專利名稱：具有止血和緩釋粒細(xì)胞集落刺激因子雙重作用的制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及的是一種藥物制備技術(shù)領(lǐng)域的制劑及方法，具體是一種具有止血和緩釋粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)雙重作用的制劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
雖然有很多方法可以解決止血問(wèn)題，但是難以解決血液的再生，往往靠輸血，同時(shí)輸血容易被污染，帶來(lái)嚴(yán)重的感染。在在腫瘤治療領(lǐng)域，尤其是實(shí)體腫瘤的手術(shù)治療和化療，造成失血較多，嚴(yán)重影響病人的生命。在腫瘤化療造成中性粒細(xì)胞減少，往往需要頻繁的注射給粒細(xì)胞集落刺激因子。為了解決化療和手術(shù)切除帶來(lái)的止血和增加中性粒細(xì)胞， 往往先用止血鉗等止血，然后再注射給粒細(xì)胞集落刺激因子。可降解控釋粒細(xì)胞集落刺激因子系統(tǒng)，存在很多技術(shù)性問(wèn)題，諸如釋放動(dòng)力學(xué)、藥物穩(wěn)定性、藥物的包封率、藥物的釋放動(dòng)力學(xué)、高分子毒性及代謝、以及生產(chǎn)工藝的簡(jiǎn)化，尚待更好地解決。由于存在這些問(wèn)題，這就為進(jìn)一步改良技術(shù)提供了很大發(fā)展空間。經(jīng)對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的文獻(xiàn)檢索發(fā)現(xiàn)，Seung Ho Choi，等人在《International Journal ofPharmaceutics))(《國(guó)際藥劑學(xué)雜志》2006年第311期第223-2 頁(yè))上發(fā)表的 ("G-CSFloadedbiodegradable PLGA nanoparticles prepared by a single oil-in-water emulsion method")( “用水包油乳化法制備粒細(xì)胞集落刺激因子生物降解納米?！?，該技術(shù)中提出用一種可生物降解和生物相容性的高分子材料聚乳酸/羥基乙酸(PLGA)制備了粒細(xì)胞集落刺激因子植入納米粒，具有一定的緩釋作用，具體方法為把粒細(xì)胞集落刺激因子水溶液和聚乳酸/羥基乙酸(PLGA)充分混勻，用水包油乳化法制備納米粒。其不足在于粒細(xì)胞集落刺激因子藥物嚴(yán)重突釋和釋放不完全、由于水包油法存在油水界面，導(dǎo)致蛋白變性失活。課題組不久前開(kāi)發(fā)了一種利用先保護(hù)粒細(xì)胞集落刺激因子，然后再通過(guò)水包油-油包固(S/0/W)的方法制備微球，突釋已吸引了眾多研究者的興趣，但仍然未解決。然而，生物大分子，如蛋白質(zhì)類藥物，疫苗，抗體，或基因，在制備過(guò)程中還是面臨著技術(shù)障礙。 其他劑型在治療過(guò)程中也存在可能包括突釋、穩(wěn)定性差、失活和載藥效率低等其他問(wèn)題。美國(guó)專禾Ij 號(hào) 5，466，462,記載了一種"Heteromorphic sponges containing active agents,( “含有活性成分的異形海綿)，該技術(shù)提出有些浸漬活性成分的手術(shù)植入劑，可以減少疤痕的形成。其不足是不能達(dá)到延長(zhǎng)緩釋的效果。在手術(shù)中，醫(yī)生通常采用止血材料，如速即紗(Surgicel)和明膠海綿，用于手術(shù)后傷口止血和抗感染康復(fù)。這些材料都被證明安全無(wú)毒，生物相容性和生物可吸收性佳。 利用這些現(xiàn)有的手術(shù)材料作為支架發(fā)展術(shù)后治療長(zhǎng)效藥物治療劑型，可提供便利且非常簡(jiǎn)單的方法來(lái)解決上述問(wèn)題。