專利名稱：用于炎癥、皮膚病、粘膜病以及其它相關(guān)疾病治療的外用制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及納米乳化外用制劑，其包括姜黃素，四羥基姜黃素/雙氧去甲基姜黃素(BDMC)或姜黃素類化合物，該制劑為單獨的或者以0. 001%至50%的含量與一種或多種藥物、保健品或食品可接受的賦形劑或失活劑混合，可有效用于炎癥，各種皮膚病、粘膜病以及其它相關(guān)疾病的治療。
背景技術(shù)：
人體皮膚由三個主要層組成表皮層，其提供防水并作為感染屏障；真皮層，其作為用于外皮附著的位置；和皮下組織，也稱為基底膜。皮膚病涉及表皮，即皮膚的最外層。 這可能是由于細菌，病毒或真菌感染。皮膚病可能是人體系統(tǒng)失調(diào)的一種跡象。牛皮癬是一種影響皮膚和關(guān)節(jié)的非傳染性疾病。由牛皮癬引起的鱗斑稱為牛皮癬斑，是皮膚發(fā)炎和過度產(chǎn)生的區(qū)域。該疾病是一種慢性反復疾病，從輕微局部區(qū)域至身體完全覆蓋的不同嚴重程度。雖然有許多治療方法可用，但由于其慢性反復的特性，牛皮癬的治療是一個挑戰(zhàn)。在牛皮癬病理生理學中，牛皮癬的成分不經(jīng)常集中存在于有問題的皮膚屏障上。 因為表皮更新快迅，在活性牛皮癬中表皮每4天更換一次，牛皮癬患者感覺具有屏障功能的問題皮膚屏障像似無用。相反，在正常皮膚中，表皮每觀-30天更換一次。其結(jié)果是具有非常強屏障功能的角質(zhì)層不讓水或化學物質(zhì)滲入和細菌滲透。因此，身體可更好的對進一步的損傷和感染進行保護。牛皮癬，皮膚傷口，痤創(chuàng)，燒傷，濕疹，煙霧誘導損傷是皮膚重要的病理條件。雖然目前對于這些疾病有許多治療方法，但需要一種更有效的治療方法，特別是在治療由金黃色葡萄球菌與其他一些疾病一起在表皮細菌過度生長的疾病。這些疾病經(jīng)常伴隨炎癥，其通過炎性細胞如淋巴細胞和巨噬細胞等分泌一種炎性細胞激素，或通過一種局部或區(qū)域活性物質(zhì)如組胺，緩激肽，血清素，前列腺素，血栓素，白三烯和血小板活化劑等引起的。然而，這些疾病具有相同的平臺或病理機制即炎癥。特別是，了解重要的炎癥機制將有助于了解牛皮癬的因素和炎癥疾病與其他疾病的關(guān)系，以便于研制用于皮膚傷害如創(chuàng)傷，燒傷，濕疹，痤瘡等更有效的治療。在非牛皮癬對象中，也可通過各種感染性或過敏性刺激如痤瘡，濕疹來引起炎癥， 以及通過各種物理和化學刺激如燒傷，創(chuàng)傷，煙霧/尼古丁引起損傷和太陽引起皮膚損傷來導致過早老化。這些非牛皮癬炎癥損傷均顯示磷酸激酶水平的提高。在這些疾病中，由于在炎癥級聯(lián)過程中，由磷酸激酶活性的增加來確保多重能量依賴的ATP存儲量的增加， 從而導致糖原分解的增加。盡管對牛皮癬的生化和遺傳起源以及痤瘡，濕疹，燒傷，創(chuàng)傷，煙霧/尼古丁誘導損傷和太陽誘導皮膚損傷，以及過早老化，以及其他疾病通過炎癥引起組織損傷的病理清楚，但仍然需要一個更加有效的藥物混合物，可有效治療牛皮癬，痤瘡，濕疹，燒傷，創(chuàng)傷，煙霧/尼古丁引起損傷，太陽引起皮膚損傷和過早老化，以及其他疾病通過炎癥引起的組織損傷。特別是，需要一個有效治療混合物，可在目標位置減少炎癥和對細菌生長過度的情況也有效，同樣也需要一個有效治療方法，可對減少組織過度疤痕和有害增殖響應對皮膚和血管的損傷反應。特別是，煙霧和陽光引起的炎癥損傷能導致過早老化。對這些疾病中的炎癥抑制，如通過抑制磷酸激酶活性，可預防皮膚被太陽損傷和慢性煙霧者皮膚過早老化。 對燒傷和燙傷及時治療，通過抑制磷酸激酶活性，可減少或防止疤痕過度發(fā)展。