專利名稱：含有流感病毒血凝素融合肽的靶向重組分子基因及其編碼的蛋白和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域的基因治療，具體涉及基因工程方法構(gòu)建由可內(nèi)化的單 鏈抗體、流感病毒血凝素融合肽和促凋亡分子組成的靶向重組分子基因、上述基因編碼的 蛋白及所述的基因和蛋白在制備用于腫瘤治療的藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
抗體藥物是以細胞工程技術(shù)和基因工程技術(shù)為主體的抗體工程技術(shù)制備的藥物。 由于其特異性高、性質(zhì)均一、可針對特定靶點向制備，抗體藥物已被廣泛應(yīng)用于感染、心血 管疾患、自身免疫疾患等多種疾病治療，特別是在腫瘤治療中有巨大的潛力與應(yīng)用前景?？?體藥物具有如下特點(1)特異性?？贵w針對特定的單一抗原表位，具有高度的特異性，這 是抗體藥物發(fā)揮靶向治療作用的重要基礎(chǔ)；(2)多樣性。主要表現(xiàn)為靶抗原的多樣性、抗體 結(jié)構(gòu)的多樣性和作用機制的多樣性以及“彈頭”效應(yīng)分子的多樣性；(3)制備抗體藥物的定 靶性。即根據(jù)需要，制備具有不同治療作用的抗體藥物?？梢葬槍μ囟ǖ陌蟹肿樱ㄏ蛑苽?相應(yīng)的抗體，實行“量體裁衣”；也可以根據(jù)需要選擇相應(yīng)的“彈頭”藥物或“效應(yīng)分子”，制 備相應(yīng)的免疫偶聯(lián)物或融合蛋白?？贵w融合蛋白是抗體介導(dǎo)的靶向重組分子，由抗體片段(如單鏈抗體)和效應(yīng)蛋 白兩個基本部分構(gòu)成?？贵w片段可以將效應(yīng)蛋白攜帶至靶細胞表面，其后效應(yīng)蛋白發(fā)揮其 特定的生物學(xué)活性。與單一的單克隆抗體藥物主要通過封閉特定信號通路發(fā)揮作用相比， 抗體融合蛋白兼具抗體的靶向性和效應(yīng)蛋白的高生物活性，具有更有效的結(jié)構(gòu)優(yōu)勢。然而， 大多數(shù)效應(yīng)蛋白發(fā)揮作用的場所是細胞漿，雖然可內(nèi)化的單鏈抗體可以通過靶細胞的內(nèi)化 作用介導(dǎo)效應(yīng)蛋白進入靶細胞內(nèi)吞體，但是由于效應(yīng)蛋白不能自由穿透內(nèi)吞體膜結(jié)構(gòu)進入 胞漿，抗體融合蛋白的功效被大大降低。因此，對傳統(tǒng)抗體融合蛋白進行結(jié)構(gòu)改造，提高效 應(yīng)蛋白轉(zhuǎn)位進入胞漿的能力是抗體靶向治療亟待解決的關(guān)鍵問題之一。流感病毒血凝素(hemagglutinin，HA)是流感病毒包膜表面的一種主要膜蛋白， 由病毒基因組片段4編碼，可誘導(dǎo)感染機體產(chǎn)生保護性中和抗體。HA分子感染細胞前必須 經(jīng)酶裂解成HA1和HA2, HA1具有與宿主細胞受體結(jié)合的特性，HA2參與病毒和細胞融合的過 程。流感病毒血凝素融合肽(hemagglutinin fusion peptide)由流感病毒HA2亞單位 N端的20個氨基酸殘基組成，能介導(dǎo)病毒外膜與細胞內(nèi)小體膜融合并釋放病毒核衣殼進入 胞漿。流感病毒的融合肽的膜融合作用具有PH依賴性。在較高PH環(huán)境下，融合肽N端α 螺旋插入內(nèi)吞體膜結(jié)構(gòu)中，而C端的空間構(gòu)象松散，溶于水相中。在質(zhì)子泵作用下，內(nèi)吞體 內(nèi)PH逐漸下降。當(dāng)ρΗ降至5.0左右時，HA Glu11和Glu15所帶電荷被中和，C端極性降低， 在Trp14和Ile18之間形成新的螺旋結(jié)構(gòu)并插入到內(nèi)吞體膜結(jié)構(gòu)中，與N端α螺旋形成“倒 V”字形結(jié)構(gòu)。