專利名稱：一種中藥組合物制劑的檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥組合物制劑的檢測(cè)方法，特別涉及一種清風(fēng)熱、通鼻竅的中藥組合物制劑的檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
鼻炎是耳鼻喉科的常見(jiàn)病，近年來(lái)發(fā)病呈上升趨勢(shì)，中醫(yī)藥治療該病具有療效顯著而持久的特點(diǎn)，因此治療鼻炎的中藥復(fù)方很多，一般具有清風(fēng)熱，通鼻竅的功效，主要用于外感風(fēng)熱或風(fēng)寒化熱，鼻塞流涕，頭痛流淚，慢性鼻炎等。但是沒(méi)有具體的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，或者只規(guī)定了鑒別項(xiàng)，未規(guī)定有效成分的含量測(cè)定，因此形成一套完善的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)體系一直是值得研究的問(wèn)題。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個(gè)目的在于公開(kāi)一種中藥組合物制劑的檢測(cè)方法。
本發(fā)明目的是通過(guò)如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn) 本發(fā)明檢測(cè)方法包括如下鑒別和含量測(cè)定中的一種或幾種 鑒別 A取本發(fā)明制劑日用制劑量的1/10-9/10重量倍，加乙醚10-45體積份，浸泡0.5-1.5小時(shí)，時(shí)時(shí)振搖，濾過(guò)，濾液揮干，殘?jiān)右宜嵋阴?.5-1.5體積份使溶解，作為供試品溶液。另取歐前胡素、異歐前胡素對(duì)照品，加乙酸乙酯制成每1ml含歐前胡素、異歐前胡素各1mg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(2005版藥典第一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取對(duì)照品溶液0.0005-0.0015體積份，供試品溶液0.002-0.007體積份，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以4-10∶1-5∶0.5-1.5的60～90℃石油醚-乙醚-乙酸乙酯為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈在254nm下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
B取本發(fā)明制劑日用制劑量的1/18-1/3重量倍，加甲醇6-12體積份，密塞，浸泡15-40分鐘，超聲處理15-40分鐘，放冷，濾過(guò)，濾液作為供試品溶液。另取木蘭脂素對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含木蘭脂素1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(2005版藥典第一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取對(duì)照品溶液0.0005-0.0015體積份，供試品溶液0.002-0.006體積份，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以2-8∶0.5-1.5∶0.01-0.03的三氯甲烷-乙醚-乙酸乙酯，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在90℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的紫紅色斑點(diǎn)。
含量測(cè)定照高效液相色譜法(2005版藥典第一部附錄VI D)測(cè)定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以35-50∶0.5-1.5∶50-65的乙腈-四氫呋喃-水為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為278nm。理論板數(shù)按木蘭脂素峰計(jì)算應(yīng)不低于9000。
對(duì)照品溶液的制備精密稱取木蘭脂素對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含木蘭脂素0.1mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備取本發(fā)明制劑日用制劑量的1/15-1/3重量倍，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加甲醇15-35體積份，稱定重量，密塞，浸泡15-40分鐘，超聲處理15-40分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。
測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各0.002-0.015體積份，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
每日用制劑量含辛夷以木蘭脂素C23H28O7計(jì)，不得少于1.5-2.4mg。
本發(fā)明檢測(cè)方法優(yōu)選如下鑒別和含量測(cè)定中的一種或幾種 鑒別 A取本發(fā)明制劑日用制劑量的1/2-3/5重量倍，加乙醚30體積份，浸泡1小時(shí)，時(shí)時(shí)振搖，濾過(guò)，濾液揮干，殘?jiān)右宜嵋阴?體積份使溶解，作為供試品溶液。另取歐前胡素、異歐前胡素對(duì)照品，加乙酸乙酯制成每1ml含歐前胡素、異歐前胡素各1mg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(2005版藥典第一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取對(duì)照品溶液0.001體積份，供試品溶液0.004體積份，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以6∶3∶1的60～90℃石油醚-乙醚-乙酸乙酯為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈在254nm下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
B取本發(fā)明制劑日用制劑量的1/10-1/9重量倍，加甲醇10體積份，密塞，浸泡30分鐘，超聲處理30分鐘，放冷，濾過(guò)，濾液作為供試品溶液。另取木蘭脂素對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含木蘭脂素1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(2005版藥典第一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取對(duì)照品溶液0.001體積份，供試品溶液0.004體積份，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以5∶1∶0.02的三氯甲烷-乙醚-乙酸乙酯，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在90℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的紫紅色斑點(diǎn)。