在市場上有很多用于治療牛皮癬的合成藥物產(chǎn)品，然而，由于其慢性反復的特性， 牛皮癬的治療是一個挑戰(zhàn)。美國專利6515016公開了一種用于牛皮癬治療或預防的方法，包括在需要時給患者給藥一種治療有效劑量的抑微管劑，其中所述的抗微管劑是紫杉醇，或類似物或其衍生物。美國專利6107349公開了一種用于治療患者身上的牛皮癬的方法，包括給所述患者連續(xù)口服給藥一種治療劑量的由月見草油維生素E，葉酸和復合B族維生素包括維生素 Bi，維生素B2，維生素B3，維生素B6，維生素B12，生物素，對氨基苯甲酸和抗脂肪肝劑的混合物。美國專利6830758權(quán)利要求，一種用于治療或防止牛皮癬，皮炎，和/或濕疹的，不溶于水，防護，粘接皮膚的有效粘貼劑。此外，還有很多用于治療牛皮癬的中草藥混合物的文獻。W0/2003/057133提供了一種新的含有墨西哥薊罌粟葉和/或莖的提取物，可選含有孜然果實提取物的中草藥混合物，其在體外，體內(nèi)以及對免疫和藥理活性表現(xiàn)有效；一種用于制備步驟；和一種通過給藥所述的新中草藥混合物用于治療牛皮癬以及相關(guān)的免疫和生物疾病的方法。美國專利5925376公開了一種用于牛皮癬表皮細胞抑制增殖和后期變異的方法， 包括用一定給藥劑量的姜黃素接觸牛皮癬表皮細胞的步驟并通過以下所選途徑(a)每天口服給藥250mg至2g，和(b) —種半固體劑型，一至四種添加混合物一起組成濃度從0. 1% 至10 %的軟膏/乳膏/乳液，各種添加混合物分別是(i)軟膏0. 005 %的1- α，25- 二羥基維生素D3 ;(ii)25mg劑量的依曲替酯每日給藥1至3次；(iii)60mg劑量的地爾硫卓每日給藥3次；和(iv)軟膏或糨糊濃度約0. 至3%的蒽啉每日1或2次給藥；(ν)膠原蛋白以軟膏/乳膏/凝膠給藥。美國專利20080058426公開了一種乳膏混合物，包括含有70_80%四氫姜黃素， 15-20%四氫去甲氧基姜黃素和2. 5-6. 5%四氫二去甲氧基姜黃素的氫化姜黃素混合物。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)姜黃素是一種選擇性的磷酸激酶抑制劑(雷迪S，阿加沃爾ΒΒ，姜黃素是一種磷酸激酶的非競爭性和選擇性抑制劑，F(xiàn)EBS快報1994 ；341 19-22)。同樣，用姜黃素抑制磷酸激酶活性來解決牛皮癬(恒MCY等，采用臨床，組織學和免疫組織化學參數(shù)對藥物誘導抑制磷酸激酶活性與解決牛皮癬的相關(guān)性的評估，英國雜志皮膚科 2000 ； 143 :937-949)。最后已有用于治療牛皮癬多種藥物混合物公開，盡管沒有論述混合物包括四羥基姜黃素/雙氧去甲基姜黃素(BDMC)，姜黃素，姜黃素類化合物，這是本發(fā)明的獨特之處以及一個重要方面。因此，需要一個用來開發(fā)中草藥制劑的文獻，其論述包括炎癥和自由基在動物體內(nèi)產(chǎn)生的問題。因此，本申請公開了一種納米乳化外用制劑，包括姜黃素，四羥基姜黃素/雙氧去甲基姜黃素(BDMC)或任何其他姜黃素類化合物以單獨或與一種或多種藥學上可接受的賦形劑或用于治療牛皮癬以及炎癥適合的無活性原料一起混合，其主要疾病包括但不限于痤瘡，濕疹，皮膚創(chuàng)傷，燒傷，煙霧/尼古丁引起損傷，過早老化，陽光引起損傷。發(fā)明概述本發(fā)明公開了一種納米乳化外用制劑，其包括姜黃素，四羥基姜黃素/雙氧去甲基姜黃素或姜黃素類化合物，該制劑為單獨的或者以0. 001%至50%的含量與一種或多種藥物、保健品或食品可接受的賦形劑或失活劑混合，可有效用于治療如牛皮癬、痤瘡、濕疹、 皮膚創(chuàng)傷、燒傷、煙霧/尼古丁引起損傷、過早老化、陽光引起損傷的炎癥疾病，還可以治療粘膜病。此外本發(fā)明還公開了一種對患有如牛皮癬、痤瘡、濕疹、皮膚創(chuàng)傷、燒傷、煙霧/尼古丁引起損傷、過早老化、陽光引起損傷的炎癥疾病和粘膜病的動物進行治療的方法。