本發(fā)明揭示了一個(gè)獨(dú)特新方法，可將手術(shù)用止血材料作為骨架， 通過(guò)粒細(xì)胞集落刺激因子的葡聚糖顆粒和可降解緩控釋材料涂層的方式構(gòu)建成有效的具有止血功能和釋放有效的粒細(xì)胞集落刺激因子給藥系統(tǒng)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的上述不足，提供一種具有止血和緩釋粒細(xì)胞集落刺激因子雙重作用的制劑及其制備方法，將手術(shù)止血紗布與粒細(xì)胞集落刺激因子的葡聚糖顆粒和可降解緩控釋材料涂層的藥物緩釋體系相結(jié)合，在制備工藝上在止血紗布的生產(chǎn)工藝上添加了載藥工序，提供一種構(gòu)建新型的粒細(xì)胞集落刺激因子藥物緩釋植入系統(tǒng)的簡(jiǎn)便易行、同時(shí)對(duì)各類藥物均適用的方法。本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的本發(fā)明涉及一種具有止血和緩釋粒細(xì)胞集落刺激因子雙重作用的制劑，由含有粒細(xì)胞集落刺激因子的葡聚糖顆粒、可降解緩控釋材料和止血材料骨架組成，其中含有粒細(xì)胞集落刺激因子的葡聚糖顆粒和可降解緩控釋材料分別占止血材料骨架的單位面積重量分別為 0. 004-400mg/cm2 以及 0. 001mg-4mg/cm2。所述的含有粒細(xì)胞集落刺激因子的和所述的可降解緩控釋材料在止血材料骨架的單位面積Icm2優(yōu)選的重量分別為0. 04-300mg/cm2和0. 01mg-;3mg/cm2。所述的含有粒細(xì)胞集落刺激因子的葡聚糖顆粒的粒徑為0. 01 μ m-20 μ m,該葡聚糖顆粒分散于可降解緩控釋材料中，經(jīng)噴霧涂層法、涂抹法或浸漬法應(yīng)用于止血紗布表面。所述的可降解緩控釋材料為聚乳酸(PLA)、聚乙酸(PGA)、聚乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)、聚己內(nèi)酯(PCL)、聚(酯)、聚(乳酸-羥基乙酸)及其衍生物或其它可生物降解緩控釋放材料及其組合。所述的止血材料骨架為可吸收氧化纖維素速即紗、可吸收明膠海綿或膠原蛋白。本發(fā)明涉及上述制劑的制備方法，通過(guò)向液態(tài)的可降解緩控釋材料或溶解于有機(jī)溶劑的可降解緩控釋材料中混懸入含有粒細(xì)胞集落刺激因子的葡聚糖顆粒制成混懸液，最后用噴涂、涂刷或浸漬方法將混懸液涂布于生物降解纖維或多孔材料上。所述的溶解是指把可降解緩控釋材料通過(guò)加熱讓其充分熔解得到可降解緩控釋材料液體并與有機(jī)溶劑混合；所述的有機(jī)溶劑為二氯甲烷、乙腈或乙酸乙酯或其組合；所述的含有粒細(xì)胞集落刺激因子的葡聚糖顆粒通過(guò)以下任一方式制備得到1)葡聚糖水相/聚乙二醇水相乳液方式；2)相分離法制備方式；3)噴霧干燥法制備方式；4)超臨界法制備方式。所述的混懸是指通過(guò)旋渦、超聲或勻漿方式將含有粒細(xì)胞集落刺激因子的葡聚糖顆粒與液態(tài)的可降解緩控釋材料或溶解于有機(jī)溶劑的可降解緩控釋材料均勻混合得到。本發(fā)明可降解纖維或多孔材料采用了表面積大且富含多孔結(jié)構(gòu)的臨床止血材料， 用于可降解緩控釋放材料層或結(jié)構(gòu)，利于其中粒細(xì)胞集落刺激因子的釋放。該止血材料不僅充當(dāng)支持物或支架，簡(jiǎn)化緩釋體系制備過(guò)程的，同時(shí)也提供了粒細(xì)胞集落刺激因子釋放機(jī)制。作為可降解緩控釋放的支持物，其高度親水性及快速降解性，有效地避免了一般可降解緩控釋放為基質(zhì)的藥物緩釋種常見(jiàn)的不完全釋放問(wèn)題，并在不延長(zhǎng)整體釋放期的情況下，利用分子量大或疏水性高的高分子制備的給藥植入劑獲得線性釋放。在制備工藝上，由于避免了繁雜的微囊化程序，載藥可降解緩控釋放材料的有機(jī)溶液(形成藥物溶液或混懸液)可被很簡(jiǎn)單地涂布到止血材料上，同時(shí)也避免了微囊化工藝藥物包封率低(一般40-60%)、溶劑使用量大(因需用于微球的洗滌和回收)等弱點(diǎn)。這些優(yōu)點(diǎn)致使本發(fā)明與以前的報(bào)道植入劑相比，其藥物釋放線性情況佳、給藥便利和生產(chǎn)簡(jiǎn)易可行。


