專利名稱：：一種藥物組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明提供了一種藥物組合物及其制備方法及在心腦血管疾病的應用，屬于生物醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
。
背景技術(shù)：
：復方血栓通是以三七、黃芪、丹參、玄參四味藥材為原料藥，經(jīng)過提取制得浸膏，然后與藥用輔料混合制成的藥物，用來治療活血化瘀，益氣養(yǎng)陰。用于治療血瘀兼氣陰兩虛證的視網(wǎng)膜靜脈阻塞，癥見視力下降或視覺異常，眼底瘀血征象，神疲乏力、咽干、口干等癥。三七的活性成分主要為三七總皂苷，功能主要為活血去瘀，通脈活絡(luò)，擴張血管，改善血液，抑制血小板聚集，增加腦血流量，用于中風偏癱，腦梗塞，腦血管病后遺癥，內(nèi)眼病，視網(wǎng)膜中央靜脈阻塞，眼前房出血等。黃芪的活性成分主要為黃芪皂苷、黃酮及多糖，皂苷主要為黃芪甲苷為主，其主要用于氣虛乏力、中氣下陷、氣虛水腫等癥狀。玄參的主要成分為玄參苷與環(huán)烯醚萜類化合物，其功效主要有涼血滋陰、瀉火解毒的作用。丹參的主要成分分為脂溶性成分及水溶性成分；大量的藥理和臨床研究結(jié)果證明水溶性成分的活性高于脂溶性成分。丹參總多酚酸是中藥材丹參中的水溶性成分，主要成分為丹酚酸、原兒茶醛、原兒茶酸、丹參素、咖啡酸、迷迭香酸等。丹參多酚酸具有顯著的抗心肌缺血作用，可降低心臟耗氧量，并能對抗誘導的血小板聚集和抑制血栓的形成。臨床試驗研究表明，丹參多酚酸對于冠心病、心絞痛，療效顯著、確切，病人使用安全。以該四種藥材作為主要活性成分的復方血栓通膠囊收載于新藥轉(zhuǎn)正標準27冊(WS3-211(z-030)-2000(z))中。中國專利申請?zhí)?2103920.8公開了復方血栓通滴丸的制備方法，申請?zhí)?2121219.8公開了復方血栓通軟膠囊的制備方法，這兩個專利的方法都是將三七采用乙醇浸滯提取，其余三味藥材乙醇加熱回流提取，然后將兩種提取物進行混合均勻后，制成相應的制劑。該方法采用乙醇來浸滯提取，需要大量的溶劑，提取效率較低，周期也較長。中國專利申請?zhí)?2149700.1中公開了復方血栓通的口服制劑及其制備方法，該方法是將三七采用乙醇超聲提取得到提取物，其余三味藥材采用乙醇加熱回流得到提取物，然后將兩種提取物混合均勻后，與適量的藥用輔料制得合適的口服劑型；以上方法在提取丹參時均未采用氮氣保護，很容易導致丹參酚酸氧化，導致有效成分降低。丹參的水溶性成分以丹參酚酸為主，其中丹參酚酸B(salvianolicacidB，SAB)的含量最高(約占總丹參酚酸的70%)、活性最強，隨著加熱時間的延長，丹酚酸B等大分子物質(zhì)水解為丹參素，造成提取時間越長，丹酚酸B的含量越少。而且這些方法均是將提取物直接與輔料制成制劑，而沒有得到藥材的有效部位，降低了療效，增加了藥物的副作用。為了克服以上現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，本發(fā)明人經(jīng)過多次試驗，得到以藥材的有效部位為主要成分，并與文獻報道的提取物進行了藥理學試驗比較，證明本發(fā)明的藥物組成，能夠更有效的降低心肌缺血犬心率、升高收縮壓、舒張壓。通過研究更明確了有效成分并減少了不必要的無效成分，因此更容易控制藥品質(zhì)量，而且作用機理明確，制劑穩(wěn)定性和均一性好，產(chǎn)品質(zhì)量可控。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供一種以復方血栓通有效部位為主要成分，加以適量的藥用輔料制成合適的制劑。本發(fā)明人經(jīng)過多次正交提取試驗和動物的藥理學試驗等艱苦努力，終于獲得了以藥材的有效部位為主要成分，并在此基礎(chǔ)上通過進一步研究，獲得了一種藥效好，見效快，生物利用度高，毒副作用小的藥物。本發(fā)明的解決方案是提供一種藥物組合物，該組合物是以三七25份，黃芪8份，玄參8份，丹參5份為原料藥制備的，所述藥物組合物，其中含有從上述四種中藥中提取的總黃酮類提取物，總皂苷類提取物和總多酚酸類提取物，三種提取物的重量比例為1-5:1-5:1，其中總黃酮提取物中含總黃酮80%以上；總皂苷類提取物中含總皂苷70%以上；總多酚酸類提取物中含總多酚酸85%以上，三者含總黃酮、總皂苷與總多酚之合在80%以上，三種提取物是用本發(fā)明的方法制備的。所述百分比例均為重量百分比。優(yōu)選的，本發(fā)明的組合物含有總黃酮類提取物，總皂苷類提取物和總多酚酸類提取物，三者比例為l-i.5:3-5:i。更優(yōu)選的三者比例為i.2:4.4:i。本發(fā)明的藥物組合物，其中所述的總黃酮類提取物，總皂苷類提取物和總多酚酸類提取物，可以按照以下步驟提取(1)三七，黃芪，玄參藥材乙醇加熱回流提?。惶崛∫夯厥找掖贾翢o醇味，加水沉淀，靜置過夜，過濾，濾液濃縮；(2)將濃縮濾液過大孔樹脂，先以水洗脫，再以20%乙醇洗脫，20%乙醇洗脫液濃縮，干燥得到總黃酮類提取物；然后再以70%乙醇洗脫，收集洗脫液，干燥得到總皂苷類提取物；(3)將丹參水提，提取液濃縮，加乙醇醇沉，靜置過夜，過濾，回收乙醇至無醇味，濃縮；(4)將丹參濃縮液過大孔樹脂，先以水洗脫，再以乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，濃縮干燥得總多酚酸類提取物；優(yōu)選的步驟(1)中乙醇的濃度為70-95%，步驟(4)中乙醇的濃度為50-95%。