含量測(cè)定照高效液相色譜法(2005版藥典第一部附錄VI D)測(cè)定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以42∶1∶57的乙腈-四氫呋喃-水為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為278nm。理論板數(shù)按木蘭脂素峰計(jì)算應(yīng)不低于9000。
對(duì)照品溶液的制備精密稱取木蘭脂素對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含木蘭脂素0.1mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備取本發(fā)明制劑日用制劑量的1/9-1/5重量倍，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加甲醇25體積份，稱定重量，密塞，浸泡30分鐘，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。
測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各0.005-0.01體積份，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
每日用制劑量含辛夷以木蘭脂素C23H28O7計(jì)，不得少于1.8mg。
本發(fā)明所述的重量份與體積份的比例為克/毫升。本發(fā)明藥物組合物檢測(cè)方法可以應(yīng)用于組合物的各種劑型，如散劑、顆粒劑、片劑、膠囊劑、分散片、滴丸劑、水丸劑、蜜丸劑、微丸劑、濃縮丸劑、口服液體制劑或注射劑等臨床可接受的劑型，由于不同劑型的制劑其中所含的相當(dāng)生藥量是相同的，因此各個(gè)劑型在進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，所選用樣品量可統(tǒng)一折算為日用制劑量為計(jì)量單位，每單位制劑可以為每片、每粒、每支或每丸等。
本發(fā)明中藥組合物制劑的原料藥組成為 炒蒼耳子150-240重量份 辛夷30-80重量份 白芷105-140重量份 鵝不食草30-80重量份 薄荷150-240重量份 黃芩150-240重量份 甘草30-80重量份 本發(fā)明中藥組合物制劑的原料藥組成優(yōu)選為 炒蒼耳子187.5重量份 辛夷62.5重量份 白芷125重量份 鵝不食草62.5重量份 薄荷187.5重量份 黃芩187.5重量份 甘草62.5重量份 本發(fā)明中藥組合物制劑的原料藥組成優(yōu)選為 炒蒼耳子192.5重量份 辛夷54.5重量份 白芷114重量份 鵝不食草73.5重量份 薄荷195.5重量份 黃芩163.5重量份 甘草57.5重量份 本發(fā)明中藥組合物制劑的原料藥組成優(yōu)選為 炒蒼耳子163.5重量份 辛夷74.5重量份 白芷136重量份 鵝不食草53.5重量份 薄荷162.5重量份 黃芩198.5重量份 甘草76.5重量份 本發(fā)明所述的質(zhì)量檢測(cè)方法中的中藥組合物制劑是取上述原料藥，按照常規(guī)工藝，加入常規(guī)輔料，制成藥學(xué)上可接受的各種劑型，包括但不限于散劑、顆粒劑、片劑、膠囊劑、分散片、滴丸劑、水丸劑、蜜丸劑、微丸劑、濃縮丸劑、軟膠囊劑、緩釋劑、口服液體制劑或注射劑。
圖1本發(fā)明中藥組合物制劑水蜜丸白芷的薄層鑒別(青島預(yù)制板)；1、陰性對(duì)照品溶液；2、歐前胡素、異歐前胡素對(duì)照品溶液；3-5、供試品溶液； 圖2本發(fā)明中藥組合物制劑水蜜丸白芷的薄層鑒別(煙臺(tái)預(yù)制板)；1、陰性對(duì)照品溶液；2、歐前胡素、異歐前胡素對(duì)照品溶液；3-5、供試品溶液； 圖3高濕條件下本發(fā)明中藥組合物制劑水蜜丸白芷的薄層鑒別；1、陰性對(duì)照品溶液；2、歐前胡素、異歐前胡素對(duì)照品溶液；3-5、供試品溶液； 圖4低溫條件下本發(fā)明中藥組合物制劑水蜜丸白芷的薄層鑒別；1、陰性對(duì)照品溶液；2、歐前胡素、異歐前胡素對(duì)照品溶液；3-5、供試品溶液； 圖5本發(fā)明中藥組合物制劑大蜜丸白芷的薄層鑒別(青島預(yù)制板)；1、陰性對(duì)照品溶液；2、歐前胡素、異歐前胡素對(duì)照品溶液；3-5、供試品溶液； 圖6本發(fā)明中藥組合物制劑水蜜丸辛夷的薄層鑒別(青島預(yù)制板)；1、陰性對(duì)照品溶液；2、辛夷對(duì)照品(木蘭脂素)；3-5、供試品溶液； 圖7本發(fā)明中藥組合物制劑水蜜丸辛夷的薄層鑒別(煙臺(tái)預(yù)制板)；1、陰性對(duì)照品溶液；2、辛夷對(duì)照品(木蘭脂素)；3-5、供試品溶液； 圖8高濕條件下本發(fā)明中藥組合物制劑水蜜丸辛夷的薄層鑒別；1、陰性對(duì)照品溶液；2、辛夷對(duì)照品(木蘭脂素)；3-5、供試品溶液； 圖9低溫條件下本發(fā)明中藥組合物制劑水蜜丸辛夷的薄層鑒別；1、陰性對(duì)照品溶液；2、辛夷對(duì)照品(木蘭脂素)；3-5、供試品溶液； 圖10本發(fā)明中藥組合物制劑大蜜丸辛夷的薄層鑒別(青島預(yù)制板)；1、陰性對(duì)照品溶液；2、辛夷對(duì)照品(木蘭脂素)；3-5、供試品溶液； 圖11本發(fā)明中藥組合物制劑水蜜丸薄荷的薄層鑒別(青島預(yù)制板)；1、陰性對(duì)照品溶液；2、薄荷對(duì)照品(薄荷腦)；3-5、供試品溶液； 圖12本發(fā)明中藥組合物制劑水蜜丸薄荷的薄層鑒別(煙臺(tái)預(yù)制板)；1、陰性對(duì)照品溶液；2、薄荷對(duì)照品(薄荷腦)；3-5、供試品溶液； 圖13高濕條件下本發(fā)明中藥組合物制劑水蜜丸薄荷的薄層鑒別；1、陰性對(duì)照品溶液；2、薄荷對(duì)照品(薄荷腦)；3-5、供試品溶液； 圖14低溫條件下本發(fā)明中藥組合物制劑水蜜丸薄荷的薄層鑒別；1、陰性對(duì)照品溶液；2、薄荷對(duì)照品(薄荷腦)；3-5、供試品溶液； 圖15本發(fā)明中藥組合物制劑大蜜丸薄荷的薄層鑒別(青島預(yù)制板)；1、陰性對(duì)照品溶液；2、薄荷對(duì)照品(薄荷腦)；3-5、供試品溶液； 圖16對(duì)照品、供試液、陰性對(duì)照色譜圖 圖17木蘭脂素標(biāo)準(zhǔn)曲線 圖183種型號(hào)色譜柱的液相色譜圖 本發(fā)明對(duì)中藥組合物制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)相比較以前的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了提高和完善，進(jìn)行了白芷中歐前胡素、異歐前胡素，辛夷中木蘭脂素的薄層色譜鑒別，經(jīng)復(fù)核，以上薄層色譜斑點(diǎn)清晰，重現(xiàn)性好，空白無(wú)干擾；同時(shí)采用高效液相色譜法測(cè)定辛夷中木蘭脂素的含量，試驗(yàn)結(jié)果表明木蘭脂素色譜峰與雜質(zhì)峰能較好分離；并且進(jìn)行了準(zhǔn)確度試驗(yàn)，結(jié)果表明本發(fā)明的測(cè)定方法具有良好的準(zhǔn)確度；通過(guò)本發(fā)明的質(zhì)量控制，提高了產(chǎn)品穩(wěn)定性，有利于工業(yè)化生產(chǎn)的質(zhì)量控制。
下面實(shí)驗(yàn)例和實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明但不限于本發(fā)明。