圖-1 顯示了納米乳化的姜黃素98%的大小。圖-2 顯示了未成形的姜黃素98%的大小。圖-3 顯示了納米乳化的BDMC的大小。圖-4 組織病理學顯示了小鼠尾巴的T. S(對照組)。圖-5 組織病理學顯示了小鼠尾巴的T. S(空白組)。圖-6 組織病理學顯示了用煤焦油處理后的小鼠尾巴。圖-7 組織病理學顯示了用水溶性姜黃素處理后的小鼠尾巴的T. S。圖-8 組織病理學顯示了用制劑姜黃素處理后的小鼠尾巴的T. S。圖-9 研究顯示，TNF-α處理組相對于TNF-α未處理對照組在調(diào)控下的基因折疊> 2. 0的選擇接受分層聚集(圖9a)。TNF-α處理后的正調(diào)控下的基因主要聚集，但在 BDMC/姜黃素/姜黃素類化合物的獨特調(diào)控下成為DC (圖9Β)或C95敏感基因(圖9C)。圖10 使用DAVID (注釋，可視化和集成發(fā)現(xiàn)數(shù)據(jù)庫，NIAID, NTH)通過功能分析來鑒定候選基因(粘著斑)。圖-11 使用DAVID (注釋，可視化和集成發(fā)現(xiàn)數(shù)據(jù)庫，NIAID, NTH)通過功能分析來鑒定候選基因。發(fā)明詳述下面將結(jié)合一些優(yōu)選的選擇性實施例來進詳細說明本發(fā)明，從而可以更充分地理解和說明本發(fā)明的各種方面。本文中，術(shù)語“姜黃素類化合物”指一種姜黃素，去甲氧姜黃素和雙去甲氧姜黃素的混合物。本文中，詞組“本發(fā)明的混合物”指含有“姜黃素”或“四羥基姜黃素”或“姜黃素類化合物”或“它們的混合物”或者本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員公知的替換物。如上文所述，在一個實施例中，四羥基姜黃素或雙氧去甲基姜黃素，[一種制備四羥基姜黃素或雙氧去甲基姜黃素的方法已經(jīng)在我們之前申請的申請?zhí)枮镻CT/IN05/00337 的PCT申請中公開了用于眼藥PCT/IN2009/000650的藥物前體(BDMC/姜黃素)PCT/ IN2009/000382姜黃素/BDMC]在本發(fā)明中用于治療如牛皮癬、痤瘡、濕疹、創(chuàng)傷、燒傷、皮膚光損傷和光老化等皮膚問題。四羥基姜黃素/雙氧去甲基姜黃素，通過改良的生物分子標記，如腫瘤壞死因子-α (TNF-α)，基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)，白細胞介素，干擾素Y (IFN γ)或通過抑制酶， 如蛋白激酶C (H(C)，抑制磷酸激酶活性來處理抗氧化活性，從而根據(jù)患有牛皮癬時角質(zhì)層的不良狀況來降低表皮的快速代謝，從而使之變成正常皮膚時的表皮屏障，患有粘膜病時也是一樣。在另一個實施例中，姜黃素，一種在香料中天然產(chǎn)生的，姜黃也在本發(fā)明中用于治療一些如牛皮癬、痤瘡、濕疹、創(chuàng)傷、燒傷、皮膚光損傷和光老化等皮膚問題及如口腔黏膜炎等粘膜病。在一個進一步的實施例中，所述的姜黃素或四羥基姜黃素可以用姜黃素類化合物替換來達到本發(fā)明中治療一些如牛皮癬、痤瘡、濕疹、創(chuàng)傷、燒傷、皮膚光損傷和光老化等皮膚問題和所有類型的粘膜病。本發(fā)明所述的納米乳化典型制劑可以非限制性地形成為半固體制劑，軟膏/乳膏 /凝膠/乳液，它們比較昂貴并且也可以作為一種充分有效的治療與一種或多種公知的治療結(jié)合使用來治療牛皮癬。