專(zhuān)利名稱(chēng)：前列腺素E₂結(jié)合蛋白及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及對(duì)脂質(zhì)代謝產(chǎn)物例如前列腺素E2 (PGE2)特異的結(jié)合蛋白及其組合物， 例如抗體和抗原結(jié)合部分，以及制備、表征和在疾病預(yù)防、診斷和治療中使用其的方法。
背景技術(shù)：
生物學(xué)活性脂質(zhì)例如前列腺素(PG)、血栓烷(TX)、白三烯(LT)和1-磷酸-鞘氨醇在 各種病癥的病因?qū)W中起關(guān)鍵生理學(xué)作用。(Wymann，MP和Schneiter R，Nat. Rev. Mol. Cell. Biol. 9 (2):162-76 (2008))。在炎癥過(guò)程中，細(xì)胞磷脂酶特別是磷脂酶A2和C被 激活，并且使細(xì)胞膜磷脂降解為花生四烯酸(AA)。AA通過(guò)2個(gè)主要途徑進(jìn)行代謝一一環(huán)加 氧酶(COX)和脂肪加氧酶(LO)途徑。COX途徑產(chǎn)生前列腺素(POT2、PGE2、PGF2a、前列腺環(huán)素 或PGI2、和血栓烷A2或TXA2)。LO途徑具有2個(gè)分支；5-L0途徑產(chǎn)生白三烯(例如，LTA4、 LTB4、LTC4、LTD4、LTE4和LTF4)，并且15-L0途徑產(chǎn)生脂氧素(例如，LXA4、LXB4)。前列腺 素類(lèi)例如前列腺素(PG)、血栓烷(TX)和白三烯(LT)具有各種生理活性用于維持體內(nèi)的局 部穩(wěn)態(tài)(The Pharmacological Basis of Therapeutics, Gilman,等人編，第 7 版，第 660 頁(yè)，Macmillan Publishing Co.，New York (1985))。COX 的產(chǎn)物 PG G2/ PG H2 通過(guò)組織 特異性異構(gòu)酶的作用轉(zhuǎn)換為特定PGs，以產(chǎn)生PGI2、TXA2, POT2、PGE2和PGF2a。Pk的生物 學(xué)功能通過(guò)組織特異性細(xì)胞表面視紫紅質(zhì)樣7次跨膜G蛋白偶聯(lián)受體(GPCRs)介導(dǎo)。每種 PG的精確生理學(xué)/病理學(xué)作用由細(xì)胞背景、受體表達(dá)譜、配體親和力和與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的 差別偶聯(lián)決定(Haluska 等人，Annu. Rev. Pharm. Tox. 10213 (1989);Prostanoids and their Receptors. In Comprehensive Medicinal Chemistry,第 643 頁(yè)，Pergamon Press, Oxford (1990))。P(is —般在vasomotricity調(diào)節(jié)、睡眠/清醒周期、腸分泌、脂解、腎小 球過(guò)濾、肥大細(xì)胞脫顆粒作用、神經(jīng)傳遞、血小板聚集、leuteolysis、子宮肌層收縮和分娩、 炎癥和關(guān)節(jié)炎、動(dòng)脈導(dǎo)管開(kāi)放、細(xì)胞生長(zhǎng)和分化、和免疫應(yīng)答調(diào)節(jié)中起廣泛多樣的生理學(xué)作 用。在病理生理學(xué)上，PGs已牽涉各種疾病，包括疼痛和炎癥、癌癥、神經(jīng)學(xué)疾病、心血管疾 病和高血壓。前列腺素氏斤6氏)是前列腺素類(lèi)家族成員。PG&廣泛參與胃腸道收縮和松弛、胃酸 分泌、平滑肌松弛和神經(jīng)遞質(zhì)釋放。已鑒定了關(guān)于PGE2的4種亞型受體，包括EP1、EP2、EP3 和 EP4 (Negishi，M.等人，J. Lipid Mediators Cell Signalling，12:379-391 (1995)), 其各自涉及不同的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。PGE2是AA代謝的COX途徑的主要產(chǎn)物。它是在關(guān)節(jié)中合成的主要PG，并且在關(guān)節(jié) 炎炎癥和發(fā)病機(jī)理中起重要作用。已鑒定了 5種PG&合酶。(Smith札，Am. J. Physiol. 263 (2 Pt 2) :F181-91 (1992))。在這 5 種中，膜 PGE 合酶(mPGES)-1 看起來(lái)是負(fù)責(zé) PGE2生產(chǎn)的關(guān)鍵PG&轉(zhuǎn)換酶。相對(duì)于其他PGE合酶，MPGES-I顯示出最高催化活性，并且與C0X-1 和/或C0X-2結(jié)合起作用，以將PGH2轉(zhuǎn)換為PGE20使用mPGES-1 KO小鼠(Kamei，D.，等人， J. Biol. Chem.，279 (32) :33684-95 (2004) ;Trebino，C. Ε·，等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 100 (15):9044-9 (2003)、特異性 PGE2 受體同種型 KO 小鼠(McCoy，J. Μ.，等人 J. Clin. Invest.，110 (5) :651-8 (2002) ；Majima, Μ.，等人 Trends Pharmacol. Sci.， 24 (10) :524-9 (2003)；和 Amano，H.，等人，J. Exp. Med. , 197 (2) :221-32 (2003);和抗 PGE2 特異性抗體(Portanova，J. P.，等人，J. Exp. Med.，184 (3) :883-91 (1996) ；Zhang, Y.，等人，J. Pharmacol. Exp. Ther.，沘3 (3): 1069-75 (1997)的研究暗示 PGE2 在類(lèi)風(fēng)濕 性關(guān)節(jié)炎(RA)、疼痛和炎癥以及癌癥發(fā)展的動(dòng)物模型中起主要作用。在不存在mPGES-Ι的 情況下，C0X-1、C0X-2和其他PGE2合酶的水平保持相對(duì)不變。與野生型小鼠比較，mPGES-1 KO小鼠是存活、能育且正常發(fā)育的。然而，它們顯示出在PG&生產(chǎn)的基礎(chǔ)水平中以及在用 各種免疫刺激攻擊后來(lái)自巨噬細(xì)胞的PG&生產(chǎn)中的急劇減少。此外，TXA2的生產(chǎn)增加。 mPGES-1 KO小鼠顯示關(guān)節(jié)炎發(fā)展的發(fā)生率和嚴(yán)重性減少，并且在各種模型中顯示針對(duì)疼痛 和炎癥的抗性。幾個(gè)實(shí)驗(yàn)室已獨(dú)立產(chǎn)生了各種EP受體同種型KO小鼠。這些小鼠是存活、 能育且正常發(fā)育的。使用特異性EP同種型KO小鼠的研究證實(shí)PGE2的各種功能經(jīng)由特異性 EP同種型介導(dǎo)。例如，EP4同種型的缺乏明確影響小鼠中關(guān)節(jié)炎發(fā)展的嚴(yán)重性，而EP3的缺 乏通過(guò)調(diào)節(jié)經(jīng)由基質(zhì)細(xì)胞的VEGF生產(chǎn)和血管發(fā)生來(lái)影響腫瘤發(fā)展和進(jìn)展。前列腺素生物合成和代謝中的缺陷目前被認(rèn)為在自身免疫和炎性病癥的病因?qū)W 中起重要作用。例如，與來(lái)自未受影響受試者的滑膜組織比較，來(lái)自患有類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的 患者的滑膜組織產(chǎn)生更大量的PGE2和前列腺素F2a(PGF2a )(Blotman,F.，等人，Rev. Rhum. Mai. 0steoartic,46 (4) :243-7 (1979))。相似地，在顯示出食物耐受不良繼發(fā)的全身性 和胃腸道癥狀的患者中出現(xiàn)PGF2a的合成增加。因此，攝入特定食物繼發(fā)的偏頭痛 可以是2-系列前列腺素合成增加的結(jié)果。多發(fā)性硬化也與前列腺素PGE1和PGE2正常水平 中的不平衡相關(guān)。生殖的許多方面例如生殖力、妊娠和分娩可以通過(guò)前列腺素調(diào)節(jié)。前列 腺素還在生殖生理學(xué)中起主要作用。過(guò)量前列腺素合成促使痛經(jīng)和生產(chǎn)，這可以通過(guò)靜脈 內(nèi)施用前列腺素或通過(guò)插入前列腺素陰道栓進(jìn)行誘導(dǎo)。(Wang L.等人，Occup. Environ. Med. 61 (12) :1021-1026 (2004))。PG&的過(guò)量合成也在生殖病癥中起主要作用，例如不 育、反復(fù)流產(chǎn)、先兆子癇和子癇。因此存在關(guān)于對(duì)于PG&特異性的抗體的需要，所述抗體阻 斷或調(diào)節(jié)其生物學(xué)功能，可以用于預(yù)防和治療與PGE2過(guò)量生產(chǎn)相關(guān)的疾病，以及診斷目的。高度特異性、高親和力(Kd為約300pM)抗PGE2 mAb一一 2B5的產(chǎn)生已得到報(bào)道。 (Mnich SJ，等人 J. Immunol. 155 (9) :4437-44 (1995))。2B5 相對(duì)于吲哚美辛 C0X-1, 2 抑制劑的功效在小鼠中疼痛和炎癥以及在大鼠中佐劑誘發(fā)性關(guān)節(jié)炎的動(dòng)物模型中進(jìn)行測(cè) 定。(Portanova JP 等人，J. Exp. Med. 184 (3) :883-91 (1996))。這些研究明確顯示 2B5在減少疼痛和炎癥以及關(guān)節(jié)炎嚴(yán)重性方面與吲哚美辛一樣有效，暗示PGE2是這些動(dòng)物 模型中AA代謝的C0X-1，2途徑中的關(guān)鍵參與者。通過(guò)COX抑制劑抑制泛-PG生產(chǎn)已是數(shù)十年來(lái)充分確定的治療策略。COX的2種 同種型C0X-1和C0X-2是已知的，其各自由不同基因編碼。2種同種型執(zhí)行基本上相同的 催化反應(yīng)，并且具有相似的三級(jí)結(jié)構(gòu)(Garavito RM，等人，Annu. Rev. Biophys. Biomol. Struct. 32:183-206 (2003))。C0X-1在幾乎所有組織中組成性表達(dá)，并且被認(rèn)為在很大程度上負(fù)責(zé)正常“看家”功能，例如胃細(xì)胞保護(hù)和穩(wěn)態(tài)。相比之下，C0X-2在特定組織中組 成性表達(dá)，并且可在炎癥和癌癥部位高度誘導(dǎo)。因此，C0X-2介導(dǎo)的PG生產(chǎn)被認(rèn)為在炎癥 和癌癥部位起重要作用。傳統(tǒng)非類(lèi)固醇消炎藥(NSAIDs)例如阿司匹林、吲哚美辛、布洛芬) 抑制2種COX同種型。這些化合物是對(duì)于疼痛、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)、骨關(guān)節(jié)炎(OA)和心 血管疾病最廣泛使用的藥物，并且目前考慮用于預(yù)防結(jié)腸癌和AD。傳統(tǒng)NSAIDs的主要障礙 是在高危群體中的胃和腎不利事件，這被認(rèn)為是由于C0X-1的抑制。因此，第二代NSAIDs， C0X-2選擇性抑制劑(例如，塞來(lái)考昔，西樂(lè)葆；羅非昔布，萬(wàn)絡(luò)；伐地考昔，Bextra)，被認(rèn)為 具有更佳的治療譜。這種假設(shè)已導(dǎo)致其廣泛用于疼痛、RA和OA。自從在1999年批準(zhǔn)第一 種C0X-2抑制劑后，在2004年C0X-2抑制劑的組合銷(xiāo)售是約US $ 50億。然而，近期某些 C0X-2選擇性抑制劑撤出市場(chǎng)，并且處于FDA審查下，由于關(guān)于特定C0X-2抑制劑在高?；?者中的心血管副作用。與COX抑制劑相關(guān)的阻礙可能由于其抑制所有P(iS的能力而引起，并 且特別是由于其差別干擾PGI2和TXA2生產(chǎn)的能力而引起，所述PGI2和TXA2在維持心血管 穩(wěn)態(tài)中起重要作用(Martinez-Gonzcilez J.等人，Curr. Pharm. Des. 13 (22):2215-2227 (2007))。COX抑制可能使得更多的AA對(duì)于LO途徑可用，因此增加白三烯和脂氧素生產(chǎn)，這 可能促成COX抑制相關(guān)不利效應(yīng)。使用C0X-1和/或C0X-2敲除小鼠以及C0X-1和C0X-2 特異性抑制劑的近期研究也暗示關(guān)于2種COX同種型的生理學(xué)作用的假設(shè)可能是不正確 的。(Loftin，C. D.，等人 Prostaglandins Other Lipid Mediat. 68-69:177—85 (2002))。 這些研究暗示C0X-1和C0X-2在供應(yīng)PGs以維持組織穩(wěn)態(tài)中都起重要作用，并且2種同種 型可能促成疾病發(fā)展，例如疼痛、炎癥和癌癥。因此，用特異性抗體阻斷C0X-1和C0X-2途 徑下游的有害PGE2看起來(lái)是用于治療特定人疾病的有吸引力的方法。
