專(zhuān)利名稱(chēng)：一種單克隆抗體用于治療頭頸部腫瘤的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種抗表皮生長(zhǎng)因子受體的單克隆抗體在治療頭頸部腫瘤方面的用途。
背景技術(shù)：
根據(jù)世界衛(wèi)生組織報(bào)告，目前全球每年新發(fā)腫瘤患者約有1000萬(wàn)，死亡近600萬(wàn)。 自20世紀(jì)70年代以來(lái)，我國(guó)惡性腫瘤的發(fā)病率和死亡率一直呈上升趨勢(shì)，2010年癌癥發(fā)病總?cè)藬?shù)約為200萬(wàn)人，死亡150萬(wàn)。目前腫瘤死亡率已超過(guò)心腦血管病而躍居首位。惡性腫瘤已成為人類(lèi)的“第一殺手”。頭頸腫瘤包括自顱底到鎖骨上，頸椎以前這樣一個(gè)解剖范圍的腫瘤，以惡性腫瘤為主。即以頭面部軟組織、耳鼻咽喉、口腔、涎腺、頸部軟組織、甲狀腺等部位的腫瘤(通常不包括顱內(nèi)、頸椎腫瘤及眼內(nèi)腫瘤)。頭頸部惡性腫瘤因其發(fā)病部位很多，因此其發(fā)病率在不同的國(guó)家，地區(qū)，民族以及人種間都不相同。在美國(guó)華人中，男性發(fā)病率較高的是鼻咽癌，以下依次是甲狀腺癌，口腔癌和喉癌；女性發(fā)病率較高的是甲狀腺癌，其次是鼻咽癌和涎腺腫瘤。在美國(guó)華人男性中頭頸部惡性腫瘤占全身惡性腫瘤的11%以上，在女性則不足10%。在日本，男性發(fā)病率較高的是喉癌，其次，是口腔癌；女性發(fā)病率較高的是甲狀腺癌，其次是口腔癌。頭頸部腫瘤占全身腫瘤的10%以下。在我國(guó)，北京的男性頭頸部腫瘤發(fā)病率以喉癌占首位，其次為鼻咽癌和口腔癌；女性頭頸部腫瘤發(fā)病率以甲狀腺癌占首位，其次為口腔癌。而上海市統(tǒng)計(jì)資料顯示，男性頭頸部腫瘤發(fā)病率首位是鼻咽癌，其次為喉癌。女性頭頸部腫瘤發(fā)病率首位是甲狀腺癌，其次是鼻咽癌，頭頸部腫瘤因其解剖復(fù)雜，組織病理類(lèi)型繁多，一般常見(jiàn)鱗狀上皮細(xì)胞癌，其次為各類(lèi)腺癌、肉瘤少見(jiàn)。依據(jù)有關(guān)的統(tǒng)計(jì)資料，我國(guó)頭頸部惡性腫瘤占全身惡性腫瘤的10%。 其中絕大部分為頭頸部鱗癌。早期的頭頸部鱗癌，通過(guò)單一的手術(shù)或放療均可取得較好的效果，而對(duì)于進(jìn)展期的頭頸部鱗癌，則應(yīng)當(dāng)選擇更為積極地治療措施。目前由于治療方式上的改變，以及大量新藥的出現(xiàn)，進(jìn)展期頭頸部鱗癌的治療有了新的進(jìn)展，療效較傳統(tǒng)的治療模式也有了明顯的改善。近年來(lái)提出的腫瘤生物學(xué)分期，以探討區(qū)分機(jī)體對(duì)腫瘤的不同反應(yīng)，尋找適合于調(diào)整機(jī)體反應(yīng)有利于根治腫瘤的治療方案。隨著對(duì)腫瘤發(fā)病機(jī)制的進(jìn)一步認(rèn)識(shí)，以及分子生物學(xué)技術(shù)的不斷進(jìn)步，目前臨床已經(jīng)開(kāi)始針對(duì)細(xì)胞受體、關(guān)鍵基因和調(diào)控分子為靶點(diǎn)的治療，也就是所謂的分子靶向治療。而其中的熱點(diǎn)，主要是針對(duì)表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR) 為靶向的治療。EGFR是一跨膜糖蛋白受體，由細(xì)胞外的配體結(jié)合區(qū)，跨膜區(qū)及細(xì)胞內(nèi)的酪氨酸激酶活性區(qū)組成，當(dāng)配體于胞外的配體結(jié)合區(qū)結(jié)合后，受體可發(fā)生同二聚或異二聚作用，激活胞內(nèi)酪氨酸激酶的活性，并進(jìn)一步激活下游的信號(hào)傳導(dǎo)通路。因EGFR的信號(hào)傳導(dǎo)機(jī)制和腫瘤的惡性表型，正常細(xì)胞凋亡的抑制，血管生成，以及腫瘤的轉(zhuǎn)移均有密切的聯(lián)系，提示它可以作為藥物的治療靶向。在上皮源性腫瘤，特別是頭頸部鱗狀細(xì)胞癌(SCCHN)中，EGFR表達(dá)水平顯著提高，并與鱗狀細(xì)胞惡變相關(guān)。