四羥基姜黃素具有潛在的消炎活性，因此有利于那些炎癥引起的皮膚情況，如牛皮癬、陽光引起損傷和痤瘡，此外四羥基姜黃素還能抑制磷酸激酶活性。因此在一個實施例中，本發(fā)明提供的納米乳化典型制劑包括四羥基姜黃素 (BDMC)，它作為一種消炎劑和抗氧化劑來用于治療各種皮膚問題。在另一個實施例中，本發(fā)明提供的納米乳化典型制劑包括姜黃素，它作為一種消炎劑和抗氧化劑來用于治療各種皮膚問題。在另一個實施例中，本發(fā)明提供的納米乳化典型制劑包括姜黃素類化合物，它作為一種消炎劑和抗氧化劑與藥物、保健品或食品可接受的或失活劑一起使用來治療各種皮膚問題。在一個進一步的實施例中，本發(fā)明公開了一種治療牛皮癬和各種類型的燒傷、痤瘡、皮膚創(chuàng)傷、濕疹，預防及治療陽光引起損傷，皮膚過早老化引起不良后果。所述的方法包括使用一個足夠量的所述混合物，包括單獨的姜黃素或四羥基姜黃素(BDMC)或任何其它合適的姜黃素類化合物或它們的混合，可效地抑制磷酸激酶活性，從而治療受影響的皮膚， 尤其是受影響的表皮。因此本發(fā)明公開了一種納米乳化典型制劑，其含有單獨的姜黃素或四羥基姜黃素或姜黃色素或它們的混合，并含有一種或多種藥物、保健品或食品可接受的賦形劑或失活劑來用于治療上述與皮膚相關(guān)的疾病。通常姜黃素或四羥基姜黃素(BDMC)或姜黃色素可以非限制性地以半固體制劑， 軟膏/乳膏/凝膠/乳液的形式外用藥。在另一個實施例中，本發(fā)明提供了單獨的姜黃素或四羥基姜黃素(BDMC)或姜黃色素或它們的混合物，它們可以非限制性地以0. 001%至50%，優(yōu)選0.01%至30%，更優(yōu)選 0. 至20%的濃度軟膏/乳膏給藥。在另一個實施例中，本發(fā)明所述混合物中使用的姜黃素或四羥基姜黃素或姜黃色素可以是單獨使用，也可以混合使用，可以對受影響的動物每日四次地給藥，或者由醫(yī)生根據(jù)各種情況進行給藥。所述的動物可以是一個人、一只狗、一只貓、一頭牛、一匹馬、一只綿羊、一頭山羊或任何一個其它的動物。在本發(fā)明的另一個實施例中，本發(fā)明所述的納米乳化外用制劑，其中姜黃素/四羥基姜黃素(BDMC)的顆粒大小為0. 5至lOOnm，優(yōu)選為1至50nm，更優(yōu)選為2至25nm。在本發(fā)明的制劑中，姜黃素或四羥基姜黃素或姜黃色素的顆粒大小為8-llnm。本發(fā)明的另一方面，提供一種用于動物治療炎癥的方法，其中包括使用本發(fā)明的混合物通過生物標記如腫瘤壞死因子-α (TNF- α )，基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)，白細胞介素， 干擾素Y (IFN Y)或通過抑制酶，如蛋白激酶C(PKC)，磷酸激酶的改良來治療動物。另一方面，本發(fā)明提供一種用于防止或抑制牛皮癬表皮細胞的增殖和后期變異，其中包括使用本發(fā)明的混合物以足夠量接觸在牛皮癬表皮細胞上以造成如TNF-α，MMPs,白細胞介素， IFN γ生物標記或抑制酶，如H(C，磷酸激酶的改良。本發(fā)明開發(fā)了一種用于外用給藥包括姜黃素或四羥基姜黃素或姜黃素類化合物以單獨或與一種或多種藥物，保健品或食品可接受失活劑混合的新的藥物混合物。本發(fā)明進一步公開了一種用于防止，治療或控制炎癥以及用于防止，控制或治療炎癥皮膚療病如牛皮癬，創(chuàng)傷，燒傷，痤瘡，濕疹，陽光引起損傷，過早老化和煙霧/尼古丁引起損傷的新方法。早期開發(fā)的研究表明，各種炎癥皮膚疾病和病理疾病有關(guān)聯(lián)并且通過炎癥過程惡化。