重要生物學(xué)活性前列腺素的另一個(gè)例子是PGD2。PGD2是在免疫攻擊后由肥大 細(xì)胞生產(chǎn)的花生四烯酸的主要環(huán)加氧酶產(chǎn)物(Lewis，等人，J. Immunol. 129:1627-1631 (1982))。活化肥大細(xì)胞，PGD2的主要來(lái)源，是在病狀中驅(qū)動(dòng)變應(yīng)性應(yīng)答中的關(guān)鍵參與物 (player)之一，所述病狀例如哮喘、變應(yīng)性鼻炎、變應(yīng)性結(jié)膜炎、變應(yīng)性皮炎和其他疾病 (Brightling，等人，Clin. Exp. Allergy 33:550-556(2003))0 近期研究已顯示 PGD2 通過(guò) 2種不同的G蛋白偶聯(lián)受體(GPCRs)發(fā)揮其作用一一在各種人組織中表達(dá)的T輔助2型細(xì)胞 (CRTH2)上表達(dá)的D-前列腺素類(lèi)受體(DP)和化學(xué)吸引劑受體-同源分子。PGD2/CRTH2系統(tǒng) 介導(dǎo)嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞和Th2細(xì)胞的趨化性，這涉及變應(yīng)性炎癥的誘導(dǎo)(Ulven T 等人，Curr. Top. Med. Chem. 6 (13) :1427-1444 (2006))。PGD2 的許多作用通過(guò)其對(duì) D型前列腺素(“DP”)受體的作用而介導(dǎo)，所述DP受體是在上皮和平滑肌上表達(dá)的G蛋白偶 聯(lián)受體。在哮喘中，呼吸上皮長(zhǎng)久以來(lái)已被認(rèn)為是驅(qū)動(dòng)疾病發(fā)展的炎性細(xì)胞因子和趨化因 子的關(guān)鍵來(lái)源(Holgate，等人，Am. J. Respir. Crit. Care Med. 162:113-117 (2000))。 在哮喘的實(shí)驗(yàn)鼠模型中，DP受體在抗原攻擊后在氣道上皮上急劇上調(diào)(Matsuoka，等人， Science觀7:2013-2017(2000))。DP受體涉及人變應(yīng)性鼻炎，特征在于噴嚏、癢、rhinorea 和鼻充血癥狀的常見(jiàn)變應(yīng)性疾病。DP拮抗劑已顯示在減輕許多物種中的變應(yīng)性鼻炎癥 狀中有效，并且更具體而言已顯示抑制抗原誘導(dǎo)的鼻充血，變應(yīng)性鼻炎中表現(xiàn)最多的癥狀 (Jones，等人，Am. J. Resp. Crit. Care Med. 167:A218 (2003) ;Arimura，等人，S-5751. J. Pharmacol. Exp. Ther. 298 (2) :411-9 (2001))。DP 拮抗劑在變應(yīng)性結(jié)膜炎和變應(yīng) 性皮炎的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭幸彩怯行У?Arimura等人，S-5751. J. Pharmacol. Exp. Ther. 298(2) :411-9 (2001) Jorisu，等人，Bioorg. & Med. Chem. 12:5361-5378 (2004))。因此 也存在關(guān)于對(duì)于PGD2特異性的抗體的需要，并且阻斷或調(diào)節(jié)其生物學(xué)功能因此可以用于預(yù) 防和治療與POT2過(guò)量生產(chǎn)相關(guān)的疾病。1-磷酸鞘氨醇(SlP)是誘導(dǎo)許多細(xì)胞效應(yīng)的生物學(xué)活性脂質(zhì)的另一個(gè)例子，包括 導(dǎo)致血小板聚集、細(xì)胞增殖、細(xì)胞形態(tài)、腫瘤細(xì)胞侵襲、內(nèi)皮細(xì)胞趨化性和內(nèi)皮細(xì)胞體外血 管發(fā)生的那些。SlP受體因此是用于治療應(yīng)用例如傷口愈合和腫瘤生長(zhǎng)抑制的良好靶。SlP 部分經(jīng)由命名為SlPl、S1P2、S1P3、S1P4和S1P5 (以前分別被稱(chēng)為EDG-U EDG-5、EDG-3、 EDG-6和EDG-8)的一組G蛋白偶聯(lián)受體給細(xì)胞發(fā)信號(hào)。這些受體與關(guān)于結(jié)構(gòu)相關(guān)溶血磷脂 酸(LPA)的 3 種其他受體(LPA1、LPA2 和 LPA3(以前為 EDG_2、EDG_4 和 EDG-7))共享 50-55% 氨基酸和簇同一性。(Ishii，I.等人，Mol. Pharmacol. 58 (5) :895-902 (2000))。當(dāng)配 體與那種受體結(jié)合時(shí)，在G蛋白偶聯(lián)受體(GPCR)中誘導(dǎo)構(gòu)象轉(zhuǎn)變，促使在結(jié)合的G蛋白的 α-亞單位上的⑶P由GTP替換和G蛋白后續(xù)釋放到細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。α-亞單位隨后與β Υ-亞 單位解離，并且每個(gè)亞單位隨后可以與效應(yīng)蛋白質(zhì)結(jié)合，這激活第二信使，導(dǎo)致細(xì)胞應(yīng)答。 最后，在G蛋白上的GTP水解為GDP，并且G蛋白的亞單位彼此再次結(jié)合，并且隨后與受體再 次結(jié)合。擴(kuò)增在一般GPCR途徑中起主要作用。一種配體與一種受體的結(jié)合導(dǎo)致許多G蛋 白的活化，各自能夠與許多效應(yīng)蛋白質(zhì)結(jié)合，導(dǎo)致擴(kuò)增的細(xì)胞應(yīng)答。SlP受體成為良好的藥 物靶，因?yàn)閭€(gè)別受體是組織和應(yīng)答特異性的。SlP受體的組織特異性是重要的，因?yàn)殚_(kāi)發(fā)對(duì) 于一種受體選擇性的激動(dòng)劑或拮抗劑使細(xì)胞應(yīng)答集中于包含那種受體的組織，限制不希望 有的副作用。SlP受體的應(yīng)答特異性也是重要的，因?yàn)樗试S開(kāi)發(fā)起始或抑制特定細(xì)胞應(yīng)答 而不影響其他應(yīng)答的激動(dòng)劑或拮抗劑。例如，SlP受體的應(yīng)答特異性可以允許起始血小板 聚集而不影響細(xì)胞形態(tài)的SlP模擬物。SlP作為鞘氨醇的代謝產(chǎn)物在其與鞘氨醇激酶的反應(yīng)中形成，并且大量貯存于血 小板聚集體中，其中存在高水平的鞘氨醇激酶且不存在鞘氨醇裂解酶。SlP在血小板聚集過(guò) 程中釋放，在血清中累積，并且也在惡性腹水中發(fā)現(xiàn)。SlP生物降解最可能經(jīng)由通過(guò)磷酸外 切水解酶(ectophosphohydrolases)水解而進(jìn)行，特別是1_磷酸-鞘氨醇磷酸水解酶。因 此存在關(guān)于對(duì)于SlP特異性的抗體的需要，用于通過(guò)阻斷其與受體的相互作用或穩(wěn)定SlP 且增強(qiáng)其生物效應(yīng)來(lái)調(diào)節(jié)其生物學(xué)功能，用于在預(yù)防或治療自身免疫疾病、炎性疾病和癌 癥中使用。由于PGE2在各種人病癥中的作用，已設(shè)計(jì)了抑制或?qū)筆GE2活性的治療策略。特 別地，適合于遞送給人的治療抗體仍未得到報(bào)道，所述治療抗體與PGE2結(jié)合且中和PGE2。 本領(lǐng)域存在關(guān)于能夠結(jié)合且中和PGE2的改良抗體的需要。發(fā)明概述
本發(fā)明涉及對(duì)脂質(zhì)代謝產(chǎn)物例如前列腺素E2 (PGE2)特異的結(jié)合蛋白。本發(fā)明的PGE2 結(jié)合蛋白包括但不限于能夠結(jié)合PGE2的抗體、抗原結(jié)合片段、和具有各種支架的抗原結(jié)合 片段。本發(fā)明的一個(gè)方面涉及能夠結(jié)合PG&的結(jié)合蛋白。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的 結(jié)合蛋白具有中和、穩(wěn)定、拮抗和/或激動(dòng)活性。在另一個(gè)實(shí)施方案中，結(jié)合蛋白能夠調(diào)節(jié) PGE2的生物學(xué)功能。例如，結(jié)合蛋白能夠至少部分中和PGE2。在本發(fā)明的一個(gè)方面，結(jié)合蛋白能夠結(jié)合PGE2，并且阻止？6氏與一種或更多種PGE2受體(例如，EP1、EP2、EP3和EP4)結(jié)合。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，結(jié)合蛋白能夠結(jié) 合PGE2,并且阻止PGE2與EP1、EP2、EP3和EP4受體結(jié)合。本發(fā)明提供了制備、表征且使用PGE2結(jié)合蛋白作為單一療法或作為與其他治療劑 的組合療法的方法；以及在預(yù)防和/或治療由PGE2介導(dǎo)的疾病中的方法，所述疾病例如自 身免疫和炎性疾病，例如類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、Crohn氏病、骨關(guān)節(jié)炎、AMD、淋巴結(jié)病、溶血性貧 血、紫癜、強(qiáng)直性脊柱炎、多發(fā)性硬化、糖尿病、癌癥、疼痛、骨丟失/恢復(fù)、atherosclelotic 病、生殖病癥和其他疾病。本發(fā)明的結(jié)合蛋白還可以用于此種疾病的診斷中。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，結(jié)合蛋白是結(jié)合PGE2的分離的抗體或其抗原結(jié)合片 段。此種結(jié)合可以在基于生物素化PG& WELISA測(cè)定中加以證實(shí)，其中EC5tl選自約1χ10_6 -約 1χ1(Γ7 Μ、約 lxl(T7 -約 1χ1(Γ8 Μ、約 lxl(T8 -約 1χ1(Γ9 Μ、約 1(Γ9 -約 10, Μ、約 1x10, -約1Χ10_" Μ、和約10_"-約10_12Μ。在另一個(gè)實(shí)施方案中，結(jié)合蛋白與PG&的結(jié)合在基 于3H標(biāo)記的PGE2的放射免疫測(cè)定中加以證實(shí)，其中Kd選自約lxlO—6 -約lxlO—7 Μ、約lxlO—7 -約 1χ1(Γ8 Μ、約 lxl(T8 -約 1χ1(Γ9 Μ、約 1(Γ9 -約 1(T1QM、約 1x10,-約 1χ1(Γ" M 和約 10_"-約10_12。在另一個(gè)實(shí)施方案中，結(jié)合蛋白與結(jié)合在FLIPR中加以證實(shí)，其中 通過(guò)其受體ΕΡ4介導(dǎo)的導(dǎo)的鈣流入通過(guò)結(jié)合蛋白與PGE2的結(jié)合加以抑制，其中IC5tl 選自約 1χ1(Γ6 -約 1χ1(Γ7 Μ、約 1x10"-約 1χ1(Γ8 Μ、約 lxl(T8 -約 1χ1(Γ9 Μ、約 1(Γ9 -約 10, Μ、約 1x10,-約 1χ1(Γ" M 和約 1(Γ"-約 1(Γ12。