專利名稱：：一種具有抗腫瘤活性的聯(lián)苯化合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，涉及一種抗腫瘤的化合物，特別涉及一種具有抗腫瘤活性的聯(lián)苯化合物及其制備方法。
背景技術(shù)：
：惡性腫瘤是當(dāng)前嚴(yán)重影響人類健康、威脅人類生命的主要疾病之一。世界衛(wèi)生組織的統(tǒng)計(jì)資料顯示，目前全世界每年約有一千萬腫瘤患者，數(shù)百萬人死于惡性腫瘤。惡性腫瘤已經(jīng)成為僅次于心血管疾病的人類第二大殺手。腫瘤的化學(xué)治療是腫瘤防治的三個(gè)基本手段之一，經(jīng)過數(shù)十年的發(fā)展，用于腫瘤治療的化療藥物研究取得了巨大的成功，得到了一大批具有不同作用機(jī)制的臨床抗腫瘤藥物。但是由于化療藥物本身不同程度的毒副作用以及腫瘤的耐藥性的產(chǎn)生常常會(huì)使腫瘤的化學(xué)治療達(dá)不到預(yù)期的效果。因此，新的抗腫瘤藥物的研究與開發(fā)是目前藥學(xué)領(lǐng)域的熱點(diǎn)與難點(diǎn)問題之一。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明解決的問題在于提供一種具有抗腫瘤活性的聯(lián)苯化合物及其制備方法，該聯(lián)苯化合物在體外和體內(nèi)都表現(xiàn)出抗腫瘤活性，能夠應(yīng)用于抗腫瘤藥物的制備。本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)—種具有抗腫瘤活性的聯(lián)苯化合物，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式為其中，RpR2為單取代、雙取代或三取代，取代基為氫、羥基、氨基、鹵素中的一種或幾種。—種具有抗腫瘤活性的聯(lián)苯化合物的制備方法，包括以下步驟1)異香草醛在鐵粉催化作用下，與液溴反應(yīng)得到2_溴代異香草醛；2)將2-溴代異香草醛通過芐基保護(hù)反應(yīng)，得到4_甲氧基-3-芐氧基-2-溴苯甲醛；3)在1^為56條件下，用亞氯酸鈉和過氧化氫的二元氧化體系，將4-甲氧基-3-芐氧基-2-溴苯甲醛氧化為4-甲氧基-3-芐氧基-2-溴苯甲酸；4)將4_甲氧基-3-芐氧基-2-溴苯甲酸通過?；磻?yīng)生成4_甲氧基-3-芐氧基_2-溴苯甲酰氯，然后再與甲胺反應(yīng)得到4-甲氧基-3-芐氧基-2-溴苯甲酰甲胺；5)4-甲氧基-3-節(jié)氧基-2-溴苯甲酰甲胺通過Ullma皿反應(yīng)得到節(jié)基保護(hù)的聯(lián)苯雙酰胺化合物5，5'-二甲氧基-6，6'-二芐氧基聯(lián)苯-2，2'-二苯甲酰甲胺；6)5，5'-二甲氧基_6，6'-二芐氧基聯(lián)苯_2，2'-二苯甲酰甲胺通過催化氫化脫去芐基保護(hù)基，得到帶有兩個(gè)酚羥基的聯(lián)苯雙酰胺化合物5，5'-二甲氧基_6，6'-二羥基聯(lián)苯-2，2'-二苯甲酰甲胺；7)5，5'-二甲氧基_6，6'-二羥基聯(lián)苯_2，2'-二苯甲酰甲胺的l個(gè)酚羥基與含有鹵素取代乙酰苯胺的化合物通過醚化反應(yīng)，得到單羥基醚化的聯(lián)苯化合物。8)單羥基醚化的聯(lián)苯化合物的另一個(gè)羥基與含有鹵素取代乙酰苯胺的化合物通過醚化反應(yīng)，得到目標(biāo)化合物。所述的氯乙酰取代苯胺的化合物為氯乙酰鹵素取代苯胺、氯乙酰羥基取代苯胺或氯乙酰氨基取代苯胺的化合物。所述的具有抗腫瘤活性的聯(lián)苯化合物應(yīng)用于抗腫瘤藥物的制備。所述是應(yīng)用于抗結(jié)直腸癌、肺癌、肝癌、乳腺癌或胰腺癌藥物的制備。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益的技術(shù)效果本發(fā)明提供的聯(lián)苯化合物是一種新的具有抗腫瘤活性的化合物，其在體外對(duì)結(jié)直腸癌、肺癌、肝癌、乳腺癌或胰腺癌細(xì)胞系具有誘導(dǎo)凋亡和抑制增殖作用，在體內(nèi)對(duì)肝癌和結(jié)直腸癌具有腫瘤抑制作用，可應(yīng)用于抗腫瘤藥物的制備。本發(fā)明提供的聯(lián)苯化合物的制備方法，具有原料來源易得，反應(yīng)條件溫和，反應(yīng)過程操作簡(jiǎn)單，所用試劑便宜易得的優(yōu)點(diǎn)。