專利名稱：藥物化合物巴西蘇木紅素的新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及以蘇木為原料提取的巴西蘇木紅素的在醫(yī)藥方面的新用途，屬于中藥
技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
蘇木，為豆科植物蘇木Caesalpinia s即pan L.的干燥心材。分布于我國(guó)的廣西， 廣東，臺(tái)灣，貴州，云南，四川等地。全年可采。除去外皮及邊材，取心材，曬干。含有巴西蘇 木紅素(brazilein， brasilein)等成分。《本草綱目》記載蘇木具有"破血，排膿止痛"的功效。主治婦人血?dú)庑母雇?，消癰 腫撲損瘀血"，《中藥大辭典_上冊(cè)》記載蘇木具有"行血破瘀，消腫止痛"的功效。蘇木為 常用中藥，具有活血化瘀、消腫止痛的作用。臨床上常用于治療跌打損傷、血瘀腫痛等癥。
近年來(lái)的研究表明，蘇木中的活性化合物巴西蘇木紅素(C16H1205)具有改善心肌收 縮力(Study on cardioactive effect of Brazilein. Pharmacology, 2006， 76， 76-83)、保 護(hù)缺血再灌所弓l起的腦損傷(Brazilein protects the brain against focal cerebral ischemia r印erfusion injurycorrelating to inflammatory response suppression. European J of Pharmacology. 2007， 558， 88-95)、抗氧化(Antioxidant Activity In Vitro of Three Constituents from Caesalpinia sappan L TSINGHUA SCIENCE AND TECHNOLOGY, 2008， 13(4) :474-479)、降血壓(專利:ZL200710122084. 6)等藥理作用。但未 見(jiàn)有對(duì)5-HL受體作用的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供巴西蘇木紅素對(duì)阻斷5-羥色胺2亞型受體(5_HT2)的作用， 即提供化合物巴西蘇木紅素在醫(yī)藥方面的又一種新用途，該用途為 化合物巴西蘇木紅素在治療因5-羥色胺2亞型受體激動(dòng)所引起的病癥的藥物中 的應(yīng)用。 化合物巴西蘇木紅素在治療因血管平滑肌上的5-羥色胺2亞型受體激動(dòng)所引起 的腦供血不足的藥物中的應(yīng)用。 化合物巴西蘇木紅素在治療因血管平滑肌上的5-羥色胺2亞型受體激動(dòng)所引起 的心肌供血不足的藥物中的應(yīng)用。 化合物巴西蘇木紅素在治療因子宮平滑肌上的5-羥色胺2亞型受體激動(dòng)所引起 的痛經(jīng)的藥物的中應(yīng)用。 化合物巴西蘇木紅素在治療因大腸和小腸平滑肌上的5-羥色胺2亞型受體激動(dòng) 所引起的腸易激綜合征的藥物中的應(yīng)用。 化合物巴西蘇木紅素在治療因腦神經(jīng)元上的5-羥色胺2亞型受體激動(dòng)所引起的 焦慮的藥物中的應(yīng)用。 化合物巴西蘇木紅素在治療因外周神經(jīng)元上的5-羥色胺2亞型受體激動(dòng)所引起
3的疼痛的藥物中的應(yīng)用。 化合物巴西蘇木紅素在治療因淋巴細(xì)胞上的5-羥色胺2亞型受體激動(dòng)所引起的 免疫功能亢進(jìn)的藥物中的應(yīng)用。 本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，化合物巴西蘇木紅素具有明顯的阻斷5-羥色胺2亞型受 體(5-HT》的作用。以該化合物為活性成分，可以用來(lái)制備治療因5-HT2受體激動(dòng)所引起的 病癥，如各種類型的血管痙攣、頭痛、腦供血不足、冠心病心絞痛，胃腸平滑肌收縮功能紊亂 的腸易激綜合征，腦神經(jīng)元5-HT2受體興奮的煩躁焦慮，外周神經(jīng)元上的5-HT2受體激動(dòng)所 引起的疼痛，子宮平滑肌痙攣的痛經(jīng)，淋巴細(xì)胞5-HL受體激動(dòng)所引起的免疫功能亢進(jìn)等。