圖1 具有止血和緩釋粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)雙重作用的制劑制備及方法的示意圖；圖2.為實(shí)施例掃描電鏡圖；圖中(A)為空白可吸收氧化纖維素掃描電鏡圖，(B)為涂有粒細(xì)胞集落刺激因子的多糖顆粒的可吸收氧化纖維素制劑掃描電鏡圖；圖3實(shí)施例1的釋放動(dòng)力學(xué)曲線示意圖
圖4實(shí)施例2的釋放動(dòng)力學(xué)曲線示意圖
圖5實(shí)施例3的釋放動(dòng)力學(xué)曲線示意圖
圖6實(shí)施例4的釋放動(dòng)力學(xué)曲線示意圖
圖7實(shí)施例5的釋放動(dòng)力學(xué)曲線示意圖
圖8實(shí)施例6的釋放動(dòng)力學(xué)曲線示意圖。圖9實(shí)施例7的釋放動(dòng)力學(xué)曲線示意圖。
具體實(shí)施例方式下面對(duì)本發(fā)明的實(shí)施例作詳細(xì)說(shuō)明，本實(shí)施例在以本發(fā)明技術(shù)方案為前提下進(jìn)行實(shí)施，給出了詳細(xì)的實(shí)施方式和具體的操作過(guò)程，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不限于下述的實(shí)施例。實(shí)施例可降解緩控釋材料的單體比例和分子量對(duì)改變給藥系統(tǒng)的性質(zhì)極其重要。本實(shí)施例中改變不同單體配比和分子量的給藥系統(tǒng)的釋放情況分別為圖3、圖4、圖5、圖6、圖7和圖8。對(duì)于不盡人意的突釋現(xiàn)象，通過(guò)涂布不含粒細(xì)胞集落刺激因子可降解緩控釋材料層包覆于原有給藥系統(tǒng)上，得到較好釋放曲線。這些釋放結(jié)果可以達(dá)到滿意的治療效果。圖1是本實(shí)施例述及的緩釋給藥系統(tǒng)制備過(guò)程示意圖。含粒細(xì)胞集落刺激因子 (G-CSF)多糖顆粒涂層緩釋給藥系統(tǒng)及不含涂層緩釋給藥系統(tǒng)都是按圖中相應(yīng)方法制備而成。不含涂層緩釋給藥系統(tǒng)可按以下步驟制備。實(shí)施例首先，將可降解緩控釋材料溶解在有機(jī)溶劑形成的溶液或加熱熔解的熔液，并加入緩釋粒細(xì)胞集落刺激因子的葡聚糖顆粒到可降解緩控釋材料溶液(熔液)中，然后將其分散均勻。最后，涂布上述一定量溶液(熔液)與一定面積的止血材料骨架上，真空干燥M 小時(shí)，得成品。通常粒細(xì)胞集落刺激因子、葡聚糖和可降解緩控釋材料分別占止血材料骨架的單位面積范圍約為 0. 001mg-4mg/cm2、0. 004mg-400mg/cm2 和 0. 050mg-1200mg/cm2。以粒細(xì)胞集落刺激因子、葡聚糖和可降解緩控釋材料在止血材料骨架(或支持物)的單位面積 Icm2 最佳重量范圍為 0. 01mg-3mg/cm2、0. 04mg_60mg/cm2 和 0. 20mg-1200mg/cm2。有機(jī)溶劑為二氯甲烷、乙酸乙酯、乙腈及二氯甲烷和乙酸乙酯任意比例混和作為溶劑。實(shí)施例1 具有止血和緩釋粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)雙重作用的制劑制備及方法①取一塊可吸收氧化纖維素Surgicel上(10cm * Icm)展開(kāi)；②稱取聚乳酸羥基乙酸0.25mg(PLGA，分子量為47kD，乳酸羥基乙酸= 50 50)，溶解在1. 25mg的乙酸乙酯備用；③稱取含有0. Olmg的粒細(xì)胞集落刺激因子的葡聚糖顆粒0. 02mg(葡聚糖顆粒的粒徑 5 μ m士 4 μ m)；④把③的粒細(xì)胞集落刺激因子葡聚糖顆粒放在②的溶液里，充分混和均勻，得混懸液；⑤把④的混懸液用小毛刷涂布在可吸收氧化纖維素Surgicel上；⑥把⑤干燥即得成品。⑦體外釋放曲線見(jiàn)圖3，呈現(xiàn)良好的釋放動(dòng)力學(xué)。⑧把成品用在手術(shù)腫瘤動(dòng)物模型上的藥效考察，發(fā)現(xiàn)比對(duì)照組的止血功能稍低， 但是顯著提高血液的中性粒細(xì)胞數(shù)見(jiàn)表1.表1 實(shí)施例1的治療效果