步驟(1)中提取次數(shù)為1-3次，步驟(3)中提取次數(shù)為1-3次。將上述三種提取物混合即得本發(fā)明的藥物組合物的活性成分，將該活性成分和藥物可接受的載體混合，按制劑學常規(guī)技術(shù)可制成藥物制劑組合物。本發(fā)明的藥物組合物，其特征在于，具有活血化瘀、益氣養(yǎng)陰之功效，用于治療血瘀兼氣陰兩虛證的視網(wǎng)膜靜脈阻塞，癥見視力下降或視覺異常，眼底瘀血征象，神疲乏力，咽干，口干等癥；用于治療血瘀兼氣陰兩虛的穩(wěn)定性勞累型心絞痛，癥見胸悶痛、心悸、心慌、氣短乏力、心煩口干者。本發(fā)明的藥物組合物，是任何可藥用劑型。這些劑型包括滴丸劑、片劑、膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓劑、軟膏劑、硬膏劑、霜劑、噴霧劑、滴劑、貼劑。本發(fā)明的制劑，優(yōu)選的是口服劑型，更優(yōu)選是滴丸劑型。本發(fā)明優(yōu)選的滴丸劑型。是將藥物活性成分加入聚乙二醇，加熱至809(TC，滴入到溫度為l(TC以下的液體石蠟中，制成滴丸。本發(fā)明的藥物組合物優(yōu)選按照以下步驟制備(1)將四味藥材粉碎，過12目篩，三七，黃芪，玄參藥材混合后分別以8倍量、6倍量的75%乙醇加熱回流提取兩次，合并濾液；回收乙醇至無醇味，加水沉淀，靜置過夜，過濾，濾液濃縮至含生藥量lg/ml;(2)將該提取液過大孔樹脂，先以水洗脫，水洗至無molish反應，停止洗脫，洗脫液棄去，再以20%乙醇洗脫，洗脫液得到主要含有黃酮類提取液，濃縮，噴霧干燥得到總黃酮類提取物；然后以70%乙醇洗脫，收集洗脫液，得到主要含有總皂苷類提取液，噴霧干燥得到總皂苷類提取物；(3)將丹參分別以8倍量、6倍量的水在氮氣保護下6(TC提取兩次，過濾，合并濾液，濃縮至密度1.11.2，加乙醇醇沉至醇度達50%，靜置過夜，過濾，回收乙醇至無醇味，濃縮至濃度含生藥量lg/ml;(4)將丹參提取液過大孔樹脂，先以水洗脫，至無molish反應，停止洗脫，棄去洗脫液，再以60%乙醇洗脫，至三氯化鐵鐵氰化鉀試劑不變藍，停止收集，收集洗脫液，濃縮噴霧干燥得總多酚酸類提取物；(5)將上述三種提取物按照1-2:1-5:l混合均勻，作為藥物活性成分，根據(jù)需要，加入藥物可接受的載體，制備成藥物組合物。Molish反應對本領(lǐng)域的技術(shù)人員是個很熟知的常識，它是鑒別糖的一個反應。采用a-萘酚與糖醛及衍生物反應生成紫色化合物這一現(xiàn)象來鑒別糖的存在。本發(fā)明在過大孔樹脂時先采用水洗去多糖，Molish反應呈陰性證明洗脫液里不再含有多糖?？傸S酮、總皂苷、總多酚的分析測定對本領(lǐng)域的技術(shù)人員來講是個非常熟悉的方法，一般采用紫外分光光度法，以對照品的濃度為x軸，以對照品的吸收度或者峰面積為y軸，制定出相應的標準曲線。根據(jù)標準曲線，算出相應總黃酮、總皂苷、總多酚的量。本發(fā)明測定總黃酮采用以蘆丁為對照，在500nm處測定總黃酮的量；測定總皂苷采用黃芪甲苷為對照，在580nm處測定總皂苷的量；測定總多酚采用原兒茶醛為對照，在750nm處測定總多酚的含量。在具體實施例1中本發(fā)明人按照本說明書提供的方法進行提取得到復方血栓通提取物也就是本說明書中所說的復方血栓通總皂苷+總黃酮+總多酚提取物，經(jīng)分析測定含有有效部位包括總皂苷、總黃酮與總多酚的含量在83.8%。按照中國專利申請?zhí)?2103920.8的方法進行了制備得到復方血栓通浸膏，并經(jīng)分析測定，該浸膏粉里含總黃酮8.42%，總皂苷18.7%，總多酚6.2%，有效成分33.3%。在具體實施例2中，本發(fā)明人以復方血栓通總黃酮提取物、復方血栓通總皂苷+總黃酮提取物、復方血栓通總皂苷+總黃酮+總多酚提取物，以及按照中國專利申請?zhí)?2103920.8的方法進行了制備得到復方血栓通浸膏分別進行了一系列藥理學試驗，試驗證明實驗結(jié)果表明各劑量組對大鼠體外血栓形成的濕重有明顯的減輕作用(P<0.05，P<0.01)，試藥組可明顯抑制大鼠血栓形成，減輕血栓濕重，具有明顯的溶血栓作用。給藥前后可明顯降低家兔血小板聚集率(PAgVmaX%)和聚集時間(PAgTmaX%)(P<0.05，P<0.01)，說明有明顯的降低家血小板聚集性的作用。對大鼠急性心肌缺血具有一定的抑制作用。給藥組動物的CPK、AST、LDH-L有所降低，心肌梗死范圍明顯縮小、心率減慢、ST段及T波高與模型組比較統(tǒng)計學檢查有顯著差異(P6<0.01)。提示對大鼠急性心肌缺血具有改善心肌酶譜、保護心肌降低損傷的作用。觀察了經(jīng)十二指腸給藥后對心肌缺血犬血流動力學的影響，并與陽性藥復方丹參滴丸進行比較。結(jié)果顯示能夠使心肌缺血犬心率降低，升高收縮壓、舒張壓(復方血栓通總皂苷+總黃酮組不升高)和平均壓，以及升高左室內(nèi)壓和左室內(nèi)壓變化最大速率dP/dtmax。