專利名稱:牦牛血去蛋白提取物及其提取方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明涉及一種從牦牛(包括新生六個(gè)月內(nèi)的小牦牛)血提取的去蛋白提取物及其提取方法和應(yīng)用。屬于生物藥品制劑、保健食品及食品生產(chǎn)方法、及應(yīng)用領(lǐng)域。
背景技術(shù):
Parade等人于1968年,首次報(bào)道了新生六個(gè)月內(nèi)的小牛(特指黃牛)血去蛋白提取物,不僅具有胰島素樣作用,還能刺激細(xì)胞對(duì)氧的攝取和利用。同時(shí),也有學(xué)者注意到成年牛血去蛋白提取物,也有以上生物活性,但其作用遠(yuǎn)遜色于新生六個(gè)月內(nèi)的小牛血去蛋白提取物。造成成年牛血去蛋白提取物與新生小牛血去蛋白提取物生物活性的顯著差異,主要是由于新生小牛在出生前,長(zhǎng)期停留于密閉缺氧的母體子宮內(nèi)造成的,在這樣的缺氧環(huán)境下,胎牛血這種類胰島素樣物質(zhì)含量增加,有利于胎牛體內(nèi)的氧代謝及能量代謝。
牦牛在分類上屬于牛屬,牦牛亞屬,牦牛種。據(jù)研究,其生理生化特征與黃牛有較大的差異。我國(guó)青藏高原是牦牛的主要發(fā)源地和主要產(chǎn)區(qū),牦牛長(zhǎng)期生長(zhǎng)繁衍于海拔2500-5000米高原缺氧環(huán)境,對(duì)高原嚴(yán)寒、缺氧的氣候特別適應(yīng)。鑒于牦牛以上生活習(xí)性及生長(zhǎng)環(huán)境,本發(fā)明人經(jīng)過(guò)多年的研究,發(fā)現(xiàn)不論成年牦牛,還是6個(gè)月內(nèi)新生的牦牛,其血液均存在著生物活性極強(qiáng)的類胰島素物質(zhì),而這種物質(zhì)與Parade等人報(bào)道的新生六個(gè)月內(nèi)的小牛血去蛋白提取物,不論是分子量、成分及生物功能均極為相近。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的之一是提供一種高原地區(qū)牦牛血去蛋白提取物,該提取物主要是通過(guò)促進(jìn)細(xì)胞對(duì)葡萄糖的攝取和利用(不依賴于胰島素)增加細(xì)胞對(duì)氧的攝入和利用,從而使ATP生成增加,在細(xì)胞水平促進(jìn)細(xì)胞能量代謝,該提取物可應(yīng)用于藥品、保健食品及食品,可制成注射劑、片劑、膠囊及口服液等劑型。
本發(fā)明的目的之二是提供兩種提取高原牦牛血去蛋白提取物的制備方法。
本發(fā)明的目的之三是提供了一種牦牛血去蛋白提取物應(yīng)用于藥品、保健食品及食品上的應(yīng)用范圍。
本發(fā)明的以上目的將通過(guò)下列詳細(xì)說(shuō)明和描述來(lái)進(jìn)一步闡述。
本發(fā)明中所提供的一種牦牛血去蛋白提取物主要是從高原牦牛(包括新生六個(gè)月內(nèi)小牦牛)血中獲得,根據(jù)本發(fā)明人對(duì)牦牛血去蛋白提取物的成份分析,此種提取物分子量小于5000或6000道爾頓,只含生理性成份,即60%無(wú)機(jī)物質(zhì),如Na+,K+、Cl-、Ca2+等電解質(zhì)和微量的必需元素,以及40%有機(jī)物質(zhì),如磷酸肌醇寡糖、氨基酸、低分子多肽、核酸衍生物、糖脂類及糖和類脂代謝的中間產(chǎn)物等。
本發(fā)明所得到的牦牛血去蛋白提取物的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為該提取物為無(wú)菌凍干制劑,含牛血衍生物應(yīng)為標(biāo)示量的90.0-110.0%;性狀為白色或微黃色疏松狀凍干粉,易溶于水,相對(duì)密度為1.021-1.025。
本發(fā)明的牦牛血去蛋白提取物可通過(guò)以下兩種制備方法獲得1、(1)、在無(wú)菌條件下采牦牛血,在溫度3℃~8℃下,3000-5000rpm,離心10-40分鐘,得上清液。
(2)、取上清液,利用0.2-0.9微米的薄膜過(guò)濾澄清,得澄清液。
(3)、澄清液用Milipore超濾器截留分子量小于6000道爾頓以下的組分(超濾速度為10-1000ml/分,蠕動(dòng)泵壓為≤0.1-0.5mPa)。
(4)、分裝、凍干。