圖1為巴西蘇木紅素化學(xué)結(jié)構(gòu)式。 圖2為巴西蘇木紅素阻斷5_HT2受體激動(dòng)劑麥角新堿對(duì)血管收縮的作用。
圖3為巴西蘇木紅素阻斷5_HT2受體激動(dòng)劑麥角新堿對(duì)小鼠子宮的收縮幅度。
圖4為不同濃度的巴西蘇木紅素阻斷5_HT2受體激動(dòng)劑麥角新堿收縮子宮平滑肌 的活性。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1 、理化及波譜特征 本發(fā)明所用巴西蘇木紅素(英文名brazilein或brasilein ;) (C16H1205)的結(jié)構(gòu) 式如圖l。為紅棕色晶體(MeOH)，mp 260_265°C (dec.)。
TLC檢查紫外燈365nm下顯亮白色熒光。
EI-MSm/z :284(M+)。 IR(KBr)cm—1 :3400， 1705 (C = 0) ， 1670， 1600， 1520， 1410， 1390， 1100。
UV (MeOH) nm : 272 ， 445 ， 552 。 'H NMR(DMS0-d6) S :2.85，2H， s (H_7) ， 4. 01， 1H， d， J = 11. 5， 4. 47， 1H， d， J = 11. 5(H-6) ，6. 33， 1H， s(H_8) ，6. 36， 1H， d， J = 2. 0(H_4) ，6. 57， 1H， dd， J = 8. 5，2. 0(H_2)， 7. 11， 1H， s(H-ll) ，7. 81， 1H， d， J = 8. 5(H_1)。 13C NMR(DMS0-d6) S :72. 9 (C-6) ， 74. 2 (C-6a) ， 102. 8 (C-4) ， 104. 1 (C-11)， 110. 8 (C_la) ， 110. 8 (C_2) ， 117. 5 (C_8) ， 126. 0 (C_lla) ， 130. 5 (C_l) ， 151. 5 (C_12)， 152. 3 (C-10) ， 157. 7 (C_4a) ， 158. 9 (C_7a) ， 162. 2 (C_3) ， 179. 3 (C_9)。
實(shí)施例2、對(duì)血管平滑肌5_HT2受體的作用 本發(fā)明所用巴西蘇木紅素，批號(hào)070131，純度98% (HPLC標(biāo)定)。
將巴西蘇木紅素以匿SO溶解，以生理鹽水配制成所需濃度。實(shí)驗(yàn)所用動(dòng)物為 Wistar大鼠，雌雄兼用，清潔級(jí)，體重180 250g ;購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公 司，合格證號(hào)SCXK(京)2007-0001。 實(shí)驗(yàn)所用儀器有麥?zhǔn)显〔?25ml) (Kent Science Corporation, USA);肌肉張力 換能器(JZJ01型，30g)(成都儀器廠)；RM6240BD多通道生理信號(hào)采集處理系統(tǒng)(成都儀 器廠)；恒溫蠕動(dòng)泵(MODEL 210) (PolyScience， USA)。 實(shí)驗(yàn)所用試劑有麥角新堿(Ergometrine Maleate)，上海禾豐制藥有限公司生產(chǎn)。分離血管及灌流所用的Krebs緩沖液成分(mmol/L) :NaCl 118， KC1 4.7， CaCl2 1.5， MgS04 1. 2， NaHC0325，葡萄糖5. 5， KH2P04 1. 2， pH 7. 4。