雖然這些損傷機制是針對牛皮癬，類似的機制也存在于創(chuàng)傷，燒傷，痤創(chuàng)和濕疹以及由于暴露在陽光和煙霧/尼古丁下的皮膚損傷所伴隨的炎癥中。因此，造成如TNF-α ,MMPs, 白細胞介素，IFN γ生物標記或抑制酶，如H(C，磷酸激酶的改良的制劑如以單獨或混合形式的四羥基姜黃素，姜黃素或姜黃素類化合物在防止，治療或控制這些上述疾病所伴隨的炎癥有效。本方法包括用以單獨或混合形式的姜黃素或四羥基姜黃素(BDMC)或姜黃素類化合物的足夠量外用給藥來治療具有炎癥感染的動物的步驟。本發(fā)明的方法在防止，治療或控制炎癥上有效，即通過上述行動模式來改善感染表皮，干燥損傷和提高復原以及防止癥狀復發(fā)。給藥劑量可通過文獻中一個普通技術(shù)來確定，即根據(jù)疾病的臨床嚴重程度，患者的年齡和體重，患者對疾病的表現(xiàn)如牛皮癬或其他皮膚疾病或系統(tǒng)炎癥疾病可能迅速發(fā)生，光線或煙霧環(huán)境的暴露程度和文獻中一般能理解的其他藥物代謝因素，如肝臟和腎臟的新陳代謝而定。劑量方案的調(diào)整可優(yōu)化治療響應。劑量可按每日基準分開給藥或劑量可隨治療情況而相應的減少。在另一實施例中，用于制備混合物的賦形劑或失活劑包括但不限于軟膏基質(zhì)和乳化劑如輕型液體石蠟，聚乙二醇，水洗基質(zhì)如十六醇，硬脂酸，硬脂醇，甘油硬脂酸，羊毛脂， 甘油和其他，以及固體乳化劑/非離子表面活性劑如單硬脂酸甘油脂(GMS)，聚乙二醇(PEG 400)和十六醇(CA)和吐溫80，防腐劑如甲基，乙基或丙基對羥基苯甲酸酯或二惡燒，潤滑劑如用于迅速吸收到皮膚中的肉豆蔻酸異丙酯，用于保持皮膚水分和定型的膠原蛋白，其他調(diào)味劑如薰衣草油和殺菌劑如二苯基乙醇。另一方面，本發(fā)明的外用制劑的混合物還包括有協(xié)同作用的煙酰胺，其結(jié)果是減少皮膚紅色斑點和過度色素沉著。另一個方面，混合物包括但不限于所知道的藥物，保健品或食品可接受的抗炎，抗牛皮癬，抗氧化，抗過敏，抗病毒，抗菌和抗血管增生劑。
在另一實施例中，姜黃素或四羥基姜黃素(BDMC)或姜黃素類化合物以單獨或混合形式制成制劑的技術(shù)包括但不限于通過如超聲波/乳化/滴定方法實現(xiàn)的納米乳化，制粉，噴霧干燥，固體分散，熱熔擠出，冷凍干燥方法等技術(shù)。一種用于制備納米乳化四羥基姜黃素的方法在實施例1中公開了，然而納米乳化姜黃素或姜黃素類化合物也可通過類似的過程制備得到。下面的例子，其中包括優(yōu)先實施例，將有助于闡明本發(fā)明的實施，但應理解，這些說明是通過舉例的方式來解釋說明本發(fā)明優(yōu)選實施例的目的
實施例實施例1 含有四羥基姜黃素的納米乳化外用制劑(100克乳膏)單硬脂酸甘油酯(GMS) 5. 克，聚乙二醇4000 (PEG400) 2. 64克，二甲基亞砜 (DMSO) 1毫升，煙酰胺100毫克，異丙酯肉豆蔻4毫升，苯基2-乙醇(1毫升)，輕液石蠟2 毫升，十六醇2. 64克，苯基2-乙醇1毫升，膠原蛋白13. 20克，四羥基姜黃素250毫克，二惡烷100微升，薰衣草油100 μ 1和軟化水65. 04毫升。制造過程包括以下步驟1.將稱重過的單硬脂酸甘油酯(GMS)，聚乙二醇(PEG400)，十六醇(CA)加入到一個50毫升干凈的燒杯中，然后通過移液將輕液石蠟和異丙酯肉豆蔻加入到乳化液中；2.在上述混合物加入苯基-2-乙醇；3.用10毫升軟化水將膠原蛋白濕潤并直到溶液變清(約25分鐘)，然后加入煙酰胺。4.將稱重過的四羥基姜黃素/姜黃素/姜黃素類化合物加入到一個干凈容器中， 并用吐溫80和PEG400混合液和在控制溫度下超聲波溶解成納米乳化液；5.