專利名稱：從豬血中提取改性血漿蛋白粉、補(bǔ)血活性肽的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從豬血中提取改性血漿蛋白粉、補(bǔ)血活性肽的方法。
背景技術(shù)：
據(jù)有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道國(guó)內(nèi)外對(duì)畜禽血的開(kāi)發(fā)，始于上世紀(jì)初。早期主要用于飼料工業(yè)。 隨著技術(shù)發(fā)展，在德國(guó)、丹麥等國(guó)的食品專家用豬血分離出血漿作為補(bǔ)品，加入香腸、布丁、 糕點(diǎn)中；七十年代瑞典、法國(guó)開(kāi)始將新鮮豬血用于香腸和布丁中，并將少量的豬血漿用于糕 點(diǎn)、餅干、面包、掛面等產(chǎn)品以代替雞蛋清，但也僅利用了豬血資源的25% 30%。豬血還 曾被用于家具的黏合劑，釀酒工業(yè)中的澄清劑以及用豬血為原料提取許多有生理功能的制 品，如血紅素、超氧化物歧化酶、凝血酶等。近年來(lái)法國(guó)又開(kāi)始將血漿制成血漿粉和蛋白粉 添加到食品中，但這些應(yīng)用仍很有限。 目前我國(guó)利用血液的技術(shù)程度較低、產(chǎn)品單調(diào)，主要是生產(chǎn)干燥血粉、發(fā)酵血粉飼 料等，近年又開(kāi)發(fā)了血豆腐、補(bǔ)血?jiǎng)┑龋瞧湎章蕛H有30 % 50 %左右，利用率很 低，并且生產(chǎn)環(huán)境尚需改進(jìn)。國(guó)內(nèi)在豬血資源的利用上雖做了大量的基礎(chǔ)工作，但尚處于實(shí) 驗(yàn)研究階段，如在豬血蛋白水解采用酸水解方法，且均為單一產(chǎn)品提取。在食品領(lǐng)域的應(yīng)用 上，目前也有研究報(bào)道，技術(shù)難點(diǎn)在于有機(jī)溶劑的大量使用產(chǎn)生的再污染問(wèn)題，由于這些原 因，豬血資源的綜合利用，難以實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就在于克服上述現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足，而提供一種從豬血中提取 改性血漿蛋白粉、補(bǔ)血活性肽的方法，該方法用復(fù)合酶水解血紅蛋白生產(chǎn)補(bǔ)血活性肽，采用 轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶酶解血漿蛋白生產(chǎn)改性血漿蛋白，具有省時(shí)、省能量、操作簡(jiǎn)單、資源利用率 高的優(yōu)點(diǎn)。 本發(fā)明的技術(shù)方案是一種從豬血中提取改性血漿蛋白粉、補(bǔ)血活性肽的方法，其 特征在于以新鮮健康豬血為原料，經(jīng)抗凝處理后進(jìn)行離心分離，得到血細(xì)胞和血漿；血細(xì) 胞經(jīng)高壓剪切破壁、復(fù)合酶水解、閃蒸脫臭工藝處理后得到的酶解液，再經(jīng)粗濾、精濾及濃 縮處理，噴霧干燥制成補(bǔ)血活性肽；經(jīng)過(guò)分離后的血漿則經(jīng)改性處理制成改性血漿蛋白粉。
上述抗凝處理和離心分離的工藝過(guò)程是在新鮮血液中加人檸檬酸鈉0. 33% (w/ v)，然后將其在5°C，3000Xg離心分離20min，分離上清液后得到血紅細(xì)胞，隨即采用均質(zhì) 機(jī)在60MPa壓力下破碎血紅細(xì)胞，使血紅蛋白溶出并勻漿，冷凍備用，上清液即血漿，血漿
約占全血的60%，冷卻至rc 2t:保存。 上述分離后的血漿則經(jīng)改性處理制成改性血漿蛋白粉的工藝過(guò)程是(1)在血漿 中加入轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶來(lái)提高血漿蛋白的凝膠性；提高血漿蛋白的凝膠性的條件是轉(zhuǎn)谷氨 酰胺酶的加入量在l-5u/g之間、pH7. 0-9. 0、反應(yīng)溫度為45°C _55°C 、底物蛋白濃度為12%; (2)將改性后的血漿蛋白進(jìn)行濃縮，其濃縮條件為真空度O. 13MPa，溫度不高于55t:，使固 形物含量濃縮至為40% ;(3)將上述濃縮液進(jìn)行噴霧干燥，得到血漿蛋白粉；噴霧干燥的進(jìn)風(fēng)溫度為160°C 170。C，排風(fēng)溫度為48°C 50。C，進(jìn)料濃度為40%左右。 上述通過(guò)血紅細(xì)胞制成補(bǔ)血活性肽的工藝過(guò)程是將處理后的血紅蛋白調(diào)其濃度