實(shí)驗(yàn)具體步驟如下 離體血管環(huán)制備和血管平滑肌張力測(cè)定方法。取大鼠，禁食不禁水24小時(shí)，用 10%戊巴比妥鈉(lml/0. 1kg)麻醉后迅速剪開(kāi)胸腔分離胸主動(dòng)脈，在冷凍及95%02+5%0)2 飽和的克氏液里用眼科鑷除去血管上的脂肪及結(jié)締組織，剪成約4mm的血管環(huán)，固定在麥 氏浴槽里的拉鉤與固定鉤上，拉鉤連接量程為30g的張力換能器。麥?zhǔn)显〔劾锸浅掷m(xù)通混 合氣，20ml的Krebs液。浴槽外套與恒溫蠕動(dòng)泵連接，以37±0. 5。C循環(huán)水灌流溫育。張力 換能器接RM6240BD多通道生理信號(hào)采集處理儀，在電腦上觀察張力變化，將血管環(huán)張力調(diào) 節(jié)為lg，平衡約30分鐘；血管張力穩(wěn)定后，調(diào)節(jié)張力為2g，平衡30分鐘或以上，直到血管張 力平穩(wěn)，期間每15分鐘換Krebs液一次。用50mM KC1重復(fù)剌激血管環(huán)三次，以誘發(fā)血管環(huán) 的最大收縮幅度。待血管環(huán)重新穩(wěn)定后加入藥物，觀察血管收縮舒張引起的張力變化。以 KC1誘發(fā)最大收縮幅度為100X，藥物誘發(fā)血管收縮的幅度與KC1誘發(fā)最大收縮幅度之間的 比率為血管收縮率。 巴西蘇木紅素對(duì)麥角新堿預(yù)作用的影響。穩(wěn)定后的血管環(huán)加入ImM的麥角新堿， 待血管環(huán)收縮穩(wěn)定后，加入100 M巴西蘇木紅素，記錄30分鐘以上。并以ImM的麥角新堿 對(duì)血管環(huán)的作用為對(duì)照，考察5-HT受體對(duì)對(duì)巴西蘇木紅素舒張胸主動(dòng)脈血管平滑肌作用 的影響。 所得數(shù)據(jù)經(jīng)EXCEL軟件處理。SPSS10. 0軟件處理，方差分析，組間t檢驗(yàn)。
本實(shí)驗(yàn)所得結(jié)果如下 選用5_HT2受體激動(dòng)劑麥角新堿，并采用預(yù)先加入和后加入麥角新堿兩種加藥方 式進(jìn)行研究。結(jié)果顯示加入麥角新堿后，血管出現(xiàn)明顯的強(qiáng)收縮。預(yù)先加入麥角新堿并使 血管達(dá)到最大且平穩(wěn)的收縮狀態(tài)后，再加入巴西素木紅素作用30分鐘，血管張力沒(méi)有明顯 變化，收縮幅度與麥角新堿組相比無(wú)明顯差異。先加入巴西素木紅素30分鐘后，再加入麥 角新堿后，血管收縮幅度未見(jiàn)明顯增強(qiáng)，再加入KCL進(jìn)行剌激，血管張力明顯增加。巴西蘇 木紅素能夠有效阻斷麥角新堿對(duì)血管的收縮作用。如圖2所示，巴西蘇木紅素阻斷5-HT2 受體激動(dòng)劑麥角新堿對(duì)血管收縮的作用。KC1激活血管收縮濃度為50mM。三組(麥角新 堿對(duì)照組、巴西蘇木紅素先加入組和巴西蘇木紅素先后入組)結(jié)果比較。圖中數(shù)據(jù)為均值 ±標(biāo)準(zhǔn)偏差，各組均用3個(gè)動(dòng)脈條重復(fù)實(shí)驗(yàn)(n = 3) 。 *與麥角新堿組相比有顯著性差異， P < 0. 05。 本結(jié)果顯示，巴西蘇木紅素能作用于5_HT2受體而阻斷該受體激動(dòng)劑麥角新堿對(duì) 血管的張力。 實(shí)施例3、對(duì)子宮平滑肌5_HT2受體的作用 本發(fā)明所用巴西蘇木紅素，批號(hào)070131。將巴西蘇木紅素以匿SO溶解，以生理鹽 水配制成所需濃度。實(shí)驗(yàn)所用動(dòng)物為ICR小鼠，雌性，清潔級(jí)，體重18 22g，購(gòu)自北京維通 利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，合格證號(hào)SCXK(京)2007-0001。 實(shí)驗(yàn)所用儀器有麥?zhǔn)显〔?25ml) (Kent Science Corporation, USA);肌肉張力 換能器(JZJ01型，30g)(成都儀器廠)；RM6240BD多通道生理信號(hào)采集處理系統(tǒng)(成都儀 器廠)；恒溫蠕動(dòng)泵(MODEL 210) (PolyScience， USA)。