融合肽空間構(gòu)象的變化引起內(nèi)吞體膜結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性的變化，最終導(dǎo)致膜融合和 內(nèi)吞體內(nèi)物質(zhì)“外瀉”進入細胞液(Vaccaro L,Cross K J,Kleinjung J，et al. Plasticityof influenza haemagglutinin fusionpeptides and their interaction with lipid bilayers. Biophys J, 2005,88(1) :25_36)。流感病毒血凝素融合肽能破壞內(nèi)吞體膜結(jié)構(gòu)穩(wěn) 定性，這為向細胞液內(nèi)導(dǎo)入外源蛋白提供了有力的工具
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于構(gòu)建一類特異性強、活性高的靶向重組分子，這類靶向重組分 子可用于腫瘤、感染性疾病等的靶向生物治療。本發(fā)明為實現(xiàn)上述發(fā)明目的，將能特異性識別并結(jié)合腫瘤抗原(如HER2)或其他 疾病特異性抗原(如乙肝表面抗原HBsAg)的可內(nèi)化單鏈抗體基因與流感病毒血凝素融合 肽(HAfp)基因和促凋亡分子基因(如活性殺傷分子bid)融合，并在可內(nèi)化單鏈抗體基因 與HAfp基因之間加入了編碼furin蛋白酶識別位點的基因序列。這樣，經(jīng)基因重組獲得的 重組分子同時具有抗體對靶細胞的特異性識別功能、HAfp破壞靶細胞內(nèi)吞體膜穩(wěn)定性功能 和促凋亡分子誘導(dǎo)靶細胞凋亡的生物學(xué)功能，可以用于腫瘤等疾病的靶向治療。本發(fā)明的技術(shù)解決方案是含有流感病毒血凝素融合肽的靶向重組分子基因，由 可內(nèi)化單鏈抗體基因、流感病毒血凝素融合肽基因和促凋亡分子基因組成，并在可內(nèi)化單 鏈抗體基因與HAfp基因之間加入了編碼furin蛋白酶識別位點的基因序列。由上述的基因編碼的蛋白，由可內(nèi)化單鏈抗體、流感病毒血凝素融合肽和促凋亡 分子組成，并在可內(nèi)化單鏈抗體與HAfp之間加入了編碼furin蛋白酶識別位點氨基酸序 列。所述的基因在制備用于腫瘤治療的藥物中的應(yīng)用。所述的蛋白在制備用于腫瘤治療的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明所構(gòu)建的含有流感病毒血凝素融合肽的靶向重組分子具有以下特點①特 異性——靴向重組分子通過單鏈抗體特異性地識別表達有特定腫瘤抗原的腫瘤細胞，而對 正常組織細胞沒有識別和殺傷作用；②安全性——靴向重組分子主要由人源化單鏈抗體和 人自身促凋亡分子構(gòu)成，而流感病毒血凝素融合肽序列短、免疫原性小，反復(fù)使用不會誘發(fā) 體內(nèi)產(chǎn)生中和抗體，而且細胞發(fā)生凋亡時不引起炎癥反應(yīng)，所以治療的毒副作用較小；③高 效性——重組分子負載的促凋亡分子具有高效的促細胞凋亡生物活性。如具有殺傷活性的 Bid是細胞凋亡通路中重要的信號傳導(dǎo)分子，向細胞中導(dǎo)入活性形式的截短型Bid(tbid) 分子，不僅能夠激活caspases通路的凋亡效應(yīng)，還可以促進AIF等不依賴caspases的凋亡 誘導(dǎo)分子從線粒體中釋放，即使caspases被抑制也能啟動凋亡的發(fā)生，使其對腫瘤細胞的 殺傷作用更直接，且效率更高。此外，靶向重組分子結(jié)合靶細胞并內(nèi)化進入內(nèi)吞體后，在內(nèi) 吞體furin蛋白酶的作用下被剪切，釋放出Hafp-促凋亡分子小片段，并在HAfp的作用下 實現(xiàn)了促凋亡分子高效轉(zhuǎn)位至胞漿從而發(fā)揮其促凋亡生物活性。本發(fā)明的研究結(jié)果表明，含有流感病毒血凝素融合肽的靶向重組分子能夠特異性 識靶細胞并被靶細胞內(nèi)吞進入內(nèi)吞體；由于HAfp的存在，活性促凋亡分子能從內(nèi)吞體中高 效轉(zhuǎn)位至胞漿；促凋亡分子在靶細胞內(nèi)可充分發(fā)揮其促細胞凋亡的生物活性。本發(fā)明可望為腫瘤等多種疾病的靶向生物治療提供一種新手段。


