專利名稱：豬血去蛋白提取物腸溶膠囊及其制備工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及豬血去蛋白提取物制劑，尤其涉及豬血去蛋白提取物腸溶膠囊制劑， 以及該制劑的制備方法。它適用于腦血管疾病、改善腦供血不足及顱腦外傷引起的神經(jīng)功能缺損、周邊血流紊亂及其引起的癥狀的治療，它是豬血去蛋白提取物的一種新劑型，屬于生物制品技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
世界各國公認腦血管疾病是威脅人類健康的最嚴重的疾病之一。一些國家公布的腦血管疾病發(fā)病率約150-200/10萬人口 /年。腦血管疾病幸存者殘疾率高達60-80%。此外，還有許多腦血管病者并非以急性形式起病，而是表現(xiàn)為癡呆、肢體運動障礙或精神異常等等、這些情況給患者家庭及社會均造成了嚴重的負擔(dān)，受到醫(yī)學(xué)界及社會各界的廣泛關(guān)注。目前，我國正步入老齡化社會，腦血管疾病發(fā)病率明顯提高，老年性癡呆、中風(fēng)、腦外傷等發(fā)病人數(shù)每年都有很大幅度增加。因此，加強對腦血管疾病的預(yù)防和治療，降低腦血管疾病發(fā)病率已成為醫(yī)療科研工作的重點和奮斗的目標(biāo)。目前治療上述疾病的藥物均以小牛血為原料的去蛋白提取物，而近年來由于瘋牛病的肆虐，瘋牛病檢測方法的局限性、瘋牛病病毒滅活的限制性等因素，世界衛(wèi)生組織嚴格限制使用牛血原料產(chǎn)品，廣大民眾對牛源性生物制品也產(chǎn)生嚴重的恐慌心理；目前，中國也嚴格限制牛資源制品，尤其是西方國家的食品和藥品的進口。因此在不遠的將來，此類品種在臨床應(yīng)用上將受到廣泛的限制。市場上銷售的小牛血清去蛋白腸溶膠囊是一種牛源制品，存在瘋牛病及阮病毒的潛在風(fēng)險，易引起人體不良反應(yīng)。該產(chǎn)品內(nèi)容物輔料較少，較易吸潮，影響藥物質(zhì)量，產(chǎn)品起效速度慢，在體內(nèi)的生物利用度較低，致使產(chǎn)品整體療效下降。在專利號為 ZL200510083040.8，專利名稱為“小牛血去蛋白膠囊及其制備方法”中描述的動物實驗采用口服給藥，由于發(fā)明中所提及小牛血去蛋白膠囊為腸溶膠囊殼控制藥物釋放，故這種口服給藥在胃中已分解吸收，不能反映該膠囊在腸道中起到的藥物作用。雖然豬血去蛋白提取物具有促進細胞對氧和葡萄糖的攝取等作用，但不能直接用于患者臨床應(yīng)用，并且此提取物是水溶液，儲存條件困難，只能冷凍保存，不僅耗電量大，一旦停電將直接影響其質(zhì)量。并且現(xiàn)有的豬血去蛋白提取物為注射制劑，其具有注射劑使用不便，患者不能自行用藥的缺點。

發(fā)明內(nèi)容
為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種豬血去蛋白提取物腸溶膠囊，其具有起效快、療程短、治療效果好、安全性和生物活性高、易于儲存、原料易得、成本低，生產(chǎn)工藝先進、周期短、收率高、方便給藥的特點。為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明是通過下述技術(shù)方案實現(xiàn)的
豬血去蛋白提取物腸溶膠囊，它由膠囊內(nèi)容物和膠囊殼組成；所述膠囊內(nèi)容物由下述原料按所述重量分數(shù)比制成取豬血去蛋白提取物粉末45-65份，可壓性淀粉21-33份，羧甲基淀粉鈉4-7份，淀粉漿8-12份，硬脂酸鎂和滑石粉2-3份，尼泊金甲乙酯0. 07-0. 11份； 所述膠囊殼為腸溶膠囊殼。所述膠囊內(nèi)容物的最佳重量分數(shù)比為豬血去蛋白提取物粉末55份，可壓性淀粉 27份，羧甲基淀粉鈉5. 5份，淀粉漿10份，硬脂酸鎂和滑石粉2. 5份，尼泊金甲乙酯0. 09 份。