專利名稱：一種中藥組合物制劑的檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥組合物制劑的檢測方法，特別涉及一種具有涼血、祛濕功效的中藥組合物制劑的檢測方法。

背景技術(shù)：
本發(fā)明中藥組合物制劑由當(dāng)歸、苦參兩味藥組成，具有涼血，祛濕的功效，用于血燥濕熱引起，頭面生瘡，粉刺疙瘩，濕疹刺癢，酒糟鼻赤。但是缺乏針對該組合物制劑的質(zhì)量檢測方法體系，因此，研究針對本發(fā)明中藥組合物制劑的質(zhì)量檢測方法體系將是亟待解決的問題。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于公開一種中藥組合物制劑的檢測方法。
本發(fā)明目的是通過如下技術(shù)方案實現(xiàn) 本發(fā)明檢測方法包括如下鑒別和含量測定中的一種或幾種 鑒別 A取本發(fā)明制劑日用制劑量的1/6-3/4重量倍，加乙醇6-15體積份，浸漬0.5-1.5小時，濾過，濾液濃縮至0.5-1.5體積份，作為供試品溶液。另取當(dāng)歸對照藥材0.5-1.5重量份，加乙醇2-8體積份，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005版一部附錄VI B)試驗。吸取上述兩種溶液各0.001-0.005體積份，分別點于同一硅膠G薄層板上，以4-12∶0.5-1.5的甲苯-醋酸乙酯為展開劑，展開取出，晾干，在紫外光燈365nm下檢視。供試品色譜中與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
B取本發(fā)明制劑日用制劑量的1/6-3/4重量倍，加三氯甲烷15-35體積份，用氨試液調(diào)節(jié)pH值至9～10，加熱回流0.5-1.5小時，放冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇1-3體積份使溶解，作為供試品溶液。另取苦參堿對照品，加乙醇制成每1ml含苦參堿1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005版一部附錄VI B)試驗，吸取供試品溶液0.008-0.012體積份，對照品溶液0.001-0.003體積份，分別點于同一硅膠G薄層板上，以2-6∶1-5∶1-3∶0.1-0.3的乙酸乙酯-丙酮-甲苯-濃氨試液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液，供試品色譜在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。
含量測定苦參堿照高效液相色譜法(中國藥典2005版一部附錄VI D)測定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以8-18∶65-102的四氫呋喃-0.3％十二烷基硫酸鈉(用磷酸調(diào)pH值至4.0)為流動相；檢測波長為210nm。理論板數(shù)按苦參堿峰計算應(yīng)不低于5000。
對照品溶液的制備精密稱取苦參堿對照品適量，加甲醇制成每1ml含苦參堿0.1mg的溶液，作為對照品溶液。
供試品溶液的制備取本發(fā)明制劑日用制劑量的1/40-1/8重量倍，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入0.2％鹽酸甲醇溶液10-30體積份，密塞，超聲處理25-45分鐘，放冷，再稱定重量，用0.2％鹽酸甲醇溶液補足減失的重量，搖勻，用微孔濾膜在0.45μm下濾過，取續(xù)濾液，即得。
測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各0.008-0.012體積份，注入液相色譜儀，測定，即得。
每日用制劑量含苦參以苦參堿C15H24N2O計，不得少于8-16mg。
本發(fā)明檢測方法優(yōu)選如下鑒別和含量測定中的一種或幾種 鑒別 A取本發(fā)明制劑日用制劑量的1/4重量倍，加乙醇10體積份，浸漬1小時，濾過，濾液濃縮至1體積份，作為供試品溶液。另取當(dāng)歸對照藥材1重量份，加乙醇5體積份，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005版一部附錄VI B)試驗。吸取上述兩種溶液各0.003體積份，分別點于同一硅膠G薄層板上，以9∶1的甲苯-醋酸乙酯為展開劑，展開取出，晾干，在紫外光燈365nm下檢視。供試品色譜中與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
B取本發(fā)明制劑日用制劑量的1/4重量倍，加三氯甲烷25體積份，用氨試液調(diào)節(jié)pH值至9～10，加熱回流1小時，放冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇2體積份使溶解，作為供試品溶液。另取苦參堿對照品，加乙醇制成每1ml含苦參堿1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005版一部附錄VI B)試驗，吸取供試品溶液0.01體積份，對照品溶液0.002體積份，分別點于同一硅膠G薄層板上，以4∶3∶2∶0.2的乙酸乙酯-丙酮-甲苯-濃氨試液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液，供試品色譜在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。