2、(1)在無(wú)菌條件下采牦牛血,在溫度3℃~8℃下,3000-5000rpm,離心10-40分鐘,得上清液。
(2)、取上清液,加入70%-99%兩倍于血清體積的乙醇,不斷攪拌靜止60分鐘,使蛋白質(zhì)變性沉淀,然后經(jīng)10000-20000rpm4℃離心30-60分鐘,留上清液。
(3)、利用真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀,20℃-40℃,0.5-3個(gè)大氣壓減壓除乙醇。
(4)、上清液用Milipore超濾器截留分子量小于6000道爾頓以下的組分(超濾速度為10-1000ml/分,蠕動(dòng)泵壓為≤0.1-0.5mpa)。
(5)、分裝、凍干。
本發(fā)明的產(chǎn)品牦牛血去蛋白提取物,在藥品、保健食品及食品中應(yīng)用,主要用于(1)II型糖尿病的治療;(2)糖尿病性多發(fā)性神經(jīng)病變的治療;(3)老年性癡呆、顱腦外傷、中風(fēng)及各種腦昏迷造成的腦功能不全的治療;(4)各種急慢性高原病即急性高原反應(yīng)、高原肺水腫、高原心臟病及高原紅細(xì)胞增多癥的治療。本發(fā)明的產(chǎn)品牦牛血去蛋白提取物應(yīng)用于藥品、保健食品及食品時(shí),可制成注射劑、片劑、軟膠囊、硬膠囊及口服液等劑型。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1本發(fā)明的牦牛血去蛋白提取物可通過(guò)以下制備方法獲得(1)、在無(wú)菌條件下采牦牛血,在溫度4℃下,4000rpm,離心20分鐘,得上清液。
(2)、取上清液,利用0.3微米的薄膜過(guò)濾澄清,得澄清液。
(3)、澄清液用Milipore超濾器截留分子量小于6000道爾頓以下的組分(超濾速度為200ml/分,蠕動(dòng)泵壓為≤0.2mpa)。
(4)、分裝、凍干。
實(shí)施例2本發(fā)明的牦牛血去蛋白提取物也可以通過(guò)以下制備方法獲得(1)在無(wú)菌條件下采牦牛血,在溫度4℃下,4000rpm,離心20分鐘,得上清液。
(2)、取上清液,加入95%兩倍于血清體積的乙醇,不斷攪拌靜止60分鐘,使蛋白質(zhì)變性沉淀,然后經(jīng)20000rpm4℃離心30分鐘,留上清液。
(3)、利用真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀,40℃,1個(gè)大氣壓減壓除乙醇。
(4)、上清液用Milipore超濾器截留分子量小于6000道爾頓以下的組分(超濾速度為200ml/分,蠕動(dòng)泵壓為≤0.2mpa)。
(5)、分裝、凍干。
實(shí)施例3本發(fā)明的牦牛血去蛋白提取物對(duì)小白鼠急性缺氧耐力的影響取實(shí)驗(yàn)動(dòng)物昆明種小白鼠,雄性,10周齡,按體重隨機(jī)分兩組,每組30只,缺氧前1小時(shí),藥物組和對(duì)照組分別經(jīng)口給予牦牛血去蛋白提取物3mg/kg,和等量淀粉,應(yīng)用減壓缺氧方法,觀察小白鼠的缺氧耐力。缺氧高度10000米,上升速度15米/秒,觀察1小時(shí)內(nèi)動(dòng)物死亡率。結(jié)果服藥組小白鼠的存活率為50%,對(duì)照組存活率為18%。由此可知牦牛血去蛋白提取物可顯著提高動(dòng)物的缺氧耐力。
實(shí)施例4對(duì)非胰島素依賴性糖尿病小白鼠血糖的調(diào)節(jié)作用取非胰島素依賴性糖尿病小白鼠,雄性,10周齡,隨機(jī)分為兩組,每組15只,藥物組和對(duì)照組分別經(jīng)口給予牦牛血去蛋白提取物3mg/kg,和淀粉,一日一次,一周5日,共給藥4周。給藥前以及給藥后4周由尾靜脈取血,測(cè)定血中的葡萄糖濃度,給藥前及給藥第4周的取血均在斷食12小時(shí)后進(jìn)行。結(jié)果給藥4周后小白鼠血糖明顯低于給藥前水平(見(jiàn)下表)分組血糖值(mmol/L)給藥前 給藥4周后對(duì)照組17.86±1.22 16.94±1.38給藥組17.09±1.08 9.43±0.89**=P<0.01實(shí)施例5對(duì)糖尿病性多發(fā)性神經(jīng)病變作用通過(guò)對(duì)100例糖尿病性多發(fā)性神經(jīng)病變病人進(jìn)行了牦牛血去蛋白提取物對(duì)照組雙盲觀察,發(fā)現(xiàn)治療組病人的神經(jīng)傳導(dǎo)速度持續(xù)增加,在治療8周時(shí)從最初的37.09米/秒,增加到41.02米/秒;痛覺(jué)程度自61.20下降為43.38。此外,患者的震動(dòng)覺(jué)及溫覺(jué)均有所改善。
