專利名稱：一種中藥脂質(zhì)體的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥脂質(zhì)體的制備方法。
背景技術(shù)：
脂質(zhì)體于1956年由英國(guó)學(xué)者Bangham和Standish用電鏡觀察懸浮于水中的磷脂 時(shí)發(fā)現(xiàn)。1971年Gregoriadis和Ryman開(kāi)始將脂質(zhì)體用于藥物載體研究。脂質(zhì)體是脂類分 子(類脂)的自組裝體，是一 種由一個(gè)或多個(gè)脂質(zhì)雙層中間包覆微水相的結(jié)構(gòu)。在脂質(zhì)體 的形成過(guò)程中，親水的頭部形成膜的內(nèi)外表面層，而親油性的尾部處于膜的中間，膜壁厚度 約為5-7nm，而囊的直徑一般在25-500nm之間。脂質(zhì)體的這種結(jié)構(gòu)使其能夠攜帶各種親水 的、疏水的或兩親性的物質(zhì)，這些物質(zhì)被包入脂質(zhì)體內(nèi)部水相，或插入類脂雙分子層，或吸 附連結(jié)在脂質(zhì)體的表面。納米中藥不是一種新的藥種，而是中藥納米化后的一種籠統(tǒng)的叫法。它是指運(yùn)用 納米技術(shù)制造的、粒徑小于IOOnm的有效成分、有效部位、原藥及其復(fù)方制劑。同傳統(tǒng)的中 藥相比，納米中藥具有如下的特點(diǎn)①提高了藥物的利用度，減少用藥量。②增強(qiáng)藥物的靶 向性。③具有緩釋功能，將中藥納米粒進(jìn)行一定的表面修飾后，可能使中藥具有緩釋作用。 ④呈現(xiàn)新的藥效，拓寬原藥適用證，中藥加工至納米尺寸時(shí)，由于其量子尺寸等效應(yīng)導(dǎo)致其 物理、化學(xué)特性的改變，從而可使中藥呈現(xiàn)出新功能。⑤豐富中藥的劑型選擇，提升傳統(tǒng)給 藥途徑。納米中藥所具有的新功能可在臨床中解決許多疑難問(wèn)題，在臨床各科的應(yīng)用前景 將十分廣闊。在制備含藥脂質(zhì)體時(shí)，根據(jù)藥物裝載的機(jī)制不同，可分為被動(dòng)載藥法和主動(dòng)載 藥法兩大類。對(duì)于脂溶性的、與磷脂親和力高的藥物，被動(dòng)載藥法較為適用；而對(duì)于兩親性 藥物，其油水分配系數(shù)受介質(zhì)的PH值和離子強(qiáng)度的影響較大，包封條件的較小變化，就有 可能使包封率有較大的變化，不適合放大生產(chǎn)。所謂主動(dòng)載藥，即通過(guò)內(nèi)外水相的不同離子 或化合物梯度進(jìn)行載藥，主要有K+-Na+梯度和H+梯度(即pH梯度等)。由于采用主動(dòng)載 藥法制備的脂質(zhì)體包封率高、滲漏率小，非常適合工業(yè)化大生產(chǎn)。在脂質(zhì)體的制備過(guò)程中，脂質(zhì)體的包封率、穩(wěn)定性和粒徑是最重要的3個(gè)部分。首 先，脂質(zhì)體如混懸在水相中，在儲(chǔ)存過(guò)程中，藥物會(huì)慢慢滲漏，導(dǎo)致藥物包封率的改變。因 此，使得脂質(zhì)體能有一個(gè)穩(wěn)定的劑型保證脂質(zhì)體的包封率不發(fā)生大的變化，并且不影響制 劑的療效。其次，脂質(zhì)體的粒徑也是一個(gè)很重要的指標(biāo)。獲得小粒徑脂質(zhì)體一直是研發(fā)的 目標(biāo)，這是由于i大粒徑的脂質(zhì)體很容易被體內(nèi)的單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)所吞噬，從而被迅速 清除；ii小粒徑的脂質(zhì)體可以被動(dòng)靶向。綜上所述，由于脂質(zhì)體的特點(diǎn)和良好性能，若能很好的解決上述的問(wèn)題，利用穩(wěn)定 可行的脂質(zhì)體制備方法來(lái)獲得有效的脂質(zhì)體制劑。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)中存在的問(wèn)題，提供新的中藥脂質(zhì)體的制備方法。