含量測定苦參堿照高效液相色譜法(中國藥典2005版一部附錄VI D)測定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以14∶86的四氫呋喃-0.3％十二烷基硫酸鈉(用磷酸調(diào)pH值至4.0)為流動相；檢測波長為210nm。理論板數(shù)按苦參堿峰計算應(yīng)不低于5000。
對照品溶液的制備精密稱取苦參堿對照品適量，加甲醇制成每1ml含苦參堿0.1mg的溶液，作為對照品溶液。
供試品溶液的制備取本發(fā)明制劑日用制劑量的3/40重量倍，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入0.2％鹽酸甲醇溶液20體積份，密塞，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用0.2％鹽酸甲醇溶液補足減失的重量，搖勻，用微孔濾膜在0.45μm下濾過，取續(xù)濾液，即得。
測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各0.01體積份，注入液相色譜儀，測定，即得。
每日用制劑量含苦參以苦參堿C15H24N2O計，不得少于12mg。
本發(fā)明藥物組合物檢測方法可以應(yīng)用于組合物的各種劑型，如散劑、顆粒劑、片劑、膠囊劑、分散片、滴丸劑、水丸劑、蜜丸劑、微丸劑、濃縮丸劑、緩釋劑、口服液體制劑或注射劑等臨床可接受的劑型，由于不同劑型的制劑其中所含的相當(dāng)生藥量是相同的，因此各個劑型在進行檢測時，所選用樣品量可統(tǒng)一折算為日用制劑量為計量單位，每單位制劑可以為每片、每粒、每支或每丸等。
本發(fā)明中藥組合物制劑的原料藥組成為 當(dāng)歸300-800重量份苦參300-800重量份 本發(fā)明中藥組合物制劑的原料藥組成優(yōu)選為 當(dāng)歸500重量份苦參500重量份 本發(fā)明中藥組合物制劑的原料藥組成優(yōu)選為 當(dāng)歸650重量份苦參400重量份 本發(fā)明中藥組合物制劑的原料藥組成優(yōu)選為 當(dāng)歸460重量份苦參680重量份 本發(fā)明所述的重量份和體積份的關(guān)系為g/ml的關(guān)系。
本發(fā)明所述的質(zhì)量檢測方法中的中藥組合物制劑是按照常規(guī)工藝，加入常規(guī)輔料，制成藥學(xué)上可接受的各種劑型，包括但不限于散劑、顆粒劑、片劑、膠囊劑、分散片、滴丸劑、水丸劑、蜜丸劑、微丸劑、濃縮丸劑、軟膠囊劑、緩釋劑、口服液體制劑或注射劑。



圖1當(dāng)歸的薄層色譜圖1、當(dāng)歸對照藥材；2、3、4、本發(fā)明中藥組合物制劑(批號6030870、6031451、6031452)；5、陰性對照(缺當(dāng)歸)； 圖2苦參的薄層色譜圖1、2、3本發(fā)明中藥組合物制劑(批號6030870、6031451、6031452)；4、苦參堿；5、陰性對照(缺苦參)； 圖3苦參堿全波長(190-400nm)掃描圖譜 圖4本發(fā)明中藥組合物制劑高效液相色譜圖(磷酸調(diào)pH值至3.0) 圖5本發(fā)明中藥組合物制劑高效液相色譜圖(磷酸調(diào)pH值至3.5) 圖6本發(fā)明中藥組合物制劑高效液相色譜圖(磷酸調(diào)pH值至4.0) 圖7苦參堿的標準曲線 圖8空白溶液的高效液相色譜圖 圖9苦參堿對照品高效液相色譜圖 圖10本發(fā)明中藥組合物制劑高效液相色譜圖 圖11苦參堿高效液相色譜圖 圖12本發(fā)明中藥組合物制劑高效液相色譜圖 圖13苦參堿對照品高效液相色譜圖 圖14本發(fā)明中藥組合物制劑高效液相色譜圖 本發(fā)明對中藥組合物制劑的質(zhì)量標準進行了提高和完善，進行了苦參中苦參堿的薄層色譜鑒別，經(jīng)復(fù)核，以上薄層色譜斑點清晰，重現(xiàn)性好，空白無干擾；同時采用高效液相色譜法測定苦參中苦參堿的含量，試驗結(jié)果表明苦參堿色譜峰與雜質(zhì)峰能較好分離；并且通過準確度試驗，表明本方法具有良好的準確度；通過本發(fā)明的質(zhì)量控制，提高了產(chǎn)品穩(wěn)定性，有利于工業(yè)化生產(chǎn)的質(zhì)量控制。
下面實驗例和實施例進一步說明但不限于本發(fā)明。
實驗例1鑒別實驗 1、藥品與試劑 苦參堿對照品110805-200306由中國藥品生物制品檢定所提供。
當(dāng)歸對照藥材121057-200504由中國藥品生物制品檢定所提供。
樣品本發(fā)明中藥組合物制劑由實施例1所述方法制備；(批號6030870、6031451、6031452)由北京同仁堂科技發(fā)展有限公司制藥廠提供。
試劑均為分析純。
薄層色譜硅膠預(yù)制板青島海洋化工廠、煙臺市化學(xué)工業(yè)研究所生產(chǎn)。