所述的豬血去蛋白提取物粉末組成百分含量為60%氯化物，20%的K+、Ca2+和Na+， 15%的糖類物質(zhì)和5%的氨基酸、核糖、多肽。本發(fā)明另一目的是提供豬血去蛋白提取物腸溶膠囊的制備工藝。豬血去蛋白提取物腸溶膠囊的制備工藝，取符合所述重量份數(shù)的豬血去蛋白提取物粉末、可壓性淀粉、羧甲基淀粉鈉、淀粉漿、硬脂酸鎂和滑石粉和尼泊金甲乙酯混合均勻， 制粒，45-55°C真空干燥對小時，20目篩整粒，裝入腸溶膠囊殼，得到豬血去蛋白提取物腸溶膠囊。所述豬血去蛋白提取物粉末是由豬血去蛋白提取溶液經(jīng)進口溫度120°C，出口溫度65°C，風(fēng)速2. 5m/s條件下噴霧干燥所得。所述的豬血去蛋白提取物粉末是所述的豬血去蛋白提取物粉末的制備工藝如下取非傳染區(qū)經(jīng)檢驗合格的健康豬，采用無菌采血，去纖維蛋白，反復(fù)凍融，勻漿，分別用 100000D、30000D、10000、6000D的中空纖維超濾柱依次進行四級超濾，將最終超濾液裝入減壓濃縮罐，在55°C下采用射流真空泵抽真空進行減壓濃縮至總固體含量40mg/ml以上，得豬血去蛋白提取物溶液，經(jīng)噴霧干燥，即得豬血去蛋白提取物粉末，該豬血去蛋白提取物粉末組成百分含量為60%氯化物，20%的K+、Ca2+和Na+，15%的糖類物質(zhì)和5%的氨基酸、核糖、 多肽。所述的噴霧干燥條件為進口溫度120°C，出口溫度65 V，風(fēng)速2. 5m/s, 45-55 V真空干燥M小時，80目過篩得豬血去蛋白提取物粉末。由于采用上述技術(shù)方案，使得本發(fā)明具有如下優(yōu)點和效果
本發(fā)明采用豬血為原料來源替代小牛血，生產(chǎn)具有相同功能的生化藥物，可以替代牛血來源的同類產(chǎn)品，成為治療和輔助治療腦血管疾病的首選藥物。本發(fā)明產(chǎn)品采用豬血為原料與同類牛血產(chǎn)品相比具有高安全性、高生物活性的產(chǎn)品優(yōu)勢，并且由于原料易得、成本低，生產(chǎn)工藝先進、周期短、收率高，與同類牛血產(chǎn)品相比具有價格優(yōu)勢。由實驗數(shù)據(jù)可見， 本發(fā)明在提高存活率、提高缺氧腦組織中SOD的含量、促進SOD釋放、提高由藥物引起的記憶障礙、延長記憶潛伏期、減少記憶識別次數(shù)方面作用效果優(yōu)于小牛血去蛋白膠囊。豬血去蛋白提取物腸溶膠囊摒棄了注射劑使用不便，患者不能自行用藥的缺點， 可以較廣泛的用于臨床，并且無原料安全性隱患。在制劑工藝上，不經(jīng)有機溶劑，嚴格控制水分含量，防止產(chǎn)品吸潮變質(zhì)影響療效，保證產(chǎn)品臨床使用安全。豬血去蛋白提取物雖能刺激細胞對氧和葡萄糖的攝取、利用，促進細胞的增殖，抑制細胞的損失，但不能直接用于患者臨床應(yīng)用，并且此提取物是水溶性，儲存條件困難，只能冷凍保存，本發(fā)明研發(fā)的腸溶膠囊則解決了這一問題。豬血去蛋白提取物是以豬血液為原料制備的小分子(分子量小于6000Da)肽、核苷酸和寡糖類物質(zhì)。其主要藥理作用是促進細胞對氧和葡萄糖的攝取和利用，使細胞中葡萄糖的無氧代謝轉(zhuǎn)向有氧代謝，促使能量物質(zhì)生成增多，延長細胞生存時間，促進組織細胞代謝及功能恢復(fù)和組織修復(fù)。本發(fā)明將豬血去蛋白提取物制成方便服用的口服膠囊，彌補注射制劑應(yīng)用不方便的缺陷，患者可以在家自行長期服用，較廣泛的用于臨床，并且無原料安全性隱患，實驗證明其療效顯著，使用安全?？捎糜谂R床治療腦血管疾病(癡呆，如中風(fēng)、腦外傷)，改善腦供血不足及顱腦外傷引起的神經(jīng)功能缺損，治療周邊血流(動、靜脈)紊亂及引起的癥狀(動脈血管病、腿部潰瘍)等。本發(fā)明藥效學(xué)實驗中采用將豬血去蛋白提取物腸溶膠囊分別制成采用內(nèi)容物控制釋放和膠囊殼控制釋放的兩種方式，并采用體外實驗對比了兩種釋放方式，二者無差別， 可以更客觀的反映藥物在體內(nèi)釋放吸收的效率與作用。