為達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案一種中藥脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于該方法的具體步驟為a.將卵磷脂與膽固醇按質(zhì)量比為(1 5) 1的比例溶解在無(wú)水乙醇中得到溶液A，將該溶液A除去溶劑得到磷脂膜；b.將步驟a所得磷脂膜溶于pH值為3 5的枸櫞酸緩沖溶液中，經(jīng)水化后得到空 白脂質(zhì)體B，將該空白脂質(zhì)體B用微孔濾膜過(guò)濾，得到澄清的空白脂質(zhì)體溶液；c.將待包封的物質(zhì)和載體物質(zhì)溶于水中得到溶液C，所述的載體物質(zhì)為蔗糖、 海藻糖、乳糖或甘露醇；所述的待包封的物質(zhì)與步驟b所得空白脂質(zhì)體溶液之間的比例為 0. 6mg/ml 1. 2mg/ml，載體物質(zhì)與待包封的物質(zhì)之間的質(zhì)量比例為1 1 10 1。d.將步驟c所得溶液C加入到步驟b所得空白脂質(zhì)體溶液中得到混合液，調(diào)節(jié)該 混合液的pH為6 8，在30 80°C溫度下進(jìn)行孵化，再經(jīng)高壓均質(zhì)法得到脂質(zhì)體溶液；e.將步驟d得到的脂質(zhì)體溶液冷凍干燥除去溶劑，得到凍干的中藥脂質(zhì)體。上述的待包封的物質(zhì)為兩親性藥物。上述的兩親性藥物有鹽酸小檗堿或阿膠。上述的的微孔濾膜大小為0. 22 μ m 0. 8 μ m。上述的卵磷脂為氫化大豆卵磷脂、大豆卵磷脂或蛋黃卵磷脂。上述的膽固醇為蛋白膽固醇、血清膽固醇、蛋黃膽固醇或膽囊膽固醇；上述的步驟a所得溶液A中還加入抗氧化劑。上述的抗氧化劑為維生素E。上述的高壓均質(zhì)法的具體工藝為將溶液加入均質(zhì)機(jī)中采用逐級(jí)循環(huán)升壓，壓力 范圍為20 IOOMpa0本發(fā)明添加了蔗糖、海藻糖、乳糖或甘露醇等載體物質(zhì)以保護(hù)脂質(zhì)體顆粒的完整 性。這些物質(zhì)的加入可以作為凍干保護(hù)劑，使得到得凍干產(chǎn)物具有良好的形態(tài)。同時(shí)使得 到得凍干產(chǎn)物不易吸潮，可以長(zhǎng)期貯存，待到需要使用時(shí)，在進(jìn)行水化即可。本發(fā)明中提到得待包封的中藥，是中藥提純物生物堿類藥物，該類藥物在有機(jī)相 中的溶解度很小，而在水相中的溶解度相對(duì)較大，此時(shí)采用了主動(dòng)載藥的方法，利用PH梯 度法包封生物堿類藥物。將用薄膜蒸發(fā)法得到的脂類物質(zhì)溶解于檸檬酸中，通過(guò)微孔濾膜 過(guò)膜，之后加入溶解了的生物堿類中藥成分。然后再用碳酸氫鈉調(diào)節(jié)外水相PH值，造成脂 質(zhì)體內(nèi)外的PH值梯度，通過(guò)孵育使得藥物進(jìn)入到脂質(zhì)體中得到含藥脂質(zhì)體，從而實(shí)現(xiàn)主動(dòng) 載藥過(guò)程。本發(fā)明方法工藝非常簡(jiǎn)單，只需要一臺(tái)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀和一臺(tái)冷凍干燥機(jī)就好了，其 他幾乎不需要大型設(shè)備，且非常容易放大的，有利于工業(yè)化生產(chǎn)。