圖1為具有抗腫瘤活性的聯(lián)苯化合物的合成路線圖；其中，化合物1為異香草醛，化合物2為2-溴代異香草醛，化合物3為4-甲氧基-3-芐氧基-2-溴苯甲醛，化合物4為4-甲氧基-3-芐氧基-2-溴苯甲酸，化合物5為4-甲氧基-3-芐氧基-2-溴苯甲酰甲胺，化合物6為5，5'-二甲氧基-6，6'-二芐氧基聯(lián)苯-2，2'-二甲酰甲胺，化合物7為5，5'-二甲氧基-6，6'-二羥基聯(lián)苯_2，2'-二甲酰甲胺，化合物8為單羥基醚化的聯(lián)苯化合物，化合物9為具有抗腫瘤活性的聯(lián)苯化合物。圖中標(biāo)注的反應(yīng)條件具體為a為Fe，NaOAc，AcOH，Br2;b為BnCl，K2C03;c為NaH2P04，NaC102，30%H202;d為SOCl2，DMF(cat)，CH2C12，CH2C12，30%CH3NH2;e為Cu，DMF;f為H2，Pd/C;g為K2C03，CH3C0CH3;h為K2C03，CH3C0CH3。具體實(shí)施例方式本發(fā)明提供一種具有抗腫瘤活性的聯(lián)苯化合物，該聯(lián)苯化合物在體外和體內(nèi)都表現(xiàn)出抗腫瘤活性，能夠應(yīng)用于抗腫瘤藥物的制備。下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做詳細(xì)說明，所述是對(duì)本發(fā)明的解釋而不是限定。本發(fā)明提供的具有抗腫瘤活性的聯(lián)苯化合物，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式為4R，十其中，&和R2可以相同或不同，&、R2為苯環(huán)上的單取代、雙取代或三取代，取代基為氫、羥基、氨基、鹵素中的一種或幾種。下面結(jié)合圖1所示的合成路線和具體的合成實(shí)施例來詳細(xì)說明具有抗腫瘤活性的聯(lián)苯化合物的制備方法。實(shí)施例1結(jié)構(gòu)式中&、R2均為3-氯-4-氟的鹵素的化合物，通過以下步驟制備[OO33]2-氯-N-(3-氯_4-氟苯)乙酰胺的1)異香草醛化(1)通過溴化反應(yīng)制備合物2-溴代異香草醛(2)將20.Og(O.132mol)異香草醛(1)、21.59g(0.263mol)乙酸鈉和O.68g(0.012mol)的鐵粉置于500mL三頸瓶中，加入120ml冰乙酸，室溫?cái)嚢?0min;攪拌完成后，在溫度控制為2325。C的條件下，滴加預(yù)先將7.OmL(O.14mol)液溴與30mL冰乙酸混合配制成的溶液，滴完后控溫2325。C繼續(xù)攪拌3h;然后加入250mL冰水，攪拌lh;過濾，固體蒸干，乙醇重結(jié)晶，得灰白色2_溴代異香草醛(2)固體產(chǎn)品24.59g，產(chǎn)率81X;其理化性質(zhì)為mp206-207°C;質(zhì)譜為EI-MS(m/z):230.9([M+H]+)，核磁共振氫譜為,HNMR(300MHz，CDC13);S卯m4.01(s，3H)，6.07(s，1H)，6.93(d，J=8.5Hz，lH)，7.58(d，J=8.5Hz，1H)，10.26(s，1H)。2)2-溴代異香草醛(2)芐基保護(hù)反應(yīng)制備化合物4-甲氧基_3_芐氧基_2_溴苯甲醛(3)將6.90g(0.030mol)2-溴代異香草醛(2)懸浮于120mL無水乙醇中，然后加入12.44g(0.090mol)無水碳酸鉀和5.20mL(0.045mol)氯化節(jié)，于78。C加熱回流反應(yīng)4h;待冷卻至室溫后過濾，濾液減壓回收乙醇，然后加入140ml乙酸乙酯萃取有機(jī)相依次用水、2mol/LNaOH溶液、2mol/L鹽酸、飽和氯化鈉水溶液洗滌，最后有機(jī)相再用無水硫酸鈉干燥后減壓蒸去溶劑，得淡黃色4-甲氧基-3-芐氧基-2-溴苯甲醛(3)粗品9.12g，產(chǎn)率95%;其理化性質(zhì)為卿79-81°C;質(zhì)譜為:EI-MS(m/z):320.9([M+H]+);核磁共振氫譜為,HNMR(300MHz，CDC13)S卯m3.96(s，3H)，5.03(s，2H)，6.98(d，J=9.2Hz，lH)，7.35-7.54(m，5H)，7.76(d，J=8.4Hz，1H)，10.27(s，1H)。3)4-甲氧基-3-節(jié)氧基-2-溴苯甲醛(3)氧化制備化合物4_甲氧基_3_節(jié)氧基-2-溴苯甲酸(4)將9.60g(0.030mol)4_甲氧基_3_節(jié)氧基_2_溴苯甲醛(3)溶于100mL四氫呋喃(THF)，然后加入40mL蒸餾水和2.16g(0.018mol，溶解后Kl為56)NaH2P04，室溫?cái)嚢杈鶆?