復方血栓通總皂苷+總黃酮+總多酚組作用強度更強及時程更長，而復方血栓通浸膏粉和復方血栓通總黃酮組對上述指標未顯現(xiàn)影響。本發(fā)明的藥物組合物將藥材的有效部位皂甙類與酚酸類組合在一起，該方法與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有以下特點1)工藝的優(yōu)化，采用了氮氣保護提取丹參水溶性丹參總多酚，使有效成分含量升高；突破了以往的直接采用乙醇提取得到提取物的方法，由于采用藥材的有效部位作為藥物的主成分，能最大限度的發(fā)揮藥物的作用，降低藥物的副作用，提高了藥物的生物利用度。2)由于明確了藥材的有效部位，提高了藥品的質(zhì)量，提高了療效。3)采用滴丸作為本發(fā)明的劑型，設(shè)備簡單、操作方便、工藝條件易于控制，質(zhì)量穩(wěn)定，劑量準確，受熱時間短，易氧化的藥物溶于基質(zhì)后，可增加其穩(wěn)定。為了便于理解，以下將通過具體實施例對本發(fā)明進行描述。需要特別指出的是，這些描述僅僅是示例性的描述，并不構(gòu)成對本發(fā)明范圍的限制。依據(jù)本說明書的論述，本發(fā)明的許多變化、改變對所屬領(lǐng)域技術(shù)人員來講都是顯而易見的了。具體實施例方式實施例1本發(fā)明復方血栓通有效部位的提取及組合物的制備將三七2000g、黃芪640g、玄參640g、丹參400g四味藥材粉碎，過12目篩，前三味藥材混合后分別以25L、20L的75%乙醇加熱回流提取兩次，第一次2小時，第二次1小時，合并濾液；回收乙醇至無醇味，加水沉淀，靜置過夜，過濾，濾液濃縮至含生藥量lg/ml。將該提取液過大孔樹脂層析柱(010*100)，先以20L的水洗脫，至無molish反應，停止洗脫，洗脫液棄去，再以15L的20%乙醇洗脫，洗脫液得到主要含有黃酮類提取液，濃縮，噴霧干燥得到總黃酮類提取物32g;然后以20L的70%乙醇洗脫，收集洗脫液，得到主要含有總皂苷類提取液，噴霧干燥粉碎得到總皂苷類提取物118g;將400g丹參分別以3200ml、2400ml的水在氮氣6(TC提取兩次，第一次2小時，第一次1小時。過濾，合并濾液，濃縮至密度1.11.2，加乙醇醇沉至醇度達50%，靜置過夜，過濾，回收乙醇至無醇濃縮至濃度含生藥量lg/ml。將丹參提取液過大孔樹脂層析柱(010*80)，先以20L的水洗脫，至無molish反應，停止洗脫，棄去洗脫液，再以約25L的60%乙醇洗脫，至三氯化鐵鐵氰化鉀試劑不變藍，停止收集，收集洗脫液，濃縮噴霧干燥得總多酚酸類提取物26.8g。經(jīng)分析測定總黃酮提取物中含有總黃酮87.5%，總皂苷提取物中含總皂苷82.3%，總多酚提取物中含總多酚86.4%。將上述三種提取物按照1.2:4.4:l重量比例混合均勻，作為藥物活性成分，根據(jù)需要，加入藥物可接受的載體，制備成滴丸。實施例2本發(fā)明復方血栓通有效部位的提取及組合物的制備(1)將三七2000g、黃芪640g、玄參640g、丹參400g四味藥材粉碎，過12目篩，三七，黃芪，玄參藥材混合后分別以8倍量、6倍量的70%乙醇加熱回流提取兩次，合并濾液；回收乙醇至無醇味，加水沉淀，靜置過夜，過濾，濾液濃縮至含生藥量lg/ml;(2)將該提取液過大孔樹脂，先以水洗脫，水洗至無molish反應，停止洗脫，洗脫液棄去，再以20%乙醇洗脫，洗脫液得到主要含有黃酮類提取液，濃縮，噴霧干燥得到總黃酮類提取物；然后以70%乙醇洗脫，收集洗脫液，得到主要含有總皂苷類提取液，噴霧干燥得到總皂苷類提取物；(3)將丹參分別以8倍量、6倍量的水在氮氣保護下6(TC提取兩次，過濾，合并濾液，濃縮至密度1.11.2，加乙醇醇沉至醇度達50%，靜置過夜，過濾，回收乙醇至無醇味，濃縮至濃度含生藥量lg/ml;(4)將丹參提取液過大孔樹脂，先以水洗脫，至無molish反應，停止洗脫，棄去洗脫液，再以50%乙醇洗脫，至三氯化鐵鐵氰化鉀試劑不變藍，停止收集，收集洗脫液，濃縮噴霧干燥得總多酚酸類提取物；(5)將上述三種提取物按照1:1:1的重量比例混合均勻，作為藥物活性成分，根據(jù)需要，加入藥物可接受的載體，制備成片劑。實施例3本發(fā)明復方血栓通有效部位的提取及組合物的制備(1)將三七2000g、黃芪640g、玄參640g、丹參400g四味藥材粉碎，過12目篩，三七，黃芪，玄參藥材混合后分別以8倍量、6倍量的95%乙醇加熱回流提取兩次，合并濾液；回收乙醇至無醇味，加水沉淀，靜置過夜，過濾，濾液濃縮至含生藥量lg/ml;(2)將該提取液過大孔樹脂，先以水洗脫，水洗至無molish反應，停止洗脫，洗脫液棄去，再以20%乙醇洗脫，洗脫液得到主要含有黃酮類提取液，濃縮，噴霧干燥得到總黃酮類提取物；然后以70%乙醇洗脫，收集洗脫液，得到主要含有總皂苷類提取液，噴霧干燥得到總皂苷類提取物；(3)將丹參分別以8倍量、6倍量的水在氮氣保護下6(TC提取兩次，過濾，合并濾液，濃縮至密度1.11.2，加乙醇醇沉至醇度達50%，靜置過夜，過濾，回收乙醇至無醇味，濃縮至濃度含生藥量lg/ml;(4)將丹參提取液過大孔樹脂，先以水洗脫，至無molish反應，停止洗脫，棄去洗脫液，再以95%乙醇洗脫，至三氯化鐵鐵氰化鉀試劑不變藍，停止收集，收集洗脫液，濃縮噴霧干燥得總多酚酸類提取物；(5)將上述三種提取物以2:5:l重量比例混合均勻，作為藥物活性成分，根據(jù)需要，加入藥物可接受的載體，制備成膠囊。