本發(fā)明方法找到了一種有 效的控制脂質(zhì)體粒徑的方法。本發(fā)明方法通過(guò)調(diào)整脂類組成成分之間的比例，然后通過(guò)高 壓均質(zhì)機(jī)調(diào)整其均質(zhì)壓力，可以有效的控制脂質(zhì)體的粒徑。由于可以做到粒度均一，穩(wěn)定性 好的小顆粒脂質(zhì)體，大大增加了本發(fā)明的應(yīng)用價(jià)值。本發(fā)明中所涉及到的溶媒為無(wú)水乙醇，無(wú)水乙醇本身就是毒性很低的溶媒，并且 在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上能過(guò)較為徹底的去除，所以最終得到的產(chǎn)物幾乎不會(huì)有殘留。本發(fā)明方法還可以得到較高的藥物的包封效率。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例一磷脂與膽固醇比例對(duì)脂質(zhì)體粒徑的影響氫化大豆卵磷脂與血清膽固醇的質(zhì)量比分別為2 1,3 1,4 1,5 1,6 1。再分別加入5mg維生素E溶于適量 乙醇中，超聲溶解，使之成為白色透亮溶液；減壓回收溶劑，在瓶壁形成一層薄膜；注入枸 櫞酸溶液60ml，使得脂材溶解，并且使脂材膜在枸櫞酸中水化Ih ；將前面溶液過(guò)0. 45um微 孔濾膜，得到空白脂質(zhì)體；在得到的空白脂質(zhì)體溶液中加入80mg的鹽酸小檗堿溶液，超聲 使之完全溶解；用碳酸氫鈉溶解調(diào)整其PH值為6. 8，使得游離的鹽酸小檗堿進(jìn)入到空白脂 質(zhì)體中；在60°C下孵化20分鐘，得到黃色的類脂混懸液；將類脂混懸液在高壓均質(zhì)機(jī)中均 質(zhì)2h，得到的脂質(zhì)體為澄明均一的溶液，，將0. 5g蔗糖加入到脂質(zhì)體溶液中，超聲使之完 全溶解。將脂質(zhì)體溶液在低溫冰箱中快速冰凍，放置于冷凍干燥機(jī)中凍干24H。將凍干粉 末加雙蒸水超聲溶解，并用ZETASSIZEROiiarlvern公司)測(cè)定粒徑。脂質(zhì)體的粒徑分別為 118. 7nm，90. 8nm，95. 29nm，85. 4nm，83. 3nm(intensity mean)。用透射電子顯微鏡觀察所得 脂質(zhì)體。采用負(fù)染法進(jìn)行觀察。即將脂質(zhì)體用1%，PH =7的磷鎢酸進(jìn)行染色。在電子顯 微鏡下觀察到脂質(zhì)體為圓球，大小與用粒度儀測(cè)定的結(jié)果相吻合。實(shí)施例二 鹽酸小檗堿脂質(zhì)體的制備稱取80mg大豆卵磷脂，20mg蛋黃膽固醇，以 及5mg維生素E溶于適量乙醇中，超聲溶解，使之成為白色透亮溶液；減壓回收溶劑，在瓶 壁形成一層薄膜；注入枸櫞酸溶液50ml，使得脂材溶解，并且使脂材膜在枸櫞酸中水化Ih ； 將前面溶液過(guò)0. Sum微孔濾膜，得到空白脂質(zhì)體；在得到的空白脂質(zhì)體溶液中加入80mg的 鹽酸小檗堿溶液，超聲使之完全溶解；用碳酸氫鈉溶解調(diào)整其PH值為6. 8，使得游離的鹽酸 小檗堿進(jìn)入到空白脂質(zhì)體中；在50°C下孵化20分鐘，得到黃色的類脂混懸液；將類脂混懸 液在高壓均質(zhì)機(jī)中在壓力400-1000Mpa下逐級(jí)增壓均質(zhì)2h，得到的脂質(zhì)體為澄明均一的溶 液，將0. 5g海藻糖加入到脂質(zhì)體溶液中，超聲使之完全溶解。將脂質(zhì)體溶液在低溫冰箱中 快速冰凍，放置于冷凍干燥機(jī)中凍干24H。將凍干粉末加雙蒸水超聲溶解，并通過(guò)激光粒度 儀測(cè)得粒徑在90nm左右。