；室溫滴加預(yù)先將8.96gNaC102(0.099mol)和6.8mL30%H202(0.066mol)溶于525ml蒸餾水配成的溶液，滴完后再室溫?cái)嚢?h;減壓回收THF，然后加入160ml乙酸乙酯萃取，用2mol/LNaOH溶液洗至有機(jī)相無吸收；收集合并水相，并用濃鹽酸酸化至ra為34，析出白色固體；過濾，烘干，得白色4-甲氧基-3-芐氧基-2-溴苯甲酸(4)固體產(chǎn)品9.37g，產(chǎn)率93X;其理化性質(zhì)為卿159-161°C;質(zhì)譜為:EI-MS(m/z):336.9([M+H]+)，核磁共振氫譜為NMR(300MHz，CDC13)S卯m3.94(s，3H)，5.03(s，2H)，6.93(d，J=9.2Hz，1H)，7.37-7.56(m，5H)，7.87(d，J=9.1Hz，1H)。4)4-甲氧基-3-節(jié)氧基-2-溴苯甲酸(4)通過兩步反應(yīng)制備化合物4_甲氧基-3-芐氧基-2-溴苯甲酰甲胺(5)將5.04g(0.015mol)4-甲氧基-3-芐氧基-2-溴苯甲酸(4)溶于50mL二氯甲烷中，依次逐滴加入4.37mL(0.060mol)氯化亞砜和催化量的N，N-二甲基甲酰胺(DMF)，室溫下攪拌反應(yīng)3h;反應(yīng)完全后，減壓蒸除溶劑，將包含化合物4-甲氧基-3-芐氧基-2-溴苯甲酰氯的殘余物溶于25mL無水二氯甲烷；在冰浴條件下，將所得到的上述溶液逐滴加到10.31mL(0.090mmol)30%的甲胺水溶液中，滴加完成后室溫反應(yīng)4h;反應(yīng)完全后，減壓蒸除溶劑，用150mL乙酸乙酯萃取然后依次用水、飽和碳酸氫鈉溶液、飽和氯化鈉水溶液洗滌有機(jī)相，最后有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥后減壓蒸去溶劑，殘留物經(jīng)硅膠柱層析分離(洗脫劑按體積比為氯仿甲醇=30:1)得到白色固體4-甲氧基-3-芐氧基-2-溴苯甲酰甲胺(5)4.46g，產(chǎn)率85X;其理化性質(zhì)為卿142-144°C;質(zhì)譜為:EI-MS(m/z):350.9([M+H]+)，核磁共振氫譜為NMR(300MHz，CDC13)S卯m3.00(d，J=4.3Hz，3H)，3.89(s，3H)，5.01(s，2H)，6.13(br，1H)，6.91(d，J=7.2Hz，1H)，7.37—7.56(m，5H)，7.55(d，J=7.OHz，1H)。5)4-甲氧基-3-芐氧基-2-溴苯甲酰甲胺(5)通過Ullma皿反應(yīng)去芐基保護(hù)基制備化合物5，5'-二甲氧基-6，6'-二節(jié)氧基聯(lián)苯-2，2'-二甲酰甲胺(6)將3.498(0.01011101)4-甲氧基_3_芐氧基_2_溴苯甲酰甲胺(5)溶于25mL無水N，N-二甲基甲酰胺，置于100mL三頸瓶中，加入6.40g(0.lOmol)新處理(鹽酸活化)的銅粉，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下控溫15016(TC回流4小時(shí)；待冷卻至室溫后，過濾，濾液減壓回收N，N-二甲基甲酰胺，加120mL氯仿萃取再依次用2mol/L鹽酸、飽和氯化鈉水溶液洗滌有機(jī)相，并將有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥后減壓蒸去溶劑，殘留物經(jīng)硅膠柱層析分離(洗脫劑按體積比為石油醚乙酸乙酯=1:1)得白色5，5'-二甲氧基-6，6'-二芐氧基聯(lián)苯-2，2'-二甲酰甲胺(6)1.95g，產(chǎn)率72X;其理化性質(zhì)為卿176-180°C;質(zhì)譜為:EI-MS(m/z):540.1([M]+)，核磁共振氫譜為NMR(300MHz，CDCl3)S卯m2.65(d，J=4.6Hz，6H)，3.87(s，6H)，4.73(d，J=10.9Hz，1H)，4.82(d，J=10.8Hz，1H)，6.94—7.19(m，12H)，7.33(d，J=8.4Hz，2H)。6)化合物5，5'-二甲氧基_6，6'-二羥基聯(lián)苯_2，2'-二甲酰甲胺(7)的制備將3.llg(5.76mmo1)化合物5，5'-二甲氧基_6，6'-二節(jié)氧基聯(lián)苯_2，2'-二甲酰甲胺(6)溶于100mL無水甲醇中，然后加入0.31g10%的鈀/碳催化劑(其中鈀的質(zhì)量比為10%)，氫氣密閉體系中室溫充分?jǐn)嚢柚翢o化合物(6);濾過鈀/碳催化劑，依次用無水乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、DMF洗滌鈀/碳，減壓蒸去溶劑得灰白色5，5'-二甲氧基-6，6'-二羥基聯(lián)苯-2，2'-二甲酰甲胺(7)2.01g，產(chǎn)率97%;其理化性質(zhì)為卿166-168°C;質(zhì)譜為:EI-MS(m/z):360.1([M]+)，核磁共振氫譜為NMR(300MHz，CDC13)S卯m2.74(d，J=4.2Hz，6H)，3.92(s，6H)，6.89(d，J=8.4Hz，2H)，7.16(d，J=8.5Hz，2H)。