實(shí)驗(yàn)所用試劑有5-羥色胺(5-HT) (Sigma公司)、麥角新堿(上海禾豐制藥有限 公司)。分離血管及灌流所用的Krebs緩沖液成分(mmol/L) :NaCl 118， KC1 4. 7， CaCl2 1. 5， MgS04 1. 2， NaHC03 25，葡萄糖5. 5， KH2P04 1. 2， pH 7. 4。
本發(fā)明所用實(shí)驗(yàn)方法如下 小鼠離體子宮平滑肌張力測(cè)定方法。取雌性未孕小鼠，禁食不禁水24小時(shí)，頸椎 脫臼處死，卵巢與子宮分叉處之間的中段子宮，剪除周圍組織。子宮肌條一端分別用手術(shù)縫 線將肌條扎緊打結(jié)連于張力換能器，另一端打結(jié)后再結(jié)一個(gè)直徑約0. 5cm的環(huán)固定于浴槽 底部的玻璃彎鉤上，浴槽中裝入20ml恒溫(37°C )通氣(95% 02+5% C02)的Krebs液。肌 條給予lg的前負(fù)荷溫育，子宮平滑肌條溫育15 20分鐘后，待肌條的自發(fā)活動(dòng)平穩(wěn)后加 入所受試的藥物。記錄給藥前10分鐘，給藥后10分鐘的收縮波的頻率、平均振幅和張力。 其中張力以每次收縮最低點(diǎn)表示，強(qiáng)度幅度以每次收縮所達(dá)到的最高點(diǎn)表示。
巴西蘇木紅素對(duì)小鼠離體子宮平滑肌的作用。自律性收縮穩(wěn)定的子宮平滑肌記錄 IO分鐘的收縮波，加入不同濃度的巴西蘇木紅素(50iiM、100iiM和200iiM)，繼續(xù)記錄10 分鐘以上收縮波，觀察巴西蘇木紅素對(duì)小鼠離體子宮平滑肌的作用。 5-HT和麥角新堿對(duì)巴西蘇木紅素舒張血管作用。(1)自律性收縮穩(wěn)定的子宮平滑 肌，加入100iiM巴西蘇木紅素，記錄10分鐘后，分別加入5-HT(lmM)和麥角新堿(lmM)，繼 續(xù)記錄10分鐘以上的收縮波。(2)自律性收縮穩(wěn)定的子宮平滑肌，分別加入5-HT(lmM)和 麥角新堿(l慮)，記錄10分鐘后，加入100iiM巴西蘇木紅素，繼續(xù)記錄10分鐘以上的收縮 波。 不同濃度的巴西蘇木紅素對(duì)麥角新堿收縮子宮平滑肌活性的影響。自律性收縮穩(wěn) 定的子宮平滑肌，分別加入不同濃度的巴西蘇木紅素(50 ii M、 100 ii M和200 ii M)，記錄10分 鐘后，加入麥角新堿(lmM)，繼續(xù)記錄IO分鐘以上的收縮波。 所得數(shù)據(jù)經(jīng)EXCEL軟件處理。SPSS10. 0軟件處理，方差分析，組間t檢驗(yàn)。
本實(shí)驗(yàn)所得結(jié)果如下 不同濃度的巴西蘇木紅素(50 ii M、100 ii M和200 ii M)對(duì)子宮的收縮幅度和頻率無(wú) 明顯影響。 分別預(yù)先加入非選擇性5-HT受體激動(dòng)劑5-HT和5_HT2受體激動(dòng)劑麥角新堿，后 加入100i!M的巴西蘇木紅素均不能升高或降低子宮平滑肌的張力。而子宮平滑肌經(jīng)過(guò) 100 i！ M的巴西蘇木紅素作用后，分別后加入5-HT和麥角新堿，此時(shí)加入5-HT仍可增加子宮 平滑肌的張力，而加入麥角新堿并未增強(qiáng)子宮平滑肌張力，與麥角新堿組相比子宮平滑肌 張力顯著降低，與麥角新堿組相比子宮平滑肌頻率無(wú)明顯影響。圖3為巴西蘇木紅素阻斷 5-HT2受體激動(dòng)劑麥角新堿對(duì)小鼠子宮的收縮幅度，A:各組小鼠子宮收縮幅度的比較。與 對(duì)照組相比^P〈0.05。 B:各組小鼠子宮收縮頻率的比較。圖中數(shù)據(jù)為均值士標(biāo)準(zhǔn)偏差， 各組均用3個(gè)子宮條重復(fù)實(shí)驗(yàn)(n = 3)。 