因療法相比，具有很多優(yōu)點，如高效低毒，不易產(chǎn)生耐藥性，不受腫瘤細(xì)胞周期的影響，容易尋找到靶向血管；特別是在治療過程中對血管的有限損傷就可造成大量腫瘤細(xì)胞的生長抑制，不會對骨髓和造血器官產(chǎn)生毒性(即靶向快速生長的細(xì)胞，并有相對較高的特異性，且不會殺死未分裂的細(xì)胞，因此不良反應(yīng)小，近年來日益受到重視，并顯示了良好的應(yīng)用前景。但是，用于治療乳腺癌和前列腺癌的臨床I期和II期實驗表明，該藥口服生物利用度低，在病人血漿達(dá)不到發(fā)揮抗腫瘤作用所需要的高濃度，治療效果不理想。因此，需考慮組合用藥，以充分發(fā)揮藥效。
姜黃(植物姜黃的干燥根莖)用作調(diào)味品、食用色素和傳統(tǒng)中藥已有上千年歷史。 從姜黃中提取得到的主要含姜黃素、去甲氧基姜黃素，雙去甲氧基姜黃素的姜黃黃色素，染色能力強(qiáng)(大于其他天然色素和合成檸檬黃等)，安全無毒，無副作用，是國內(nèi)外允許使用的重要天然食用色素之一，按照GB2760-2007的規(guī)定，用量可按“正常生產(chǎn)需要”而定。在我國姜黃黃色素用于蘿卜干、咖喱粉的著色也已有很久的歷史。上述充分說明以姜黃素衍生物為主的姜黃黃色素，安全，價格低廉。
姜黃素衍生物，除了從姜科植物姜黃的根莖及塊根中分離得到外，還可從姜科植物莪術(shù)、郁金等根莖及塊根中提取分離得到。姜黃素在體外具有良好的廣譜抗腫瘤活性，包括肺癌，肝癌、卵巢癌、白血病、淋巴瘤、胃腸癌、乳腺癌、頭頸癌、黑素瘤、神經(jīng)癌、肉瘤、胰腺癌等；還有極好的腫瘤預(yù)防作用。而且姜黃素可和多個細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路相互作用，包括細(xì)胞周期、凋亡、細(xì)胞增殖、生存、侵襲、血管發(fā)生、轉(zhuǎn)移和炎癥等。臨床研究報道姜黃素口服達(dá)12g/天時，對人沒有任何毒性，因此姜黃素已作為一種低毒、有效、費用低(大多數(shù)人可承受)的抗腫瘤藥物而備受關(guān)注。但其口服同樣生物利用度差，血藥濃度低，使其在臨床上，無法發(fā)揮眾多有益的抗癌作用。此外，近來，越來越多的研究顯示，去甲氧基姜黃素、 雙去甲氧基姜黃素具有與姜黃素相似或更強(qiáng)的藥理活性，如抗腫瘤轉(zhuǎn)移、抗炎等均比姜黃素更好。因此，如何充分發(fā)揮姜黃素衍生物藥效(減小其用藥劑量、以達(dá)所需血藥濃度)，亦是急待解決的問題。
藥物組合使用以減毒增效的方法已日漸得到人們認(rèn)可和重視。雖已有2-甲氧基雌二醇與多西紫杉醇(多西他賽，docetaxel)組合、姜黃素與順鉬組合，以降低毒副作用、 發(fā)揮協(xié)同抗腫瘤作用的報道。但現(xiàn)有藥物組合中依然存在諸多不足，比如毒副作用依然較大，價格昂貴、抗腫瘤靶點少等。
現(xiàn)有抗癌藥物靶點單一而易出現(xiàn)耐藥、不能有效抑制癌變的多個基因或蛋白，以及毒副作用大等問題，而使其療效有限；再加之其價格昂貴，給病人及其家庭造成了巨大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。藥物的合理組合，可達(dá)到協(xié)同或相加作用，從而增強(qiáng)療效，而組合不當(dāng)則會拈抗， 療效抵消、下降，甚至引起毒副作用。發(fā)明內(nèi)容