7)5，5'-二甲氧基_6，6'-二羥基聯(lián)苯_2，2'-二甲酰甲胺(7)羥基醚化制備化合物6-(2-(3-氯-4-氟-苯胺)-2-羰乙氧基)-6'-羥基_5，5'-二甲氧基_2，2'-二甲酰甲胺將3.60g(10mmo1)化合物5，5'-二甲氧基_6，6'-二羥基聯(lián)苯_2，2'-二甲酰甲胺溶于(7)200mL無水丙酮中，加入4.15g(30mmo1)無水碳酸鉀，室溫?cái)嚢?0分鐘后，加入2.44g(llmmo1)的2-氯-N-(3-氯-4-氟苯)乙酰胺，56。C加熱回流反應(yīng)8小時(shí)；反應(yīng)完全后，減壓蒸除溶劑，殘余物溶于250mL乙酸乙酯中，依次用2mol/L鹽酸、飽和氯化鈉水溶液洗滌有機(jī)相，最后有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥后減壓蒸去溶劑，殘留物經(jīng)硅膠柱層析分離(洗脫劑按體積比為石油醚乙酸乙酯=1:l)得白色6-(2-(3-氯-4-氟-苯胺)-2-羰乙氧基)-6'-羥基-5，5'-二甲氧基-2，2'-二甲酰甲胺4.41g，產(chǎn)率83X;8)6-(2-(3-氯-4-氟-苯胺)-2-羰乙氧基)-6'-羥基_5，5'-二甲氧基_2，2'-二甲酰甲胺(8)羥基醚化制備化合物6，6'-二(2-(3-氯-4-氟-苯胺)-2-羰乙氧基)-5，5'-二甲氧基-2，2'-二甲酰甲胺(9)將5.31g(1Ommo1)化合物6-(2-(3-氯-4-氟-苯胺)-2-羰乙氧基)-6'-羥基-5，5'-二甲氧基-2，2'-二甲酰甲胺(8)200mL無水丙酮中，加入4.15g(30mmo1)無水碳酸鉀，室溫?cái)嚢?0分鐘后，加入2.44g(llmmo1)的2-氯_N_(3-氯-4-氟苯)乙酰胺，56。C加熱回流反應(yīng)8小時(shí)；反應(yīng)完全后，減壓蒸除溶劑，殘余物溶于250mL乙酸乙酯中，依次用2mol/L鹽酸、飽和氯化鈉水溶液洗滌有機(jī)相，最后有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥后減壓蒸去溶劑，殘留物經(jīng)硅膠柱層析分離(洗脫劑按體積比為石油醚乙酸乙酯=1:1)得白色6，6'-二(2-(3-氯-4-氟-苯胺)-2-羰乙氧基)-5，5'-二甲氧基-2，2'-二甲酰甲胺6.21g，產(chǎn)率85%;其理化性質(zhì)為mp129-131°C;質(zhì)譜為EI-MS(m/z):733.2([M]+)，核磁共振氫譜為1HNMR(300MHz，CDC13)S卯m2.74(s，3H)，2.75(s，3H)，3.86(s，6H)，4.08(s，1H)，4.11(s，lH)，4.16(s，lH)，4.18(s，1H)，6.87(d，J=7.8Hz，2H)，7.10(d，J=7.9Hz，2H)，7.30(d，J=8.7Hz，2H)，7.74(d，J=6.3Hz，1H)，8.68(s，2H)。所得聯(lián)苯化合物6，6'-二(2-(3-氯-4-氟-苯胺)-2-羰乙氧基)-5，5'-二甲氧基-2，2'-二甲酰甲胺相當(dāng)于圖l所示的化合物(9)，其結(jié)構(gòu)式如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>實(shí)施例2結(jié)構(gòu)式中&為氫、R2為4_羥基的化合物，通過以下步驟制備步驟l)6)與實(shí)施例l相同，也即從化合物異香草醛化(1)到化合物5，5'-二甲氧基-6，6'-二羥基聯(lián)苯-2，2'-二甲酰甲胺(7)的制備步驟相同；之后在兩個(gè)酚羥基醚化過程不同中，兩個(gè)酚羥基先后與氯乙酰苯胺和氯乙酰4-羥基苯胺反應(yīng)，具體為將3.60g(10mmo1)化合物5，5'-二甲氧基_6，6'-二羥基聯(lián)苯_2，2'-二甲酰甲胺溶于(7)200mL無水丙酮中，加入4.15g(30mmo1)無水碳酸鉀，室溫?cái)嚢?0分鐘后，加入1.86g(llmmo1)的2-氯-N-(苯基)乙酰胺，56。