同時考慮到生化制品對溫度較為敏感，特別對豬血去蛋白提取物溶液的干燥條件進行考察，分別比較了高溫噴霧干燥和冷凍干燥，兩種方式對豬血去蛋白提取物腸溶膠囊的含量、活力及藥效學(xué)無統(tǒng)計學(xué)差異，故從節(jié)能、成本等方面考慮，選擇較為經(jīng)濟的噴霧干燥方法。本發(fā)明在制劑工藝及藥效學(xué)等方面充分考慮豬血去蛋白提取物腸溶膠囊的特性，通過不同條件的對比，更好地優(yōu)選出經(jīng)濟、合理、有效的實驗條件，更加突出豬血去蛋白提取物腸溶膠囊的有效性及安全性。 豬血去蛋白提取物腸溶膠囊治療腦血管疾病、改善腦供血不足及顱腦外傷引起的神經(jīng)功能缺損、治療周邊血流紊亂等。本發(fā)明除了采用了豬血去蛋白提取物外，其它原料與小牛血去蛋白膠囊的原料也不同，本發(fā)明經(jīng)過大量實驗篩選得出可壓性淀粉、羧甲基淀粉鈉、淀粉漿、硬脂酸鎂和滑石粉和尼泊金甲乙酯作為原料，由實驗數(shù)據(jù)可以看出，可壓性淀粉、羧甲基淀粉鈉、淀粉漿、硬脂酸鎂和滑石粉和尼泊金甲乙酯這幾種原料不僅起到了基質(zhì)的作用，同時與豬血去蛋白提取物產(chǎn)生了協(xié)同作用，進而提高了藥物的治療效果，穩(wěn)定性好。
具體實施例方式下述的實施例中的實驗方法如無特別說明，均為常規(guī)方法。下述的實施例中的百分含量如無特別說明，均為質(zhì)量百分含量。實施例1
制備豬血去蛋白提取物粉末的方法比較 1、噴霧干燥法
按照專利號為ZL200510046^9. 1，發(fā)明名稱為“從豬血中提取具有刺激細胞呼吸活性作用物質(zhì)的方法”中描述的制備方法得豬血去蛋白提取物溶液；將豬血去蛋白提取物溶液在進口溫度120°C，出口溫度65°C，風(fēng)速2. 5m/s條件下進行噴霧干燥，45_55°C真空干燥M 小時，80目過篩，得豬血去蛋白提取物粉末。按重量分數(shù)比取豬血去蛋白提取物粉末55，可壓性淀粉27，羧甲基淀粉鈉5. 5，5%淀粉漿10，硬脂酸鎂和滑石粉2. 5，尼泊金甲乙酯0. 09， 混合，16目篩制粒，45-55°C真空干燥對小時，20目篩整粒，裝入腸溶膠囊殼，得到豬血去蛋白提取物腸溶膠囊。2、冷凍干燥法
按照專利號為ZL200510046^9. 1，發(fā)明名稱為“從豬血中提取具有刺激細胞呼吸活性作用物質(zhì)的方法”中描述的制備方法得豬血去蛋白提取物溶液；將豬血去蛋白提取物溶液在溫度-4(T -50°C預(yù)凍4小時，升溫至-2(T -25°C升華8小時，升溫至-1(T -5°C再干燥4 小時，再升溫至2(T25°C保溫8小時，干燥，80目過篩，得豬血去蛋白提取物粉末。按重量分數(shù)比取豬血去蛋白提取物粉末55，可壓性淀粉27，羧甲基淀粉鈉5. 5，5%淀粉漿10，硬脂酸鎂和滑石粉2. 5，尼泊金甲乙酯0. 09，混合，16目篩制粒，45-55°C真空干燥對小時，20目篩整粒，裝入腸溶膠囊殼，得到豬血去蛋白提取物腸溶膠囊。3、兩種方法質(zhì)量指標(biāo)比較 3. 1呼吸活性測定
3. 1. 1肝勻漿液的制備取體重200— 300g的雄性豚鼠一只，頸部打擊處死 (處死前需禁食至少M小時)，立即切斷頸動脈放血，打開腹腔取出肝臟，置冰水浴中的 Soerensen緩沖液中(注意不要損傷膽囊或膽管)。稱取5. 5g的肝臟，并切割為大小相同的7塊，每塊用7ml的Soerensen緩沖液勻漿(注意以上操作必須在冰水浴中進行)。3. 1. 2測定法預(yù)先把測壓計反應(yīng)瓶洗凈并干燥，備用；裝好測壓液于測壓管內(nèi)， 調(diào)節(jié)液面至150mm ；反應(yīng)瓶中先加入Soerensen緩沖液1. 1ml，加供試品0. aiil，然后加肝勻漿液1. Oml ；加10%氫氧化鈉溶液0. 