圖1為HBsAg/HER2靶向促凋亡分子基因的瓊脂糖凝膠電泳鑒定結(jié)果圖。圖2為HBsAg/HER2靶向促凋亡分子基因原核表達產(chǎn)物Westen blot鑒定結(jié)果圖。圖3為HBsAg/HER2靶向促凋亡分子抗原結(jié)合活性ELISA鑒定結(jié)果圖。圖4為HBsAg靶向促凋亡分子特異性識別靶細胞的間接免疫熒光結(jié)果圖。圖5為HBsAg/HER2靶向促凋亡分子抑制靶細胞的生長的MTT結(jié)果圖。圖6為HBsAg靶向促凋亡分子殺傷HBsAg陽性腫瘤細胞的流式細胞檢測結(jié)果圖。
具體實施例方式本發(fā)明構(gòu)建的靶向重組分子由可內(nèi)化單鏈抗體基因與流感病毒血凝素融合肽基 因和促凋亡分子基因經(jīng)重組而形成，并在可內(nèi)化單鏈抗體基因與流感病毒血凝素融合肽基 因之間插入了編碼furin蛋白酶識別位點的基因序列?，F(xiàn)以乙肝病毒表面抗原HBsAg和腫 瘤特異性抗原HER2為例，構(gòu)建HBsAg/HER2靶向促凋亡分子，并檢測上述分子的生物學(xué)活 性。上述重組分子的促凋亡分子均為人截短型活性bid(tbid)。實施例1 1. HBsAg靶向促凋亡分子基因的構(gòu)建(1)構(gòu)建 pET32a-scFv-Fu-HAfp_tBid 質(zhì)粒(Fu 為 furin 蛋白酶識別位點，下同)以本發(fā)明人實驗室保存的質(zhì)粒pET32a-HBV_scFv為模板(Wen WH，Qin WJ, Gao H, Zhao J, Jia LT, Liao QH, Meng YL, Jin BQ, Yao LB, Chen SY, YangAG. An hepatitis B virus surface antigen specific single chain of variable fragment derived from a natural immune antigen binding fragment phage display library is specifically internalized byHepG2. 2. 15 cells. J Viral Hepat. 2007 Jul ；14(7) 512-9.)，以HBV-scFv-p5和HAfp-lst_p3為上、下游引物進行第一輪擴增，獲得的PCR產(chǎn)物 再以HBV-ScFv-p5和HAfp-2nd-p3為上、下游引物進行第二輪擴增，獲得scFv-HAfp片段。 將scFv-HAfp片段以Ncol和EcoRI雙酶切，與經(jīng)Ncol和EcoRI雙酶切的pET32a載體連接， 獲得 pET32a-scFv-HAfp 質(zhì)粒。以上述 pET32a-scFv_HAfp 為模板，以 EcoRI-Fu_HAfp-p5 和 HAfp-BamHI_p3 為上、下游引物進行擴增，獲得Fu-HAfp片段；以本發(fā)明人實驗室保存的質(zhì)粒 pET32a-e23sFv-TD-tBid (Wang F, Ren J, Qiu XC, Wang LF, Zhu Q, Zhang YQ, Huan Y, Meng YL, Yao LB, Chen SY, Xu YM, Yang AG. Selective cytotoxicity to HER2-positive tumor cells by a recombinante23sFv-TD-tBID protein containing a furin cleavage sequence. CIinCancer Res. 2010 Apr 15 ； 16 (8) :2284_94.)