C加熱回流反應(yīng)8小時(shí)；反應(yīng)完全后，減壓蒸除溶劑，殘余物溶于250mL乙酸乙酯中，依次用2mol/L鹽酸、飽和氯化鈉水溶液洗滌有機(jī)相，最后有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥后減壓蒸去溶劑，殘留物經(jīng)硅膠柱層析分離(洗脫劑按體積比為石油醚乙酸乙酯=1:1)得白色6-(2-(苯胺)-2-羰乙氧基)-6'-羥基-5，5'-二甲氧基-2，2'-二甲酰甲胺4.02g，產(chǎn)率84X;將4.78g(1Ommo1)化合物6-(苯胺)-2-羰乙氧基)-6'-羥基-5，5'-二甲氧基-2，2'-二甲酰甲胺(8)200mL無水丙酮中，加入4.15g(30mmo1)無水碳酸鉀，室溫?cái)嚢?0分鐘后，加入2.44g(llmmo1)的2-氯-N-(4-羥基苯)乙酰胺，56。C加熱回流反應(yīng)8小時(shí)；反應(yīng)完全后，減壓蒸除溶劑，殘余物溶于250mL乙酸乙酯中，依次用2mol/L鹽酸、飽和氯化鈉水溶液洗滌有機(jī)相，最后有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥后減壓蒸去溶劑，殘留物經(jīng)硅膠柱層析分離(洗脫劑按體積比為石油醚乙酸乙酯=1:1)得白色6-(2-(4-羥基苯胺)-2-羰乙氧基)-5，5'-二甲氧基-6'-苯胺-2-羰乙氧基)-2，2'-二甲酰甲胺5.59g，產(chǎn)率87%;所得聯(lián)苯化合物6-(2-(4-羥基苯胺)_2-羰乙氧基)-5，5'-二甲氧基_6'-苯胺-2-羰乙氧基)-2，2'-二甲酰甲胺相當(dāng)于圖l所示的化合物(9)，其結(jié)構(gòu)式如下實(shí)施例3結(jié)構(gòu)式中&為3-氯-4-羥基、R2為3-氯_4_氟_5_氨基的化合物，通過以下步驟制備步驟l)6)于實(shí)施例1相同，也即從化合物異香草醛化(1)到化合物5，5'-二甲氧基-6，6'-二羥基聯(lián)苯_2，2'-二甲酰甲胺(7)的制備步驟相同；之后在兩個(gè)酚羥基醚化過程不同中，兩個(gè)酚羥基先后與2-氯-N-(3-氯-4-羥基苯)乙酰胺和2-氯-N-(3-氯-4-氟-5-氨基苯)乙酰胺反應(yīng)，具體為將3.60g(10mmo1)化合物5，5'-二甲氧基_6，6'_二羥基聯(lián)苯_2，2'-二甲酰甲胺溶于(7)200mL無水丙酮中，加入4.15g(30mmo1)無水碳酸鉀，室溫?cái)嚢?0分鐘后，加入2.42g(llmmo1)的2-氯-N-(3-氯-4-羥基苯)乙酰胺，56。C加熱回流反應(yīng)8小時(shí)；反應(yīng)完全后，減壓蒸除溶劑，殘余物溶于250mL乙酸乙酯中，依次用2mol/L鹽酸、飽和氯化鈉水溶液洗滌有機(jī)相，最后有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥后減壓蒸去溶劑，殘留物經(jīng)硅膠柱層析分離(洗脫劑按體積比為石油醚乙酸乙酯=1:l)得白色6-(2-(3-氯-4-羥基-苯胺)-2-羰乙氧基)-6'-羥基-5，5'-二甲氧基-2，2'-二甲酰甲胺4.41g，產(chǎn)率81X;將5.44g(10mmo1)化合物6-(2_(3_氯_4_羥基-苯胺)_2_羰乙氧基)_6，-羥基-5，5'-二甲氧基-2，2'-二甲酰甲胺(8)200mL無水丙酮中，加入4.15g(30mmo1)無水碳酸鉀，室溫?cái)嚢?0分鐘后，加入2.61g(llmmo1)的2-氯_N_(3-氯+氟-5-氨基苯)乙酰胺，56t:加熱回流反應(yīng)8小時(shí)；反應(yīng)完全后，減壓蒸除溶劑，殘余物溶于250mL乙酸乙酯中，依次用2mol/L鹽酸、飽和氯化鈉水溶液洗滌有機(jī)相，最后有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥后減壓蒸去溶劑，殘留物經(jīng)硅膠柱層析分離(洗脫劑按體積比為石油醚乙酸乙酯=1:i)得白色6-(2-(3-氯-4-羥基_苯胺)-2-羰乙氧基)-5，5'-二甲氧基-6'-(2-(3-氯-4-氟-5-氨基苯)-2，2'_二甲酰甲胺6.27g，產(chǎn)率84X;所得聯(lián)苯化合物6-(2-(3-氯-4-羥基-苯胺)-2-羰乙氧基)-5，5'-二甲氧基-6'-(2-(3-氯-4-氟-5-氨基苯)-2，2'-二甲酰甲胺相當(dāng)于圖1所示的化合物(9)，其結(jié)構(gòu)式如下聯(lián)苯化合物的抗腫瘤活性驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)a、聯(lián)苯化合物的體外抗腫瘤作用本發(fā)明提供的聯(lián)苯化合物具有抗腫瘤作用，對(duì)腫瘤細(xì)胞有體外抑制增殖作用；在人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞(A549)，人結(jié)腸癌細(xì)胞(Caco-2)，人皮膚鱗癌細(xì)胞(A431)上具有細(xì)胞毒活性，可用于這些癌癥的治療；與陽性對(duì)照藥塔斯品堿相比，個(gè)別化合物顯示了更高的抑制腫瘤細(xì)胞增殖活性?？