在一個(gè)實(shí)施方案中，在基于FACS的受體結(jié)合測(cè)定中，抗體抑制生物素化PGE2與細(xì) 胞表面上的ΕΡ1、ΕΡ2、ΕΡ3和/或ΕΡ4受體結(jié)合，或在基于ELISA的受體結(jié)合測(cè)定中，抗體抑 制生物素化PGE2與使用受體表達(dá)細(xì)胞制備的膜制劑上的ΕΡ1、ΕΡ2、ΕΡ3和/或ΕΡ4受體結(jié) 合，其中 IC5tl 為約 1χ1(Γ6 -約 1x10" Μ、約 1χ1(Γ7 -約 1χ1(Γ8 Μ、約 lxl(T8 -約 1χ1(Γ9 Μ、 約 10_9 -約 10_10Μ、約 IxlO"10 -約 IxlO"11 M 和約 10—11 -約 10_12，或在基于 3H PGE2 的放 射免疫測(cè)定中，抗體抑制3H- PGE2與細(xì)胞表面或膜制劑上的ΕΡ1、ΕΡ2、ΕΡ3和/或ΕΡ4受體 結(jié)合，其中 IC50 為約 IxlO"6 -約 1x10" Μ、約 1x10"-約 IxlO"8 Μ、約 IxlO"8 -約 IxlO"9 Μ、約 1(Γ9 -約 10, Μ、約 1x10,-約 1χ1(Γ" M 和約 1(Γ"-約 1(Γ12，和 / 或在 ΕΡ4 介導(dǎo) 的FLIPR測(cè)定中，抗體抑制PGE2誘導(dǎo)的鈣流入，其中IC5。為1x10—6 -約1χ10_7 Μ、約lxlO-7 -約 1χ1(Γ8 Μ、約 lxl(T8 -約 1χ1(Γ9 Μ、約 1(Γ9 -約 1(T1QM、約 1x10,-約 1χ1(Γ" M 和約 10_"-約10_12。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體或其抗原結(jié)合片段結(jié)合PGE2,并且在基于細(xì)胞表面 的受體結(jié)合測(cè)定中，或在基于放射免疫測(cè)定的受體結(jié)合測(cè)定中，在100 ηΜ的濃度下使PGE2 與其受體中的至少一種的結(jié)合抑制約70-100%。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體是19C9、4F10、15F10、K1B、K7H、K3A、LlU L21、2B5_7. 0、 2B5-8. 0或2B5-9. 0或其變體。在一個(gè)實(shí)施方案中，變體是人源化變體，例如Hu2B5. Pl或 Hu2B5. P2。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其結(jié)合PGE2,并且在 角叉菜膠誘導(dǎo)的嚙齒類(lèi)動(dòng)物爪水腫模型中，使爪水腫抑制約10 %、20 %、30 %、40 %、50 %、 60%,70^^80^^90%或100%。在一個(gè)特定實(shí)施方案中，在角叉菜膠誘導(dǎo)的嚙齒類(lèi)動(dòng)物爪 水腫模型中，抗體使爪水腫抑制超過(guò)約10%。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其結(jié)合PGE2，并且 在嚙齒類(lèi)動(dòng)物膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎模型中，使爪腫脹或平均關(guān)節(jié)炎得分抑制約10 %、20 %、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或100%。在一個(gè)特定實(shí)施方案中，在嚙齒類(lèi)動(dòng)物膠 原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎模型中，抗體使爪腫脹或平均關(guān)節(jié)炎得分抑制超過(guò)10%。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其結(jié)合PGE2,并且在 角叉菜膠誘導(dǎo)的嚙齒類(lèi)動(dòng)物爪水腫模型中，使爪水腫抑制約10 %、20 %、30 %、40 %、50 %、 60%,70^^80^^90%或100%。在一個(gè)特定實(shí)施方案中，在角叉菜膠誘導(dǎo)的嚙齒類(lèi)動(dòng)物爪 水腫模型中，抗體使爪水腫抑制超過(guò)約10%。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其結(jié)合PGE2，并且 在嚙齒類(lèi)動(dòng)物膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎模型中，使爪腫脹或平均關(guān)節(jié)炎得分抑制約10 %、20 %、 30 %、40 %、50 %、60 %、70 %、80 %、90 %或100 %。在一個(gè)特定實(shí)施方案中，在嚙齒類(lèi)動(dòng)物膠 原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎模型中，抗體使爪腫脹或平均關(guān)節(jié)炎得分抑制超過(guò)10%。在另一個(gè)實(shí)施方案中，如通過(guò)放射免疫測(cè)定測(cè)量的，本發(fā)明的結(jié)合蛋白對(duì)于PGE2 具有至多約KT3s-1 ；至多約IO-4s-1 ；至多約IO-5s-1 ；或至多約IO-fV1的解離速率(off rate) 常數(shù)(k。ff)。優(yōu)選地，如通過(guò)放射免疫測(cè)定測(cè)量的，本發(fā)明的結(jié)合蛋白對(duì)于PG&具有約ΙΟ、—1 -約ΙΟ、-1 ；約ΙΟ-、-1 -約ΙΟ、-1 ；或約ΙΟ、-1 -約ΙΟΥ1的解離速率常數(shù)(k。ff)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，通過(guò)放射免疫測(cè)定測(cè)定的，本發(fā)明的結(jié)合蛋白對(duì)于？6氏具 有至多約1(Γ6 M ；至多約1(Γ7 M ；至多約1(Γ8 M ；至多約1(Γ9 M ；至多約10, M ；至多約10_" Μ;至多約10_12 Μ;或至多10_13Μ的解離常數(shù)(KD)。優(yōu)選地，本發(fā)明的結(jié)合蛋白對(duì)于？6氏具 有約 10" M -約 1(Γ8 M ；約 1(Γ8 M -約 1(Γ9 M ；約 1(Γ9 M -約 1(T1Q M ；約 10,-約 1(Γ" M;約10—11 M -約10_12 M;或約10_12 - M約10_13 M的解離常數(shù)(KD)。本發(fā)明的一個(gè)方面提 供了針對(duì)本發(fā)明的至少一種PGE2結(jié)合蛋白的至少一種PGE2抗獨(dú)特型抗體?？躬?dú)特型抗體 包括包含分子的任何蛋白質(zhì)或肽，所述分子包括免疫球蛋白分子的至少一部分，例如但不 限于重或輕鏈或其配體結(jié)合部分的至少一個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)、重鏈或輕鏈可變區(qū)、重鏈或 輕鏈恒定區(qū)、構(gòu)架區(qū)，或；其任何部分，其可以摻入本發(fā)明的結(jié)合蛋白內(nèi)。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其結(jié)合前列腺素 E2，并且在基于細(xì)胞表面的受體結(jié)合測(cè)定中，其中IC5tl選自約lxl0_6 - IxlO-7 MUxlO-7 -IxlO"8 MUxlO"8 - IxlO"9 MUO"9 - IO-10MUxIO"10 - IxlO"11 M 和 1(Γ" - 1(Γ12Μ，或在基于 ELISA 的受體結(jié)合測(cè)定中，其中 IC5。選自約 1χ1(Γ6 - IxlO"7 MUxlO"7 - IxlO"8 MUxlO"8 -IxlO"9 MUO"9 - 1(Γ10Μ、1χ1(Γ10 - IxlO"11 M 禾口 1(Γ" - 1(Γ12 Μ，抑制前列腺素 E2 與 El、Ε2、 E3和E4受體中的至少一種結(jié)合。在另一個(gè)實(shí)施方案中，抗體或其抗原結(jié)合片段結(jié)合前列腺素&，并且在基于細(xì)胞 表面的受體結(jié)合測(cè)定中或在基于3H-PGE2的放射免疫測(cè)定中，使用表達(dá)El、E2、E3和E4受 體中的至少一種的細(xì)胞，或表達(dá)E1、E2、E3和E4受體中的至少一種的細(xì)胞膜制劑，在約100 nM的濃度下使前列腺素E2與El、E2、E3和E4受體中的至少一種的結(jié)合抑制約70-100%。 在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體選自 19C9、4F10、15F10、K1B、K7H、K3A、Lll、L21、2B5_7. 0、2B5_8. 0 和2B5-9.0。在另一個(gè)實(shí)施方案中，抗體或其抗原結(jié)合片段能夠調(diào)節(jié)前列腺素氏的生物學(xué)功 能，例如中和前列腺素E2。抗體或其抗原結(jié)合片段選自免疫球蛋白分子、單克隆抗體、嵌合 抗體、CDR移植的抗體、人源化抗體、Fab、Fab，、F (ab，)2、Fv、二硫化物連接的Fv、scFv、單 結(jié)構(gòu)域抗體、雙抗體、多特異性抗體、雙重特異性抗體和雙特異性抗體。在一個(gè)實(shí)施方案中， 抗體或其抗原結(jié)合片段是人源化抗體。在另一個(gè)實(shí)施方案中，抗體選自Hu2B5.Pl和Hu2B5.P20本發(fā)明還提供了藥物組合物，其包括抗體或其抗原結(jié)合片段、和藥學(xué)可接受的載體。在 一個(gè)實(shí)施方案中，藥物組合物進(jìn)一步包括至少一種另外治療劑用于治療其中前列腺素E2活 性是有害的病癥。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了生成與前列腺素氏結(jié)合的抗體或其片段的方法，其 包括用前列腺素甲狀腺球蛋白免疫接種非人動(dòng)物，收集包含抗前列腺素氏抗體的體液 或器官，并且分離抗前列腺素E2抗體的步驟。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了包括抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域的人源化抗體，能夠結(jié)合前列 腺素E2,包括包含選自SEQ ID NOs 54-59的氨基酸序列的至少一個(gè)⑶R區(qū)。在另一個(gè)實(shí)施 方案中，本發(fā)明提供了包括抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域的人源化抗體，所述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包括包含 氨基酸序列的至少一個(gè)⑶R區(qū)，所述氨基酸序列與選自SEQ ID NOs 54-59的氨基酸序列至 少約60 %、至少約65 %、至少約70 %、至少約75 %、至少約80 %、至少約85 %、至少約90 %、 至少約95%或至少約98%同源。在一個(gè)實(shí)施方案中，人源化抗體包括選自SEQ ID NOs 78、 79、80和81的氨基酸序列。在一個(gè)方面，本發(fā)明的結(jié)合蛋白能夠結(jié)合PGE2，所述抗 原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包括包含選自下述的氨基酸序列的至少一個(gè)CDR 在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了包括抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域的結(jié)合蛋白或其片段， 所述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包括包含選自下述的氨基酸序列的至少一個(gè)⑶R :SEQ ID NOs :6、7、8、 10、11、12、14、15、16、18、19、20、22、23、26、27、28、30、31、32、34、35、37、38 和 39。在另一個(gè) 實(shí)施方案中，結(jié)合蛋白或其片段包括抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域，所述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包括包含選自 下述的氨基酸序列的至少一個(gè)VH區(qū)SEQ ID NOs :5、13、21、25、33、40、42和44。在另外一 個(gè)實(shí)施方案中，結(jié)合蛋白或其片段包括抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域，所述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包括包含選 自下述的氨基酸序列的至少一個(gè)VL區(qū)SEQ ID NOs :9、17、M、29、36、41、43和45。