實施例4組合物的制備將總黃酮類提取物，總皂苷類提取物和總多酚酸類提取物三種提取物以1.5:3:i重量比例混合均勻，作為藥物活性成分，根據(jù)需要，加入藥物可接受的載體，制備成丸劑。實施例5組合物的制備將總黃酮類提取物，總皂苷類提取物和總多酚酸類提取物三種提取物以i:5:i重量比例混合均勻，作為藥物活性成分，根據(jù)需要，加入藥物可接受的載體，制備成口服液。實施例6組合物的制備將總黃酮類提取物，總皂苷類提取物和總多酚酸類提取物三種提取物以1.5:3:i重量比例混合均勻，作為藥物活性成分，根據(jù)需要，加入藥物可接受的載體，制備成注射劑。實施例7藥效學試驗取總黃酮提取物8g+總皂苷提取物29.5g混合均勻作為復方血栓通總黃酮+總皂苷組(有效成分83.4%);取總黃酮提取物16g+總皂苷提取物59g+總多酚提取物13.4g作為復方血栓通總黃酮+總皂苷+總多酚組(有效成分83.8%);總黃酮提取物作為復方血栓通總黃酮組(有效成分87.5%)。對照品按照中國專利申請?zhí)?2103920.8中的制備方法提取的對照品將三七2000g、黃芪640g、玄參640g、丹參400g四味藥材中的三七粉碎，過12目篩，以10L的50%乙醇浸滯兩次，第一次5天，第二天10天，濾過，合并濾液，回收乙醇，濃縮成稠膏，烘干，得到180.4g，粉碎成細粉；其余黃芪等三味以10L、8L的50%乙醇加熱回流提取兩次，第一次3小時，第二次2小時，濾過，合并濾液，回收乙醇，噴霧干燥得到234.6g，將這兩種提取物混合均勻，作為復方血栓通浸膏粉。經(jīng)分析測定該浸膏含有總黃酮8.42%，總皂苷18.7%，總多酚6.2%，總有效成分33.3%。1.試驗材料受試藥物復方血栓通總皂苷+總黃酮組，復方血栓通浸膏粉，本發(fā)明實施例1方法制備的復方血栓通總皂苷+總黃酮+總多酚組復方血栓通總黃酮組陽性藥復方丹參片0.3g/片廣州白云山中藥廠，地奧心血康膠囊0.3g/粒多貝斯膠囊0.5g/粒復方丹參滴丸27m/g丸1.2動物種屬、品系、來源、合格證SD品系大白鼠早$各半，體重190成都地奧制藥集團有限公司西安利君制藥股份有限公司天津天士力制藥股份有限公司240g;質(zhì)量合格證陜醫(yī)動證字08-005號<新西蘭品系大白兔體重1.82.2kg，早d兼用；質(zhì)量合格證陜醫(yī)動證字08-018健康家犬體重1215kg，早$各半。均由西安交通大學醫(yī)學院實驗動物中心提供。實驗室溫度1826°C，相對溫度4555%。[(Km](—)、對大鼠動靜脈血栓的影響取健康的SD大鼠36只，早$兼用，體重180220g，，適應實驗室環(huán)境7天后稱重，編號，隨機均衡分為6組，每組6只。①.對照組(正常動物組)；②.多貝斯膠囊組(250mg/kg);③.復方血栓通總皂苷+總黃酮+總多酚組(200mg/kg);.復方血栓通總皂苷、+總黃酮組(200mg/kg);⑤.復方血栓通浸膏粉組(200mg/kg);⑥復方血栓通總黃酮組；以上動物灌胃給藥，每天一次，連續(xù)3天，末次給藥30分鐘后，用3%戊巴比妥鈉lml/kg腹腔注射麻醉后仰臥固定在大鼠手術(shù)臺上，分離右頸總動脈及左頸外靜脈，用事先備好的聚乙稀插管(聚烯管內(nèi)徑lmm，長5cm，內(nèi)徑2mm，長8cm，在三段管中放入一根5cm長的4號手術(shù)線，用50ii/ml肝素生理鹽水溶液充滿聚乙烯管后夾住管壁)，當管的一端插入左頸外靜脈后，將管的另一端插入右頸總動脈，手術(shù)后5min開放血流，開放血流15min后中斷血流迅速取出絲線稱血栓濕重(全重_線重=血栓濕重)。9<formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula>各給藥組與生理鹽水組比較，組間T檢驗處理。結(jié)果見表1表1.對大鼠動靜脈血栓形成的影響G±S，n=6)<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>*表示各給藥組與對照組比較*P<0.05**P<0.01試驗結(jié)果表明各劑量組對大鼠體外血栓形成的濕重有明顯的減輕作用，結(jié)果與多貝斯膠囊組相似(P<0.05，P<0.01)，上述試藥組可明顯抑制大鼠血栓形成，減輕血栓濕重，具有明顯的溶血栓作用。(二)、對家兔血小板聚集性的影響取健康的新西蘭品系家兔36只，體重1.82.2kg，早$兼用隨機分為6組，每組6只，①對照組(正常模型組)；②多貝斯膠囊組(190mg/kg);③復方血栓通總皂苷+總黃酮+總多酚組(140mg/kg);復方血栓通總皂苷組+總黃酮組(140mg/kg);⑤復方血栓通浸膏粉組(140mg/kg);⑥復方血栓通總黃酮組。以上動物試驗前12h禁食不禁水，在無菌條件下心臟取血5ml，加入含3.8%枸櫞酸鈉抗凝劑試管中(比例l:9)輕輕混勻，在600轉(zhuǎn)離心10min吸取上清液備用，此為PRP，再以3000轉(zhuǎn)離心10min，此為PPP，用PPP調(diào)零，再于PRP中按l:IO加入ADP試劑(終濃度為2iimol/L)。