將單硬脂酸甘油酯(GMS)，聚乙二醇(PEG400)和十六醇(CA)加熱到70°C，同時加入軟化水來融化固體乳化劑；6.立即將溶解的四羥基姜黃素的一半加入到熱的乳化劑中并徹底混合；7.同時在70°C下加熱65. 04毫升軟化水；8.將融化的乳化劑加入到沸騰的軟化水中，并充分攪拌混合直到在室溫下成軟膏狀態(tài)。9.加入膠原蛋白和煙酸的混合物并攪拌均勻形成一種光滑的軟膏；10.將另一半溶解的四羥基姜黃素加入到冷卻的軟膏中并拌勻混合物。11.將1毫升溶有二惡烷的PEG 400加入溶解到步驟9的混合物中；和12.在上述軟膏中加入調(diào)香的薰衣草油。實施例2 姜黃素溶解1.稱取姜黃素60毫克到一個10毫升的燒杯中。2.加入1克(765ul)吐溫80和1克PEG并用玻璃棒攪拌均勻。3.然后超聲波溶解30分鐘或直到姜黃素完全溶解。4.形成一個深紅色溶液。
5.粒子尺寸分布的研究報告表明，該納米乳液的尺寸在8-11納米之間，即形成了一種高可接受的納米乳液。實施例3 姜黃素98%和雙氧去甲基姜黃素(BDMC)納米乳化的顆粒大小分布數(shù)據(jù)顆粒大小分布研究實施納米乳化制劑進一步證實姜黃素分子以納米大小的顆粒存在于本制劑中。這些研究證明通過獨特的方法將原來以374nm非均質(zhì)形式的姜黃素分子乳化成8-llnm大小顆粒，并表明通過該制劑可增強輸送和姜黃素的功效。該研究的實施是利用馬爾文顆粒大小分析儀。散射強度相對角的圖譜是用來計算顆粒大小的信息主要來源。顆粒的散射是通過米氏散射模型根據(jù)穿過廣泛的動態(tài)范圍的準確尺度來精確測定的。在激光衍射測量過程中，粒子通過激光光束的聚焦。這些顆粒以一個與其大小成比例的角度散射光線。然后散射光的強度角通過一系列的光敏檢測器測量。 該項研究的優(yōu)點是不用制備復雜的樣品。 實施對姜黃素98 %的顆粒大小分布以及BDMC和姜黃素98 %的納米乳化的研究清楚表明BDMC和姜黃素98%的納米乳化顆粒大小是在8-llnm之間(如圖1_3所示)，與納米乳化混合物的理想大小相比非均質(zhì)的姜黃素98%的顆粒大小是373nm。另外，可觀察到通過分子重量賦形劑可促使峰值的形成用來制備制劑。獲得的結(jié)果證明本制劑是一種納米乳化類型。實施例4 納米乳化姜黃素混合物在Balb/c鼠的鼠尾正角化誘導試驗中效果的研究在體內(nèi)進行研究測量一種新型姜黃素制劑的抗牛皮癬活性，根據(jù)鼠尾組織與牛皮癬人類皮膚的組織病理機制一樣，因此，利用一個標準的，靈敏度高和重現(xiàn)性好的鼠尾測試方法，來定量評估對上皮細胞分化和正角化誘導(粒狀層)的藥物效果[博斯曼等，1992， 米特拉等，1998]。本研究中用了年齡在8-9周的四十個動物(Balb/C鼠)，其中，分為五組，每組8個動物。測試品的指定劑量局部涂在鼠尾上，每日兩次共14天，按照每組指定給藥(新姜黃素制劑100毫克——研究組，或水溶性姜黃素100微升或5%煤焦油100微升作為正對照組，或藥物空白組)，以及一組未處理鼠尾作為自然對照組。在實驗期結(jié)束時處死這些老鼠。 尾部處理，剪下約2. 5厘米長并固化在4%福爾馬林中。從這些處理和未處理對照尾部上預先縱向組織切片(每尾10節(jié))并用蘇木精和伊紅(H&E)染色。在顯微鏡下測量出在具有一個獨立鱗狀物的充分發(fā)展粒狀層的水平長度與其總長度有關(guān)。具有一個獨立鱗狀物分離的充分發(fā)展粒狀層的水平長度與特定鱗片狀物的水平長度比率來計算所達到的誘導正角化程度。在單獨動物上獲得的計算值進行統(tǒng)計分析并推算出用該姜黃素的新制劑和水溶性姜黃素的治療效果，顯示出誘導正角化層和連續(xù)顆粒的形成和表皮層粗糙有顯著的改善。