在另外 一個(gè)實(shí)施方案中，結(jié)合蛋白或其片段包括抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域，所述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包括包含 選自SEQ ID NOs 54-59的氨基酸序列的至少一個(gè)⑶R區(qū)。在一個(gè)實(shí)施方案中，結(jié)合蛋白包括例如選自VH⑶R組的至少3個(gè)⑶Rs，所述VH CDR組選自 SEQ ID NOs :6、7禾口 8 ；SEQ ID NOs :14、15和 16 ；SEQ ID NOs :14、22和 23、SEQ ID N0s:26、27 和 28 和 32 ；SEQ ID N0s:26、34 和 35 ；禾口 SEQ ID N0s:54、55 和 56。在另 一個(gè)實(shí)施方案中，所述至少3個(gè)⑶Rs選自VL⑶R組，所述VL⑶R組選自SEQ ID NOs 10、 11 禾口 12 ；SEQ ID NOs :17、18 禾口 19 ；SEQ ID NOs :30、31 禾口 32 ；SEQ ID NOs :37、38 禾口 39 ； SEQ ID N0s:42、43和44 ；和SEQ ID N0s:57、58和59。在另外一個(gè)實(shí)施方案中，所述至少 3個(gè)⑶Rs包括具有SEQ ID NOs :54、55和56的氨基酸序列的VH⑶R組，和/或具有SEQ ID NOs 57,58和59的氨基酸序列的VL CDR組。在另一個(gè)實(shí)施方案中，結(jié)合蛋白包括至少2個(gè)可變結(jié)構(gòu)域⑶R組，例如選自SEQ ID N0s:6、7、8 和 SEQ ID NOs :10、11、12 ;SEQ ID NOs 14、15、16 和 SEQ ID NOs :18,19,20 ；SEQ ID NOs :14、22、23 和 SEQ ID NOs :10、11、12 ;SEQ ID NOs :26、27、28 和 SEQ ID NOs 30、31、32;和 SEQ ID NOs :26、34、35 和 SEQ ID NOs :37、38、39。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的結(jié)合蛋白包括具有選自下述的氨基酸序列的2個(gè) 可變結(jié)構(gòu)域:SEQ ID NO:5禾口 SEQ ID N0:9 ；SEQ ID NO: 13禾口 SEQ ID NO: 17 ；SEQ ID NO:21 和 SEQ ID NO:24 ；SEQ ID N0:25 禾口 SEQ ID NO:29 ；SEQ ID N0:33 禾口 SEQ ID N0:36 ；SEQ ID N0:40和 SEQ ID N0:41 ；SEQ ID N0:42和 SEQ ID N0:43 ；和 SEQ ID N0:44和 SEQ ID N0:45。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述2個(gè)可變結(jié)構(gòu)域具有選自下述的氨基酸序列SEQ ID N0:60禾口 SEQ ID N0:61 ；SEQ ID N0:62禾口 SEQ ID NO:63 ；SEQ ID N0:64禾口 SEQ ID N0:65 ； SEQ ID N0:66和 SEQ ID N0:67 ；SEQ ID N0:68和 SEQ ID N0:69 ；SEQ ID N0:70和 SEQ ID N0:71 ；SEQ ID N0:72和 SEQ ID N0:73 ；SEQ ID N0:74和 SEQ ID N0:75 ；和 SEQ ID N0:76 和SEQ ID N0:77。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述2個(gè)可變結(jié)構(gòu)域具有選自下述的氨基酸序列 SEQ ID N0:78 和 SEQ ID N0:79;和 SEQ ID N0:80 和 SEQ ID N0:81。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了與前列腺素氏結(jié)合的人源化抗體或其片段，所述人 源化抗體包括包含選自下述的氨基酸序列的至少一個(gè)VH區(qū)SEQ ID NOs :60、62、64、66、 68、70、72、74、76、78和80。在另一個(gè)實(shí)施方案中，人源化抗體或其片段包括包含選自下述 的氨基酸序列的至少一個(gè) VL 區(qū)SEQ ID NOs 61 63、65、67、69、71、73、75、77、79 和 81。在 另外一個(gè)實(shí)施方案中，所述至少一個(gè)VH區(qū)或至少一個(gè)VL區(qū)包括包含至少一個(gè)氨基酸置換 的人受體構(gòu)架序列，其中所述構(gòu)架序列的氨基酸序列與人受體構(gòu)架序列的序列至少65%相 同。例如，人受體構(gòu)架可以包括在關(guān)鍵殘基上的至少一個(gè)構(gòu)架氨基酸置換，所述關(guān)鍵殘基 選自與CDR相鄰的殘基、糖基化位點(diǎn)殘基、罕見(jiàn)殘基、能夠與前列腺素&相互作用的殘基、 能夠與CDR相互作用的殘基、典型殘基、在重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)之間的接觸殘基、在 Vernier區(qū)內(nèi)的殘基、和在Chothia限定的可變重鏈⑶Rl和Kabat限定的第一個(gè)重鏈構(gòu)架 之間重疊的區(qū)域中的殘基。在另一個(gè)實(shí)施方案中，結(jié)合蛋白進(jìn)一步包括人受體構(gòu)架。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，人重鏈和輕鏈?zhǔn)荏w序列選自表7和表8中所述的序 列(實(shí)施例4. 2. 1)。其他人重鏈和輕鏈?zhǔn)荏w序列是本領(lǐng)域眾所周知的，并且適合于與本發(fā)明 一起使用。在一個(gè)實(shí)施方案中，結(jié)合蛋白是能夠結(jié)合PGE2的CDR移植的抗體或其抗原結(jié)合 部分。在另一個(gè)實(shí)施方案中，結(jié)合蛋白是能夠結(jié)合PGE2的人源化抗體或其抗原結(jié)合部分。 在一個(gè)實(shí)施方案中，CDR移植的抗體或人源化抗體或其抗原結(jié)合部分包括此處公開(kāi)的一個(gè) 或更多個(gè)CDRs，例如3個(gè)或更多個(gè)、4個(gè)或更多個(gè)、5個(gè)或更多個(gè)、或6個(gè)或更多個(gè)CDRs。在 另一個(gè)實(shí)施方案中，CDR移植的抗體或人源化抗體或其抗原結(jié)合部分包括人受體構(gòu)架。所 述人受體構(gòu)架可以是人免疫球蛋白的任何受體構(gòu)架。在一個(gè)特定實(shí)施方案中，人受體構(gòu)架 是此處公開(kāi)的人受體構(gòu)架中的任何一個(gè)。在一個(gè)實(shí)施方案中，將CDRs摻入人受體構(gòu)架的 人抗體可變結(jié)構(gòu)域內(nèi)。在一個(gè)實(shí)施方案中，人抗體可變結(jié)構(gòu)域是共有人可變結(jié)構(gòu)域。在另 一個(gè)實(shí)施方案中，人受體構(gòu)架包括在關(guān)鍵殘基上的至少一個(gè)構(gòu)架區(qū)氨基酸置換，其中所述 關(guān)鍵殘基選自與CDR相鄰的殘基；糖基化位點(diǎn)殘基；罕見(jiàn)殘基；能夠與PGE2相互作用的殘 基；能夠與CDR相互作用的殘基；典型殘基；在重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)之間的接觸殘基； 在Vernier區(qū)內(nèi)的殘基；和在Chothia限定的可變重鏈⑶Rl和Kabat限定的第一個(gè)重鏈 構(gòu)架之間重疊的區(qū)域中的殘基。在一個(gè)實(shí)施方案中，人受體構(gòu)架人受體構(gòu)架包括至少一個(gè)構(gòu)架區(qū)氨基酸置換，其中所述構(gòu)架的氨基酸序列與所述人受體構(gòu)架的序列至少65%相同， 并且包括與所述人受體構(gòu)架相同的至少70個(gè)氨基酸殘基。在一個(gè)實(shí)施方案中，在關(guān)鍵殘基 上的構(gòu)架區(qū)氨基酸置換選自在重鏈可變區(qū)中在位置48上的M (人)至I (小鼠)、在位置68 上的V (人)至A (小鼠)、在位置70上的M (人)至L (小鼠)、和在位置72上的T (人)至V (小鼠)；以及在輕鏈可變區(qū)中在位置2上的I (人)至V (小鼠)、和在位置3上的V (人)至 L (小鼠)。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了包括結(jié)合蛋白中的任何一種和接頭多肽和/或免疫 球蛋白恒定結(jié)構(gòu)域的抗體構(gòu)建體。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體構(gòu)建體選自免疫球蛋白分子、單 克隆抗體、嵌合抗體、⑶R移植的抗體、人源化抗體、Fab、Fab，、F (ab，)2、Fv、二硫化物連接 的Fv、SCFv、單結(jié)構(gòu)域抗體、雙抗體、多特異性抗體、雙重特異性抗體和雙特異性抗體。在一 個(gè)實(shí)施方案中，抗體構(gòu)建體包括選自下述的重鏈免疫球蛋白恒定結(jié)構(gòu)域人IgM恒定結(jié)構(gòu) 域、人IgGl恒定結(jié)構(gòu)域、人IgG2恒定結(jié)構(gòu)域、人IgG3恒定結(jié)構(gòu)域、人IgG4恒定結(jié)構(gòu)域、人 IgE恒定結(jié)構(gòu)域和人IgA恒定結(jié)構(gòu)域。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體構(gòu)建體包括具有選自下述 的氨基酸序列的免疫球蛋白恒定結(jié)構(gòu)域=SEQ ID NO. :1 ；SEQ ID NO. :2 ；SEQ ID NO. :3 ；SEQ ID NO. :4 ；和 SEQ ID NO. :5。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了包括抗PGE2抗體構(gòu)建體和選自下述的試劑 的抗PGE2抗體綴合物免疫粘附分子、顯像劑、治療劑和細(xì)胞毒性劑。在一個(gè)實(shí)施方案中， 所述試劑是選自下述的顯像劑放射性標(biāo)記、酶、熒光標(biāo)記、發(fā)光標(biāo)記、生物發(fā)光標(biāo)記、磁性 標(biāo)記和生物素。在另一個(gè)實(shí)施方案中，顯像劑是例如選自下述的放射性標(biāo)記3H、14C、35S、9°Y、 99TC、mIn、125I、131I、mLU、166H0和153Sm。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述試劑是選自下述的治療 或細(xì)胞毒性劑抗代謝物、烷化劑、抗生素、生長(zhǎng)因子、細(xì)胞因子、抗血管生成劑、抗有絲分裂 劑、蒽環(huán)類(lèi)、毒素和細(xì)胞凋亡劑。在另一個(gè)實(shí)施方案中，結(jié)合蛋白是糖基化的。在一個(gè)特定實(shí)施方案中，PGE2結(jié)合 蛋白具有人糖基化模式。在另一個(gè)實(shí)施方案中，PGE2結(jié)合蛋白、抗體構(gòu)建體或抗體綴合物是結(jié)晶的(例如， 作為晶體存在)。在一個(gè)實(shí)施方案中，晶體是無(wú)載體的藥學(xué)控釋晶體。在另一個(gè)實(shí)施方案中， 結(jié)晶結(jié)合蛋白、結(jié)晶抗體構(gòu)建體或結(jié)晶抗體綴合物具有比其可溶性對(duì)應(yīng)物更長(zhǎng)的體內(nèi)半衰 期。在另一個(gè)實(shí)施方案中，結(jié)晶結(jié)合蛋白、結(jié)晶抗體構(gòu)建體或結(jié)晶抗體綴合物在結(jié)晶化后保 留生物學(xué)活性。本發(fā)明的一個(gè)方面涉及包括能夠PGE2的結(jié)合蛋白的DVD結(jié)合蛋白。優(yōu)選地， DVD結(jié)合蛋白能夠結(jié)合2個(gè)PGE2結(jié)合位點(diǎn)或結(jié)合PGE2和第二種靶。第二種靶選自