目前，全球已經(jīng)有三種針對(duì)EGFR的單克隆抗體上市，用于EGFR過(guò)度表達(dá)的上皮源性腫瘤的治療，已經(jīng)取得了明顯的效果。此三種抗體為尼妥珠單抗(Nimotuzumab)，西妥昔單抗(Cetuximab)，帕尼單抗(Panitumumab)。尼妥珠單抗(簡(jiǎn)稱(chēng)hR3)是人IgGl類(lèi)型的抗體，它表達(dá)在鼠源骨髓瘤NSO細(xì)胞系中。該人源化單抗顯示出與其鼠源單抗相同的活性，可以抑制標(biāo)記的EGF結(jié)合到其受體上， 并且有101的解離常數(shù)。尼妥珠單抗表現(xiàn)出對(duì)EGFR良好的結(jié)合性。為了降低與鼠源單抗相關(guān)的免疫反應(yīng)和HAMA氏反應(yīng)并提高體內(nèi)半衰期，對(duì)這一鼠源單抗ior egf/r3 (簡(jiǎn)稱(chēng)r3) 進(jìn)行了重構(gòu)和人源化重組。該改造的抗體的構(gòu)造使用人免疫球蛋白R(shí)El和EU的輕鏈和重鏈，將鼠源單抗r3互補(bǔ)決定區(qū)CDR移植到人免疫球蛋白的骨架上，同時(shí)突變回3個(gè)鼠源氨基酸殘基(分別是^^75，11!176和Thr9;3)以完全恢復(fù)其對(duì)抗原的親和力。尼妥珠單抗是針對(duì)EGFR的人源化IgGl型單克隆抗體藥物，通過(guò)與EGFR胞外區(qū)域 3A表位結(jié)合，競(jìng)爭(zhēng)性抑制配體與EGFR的結(jié)合，使受體失去活性，從而達(dá)到抑制腫瘤細(xì)胞的作用。同時(shí)與西妥西單抗相比，它具有人源化程度高(達(dá)95%)、相對(duì)中等親和力和半衰期長(zhǎng)(達(dá)302小時(shí))的生物活性特點(diǎn)，從而可顯著降低免疫原性、以及皮膚毒性等副反應(yīng)。本藥物的治療機(jī)制尼妥珠單抗(hR;3)是人源化抗EGFR單抗。尼妥珠單抗是抗EGFR的重組人源化單克隆抗體，其人源化程度達(dá)95%，為中度親和力(10_9)，有較長(zhǎng)半衰期(302小時(shí))。由于它是單克隆抗體，所以特異性強(qiáng)；而且加之它是一個(gè)人源化抗體，所以不會(huì)發(fā)生其他抗體所容易產(chǎn)生的致命免疫應(yīng)答(HAMA)反應(yīng)。研究已經(jīng)證實(shí)尼妥珠單抗參與了抗體依賴(lài)的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒(ADCC)和補(bǔ)體依賴(lài)的細(xì)胞毒(CDC)這兩種重要的免疫學(xué)系統(tǒng)的效應(yīng)機(jī)制。在51Cr釋放實(shí)驗(yàn)中使用H-125 人肺腺癌細(xì)胞系作為靶目標(biāo)證明了尼妥珠單抗的ADCC活性。當(dāng)使用人的補(bǔ)體源時(shí)，人源化單抗尼妥珠單抗可以固定、激活和誘導(dǎo)標(biāo)記細(xì)胞的溶解。這個(gè)結(jié)果揭示了尼妥珠單抗可以通過(guò)這些免疫學(xué)效應(yīng)機(jī)制(ADCC和⑶C)誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的溶胞效應(yīng)。在老鼠細(xì)胞上通過(guò)阻斷EGFR受體進(jìn)行了一些體內(nèi)和體外的實(shí)驗(yàn)，以用來(lái)演示尼妥珠單抗在腫瘤細(xì)胞系和移植的腫瘤細(xì)胞上的抗增殖活性。尼妥珠單抗在三維培養(yǎng)基(該培養(yǎng)基對(duì)于腫瘤抑制有理想的品質(zhì))上有格外的活力。尼妥珠單抗通過(guò)抑制促血管生成生長(zhǎng)因子比如VEGF的產(chǎn)生而證明了其抗血管生成的屬性，它還通過(guò)伴隨細(xì)胞周期S期減少的Gl停止證明了其致細(xì)胞凋亡的屬性。在測(cè)定尼妥珠單抗的抗腫瘤活性的體內(nèi)試驗(yàn)中，免疫組化分析揭示了被治療患者腫瘤的血管血運(yùn)供應(yīng)顯著降低。這些結(jié)果暗示人源化單抗尼妥珠單抗可以有效作為針對(duì)EGF-R依賴(lài)的腫瘤的治療。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種有效治療頭頸部腫瘤的藥物，經(jīng)本發(fā)明人深入而廣發(fā)的研究發(fā)現(xiàn)，尼妥珠單抗可以非常有效的治療頭頸部腫瘤，在此基礎(chǔ)上完成了本發(fā)明。尼妥珠單抗的分子結(jié)構(gòu)是已知的，如中國(guó)專(zhuān)利CN10M609C所述，該單克隆抗體是一人源化單克隆抗體，是針對(duì)特異抗原產(chǎn)生的特異純化抗體，它具有高度專(zhuān)一性，能夠特異