為模板，以 BamHI_tBid-p5 和 T7ter為上、下游引物進行擴增，獲得tBid片段。將Fu-HAfp片段以EcoRI和BamHI雙酶切、 tBid片段以BamHI和Xhol雙酶切，酶切片段與經(jīng)EcoRI和Xhol雙酶切的pET32a_HBV_scFv 質(zhì)粒連接，獲得pET32a-SCFv-Fu-HAFP-tBid質(zhì)粒。經(jīng)酶切鑒定和測序證實載體構(gòu)建正確。 引物序列如下HBV-scFv-p55’ -TTTCCATGGAGGTGCAGCTGGTGGAGTC-3，HAfp-lst-p3
5， -GCCGTTTTCAATAAAGCCTTCAATCGCTTCAAACAGGCCTCGATTGATTTCCACCTTGG-3，HAfp-2nd-p35 ’ -GCGAATTCGCCATACCAGCCATCAATCATGCCTTCCCAGCCGTTTTCAATAAAGCCTT-3’EcoRI-Fu-HAfp-p5 5 ’ -TTTGAATTCGCCGCCAATAGAGTGAGGAGATCTGTGGGCGGCCTGTTTGAAGCGATTG-3’HAfp-BamHI-p 3 5’ -TTTGGATCCGCCATACCAGCCATCAATCATGC-3’BamHI-tBid-p5 5’ -TTTGGATCCGGCAACCGCAGCAGCCACTC-3，T7ter 5’ -TGCTAGTTATTGCTCAGCGG-3’ 3(2)構(gòu)建 pET44b-scFv-Fu-HAfp-tBid 質(zhì)粒將pET32a-scFv-Fu-HAfp-tBid質(zhì)粒以Kpnl和Xhol雙酶切，酶切片段與經(jīng)Kpnl和 Xhol雙酶切的pET44b載體連接，獲得pET44b-scFv-Fu-HAfp-tBid質(zhì)粒。經(jīng)酶切鑒定證實 載體構(gòu)建正確(附圖1)，測序結(jié)果表明該重組分子中具有流感病毒血凝素融合肽的序列。實施例2 2. HER2靶向促凋亡分子基因的構(gòu)建用Ncol 禾口 EcoRI 雙醇切 pET44b-scFv-Fu-HAfp-tBid 質(zhì)粒禾口 pET32a-e23sFv-TD-tBid 質(zhì)粒，通過片段回收和連接獲得 pET44b-e23sFv-Fu_HAfp-tBid 質(zhì) 粒經(jīng)酶切鑒定證實載體構(gòu)建正確(附圖1)，測序結(jié)果表明該重組分子中具有流感病毒血凝 素融合肽的序列。3. HBsAg/HER2靶向促凋亡分子原核表達及產(chǎn)物純化將構(gòu)建成功的pET44b-scFv-Fu-HAFP-tBid 質(zhì)粒和 pET44b-e23sFv-Fu_HAfp-tBid 轉(zhuǎn)化入大腸桿菌蛋白表達宿主菌RosettaBlue (DE3)，挑取單克隆，接種于含有氨芐青霉素 (100ii g/mL)、四環(huán)素(12. 5ii g/mL)、氯霉素(34 u g/mL)的 LB 培養(yǎng)基中，37°C、220rpm 搖菌 過夜，次日以1 100接種，37°C振蕩培養(yǎng)至006(1(1為0.6時，加入IPTG至終濃度為0. lmmol/ L誘導(dǎo)表達，于25°C低溫振蕩培養(yǎng)4小時。離心收集菌體，以每0. lg濕菌加入lmL裂菌緩 沖液(20mmol/L Tris-HCl pH8. 0,0. 5mol/L NaCl，10%甘油，5mmol/L 咪唑)的比例重懸， 冰上超聲破碎菌體(超聲功率300W，超聲時間15min，超聲ls，間隔ls)，4°C 12000rpm離 心15min，收集上清，與2mL鎳-次氨基三乙酸(Ni2+_NTA)螯合層析介質(zhì)混合，至于垂直混合 器上4°C結(jié)合1小時。將混合液加入層析柱中，以30mL/h流速收集穿透液，加入10mL洗滌 緩沖液(20mmol/LTris-HCl pH8. 0,0. 