2ml于具一小濾紙條的反應(yīng)瓶中間小杯；由于肝勻漿本身有耗氧作用，故實驗時以Soerensen緩沖液0. 2ml代替供試品，其余試劑同樣品管，作為空白管；將裝好的反應(yīng)瓶按管號與測壓計相連(注意密閉，勿使漏氣)，置37°C恒溫水浴中； 開動振蕩器振搖10分鐘(75次/分)使反應(yīng)瓶內(nèi)外溫度一致。將測壓計右側(cè)柱液面調(diào)至 150mm，記下左側(cè)液面初讀數(shù)(A)，然后關(guān)閉三向活塞，開始計時，反應(yīng)30分鐘記時后將測壓計右側(cè)柱液面再調(diào)至150mm，記下左側(cè)液面讀數(shù)(B)。打開三向活塞，重復(fù)上述過程，進行下一個30分鐘的反應(yīng)并記下左側(cè)液面初讀數(shù)(C)及30分鐘后的液面讀數(shù)(D)；實驗過程中必須附加一套供校正用的溫壓計，在反應(yīng)瓶中加2. 5ml的Soerensen緩沖液，使其在與試驗管完全相同的條件下試驗，觀察其壓力的變化(Δ C)，以消除試驗過程中溫度及大氣壓的影響；取2. Oml肝勻漿，置恒重的裝有海沙的稱量瓶中，110°C干燥至恒重，計算兩次的重量差 Aff (mg)。3. 1. 3 計算
QO2 ( μ 102/mg*h) =[ (A-B+C-D) XKl-Δ CXK2]/G/I (QO2 彡 4· 0 μ 1.02/mg.h) 刺激指數(shù)(SI)=供試品QO2/空白如2 (Si ^ 2.5)
式中Kl為空白或樣品的反應(yīng)瓶常數(shù)；K2為溫壓計的反應(yīng)瓶常數(shù)；G為每Iml肝勻漿的干重(mg)，G= Δ ff/2-9. 3,9. 3 % Soerensen緩沖液的干重(mg) ；I為反應(yīng)時間(小時)。3.2多肽測定
3.2. 1標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備取帶塞試管6支，按順序精密加入牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)液0.00， 0. 50,0. 70,0. 90，1. 10，1. 30ml,再依次加水 1. 60，1. 10,0. 90,0. 70,0. 50,0. 30ml,再精密加堿性銅試液4. Oml搖勻，室溫放置10分鐘，依次精密加入福林試液0. 4ml搖勻，加塞，于 30°C恒溫水浴保溫30分鐘，冷卻后，在660nm的波長處測定吸收度，以吸收度A為縱坐標(biāo)， 白蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度C為橫坐標(biāo)，繪制C-A曲線，或用最小二乘法回歸，求得回歸方程。3. 2. 2供試品測定取膠囊內(nèi)容物混合均勻，精密稱定(約相當(dāng)于5mg多肽)，加水溶解并稀釋制成每Iml含100 μ g的多肽溶液，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。精密量取供試品溶液0. 80ml,以下照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備，自“再依次精密加堿性銅試液……”起，同法操作， 測定吸收度，自標(biāo)準(zhǔn)曲線或回歸方程求得供試液的mg數(shù)。多肽含量應(yīng)在4. 5mg/粒飛.5mg/粒之間。 3. 3測定結(jié)果
分別采用噴霧干燥法和冷凍干燥法制備豬血去蛋白提取物粉末，對制備豬血去蛋白提取物腸溶膠囊的含量及活力的影響比較結(jié)果如下
表1兩種制備豬血去蛋白提取物粉末的方法比較結(jié)果表
權(quán)利要求