實(shí)驗(yàn)儀器、試劑與試藥 儀器Agilent 1100HPLC系統(tǒng)，Agilent 1200HPLC系統(tǒng)； 試劑乙腈、四氫呋喃為色譜純，水為超純水(自制)，其他試劑為分析純； 對(duì)照品及對(duì)照藥材中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，木蘭脂素(供含量測(cè)定用，(批號(hào)110882-200504，110882-200605)；歐前胡素(含量測(cè)定用，(批號(hào)110826-200712)，異歐前胡素(含量測(cè)定用，批號(hào)110827-200407)，薄荷腦(含量測(cè)定用，批號(hào)110728-200506)。蒼耳子對(duì)照藥材(批號(hào)121168-200604)； 硅膠G薄層色譜預(yù)制板為青島海洋化工廠分廠生產(chǎn)，規(guī)格100×100mm，批號(hào)20090121；為煙臺(tái)化學(xué)工業(yè)研究所生產(chǎn)，規(guī)格SG 100×100mm，批號(hào)20081006，pH6.2-6.8； 樣品由北京同仁堂科技發(fā)展股份有限公司制藥廠提供，批號(hào)8012429、8019001、8013244；8032661、8038177、8038178。下述實(shí)驗(yàn)例中所述的本發(fā)明中藥組合物制劑(水蜜丸、大蜜丸)由實(shí)施例1所述方法制備。
實(shí)驗(yàn)例1白芷的薄層色譜 按實(shí)施例1的方法制備不含白芷的陰性樣品，同法制得陰性對(duì)照品溶液。按實(shí)施例1所述的條件展開(kāi)，結(jié)果陰性對(duì)照試驗(yàn)未見(jiàn)干擾(見(jiàn)附圖1)，。
耐用性考察 分別采用不同品牌薄層預(yù)制板，按實(shí)施例1所述方法操作。附圖1為青島海洋化工廠分廠生產(chǎn)的硅膠G預(yù)制板所得薄層色譜圖；附圖2為煙臺(tái)市化學(xué)工業(yè)研究所生產(chǎn)的硅膠G預(yù)制板所得薄層色譜圖。結(jié)果這兩個(gè)品牌的預(yù)制板中煙臺(tái)市化學(xué)工業(yè)研究所生產(chǎn)的硅膠G預(yù)制板供試液的展開(kāi)效果不理想，陰性樣品略有干擾，而青島海洋化工廠分廠生產(chǎn)的硅膠G預(yù)制板展開(kāi)效果較好，所以建議選用青島海洋化工廠分廠生產(chǎn)的硅膠G預(yù)制板。
考察相對(duì)濕度75％對(duì)薄層鑒別的影響。量取硫酸25ml加水100ml混勻，加入雙槽層析缸的一側(cè)槽中(100×100mm層析缸，加入12ml稀硫酸)，將點(diǎn)樣后的薄層板放入另一側(cè)槽中，密閉放置20分鐘，然后加入展開(kāi)劑，展開(kāi)，紫外光燈(254nm)下觀察。結(jié)果表明高濕時(shí)斑點(diǎn)有擴(kuò)散現(xiàn)象，但對(duì)本鑒別項(xiàng)基本無(wú)影響。見(jiàn)附圖3。
在較低氣溫4～5℃環(huán)境中，按實(shí)施例1所述方法操作。結(jié)果表明低溫時(shí)斑點(diǎn)清晰，展開(kāi)效果較好，見(jiàn)附圖4。
在本發(fā)明中藥組合物制劑水蜜丸薄層鑒別相同的條件下進(jìn)行本發(fā)明中藥組合物制劑大蜜丸白芷的薄層鑒別，結(jié)果表明，該條件亦適用于本發(fā)明中藥組合物制劑大蜜丸白芷的薄層鑒別，見(jiàn)附圖5。
實(shí)驗(yàn)例2辛夷的薄層鑒別 按實(shí)施例1所述方法制備不含辛夷的陰性樣品，同法制得陰性對(duì)照品溶液。依實(shí)施例1所述條件試驗(yàn)，陰性樣品未見(jiàn)干擾(見(jiàn)附圖6)，。
耐用性考察 采用兩個(gè)品牌的預(yù)制板各一塊，按實(shí)施例1所述方法操作。附圖6為青島海洋化工廠分廠生產(chǎn)的硅膠G預(yù)制板所得薄層色譜圖；附圖7為煙臺(tái)市化學(xué)工業(yè)研究所生產(chǎn)的硅膠G預(yù)制板所得薄層色譜圖。結(jié)果使用這兩個(gè)品牌的預(yù)制板均能實(shí)現(xiàn)對(duì)辛夷的薄層鑒別，只是噴顯色劑后，兩種品牌的預(yù)制板斑點(diǎn)顏色不同，且煙臺(tái)市化學(xué)工業(yè)研究所生產(chǎn)的硅膠G預(yù)制板的陰性對(duì)照品略有干擾，故建議選用青島海洋化工廠分廠生產(chǎn)的硅膠G預(yù)制板。
考察相對(duì)濕度75％對(duì)薄層鑒別的影響，試驗(yàn)結(jié)果表明高濕對(duì)供試品溶液的薄層色譜基本無(wú)影響，見(jiàn)附圖8。
在較低氣溫4～5℃環(huán)境中試驗(yàn)，結(jié)果表明低溫時(shí)顯色后供試品溶液的斑點(diǎn)顏色較淺，見(jiàn)附圖9。
在本發(fā)明中藥組合物制劑水蜜丸薄層鑒別相同的條件下進(jìn)行本發(fā)明中藥組合物制劑大蜜丸辛夷的薄層鑒別，結(jié)果表明，該條件亦適用于本發(fā)明中藥組合物制劑大蜜丸辛夷的薄層鑒別，見(jiàn)附圖10。
實(shí)驗(yàn)例3薄荷的薄層鑒別研究 按實(shí)施例1所述方法制備不含薄荷的陰性樣品，同法制得陰性對(duì)照品溶液。依實(shí)施例1所述條件展開(kāi)，結(jié)果陰性對(duì)照試驗(yàn)未見(jiàn)干擾(見(jiàn)附圖11)。
耐用性考察 采用兩個(gè)品牌的預(yù)制板各一塊，按實(shí)施例1所述方法操作。附圖11為青島海洋化工廠分廠生產(chǎn)的硅膠G預(yù)制板所得薄層色譜圖；附圖12為煙臺(tái)市化學(xué)工業(yè)研究所生產(chǎn)的硅膠G預(yù)制板所得薄層色譜圖。結(jié)果煙臺(tái)市化學(xué)工業(yè)研究所生產(chǎn)的硅膠G預(yù)制板的薄層色譜在對(duì)照品相應(yīng)位置上的供試品樣品斑點(diǎn)未能達(dá)到分離，故建議選用青島海洋化工廠分廠生產(chǎn)的硅膠G預(yù)制板。
考察相對(duì)濕度75％對(duì)薄層鑒別的影響，試驗(yàn)結(jié)果表明高濕時(shí)斑點(diǎn)略微散開(kāi)，但對(duì)本鑒別項(xiàng)基本無(wú)影響。見(jiàn)附圖13。
在較低氣溫4～5℃環(huán)境中試驗(yàn)，結(jié)果表明低溫時(shí)顯色后斑點(diǎn)更為清晰，且基本無(wú)擴(kuò)散現(xiàn)象，見(jiàn)附圖14。
在本發(fā)明中藥組合物制劑水蜜丸薄層鑒別相同的條件下進(jìn)行本發(fā)明中藥組合物制劑大蜜丸薄荷的薄層鑒別，結(jié)果表明，該條件亦適用于本發(fā)明中藥組合物制劑大蜜丸薄荷的薄層鑒別，見(jiàn)附圖15。
實(shí)驗(yàn)例4含量測(cè)定 (1)色譜條件及色譜柱 色譜柱
C18色譜柱(4.6×250nm，5μm)，Kromasil C18保護(hù)柱； 流速1.0ml/min，柱溫30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)278nm； 流動(dòng)相乙腈-四氫呋喃-水(42∶1∶57)，見(jiàn)附圖16。
(2)供試品溶液制備的選擇 提取溶劑的選擇 取(水蜜丸)藥丸粉碎，取約2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別精密加入乙酸乙酯、甲醇、50％甲醇各25ml，稱定重量，密塞，浸泡30分鐘，超聲處理30分鐘，放冷，用相應(yīng)的溶劑補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，以微孔濾膜(0.45μm)濾過(guò)，精密吸取10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表1。
表1提取溶劑的選擇結(jié)果
結(jié)果表明，甲醇提取效果最好，故確定提取溶劑為甲醇。