2、當(dāng)歸的薄層鑒別。取本發(fā)明中藥組合物丸劑約3g，經(jīng)三批樣品實驗觀察，空白無干擾。結(jié)果見附圖1。
3、苦參的薄層鑒別。取本發(fā)明中藥組合物丸劑約3g，展開劑為甲苯，空白溶液的制備是按處方中藥材量的比例，自配不含苦參的群藥，按其工藝制成空白制劑，再按實施例1所述的供試品溶液的制備方法制備，展開及檢視條件見實施例1。經(jīng)三批樣品實驗觀察，空白無干擾。結(jié)果見附圖2。
實驗例2苦參中苦參堿的含量測定 1、儀器與試劑 儀器Agilent 1100高效液相色譜儀。
色譜柱Agilent ZORBAX Eclips Plus C18(4.6×250mm，5μm。苦參堿對照品(供含量測定用110805-200306)由中國藥品生物制品檢定所提供。純度100.00％見附圖12。
樣品本發(fā)明中藥組合物制劑由實施例1所述方法制備，(批號6030447、6030870、6031451、6031452、8030964、8030965、8038064、8038115、8038116、8038117)由北京同仁堂科技發(fā)展有限公司制藥廠提供。
試劑配制標準溶液及供試品溶液的試劑均為分析純，液相色譜用試劑為色譜級試劑，液相用水為超純水。
2、色譜分析條件 流動相四氫呋喃-0.3％十二烷基硫酸鈉(用磷酸調(diào)pH值至4.0)(14∶86) 流速1.0ml/分鐘 檢測波長210nm 理論板數(shù)按苦參堿峰計算應(yīng)不低于5000。
3、實驗條件的選擇 (1)檢測波長的選擇取苦參堿對照品，加流動相溶解，注入液相色譜儀，用DAD(二極管距陣檢測器)進行紫外全波長掃描(190～400nm)。結(jié)果表明，在苦參堿210nm附近有吸收峰，以210nm吸收度最大，靈敏度最高，且樣品空白無干擾，故此本實驗選擇210hm作為檢測波長(見附圖3)； (2)色譜柱的選擇《中國藥典》2005版中“苦參”含量測定采用氨基色譜柱分離，因為關(guān)于用ODS色譜柱分離苦參中苦參堿或氧化苦參堿的報道很多，ODS色譜柱現(xiàn)使用較普遍，所以選用了ODS色譜柱。
(3)流動相的選擇流動相的pH值選擇流動相選擇為四氫呋喃-0.3％十二烷基硫酸鈉(14∶86)，分別用磷酸調(diào)整0.3％十二烷基硫酸鈉pH值至3.0，3.5，4.0比較樣品在不同pH值的流動相中的分離情況，結(jié)果磷酸調(diào)pH值至4.0的苦參堿峰的分離度合格(R＞1.5)，而且分離效果最佳(見附圖4、5、6) (4)柱溫的選擇流動相為四氫呋喃-0.3％十二烷基硫酸鈉(用磷酸調(diào)整pH值至4.0)，(14∶86)，分別選擇柱溫20℃、25℃、30℃、40℃，比較樣品在不同柱溫時的分離情況，結(jié)果柱溫20℃～30℃時，苦參堿峰的分離效果最佳。
4、提取條件的選擇 (1)提取溶媒的選擇本實驗采用不同溶劑為提取溶劑，超聲提取30分鐘，結(jié)果見表1。
表1提取溶媒的選擇
從上表可見，用0.2％鹽酸甲醇作為提取溶媒，苦參堿即可提取完全。
(2)提取時間的確定本實驗采用0.2％鹽酸甲醇為提取溶劑，對提取時間即超聲時間進行了摸索實驗，結(jié)果見表2。
表2提取時間的確定
從上表可見，超聲提取30分鐘，含量最高。故超聲暫定為30分鐘即可。
5、線性關(guān)系的考察 精密稱取苦參堿對照品11.38mg，置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取苦參堿對照品溶液(1.138mg/ml)0.2，0.5，2，5，8，10μl注入液相色譜儀，測得峰面積，結(jié)果見表3。以對照品進樣量(μg)為橫坐標，以峰面積為縱坐標，繪制標準曲線(見附圖7)，結(jié)果表明苦參堿在0.2276～11.38μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。回歸方程為Y＝1697.18558x+0.251635，r＝0.99998(n＝6)。
表3線性關(guān)系考察
6、精密度試驗精密吸取同一供試品溶液，重復(fù)進樣6次，測定峰面積，RSD＜3％，結(jié)果見表4。
表4精密度試驗
7、重復(fù)性試驗按上述方法，對同一批樣品(批號8030964)6份，進行測定，RSD＜2％，結(jié)果見表5。
表5重復(fù)性試驗
8、空白試驗空白溶液的制備是按處方中藥味比例，自配不含苦參的制劑，再按實施例1所述的含量測定下供試品溶液制備方法制備并測定，空白溶液在與苦參堿對照品相同保留時間處未顯色譜峰，故認為空白無干擾(見附圖8)。
9、穩(wěn)定性試驗按實施例1所述的方法對同一批樣品分別于配制后0，1，2，6，12，24小時，依法測定，結(jié)果表明，供試品溶液在24小時內(nèi)穩(wěn)定。RSD＜3％，結(jié)果見表6。
表6穩(wěn)定性試驗
10、準確度試驗 采用加樣回收法。精密稱取已知含量的同批(8030964，苦參堿含量2.454mg/g)號樣品0.4g，分別精密加入苦參堿對照品溶液(0.0855mg/ml)10ml，再精密加入0.2％鹽酸甲醇溶液10ml，按實施例1所述的含量測定項下操作，平行制樣6份，測定，按下式計算回收率，結(jié)果表明本方法具有良好的準確度，數(shù)據(jù)見表7。