針對上述情況，為克服現(xiàn)有技術(shù)缺陷，本發(fā)明之目的就是提供一種用于防治腫瘤的藥物組合物，可有效解決腫瘤的防治問題。
本發(fā)明解決的技術(shù)方案是，該藥物組合物由以摩爾比計的2-甲氧基雌二醇1-20 份和姜黃素衍生物1-40份混合制成，所述的姜黃素衍生物為姜黃素、去甲氧基姜黃素、雙去甲氧基姜黃素中的一種或兩種以上等摩爾比的混合物；按現(xiàn)有常規(guī)制備方法制備成片劑、膠囊劑、滴丸劑、微丸劑、口服液、凍干制劑、水針劑、輸液劑、栓劑、軟膏劑、巴布劑、透皮劑的一種；該藥物組合物的給藥量是治療的有效量，所述的該藥物組合物的片劑或膠囊劑，或滴丸劑，或微丸劑，或口服液的每片，或每粒，或每丸中該藥物組合物的有效給藥量為 0. 15g-12. OOg ；所述的該藥物組合物的凍干制劑，或水針劑，或輸液劑的每支中該藥物組合物的有效給藥量為0. 0015g-3. OOg ；所述的該藥物組合物的栓劑，或軟膏劑，或巴布劑，或透皮劑，或貼劑的每枚、每支或每貼中該藥物組合物的有效給藥量為0. 08g-4. 80g ；所述的凍干制劑有納米混懸劑凍干粉；所述的透皮劑為透皮搽劑。
本發(fā)明成本低，具有多靶點、多途徑的抗腫瘤作用，安全可靠，有效提高患者用藥依從性，最大限度地發(fā)揮在防治腫瘤中的作用。
具體實施方式
以下結(jié)合實施例對本發(fā)明的具體實施方式
作詳細(xì)說明。
實施例1
本發(fā)明藥物組合物由以摩爾比計的2-甲氧基雌二醇1-15份和姜黃素2-30份混合制成，所述的該藥物組合物按常規(guī)方法制成的片劑或膠囊劑，或滴丸劑，或微丸劑，或口服液的每片，或每粒，或每丸中該藥物組合物的有效給藥量為0. 30g-4. 80g ；所述的該藥物組合物按常規(guī)方法制成的凍干制劑，或水針劑，或輸液劑的每支中該藥物組合物的有效給藥量為0. Olg-1. 2g ；所述的該藥物組合物按常規(guī)方法制成的栓劑，或軟膏劑，或巴布劑，或透皮劑，或貼劑的每枚、每支或每貼中該藥物組合物的有效給藥量為0. 12g-3. 60g。
實施例2:
本發(fā)明藥物組合物由以摩爾比計的2-甲氧基雌二醇1份和去甲氧基姜黃素2份混合制成，所述的該藥物組合物按常規(guī)方法制成的片劑的每片中該藥物組合物的有效給藥量為3. OOgo
實施例3 納米混懸劑凍干粉制備
本發(fā)明藥物組合物由以摩爾比計的2-甲氧基雌二醇10份和雙去甲氧基姜黃素20份混合制成，所述的該藥物組合物300mg和卵磷脂1300mg，加入15ml 二氯甲烷中， 35-40°C完全溶解，作為油相；450mg泊羅沙姆188，加入35ml PH值為7. 4的磷酸鹽緩沖液中，超聲溶解，作為水相；水相置于磁力攪拌器工作盤上，邊攪拌邊將油相滴入，混勻后，內(nèi)切式勻漿機(jī)10000轉(zhuǎn)/分勻化6分鐘，倒入圓底燒瓶中，保持水浴溫度40°C，于旋轉(zhuǎn)薄膜蒸發(fā)器上真空蒸發(fā)4. 5h，除去二氯甲烷并形成初混懸液，初混懸液放入超聲儀中，在700W條件下，超聲粉碎25次，每次條件均為超聲如，停8s，形成納米混懸劑，加入1500mg葡萄糖溶解后，滅菌，分裝入瓶，每瓶中該藥物組合物的有效給藥量為0. 02g，-20°C凍1 后，再冷凍干燥48h，得納米混懸劑凍干粉；所述的磷酸鹽緩沖液為北京鼎國昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司的市售產(chǎn)品。
實施例4:
本發(fā)明藥物組合物由以摩爾比計的2-甲氧基雌二醇15份和姜黃素30份混合制成，所述的該藥物組合物按常規(guī)方法制成的透皮搽劑的每貼中該藥物組合物的有效給藥量為 0. 16g。
實施例5
本發(fā)明藥物組合物由以摩爾比計的2-甲氧基雌二醇20份和去甲氧基姜黃素40 份混合制成，所述的該藥物組合物按常規(guī)方法制成的口服液的每支中該藥物組合物的有效給藥量為log。
本發(fā)明可通過上述具體技術(shù)方案實現(xiàn)，但不限制與本發(fā)明用等效替換的手段得出的另外的技術(shù)方案。
本發(fā)明可以通過，但不限于注射(包括靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、肌內(nèi)、皮下、真皮內(nèi))，口服，局部(包括經(jīng)皮、舌下和頰)、直腸、陰道、鼻部使用，及眼用途徑給藥。此外，2-甲氧基雌二醇和姜黃素衍生物或可以預(yù)先混合或分別但是同時以相同或不同的形式給藥，包括， 但不限于口服、靜脈滴注、肌肉注射、皮下注射、皮內(nèi)注射、腹膜注射。
本發(fā)明通過以下實驗確定了 2-甲氧基雌二醇和姜黃素衍生物可以組合，這兩種具有多途徑(抑制腫瘤細(xì)胞增殖、抑制腫瘤轉(zhuǎn)移、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞分化)，廣泛(多種腫瘤細(xì)胞)防治腫瘤作用，毒副作用小的藥物，經(jīng)過合理組合后，具有很好的協(xié)同及相加抗腫瘤作用，達(dá)到了 1+1 ^ 2即增加療效的效果；而且，2-甲氧基雌二醇和姜黃素衍生物本身毒性小，二者合理組合，又具有安全性的特點。此外姜黃素衍生物最大優(yōu)勢在于價廉，二者組合費用低，更多的病人可以承受。因此，從臨床應(yīng)用角度出發(fā)，這兩種低毒、多靶點、廣譜抗癌藥物組合，在保證安全的前提下，從多個途徑共同作用于腫瘤，得到安全、高效、多靶點、價低的高品質(zhì)抗癌藥物，克服現(xiàn)有抗腫瘤藥物缺點，將對腫瘤的預(yù)防和/或治療具有積極意義，本發(fā)明在防治腫瘤中的應(yīng)用，具體如下
一 .量效關(guān)系研究
2-甲氧基雌二醇和姜黃素衍生物殺傷腫瘤細(xì)胞，二者是否存在一定的量效關(guān)系， 通過試驗，得到了進(jìn)一步的認(rèn)識。
1.數(shù)據(jù)表示和統(tǒng)計學(xué)處理
實驗結(jié)果以平均值士標(biāo)準(zhǔn)誤(Mean士S. D.)表示，采用spss13. 0軟件作統(tǒng)計學(xué)分析，兩組數(shù)據(jù)間差異比較采用Mudent’ s t檢驗。P < 0. 05為具有統(tǒng)計學(xué)差異。
2.對肺癌SPC-Al細(xì)胞增殖的影響
實驗方案一
方案1 :2-甲氧基雌二醇0. 7摩爾份
方案2 2-甲氧基雌二醇3. 5摩爾份
方案3 2-甲氧基雌二醇7摩爾份
方案4 2-甲氧基雌二醇14摩爾份
方案5 2-甲氧基雌二醇28摩爾份
方案6 2-甲氧基雌二醇56摩爾份