溶劑用量的選擇取(水蜜丸)藥丸粉碎，取約2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別精密加入甲醇15ml、25ml、35ml，稱定重量，密塞，浸泡30分鐘，超聲處理30分鐘，放冷，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，以微孔濾膜(0.45μm)濾過(guò)，精密吸取10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表2。
表2溶劑用量的選擇結(jié)果
根據(jù)測(cè)定結(jié)果確定提取溶劑的量為25ml。
(3)線性關(guān)系的考察 精密稱取13.96mg木蘭脂素對(duì)照品，以少量的甲醇溶解后轉(zhuǎn)入50ml容量瓶中，經(jīng)甲醇多次洗滌，并定容至刻度，搖勻，即得濃度為0.2792mg/ml木蘭脂素對(duì)照品貯備液。取貯備液1ml，分別置25ml、50ml量瓶中，加甲醇至刻度，制備濃度為11.168、5.584μg/ml的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品溶液。再分別取該貯備液8ml、6ml、4ml、2ml、1ml，分別置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，制備濃度為0.22336、0.16752、0.11168、0.05584、0.02792mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品溶液。
另精密稱取13.40mg木蘭脂素對(duì)照品，以少量的甲醇溶解后轉(zhuǎn)入25ml容量瓶中，經(jīng)甲醇多次洗滌，并定容至刻度，搖勻，即得濃度為0.536mg/ml木蘭脂素對(duì)照品貯備液。取該貯備液8ml，10ml容量瓶定容，制備濃度為0.4288mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品溶液。
精密吸取上述對(duì)照品溶液和貯備液各10μl，按已確定的色譜條件測(cè)定峰面積，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，木蘭脂素的進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算得回歸方程為Y＝539.86X+2.9469，r＝0.9999，結(jié)果表3和見(jiàn)附圖17。
實(shí)驗(yàn)表明，木蘭脂素在0.05584～5.36μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。
表3線性關(guān)系
(4)精密度試驗(yàn) 精密吸取水蜜丸供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，每次10μl，測(cè)定峰面積，結(jié)果見(jiàn)表4。
表4精密度試驗(yàn)結(jié)果
結(jié)果表明，本色譜條件下的儀器精密度良好。
(5)重復(fù)性試驗(yàn) 本發(fā)明中藥組合物制劑水蜜丸重復(fù)性試驗(yàn)精密稱取實(shí)施例1制備的粉碎的藥丸(批號(hào)8032661)6份，制成供試品溶液，按實(shí)施例1所述的木蘭脂素含量測(cè)定方法，平行測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表5。
表5重復(fù)性試驗(yàn)(水蜜丸)
結(jié)果表明，本方法的重現(xiàn)性良好。
本發(fā)明中藥組合物制劑大蜜丸重復(fù)性試驗(yàn)精密稱取剪碎的藥丸(批號(hào)8012429)6份，制成供試品溶液，按實(shí)施例1所述的木蘭脂素含量測(cè)定方法，平行測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表6。
表6本發(fā)明中藥組合物制劑大蜜丸重復(fù)性試驗(yàn)及其結(jié)果
結(jié)果表明，本方法的重現(xiàn)性良好。
(6)穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取水蜜丸供試品溶液，按上述色譜條件每隔一定時(shí)間測(cè)定其峰面積，每次進(jìn)樣10μl，考察樣品溶液的穩(wěn)定性，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，結(jié)果見(jiàn)表7。
表7穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果
結(jié)果表明，水蜜丸供試品溶液在24h內(nèi)是穩(wěn)定的。
(7)準(zhǔn)確度試驗(yàn) 采用加樣回收實(shí)驗(yàn)法。
本發(fā)明中藥組合物制劑(水蜜丸)取已知木蘭脂素含量的樣品(批號(hào)8032661，含量1.834mg/g)1g，精密稱定，精密加入木蘭脂素對(duì)照品溶液(0.0792mg/ml)25ml，按實(shí)施例1所述方法制成供試品溶液，平行制備6份，按上述色譜條件測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表8。
表8回收率試驗(yàn)及其結(jié)果
結(jié)果表明，本法回收率良好。
本發(fā)明中藥組合物制劑(大蜜丸)取已知木蘭脂素含量的樣品(批號(hào)8012429，含量1.129mg/g)2g，精密稱定，精密加入木蘭脂素對(duì)照品溶液(0.0944mg/g)25ml，按實(shí)施例1所述方法制成供試品溶液，平行制備6份，按上述色譜條件測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表9。
表9回收率試驗(yàn)及其結(jié)果
結(jié)果表明，本法回收率良好。
(8)耐用性試驗(yàn) 另選取2種不同型號(hào)的色譜柱，在相同條件下，測(cè)定同一個(gè)水蜜丸供試品溶液(批號(hào)8032661)，結(jié)果見(jiàn)附圖18和表10。
表10適用性試驗(yàn)結(jié)果
結(jié)果表明，在此色譜條件下，3種型號(hào)色譜柱的木蘭脂素峰與其它峰均達(dá)到基線分離，且三種色譜柱所測(cè)定含量差異不大。
(9)范圍 本發(fā)明中藥組合物制劑水蜜丸適用范圍 下限取已知木蘭脂素含量的樣品(批號(hào)8032661，含量1.834mg/g)0.5g，精密稱定，精密加入木蘭脂素對(duì)照品溶液(0.042mg/ml)25ml，按實(shí)施例1所述方法制成供試品溶液，平行制備6份，按上述色譜條件測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表11。
表11回收率試驗(yàn)及其結(jié)果
結(jié)果表明，本法回收率良好。
上限取已知木蘭脂素含量的樣品(批號(hào)8032661，含量1.834mg/g)3g，精密稱定，精密加入木蘭脂素對(duì)照品溶液(0.2216mg/ml)25ml，按實(shí)施例1所述方法制成供試品溶液，平行制備6份，按上述色譜條件測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表12。
表12回收率試驗(yàn)及其結(jié)果
結(jié)果表明，本法回收率良好。
本發(fā)明中藥組合物制劑大蜜丸適用范圍 下限取已知木蘭脂素含量的樣品(批號(hào)8012429，含量1.129mg/g)1g，精密稱定，精密加入木蘭脂素對(duì)照品溶液(0.0456mg/ml)25ml，按實(shí)施例1所述方法制成供試品溶液，平行制備6份，按上述色譜條件測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表13。