表7回收率試驗
11、樣品測定結(jié)果按含量測定項下測定方法，測定10批樣品，結(jié)果見表8 表8樣品測定結(jié)果
即本發(fā)明中藥組合物丸劑每1g含苦參以苦參堿(C15H24N20)計，按照測定的10批樣品的含量平均值的70％為標準，即不得少于1.0mg。
12、范圍試驗 (1)采用加樣回收法，按照苦參堿含量下限的50％～70％，精密稱取已知含量的同批(6030447，苦參堿含量1.358mg/g)號樣品0.3g，分別精密加入苦參堿對照品溶液(0.0447mg/ml)10ml，再精密加入鹽酸甲醇溶液10ml，照實施例1所述的含量測定項下操作，平行制樣6份，測定，按下式計算回收率，結(jié)果表明本方法具有良好的準確度，數(shù)據(jù)見表9。
表9含量下限50％～70％的回收率試驗
(2)采用加樣回收法，按照苦參堿含量下限的200％，精密稱取已知含量的同批(6030447，苦參堿含量1.358mg/g)號樣品0.9g，分別精密加入苦參堿對照品溶液(0.1225mg/ml)10.0ml，照實施例1所述的含量測定項下操作，平行制樣6份，測定，按下式計算回收率，結(jié)果表明本方法具有良好的準確度，數(shù)據(jù)見表10。
表10含量下限的2～5倍的回收率試驗
13、方法耐用性研究 (1)色譜柱Angilent ZORBAX Eclips Plus C184.6×250mm，5um。
流動相四氫呋喃-0.3％十二烷基硫酸鈉(用磷酸調(diào)pH值至4.0)14∶86) 流速1.0ml/min 柱溫20℃ 檢測波長210nm 測定數(shù)據(jù)如下結(jié)果見表11。(苦參堿對照品色譜圖見附圖9，本發(fā)明中藥組合物制劑色譜圖見附圖10) 表11耐用性結(jié)果
(2)色譜柱Phennomenex Luna C18250mm×4.6mm，5um 流動相四氫呋喃-0.3％十二烷基硫酸鈉(用磷酸調(diào)pH值至4.0)(14∶86) 流速1.0ml/min 柱溫20℃ 檢測波長210nm 測定數(shù)據(jù)如下結(jié)果見表12。(苦參堿對照品色譜圖見附圖11，本發(fā)明中藥組合物制劑色譜圖見附圖12) 表12耐用性結(jié)果
(3)色譜柱Angilent ZORBAX XDB C18250×4.6mm，5um。
流動相四氫呋喃-0.3％十二烷基硫酸鈉(用磷酸調(diào)pH值至4.0)(14∶86) 流速1.0ml/min 柱溫20℃ 檢測波長210nm 測定數(shù)據(jù)如下結(jié)果見表13。(苦參堿對照品色譜圖見附圖13，本發(fā)明中藥組合物制劑色譜圖見附圖14) 表13耐用性結(jié)果
根據(jù)三個品牌色譜柱測定同一份樣品的結(jié)果，計算苦參堿含量的相對標準偏差為0.56％，以上實驗說明本方法具有較好的耐用性。
實驗例3標準復(fù)核及方法學(xué)驗證實驗報告如下 1.性狀與樣品實際性狀相符。
2.鑒別(1)為當(dāng)歸、苦參二味藥的顯微特征，經(jīng)復(fù)核，顯微特征明顯，易于查找。
3.鑒別(2)為當(dāng)歸的薄層色譜，(3)為苦參中苦參堿的薄層色譜。經(jīng)復(fù)核，以上薄層色譜斑點清晰，重現(xiàn)性好，空白無干擾。
4.含量測定采用高效液相色譜法測定苦參中苦參堿的含量，規(guī)定不得少于1.0mg/g。試驗結(jié)果表明苦參堿色譜峰與雜質(zhì)峰能較好分離，經(jīng)復(fù)核，三批樣品含量均符合規(guī)定，測定數(shù)據(jù)見表14 表14苦參堿含量測定數(shù)據(jù)(mg/g)
5.空白試驗按處方中藥味比例，配制不含苦參的群藥，按其制法制成空白制劑，按供試品溶液制備方法制成陰性對照溶液，依法測定，結(jié)果空白溶液在與苦參堿對照品溶液相同保留時間處未出現(xiàn)色譜峰，空白無干擾。
6.重復(fù)性試驗 取同一批樣品(批號8034309)，平行制備3份進行測定，結(jié)果見表15。
表15重復(fù)性試驗結(jié)果
7.準確度試驗 采用加樣回收法。精密稱取已知含量的同一批樣品(批號8034309，苦參堿含量為2.377mg/g)0.45g，精密加入苦參堿對照品溶液(含苦參堿0.0569mg/ml)20ml，照實驗例1所述含量測定項下操作，平行制備3份，依法測定，結(jié)果表明本方法具有良好的準確度，數(shù)據(jù)見表16。
表16準確度試驗數(shù)據(jù)
下述實施例均能實現(xiàn)上述實驗例的效果。

具體實施例方式 實施例1本發(fā)明藥物組合物丸劑的檢測方法 當(dāng)歸500g 苦參500g 取上述二味藥，粉碎成細粉，過篩，混勻。每100g粉末加煉蜜40～50g與適量水，泛丸，干燥；用玉米脘包衣，晾干，制成水蜜丸，即得。
鑒別 A取本發(fā)明水蜜丸約3g，粉碎，加乙醇10ml，浸漬1小時，濾過，濾液濃縮至1ml，作為供試品溶液。另取當(dāng)歸對照藥材1g，加乙醇5ml，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005版一部附錄VI B)試驗。吸取上述兩種溶液各3μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以9∶1的甲苯-醋酸乙酯為展開劑，展開取出，晾干，在紫外光燈365nm下檢視。供試品色譜中與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