為8%，加熱至40°C -55t:保溫水解，加入0. 2%的復(fù)合蛋白酶進(jìn)行水解血紅蛋白，pH值在
7-8之間，水解后加入脫色劑，在室溫下處理30min后3000Xg離心10min，得到酶解上清
液，下層液為紅細(xì)胞；下層的紅細(xì)胞經(jīng)清洗后，使用超聲波勻漿技術(shù)，使血細(xì)胞破壞，制備出
變性血紅蛋白，再經(jīng)離心分離，沉淀物經(jīng)濃縮及噴霧干燥制成血紅蛋白粉；酶解的上清液經(jīng)
過(guò)粗濾后，進(jìn)行精濾、濃縮后經(jīng)過(guò)噴霧干燥制得補(bǔ)血活性肽。 上述復(fù)合酶采用AS1.39中性蛋白酶和木瓜蛋白酶按照5 : 5的比例混合制得。
上述復(fù)合酶水解血紅蛋白的最優(yōu)條件為溫度55t:，pH7. 5值、E/S為6000-8000u/ g、底物濃度為6-8%、酶解6-8h。 上述補(bǔ)血活性肽的膜過(guò)濾條件為用UF-3膜截留10000DA以上的肽及大分子物 質(zhì)，膜過(guò)濾壓力為2. OmPa，膜通量為16. 3L/m2. h ;補(bǔ)血活性肽的真空濃縮的適宜條件為濃 縮溫度7(TC，真空度0. 090mPa ;補(bǔ)血活性肽的噴霧干燥采用離心噴霧干燥器，其進(jìn)風(fēng)溫度 30(TC，排風(fēng)溫度90°C IO(TC，進(jìn)料流速2L/h的條件下，補(bǔ)血活性肽干燥效率145g/L。
本發(fā)明具有如下的優(yōu)點(diǎn)和積極效果 1、由于本工藝未采用有機(jī)溶劑，既減少了成本又減輕了排放，對(duì)環(huán)境無(wú)污染。
2、采用復(fù)合酶水解血紅蛋白生產(chǎn)的補(bǔ)血活性肽品質(zhì)高、色澤白、質(zhì)地細(xì)膩均勻，小 肽平均分子量《10000Dalton，游離氨基酸含量《15. 0%。血蛋白粉蛋白質(zhì)^ 90. 0%。該 產(chǎn)品對(duì)缺鐵性貧血具有良好的防治作用，其吸收率高，是無(wú)機(jī)補(bǔ)鐵劑吸收率的4-5倍，且無(wú) 任何毒副作用。 3、采用轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶酶解血漿蛋白生產(chǎn)的改性血漿蛋白，不吸潮、不結(jié)塊、無(wú)腥 味。其水分《5.0%、粘度(5%溶液)>2.0毫帕秒、蛋白質(zhì)>90.0%。這種改性血漿蛋白 粉用于肉制品加工，特別是腸類制品的加工，可代替或部分代替磷酸鹽起保水增粘的作用， 不會(huì)影響人體對(duì)鈣的吸收，同時(shí)提高了肉制品的風(fēng)味及營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。
4、工藝方法省時(shí)、省能量、操作簡(jiǎn)單、充分利用了豬血資源。


圖1是本發(fā)明的工藝流程圖。
具體實(shí)施例方式
—種從豬血中提取改性血漿蛋白粉、補(bǔ)血活性肽的方法，包括以下步驟
1、血紅蛋白(HC)和血槳的制備。 新鮮豬血液中加人檸檬酸鈉0.33% (w/v)，以防止血液凝結(jié)，然后將其在5t:， 3000 X g離心分離20min，分離上清液后得到血紅細(xì)胞其蛋白質(zhì)含量為(33. 12 土 2. 57) g/100g，隨即采用均質(zhì)機(jī)在60MPa壓力下破碎血紅細(xì)胞，使血紅蛋白溶出并勻槳，冷凍備 用。上清液即血漿，血漿約占全血的60 % ，冷卻至rc 2 °C保存。 2、將分離后的血漿經(jīng)生物改性處理制成改性血漿蛋白粉。