4性針對(duì)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行靶向治療，從分子水平逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為，因而有“生物導(dǎo)彈”之稱(chēng)。該類(lèi)藥物具有靶向性強(qiáng)、特異性高和毒副作用低等特點(diǎn)，并能增強(qiáng)放、化療的治療效果，代表著腫瘤治療領(lǐng)域的最新發(fā)展方向。本發(fā)明的技術(shù)方案如下本發(fā)明的目的在于提供一種有效治療頭頸部腫瘤的藥物，所述藥物的活性成分為抗EGFR單克隆抗體，該單克隆抗體指尼妥珠單抗(Mmotuzunab)。本發(fā)明的第一方面，提供了一種抗EGFR的單克隆抗體的用途，用于制備治療頭頸部腫瘤的藥物。所述的疾病頭頸部腫瘤包括自顱底到鎖骨上，頸椎以前這樣一個(gè)解剖范圍的惡性腫瘤，即以頭面部軟組織、耳鼻咽喉、口腔、涎腺、頸部軟組織、甲狀腺等部位的腫瘤(通常不包括顱內(nèi)、頸椎腫瘤及眼內(nèi)腫瘤)；所述的頭頸部腫瘤是指鼻咽癌、甲狀腺癌、口腔癌、喉癌，下咽癌，鼻腔副鼻竇癌和涎腺腫瘤(大涎腺等)等。 所述的口腔癌是指口底癌，腭癌，牙齦癌，舌癌，頰粘膜癌，唇癌。所述頭頸部腫瘤的發(fā)病部位為面部軟組織、耳鼻咽喉、口腔、涎腺、頸部軟組織、甲狀腺等部位。所述藥物的給藥途徑是靜脈注射或靜脈滴注。所述藥物的給藥劑量是每周給藥一次，優(yōu)選給藥劑量首次劑量200mgl. 5m2體表面積，以后可以每次100mg-200mg/l. 5m2體表面積，持續(xù)6_8周。后續(xù)治療可考慮每?jī)芍芙o藥一次(100mg-200mgl. 5m2體表面積)，根據(jù)其藥物代謝半衰期特點(diǎn)來(lái)設(shè)定。在使用本發(fā)明藥物時(shí)，是將安全有效量的尼妥珠單抗施用于哺乳動(dòng)物，其中，該安全有效量通常至少為50mg/周，首次劑量為200mgl. 5m2體表面積，持續(xù)應(yīng)用6_8周。具體劑量還應(yīng)考慮給藥途徑、病人健康狀況等因素，這些都是熟練醫(yī)師技能范圍內(nèi)的。


圖1為抗體依賴(lài)性細(xì)胞調(diào)節(jié)細(xì)胞毒特異減退的結(jié)果100/1效應(yīng)器/靶位率圖2為抗體依賴(lài)性細(xì)胞調(diào)節(jié)細(xì)胞毒特異減退的結(jié)果50/1效應(yīng)器/靶位率圖3為抗EGFR單抗對(duì)荷載H-125人腺癌細(xì)胞裸鼠的抗腫瘤作用圖4為抗EGFR單抗對(duì)荷載A431腫瘤細(xì)胞裸鼠的抗腫瘤作用圖5為長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)中三種抗體在兩個(gè)計(jì)量條件下對(duì)荷載A431SCID小鼠的作用
具體實(shí)施例方式本發(fā)明的實(shí)施方案通過(guò)下列實(shí)施例舉例說(shuō)明。然而本發(fā)明的實(shí)施方案不限于這些實(shí)施例的特定細(xì)節(jié)，因?yàn)閷?duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，其它的變化是已知的，或根據(jù)直接公開(kāi)的內(nèi)容和附屬的權(quán)利要求是顯而易見(jiàn)的。因此，凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。本文引用的參考文獻(xiàn)以其全文通過(guò)引用并入本文。下述實(shí)施例中所述實(shí)驗(yàn)方法，如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法；所述試劑和生物材料，如無(wú)特殊說(shuō)明，均可從商業(yè)途徑獲得。實(shí)施例1、臨床前藥效學(xué)試驗(yàn)一、體外活性