權(quán)利要求
1.一種具有止血和緩釋粒細(xì)胞集落刺激因子雙重作用的制劑，其特征在于，由含有粒細(xì)胞集落刺激因子的葡聚糖顆粒、可降解緩控釋材料和止血材料骨架組成，其中含有粒細(xì)胞集落刺激因子的葡聚糖顆粒和可降解緩控釋材料分別占止血材料骨架的單位面積重量分別為 0. 004-400mg/cm2 以及 0. 001mg-4mg/cm2。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有止血和緩釋粒細(xì)胞集落刺激因子雙重作用的制劑，其特征是，所述的含有粒細(xì)胞集落刺激因子的和所述的可降解緩控釋材料在止血材料骨架的單位面積 Icm2 的重量分別為 0. 04-300mg/cm2 和 0. 01mg-3mg/cm2。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的具有止血和緩釋粒細(xì)胞集落刺激因子雙重作用的制劑， 其特征是，所述的含有粒細(xì)胞集落刺激因子的葡聚糖顆粒的粒徑為0. 01 μ m-20 μ m。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的具有止血和緩釋粒細(xì)胞集落刺激因子雙重作用的制劑， 其特征是，所述的可降解緩控釋材料為聚乳酸、聚乙酸、聚乳酸-羥基乙酸共聚物、聚己內(nèi)酯、聚(酯)、聚(乳酸-羥基乙酸)及其衍生物或其組合。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有止血和緩釋粒細(xì)胞集落刺激因子雙重作用的制劑，其特征是，所述的止血材料骨架為可吸收氧化纖維素速即紗、可吸收明膠海綿或膠原蛋白。
6.一種根據(jù)上述任一權(quán)利要求所述制劑的制備方法，其特征在于，通過(guò)向液態(tài)的可降解緩控釋材料或溶解于有機(jī)溶劑的可降解緩控釋材料中混懸入含有粒細(xì)胞集落刺激因子的葡聚糖顆粒制成混懸液，最后用噴涂、涂刷或浸漬方法將混懸液涂布于生物降解纖維或多孔材料上。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征是，所述的溶解是指把可降解緩控釋材料通過(guò)加熱讓其充分熔解得到可降解緩控釋材料液體并與有機(jī)溶劑混合。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征是，所述的有機(jī)溶劑為二氯甲烷、乙腈或乙酸乙酯或其組合。
9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征是，所述的含有粒細(xì)胞集落刺激因子的葡聚糖顆粒通過(guò)以下任一方式制備得到1)葡聚糖水相/聚乙二醇水相乳液方式；2)相分離法制備方式；3)噴霧干燥法制備方式；4)超臨界法制備方式。
10.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征是，所述的混懸是指通過(guò)旋渦、超聲或勻漿方式將含有粒細(xì)胞集落刺激因子的葡聚糖顆粒與液態(tài)的可降解緩控釋材料或溶解于有機(jī)溶劑的可降解緩控釋材料均勻混合得到。
全文摘要
一種藥物制備技術(shù)領(lǐng)域的具有止血和緩釋粒細(xì)胞集落刺激因子雙重作用的制劑及其制備方法，該制劑由含有粒細(xì)胞集落刺激因子的葡聚糖顆粒、可降解緩控釋材料和止血材料骨架組成，本發(fā)明通過(guò)將手術(shù)止血紗布與粒細(xì)胞集落刺激因子的葡聚糖顆粒和可降解緩控釋材料涂層的藥物緩釋體系相結(jié)合，在制備工藝上在止血紗布的生產(chǎn)工藝上添加了載藥工序；該方法簡(jiǎn)便易行并對(duì)各類藥物均適用。
文檔編號(hào)A61P7/00GK102178977SQ20111009412
公開(kāi)日2011年9月14日 申請(qǐng)日期2011年4月14日 優(yōu)先權(quán)日2011年4月14日
發(fā)明者馮艷, 吳飛, 胡振華, 袁偉恩, 鄭瑞媛, 金拓 申請(qǐng)人:上海交通大學(xué)