測定給藥前血小板聚集性正常值后連續(xù)灌胃給藥3天，容量2ml/kg，于末次給藥40min后按以上方法測給藥后各組血小板聚集性。給藥前后自身比較，T檢驗處理。結(jié)果見表2表2.對家兔血小板聚集性的作用(；士S，n=6)組別劑量(mg/kg)PAgTmax%PAgVmax%給藥前給藥后給藥前給藥后對照組多貝斯膠囊組復方l(IL栓通總皂苷+總黃酮+總多酚組復方血栓通總皂苷+總黃酮組復方血栓通浸膏粉組190140140140140復方血栓通總黃酮組各組給藥前后自身比較140.00±28.36139.13±11.9526.10±3.3925.33±4.66145.00±12.40132.75±14.16**29.44±2.8722.98±2.66**142.88士20.51138.13±16.47**28.58±6.2721.74±2.73**142.13±20.07140.25±20.5527.33±5.1822.06±3.22*145.88±18.57137.63±11.7726.95±2.7224.39±2.45*138.38±16.45133,13±11.2328.55±4.5825.36±2.15P<0.05P<0.01試驗結(jié)果表明復方血栓通總皂苷+總黃酮+多酚類組給藥前后可明顯降低家兔血小板聚集率(PAgVmaX%)和聚集時間(PAgTmaX%)，試驗結(jié)果同多貝斯膠囊組相似(P<0.05，P<0.01)，說明有明顯的降低家血小板聚集性的作用。(三)、對心肌缺血大鼠的作用1.對冠脈阻斷致心肌缺血大鼠酶譜、梗死范圍及ECG的影響領(lǐng)取健康SD品系大鼠42只，早$各半，體重190240g，稱重、編號，隨機分為7組，每組6只，①假手術(shù)組；②模型組；③地奧心血康組(100mg/kg);模型+復方血栓通總皂苷+多酚類組(200mg/kg);⑤模型+復方血栓通總皂苷+總黃酮組(200mg/kg);⑥模型+復方血栓通浸膏粉組(200mg/kg);⑦模型+復方血栓通總黃酮組。試驗時，將大鼠用乙醚麻醉，仰位固定，記錄正常心電圖(n導聯(lián)，標準電壓，紙速50mm/s)后，在無菌條件下切開左胸部皮膚，于第四肋間隙鈍性分離肌肉，輕壓右胸，擠出心臟，于肺動脈園錐與左心耳之間，距前降枝根部l2mm處結(jié)扎冠脈前降枝?；貜托呐K，擠凈殘氣，封閉胸腔?？p合傷口，用76萬u青霉素預防感染。假手術(shù)組動物的手術(shù)全過程相同，穿線不結(jié)扎冠脈。手術(shù)后次日開始灌胃給藥，每日l次，連續(xù)l周。假手術(shù)組和模型對照組灌胃給予等容量生理鹽水1.0ml/100g，未次給藥后4h，用乙醚麻醉動物，腹主動脈采血，用日立7170型全自動生化分析儀以動態(tài)法測定血清CK、LDH-L和AST水平。然后開胸，取出心臟，擠凈殘血，剪去周圍大血管及心房，稱濕重，自心尖部切成均勻厚度5片，置0.25XNBT(甲硝基四氮唑藍)溶液中，37t:水浴10min染色。切下未染區(qū)稱濕重，計算心臟梗死區(qū)占全心室重量的百分比。試驗結(jié)果如表35。表3.對結(jié)扎冠脈大鼠心肌酶譜的影響G士S，n=6)組另U劑量(mg/kg)AST(u/L)CPK(u/L)LDH丄(u/L)假手術(shù)組147.1±7.5595,0±33.4412.5±57,2模型組244.7±44.1AA1241.8±259.4AA888.5±26.6AA地奧心血康組100180.2士18.7"859.9±72.41**783.5±127.8*復方血栓通總皂苷+總黃酮+總多200168.2±14.2**785.8士217.9峙573.2士90.8"酚組復方血栓通總皂苷+總黃酮組200197.2±41.2817.7±220.2**769.4±69.4**復方血栓通浸膏粉組200228.9±37.81052.4±189.1805.7士84.3"復方血栓通總黃酮組200233.6±87.31189.8±187.6832肚43.2"*表示各給藥組與模型組比較*P<0.05**P<0.01A表示模型組與假手術(shù)組比較Ap〈0.05AAP<0.01表4.對結(jié)扎冠脈大鼠心肌梗死范圍的影響G±S，n=6)組另IJ劑量(mg/kg)全心室重(g)梗死區(qū)重(g)梗死.(%)假手術(shù)組1.12±0.090—模型組1.15±0.190.34±0.0728,3±4.1地奧心血康組1001.03±0.100.13±0.0512.5±2,1**復方血栓通總皂苷+總黃酮+總2001.33±0.160.12±0.049.10±1.6**多酚組復方血栓通總皂苷+總黃酮組2001.02±0.150.17±0,0816.4±2.2**復方血栓通浸膏粉組2001.02±0.080.20±0.0619.7±2.5**復方血栓通總黃酮組2001.05±0.060.23±0.0822.2±3.2***表示各給藥組與模型組比較*P<0.05**P<0.01表5.