其工藝過(guò)程是(1)在 血漿中加入轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶來(lái)提高血漿蛋白的凝膠性；提高血漿蛋白的凝膠性的條件是轉(zhuǎn) 谷氨酰胺酶的加入量5u/g、 pH8. 0、反應(yīng)溫度為45t:、底物蛋白濃度為12% ;(2)將改性后的血漿蛋白進(jìn)行濃縮，其濃縮條件為真空度0. 13MPa，溫度不高于55t:，使固形物含量濃 縮至為40% ;(3)將上述濃縮液進(jìn)行噴霧干燥，得到不吸潮、不結(jié)塊、無(wú)腥味的黃色血漿蛋 白粉；噴霧干燥的進(jìn)風(fēng)溫度為160°C 17(TC，排風(fēng)溫度為48°C 5(TC，進(jìn)料濃度為40%左 右。 3、通過(guò)血紅細(xì)胞制成補(bǔ)血活性肽。其工藝過(guò)程是將處理后的血紅蛋白調(diào)其濃度 為8%，加熱至5(TC保溫水解，以血紅蛋白質(zhì)量計(jì)算，加入0. 2%的復(fù)合蛋白酶進(jìn)行水解血 紅蛋白，水解過(guò)程中由于氨基氮含量逐漸增加，使反應(yīng)液中的pH值下降，可通過(guò)滴加4N氫 氧化鈉來(lái)維持其pH值，攪拌水解24h后，升溫至IO(TC水浴5min滅酶，然后加脫色劑(羧 甲基淀粉鈉)，在室溫下處理30min后3000 X g離心10min，得到酶解上清液，下層液為紅細(xì) 胞。下層的紅細(xì)胞經(jīng)清洗后，使用超聲波勻漿技術(shù)，使血細(xì)胞破壞，制備出變性血紅蛋白，再 經(jīng)離心分離，沉淀物經(jīng)濃縮及噴霧干燥制成血紅蛋白粉；酶解的上清液經(jīng)過(guò)粗濾后，進(jìn)行精 濾、濃縮后經(jīng)過(guò)噴霧干燥制得補(bǔ)血活性肽。 上述復(fù)合酶采用AS1.39中性蛋白酶和木瓜蛋白酶按照5 : 5的比例混合制得。
上述復(fù)合酶水解血紅蛋白的最優(yōu)條件為溫度55°C， pH7. 5值、E/S為8000u/g、底 物濃度為8X、酶解8h。 上述補(bǔ)血活性肽的膜過(guò)濾條件為用UF-3膜截留10000DA以上的肽及大分子物 質(zhì)，膜過(guò)濾壓力為2. OmPa，膜通量為16. 3L/m2. h ;補(bǔ)血活性肽的真空濃縮的適宜條件為濃 縮溫度7(TC，真空度0. 090mPa ;補(bǔ)血活性肽的噴霧干燥采用離心噴霧干燥器，其進(jìn)風(fēng)溫度 30(TC，排風(fēng)溫度90°C IO(TC，進(jìn)料流速2L/h的條件下，補(bǔ)血活性肽干燥效率145g/L。
權(quán)利要求
一種從豬血中提取改性血漿蛋白粉、補(bǔ)血活性肽的方法，其特征在于以新鮮健康豬血為原料，經(jīng)抗凝處理后進(jìn)行離心分離，得到血細(xì)胞和血漿；血細(xì)胞經(jīng)高壓剪切破壁、復(fù)合酶水解、閃蒸脫臭工藝處理后得到的酶解液，再經(jīng)粗濾、精濾及濃縮處理，噴霧干燥制成補(bǔ)血活性肽；經(jīng)過(guò)分離后的血漿則經(jīng)改性處理制成改性血漿蛋白粉。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的從豬血中提取改性血漿蛋白粉、補(bǔ)血活性肽的方法，其特征 在于上述抗凝處理和離心分離的工藝過(guò)程是在新鮮血液中加人檸檬酸鈉0. 33% (w/v)， 然后將其在5°C，3000Xg離心分離20min，分離上清液后得到血紅細(xì)胞，隨即采用均質(zhì)機(jī)在 60MPa壓力下破碎血紅細(xì)胞，使血紅蛋白溶出并勻漿，冷凍備用，上清液即血漿，血漿約占全血的60%，冷卻至rc 2t:保存。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的從豬血中提取改性血漿蛋白粉、補(bǔ)血活性肽的方法，其特征在于上述分離后的血漿經(jīng)改性處理制成改性血漿蛋白粉的工藝過(guò)程是(l)在血漿中加 入轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶來(lái)提高血漿蛋白的凝膠性；提高血漿蛋白的凝膠性的條件是轉(zhuǎn)谷氨酰胺 酶的加入量在l-5u/g之間、pH7. 