從圖4-8中可明顯的看出，在這些研究組中獲得的正面結(jié)果與標準傳統(tǒng)煤焦油處理一樣，并比空白對照組有顯著更高。圖4顯示了鼠尾TS (對照組)觀察到的病理組織，在顯微鏡下顯示一個連續(xù)顆粒層和一個如人類牛皮癬損傷特征的弱表皮層。圖5顯示了在空白處理組(含有蠟)中一個連續(xù)顆粒層結(jié)構(gòu)和一個適度發(fā)展的表皮層。圖6顯示了在煤焦油處理組中一個完全發(fā)展的表皮層。在這些案例中這種顆粒層結(jié)構(gòu)有明確的界定。煤焦油通常用于牛皮癬的處理。因此，這里用作參考標準來比較特制姜黃素的效果。圖7顯示了姜黃素案例中的完全界定的表皮層結(jié)構(gòu)。這是在賦形劑溶解平常姜黃素來制備的。因此，這些顆粒層是不連續(xù)的。圖 8顯示了用制劑姜黃素處理的一個連續(xù)顆粒層和一個好的表皮厚度。其效果相當于煤焦油的。上述研究的臨床結(jié)果清楚地表明，使用本發(fā)明的混合物治療牛皮癬和相關(guān)炎癥疾病中有潛在治療應用。實施例5 關(guān)于BDMC/姜黃素/姜黃素類化合物的進行微陣列研究一些臨床條件下發(fā)病機制包括炎癥過程和一些慢性疾病如牛皮癬，動脈粥樣硬化，糖尿病II型，敗血癥和類風濕關(guān)節(jié)炎的更多特定免疫功能變化涉及并與TNF-α有關(guān)。TNF-α及其受體在牛皮癬斑的生長和留存發(fā)揮著重要的作用。發(fā)現(xiàn)TNF-α在牛皮癬疾病(皮膚和滑膜)中具有正調(diào)控作用以及在牛皮癬治療中表現(xiàn)出突出的靶向作用。BDMC/姜黃素/姜黃素類化合物對TNF-α誘導在人微血管內(nèi)皮細胞(HMEC)中的基因表達效果的研究微陣列分析可用來實現(xiàn)對用去甲基化姜黃素(BMDC，姜黃素)/用姜黃素類化合物進行預處理或不預處理后的內(nèi)皮細胞進行TNF-α處理中的基因不同表達的識別。數(shù)據(jù)采集和圖像處理使用GC0S(基因芯片操作軟件，Affymetrix公司)。TNF-α處理組相對于 TNF-α未處理對照組在調(diào)控下的基因折疊>2.0的選擇和服從分層聚集。TNF-α處理后的正調(diào)控下的基因主要聚集，但在去甲基化姜黃素(BMDC，姜黃素)/用姜黃素類化合物的獨特調(diào)控下成為敏感基因。使用DAVID(注釋，可視化和集成發(fā)現(xiàn)數(shù)據(jù)庫，NIAID，NTH)對這些子聚集進行進一步的功能分析(圖10，11)。主要的已知路徑(KEGG資料，基因與基因組京都百科全書)中界定了每個聚集所示的候選基因的路徑圖標記。產(chǎn)生的數(shù)據(jù)與雙氧去甲基姜黃素抑制所述TNF-α功能的活性相適應?；蛐酒瑃W^TNF-CI誘導HM C轉(zhuǎn)錄的篩選鑒定出的1195探針是由兩倍或更高幅度的誘導。如上所述的微陣列研究表明，在微血管內(nèi)皮細胞中接受TNF-α挑戰(zhàn)，總計 1065TNF-Q誘導基因?qū)﹄p氧去甲基姜黃素變得敏感(圖1)。同樣研究顯示，雙氧去甲基姜黃素對TNF-α具有拮抗作用。因此，雙氧去甲基姜黃素對TNF-α的拮抗作用和伴隨的TNF-α調(diào)控下的介導機制可很好的應用于牛皮癬的治療。
權(quán)利要求
1.納米乳化外用制劑，其特征在于包括姜黃素，四羥基姜黃素/雙氧去甲基姜黃素 (BDMC)和姜黃素類化合物，該制劑為單獨的或者與一種或多種藥物、保健品或食品可接受的賦形劑或失活劑混合，可以用于治療炎癥和各種皮膚病。