對結(jié)扎冠脈大鼠急性心肌缺血心率變化的影響(；士S，n=6)組別劑量(mg/kg)結(jié)扎后心率次/minT波ST段(mV)假手術(shù)組210±170.20±0.030.19±0.02模型組245土20厶厶0.38±0.02AA0.38±0.02厶厶地奧心血康組100195±21**0.19±0.03**0.16±0.03**復方血栓通總皂苷+總黃酮-^200200±15**0.18士0.02峙0.18±0.02**總多酚組復方血栓通總皂苷+總黃酮組200210±18**0.21±0.03**0.20±0.06**復方血栓通浸膏粉組200215±15**0.25±0.03**0.21士0.03峙復方血栓通總黃酮組200217±16**0.24±0.02**0.25土0.03峙*表示各給藥組與模型組比較*P<0.05**P<0.01試驗結(jié)果顯示，上述試藥對大鼠急性心肌缺血具有一定的抑制作用，與地奧心血康作用相似，但沒有復方血栓通總皂苷+總黃酮+總多酚組作用顯著。給藥組動物的CPK、AST、LDH-L有所降低，心肌梗死范圍明顯縮小、心率減慢、ST段及T波高與模型組比較統(tǒng)計學檢查有顯著差異(P<0.01)。提示對大鼠急性心肌缺血具有改善心肌酶譜、保護心肌降低損傷的作用。(四)、對犬血流動力學的影響1)、對心肌缺血犬血流動力學的影響方法將42只健康雜種犬，雌雄各半，隨機分成6組，每組各6只①正常對照組；②模型組；③心肌缺血模型+復方丹參滴丸組；④心肌缺血模型+復方血栓通總皂苷+總黃酮+總多酚組；⑤心肌缺血模型+復方血栓通總皂苷+總黃酮組；⑥心肌缺血模型+復方血栓通浸膏粉組；⑦心機缺血模型+復方血栓通總黃酮組。各給藥組分別經(jīng)十二指腸給予110mg/kg;陽性藥對照組給予復方丹參滴丸68.Omg/kg;正常對照組經(jīng)十二指腸給予生理鹽水，給藥容積均為0.5ml/kg。實驗時將動物用3%的戊巴比妥鈉(iv)麻醉(30mg/kg)，仰臥位固定，暴露氣管，插入氣管導管，與呼吸機連接，進行正壓人工呼吸；分離頸總動脈，插入充滿肝素生理鹽水的心導管至左心室，另一端與AP-601G載波放大器連接，測量左心室內(nèi)壓。將AP-601G載波放大器的信號輸入EQ-601G微分放大器，測量左心室內(nèi)壓變化的最大速率dP/dtmax。分離股動脈和股靜脈，插入充滿3%。肝素生理鹽水的動脈導管，另一端與AP-601G載波放大器連接，測量動脈血壓；股靜脈內(nèi)插入靜脈導管，備做靜脈點滴生理鹽水用。連接標準II導聯(lián)心電圖。打開胸腔，暴露心臟，剝離主動脈動脈根部周圍的脂肪和結(jié)締組織，放置電磁血流量計探頭，測量心輸出量。在左心耳根部分離狀動脈左旋支，放置電磁血流量計探頭，測量冠脈血流量。所有測量信號導入RM-6000型多導生理記錄儀，并同步記錄。打開腹部，暴露十二指腸，插入導管并結(jié)扎固定以備給藥。打開右心耳，插入冠狀靜脈竇插管，以備作采集冠狀靜脈竇血液。手術(shù)完畢，靜脈滴注生理鹽水，穩(wěn)定30min后，記錄各項指標正常值后，在冠狀動脈前降支下1/3處結(jié)扎冠狀動脈，隨即經(jīng)十二指腸給藥，記錄給藥后15、30、90、150、270min時的各項指標。以給藥后各時間段與正常值的變化百分率為數(shù)據(jù)，做組間t檢驗。結(jié)果①對心率(HR)的影響(表6)結(jié)扎動脈后，結(jié)扎冠脈后，模型組的HR明顯高于正常對照組(P<0.01)。給藥后各組與模型對照組比較，HR減慢，其中，復方丹參滴丸組差異有統(tǒng)計學意義(15和90min，P<0.05;30min，P<0.01);復方血栓通總皂苷+總黃酮+總多酚類組差異有統(tǒng)計學意義(1590min，P<0.05);復方血栓通總皂苷+總黃酮組差異有統(tǒng)計學意義(15min，P<0.05);復方血栓通浸膏粉組和復方血栓通總黃酮組差異無統(tǒng)計學意義(15270min，P>0.05)。②對收縮壓(SAP)的影響(表7)結(jié)扎動脈后，模型組SAP較正常對照組下降明顯(P<0.01)。給藥后各組與模型對照組比較，SAP均有所上升，其中，復方丹參滴丸組差異有統(tǒng)計學意義(15150min，P<0.05);復方血栓通總皂苷+多酚類組和復方血栓通總黃酮組差異有統(tǒng)計學意義(1530min，P<0.05);復方血栓通總皂苷組差異有統(tǒng)計學意義(15min，P<0.05);復方血栓通浸膏粉組差異無統(tǒng)計學意義(15270min，P>0.05)。③.對動脈舒張壓(DAP)的影響(表8)結(jié)扎動脈后，模型對照組較正常對照組的DAP明顯下降(P<0.01)。給藥后各組與模型對照組比較，DAP有所上升，其中，復方丹參滴丸組和復方血栓通總皂苷+多酚類組差異有統(tǒng)計學意義(1530min，P<0.01;90min，P<0.05);復方血栓通浸膏粉組、復方血栓通總黃酮組和復方血栓通總皂苷+總黃酮組差異無統(tǒng)計學意義(15270min，P>0.05)。.對平均動脈壓(MAP)的影響(表9)結(jié)扎動脈后，模型對照組較正常對照組的MAP明顯下降(P<0.01)。給藥后各組與模型對照組比較，MAP有不同水平上升，其中，復方丹參滴丸組差異有統(tǒng)計學意義(1590min，P<0.01;150min，P<0.05);復方血栓通總皂苷+總黃酮+多酚類組差異有統(tǒng)計學意義(1530min，P<0.01;90min，P<0.05);復方血栓通總皂苷+總黃酮組，15min時差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);復方血栓通浸膏粉組和復方血栓通總黃酮組差異無統(tǒng)計學意義(15270min，P>0.05)。