5mol/L NaCl，10%甘油，40mmol/L 咪唑)去除與層析 介質(zhì)非特異結(jié)合的雜蛋白，再加入10mL洗脫緩沖液(20mmol/L Tris-HCl pH8.0,0. 5mol/L NaCl,10%甘油，lmol/L咪唑)洗脫目的蛋白。將蛋白洗脫液以超濾管濃縮，BCA法對濃縮 蛋白進行定量，以lU/50iig純化蛋白的比例加入腸激酶，22°C作用16小時，將目的蛋白與 其N端融合標簽切開，再將酶切后的蛋白溶液與2mL Ni2+-NTA層析介質(zhì)混合以相同步驟進 行第二次親和層析，去除N端融合標簽，最終的蛋白洗脫液經(jīng)超濾管濃縮后定量，確定純化 蛋白濃度，所得產(chǎn)物即為融合基因表達蛋白(附圖2)。該基因表達產(chǎn)物具有流感病毒血凝 素融合肽的序列。
4. HBsAg/HER2靶向促凋亡分子表達產(chǎn)物抗原結(jié)合活性檢測將HBsAg/HER2蛋白配制成20 u g/mL溶液，以每孔50 y L加入ELISA板，4°C包被 過夜。加入不同稀釋度的HBsAg/HER2靶向促凋亡分子基因表達產(chǎn)物，以純化的NusA蛋白 作為陰性對照，37°C孵育1小時，依次加入鼠抗6XHis單克隆抗體(1 1000稀釋)、HRP 標記的山羊抗小鼠IgG(l 2000稀釋)，37°C各孵育1小時，加入ABTS顯色液，37°C孵育 20min，在酶標儀上讀取各孔A410nm值。結(jié)果顯示隨著蛋白濃度的下降，融合基因表達產(chǎn) 物與HBsAg/HER2抗原的結(jié)合也逐漸降低，表明融合基因表達產(chǎn)物具有HBsAg/HER2結(jié)合活 性(附圖3)。5. scFv-Fu-HAfp-tBid基因表達產(chǎn)物對靶細胞結(jié)合及內(nèi)化活性檢測 胰酶消化PLC\PRF\5和IfepG2細胞，制備細胞爬片，待細胞貼壁后分別加入 scFv-Fu-HAfp-tBi d融合基因表達產(chǎn)物和純化的NusA蛋白，調(diào)整蛋白濃度為1 ii mo 1 /L， 37°C孵育2小時。孵育完畢后，細胞爬片經(jīng)4%多聚甲醛固定20min，以0. 5% Triton-X100 溶液室溫處理lOmin，再以10%兔血清37°C封閉30min，依次加入鼠抗6XHis單克隆抗體 (1 500稀釋，4°C孵育過夜)，Cy3標記的山羊抗小鼠IgG(l 200稀釋，室溫避光孵育 30min)，再以1 ii g/mL DAPI溶液37°C避光孵育5min，1 1甘油/PBS溶液封片，熒光顯微 鏡下觀察、照相。結(jié)果顯示scFv-Fu-HAfp-tBid融合基因表達產(chǎn)物能夠與HBsAg陽性細胞 (PLC\PRF\5)結(jié)合并內(nèi)化進入細胞，但對HBsAg陰性細胞0fepG2)沒有類似作用，顯示出特 異的細胞結(jié)合活性和良好的內(nèi)化活性；相同處理條件下，陰性對照NusA蛋白對HBsAg陽性 細胞和陰性細胞都無結(jié)合及內(nèi)化活性(附圖4)。6. MTT法檢測HBsAg/HER2靶向促凋亡分子基因表達產(chǎn)物對靶細胞生長抑制作用取對數(shù)生長期的HBsAg陽性PLC\PRF\5細胞和HER2陽性SGC-7901細胞，以 5 X 103/孔鋪于96孔板，培養(yǎng)過夜。純化的融合蛋白以PBS調(diào)整至設(shè)定濃度，以0. 2 y m濾器 過濾除菌，加入相應(yīng)孔中，繼續(xù)培養(yǎng)48小時后，每孔中加入20 iiL MTT溶液(5mg/mL)，繼續(xù) 培養(yǎng)4小時后吸去培養(yǎng)液，每孔加入150 ii L DMS0，振蕩lOmin，以490nm波長在酶標儀上測 定各孔光吸收值，以光吸收值與融合蛋白作用濃度做圖，顯示不同濃度融合蛋白的加入對 HBsAg/HER2陽性腫瘤細胞生長狀況的影響。