表13回收率試驗(yàn)及其結(jié)果
結(jié)果表明，本法回收率良好。
上限取已知木蘭脂素含量的樣品(批號(hào)8012429，含量1.129mg/g)6g，精密稱定，精密加入木蘭脂素對(duì)照品溶液(0.2668mg/ml)25ml，按實(shí)施例1所述方法制成供試品溶液，平行制備6份，按上述色譜條件測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表14。
表14回收率試驗(yàn)及其結(jié)果
結(jié)果表明，本法回收率良好。
(10)樣品的含量測(cè)定 本發(fā)明中藥組合物制劑水蜜丸三批樣品的含量測(cè)定取樣品，按實(shí)施例1所述方法測(cè)定，計(jì)算含量。樣品測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表15。
表15三批樣品含量測(cè)定結(jié)果表
結(jié)果表明，三批樣品中木蘭脂素含量基本穩(wěn)定，結(jié)合藥典中辛夷項(xiàng)下有關(guān)規(guī)定，本發(fā)明中藥組合物制劑(水蜜丸)中辛夷以木蘭脂素計(jì)，每1g不得少于0.18mg。
本發(fā)明中藥組合物制劑大蜜丸三批樣品的含量測(cè)定取樣品，按實(shí)施例1所述方法測(cè)定，計(jì)算含量。樣品測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表16。
表16三批樣品含量測(cè)定結(jié)果表
結(jié)果表明，三批樣品中木蘭脂素含量基本穩(wěn)定，結(jié)合藥典中辛夷項(xiàng)下有關(guān)規(guī)定，本發(fā)明中藥組合物制劑(大蜜丸)中辛夷以木蘭脂素計(jì)，每丸不得少于0.90mg。
(11)轉(zhuǎn)移率按《中國(guó)藥典》2005年版一部辛夷項(xiàng)下木蘭脂素的含量不得少于0.40％，計(jì)算轉(zhuǎn)移率，水蜜丸為91.3％，大蜜丸為91.0％。
實(shí)驗(yàn)例5標(biāo)準(zhǔn)復(fù)核及方法學(xué)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn) 1.性狀與樣品實(shí)際性狀相符。
2.鑒別(1)為白芷中歐前胡素、異歐前胡素的薄層色譜；(2)為辛夷中木蘭脂素的薄層色譜；經(jīng)復(fù)核，以上薄層色譜斑點(diǎn)清晰，重現(xiàn)性好，空白無(wú)干擾。
3.含量測(cè)定采用高效液相色譜法測(cè)定辛夷中木蘭脂素的含量，規(guī)定大蜜丸木蘭脂素不得少于0.90mg/丸；水蜜丸不得少于0.18mg/g。試驗(yàn)結(jié)果表明木蘭脂素色譜峰與雜質(zhì)峰能較好分離，經(jīng)復(fù)核，九批樣品含量均符合規(guī)定，見(jiàn)表17、表18。
表17本發(fā)明中藥組合物制劑(大蜜丸)木蘭脂素含量測(cè)定數(shù)據(jù)
表18本發(fā)明中藥組合物制劑(水蜜丸)木蘭脂素含量測(cè)定數(shù)據(jù)(mg/g)
4.空白試驗(yàn)按處方中藥味比例，配制不含辛夷的群藥，按其制法制成空白制劑，按供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照溶液，依法測(cè)定，結(jié)果空白溶液在與木蘭脂素對(duì)照品溶液相同保留時(shí)間處未出現(xiàn)色譜峰，空白無(wú)干擾。
5.重復(fù)性試驗(yàn)取同一批樣品(批號(hào)8012429)，平行制備3份進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表19。
表19重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果(mg/丸)
6.準(zhǔn)確度試驗(yàn)采用加樣回收法，精密稱取已知含量的同一批樣品(批號(hào)8012429，木蘭脂素含量為1.238mg/g)0.5g，精密加入木蘭脂素對(duì)照品溶液(含木蘭脂素0.04968mg/ml)25ml，照實(shí)施例1所述含量測(cè)定項(xiàng)下操作，平行制備3份，依法測(cè)定，結(jié)果表明本方法具有良好的準(zhǔn)確度，數(shù)據(jù)見(jiàn)表20。
表20準(zhǔn)確度試驗(yàn)數(shù)據(jù)
下述實(shí)施例均能實(shí)現(xiàn)上述實(shí)驗(yàn)例的效果。
具體實(shí)施例方式 實(shí)施例1本發(fā)明中藥組合物丸劑的檢測(cè)方法 炒蒼耳子187.5g 辛夷62.5g白芷125g 鵝不食草62.5g 薄荷187.5g 黃芩187.5g 甘草62.5g 取上述七味原料藥，粉碎成細(xì)粉，過(guò)篩，混勻，每100g粉末加煉蜜40～50g，制成水蜜丸；或每100g粉末加煉蜜150～170g，制成大蜜丸。
鑒別 A取水蜜丸6g，粉碎，或取大蜜丸9g，剪碎；加乙醚30ml，浸泡1小時(shí)，時(shí)時(shí)振搖，濾過(guò)，濾液揮干，殘?jiān)右宜嵋阴?ml使溶解，作為供試品溶液。另取歐前胡素、異歐前胡素對(duì)照品，加乙酸乙酯制成每1ml含歐前胡素、異歐前胡素各1mg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(2005版藥典第一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取對(duì)照品溶液1μl，供試品溶液4μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以6∶3∶1的60～90℃石油醚-乙醚-乙酸乙酯為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置254nm的紫外光燈下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
B取水蜜丸1g，粉碎，或取大蜜丸2g，剪碎；加甲醇10ml，密塞，浸泡30分鐘，超聲處理30分鐘，放冷，濾過(guò)，濾液作為供試品溶液。另取木蘭脂素對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含木蘭脂素1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(2005版藥典第一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取對(duì)照品溶液1μl，供試品溶液4μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以5∶1∶0.02的三氯甲烷-乙醚-乙酸乙酯，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在90℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的紫紅色斑點(diǎn)。
含量測(cè)定照高效液相色譜法(2005版藥典第一部附錄VI D)測(cè)定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以42∶1∶57的乙腈-四氫呋喃-水為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為278nm。理論板數(shù)按木蘭脂素峰計(jì)算應(yīng)不低于9000。