[O117]⑤對左室內(nèi)壓峰值(LVSP)的影響(表10)結(jié)扎動脈后，模型對照組的LVSP較正常對照組明顯降低(P>0.01)。給藥后各組與模型對照組比較，LVSP有所升高，其中，復方丹參滴丸組差異有統(tǒng)計學意義(15、30、150min，P<0.05;90minP<0.01);復方血栓通總皂苷+總黃酮+總多酚組差異有統(tǒng)計學意義(30、90min，P<0.01;150、270minP<0.05);復方血栓通總皂苷+總黃酮組差異有統(tǒng)計學意義(30、90min，P<0.05);復方血栓通浸膏粉組、復方血栓通總黃酮組差異無統(tǒng)計學意義(15270min，P>0.05)。.對左室內(nèi)壓變化最大速率(LVP+dP/dtmax)的影響(表11)結(jié)扎動脈后，模型對照組1^++(^/(^!￡明顯下降，與正常對照組比較有明顯統(tǒng)計差異(P<0.01)。給藥后各組與模型對照組比較，LVP+dP/dt^均有不同程度明顯上升，其中，復方丹參滴丸組差異有統(tǒng)計學意義(15、30min，P<0.01;90min，P<0.05);復方血栓通總皂苷+多酚類組差異有統(tǒng)計學意義(15、150min，P<0.05;30、90min，P<0.01);復方血栓通總皂苷組差異有統(tǒng)計學意義(30、90min，P<0.05);復方血栓通浸膏粉組和復方血栓通總黃酮組差異無統(tǒng)計學意義(15270min，P>0.05)。14<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>表8不同組分復方血栓通對心肌缺血犬動脈舒張壓(DAP,kPa)變化百分率(。/。)的組間比較(X±S，n=6)<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>二o.ovds-s.ovd*"您qs藍友翻魅SJ.I嫁Kg二o.ovd:-so.ovd<"您lq崩藍貧解3Iirl超fe翻il:一270min-27.40±5.88"-0.18±0.92-20.22±5.67-21.98±5.13-22.48±5.97-18.67±5.59*陽23.16士5,79表U不同組分復方血栓通對心肌缺血犬LV收縮期壓力最大變化速率(LVP+^PA/tmM，kPa/s)變化百分率("/o)的組間比較(X土S，n-6)270min-23.57±4,81"-0.30±0.95-20.09±5.30-23.74±3.40-20.73±4.98-18.62±2.86-21.70±3.05150min-29.04±6.33"0.02±1.55-21.14±5.20*-22.80士5.85-24.19±4.40-19.71±5.35*-22.63±3.69150min-24.35土4.01"-0.66±0.92-21.94±4.81-24.37±3.44-22.13±4.66-18.43±3.14*-21.50±3.8690min-31.75土3.55"-0.32±0.62-21.47±5.70**-25.99±5.72-27.49土3.99-19.72±3.96"-24.35±4.52*,**P<0.01。90min習24.70±4.09"-0.98±0.98-19.03±4.54*-23.50±2.66-20.67±4.04-16.89±3.44**-19.30±3.28*30min-32.01±4,87"-0.36±1.14-23.68±6.64*-29.37±3.20-31.50±3.61-22.00±5.39**-25.16±4.54*▲PO.05,"P〈0.01;②用藥組與模型對照組比較*P<0.05,30min-25.65±4.53"-1.56±1.65-12.09士3.37"-23.99±3.57-21.53士5.53-16.97±3.10**-19,03±3.89*15min-32.49士4..82"0.44±1.60-26.86±2.91*-31.47±4.8S-32.85±5.61-27.35±4.64-31.86±5.0815min-23.48±4.84"-0.14±1.89-11.63±2.86**-24.08±3.55-22.56±4.54-18.09±2.48*-22.28±3.45用藥前19.38±0.8518.44±1.2119.18±0.8819.18±0.7819.38±1.3518.67±1.1819.20±0.76用藥前300.06士21.85290.73士15.38292.20±25.71294.66±15.53290.35±17.86294.33±18.65294.28±10.87尿崩模型對照組正常對照組復方丹參滴丸組復方血栓通浸膏粉組復方血栓通總黃酮組復方血栓通總皂苷十十總黃酮+總多酚組復方血栓通總皂苷+總黃酮組①模型對照組與正常對照組比較:尿崩模型對照組正常對照組復方丹參滴丸組復方血栓通浸膏粉組復方血栓通總黃酮組復方血栓通總皂苷+總黃酮+總多酚組復方血栓通總皂苷+總黃酮組苷皂總栓壓禾方復類多+高苷皂總苷翁皂血總方龍復方張貧舒一il顯満身結(jié)中高升表，6、」表力(9"u-s屮20翁fml崩s(。