B取本發(fā)明水蜜丸約3g，粉碎，加三氯甲烷25ml，用氨試液調(diào)節(jié)pH值至9～10，加熱回流1小時，放冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇2ml使溶解，作為供試品溶液。另取苦參堿對照品，加乙醇制成每1ml含苦參堿1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005版一部附錄VI B)試驗，吸取供試品溶液10μl，對照品溶液2μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以4∶3∶2∶0.2的乙酸乙酯-丙酮-甲苯-濃氨試液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液，供試品色譜在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。
含量測定苦參堿照高效液相色譜法(中國藥典2005版一部附錄VI D)測定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以14∶86的四氫呋喃-0.3％十二烷基硫酸鈉(用磷酸調(diào)pH值至4.0)為流動相；檢測波長為210nm。理論板數(shù)按苦參堿峰計算應(yīng)不低于5000。
對照品溶液的制備精密稱取苦參堿對照品適量，加甲醇制成每1ml含苦參堿0.1mg的溶液，作為對照品溶液。
供試品溶液的制備取本發(fā)明水蜜丸粉末0.9g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入0.2％鹽酸甲醇溶液20ml，密塞，在功率250W，頻率40kHz下超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用0.2％鹽酸甲醇溶液補足減失的重量，搖勻，用微孔濾膜在0.45μm下濾過，取續(xù)濾液，即得。
測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
每日用制劑量含苦參以苦參堿C15H24N2O計，不得少于12mg。
用法與用量口服。一次6g，一日2次。
規(guī)格每100粒重10g 實施例2本發(fā)明藥物組合物散劑的檢測方法 當(dāng)歸650g 苦參400g 取上述二味藥，粉碎成細粉，過篩，混勻，加入常規(guī)輔料，按照常規(guī)工藝，制成散劑。
鑒別 A取本發(fā)明散劑日用制劑量的1/4，加乙醇8ml，浸漬0.8小時，濾過，濾液濃縮至0.8ml，作為供試品溶液。另取當(dāng)歸對照藥材0.8g，加乙醇4ml，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005版一部附錄VIB)試驗。吸取上述兩種溶液各2.5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以8∶0.7的甲苯-醋酸乙酯為展開劑，展開取出，晾干，在紫外光燈365nm下檢視。供試品色譜中與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
B取本發(fā)明散劑日用制劑量的1/4，加三氯甲烷20ml，用氨試液調(diào)節(jié)pH值至9～10，加熱回流0.8小時，放冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇1.5ml使溶解，作為供試品溶液。另取苦參堿對照品，加乙醇制成每1ml含苦參堿1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005版一部附錄VIB)試驗，吸取供試品溶液9μl，對照品溶液1.8μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以3∶2∶1.8∶0.18的乙酸乙酯-丙酮-甲苯-濃氨試液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液，供試品色譜在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。
含量測定苦參堿照高效液相色譜法(中國藥典2005版一部附錄VI D)測定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以，12∶75的四氫呋喃-0.3％十二烷基硫酸鈉(用磷酸調(diào)pH值至4.0)為流動相；檢測波長為210nm。理論板數(shù)按苦參堿峰計算應(yīng)不低于5000。
對照品溶液的制備精密稱取苦參堿對照品適量，加甲醇制成每1ml含苦參堿0.1mg的溶液，作為對照品溶液。