對(duì)照品溶液的制備精密稱取木蘭脂素對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含木蘭脂素0.1mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備取水蜜丸適量，粉碎，取約2g，精密稱定，或取重量差異項(xiàng)下的大蜜丸，剪碎，取約2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加甲醇25ml，稱定重量，密塞，浸泡30分鐘，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。
測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各5～10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
每日用制劑量含辛夷以木蘭脂素C23H28O7計(jì)，不得少于1.8mg。
用法與用量口服。水蜜丸一次5g，大蜜丸一次1丸，一日2次。
規(guī)格水蜜丸每100粒重20g；大蜜丸每丸重9g。
實(shí)施例2本發(fā)明中藥組合物散劑的檢測(cè)方法 炒蒼耳子192.5g辛夷54.5g 白芷114g 鵝不食草73.5g 薄荷195.5g黃芩163.5g 甘草57.5g 取上述七味原料藥，粉碎成細(xì)粉，過(guò)篩，混勻，加入常規(guī)輔料，按照常規(guī)工藝，制成散劑。
鑒別 A取散劑日用制劑量的2/5，加乙醚25ml，浸泡1.2小時(shí)，時(shí)時(shí)振搖，濾過(guò)，濾液揮干，殘?jiān)右宜嵋阴?.2ml使溶解，作為供試品溶液。另取歐前胡素、異歐前胡素對(duì)照品，加乙酸乙酯制成每1ml含歐前胡素、異歐前胡素各1mg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(2005版藥典第一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取對(duì)照品溶液0.8μl，供試品溶液3μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以5∶2∶1.2的60～90℃石油醚-乙醚-乙酸乙酯為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置254nm的紫外光燈下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
B取散劑日用制劑量的1/15，加甲醇9ml，密塞，浸泡35分鐘，超聲處理35分鐘，放冷，濾過(guò)，濾液作為供試品溶液。另取木蘭脂素對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含木蘭脂素1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(2005版藥典第一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取對(duì)照品溶液0.8μl，供試品溶液5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以6∶1.2∶0.015的三氯甲烷-乙醚-乙酸乙酯，展開(kāi)，取出，晾干，噴以12％硫酸乙醇溶液，在90℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的紫紅色斑點(diǎn)。
含量測(cè)定為照高效液相色譜法(2005版藥典第一部附錄VI D)測(cè)定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以48∶0.8∶54的乙腈-四氫呋喃-水為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為278nm。理論板數(shù)按木蘭脂素峰計(jì)算應(yīng)不低于9000。
對(duì)照品溶液的制備精密稱取木蘭脂素對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含木蘭脂素1mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備取散劑日用制劑量的2/15，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加甲醇20ml，稱定重量，密塞，浸泡35分鐘，以功率250W、頻率40kHz進(jìn)行超聲處理35分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。
測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各6～8μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
每日用制劑量含辛夷以木蘭脂素C23H28O7計(jì)，不得少于1.6mg。
實(shí)施例3本發(fā)明中藥組合物片劑的檢測(cè)方法 炒蒼耳子163.5g 辛夷74.5g 白芷136g 鵝不食草53.5g 薄荷162.5g 黃芩198.5g 甘草76.5g 取上述七味原料藥，粉碎成細(xì)粉，過(guò)篩，混勻，加入常規(guī)輔料，按照常規(guī)工藝，制成片劑。
鑒別 A取片劑日用制劑量的4/5，加乙醚40ml，浸泡1.4小時(shí)，時(shí)時(shí)振搖，濾過(guò)，濾液揮干，殘?jiān)右宜嵋阴?.4ml使溶解，作為供試品溶液。另取歐前胡素、異歐前胡素對(duì)照品，加乙酸乙酯制成每1ml含歐前胡素、異歐前胡素各1mg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(2005版藥典第一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取對(duì)照品溶液1.2μl，供試品溶液6μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以7∶4∶1.3的60～90℃石油醚-乙醚-乙酸乙酯為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置254nm的紫外光燈下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
B取片劑日用制劑量的1/6，加甲醇12ml，密塞，浸泡40分鐘，超聲處理40分鐘，放冷，濾過(guò)，濾液作為供試品溶液。另取木蘭脂素對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含木蘭脂素1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(2005版藥典第一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取對(duì)照品溶液1.2μl，供試品溶液6μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以7∶1.4∶0.025的三氯甲烷-乙醚-乙酸乙酯，展開(kāi)，取出，晾干，噴以12％硫酸乙醇溶液，在90℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的紫紅色斑點(diǎn)。
含量測(cè)定為照高效液相色譜法(2005版藥典第一部附錄VI D)測(cè)定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以45∶1.2∶60的乙腈-四氫呋喃-水為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為278nm。理論板數(shù)按木蘭脂素峰計(jì)算應(yīng)不低于9000。