1.豬血去蛋白提取物腸溶膠囊，其特征在于它由膠囊內(nèi)容物和膠囊殼組成；所述膠囊內(nèi)容物由下述原料按所述重量分數(shù)比制成取豬血去蛋白提取物粉末45-65份，可壓性淀粉21-33份，羧甲基淀粉鈉4-7份，淀粉漿8-12份，硬脂酸鎂和滑石粉2_3份，尼泊金甲乙酯0. 07-0. 11份；所述膠囊殼為腸溶膠囊殼。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的豬血去蛋白提取物腸溶膠囊，其特征在于所述膠囊內(nèi)容物由下述原料按所述重量分數(shù)比制成豬血去蛋白提取物粉末陽份，可壓性淀粉27份，羧甲基淀粉鈉5. 5份，淀粉漿10份，硬脂酸鎂和滑石粉2. 5份，尼泊金甲乙酯0. 09份。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的豬血去蛋白提取物腸溶膠囊，其特征在于所述的豬血去蛋白提取物粉末組成百分含量為60%氯化物，20%的K+、Ca2+和Na+，15%的糖類物質(zhì)和5%的氨基酸、核糖、多肽。
4.一種權(quán)利要求1所述豬血去蛋白提取物腸溶膠囊的制備工藝，其特征在于取符合所述重量份數(shù)的豬血去蛋白提取物粉末、可壓性淀粉、羧甲基淀粉鈉、淀粉漿、硬脂酸鎂和滑石粉和尼泊金甲乙酯混合均勻，制粒，45-55°C真空干燥M小時，20目篩整粒，裝入腸溶膠囊殼，得到豬血去蛋白提取物腸溶膠囊。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的豬血去蛋白提取物腸溶膠囊的制備工藝，其特征在于所述豬血去蛋白提取物粉末是由豬血去蛋白提取溶液經(jīng)進口溫度120°C，出口溫度65°C，風(fēng)速 2. 5m/s條件下噴霧制粒，所得。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的豬血去蛋白提取物腸溶膠囊的制備工藝，其特征在于所述的豬血去蛋白提取物粉末的制備方法如下取非傳染區(qū)經(jīng)檢驗合格的健康豬，采用無菌采血， 去纖維蛋白，反復(fù)凍融，勻漿，分別用100000D、30000D、10000、6000D的中空纖維超濾柱依次進行四級超濾，將最終超濾液裝入減壓濃縮罐，在下采用射流真空泵抽真空進行減壓濃縮至總固體含量40mg/ml以上，得豬血去蛋白提取物溶液，經(jīng)噴霧干燥，即得豬血去蛋白提取物粉末，該豬血去蛋白提取物粉末組成百分含量為60%氯化物，20%的K+、Ca2+和Na+， 15%的糖類物質(zhì)和5%的氨基酸、核糖、多肽。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的豬血去蛋白提取物腸溶膠囊的制備工藝，其特征在于所述的噴霧干燥條件為進口溫度120°C，出口溫度65°C，風(fēng)速2. 5m/s，45-55°C真空干燥對小時，80 目過篩，得豬血去蛋白提取物粉末。
全文摘要
本發(fā)明公開了豬血去蛋白提取物腸溶膠囊及其制備工藝，屬于生物制品技術(shù)領(lǐng)域。豬血去蛋白提取物腸溶膠囊，它由膠囊內(nèi)容物和膠囊殼組成；所述膠囊內(nèi)容物由下述原料按所述重量分數(shù)比制成取豬血去蛋白提取物粉末45-65份，可壓性淀粉21-33份，羧甲基淀粉鈉4-7份，淀粉漿8-12份，硬脂酸鎂和滑石粉2-3份，尼泊金甲乙酯0.07-0.11份；所述膠囊殼為腸溶膠囊殼。本發(fā)明的豬血去蛋白提取物腸溶膠囊性質(zhì)穩(wěn)定，臨床上使用方便，可用于治療和輔助治療腦血管疾病、改善腦供血不足及顱腦外傷引起的神經(jīng)功能缺損、周邊血流紊亂癥狀的口服首選藥物。
文檔編號A61P9/10GK102302513SQ20111028437
公開日2012年1月4日 申請日期2011年9月23日 優(yōu)先權(quán)日2011年9月23日
發(fā)明者萬琳琳, 劉路, 李莉, 王光, 申福新 申請人:沈陽斯佳科技發(fā)展有限公司