CSFI (MCSf C'SF2(GM-CSF), CSB lGCSFi, FGFZ tl-N I, IFNpL IFNy.組胺和組胺受體權(quán)利要求
1.一種包括抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域的CDR移植的結(jié)合蛋白或其片段，所述結(jié)合蛋白能夠結(jié)合 PGE2，所述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包括包含選自下述的氨基酸序列的至少一個(gè)CDR GYTFT'KYWl,G (SHQ ID NO: Μι. DIYPGYDYTHYNEKFKD {SEQ ID NO; 55).SDGSSTY <SE0 ID NO 56), TSSONtVHSKCNTYLF (SEQ ID NO: 57),KVSNRFSG (SEQ ID、0: 5X). FQVSHVPVT (SEQ 1L> NO: 59>。
2.權(quán)利要求1的結(jié)合蛋白，其中所述結(jié)合蛋白或其片段能夠調(diào)節(jié)前列腺素E2的生物學(xué) 功能。
3.權(quán)利要求1的結(jié)合蛋白，其中所述結(jié)合蛋白或其片段能夠中和前列腺素E2。
4.權(quán)利要求1的結(jié)合蛋白，其中所述結(jié)合蛋白或其片段能夠阻止前列腺素E2與前列腺 素氏受體EPl的結(jié)合。
5.權(quán)利要求1的結(jié)合蛋白，其中所述結(jié)合蛋白或其片段能夠阻止前列腺素E2與選自 EP1、EP2、EP3和EP4的至少一種前列腺素&受體的結(jié)合。
6.權(quán)利要求1的結(jié)合蛋白，其中使用ELISA測(cè)定，所述結(jié)合蛋白或其片段以選自下述 的 EC5tl 結(jié)合前列腺素 E2 約 IxlO-6 -約 1x10" M、約 1x10"-約 1χ1(Γ8 M、約 1χ1(Γ8 -約 IxlO"9 M、約 1(Γ9 -約 1(T1Q Μ、約 lxl(T1Q -約 1χ1(Γ" M、和約 1(Γ"-約 1(Γ12 Μ。
7.權(quán)利要求1的結(jié)合蛋白，其中所述結(jié)合蛋白或其片段在ΕΡ4受體介導(dǎo)的FLira測(cè)定 中抑制通過(guò)前列腺素E2與前列腺素E2受體ΕΡ4誘導(dǎo)的鈣流入，其中IC5tl選自約1χ10_6 -約 IxlO-7 Μ、約 1χ1(Γ7 -約 1χ1(Γ8 Μ、約 lxl(T8 -約 1χ1(Γ9 Μ、約 1(Γ9 -約 1(T1CI Μ、約 1x10, -約 1χ1(Γ" M 和約 1(Γ"-約 1(Γ12 Μ。
8.權(quán)利要求1的結(jié)合蛋白，其中所述結(jié)合蛋白或其片段已經(jīng)親和力成熟。
9.一種包括抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域的結(jié)合蛋白或其片段，所述結(jié)合蛋白能夠結(jié)合前列腺素 E2，所述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包括包含選自下述的氨基酸序列的至少一個(gè)⑶R :SEQ ID NO:ft. s, IiK I t 12, 14, 15 16. W. R 0. 21 23. 26. 2λ S. —W, . ’’:. }4. 35, . W. 54. 5.x5S. U 59。
10.一種包括抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域的結(jié)合蛋白或其片段，所述結(jié)合蛋白能夠結(jié)合前列腺素 E2，所述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包括包含選自下述的氨基酸序列的至少一個(gè)VH區(qū)SEQ NOs :5、 13、21、25、33、40、42 和 44。
11.一種包括抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域的結(jié)合蛋白或其片段，所述結(jié)合蛋白能夠結(jié)合前列腺素 E2，所述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包括包含選自下述的氨基酸序列的至少一個(gè)VL區(qū)SEQ ID NOs :9、 17、24、29、36、41、43 和 45。
12.一種包括抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域的人源化結(jié)合蛋白或其片段，所述結(jié)合蛋白能夠結(jié)合前 列腺素E2,所述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包括包含選自SEQ ID N0s:M-59的氨基酸序列的至少一個(gè) CDR 區(qū)。
13.權(quán)利要求9的結(jié)合蛋白，其中所述結(jié)合蛋白包括至少3個(gè)⑶Rs。
14.權(quán)利要求13的結(jié)合蛋白，其中所述至少3個(gè)⑶Rs選自VH⑶R組，所述VH⑶R組 選自 SEQ ID N0s:6、7 禾口 8 ;SEQ ID NOs: 14、15 和 16 ;SEQ ID N0s:14、22 和 23、SEQ ID NOs :26,27 和 28 ；SEQ ID NOs :26、34 和 35 ；禾口 SEQ ID NOs :54、55 和 56。
15.權(quán)利要求13的結(jié)合蛋白，其中所述至少3個(gè)⑶Rs選自VL⑶R組，所述VL⑶R組 選自 SEQ ID NOs 10,11 和 12 ；SEQ ID NOs :18、19 禾口 20 ；SEQ ID NOs :30、31 和 32 ；SEQ ID NOs 37,38 和 39 ；SEQ ID NOs :57、58、59。
16.權(quán)利要求13的結(jié)合蛋白，其中所述至少3個(gè)⑶Rs包括具有SEQID N0s:54、55和 56的氨基酸序列的VH⑶R組，和/或具有SEQ ID NOs :57、58和59的氨基酸序列的VL CDR 組。
17.權(quán)利要求9的結(jié)合蛋白，其中所述結(jié)合蛋白包括至少2個(gè)可變結(jié)構(gòu)域⑶R組。
18.權(quán)利要求17的結(jié)合蛋白，其中所述至少2個(gè)可變結(jié)構(gòu)域⑶R組選自SEQID NOs 6、7、8 和 SEQ ID NOs :10、11、12 ;SEQ ID NOs 14、15、16 和 SEQ ID NOs :18,19,20 ；SEQ ID NOs :14、22、23 和 SEQ ID NOs :10、11、12 ；SEQ ID NOs :26、27、28 和 SEQ ID NOs :30、31、32 ； SEQ ID NOs :26、34、35 和 SEQ ID NOs :37、38、39 ；和 SEQ ID NOs :54、55、56 和 SEQ ID NOs 57、58、59。
19.一種與前列腺素氏結(jié)合的人源化抗體或其片段，所述人源化抗體包括包含選自下 述的氨基酸序列的至少一個(gè) VH 區(qū)=SEQ ID NOs :60、62、64、66、68、70、72、74、76、78 和 80。
20.一種與前列腺素氏結(jié)合的人源化抗體或其片段，所述人源化抗體包括包含選自下 述的氨基酸序列的至少一個(gè) VL 區(qū)=SEQ ID NOs :61、63、65、67、69、71、73、75、77、79 和 81。
21.根據(jù)權(quán)利要求1的結(jié)合蛋白，其進(jìn)一步包括人受體構(gòu)架。
22.根據(jù)權(quán)利要求21的結(jié)合蛋白，其中所述人受體構(gòu)架包括選自下述的至少一個(gè)氨基 酸序列=SEQ ID NOs :46、47、48、49、50、51、52 和 53。
23.權(quán)利要求21或22的人源化抗體，其中所述人受體構(gòu)架包括選自下述的至少一個(gè)構(gòu) 架區(qū)氨基酸置換在所述重鏈可變區(qū)中在位置48上的M (人)至I (小鼠)、在位置68上的 V (人)至A (小鼠)、在位置70上的M (人)至L (小鼠)、和在位置72上的T (人)至V (小 鼠);和在所述輕鏈可變區(qū)中在位置2上的I (人)至V (小鼠)、和在位置3上的V (人)至L (小鼠)。
24.權(quán)利要求19或20的人源化抗體，其中所述至少一個(gè)VH區(qū)或至少一個(gè)VL區(qū)包括包 含至少一個(gè)氨基酸置換的人受體構(gòu)架序列，其中所述構(gòu)架序列的氨基酸序列與所述人受體 構(gòu)架 序列的序列至少65%相同。
25.權(quán)利要求23的人源化抗體，其中所述人受體構(gòu)架包括在關(guān)鍵殘基上的至少一個(gè)構(gòu) 架氨基酸置換，所述關(guān)鍵殘基選自與CDR相鄰的殘基、糖基化位點(diǎn)殘基、罕見(jiàn)殘基、能夠與 前列腺素&相互作用的殘基、能夠與CDR相互作用的殘基、典型殘基、在重鏈可變區(qū)和輕 鏈可變區(qū)之間的接觸殘基、在Vernier區(qū)內(nèi)的殘基、和在Chothia限定的可變重鏈⑶Rl和 Kabat限定的第一個(gè)重鏈構(gòu)架之間重疊的區(qū)域中的殘基。
26.權(quán)利要求1的結(jié)合蛋白，其中所述結(jié)合蛋白包括2個(gè)可變結(jié)構(gòu)域，其中所述2個(gè)可 變結(jié)構(gòu)域具有選自下述的氨基酸序列SEQ ID N0:5和SEQ ID NO:9 ；SEQ ID N0:13和SEQ ID NO: 17 ；SEQ ID NO: 21 和 SEQ ID NO:24 ；SEQ ID NO: 25 和 SEQ ID NO: 29 ；SEQ ID N0:33 和 SEQ ID N0:36 ；SEQ ID N0:40 禾口 SEQ ID N0:41 ；SEQ ID N0:42 禾口 SEQ ID N0:43;禾口 SEQ ID N0:44 和 SEQ ID N0:45。
27.權(quán)利要求1的結(jié)合蛋白，其中所述結(jié)合蛋白包括2個(gè)可變結(jié)構(gòu)域，其中所述2個(gè)可 變結(jié)構(gòu)域具有選自下述的氨基酸序列:SEQ ID N0:60和SEQ ID N0:61 ；SEQ ID N0:62禾口SEQID NO:63 ；SEQ ID NO:64 和 SEQ ID NO65 ；SEQ ID NO:66 和 SEQ ID NO67 ；SEQ ID NO:68 和 SEQ ID NO:69 ；SEQ ID NO: 70 和 SEQ ID NO: 71 ；SEQ ID NO: 72 和 SEQ ID NO: 73 ；SEQ ID NO:74 和 SEQ ID NO:75 ；SEQ ID NO:76 和 SEQ ID NO:77 ；SEQ ID NO:78 和 SEQ ID NO:79 ； 和 SEQ ID N0:800 和 SEQ ID N0:81。
28.—種包括權(quán)利要求1的結(jié)合蛋白的抗體構(gòu)建體，所述抗體構(gòu)建體進(jìn)一步包括接頭 多肽或免疫球蛋白恒定結(jié)構(gòu)域。
29.權(quán)利要求1的結(jié)合蛋白，其中所述結(jié)合蛋白選自免疫球蛋白分子、二硫化物連接的 Fv、單克隆抗體、scFv、嵌合抗體、單結(jié)構(gòu)域抗體、CDR移植的抗體、雙抗體、人源化抗體、多特 異性抗體、Fab、雙重特異性抗體、Fab，、雙特異性抗體、F (ab，)2*Fv。
30.權(quán)利要求觀的抗體構(gòu)建體，其中所述結(jié)合蛋白選自免疫球蛋白分子、二硫化物連 接的Fv、單克隆抗體、scFv、嵌合抗體、單結(jié)構(gòu)域抗體、CDR移植的抗體、雙抗體、人源化抗 體、多特異性抗體、Fab、雙重特異性抗體、Fab，、雙特異性抗體、F (ab，)2*Fv。
31.權(quán)利要求觀的抗體構(gòu)建體，其中所述結(jié)合蛋白包括選自下述的重鏈免疫球蛋白恒 定結(jié)構(gòu)域人IgM恒定結(jié)構(gòu)域、人IgG4恒定結(jié)構(gòu)域、人IgGl恒定結(jié)構(gòu)域、人IgE恒定結(jié)構(gòu) 域、人IgG2恒定結(jié)構(gòu)域、和人IgG3恒定結(jié)構(gòu)域和人IgA恒定結(jié)構(gòu)域。