/。)掩^扭^欲(。s-JSAd5ry糊。、wy萄堪1/EKI、貧瞎站萄，^w^崩叵lk01^進血上缺人幾、」使眵匕匕厶目17以及升高左室內(nèi)壓和左室內(nèi)壓變化最大速率dP/dtmax。復方血栓通總皂苷+總黃酮+總多酚組作用強度更強及時程更長，而復方血栓通浸膏粉和復方血栓通總黃酮對上述指標未顯現(xiàn)影響。權(quán)利要求一種藥物組合物，以三七25份，黃芪8份，玄參8份，丹參5份為原料藥制備的，其特征在于所述的組合物，其中含有總黃酮類提取物，總皂苷類提取物和總多酚酸類提取物，三者比例為1-5∶1-5∶1，其中總黃酮提取物中含總黃酮80％以上；總皂苷類提取物中含總皂苷70％以上；總多酚酸類提取物中含總多酚酸85％以上，三者含總黃酮、總皂苷與總多酚之合在80％以上。2.權(quán)利要求1的藥物組合物，其特征在于，所述的含有總黃酮類提取物，總皂苷類提取物和總多酚酸類提取物，三者比例為1-1.5:3-5:1。3.權(quán)利要求1的藥物組合物，其特征在于，所述的含有總黃酮類提取物，總皂苷類提取物和總多酚酸類提取物，三者比例為1.2:4.4:i。4.權(quán)利要求1的藥物組合物，其特征在于，按照以下步驟制備(1)三七，黃芪，玄參藥材乙醇加熱回流提??；提取液回收乙醇至無醇味，加水沉淀，靜置過夜，過濾，濾液濃縮；(2)將濃縮濾液過大孔樹脂，先以水洗脫，再以20%乙醇洗脫，20%乙醇洗脫液濃縮，干燥得到總黃酮類提取物；然后再以70%乙醇洗脫，收集洗脫液，干燥得到總皂苷類提取物；(3)將丹參水提，提取液濃縮，加乙醇醇沉，靜置過夜，過濾，回收乙醇至無醇味，濃縮；(4)將丹參濃縮液過大孔樹脂，先以水洗脫，再以乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，濃縮干燥得總多酚酸類提取物；(5)將上述三種提取物混合，作為藥物活性成分，根據(jù)需要，加入藥物可接受的載體，制備成藥物組合物。5.權(quán)利要求4的藥物組合物，其特征在于，步驟(1)中乙醇的濃度為70-95%，步驟(4)中乙醇的濃度為50-95%。6.權(quán)利要求4的藥物組合物，其特征在于，步驟(1)中提取次數(shù)為l-3次，步驟(3)中提取次數(shù)為1-3次。7.權(quán)利要求4藥物組合物，其特征在于，按照以下步驟制備(1)將四味藥材粉碎，過篩，三七，黃芪，玄參藥材混合后分別以8倍量、6倍量的75%乙醇加熱回流提取兩次，合并濾液；回收乙醇至無醇味，加水沉淀，靜置過夜，過濾，濾液濃縮至含生藥量lg/ml;(2)將該提取液過大孔樹脂，先以水洗脫，水洗至無molish反應，停止洗脫，洗脫液棄去，再以20%乙醇洗脫，洗脫液得到主要含有黃酮類提取液，濃縮，噴霧干燥得到總黃酮類提取物；然后以70%乙醇洗脫，收集洗脫液，得到主要含有總皂苷類提取液，噴霧干燥得到總皂苷類提取物；(3)將丹參分別以8倍量、6倍量的水在氮氣保護下6(TC提取兩次，過濾，合并濾液，濃縮至密度1.11.2，加乙醇醇沉至醇度達50%，靜置過夜，過濾，回收乙醇至無醇味，濃縮至濃度含生藥量lg/ml;(4)將丹參提取液過大孔樹脂，先以水洗脫，至無molish反應，停止洗脫，棄去洗脫液，再以60%乙醇洗脫，至三氯化鐵鐵氰化鉀試劑不變藍，停止收集，收集洗脫液，濃縮噴霧干燥得總多酚酸類提取物；(5)將上述三種提取物混合，作為藥物活性成分，根據(jù)需要，加入藥物可接受的載體，制備成藥物組合物。8.權(quán)利要求l的藥物組合物，其特征在于，具有活血化瘀、益氣養(yǎng)陰之功效，用于治療血瘀兼氣陰兩虛證的視網(wǎng)膜靜脈阻塞，癥見視力下降或視覺異常，眼底瘀血征象，神疲乏力，咽干，口干等癥；用于治療血瘀兼氣陰兩虛的穩(wěn)定性勞累型心絞痛，癥見胸悶痛、心悸、心慌、氣短乏力、心煩口干者，或糖尿病所致視網(wǎng)膜病變。9.權(quán)利要求1的藥物組合物，其特征在于，是任何可藥用劑型。10.權(quán)利要求9的藥物組合物，其特征在于，是滴丸劑、片劑、膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓劑、軟膏劑、硬膏劑、霜劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。全文摘要本發(fā)明提供了一種藥物組合物及其制備方法及在心腦血管疾病的應用，發(fā)明的解決方案是提供一種藥物組合物，該組合物是以三七25份，黃芪8份，玄參8份，丹參5份為原料藥制備的，所述藥物組合物，其中含有從上述四種中藥中提取的總黃酮類提取物，總皂苷類提取物和總多酚酸類提取物，三種提取物的重量比例為1-5∶1-5∶1，其中總黃酮提取物中含總黃酮80％以上；總皂苷類提取物中含總皂苷70％以上；總多酚酸類提取物中含總多酚酸85％以上，三者含總黃酮、總皂苷與總多酚之合在80％以上。文檔編號A61P27/00GK101744938SQ20101010614公開日2010年6月23日申請日期2010年2月5日優(yōu)先權(quán)日2010年2月5日發(fā)明者劉軍,楊春瑋申請人:劉軍;楊春瑋