子宮平滑肌預(yù)先加入不同濃度的巴西蘇木紅素(50iiM、100iiM和200iiM)作用20 分鐘后，加入麥角新堿，結(jié)果顯示100 ii M和200 ii M的巴西蘇木紅素能明顯阻斷麥角新堿所 引起的子宮平滑肌張力增加。圖4為不同濃度的巴西蘇木紅素阻斷5-HT2受體激動(dòng)劑麥角 新堿收縮子宮平滑肌的活性。圖中數(shù)據(jù)為均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差，各組均用3個(gè)子宮條重復(fù)實(shí)驗(yàn) (n = 3) 。 *與對(duì)照組(生理鹽水)相比，P < 0. 05。
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本結(jié)果顯示巴西蘇木紅素能夠明顯阻斷麥角新堿對(duì)血管和子宮平滑肌的收縮效 應(yīng)；但不能阻斷5-HT對(duì)血管及子宮平滑肌的收縮效應(yīng)。由于麥角新堿為5-HL受體激動(dòng)劑， 因此可知巴西蘇木紅素通過(guò)阻斷5-HT2受體而起發(fā)揮效應(yīng)。又5-HT為5-HT受體的配體， 對(duì)所有5-HT受體亞型均有激動(dòng)作用，巴西蘇木紅素不能夠有效阻斷5-HT對(duì)血管和子宮平 滑肌的作用，證明了巴西蘇木紅素作用于5-HT2受體的特異性。
權(quán)利要求
化合物巴西蘇木紅素在治療因5-羥色胺2亞型受體激動(dòng)所引起的病癥的藥物中的應(yīng)用。
2. 如權(quán)利要求1所述化合物巴西蘇木紅素在治療因血管平滑肌上的5-羥色胺2亞型 受體激動(dòng)所引起的腦供血不足的藥物中的應(yīng)用。
3. 如權(quán)利要求1所述化合物巴西蘇木紅素在治療因血管平滑肌上的5-羥色胺2亞型 受體激動(dòng)所引起的心肌供血不足的藥物中的應(yīng)用。
4. 如權(quán)利要求1所述化合物巴西蘇木紅素在治療因子宮平滑肌上的5-羥色胺2亞型 受體激動(dòng)所引起的痛經(jīng)的藥物的中應(yīng)用。
5. 如權(quán)利要求1所述化合物巴西蘇木紅素在治療因大腸和小腸平滑肌上的5-羥色胺 2亞型受體激動(dòng)所引起的腸易激綜合征的藥物中的應(yīng)用。
6. 如權(quán)利要求1所述化合物巴西蘇木紅素在治療因腦神經(jīng)元上的5-羥色胺2亞型受 體激動(dòng)所引起的焦慮的藥物中的應(yīng)用。
7. 如權(quán)利要求1所述化合物巴西蘇木紅素在治療因外周神經(jīng)元上的5-羥色胺2亞型 受體激動(dòng)所引起的疼痛的藥物中的應(yīng)用。
8. 如權(quán)利要求1所述化合物巴西蘇木紅素在治療因淋巴細(xì)胞上的5-羥色胺2亞型受 體激動(dòng)所引起的免疫功能亢進(jìn)的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
藥物化合物巴西蘇木紅素的新用途，屬于中藥技術(shù)領(lǐng)域。經(jīng)體外試驗(yàn)證明，化合物巴西蘇木紅素具有明顯的阻斷5-羥色胺2亞型受體(5-HT2)的作用。以該化合物為活性成分，可以用來(lái)制備治療因5-HT2受體激動(dòng)所引起的病癥，如各種類型的血管痙攣、頭痛、腦供血不足、冠心病心絞痛，胃腸平滑肌收縮功能紊亂的腸易激綜合征，腦神經(jīng)元5-HT2受體興奮的煩躁焦慮，外周神經(jīng)元上的5-HT2受體激動(dòng)所引起的疼痛，子宮平滑肌痙攣的痛經(jīng)，淋巴細(xì)胞5-HT2受體激動(dòng)所引起的免疫功能亢進(jìn)等。
文檔編號(hào)A61P1/00GK101773493SQ20101011181
公開(kāi)日2010年7月14日 申請(qǐng)日期2010年2月11日 優(yōu)先權(quán)日2010年2月11日
發(fā)明者李伯男, 李慧穎, 杜力軍, 王玉剛, 王秀坤, 胡珺, 邢東明, 雷帆 申請(qǐng)人:清華大學(xué)