32.權(quán)利要求觀的抗體構(gòu)建體，其中所述構(gòu)建體包括具有選自SEQID NOs 1_4的氨基 酸序列的免疫球蛋白恒定結(jié)構(gòu)域。
33.權(quán)利要求觀的抗體構(gòu)建體，其中所述結(jié)合蛋白具有人糖基化模式。
34.權(quán)利要求觀的抗體構(gòu)建體，其中所述抗體構(gòu)建體是結(jié)晶抗體構(gòu)建體。
35.權(quán)利要求33的抗體構(gòu)建體，其中所述結(jié)晶抗體構(gòu)建體是無(wú)載體的藥學(xué)控釋結(jié)晶抗 體構(gòu)建體。
36.權(quán)利要求34的抗體構(gòu)建體，其中所述抗體構(gòu)建體具有比所述抗體構(gòu)建體的可溶性 對(duì)應(yīng)物更長(zhǎng)的體內(nèi)半衰期。
37.權(quán)利要求34的抗體構(gòu)建體，其中所述抗體構(gòu)建體保留生物學(xué)活性。
38.一種包括權(quán)利要求觀的抗體構(gòu)建體的抗體綴合物，所述抗體綴合物進(jìn)一步包括選 自下述的試劑免疫粘附分子、顯像劑、治療劑和細(xì)胞毒性劑。
39.權(quán)利要求37的抗體綴合物，其中所述試劑是選自放射性標(biāo)記、酶、熒光標(biāo)記、發(fā)光 標(biāo)記、生物發(fā)光標(biāo)記、磁性標(biāo)記和生物素的顯像劑。
40.權(quán)利要求37的抗體綴合物，其中所述顯像劑是選自下述的放射性標(biāo)記3H、14C、35S、 90Y、99TC、mh、125I、131I、177Lu、166HO 和 153Sm0
41.權(quán)利要求37的抗體綴合物，其中所述試劑是選自下述的治療或細(xì)胞毒性劑抗代 謝物、烷化劑、抗生素、生長(zhǎng)因子、細(xì)胞因子、抗血管生成劑、抗有絲分裂劑、蒽環(huán)類(lèi)、毒素和 細(xì)胞凋亡劑。
42.權(quán)利要求1的結(jié)合蛋白，其中所述結(jié)合蛋白是結(jié)晶結(jié)合蛋白。
43.權(quán)利要求41的結(jié)合蛋白，其中所述結(jié)晶結(jié)合蛋白是無(wú)載體的藥學(xué)控釋結(jié)晶抗體。
44.一種分離的核酸，其編碼權(quán)利要求1的結(jié)合蛋白。
45.一種分離的核酸，其編碼權(quán)利要求觀的抗體構(gòu)建體。
46.一種載體，其包括根據(jù)權(quán)利要求43或44的分離的核酸。
47.權(quán)利要求45的載體，其中所述載體選自pcDNA、pTT、pTT3、pEFBOS、pBV、pJV、pBJ禾口 pA2。
48.一種宿主細(xì)胞，其包括權(quán)利要求45的載體。
49.權(quán)利要求47的宿主細(xì)胞，其中所述宿主細(xì)胞是原核細(xì)胞。
50.權(quán)利要求48的宿主細(xì)胞，其中所述宿主細(xì)胞是大腸桿菌。
51.權(quán)利要求47的宿主細(xì)胞，其中所述宿主細(xì)胞是真核細(xì)胞。
52.權(quán)利要求50的宿主細(xì)胞，其中所述真核細(xì)胞選自原生生物細(xì)胞、動(dòng)物細(xì)胞、植物細(xì) 胞和真菌細(xì)胞。
53.權(quán)利要求50的宿主細(xì)胞，其中所述真核細(xì)胞是選自哺乳動(dòng)物細(xì)胞、禽類(lèi)細(xì)胞和昆 蟲(chóng)細(xì)胞的動(dòng)物細(xì)胞。
54.權(quán)利要求50的宿主細(xì)胞，其中所述宿主細(xì)胞是CHO細(xì)胞。
55.權(quán)利要求50的宿主細(xì)胞，其中所述宿主細(xì)胞是COS或HEK293。
56.權(quán)利要求50的宿主細(xì)胞，其中所述宿主細(xì)胞是酵母細(xì)胞。
57.權(quán)利要求55的宿主細(xì)胞，其中所述酵母細(xì)胞是釀酒酵母。
58.權(quán)利要求47的宿主細(xì)胞，其中所述宿主細(xì)胞是昆蟲(chóng)Sf9細(xì)胞。
59.一種生產(chǎn)能夠結(jié)合前列腺素氏的蛋白質(zhì)的方法，所述方法包括在足以生產(chǎn)能夠結(jié) 合前列腺素氏的結(jié)合蛋白的條件下，在培養(yǎng)基中培養(yǎng)權(quán)利要求47的宿主細(xì)胞的步驟。
60.一種蛋白質(zhì)，其根據(jù)權(quán)利要求58的方法生產(chǎn)。
61.一種用于釋放結(jié)合蛋白的組合物，所述組合物包括(a)制劑，其中所述制劑包括根據(jù)權(quán)利要求41的結(jié)晶結(jié)合蛋白，(b)成分；和(c)至少一種聚合載體。
62.權(quán)利要求60的組合物，其中所述聚合載體是選自下述的聚合物聚丙烯酸、聚氰基 丙烯酸酯、聚氨基酸、聚酐、聚羧酚酸肽、聚酯、聚乳酸、乳酸-乙醇酸共聚物或PLGA、聚b-羥 基丁酸酯、聚己內(nèi)酯、聚二氧雜環(huán)己酮、聚乙二醇、聚(羥丙基)甲基丙烯酰胺、聚有機(jī)磷腈、 聚原酸酯、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、馬來(lái)酐-烷基乙烯基醚共聚物、Pluronic多元醇、白 蛋白、藻酸酯、纖維素和纖維素衍生物、膠原、纖維蛋白、明膠、透明質(zhì)酸、寡糖、糖胺聚糖、硫 酸化多糖、及其摻合物和/或共聚物。
63.權(quán)利要求60的組合物，其中所述成分選自白蛋白、蔗糖、海藻糖、乳糖醇、明膠、羥 丙基-β -環(huán)糊精、甲氧基聚乙二醇和聚乙二醇。
64.一種用于治療具有其中前列腺素&活性是有害的病癥的哺乳動(dòng)物的方法，所述方 法包括給所述哺乳動(dòng)物施用有效量的權(quán)利要求60的組合物的步驟。
65.一種藥物組合物，其包括權(quán)利要求1的結(jié)合蛋白和藥學(xué)可接受的載體。
66.權(quán)利要求65的藥物組合物，其中所述藥學(xué)可接受的載體充當(dāng)用于增加所述結(jié)合蛋 白吸收或分散的佐劑。
67.權(quán)利要求64的藥物組合物，其中所述佐劑是透明質(zhì)酸酶。
68.權(quán)利要求64的藥物組合物，其進(jìn)一步包括用于治療其中前列腺素氏活性是有害的 病癥的至少一種另外的治療試劑。
69.權(quán)利要求67的藥物組合物，其中所述另外的試劑選自治療劑，顯像劑、細(xì)胞毒性 劑、血管發(fā)生抑制劑、激酶抑制劑、共刺激分子阻斷劑、粘附分子阻斷劑、抗細(xì)胞因子抗體或其功能片段、氨甲蝶呤、環(huán)孢菌素、雷帕霉素、冊(cè)506、可檢測(cè)標(biāo)記或報(bào)道分子、TNF拮抗劑、抗 風(fēng)濕劑、肌肉弛緩劑、麻醉藥、非類(lèi)固醇消炎藥(NSAID)、止痛劑、麻醉劑、鎮(zhèn)靜劑、局部麻醉 劑、神經(jīng)肌肉阻斷劑、抗微生物劑、抗牛皮癬劑、皮質(zhì)類(lèi)固醇、促蛋白質(zhì)合成類(lèi)固醇、促紅細(xì) 胞生成素、免疫接種、免疫球蛋白、免疫抑制劑、生長(zhǎng)激素、激素替代藥物、放射性藥物、抗抑 郁藥、抗精神病藥、刺激劑、哮喘藥物治療、β激動(dòng)劑、吸入類(lèi)固醇、經(jīng)口類(lèi)固醇、腎上腺素或 其類(lèi)似物、細(xì)胞因子、和細(xì)胞因子拮抗劑。
70.一種用于減少前列腺素E2活性的方法，所述方法包括使前列腺素E2與權(quán)利要求1 的結(jié)合蛋白接觸的步驟，從而使得前列腺素氏活性被減少。
71.一種用于減少患有其中前列腺素E2活性是有害的病癥的人受試者中的前列腺素 E2活性的方法，所述方法包括給所述人受試者施用權(quán)利要求1的結(jié)合蛋白的步驟，從而使得 所述人受試者中的前列腺素氏活性被減少。
72.一種用于就其中前列腺素氏活性是有害的至少一種疾病或病癥治療受試者的方 法，所述方法包括給所述受試者施用權(quán)利要求1的結(jié)合蛋白的步驟，從而使得達(dá)到治療。
73.權(quán)利要求71的方法，其中所述病癥選自自身免疫疾病、炎性疾病、腫瘤、類(lèi)風(fēng)濕性 關(guān)節(jié)炎、變應(yīng)性關(guān)節(jié)炎、格-巴二氏綜合征、傳染性單核細(xì)胞增多癥、病毒性淋巴結(jié)病、皰疹 病毒感染、多發(fā)性硬化、脫髓鞘疾病、血液學(xué)病癥、溶血性貧血、血小板減少癥、內(nèi)分泌學(xué)病 癥、糖尿病、Addison氏病、特發(fā)性甲狀旁腺機(jī)能減退、慢性淋巴細(xì)胞性甲狀腺炎、膠原病癥、 全身性紅斑狼瘡、生殖病癥、閉經(jīng)、不育、復(fù)發(fā)性流產(chǎn)、子癇、頭頸腫瘤、肺癌、胃癌、前列腺 癌、胰腺癌、胃腸器官疾病、炎性腸病、潰瘍性結(jié)腸炎、Crohn氏病、疼痛、與骨關(guān)節(jié)炎相關(guān)的 疼痛、眼病癥和年齡相關(guān)黃斑變性。
74.權(quán)利要求71的方法，其中所述病癥選自類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、青少年慢性關(guān) 節(jié)炎、膿毒性關(guān)節(jié)炎、萊姆關(guān)節(jié)炎、牛皮癬性關(guān)節(jié)炎、反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎、脊椎關(guān)節(jié)病、全身性紅 斑狼瘡、Crohn氏病、潰瘍性結(jié)腸炎、炎性腸病、胰島素依賴(lài)性糖尿病、甲狀腺炎、哮喘、變應(yīng) 性疾病、牛皮癬、皮炎硬皮病、移植物抗宿主病、器官移植排斥、與器官移植相關(guān)的急性或慢 性免疫性疾病、肉狀瘤病、動(dòng)脈粥樣硬化、彌散性血管內(nèi)凝血、Kawasaki氏病、Grave氏病、 腎病綜合征、慢性疲乏綜合征、韋格納氏肉芽腫病、過(guò)敏性紫癜、腎顯微血管炎、慢性活動(dòng)性 肝炎、葡萄膜炎、膿毒性休克、中毒性休克綜合征、膿毒病綜合征、惡病質(zhì)、傳染病、寄生蟲(chóng) 病、獲得性免疫缺陷綜合征、急性橫貫性脊髓炎、亨廷頓氏舞蹈病、帕金森氏病、阿爾茨海默 氏病、中風(fēng)、原發(fā)性膽汁性肝硬變、溶血性貧血、惡性腫瘤、心力衰竭、心肌梗死、Addison氏 病、散發(fā)性多腺性I型缺陷和多腺性II型缺陷、Schmidt氏綜合征、成人(急性)呼吸窘迫 綜合征、禿頭、斑禿、血清反應(yīng)陰性關(guān)節(jié)病、關(guān)節(jié)病、Reiter氏病、牛皮癬性關(guān)節(jié)病、潰瘍性 結(jié)腸炎性關(guān)節(jié)病、腸病性滑膜炎、衣原體、耶爾森氏菌和沙門(mén)氏菌相關(guān)性關(guān)節(jié)病、脊椎關(guān)節(jié) 病、動(dòng)脈粥樣化疾病/動(dòng)脈硬化、特應(yīng)性變態(tài)反應(yīng)、自身免疫性大皰性疾病、尋常天皰瘡、落 葉狀天皰瘡、類(lèi)天皰瘡、線性IgA疾病、自身免疫性溶血性貧血、Coombs陽(yáng)性溶血性貧血、 獲得性惡性貧血、青少年性惡性貧血、肌痛腦炎/Royal Free疾病、慢性粘膜皮膚念珠菌 病、巨細(xì)胞性動(dòng)脈炎、原發(fā)性硬化性肝炎、隱原性自身免疫性肝炎、獲得性免疫缺陷病綜合 征、獲得性免疫缺陷相關(guān)病、乙型肝炎、丙型肝炎、常見(jiàn)的各種免疫缺陷(常見(jiàn)的可變低丙種 球蛋白血癥)、擴(kuò)張型心肌病、女性不育、卵巢衰竭、過(guò)早卵巢衰竭、纖維化肺疾病、隱原性纖 維化肺泡炎、炎癥后間質(zhì)性肺病、間質(zhì)性肺炎、結(jié)締組織病相關(guān)性間質(zhì)性肺病、混合型結(jié)締組織病相關(guān)性肺病、全身性硬皮病相關(guān)性間質(zhì)性肺病、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎相關(guān)性間質(zhì)性肺病、 全身性紅斑狼瘡相關(guān)性肺病、皮肌炎/多肌炎相關(guān)性肺病、Sj5gren氏病相關(guān)性肺病、強(qiáng)直 性脊柱炎相關(guān)性肺病、脈管炎性彌散性肺病、含鐵血黃素沉著病相關(guān)性肺病、藥物誘導(dǎo)的間 