實驗方法人肺癌SPC-Al細(xì)胞在RPMI-1640 (Gibco, NY, USA)培養(yǎng)液培養(yǎng)，培養(yǎng)液含10%胎牛血清(Gibco)，100U/mL的青霉素和100 μ g/mL的鏈霉素。培養(yǎng)條件為37°C，飽和濕度，5%C02(常規(guī)技術(shù))。取對數(shù)生長期細(xì)胞接種于96孔板，分為正常組(空白組)、 溶劑對照組、不同方案組。24h后按方案1-方案6中的有效給藥量分別向不同方案組中加入，溶劑對照組加入小于總體積1%。的二甲基亞砜。4 后，以改進(jìn)的磺基羅丹明B法 (sulforhodamine B，SRB法)測定細(xì)胞活力，即輕輕加入50%三氯醋酸50ul，靜置5min后放入4°C固定Ih ；倒掉固定液，去離子水洗5遍，風(fēng)干；然后加0.4%的SRB50ul，避光染色 30min ；倒掉染色液，用1 %乙酸洗5遍，風(fēng)干；加入lOmmol/LTris堿150ul溶解，震蕩5min 充分溶解SRB。按照說明書(Sigma T0X-6)，于酶聯(lián)免疫檢測儀上選擇最大吸收波長565nm 處測定光吸收值(0D值)。每組5個復(fù)孔。實驗重復(fù)3次，取平均值。按照公式計算細(xì)胞存活率細(xì)胞存活率％ =實驗組光吸收值/對照組光吸收值X 100%。細(xì)胞存活率結(jié)果見表 1
< 0. 01
6表12-甲氧基雌二醇對人肺癌SPC-Al細(xì)胞生存的影響組別0D565nm細(xì)胞存活率(%)正常組1. 442±0. 062溶劑對照組1. 406±0. 024100方案11. 387±0. 12398. 7±8. 7方案21. 302±0. 10592. 6±7. 4方案31. 013±0. 134林72. 0±9. 5林方案40. 909±0. 069**64. 7±4. 9林方案50. 449±0. 034**31. 9±2. 4林方案60. 421±0. 028**29. 9±2. 0林注數(shù)據(jù)為3次試驗的平均值，每次試驗設(shè)5個復(fù)孔。與溶劑對照組比較實驗方案二方案1 姜黃素衍生物0. 7摩爾份方案2 姜黃素衍生物1. 8摩爾份方案3 姜黃素衍生物3. 5摩爾份方案4 姜黃素衍生物7摩爾份方案5 姜黃素衍生物14摩爾份方案6 姜黃素衍生物W摩爾份實驗方法按照實驗一的試驗方法進(jìn)行試驗，實驗結(jié)果見表2 表2姜黃素衍生物對人肺癌SPC-Al細(xì)胞生存的影響
權(quán)利要求
1.一種用于防治腫瘤的藥物組合物，其特征在于，該藥物組合物由以摩爾比計的 2-甲氧基雌二醇1-20份和姜黃素衍生物1-40份混合制成，所述的姜黃素衍生物為姜黃素、去甲氧基姜黃素、雙去甲氧基姜黃素中的一種或兩種以上等摩爾比的混合物；按常規(guī)制備方法制備成片劑、膠囊劑、滴丸劑、微丸劑、口服液、凍干制劑、水針劑、輸液劑、栓劑、 軟膏劑、巴布劑、透皮劑的一種；所述的該藥物組合物的片劑或膠囊劑，或滴丸劑，或微丸劑，或口服液的每片，或每粒，或每丸中該藥物組合物的有效給藥量為0. 15g-12. OOg ；所述的該藥物組合物的凍干制劑，或水針劑，或輸液劑的每支中該藥物組合物的有效給藥量為 0. 0015g-3. OOg ；所述的該藥物組合物的栓劑，或軟膏劑，或巴布劑，或透皮劑，或貼劑的每枚、每支或每貼中該藥物組合物的有效給藥量為0. 08g-4. 80go