供試品溶液的制備取本發(fā)明散劑日用制劑量的1/20，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入0.2％鹽酸甲醇溶液18ml，密塞，超聲處理28分鐘，放冷，再稱定重量，用0.2％鹽酸甲醇溶液補足減失的重量，搖勻，用微孔濾膜在0.45μm下濾過，取續(xù)濾液，即得。
測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各9μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
每日用制劑量含苦參以苦參堿C15H24N2O計，不得少于9mg。
實施例3本發(fā)明藥物組合物片劑的檢測方法 當(dāng)歸460g 苦參680g 取上述二味藥，粉碎成細粉，過篩，混勻，加入常規(guī)輔料，按照常規(guī)工藝，制成片劑。
鑒別 A取本發(fā)明片劑日用制劑量的1/2，加乙醇12ml，浸漬1.4小時，濾過，濾液濃縮至1.4ml，作為供試品溶液。另取當(dāng)歸對照藥材1.3g，加乙醇7ml，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005版一部附錄VI B)試驗。吸取上述兩種溶液各4μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以10∶1.3的甲苯-醋酸乙酯為展開劑，展開取出，晾干，在紫外光燈365nm下檢視。供試品色譜中與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
B取本發(fā)明片劑日用制劑量的1/2，加三氯甲烷30ml，用氨試液調(diào)節(jié)pH值至9～10，加熱回流1.3小時，放冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇2.5ml使溶解，作為供試品溶液。另取苦參堿對照品，加乙醇制成每1ml含苦參堿1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005版一部附錄VIB)試驗，吸取供試品溶液11μl，對照品溶液2.5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以5∶4∶2.5∶0.25的乙酸乙酯-丙酮-甲苯-濃氨試液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液，供試品色譜在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。
含量測定苦參堿照高效液相色譜法(中國藥典2005版一部附錄VI D)測定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以16∶94的四氫呋喃-0.3％十二烷基硫酸鈉(用磷酸調(diào)pH值至4.0)為流動相；檢測波長為210nm。理論板數(shù)按苦參堿峰計算應(yīng)不低于5000。
對照品溶液的制備精密稱取苦參堿對照品適量，加甲醇制成每1ml含苦參堿0.1mg的溶液，作為對照品溶液。
供試品溶液的制備取本發(fā)明片劑日用制劑量的1/10，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入0.2％鹽酸甲醇溶液25ml，密塞，在功率250W，頻率40kHz下進行超聲處理35分鐘，放冷，再稱定重量，用0.2％鹽酸甲醇溶液補足減失的重量，搖勻，用微孔濾膜在0.45μm下濾過，取續(xù)濾液，即得。
測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各11μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
每日用制劑量含苦參以苦參堿C15H24N2O計，不得少于14mg。實施例4本發(fā)明藥物組合物口服液體制劑的檢測方法 當(dāng)歸380g 苦參550g 取上述二味藥，按照常規(guī)方法提取，加入常規(guī)輔料，按照常規(guī)工藝，制成口服液體制劑。
鑒別 A取本發(fā)明口服液體制劑日用制劑量的1/6，加乙醇7ml，浸漬0.8小時，濾過，濾液濃縮至0.7ml，作為供試品溶液。另取當(dāng)歸對照藥材0.6g，加乙醇3.5ml，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005版一部附錄VI B)試驗。吸取上述兩種溶液各2μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以7∶0.8的甲苯-醋酸乙酯為展開劑，展開取出，晾干，在紫外光燈365nm下檢視。供試品色譜中與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