結(jié)果顯示隨著靶向促凋亡分子融合基因表達 產(chǎn)物濃度的增加，靶細胞生長被抑制的程度逐漸加強；相同處理條件下，陰性對照NusA蛋 白對靶細胞生長無明顯抑制現(xiàn)象(附圖5)。7.細胞凋亡早期，細胞膜表面會出現(xiàn)磷脂酰絲氨酸從細胞膜內(nèi)側(cè)外翻，暴露于細 胞膜外側(cè)，此時可以與Armexin V試劑結(jié)合而被檢測出來。Armexin V檢測是鑒定細胞凋亡 的重要方法。將HBsAg陽性細胞(PLC\PRF\5)接種6孔板，過夜培養(yǎng)，向培養(yǎng)液中加入終濃 度為1 y mol/L的scFv-Fu-HAfp-tBid融合基因表達產(chǎn)物，繼續(xù)培養(yǎng)12小時后，胰酶消化收 集細胞，以Armexin V凋亡檢測試劑盒染色，流式細胞儀檢測。結(jié)果顯示與對照組NusA蛋 白相比，scFv-Fu-HAfp-tBid融合基因表達產(chǎn)物處理組細胞發(fā)生凋亡的比例顯著增加，達到 52. 3%，說明融合基因表達產(chǎn)物可以有效的誘導(dǎo)HBsAg陽性細胞發(fā)生細胞凋亡(附圖6)。
權(quán)利要求
含有流感病毒血凝素融合肽的靶向重組分子基因，由可內(nèi)化的單鏈抗體基因、流感病毒血凝素融合肽基因和促凋亡分子基因重組而成，并在單鏈抗體基因與流感病毒血凝素融合肽基因之間加入了編碼furin蛋白酶識別位點的基因序列。
2.如權(quán)利要求1所述的含有流感病毒血凝素融合肽的靶向重組分子基因，其特征在 于所述的可內(nèi)化的單鏈抗體為乙肝病毒表面抗原HBsAg和腫瘤特異性抗原HER2之一。
3.如權(quán)利要求1所述的含有流感病毒血凝素融合肽的靶向重組分子基因，其特征在 于所述的促凋亡分子為人截短型活性bid。
4.由權(quán)利要求1所述的基因編碼的蛋白，由可內(nèi)化的單鏈抗體、流感病毒血凝素融合 肽和促凋亡分子組成，并在單鏈抗體與流感病毒血凝素融合肽之間加入了編碼furin蛋白 酶識別位點的氨基酸序列。
5.如權(quán)利要求4所述的含有流感病毒血凝素融合肽的靶向重組分子編碼的蛋白，其特 征在于所述的可內(nèi)化的單鏈抗體為乙肝病毒表面抗原HBsAg和腫瘤特異性抗原HER2之o
6.如權(quán)利要求4所述的含有流感病毒血凝素融合肽的靶向重組分子編碼的蛋白，其特 征在于所述的促凋亡分子為人截短型活性bid。
7.如權(quán)利要求1所述的基因在制備用于腫瘤治療的藥物中的應(yīng)用。
8.如權(quán)利要求2所述的蛋白在制備用于腫瘤治療的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明提供一類含有流感病毒血凝素融合肽的靶向重組分子，由可內(nèi)化單鏈抗體基因與流感病毒血凝素融合肽基因和促凋亡分子基因經(jīng)重組而形成，并在可內(nèi)化單鏈抗體基因與流感病毒血凝素融合肽基因之間插入了編碼furin蛋白酶識別位點的基因序列。這類靶向重組分子基因表達產(chǎn)物的單鏈抗體部分可以特異性識別、結(jié)合表達有特定抗原的靶細胞，并介導(dǎo)重組蛋白內(nèi)化進入靶細胞內(nèi)吞體；重組蛋白在內(nèi)吞體中經(jīng)furin蛋白酶切割后單鏈抗體與其他部分分離，暴露出流感病毒血凝素融合肽，并在其作用下通過破壞內(nèi)吞體膜穩(wěn)定性將促凋亡分子釋放入胞漿；最終促凋亡分子在胞漿中高效誘導(dǎo)靶細胞凋亡，發(fā)揮其生物學(xué)活性。
文檔編號A61K48/00GK101979594SQ201010535659
公開日2011年2月23日 申請日期2010年11月5日 優(yōu)先權(quán)日2010年11月5日
發(fā)明者任君琳, 孟艷玲, 楊安鋼, 溫偉紅, 王濤, 王芳, 白文棟, 賈林濤, 趙晶, 趙智凝, 閆博, 陳銳 申請人:中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)