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于防治腫瘤的藥物組合物，其特征在于，由以摩爾比計的 2-甲氧基雌二醇1-15份和姜黃素2-30份混合制成，所述的該藥物組合物按常規(guī)方法制成的片劑或膠囊劑，或滴丸劑，或微丸劑，或口服液的每片，或每粒，或每丸中該藥物組合物的有效給藥量為0. 30g-4. 80g ；所述的該藥物組合物按常規(guī)方法制成的凍干制劑，或水針劑， 或輸液劑的每支中該藥物組合物的有效給藥量為0. Olg-1. 2g ；所述的該藥物組合物按常規(guī)方法制成的栓劑，或軟膏劑，或巴布劑，或透皮劑，或貼劑的每枚、每支或每貼中該藥物組合物的有效給藥量為0. 12g-3. 60g。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于防治腫瘤的藥物組合物，其特征在于，由以摩爾比計的 2-甲氧基雌二醇1份和去甲氧基姜黃素2份混合制成，所述的該藥物組合物按常規(guī)方法制成的片劑的每片中該藥物組合物的有效給藥量為3. OOgo
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于防治腫瘤的藥物組合物，其特征在于，由以摩爾比計的 2-甲氧基雌二醇15份和姜黃素30份混合制成，所述的該藥物組合物按常規(guī)方法制成的透皮搽劑的每貼中該藥物組合物的有效給藥量為0. 16g。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于防治腫瘤的藥物組合物，其特征在于，由以摩爾比計的 2-甲氧基雌二醇20份和去甲氧基姜黃素40份混合制成，所述的該藥物組合物按常規(guī)方法制成的口服液的每支中該藥物組合物的有效給藥量為10g。
6.一種用于防治腫瘤的藥物組合物的納米混懸劑凍干粉，其特征在于，該藥物組合物由以摩爾比計的2-甲氧基雌二醇10份和雙去甲氧基姜黃素20份混合制成，所述的該藥物組合物300mg和卵磷脂1300mg，加入15ml 二氯甲烷中，35_40°C完全溶解，作為油相； 450mg泊羅沙姆188，加入35ml PH值為7. 4的磷酸鹽緩沖液中，超聲溶解，作為水相；水相置于磁力攪拌器工作盤上，邊攪拌邊將油相滴入，混勻后，內(nèi)切式勻漿機(jī)10000轉(zhuǎn)/分勻化 6分鐘，倒入圓底燒瓶中，保持水浴溫度40°C，于旋轉(zhuǎn)薄膜蒸發(fā)器上真空蒸發(fā)4. 5h，除去二氯甲烷并形成初混懸液，初混懸液放入超聲儀中，在700W條件下，超聲粉碎25次，每次超聲如，停8s，形成納米混懸劑，加入1500mg葡萄糖溶解后，滅菌，分裝入瓶，每瓶中該藥物組合物的有效給藥量為0. 02g, -20°C凍1 后，再冷凍干燥48h。
全文摘要
本發(fā)明涉及用于防治腫瘤的藥物組合物，有效解決腫瘤的防治問題，本發(fā)明解決的技術(shù)方案是，該藥物組合物由以摩爾比計的2-甲氧基雌二醇1-20份和姜黃素衍生物1-40份混合制成，所述的姜黃素衍生物為姜黃素、去甲氧基姜黃素、雙去甲氧基姜黃素中的一種或兩種以上等摩爾比的混合物；按現(xiàn)有常規(guī)制備方法制備成片劑、膠囊劑、滴丸劑、微丸劑、口服液、凍干制劑、水針劑、輸液劑、栓劑、軟膏劑、巴布劑、透皮劑的一種，本發(fā)明成本低，具有多靶點、多途徑的抗腫瘤作用，安全可靠，有效提高患者用藥依從性，最大限度地發(fā)揮在防治腫瘤中的作用。
文檔編號A61K9/19GK102499927SQ201110387499
公開日2012年6月20日 申請日期2011年11月29日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月29日
發(fā)明者張振中, 張楠, 李海霞, 王亞麗, 王寧, 賈沙沙 申請人:鄭州大學(xué)