對(duì)照品溶液的制備精密稱取木蘭脂素對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含木蘭脂素1mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備取片劑日用制劑量的4/15，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加甲醇30ml，稱定重量，密塞，浸泡40分鐘，以功率250W、頻率40kHz進(jìn)行超聲處理40分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。
測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各8～12μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
每日用制劑量含辛夷以木蘭脂素C23H28O7計(jì)，不得少于2.0mg。
實(shí)施例4本發(fā)明中藥組合物口服液體制劑的鑒別方法 炒蒼耳子210.5g 辛夷45.5g 白芷120g 鵝不食草68.5g 薄荷220g 黃芩174.5g 甘草38.5g 取上述七味原料藥，按照常規(guī)方法提取，加入常規(guī)輔料，按照常規(guī)工藝，制成口服液體制劑。
鑒別 A取口服液體制劑日用制劑量的1/5，加乙醚20ml，浸泡0.8小時(shí)，時(shí)時(shí)振搖，濾過(guò)，濾液揮干，殘?jiān)右宜嵋阴?.8ml使溶解，作為供試品溶液。另取歐前胡素、異歐前胡素對(duì)照品，加乙酸乙酯制成每1ml含歐前胡素、異歐前胡素各1mg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(2005版藥典第一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取對(duì)照品溶液0.6μl，供試品溶液3μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以4∶2∶0.8的60～90℃石油醚-乙醚-乙酸乙酯為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置254nm的紫外光燈下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
B取口服液體制劑日用制劑量的1/18，加甲醇8ml，密塞，浸泡25分鐘，超聲處理25分鐘，放冷，濾過(guò)，濾液作為供試品溶液。另取木蘭脂素對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含木蘭脂素1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(2005版藥典第一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取對(duì)照品溶液0.6μl，供試品溶液3μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以4∶0.8∶0.013的三氯甲烷-乙醚-乙酸乙酯，展開(kāi)，取出，晾干，噴以12％硫酸乙醇溶液，在90℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的紫紅色斑點(diǎn)。
實(shí)施例5本發(fā)明中藥組合物膠囊制劑的含量測(cè)定方法 炒蒼耳子176.5g 辛夷68.5g白芷130g 鵝不食草45.5g 薄荷174.5g 黃芩230.5g 甘草67.5g 取上述七味原料藥，粉碎成細(xì)粉，過(guò)篩，混勻，加入常規(guī)輔料，按照常規(guī)工藝，制成膠囊制劑。
含量測(cè)定為照高效液相色譜法(2005版藥典第一部附錄VI D)測(cè)定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以48∶1.4∶62的乙腈-四氫呋喃-水為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為278nm。理論板數(shù)按木蘭脂素峰計(jì)算應(yīng)不低于9000。
對(duì)照品溶液的制備精密稱取木蘭脂素對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含木蘭脂素1mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備取膠囊制劑日用制劑量的4/15，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加甲醇32ml，稱定重量，密塞，浸泡40分鐘，以功率250W、頻率40kHz進(jìn)行超聲處理40分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。
測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10～14μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
每日用制劑量含辛夷以木蘭脂素C23H28O7計(jì)，不得少于2.2mg。
權(quán)利要求
1.一種中藥組合物制劑的檢測(cè)方法，其特征在于該方法包括如下鑒別和含量測(cè)定中的一種或幾種
鑒別
A取本發(fā)明制劑日用制劑量的1/10-9/10重量倍；加乙醚10-45體積份，浸泡0.5-1.5小時(shí)，時(shí)時(shí)振搖，濾過(guò)，濾液揮干，殘?jiān)右宜嵋阴?.5-1.5體積份使溶解，作為供試品溶液；另取歐前胡素、異歐前胡素對(duì)照品，加乙酸乙酯制成每1ml含歐前胡素、異歐前胡素各1mg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取對(duì)照品溶液0.0005-0.0015體積份，供試品溶液0.002-0.007體積份，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以4-10∶1-5∶0.5-1.5的60～90℃石油醚-乙醚-乙酸乙酯為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈在254nm下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；
B取本發(fā)明制劑日用制劑量的1/18-1/3重量倍；加甲醇6-12體積份，密塞，浸泡15-40分鐘，超聲處理15-40分鐘，放冷，濾過(guò)，濾液作為供試品溶液；另取木蘭脂素對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含木蘭脂素1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取對(duì)照品溶液0.0005-0.0015體積份，供試品溶液0.002-0.006體積份，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以2-8∶0.5-1.5∶0.01-0.03的三氯甲烷-乙醚-乙酸乙酯，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在90℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的紫紅色斑點(diǎn)；
含量測(cè)定照高效液相色譜法測(cè)定；