質(zhì)性肺病、纖維化、放射性纖維化、閉塞性細(xì)支氣管炎、慢性嗜酸性肺炎、淋巴細(xì)胞性浸潤(rùn)性 肺病、傳染后間質(zhì)性肺病、痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎、自身免疫性肝炎、1型自身免疫性肝炎(傳統(tǒng)自身 免疫性或狼瘡樣肝炎)、2型自身免疫性肝炎(抗LKM抗體肝炎)、自身免疫介導(dǎo)的低血糖、 具有黑棘皮癥的B型胰島素耐受性、甲狀旁腺機(jī)能減退、與器官移植相關(guān)的急性免疫性疾 病、與器官移植相關(guān)的慢性免疫性疾病、骨關(guān)節(jié)病、原發(fā)性硬化性膽管炎、1型牛皮癬、2型 牛皮癬、特發(fā)性白細(xì)胞減少、自身免疫性嗜中性白細(xì)胞減少癥、腎臟病N0S、腎小球腎炎、腎 顯微血管炎、萊姆病、盤(pán)狀紅斑狼瘡、特發(fā)性男性不育癥或N0S、精子自身免疫性、多發(fā)性硬 化(所有亞型)、交感性眼炎、結(jié)締組織病繼發(fā)的肺動(dòng)脈高壓、Goodpasture氏綜合征、結(jié)節(jié) 性多動(dòng)脈炎的肺表現(xiàn)、急性風(fēng)濕熱、類(lèi)風(fēng)濕性脊椎炎、Still氏病、全身性硬皮病、SjSrgren 氏綜合征、Takayasu氏病/動(dòng)脈炎、自身免疫性血小板減少癥、特發(fā)性血小板減少癥、自身 免疫性甲狀腺病、甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)、甲狀腺腫性自身免疫性甲狀腺功能減退(Hashimoto氏 病)、萎縮性自身免疫性甲狀腺功能減退、原發(fā)性粘液性水腫、晶狀體性葡萄膜炎、原發(fā)性血 管炎、白癜風(fēng)急性肝病、慢性肝病、酒精性肝硬變、酒精誘導(dǎo)的肝損傷、膽汁郁積、特應(yīng)性肝 病、藥物誘導(dǎo)的肝炎、非酒精性脂肪性肝炎、變態(tài)反應(yīng)和哮喘、B群鏈球菌(GBS)感染、精神 障礙(例如，抑郁和精神分裂癥)、Th2型和Thl型介導(dǎo)的疾病、急性和慢性痛(不同形式的 疼痛)、以及癌癥例如肺、乳腺、胃、膀胱、結(jié)腸、胰、卵巢、前列腺和直腸癌以及造血惡性腫 瘤(白血病和淋巴瘤)、無(wú)β脂蛋白血癥、手足發(fā)紺、急性和慢性寄生或感染過(guò)程、急性白 血病、急性成淋巴細(xì)胞性白血病(ALL)、急性髓細(xì)胞樣白血病(AML)、急性或慢性細(xì)菌感染、 急性胰腺炎、急性腎功能衰竭、腺癌、心房異位搏動(dòng)、AIDS癡呆復(fù)征、酒精誘導(dǎo)的肝炎、變應(yīng) 性結(jié)膜炎、過(guò)敏性接觸性皮炎、變應(yīng)性鼻炎、同種異體移植物排斥、α -1-抗胰蛋白酶缺乏、 肌萎縮性側(cè)索硬化、貧血、心絞痛、前角細(xì)胞變性、抗cd3治療、抗磷脂綜合征、抗受體超敏 反應(yīng)、主動(dòng)脈和周?chē)詣?dòng)脈瘤、主動(dòng)脈壁夾層形成、高動(dòng)脈壓、動(dòng)脈硬化、動(dòng)靜脈瘺、共濟(jì)失 調(diào)、心房纖維顫動(dòng)(持續(xù)性或陣發(fā)性)、心房撲動(dòng)、房室傳導(dǎo)阻滯、B細(xì)胞淋巴瘤、骨移植物排 斥、骨髓移植(BMT)排斥、束支傳導(dǎo)阻滯、Burkitt氏淋巴瘤、燒傷、心律失常、心臟震暈綜 合征、心臟腫瘤、心肌病、心肺分流術(shù)炎癥應(yīng)答、軟骨移植排斥、小腦皮質(zhì)變性、小腦病癥、紊 亂性或多源性房性心動(dòng)過(guò)速、化學(xué)療法相關(guān)病癥、慢性髓細(xì)胞性白血病(CML)、慢性酒精中 毒、慢性炎性病理學(xué)、慢性淋巴細(xì)胞性白血病(CLL)、慢性阻塞性肺部疾病(C0PD)、慢性水 楊酸鹽中毒、結(jié)腸直腸癌、充血性心力衰竭、結(jié)膜炎、接觸性皮炎、肺源性心臟病、冠狀動(dòng)脈 疾病、Creutzfeldt-Jakob病、培養(yǎng)物陰性膿毒病、囊性纖維化、細(xì)胞因子療法相關(guān)病癥、拳 擊員癡呆、脫髓鞘病、登革出血熱、皮炎、皮膚病學(xué)狀況、多尿癥、糖尿病、糖尿病性動(dòng)脈硬化 性疾病、彌漫性Lewy小體病、擴(kuò)張性充血性心肌病、基底神經(jīng)節(jié)病癥、中年唐氏綜合征、由 阻斷CNS多巴胺受體的藥物誘導(dǎo)的藥物誘導(dǎo)的運(yùn)動(dòng)障礙、藥物敏感性、濕疹、腦脊髓炎、心 內(nèi)膜炎、內(nèi)分泌病、會(huì)厭炎、EB病毒感染、紅斑性肢痛病、錐體外束和小腦病癥、家族性嗜血 細(xì)胞性淋巴組織細(xì)胞增多癥、胎兒胸腺移植排斥、Friedreich氏共濟(jì)失調(diào)、功能性外周性 動(dòng)脈病癥、真菌性膿毒病、氣性壞疽病、胃潰瘍、腎小球腎炎、任何器官或組織的移植物排 斥、革蘭氏陰性膿毒病、革蘭氏陽(yáng)性膿毒病、由于細(xì)胞內(nèi)生物的肉芽腫、毛細(xì)胞性白血病、Hallerrorden-Spatz病、hashimoto氏甲狀腺炎、枯草熱、心臟移植排斥、血色素沉著癥、血 液透析、溶血性尿毒性綜合征/血栓溶解性血小板減少性紫癜、出血、肝炎(A)、希氏束心律 失常、HIV感染/HIV神經(jīng)病、何杰金氏病、運(yùn)動(dòng)過(guò)度性運(yùn)動(dòng)障礙、超敏反應(yīng)、超敏感性肺炎、 高血壓、運(yùn)動(dòng)機(jī)能減退性運(yùn)動(dòng)障礙、下丘腦-垂體-腎上腺軸評(píng)價(jià)、特發(fā)性Addison氏病、 特發(fā)性肺纖維化、抗體介導(dǎo)的細(xì)胞毒性、虛弱、嬰兒型脊髓性肌萎縮、主動(dòng)脈炎癥、流行性感 冒a、電離輻射照射、虹膜睫狀體炎/葡萄膜炎/視神經(jīng)炎、缺血性再灌注損傷、缺血性中 風(fēng)、青少年類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、青少年脊髓性肌萎縮、卡波西氏肉瘤、腎移植排斥、軍團(tuán)桿菌、 利什曼病、麻風(fēng)病、皮層脊髓系統(tǒng)損傷、脂肪水腫、肝移植排斥、淋巴水腫、瘧疾、惡性淋巴 瘤、惡性組織細(xì)胞增多癥、惡性黑素瘤、腦膜炎、腦膜炎球菌血癥、代謝性/特發(fā)性、偏頭痛、 線粒體多系統(tǒng)病癥、混合型結(jié)締組織病、單克隆丙種球蛋白病、多發(fā)性骨髓瘤、多系統(tǒng)變性 (Mencel Dejerine-Thomas Shi-Drager 禾口 Machado-Jos印h)、重癥肌無(wú)力、鳥(niǎo)胞內(nèi)分支桿 菌、結(jié)核分支桿菌、骨髓異常增生綜合征、心肌梗死、心肌缺血性病癥、鼻咽癌、新生兒慢性 肺病、腎炎、腎變病、神經(jīng)變性疾病、神經(jīng)原性I肌萎縮、嗜中性粒細(xì)胞減少性發(fā)燒、非何杰 金淋巴瘤、腹主動(dòng)脈及其分支閉塞、閉塞性動(dòng)脈病癥、okt3治療、睪丸炎/附睪炎、睪丸炎/ 輸精管切除術(shù)逆轉(zhuǎn)操作、器官巨大癥、骨質(zhì)疏松癥、胰移植排斥、胰癌、惡性腫瘤的瘤旁綜合 征/高鈣血癥、甲狀旁腺移植排斥、盆腔炎癥性疾病、常年性鼻炎、心包疾病、外周性動(dòng)脈粥 樣硬化疾病、外周血管病癥、腹膜炎、惡性貧血、卡氏肺囊蟲(chóng)性肺炎、肺炎、POEMS綜合征(多 發(fā)性神經(jīng)病、器官巨大癥、內(nèi)分泌病、單克隆丙種球蛋白病、和皮膚變化綜合征)、灌注后綜 合征、泵后綜合征、MI心切開(kāi)術(shù)后綜合征、先兆子癇、進(jìn)行性核上麻痹、原發(fā)性肺動(dòng)脈高壓、 放射治療、Raynaud氏現(xiàn)象和疾病、Raynoud氏病、Refsum氏病、常規(guī)狹窄QRS心動(dòng)過(guò)速、腎 血管性高血壓、再灌注損傷、限制性心肌病、肉瘤、硬皮病、老年性舞蹈病、Lewy小體型老年 性癡呆、血清反應(yīng)陰性關(guān)節(jié)病、休克、鐮狀細(xì)胞貧血、皮膚同種異體移植物排斥、皮膚變化綜 合征、小腸移植排斥、實(shí)體瘤、特殊心律失常、脊髓性共濟(jì)失調(diào)、脊髓小腦變性、鏈球菌肌炎、 小腦結(jié)構(gòu)損傷、亞急性硬化性全腦炎、暈厥、心血管系統(tǒng)梅毒、全身性過(guò)敏反應(yīng)、全身炎癥反 應(yīng)綜合征、全身發(fā)作性青少年類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、T細(xì)胞或FAB ALL、毛細(xì)血管擴(kuò)張、血栓閉塞 性脈管炎、血小板減少癥、毒性、移植物、創(chuàng)傷/出血、III型超敏反應(yīng)、IV型超敏反應(yīng)、不穩(wěn) 定心絞痛、尿毒癥、尿膿毒病、蕁麻疹、心臟瓣膜疾病、靜脈曲張、血管炎、靜脈疾病、靜脈血 栓形成、心室纖維性顫動(dòng)、病毒和真菌感染、病毒性腦炎/無(wú)菌性腦膜炎、病毒相關(guān)性噬紅 細(xì)胞綜合征、Wernicke-Korsakoff綜合征、Wi 1 son氏病、任何器官或組織的異種移植排斥、 急性冠狀動(dòng)脈綜合征、急性特發(fā)性多神經(jīng)炎、急性炎性脫髓鞘性多發(fā)性神經(jīng)根性神經(jīng)病、急 性缺血、成人Mill氏病、斑禿、過(guò)敏反應(yīng)、抗磷脂抗體綜合征、再生障礙性貧血、動(dòng)脈硬化、 特應(yīng)性濕疹、特應(yīng)性皮炎、自身免疫性皮炎、與鏈球菌感染相關(guān)的自身免疫性病癥、自身免 疫性腸病、自身免疫性聽(tīng)力喪失、自身免疫性淋巴細(xì)胞增生綜合征(ALPS)、自身免疫性心肌 炎、自身免疫性過(guò)早卵巢衰竭、瞼炎、支氣管擴(kuò)張、大皰性類(lèi)天皰瘡、心血管病、災(zāi)變性抗磷 脂綜合征、乳糜瀉、頸椎關(guān)節(jié)強(qiáng)硬、慢性缺血、疤痕性類(lèi)天皰瘡、具有多發(fā)性硬化風(fēng)險(xiǎn)的臨床 孤立綜合征(CIS)、結(jié)膜炎、兒童期發(fā)病性精神病、慢性阻塞性肺部疾病(C0PD)、淚囊炎、皮 肌炎、糖尿病性視網(wǎng)膜病、糖尿病、椎間盤(pán)突出、盤(pán)脫垂、藥物誘導(dǎo)的免疫性溶血性貧血、心 內(nèi)膜炎、子宮內(nèi)膜異位、眼內(nèi)炎、鞏膜外層炎、多形性紅斑、重型多形性紅斑、妊娠期類(lèi)天皰 瘡、格-巴二氏綜合征(GBS)、枯草熱、Hughes綜合征、特發(fā)性帕金森氏病、特發(fā)性間質(zhì)性肺炎、IgE介導(dǎo)的變態(tài)反應(yīng)、免疫性溶血性貧血、內(nèi)含體肌炎、傳染性眼炎性疾病、炎性脫髓鞘 疾病、炎性心臟病、炎性腎病、IPF/UIP、虹膜炎、角膜炎、干燥性角膜結(jié)膜炎、Kussmaul病或 Kussmaul-Meier病、Landry氏麻痹、朗格漢斯細(xì)胞組織細(xì)胞增多癥、網(wǎng)狀青斑、黃斑變性、 顯微鏡下多脈管炎、morbus bechterev、運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元病癥、粘膜類(lèi)天皰瘡、多器官衰竭、重 癥肌無(wú)力、脊髓異常增生綜合征、心肌炎、神經(jīng)根障礙、神經(jīng)病、非甲非乙型肝炎、視神經(jīng)炎、 骨質(zhì)溶解、少關(guān)節(jié)的JRA、周?chē)鷦?dòng)脈閉塞性疾病(PA0D)、周?chē)芗膊?PVD)、外周動(dòng)脈疾病 (PAD)、靜脈炎、結(jié)節(jié)性多動(dòng)脈炎(或結(jié)節(jié)性動(dòng)脈外膜炎)、多軟骨炎、風(fēng)濕性多肌病、白發(fā)癥、 多關(guān)節(jié)的JRA、多發(fā)性?xún)?nèi)分泌缺陷綜合征、多肌炎、風(fēng)濕性多肌病(PMR)、泵后綜合征、原發(fā) 性帕金森綜合征、前列腺炎、單純紅細(xì)胞再生障礙、原發(fā)性腎上腺機(jī)能不足、復(fù)發(fā)型視神經(jīng) 脊髓炎、再狹窄、風(fēng)濕性心臟病、SAPHO (滑膜炎、痤瘡、膿皰病、骨肥厚和骨炎)、硬皮病、繼發(fā) 性淀粉樣變性、休克肺、鞏膜炎、坐骨神經(jīng)痛、繼發(fā)性腎上腺機(jī)能不足、聚硅氧烷相關(guān)的結(jié)締 組織病、Sneddon-Wilkinson皮膚病、關(guān)節(jié)強(qiáng)硬性脊椎炎、Stevens-Johnson綜合征(SJS)、 全身性炎癥應(yīng)答綜合征、顳動(dòng)脈炎、弓形體視網(wǎng)膜炎、中毒性表皮壞死松解、橫貫性脊髓炎、 TRAPS (腫瘤壞死因子受體，I型變態(tài)反應(yīng)，II型糖尿病、蕁麻疹、普通型間質(zhì)性肺炎(UIP)、 脈管炎、春季結(jié)膜炎、病毒性視網(wǎng)膜炎、Vogt-Koyanagi-Harada綜合征(VKH綜合征)、濕黃 斑變性和傷口愈合。