用柱分離的方法分離脂質(zhì)體和游離藥物，測(cè)得包封率為81%。實(shí)施例三稱取SOmg蛋黃卵磷脂，20mg血清膽固醇，以及5mg維生素E溶于適量 氯仿中，超聲溶解，使之成為白色透亮溶液；減壓回收溶劑，在瓶壁形成一層薄膜；注入枸 櫞酸溶液60ml，使得脂材溶解，并且使脂材膜在枸櫞酸中水化0. 5h ；將前面溶液過(guò)0. 45um 微孔濾膜，得到空白脂質(zhì)體；在得到的空白脂質(zhì)體溶液中加入40mg的鹽酸小檗堿溶液，超 聲使之完全溶解；用碳酸氫鈉溶解調(diào)整其PH值為6.0，使得游離的鹽酸小檗堿進(jìn)入到空白 脂質(zhì)體中；在40°C下孵化10分鐘，得到黃色的類脂混懸液；將類脂混懸液在高壓均質(zhì)機(jī)中 在壓力200-600Mpa下逐級(jí)增壓均質(zhì)lh，得到的脂質(zhì)體為澄明均一的溶液，將0. 3g甘露醇加 入到脂質(zhì)體溶液中，超聲使之完全溶解。將脂質(zhì)體溶液在低溫冰箱中快速冰凍，放置于冷凍 干燥機(jī)中凍干24H。將凍干粉末加雙蒸水超聲溶解，并通過(guò)激光粒度儀測(cè)得粒徑在95nm左 右。用柱分離的方法分離脂質(zhì)體和游離藥物，測(cè)得包封率為78%。實(shí)施例四阿膠脂質(zhì)體的制備稱取IOOmg蛋黃卵磷脂，40mg膽固醇，以及5mg維 生素E溶于適量乙醇中，超聲溶解，使之成為白色透亮溶液；減壓回收溶劑，在瓶壁形成一 層薄膜；注入枸櫞酸溶液80ml，使得脂材溶解，并且使脂材膜在枸櫞酸中水化2h ；將前面溶 液過(guò)0. 45um微孔濾膜，得到空白脂質(zhì)體；在得到的空白脂質(zhì)體溶液中加入IOOmg的阿膠溶 液，超聲使之完全溶解；用碳酸氫鈉溶解調(diào)整其PH值為6. 8，使得游離的阿膠制劑進(jìn)入到空白脂質(zhì)體中；在60°C下孵化30分鐘，得到褐色的類脂混懸液；將類脂混懸液在高壓均質(zhì)機(jī)中在壓力200-800Mpa下逐級(jí)增壓均質(zhì)1. 5h，得到的脂質(zhì)體為澄明均一的溶液，將0. 8g乳糖 加入到脂質(zhì)體溶液中，超聲使之完全溶解。將脂質(zhì)體溶液在低溫冰箱中快速冰凍，放置于冷 凍干燥機(jī)中凍干24H。將凍干粉末加雙蒸水超聲溶解，并通過(guò)激光粒度儀測(cè)得粒徑在93nm 左右。用柱分離的方法分離脂質(zhì)體和游離藥物，測(cè)得包封率為75%。
權(quán)利要求
一種中藥脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于該方法的具體步驟為a.將卵磷脂與膽固醇按質(zhì)量比為(1～5)∶1的比例溶解在無(wú)水乙醇中得到溶液A，將該溶液A除去溶劑得到磷脂膜；b.將步驟a所得磷脂膜溶于pH值為3～5的枸櫞酸緩沖溶液中，經(jīng)水化后得到空白脂質(zhì)體B，將該空白脂質(zhì)體B用微孔濾膜過(guò)濾，得到澄清的空白脂質(zhì)體溶液；c.將待包封的物質(zhì)和載體物質(zhì)溶于水中得到溶液C，所述的載體物質(zhì)為蔗糖、海藻糖、乳糖或甘露醇；所述的待包封的物質(zhì)與步驟b所得空白脂質(zhì)體溶液之間的比例為0.6mg/ml～1.2mg/ml，載體物質(zhì)與待包封的物質(zhì)之間的質(zhì)量比例為1∶1～10∶1。d.將步驟c所得溶液C加入到步驟b所得空白脂質(zhì)體溶液中得到混合液，調(diào)節(jié)該混合液的pH為6～8，在30～80℃溫度下進(jìn)行孵化，再經(jīng)高壓均質(zhì)法得到脂質(zhì)體溶液；e.將步驟d得到的脂質(zhì)體溶液冷凍干燥除去溶劑，得到凍干的中藥脂質(zhì)體。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于所述的待包封的物質(zhì)為 兩親性藥物。