鼓[瘤驗(yàn)證采用MTT法檢測(cè)待測(cè)聯(lián)苯化合物對(duì)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞(A549)，人結(jié)腸癌細(xì)胞(Caco-2)，人皮膚鱗癌細(xì)胞(A431)，用0.25%的胰酶消化35分鐘，吹打均勻后稀釋成濃度為1X1042X104個(gè)/mL的單細(xì)胞懸液，平行接種于96孔培養(yǎng)板中，每孔接種體積為200yL;于37°C、5%C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)；9然后以含0.25%匿SO(N，N-二甲基亞砜)的水溶液為陰性對(duì)照，以塔斯品堿作為陽性對(duì)照，待測(cè)樣品加入4個(gè)不同濃度的塔斯品堿聯(lián)苯衍生物(4X10—7mol/L;2X10—6mol/L;1X10—5mol/L;5X10—5mol/L)，每個(gè)濃度設(shè)5個(gè)復(fù)孔，繼續(xù)培養(yǎng)48小時(shí);然后每孔均加入5mg/ml的MTT工作液10yL，混勻，37。C培養(yǎng)箱孵育4小時(shí)后取出，小心吸棄培養(yǎng)液，每孔加入150ii1DMS0，振蕩10min，酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀測(cè)量各孔490nm處的紫外吸收值(OD值)，然后計(jì)算細(xì)胞抑制率，并根據(jù)抑制率求出ICs。值；細(xì)胞抑制率的計(jì)算公式為抑制率％=(陰性對(duì)照組0D值-用藥組0D值)/陰性對(duì)照細(xì)胞OD值X100%檢測(cè)結(jié)果顯示與陰性對(duì)照相比，聯(lián)苯化合物對(duì)上述3種腫瘤細(xì)胞均具有不同程度的體外抑制作用。作為陽性對(duì)照藥塔斯品堿對(duì)人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞(A549)，人結(jié)腸癌細(xì)胞(Caco-2)，人皮膚鱗癌細(xì)胞(A431)的半數(shù)抑制濃度(IC5。)分別為9.70iiM，0.51iiM，0.61iiM;待測(cè)聯(lián)苯化合物對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制結(jié)果為化合物(6，6'-二(2-(3-氯-4-氟-苯胺)-2-羰乙氧基)-5，5'-二甲氧基_2，2'-二甲酰甲胺)對(duì)人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞(A549)，人結(jié)腸癌細(xì)胞(Caco-2)，人皮膚鱗癌細(xì)胞(A431)的半數(shù)抑制濃度(IC5。)分別為13.07iiM，3.47iiM，15.03iiM;化合物(6-(2-(3-氯-4-氟-苯胺)-2-羰乙氧基)-6'-羥基-5，5'-二甲氧基-2，2'-二甲酰甲胺)對(duì)人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞(A549)，人結(jié)腸癌細(xì)胞(Caco-2)，人皮膚鱗癌細(xì)胞(A431)的半數(shù)抑制濃度(IC5。)分別為73.51iiM，20.33yM，217.42yM;化合物(6-(2-(3-氯-4-氟-苯胺)-2-羰乙氧基)-5，5'-二甲氧基-6'-(2-嗎啡-4-乙氧基)-2，2'-二甲酰甲胺)對(duì)人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞(A549)、人結(jié)腸癌細(xì)胞(Caco-2)和人皮膚鱗癌細(xì)胞(A431)的半數(shù)抑制濃度(IC5。)分別為194.39yM，33.14yM，25.06iiM;雖然與陽性對(duì)照相比，聯(lián)苯化合物的半數(shù)抑制濃度(IC5。)是高于塔斯品堿的，但是與陰性對(duì)照相比，其抑制腫瘤細(xì)胞增殖的效果還是非常明顯的。b、聯(lián)苯化合物的體內(nèi)抗腫瘤作用1)溶液及試藥的配制(1)0.4%臺(tái)盼藍(lán)溶液精密稱取臺(tái)盼藍(lán)4g，加少量三蒸水研磨，加三蒸水至100mL，濾紙過濾，得4X臺(tái)盼藍(lán)母液，4t:保存。