B取本發(fā)明口服液體制劑日用制劑量的1/6，加三氯甲烷18ml，用氨試液調(diào)節(jié)pH值至9～10，加熱回流0.7小時，放冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇1.4ml使溶解，作為供試品溶液。另取苦參堿對照品，加乙醇制成每1ml含苦參堿1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005版一部附錄VI B)試驗，吸取供試品溶液8.5μl，對照品溶液1.6μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以2.5∶1.8∶1.6∶0.15的乙酸乙酯-丙酮-甲苯-濃氨試液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液，供試品色譜在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。
實施例5本發(fā)明藥物組合物膠囊劑的檢測方法 當(dāng)歸720g 苦參450g 取上述二味藥，粉碎成細粉，過篩，混勻，加入常規(guī)輔料，按照常規(guī)工藝，制成膠囊劑。
含量測定苦參堿照高效液相色譜法(中國藥典2005版一部附錄VID)測定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以17∶98的四氫呋喃-0.3％十二烷基硫酸鈉(用磷酸調(diào)pH值至4.0)為流動相；檢測波長為210nm。理論板數(shù)按苦參堿峰計算應(yīng)不低于5000。
對照品溶液的制備精密稱取苦參堿對照品適量，加甲醇制成每1ml含0苦參堿.1mg的溶液，作為對照品溶液。
供試品溶液的制備取本發(fā)明膠囊劑日用制劑量的1/8，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入0.2％鹽酸甲醇溶液28ml，密塞，超聲處理40分鐘，放冷，再稱定重量，用0.2％鹽酸甲醇溶液補足減失的重量，搖勻，用微孔濾膜在0.45μm下濾過，取續(xù)濾液，即得。
測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各12μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
每日用制劑量含苦參以苦參堿C15H24N2O計，不得少于15mg。
權(quán)利要求
1.一種中藥組合物制劑的檢測方法，其特征在于該方法包括如下鑒別和含量測定中的一種或幾種
鑒別
A取本發(fā)明制劑日用制劑量的1/6-3/4重量倍，加乙醇6-15體積份，浸漬0.5-1.5小時，濾過，濾液濃縮至0.5-1.5體積份，作為供試品溶液；另取當(dāng)歸對照藥材0.5-1.5重量份，加乙醇2-8體積份，同法制成對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗；吸取上述兩種溶液各0.001-0.005體積份，分別點于同一硅膠G薄層板上，以4-12∶0.5-1.5的甲苯-醋酸乙酯為展開劑，展開取出，晾干，在紫外光燈365nm下檢視；供試品色譜中與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；
B取本發(fā)明制劑日用制劑量的1/6-3/4重量倍，加三氯甲烷15-35體積份，用氨試液調(diào)節(jié)pH值至9～10，加熱回流0.5-1.5小時，放冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇1-3體積份使溶解，作為供試品溶液；另取苦參堿對照品，加乙醇制成每1ml含苦參堿1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液0.008-0.012體積份，對照品溶液0.001-0.003體積份，分別點于同一硅膠G薄層板上，以2-6∶1-5∶1-3∶0.1-0.3的乙酸乙酯-丙酮-甲苯-濃氨試液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液，供試品色譜在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；
含量測定苦參堿照高效液相色譜法測定；
色譜條件與系統(tǒng)適用性以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以8-18∶65-102的四氫呋喃-0.3％十二烷基硫酸鈉(用磷酸調(diào)pH值至4.0)為流動相；檢測波長為210nm；理論板數(shù)按苦參堿峰計算應(yīng)不低于5000；
對照品溶液的制備精密稱取苦參堿對照品適量，加甲醇制成每1ml含苦參堿0.1mg的溶液，作為對照品溶液；
供試品溶液的制備取本發(fā)明制劑日用制劑量的1/40-1/8重量倍，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入0.2％鹽酸甲醇溶液10-30體積份，密塞，超聲處理25-45分鐘，放冷，再稱定重量，用0.2％鹽酸甲醇溶液補足減失的重量，搖勻，用微孔濾膜在0.45μm下濾過，取續(xù)濾液，即得；
測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各0.008-0.012體積份，注入液相色譜儀，測定，即得；
每日用制劑量含苦參以苦參堿C15H24N2O計，不得少于8-16mg；
其中所述中藥組合物的原料藥組成為