0-9.0、反應(yīng)溫度為45°C _55°C、底物蛋白濃度為12% ;(2) 將改性后的血漿蛋白進(jìn)行濃縮，其濃縮條件為真空度O. 13MPa，溫度不高于55t:，使固形 物含量濃縮至為40% ;(3)將上述濃縮液進(jìn)行噴霧干燥，得到血漿蛋白粉；噴霧干燥的進(jìn)風(fēng) 溫度為160°C 170。C，排風(fēng)溫度為48°C 50。C，進(jìn)料濃度為40%左右。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的從豬血中提取改性血漿蛋白粉、補(bǔ)血活性肽的方法，其特征在于上述通過(guò)血紅細(xì)胞制成補(bǔ)血活性肽的工藝過(guò)程是將處理后的血紅蛋白調(diào)其濃度為8%，加熱至40°C -55"保溫水解，加入0. 2X的復(fù)合蛋白酶進(jìn)行水解血紅蛋白，pH值在7_8 之間，水解后加入脫色劑，在室溫下處理30min后3000 X g離心10min，得到酶解上清液，下 層液為紅細(xì)胞；下層的紅細(xì)胞經(jīng)清洗后，使用超聲波勻漿技術(shù)，使血細(xì)胞破壞，制備出變性 血紅蛋白，再經(jīng)離心分離，沉淀物經(jīng)濃縮及噴霧干燥制成血紅蛋白粉；酶解的上清液經(jīng)過(guò)粗 濾后，進(jìn)行精濾、濃縮后經(jīng)過(guò)噴霧干燥制得補(bǔ)血活性肽。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的從豬血中提取改性血漿蛋白粉、補(bǔ)血活性肽的方法，其特征 在于上述復(fù)合酶采用AS1.39中性蛋白酶和木瓜蛋白酶按照5 : 5的比例混合制得。
6. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的從豬血中提取改性血漿蛋白粉、補(bǔ)血活性肽的方法，其特征 在于上述復(fù)合酶水解血紅蛋白的最優(yōu)條件為溫度55°C，pH7. 5值、E/S為6000-8000u/g、 底物濃度為6-8%、酶解6-8h。
7. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的從豬血中提取改性血漿蛋白粉、補(bǔ)血活性肽的方法，其特征 在于上述補(bǔ)血活性肽的膜過(guò)濾條件為用UF-3膜截留10000DA以上的肽及大分子物質(zhì)， 膜過(guò)濾壓力為2. OmPa，膜通量為16. 3L/m2. h ;補(bǔ)血活性肽的真空濃縮的適宜條件為濃縮 溫度70°C，真空度0. 090mPa ;補(bǔ)血活性肽的噴霧干燥采用離心噴霧干燥器，其進(jìn)風(fēng)溫度 30(TC，排風(fēng)溫度90°C IO(TC，進(jìn)料流速2L/h的條件下，補(bǔ)血活性肽干燥效率145g/L。
全文摘要
一種從豬血中提取改性血漿蛋白粉、補(bǔ)血活性肽的方法，以新鮮健康豬血為原料，經(jīng)抗凝處理后進(jìn)行離心分離，得到血細(xì)胞和血漿；血細(xì)胞經(jīng)高壓剪切破壁、復(fù)合酶水解、閃蒸脫臭工藝處理后得到的酶解液，再經(jīng)粗濾、精濾及濃縮處理，噴霧干燥制成補(bǔ)血活性肽；經(jīng)過(guò)分離后的血漿則經(jīng)改性處理制成改性血漿蛋白粉。本發(fā)明具有如下的優(yōu)點(diǎn)和積極效果1、生產(chǎn)成本、對(duì)環(huán)境無(wú)污染。2、生產(chǎn)的補(bǔ)血活性肽小肽平均分子量≤10000Dalton，游離氨基酸含量≤15.0％。血蛋白粉的蛋白質(zhì)≥90.0％。3、生產(chǎn)的改性血漿蛋白水分≤5.0％、粘度(5％溶液)≥2.0毫帕秒、蛋白質(zhì)≥90.0％。4、工藝方法省時(shí)、省能量、操作簡(jiǎn)單、充分利用了豬血資源。
文檔編號(hào)A23J3/12GK101766251SQ20081015469
公開(kāi)日2010年7月7日 申請(qǐng)日期2008年12月30日 優(yōu)先權(quán)日2008年12月30日
發(fā)明者劉元, 楊萍, 趙麗, 陳樹(shù)生 申請(qǐng)人:天津市食品工業(yè)生產(chǎn)力促進(jìn)中心