實(shí)施例6對(duì)缺血性腦病的治療作用通過(guò)對(duì)208例缺血性腦病(偏癱)應(yīng)用牦牛血去蛋白提取物治療的觀察,發(fā)現(xiàn)患者應(yīng)用牦牛血去蛋白提取物后的完全與部分康復(fù)率達(dá)82.08%,說(shuō)明該制劑在治療偏癱方面療效顯著。
權(quán)利要求
1.一種牦牛血去蛋白提取物,其特征是分子量小于5000-6000道爾頓的牦牛血去蛋白提取物。這種去蛋白血液提取物只含生理性成份,即60%無(wú)機(jī)物質(zhì),如Na+,K+、Cl-、Ca2+等電解質(zhì)和微量的必需元素,以及30%有機(jī)物質(zhì),如磷酸肌醇寡糖、氨基酸、低分子多肽、核酸衍生物、糖脂類及糖和類脂代謝的中間產(chǎn)物等。
2.如權(quán)利要求1所述的牦牛血去蛋白提取物,其中的牦牛血主要指生活于高原地區(qū)的成年牦牛及新生六個(gè)月的小牦牛血。
3.如權(quán)利要求1所述的牦牛血去蛋白提取物,其中的分子量是指小于5000道爾頓或小于6000道爾頓的牦牛血去蛋白提取物。
4.如權(quán)利要求1所述的牦牛血去蛋白提取物的生產(chǎn)方法,是以青藏高原的牦牛(包括新生六個(gè)月內(nèi)的小牦牛)血為原料,其特征是(1)、在無(wú)菌條件下采牦牛血,在溫度3℃~8℃下,3000-5000rpm,離心10-40分鐘,得上清液。(2)、取上清液,利用0.2-0.9微米的薄膜過(guò)濾澄清,得澄清液。(3)、澄清液用Milipore超濾器截留分子量小于6000道爾頓以下的組分(超濾速度為10-1000ml/分,蠕動(dòng)泵壓為≤0.1-0.5mPa)。(4)、分裝、凍干。
5.如權(quán)利要求1所述的牦牛血去蛋白提取物的生產(chǎn)方法,也可以是(1)、在無(wú)菌條件下采牦牛血,在溫度3℃~8℃下,3000-5000rpm,離心10-40分鐘,得上清液。(2)、取上清液,加入70%-99%兩倍于血清體積的乙醇,不斷攪拌靜止60分鐘,使蛋白質(zhì)變性沉淀,然后經(jīng)10000-20000rpm4℃離心30-60分鐘,留上清液。(3)、利用真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀,20℃-40℃,0.5-3個(gè)大氣壓減壓除乙醇。(4)、上清液用Milipore超濾器截留分子量小于6000道爾頓以下的組分(超濾速度為10-1000ml/分,蠕動(dòng)泵壓為≤0.1-0.5mPa)。(5)、分裝、凍干。
6.如權(quán)利要求1所述的牦牛血去蛋白提取物的應(yīng)用,其特征在于牦牛血去蛋白提取物,在藥品、保健食品及食品中應(yīng)用,主要用于(1)II型糖尿病的治療;(2)糖尿病性多發(fā)性神經(jīng)病變的治療;(3)老年性癡呆、顱腦外傷、中風(fēng)及各種腦昏迷造成的腦功能不全的治療;(4)各種急慢性高原病即急性高原反應(yīng)、高原肺水腫、高原心臟病及高原紅細(xì)胞增多癥的治療。
7.如權(quán)利要求1所述的牦牛血去蛋白提取物應(yīng)用于藥品、保健食品及食品中其特征在于可制成注射劑、片劑、軟膠囊、硬膠囊及口服液等劑型。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種牦牛血去蛋白提取物及其提取物方法和應(yīng)用,所述的牦牛血去蛋白提取物是分子量小于5000或小于6000道爾頓的生理成份;其提純過(guò)程是無(wú)菌條件下采牦牛血,分離出血清,用Milipore超濾器過(guò)濾,將超濾液除菌、凍干。本發(fā)明所述的牦牛血去蛋白提取物可作藥品、保健食品及食品用于糖尿病及其并發(fā)癥治療,用于老年性癡呆、顱腦外傷、腦昏迷等各種腦功能不全及用于各種急慢性高原病的防治。
文檔編號(hào)A61K35/14GK1470249SQ02126629
公開(kāi)日2004年1月28日 申請(qǐng)日期2002年7月25日 優(yōu)先權(quán)日2002年7月25日
發(fā)明者魏戰(zhàn)增 申請(qǐng)人:魏戰(zhàn)增