使用時(shí)，用PBS稀釋至0.4X。(2)供試液的配制稱取11號(hào)，加入已滅菌的0.5%CMC-Na生理鹽水溶液，超聲15分鐘，配制成濃溶液的溶液，稀釋至所需濃度，用前搖勻。2)SPF級(jí)動(dòng)物房的消毒及飼養(yǎng)管理潔凈動(dòng)物房設(shè)在空氣過濾十萬級(jí)環(huán)境中，放置層流架作為裸鼠的飼養(yǎng)條件。啟用前，先用2%新潔而滅全面擦拭，然后按消毒區(qū)域的容積用高錳酸鉀15g/tf加福爾馬林15mL混和熏蒸。最后經(jīng)紫外燈照射，細(xì)菌培養(yǎng)陰性才能使用。啟用后常規(guī)消毒為進(jìn)動(dòng)物房前后紫外燈照射30min，每2周用2%新潔而滅擦拭墻壁、天花板，每一個(gè)月用過氧乙酸噴射消毒。每三個(gè)月用甲醛和高錳酸鉀熏蒸一次，每三個(gè)月將層流架的過濾材料拆下進(jìn)行清洗。每天飼喂全價(jià)營養(yǎng)飼料，飲水、墊料及鼠籠均用雙層包布包裝高壓蒸汽滅菌消毒。經(jīng)緩沖室紫外燈照射后去除外層包布，進(jìn)入動(dòng)物房。進(jìn)室前需風(fēng)淋并用新潔而滅常規(guī)泡手、消毒、穿無菌衣、帶襪的無菌褲、戴口罩、帽子，并戴無菌手套。每次操作完畢，用新潔而滅抹臺(tái)面及地面。常規(guī)每周換兩次籠具，投放34天的飼料與飲水。3)接種用0.25%胰蛋白酶消化待接種的不同種類的腫瘤細(xì)胞，臺(tái)盼藍(lán)染色后計(jì)活細(xì)胞數(shù)，稀釋于無菌生理鹽水中，使細(xì)胞密度為2.5X107mL—、每只裸鼠皮下接種0.2mL于右前肢腋下。4)分組給藥待移植腫瘤組織體積達(dá)到100mm3時(shí)，隨機(jī)分組，每組6只荷瘤裸鼠。其中陰性對(duì)照組為O.5%CMC-Na生理鹽水組(已滅菌)，每只裸鼠給藥0.2mL;陽性對(duì)照組為吉非替尼組，給藥劑量為50mg*kg—1;聯(lián)苯化合物組給藥劑量分為大劑量15mg'kg-l，中劑量10mg*kg—、小劑量5mg，kg—、各組均灌胃給藥。每天給藥一次，連續(xù)給藥14天。腫瘤體積和裸鼠體重每3天測(cè)一次。用游標(biāo)卡尺測(cè)量腫瘤長(zhǎng)徑a(mm)及相垂直的短徑b(mm)，并用公式V(mm3)=(aXb2)Xl/2計(jì)算體積。給藥過程中注意觀察小鼠有無體重下降、排稀便、拒食等現(xiàn)象并隨時(shí)記錄小鼠的異常情況。5)結(jié)果觀察與療效評(píng)價(jià)療程結(jié)束之次日，將各組裸鼠逐個(gè)稱體重，斷頸處死，解剖，逐只剝?nèi)∧[瘤，稱量瘤重，并檢查腫瘤有無壞死、感染，各個(gè)臟器有無異常等情況。，記算平均瘤重及腫瘤抑制率。腫瘤抑制率(％)=(對(duì)照組平均瘤重-實(shí)驗(yàn)組平均瘤重)/對(duì)照組平均瘤重X100%聯(lián)苯化合物(6-(2-(3-氯-4-氟-苯胺)-2-羰乙氧基)-5，5'-二甲氧基-6'-((2-(3-氯-4-氟-苯胺)-2，2'-二甲酰甲胺)抗腫瘤(裸鼠7721肝癌細(xì)胞)作用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果，如表l所示表1抗肝癌模型對(duì)照結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>表1的結(jié)果顯示，聯(lián)苯化合物對(duì)于構(gòu)建的肝癌小鼠體內(nèi)的腫瘤實(shí)體具有明顯的抑制作用，抑瘤率達(dá)到了41.46%52.20%，并且抑瘤效果表現(xiàn)為非劑量依賴。聯(lián)苯化合物(6-(2_(3-氯_4-氟-苯胺)-2-羰乙氧基)-5，5'_二甲氧基-6'-((2-(3-氯-4-氟-苯胺)-2，2'-二甲酰甲胺)抗腫瘤(裸鼠HT-29結(jié)腸癌細(xì)胞)作用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果，如表2所示表2抗結(jié)腸癌模型對(duì)照結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>表2的結(jié)果顯示，聯(lián)苯化合物對(duì)于構(gòu)建的結(jié)腸癌小鼠體內(nèi)的腫瘤實(shí)體具有明顯的抑制作用，抑瘤率達(dá)到了7.33%24.44%，而且大劑量的聯(lián)苯化合物的抑瘤率與陽性對(duì)照的吉非替尼效果相當(dāng)。