當(dāng)歸300-800重量份 苦參300-800重量份。
2.如權(quán)利要求1所述的一種中藥組合物制劑的檢測方法，其特征在于該方法包括如下鑒別和含量測定中的一種或幾種
鑒別
A取本發(fā)明制劑日用制劑量的1/4重量倍，加乙醇10體積份，浸漬1小時，濾過，濾液濃縮至1體積份，作為供試品溶液；另取當(dāng)歸對照藥材1重量份，加乙醇5體積份，同法制成對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗；吸取上述兩種溶液各0.003體積份，分別點于同一硅膠G薄層板上，以9∶1的甲苯-醋酸乙酯為展開劑，展開取出，晾干，在紫外光燈365nm下檢視；供試品色譜中與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；
B取本發(fā)明制劑日用制劑量的1/4重量份，加三氯甲烷25體積份，用氨試液調(diào)節(jié)pH值至9～10，加熱回流1小時，放冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇2體積份使溶解，作為供試品溶液；另取苦參堿對照品，加乙醇制成每1ml含苦參堿1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液0.01體積份，對照品溶液0.002體積份，分別點于同一硅膠G薄層板上，以4∶3∶2∶0.2的乙酸乙酯-丙酮-甲苯-濃氨試液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液，供試品色譜在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；
含量測定苦參堿照高效液相色譜法測定；
色譜條件與系統(tǒng)適用性以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以14∶86的四氫呋喃-0.3％十二烷基硫酸鈉(用磷酸調(diào)pH值至4.0)為流動相；檢測波長為210nm；理論板數(shù)按苦參堿峰計算應(yīng)不低于5000；
對照品溶液的制備精密稱取苦參堿對照品適量，加甲醇制成每1ml含苦參堿0.1mg的溶液，作為對照品溶液；
供試品溶液的制備取本發(fā)明制劑日用制劑量的3/40重量倍，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入0.2％鹽酸甲醇溶液20體積份，密塞，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用0.2％鹽酸甲醇溶液補足減失的重量，搖勻，用微孔濾膜在0.45μm下濾過，取續(xù)濾液，即得；
測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各0.01體積份，注入液相色譜儀，測定，即得；
每日用制劑量含苦參以苦參堿C15H24N2O計，不得少于12mg。
3.如權(quán)利要求1或2所述的一種中藥組合物制劑的檢測方法，其特征在于該方法中藥組合物的原料藥組成為
當(dāng)歸500重量份 苦參500重量份。
4.如權(quán)利要求3所述的一種中藥組合物制劑的檢測方法，其特征在于該方法中藥組合物的原料藥組成為
當(dāng)歸650重量份 苦參400重量份。
5.如權(quán)利要求3所述的一種中藥組合物制劑的檢測方法，其特征在于該方法中藥組合物的原料藥組成為
當(dāng)歸460重量份 苦參680重量份。
6.如權(quán)利要求1、2、4或5所述的一種中藥組合物制劑的檢測方法，其特征在于該方法中藥組合物制劑為
取上述原料藥，按照常規(guī)工藝，加入常規(guī)輔料，制成藥學(xué)上可接受的各種劑型，包括但不限于散劑、顆粒劑、片劑、膠囊劑、丸劑、口服液體制劑或注射劑。
7.如權(quán)利要求3所述的一種中藥組合物制劑的檢測方法，其特征在于該方法中藥組合物制劑為
取上述原料藥，按照常規(guī)工藝，加入常規(guī)輔料，制成藥學(xué)上可接受的各種劑型，包括但不限于散劑、顆粒劑、片劑、膠囊劑、丸劑、口服液體制劑或注射劑。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種中藥組合物制劑的檢測方法，其中所述的中藥組合物制劑是取原料藥，加入常規(guī)輔料，按照常規(guī)工藝制成藥學(xué)上可接受的各種劑型。檢測方法包括鑒別和含量測定對苦參中苦參堿的薄層色譜鑒別，經(jīng)復(fù)核，以上薄層色譜斑點清晰，重現(xiàn)性好，空白無干擾；同時采用高效液相色譜法測定苦參中苦參堿的含量，試驗結(jié)果表明苦參堿色譜峰與雜質(zhì)峰能較好分離；通過本發(fā)明的質(zhì)量控制，提高了產(chǎn)品穩(wěn)定性，有利于工業(yè)化生產(chǎn)的質(zhì)量控制。
文檔編號A61K36/185GK101757093SQ201010034409
公開日2010年6月30日 申請日期2010年1月15日 優(yōu)先權(quán)日2010年1月15日
發(fā)明者鄭杰, 趙紅英, 劉瑩, 遲玉明, 解素花 申請人:北京同仁堂科技發(fā)展股份有限公司