2.如權(quán)利要求1所述的納米乳化外用制劑，其特征在于所述的制劑包括姜黃素或四羥基姜黃素/雙氧去甲基姜黃素或姜黃素類化合物，該制劑為單獨的或者以0. 001 %至50%， 優(yōu)選0. 01%至30%，更優(yōu)選0. 至20%的含量與一種或多種藥物、保健品或食品可接受的賦形劑或失活劑混合。
3.如權(quán)利要求1所述的納米乳化外用制劑，其特征在于所述制劑的劑型非限制性地包括半固體制劑，軟膏/乳膏/凝膠/乳液。
4.如權(quán)利要求1所述的納米乳化外用制劑，其特征在于所述姜黃素/四羥基姜黃素 (BDMC)的顆粒大小為0. 5至lOOnm，優(yōu)選為1至50nm，更優(yōu)選為2至25nm。
5.如權(quán)利要求1所述的納米乳化外用制劑，其特征在于所述姜黃素/四羥基姜黃素 (BDMC)的顆粒大小為2至25nm。
6.如權(quán)利要求1所述的納米乳化外用制劑，其特征在于所述賦形劑或失活劑非限制性地包括軟膏基質(zhì)和乳化劑如輕型液體石蠟，聚乙二醇，水洗基質(zhì)如十六醇，硬脂酸，硬脂醇， 甘油硬脂酸，羊毛脂，甘油和其他，以及固體乳化劑/非離子表面活性劑如單硬脂酸甘油脂 (GMS)，聚乙二醇(PEG 400)和十六醇(CA)和吐溫80，防腐劑如甲基，乙基或丙基對羥基苯甲酸酯或二惡烷，潤滑劑如用于迅速吸收到皮膚中的肉豆蔻酸異丙酯，用于保持皮膚水分和定型的膠原蛋白，其他調(diào)味劑如薰衣草油和殺菌劑如2-苯基乙醇。
7.如權(quán)利要求1所述的納米乳化外用制劑，其特征在于所述的制劑還包括煙酰胺。
8.如權(quán)利要求1所述的納米乳化外用制劑，其特征在于所述的制劑還非限制性地包括公知的藥物、保健品或食品可接受的消炎劑、治牛皮癬藥、抗氧化劑、抗過敏劑、抗病毒劑、 抗菌劑和抗血管生成劑。
9.如權(quán)利要求1所述的納米乳化外用制劑，其特征在于用于治療各種如牛皮癬、痤瘡、 濕疹、皮膚創(chuàng)傷、燒傷、煙霧/尼古丁引起損傷、過早老化、陽光引起損傷的皮膚病，如口腔粘膜炎、口腔創(chuàng)傷、口腔膿腫的粘膜病以及其它相關(guān)的疾病。
10.如權(quán)利要求1所述的納米乳化外用制劑，其特征在于所述的制劑形成改良的生物分子標記，如腫瘤壞死因子-α (TNF-α)，基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)，白細胞介素(IL)，干擾素Y (IFNy)或通過抑制酶，如蛋白激酶C(PKC)，磷酸激酶。
11.一種對患有各種皮膚病及炎癥的目標物進行治療的方法，其特征在于所述的方法包括一個使用足夠量的如權(quán)利要求1所述的納米乳化外用制劑來外用地治療動物的步驟。
12.如權(quán)利要求10所述的納米乳化外用制劑，其特征在于所述的目標物是一種動物。
全文摘要
納米乳化外用制劑，其包括姜黃素，四羥基姜黃素(BDMC)和姜黃素類化合物，該制劑為單獨的或者以0.001％至50％的含量與一種或多種藥物、保健品或食品可接受的賦形劑或失活劑混合，可有效用于炎癥，各種皮膚病、粘膜病以及其它相關(guān)疾病的治療。
文檔編號A61K36/906GK102215856SQ200980145613
公開日2011年10月12日 申請日期2009年11月30日 優(yōu)先權(quán)日2008年12月1日
發(fā)明者岡加·拉吉·古卡拉吉, 卡維莎·帕塔薩拉蒂, 吉蘭·布帕蒂拉吉, 安妮莎·克里斯南·奈爾, 崔姆爾土盧·古蘭扣堤, 拉姆什特·娜娜潘·加妮依帕嵐普, 拉瑪·拉吉·古卡拉吉, 瑪達維·木尕拉, 阿努伊·卡普爾, 馬利加·拉曼·木瑞麗 申請人:萊拉制藥用品私營有限責任公司