3.根據(jù)權(quán)利要求3所述的中藥脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于所述的兩親性藥物有 鹽酸小檗堿或阿膠。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于所述的的微孔濾膜大小 為 0·22μπι 0·8μ 。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的納米鹽酸小檗堿脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于所述的卵磷 脂為氫化大豆卵磷脂、大豆卵磷脂或蛋黃卵磷脂。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的納米鹽酸小檗堿脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于所述的膽固 醇為蛋白膽固醇、血清膽固醇、蛋黃膽固醇或膽囊膽固醇；
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于步驟a所得溶液A中還 加入抗氧化劑。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的中藥脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于所述的抗氧化劑為維生素E。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于所述的高壓均質(zhì)法的具 體工藝為將溶液加入均質(zhì)機(jī)中采用逐級(jí)循環(huán)升壓，壓力范圍為20 lOOMpa。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種中藥脂質(zhì)體的制備方法。該方法的具體步驟為將卵磷脂與膽固醇溶解在無(wú)水乙醇中得到溶液A，將該溶液A除去溶劑得到磷脂膜；再將磷脂膜中加入pH值為3～5的枸櫞酸緩沖溶液，經(jīng)水化后得到空白脂質(zhì)體B，將該空白脂質(zhì)體B用微孔濾膜過(guò)濾，得到澄清的空白脂質(zhì)體溶液；將待包封的物質(zhì)和載體物質(zhì)溶于水中得到溶液C，將步驟c所得溶液C加入到步驟b所得空白脂質(zhì)體B中調(diào)整其pH值為6～8，在一定溫度范圍內(nèi)(30～80℃)孵化，得到脂質(zhì)體溶液；將步驟d得到的脂質(zhì)體溶液冷凍干燥除去溶劑，得到凍干的中藥脂質(zhì)體。本發(fā)明方法工藝非常簡(jiǎn)單，有利于工業(yè)化生產(chǎn)。本發(fā)明方法通過(guò)調(diào)整脂類組成成分之間的比例，然后通過(guò)高壓均質(zhì)機(jī)調(diào)整其均質(zhì)壓力，可以有效的控制脂質(zhì)體的粒徑。由于可以做到粒度均一，穩(wěn)定性好的小顆粒脂質(zhì)體，大大增加了本發(fā)明的應(yīng)用價(jià)值。
文檔編號(hào)A61K35/36GK101804028SQ20101015252
公開(kāi)日2010年8月18日 申請(qǐng)日期2010年4月20日 優(yōu)先權(quán)日2010年4月20日
發(fā)明者何丹農(nóng), 王俊玲, 金彩虹 申請(qǐng)人:上海納米技術(shù)及應(yīng)用國(guó)家工程研究中心有限公司