結(jié)合上述聯(lián)苯化合物對(duì)體外腫瘤細(xì)胞系的抑制作用，以及聯(lián)苯化合物對(duì)體內(nèi)構(gòu)建的腫瘤模型的抑制效果，可以得出，本發(fā)明提供的聯(lián)苯化合物是一種能夠抑制腫瘤的化合物，可用于抗腫瘤藥物的制備。c、本發(fā)明所述的抗腫瘤的藥物的制備為所述的具有抗腫瘤活性的聯(lián)苯化合物或其藥物可接受的鹽、衍生物、前藥或立體異構(gòu)體，應(yīng)用于抗腫瘤的藥物的制備；或者具有抗腫瘤活性的聯(lián)苯化合物或其藥物可接受的鹽、衍生物、前藥或立體異構(gòu)體作為藥物組合物之一，結(jié)合藥物可接受的賦形劑或稀釋劑應(yīng)用于抗腫瘤的藥物的制備。應(yīng)用于抗腫瘤的藥物的制備時(shí)，通過制藥領(lǐng)域常用的手段可以制備成多種劑型，可以是口服劑型和注射劑，包括膠囊劑、片劑、顆粒劑、分散片、軟膠囊、注射液、注射用凍干粉或注射用無菌分裝粉。權(quán)利要求一種具有抗腫瘤活性的聯(lián)苯化合物，其特征在于，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式為其中，R1、R2為單取代、雙取代或三取代，取代基為氫、羥基、氨基、鹵素中的一種或幾種。FDA0000020368770000011.tif2.—種具有抗腫瘤活性的聯(lián)苯化合物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟1)異香草醛在鐵粉催化作用下，與液溴反應(yīng)得到2-溴代異香草醛；2)將2-溴代異香草醛通過芐基保護(hù)反應(yīng)，得到4_甲氧基-3-芐氧基-2-溴苯甲醛；3)在Wl為56條件下，用亞氯酸鈉和過氧化氫的二元氧化體系，將4-甲氧基-3-節(jié)氧基-2-溴苯甲醛氧化為4-甲氧基-3-芐氧基-2-溴苯甲酸；4)將4-甲氧基-3-芐氧基-2-溴苯甲酸通過酰化反應(yīng)生成4-甲氧基-3-芐氧基-2-溴苯甲酰氯，然后再與甲胺反應(yīng)得到4-甲氧基-3-芐氧基-2-溴苯甲酰甲胺；5)4-甲氧基-3-節(jié)氧基-2-溴苯甲酰甲胺通過Ullma皿反應(yīng)得到節(jié)基保護(hù)的聯(lián)苯雙酰胺化合物5，5'-二甲氧基-6，6'-二芐氧基聯(lián)苯-2，2'-二苯甲酰甲胺；6)5，5'-二甲氧基-6，6'-二節(jié)氧基聯(lián)苯_2，2'-二苯甲酰甲胺通過催化氫化脫去節(jié)基保護(hù)基，得到帶有兩個(gè)酚羥基的聯(lián)苯雙酰胺化合物5，5'-二甲氧基-6，6'-二羥基聯(lián)苯-2，2'-二苯甲酰甲胺；7)5，5'-二甲氧基-6，6'-二羥基聯(lián)苯_2，2'-二苯甲酰甲胺的l個(gè)酚羥基與氯乙酰取代苯胺的化合物通過醚化反應(yīng)，得到單羥基醚化的聯(lián)苯化合物；8)單羥基醚化的聯(lián)苯化合物的另一個(gè)羥基與氯乙酰取代苯胺的化合物通過醚化反應(yīng)，得到目標(biāo)化合物。3.如權(quán)利要求2所述的具有抗腫瘤活性的聯(lián)苯化合物的制備方法，其特征在于，所述的氯乙酰取代苯胺的化合物為氯乙酰鹵素取代苯胺、氯乙酰羥基取代苯胺或氯乙酰氨基取代苯胺的化合物。4.權(quán)利要求1所述的具有抗腫瘤活性的聯(lián)苯化合物應(yīng)用于抗腫瘤藥物的制備。5.如權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于，所述是應(yīng)用于抗結(jié)直腸癌、肺癌、肝癌、乳腺癌或胰腺癌藥物的制備。全文摘要本發(fā)明公開了一種具有抗腫瘤活性的聯(lián)苯化合物及其制備方法，該聯(lián)苯化合物在體外和體內(nèi)都表現(xiàn)出抗腫瘤活性，其在體外對(duì)結(jié)直腸癌、肺癌、肝癌、乳腺癌或胰腺癌細(xì)胞系具有誘導(dǎo)凋亡和抑制增殖作用，在體內(nèi)對(duì)肝癌和結(jié)直腸癌具有腫瘤抑制作用，能夠應(yīng)用于抗腫瘤藥物的制備。本發(fā)明提供的聯(lián)苯化合物的制備方法，具有原料來源易得，反應(yīng)條件溫和，反應(yīng)過程操作簡(jiǎn)單，所用試劑便宜易得的優(yōu)點(diǎn)。文檔編號(hào)A61P35/00GK101792401SQ201010137839公開日2010年8月4日申請(qǐng)日期2010年4月2日優(yōu)先權(quán)日2010年4月2日發(fā)明者盧聞,張彥民,張杰,李西玲,王嗣岑,王紅英,賀懷貞,賀浪沖申請(qǐng)人:西安交通大學(xué)