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通過(guò)99mTc標(biāo)記的尼妥珠單抗和H-125人肺腺癌腫瘤細(xì)胞系、A431人陰道上皮癌腫瘤細(xì)胞系以及MDA-MB-468人乳腺癌腫瘤細(xì)胞系的平衡結(jié)合試驗(yàn)來(lái)測(cè)定尼妥珠單抗結(jié)合腫瘤細(xì)胞的能力。在室溫下使用冰凍干燥試劑盒(購(gòu)自西格瑪奧德里奇(上海)貿(mào)易有限公司)標(biāo)記，15分鐘后，平均有(97. 38士0. 23) %的99mTc標(biāo)記到了 IgG抗體上。在丙酮中單抗的快速紙層析顯示大約3%或更少的自由高锝酸跑到試劑前沿(Rf = 10)，這揭示幾乎所有的高锝酸都被還原。由1. 0%白蛋白浸滲的ITLC方法測(cè)定的尼妥珠單抗的膠體形態(tài)是 (1.68 士 0.81)%。99mTc標(biāo)記的尼妥珠單抗的最大結(jié)合(Bmax)可達(dá)74. 02%，表3中顯示了每個(gè)細(xì)胞的EGFR的數(shù)目及抗體和所有細(xì)胞系的親和常數(shù)。表3、在人癌癥腫瘤細(xì)胞系上的尼妥珠單抗的結(jié)合特性
權(quán)利要求
1.一種抗表皮生長(zhǎng)因子受體的單克隆抗體在制備治療頭頸部腫瘤的藥物中的用途。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述頭頸部腫瘤是指鼻咽癌、甲狀腺癌、 口腔癌、喉癌、下咽癌、鼻腔副鼻竇癌和涎腺腫瘤中的任意一種。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用途，其特征在于，所述口腔癌是指口底癌、腭癌、牙齦癌、舌癌、頰粘膜癌、唇癌中的任意一種。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用途，其特征在于，所述頭頸部腫瘤的發(fā)病部位為面部軟組織、耳鼻咽喉、口腔、涎腺、頸部軟組織、甲狀腺中的任意一種。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述抗表皮生長(zhǎng)因子受體的單克隆抗體為尼妥珠單抗。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述抗表皮生長(zhǎng)因子受體的單克隆抗體的給藥途徑是靜脈注射或靜脈滴注。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述抗表皮生長(zhǎng)因子受體的單克隆抗體的給藥劑量是每周給藥一次，首次劑量200mg/1.5m2體表面積，以后每次100mg-200mg/l. 5m2體表面積，持續(xù)6_8周，后續(xù)治療中每?jī)芍芙o藥一次，每次 100mg-200mg/l. 5m2 體表面積。
全文摘要
本發(fā)明涉及藥物領(lǐng)域，更具體地涉及一種抗表皮生長(zhǎng)因子受體的單克隆抗體在治療頭頸部腫瘤包括鼻咽癌、甲狀腺癌、口腔癌、喉癌和涎腺腫瘤等的用途，尤其是人源化單克隆抗體——尼妥珠單抗。該單克隆抗體是針對(duì)特異抗原產(chǎn)生的特異純化抗體，它具有高度專(zhuān)一性，能夠特異性針對(duì)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行靶向治療，從分子水平逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為，具有靶向性強(qiáng)、特異性高和毒副作用低等特點(diǎn)，并能顯著增強(qiáng)放、化療的治療效果。
文檔編號(hào)A61P35/00GK102441166SQ201110380639
公開(kāi)日2012年5月9日 申請(qǐng)日期2011年11月25日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月25日
發(fā)明者曲圣坤, 李桂珠, 白先宏, 羅蘭多, 鄭雋奇, 郭偉, 郭曄, 霰海萍, 馬博晨, 馬國(guó)勝 申請(qǐng)人:百泰生物藥業(yè)有限公司