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以35-50∶0.5-1.5∶50-65的乙腈-四氫呋喃-水為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為278nm；理論板數(shù)按木蘭脂素峰計(jì)算應(yīng)不低于9000；
對(duì)照品溶液的制備精密稱取木蘭脂素對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含木蘭脂素0.1mg的溶液，即得；
供試品溶液的制備取本發(fā)明制劑日用制劑量的1/15-1/3重量倍，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加甲醇15-35體積份，稱定重量，密塞，浸泡15-40分鐘，超聲處理15-40分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得；
測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各0.002-0.015體積份，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；
每日用制劑量含辛夷以木蘭脂素C23H28O7計(jì)，不得少于1.5-2.4mg；
其中所述中藥組合物的原料藥組成為
炒蒼耳子150-240重量份 辛夷30-80重量份 白芷105-140重量份 鵝不食草30-80重量份 薄荷150-240重量份 黃芩150-240重量份 甘草30-80重量份。
2.如權(quán)利要求1所述的一種中藥組合物制劑的檢測(cè)方法，其特征在于該方法包括如下鑒別和含量測(cè)定中的一種或幾種
鑒別
A取本發(fā)明制劑日用制劑量的1/2-3/5重量倍，加乙醚30體積份，浸泡1小時(shí)，時(shí)時(shí)振搖，濾過(guò)，濾液揮干，殘?jiān)右宜嵋阴?體積份使溶解，作為供試品溶液；另取歐前胡素、異歐前胡素對(duì)照品，加乙酸乙酯制成每1ml含歐前胡素、異歐前胡素各1mg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取對(duì)照品溶液0.001體積份，供試品溶液0.004體積份，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以6∶3∶1的60～90℃石油醚-乙醚-乙酸乙酯為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈在254nm下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；
B取本發(fā)明制劑日用制劑量的1/10-1/9重量倍，加甲醇10體積份，密塞，浸泡30分鐘，超聲處理30分鐘，放冷，濾過(guò)，濾液作為供試品溶液；另取木蘭脂素對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含木蘭脂素1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取對(duì)照品溶液0.001體積份，供試品溶液0.004體積份，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以5∶1∶0.02的三氯甲烷-乙醚-乙酸乙酯，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在90℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的紫紅色斑點(diǎn)；
含量測(cè)定照高效液相色譜法測(cè)定；
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以42∶1∶57的乙腈-四氫呋喃-水為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為278nm；理論板數(shù)按木蘭脂素峰計(jì)算應(yīng)不低于9000；
對(duì)照品溶液的制備精密稱取木蘭脂素對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含木蘭脂素0.1mg的溶液，即得；
供試品溶液的制備取本發(fā)明制劑日用制劑量的1/9-1/5重量倍，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加甲醇25體積份，稱定重量，密塞，浸泡30分鐘，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得；
測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各0.005-0.01體積份，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；
每日用制劑量含辛夷以木蘭脂素C23H28O7計(jì)，不得少于1.8mg。
3.如權(quán)利要求1或2所述的一種中藥組合物制劑的檢測(cè)方法，其特征在于該方法中藥組合物的原料藥組成為
炒蒼耳子187.5重量份 辛夷62.5重量份 白芷125重量份
鵝不食草62.5重量份 薄荷187.5重量份 黃芩187.5重量份
甘草62.5重量份。
4.如權(quán)利要求3所述的一種中藥組合物制劑的檢測(cè)方法，其特征在于該方法中藥組合物的原料藥組成為
炒蒼耳子192.5重量份 辛夷54.5重量份 白芷114重量份
鵝不食草73.5重量份 薄荷195.5重量份 黃芩163.5重量份
甘草57.5重量份。
5.如權(quán)利要求3所述的一種中藥組合物制劑的檢測(cè)方法，其特征在于該方法中藥組合物的原料藥組成為
炒蒼耳子163.5重量份 辛夷74.5重量份 白芷136重量份
鵝不食草53.5重量份 薄荷162.5重量份 黃芩198.5重量份
甘草76.5重量份。
6.如權(quán)利要求1、2、4或5所述的一種中藥組合物制劑的檢測(cè)方法，其特征在于該方法中藥組合物制劑為
取原料藥，按照常規(guī)工藝，加入常規(guī)輔料，制成藥學(xué)上可接受的各種劑型，包括但不限于散劑、顆粒劑、片劑、膠囊劑、丸劑、口服液體制劑或注射劑。
7.如權(quán)利要求3所述的一種中藥組合物制劑的檢測(cè)方法，其特征在于該方法中藥組合物制劑為
取原料藥，按照常規(guī)工藝，加入常規(guī)輔料，制成藥學(xué)上可接受的各種劑型，包括但不限于散劑、顆粒劑、片劑、膠囊劑、丸劑、口服液體制劑或注射劑。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種中藥組合物制劑的檢測(cè)方法，其中所述的中藥組合物制劑是取原料藥，加入常規(guī)輔料，按照常規(guī)工藝制成藥學(xué)上可接受的各種劑型。檢測(cè)方法包括鑒別和含量測(cè)定對(duì)白芷中歐前胡素、異歐前胡素，辛夷中木蘭脂素的薄層色譜鑒別，經(jīng)復(fù)核，以上薄層色譜斑點(diǎn)清晰，重現(xiàn)性好，空白無(wú)干擾；同時(shí)對(duì)辛夷中木蘭脂素的含量采用高效液相色譜法測(cè)定，結(jié)果表明木蘭脂素色譜峰與雜質(zhì)峰能較好分離；通過(guò)本發(fā)明的質(zhì)量控制，提高了產(chǎn)品穩(wěn)定性，有利于工業(yè)化生產(chǎn)的質(zhì)量控制。
文檔編號(hào)A61K36/575GK101744887SQ201010034408
公開(kāi)日2010年6月23日 申請(qǐng)日期2010年1月15日 優(yōu)先權(quán)日2010年1月15日
發(fā)明者劉瑩, 秦文杰, 易劍平, 遲玉明, 解素花 申請(qǐng)人:北京同仁堂科技發(fā)展股份有限公司