75. 一種治療患有其中前列腺素氏是有害的病癥的患者的方法，所述方法包括在第 二種試劑施用之前、同時(shí)或之后，施用權(quán)利要求1的結(jié)合蛋白的步驟，其中所述第二種試 劑選自類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎或青少年類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎藥物，其選自氨甲蝶呤，來(lái)氟米特，低劑 量皮質(zhì)類(lèi)固醇，潑尼松，可的松，抗瘧疾藥物治療，羥氯喹，金，柳氮磺胺吡啶，青霉胺，環(huán) 磷酰胺，環(huán)孢菌素，米諾環(huán)素，乙氨酚，阿司匹林，布洛芬，萘普生，塞來(lái)考昔，英夫利昔單 抗，依那西普，阿達(dá)木單抗，阿巴他賽，利妥昔單抗，阿那白滯素，靶向IL-6、IL-6R、IL-17、 IL-18、IL-23、B7. 1/B7. 2的生物制劑和經(jīng)口遞送試劑；選自下述的骨關(guān)節(jié)炎藥物乙氨 酚、阿司匹林、布洛芬、萘普生、塞來(lái)考昔、類(lèi)固醇、人工關(guān)節(jié)液、欣維可和海爾根；選自下 述的Crohn氏病藥物阿達(dá)木單抗、azasan、安薩科、硫唑嘌呤、柳氮磺胺吡啶、布地奈德、 entocort、滅滴靈、依木蘭、英夫利昔單抗、巰嘌呤、甲硝唑、protostat、巰基嘌呤、類(lèi)克和柳 氮磺胺吡啶；選自下述的強(qiáng)直性脊柱炎藥物aCetOCOt、乙酰水楊酸、acuprin 81、阿達(dá)木 單抗、aleve、雙霉素鈣、萘普生鈉制劑、aristocort、阿司匹林、aspirtab、曲安奈德、百服 寧、buffex、凱扶蘭、西樂(lè)葆、奇諾力、可的松、雙氯芬酸、奧沙拉秦鈉、easprin、依那西普、 吲哚美辛、茚甲新、英夫利昔單抗、萘普生、類(lèi)克、曲安西龍和扶他林；選自下述的多發(fā)性硬 化藥物Avonex、Azasan、硫唑嘌呤、Betaseron、Bubbli-Pred、克帕松、Cotolone、格拉默、 依木蘭、干擾素β -la、干擾素β -Ib溶液、Key-Pred、Key-Pred SP、米托蒽醌、那他珠單 抗、i若ffl靈、Orapred> Orapred ODT> Pediapred> Pred-Ject-50> Predacort 50、Predalone 50、Predate-50、潑尼松龍、I^relone、利比和Tysabri ；選自下述的癌癥或惡性腫瘤藥物 Abraxane、亞得里亞霉素、Adruci 1、艾達(dá)樂(lè)、阿侖珠單抗、力比泰、氨基酮戊酸、阿那曲唑、阿 瑞匹坦、瑞寧得、阿諾新、Arranon、三氧化二砷、阿伐他汀(貝伐珠單抗)、阿扎胞苷、貝伐珠 單抗、貝沙羅汀、硼替佐米、Campath (阿侖珠單抗)、Camptosar (鹽酸依立替康)、卡培他濱、 卡鉬、西妥昔單抗、順鉬、Clafen (環(huán)磷酰胺)、氯法拉濱、Clofarex (氯法拉濱)、科羅拉(氯 法拉濱)、環(huán)磷酰胺、阿糖胞苷、Cytosar-U (阿糖胞苷)、Cytoxan (環(huán)磷酰胺)、達(dá)珂(地西他濱)、達(dá)沙替尼、地西他濱、D印oCyt (脂質(zhì)體阿糖胞苷)、D印oR)am (脂質(zhì)體阿糖胞苷)、鹽酸 右雷佐生、多西他賽、Doxil (鹽酸多柔比星脂質(zhì)體)、鹽酸多柔比星、鹽酸多柔比星脂質(zhì)體、 Dox-SL (鹽酸多柔比星脂質(zhì)體)、Efudex (氟尿嘧啶)、Ellence (鹽酸表柔比星)、樂(lè)沙定(奧 沙利鉬)、Emend (阿瑞匹坦)、鹽酸表柔比星、愛(ài)必妥(西妥昔單抗)、鹽酸厄洛替尼、Evacet (鹽酸多柔比星脂質(zhì)體)、易維特(鹽酸雷洛昔芬)、依西美坦、Faslodex (氟維司群)、弗隆(來(lái) 曲唑)、Fluoroplex (氟尿嘧啶)、氟尿嘧啶、氟維司群、吉非替尼、鹽酸吉西他濱、吉妥珠單 抗奧佐米星、健擇(鹽酸吉西他濱)、格列衛(wèi)(甲磺酸伊馬替尼)、赫賽汀(曲妥珠單抗)、和美新 (鹽酸托泊替康)、甲磺酸伊馬替尼、咪喹莫特、易瑞沙(吉非替尼)、鹽酸依立替康、伊沙匹隆、 Ixempra(伊沙匹隆)、Ke0Xifene(鹽酸雷洛昔芬)、凱望斯(帕利夫明)、二甲苯磺酸拉帕替尼、 來(lái)那度胺、來(lái)曲唑、聚左旋糖(氨基酮戊酸)、LipoDoX (鹽酸多柔比星脂質(zhì)體)、脂質(zhì)體阿糖胞 苷、Methazolastone (替莫唑胺)、Mylosar (阿扎胞苷)、麥羅塔(吉妥珠單抗奧佐米星)、納 米顆粒紫杉醇(紫杉醇白蛋白穩(wěn)定化納米顆粒制劑)、奈拉濱、Neosar (環(huán)磷酰胺)、Nexavar (甲苯磺酸索拉非尼)、尼洛替尼、諾瓦得士 (檸檬酸它莫西芬\0ncaspar (培門(mén)冬酶)、奧沙利 鉬、紫杉醇、紫杉醇白蛋白穩(wěn)定化納米顆粒制劑、帕利夫明、帕木單抗、Paraplat (卡鉬)、伯 爾定(卡鉬)、培門(mén)冬酶、培美曲塞二鈉、Platinol-AQ (順鉬)、Platinol (順鉬)、鹽酸雷洛昔 芬、Revlimid (來(lái)那度胺)、RituXan (利妥昔單抗)、利妥昔單抗、Sclerosol胸膜內(nèi)氣溶膠(滑 石)、甲苯磺酸索拉非尼、Sprycel (達(dá)沙替尼)、滅菌滑石粉(滑石)、Meritalc (滑石)、蘋(píng)果 酸舒尼替尼、索坦(蘋(píng)果酸舒尼替尼)、昔諾韋(沙立度胺)、滑石、檸檬酸它莫西芬、Tarabine PFS (阿糖胞苷)、特羅凱(鹽酸厄洛替尼)、Targretin (貝沙羅汀)、Tasigna (尼洛替尼)、泰 素(紫杉醇)、泰索帝(多西他賽)、Temodar (替莫唑胺)、替莫唑胺、Temsirolimus, Thalomid (沙立度胺)、沙立度胺、Totect (鹽酸右雷佐生)、鹽酸托泊替康、Torisel (Temsirolimus), 曲妥珠單抗、iTrisenox (三氧化二砷)、Tykerb (二甲苯磺酸拉帕替尼)、Vectibix (帕木單 抗)、萬(wàn)珂(硼替佐米)、Vidaza (阿扎胞苷)、Vorinostat、希羅達(dá)(卡培他濱)、Zinecard (鹽 酸右雷佐生)、唑來(lái)膦酸、Zolinza (Vorinostat)和擇泰(唑來(lái)膦酸)。
76.根據(jù)權(quán)利要求74的方法，其中對(duì)所述受試者的所述施用通過(guò)選自下述的至少一種 方式腸胃外、皮下、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、支氣管內(nèi)、腹內(nèi)、囊內(nèi)、軟骨內(nèi)、腔內(nèi)、體腔內(nèi)、小 腦內(nèi)、腦室內(nèi)、結(jié)腸內(nèi)、頸內(nèi)、胃內(nèi)、肝內(nèi)、心肌內(nèi)、骨內(nèi)、盆腔內(nèi)、心包內(nèi)、腹膜內(nèi)、胸膜內(nèi)、前 列腺內(nèi)、肺內(nèi)、直腸內(nèi)、腎內(nèi)、視網(wǎng)膜內(nèi)、脊柱內(nèi)、滑膜內(nèi)、胸內(nèi)、子宮內(nèi)、膀胱內(nèi)、快速濃注、陰 道、直腸、頰、舌下、鼻內(nèi)和經(jīng)皮。
77.一種分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段結(jié)合前列腺 素&，并且在基于細(xì)胞表面的受體結(jié)合測(cè)定中，其中IC5tl選自約lxl0_6 - IxlO-7 MUxlO-7 -IxlO"8 MUxlO"8 - IxlO"9 MUO"9 - IO-10MUxIO"10 - IxKT11 M和 1(Γ" - 1(Γ12 Μ，或在基于 ELISA 的受體結(jié)合測(cè)定中，其中 IC5。選自約 1χ1(Γ6 - IxlO"7 MUxlO"7 - IxlO"8 MUxlO"8 -lxlO—9 M、10_9 - IO^i0MUxIO"10 - IxlO"11 M 禾Π ΙΟ—11 - 10_12 Μ，抑制所述前列腺素 E2 與 El、 E2、E3和E4受體中的至少一種結(jié)合。
78.一種分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段結(jié)合PGE2， 并且在選自下述的疾病模型中使PGE2活性抑制約50% 角叉菜膠誘導(dǎo)的爪水腫模型、角叉 菜膠誘導(dǎo)的痛覺(jué)過(guò)敏模型、膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎模型和佐劑誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎模型。
79.權(quán)利要求77的抗體，其中所述抗體在選自下述的疾病模型中使PGE2活性抑制約70% 角叉菜膠誘導(dǎo)的爪水腫模型、角叉菜膠誘導(dǎo)的痛覺(jué)過(guò)敏模型、膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎模型 和佐劑誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎模型。
80.一種分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段結(jié)合PGE2， 并且在選自下述的疾病模型中使炎癥抑制約90% 角叉菜膠誘導(dǎo)的爪水腫模型、角叉菜膠 誘導(dǎo)的痛覺(jué)過(guò)敏模型、膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎模型和佐劑誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎模型。
81.權(quán)利要求77的抗體，其中所述抗體是2B5。
82.—種分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段結(jié)合前列腺 素&，并且在基于細(xì)胞表面的受體結(jié)合測(cè)定中，或在基于ELISA的受體結(jié)合測(cè)定中，在約 100 nM的濃度下使所述前列腺素E2與El、E2、E3和E4受體中的至少一種的結(jié)合抑制約 70-100%。
83.權(quán)利要求81的抗體，其中所述抗體選自19C9、4F10、15F10、K1B、K7H、K3A、L11、L21、 2B5-7. 0、2B5-8. 0 和 2B5-9. 0。
84.權(quán)利要求81的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段能夠調(diào)節(jié) 前列腺素E2的生物學(xué)功能。
85.權(quán)利要求81的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段能夠中和 前列腺素E2。
86.權(quán)利要求81的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段選自免疫 球蛋白分子、單克隆抗體、嵌合抗體、⑶R移植的抗體、人源化抗體、Fab、Fab，、F (ab，)2、Fv、 二硫化物連接的Fv、SCFv、單結(jié)構(gòu)域抗體、雙抗體、多特異性抗體、雙重特異性抗體和雙特異 性抗體。
87.權(quán)利要求81的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段是人源化 抗體。
88.—種藥物組合物，其包括權(quán)利要求81的抗體或其抗原結(jié)合片段，和藥學(xué)可接受的 載體。
89.權(quán)利要求87的藥物組合物，其進(jìn)一步包括用于治療其中前列腺素&活性是有害的 病癥的至少一種另外的治療試劑。
90.一種生成與前列腺素氏結(jié)合的抗體或其片段的方法，所述方法包括用前列腺素 E2-甲狀腺球蛋白免疫接種非人動(dòng)物，收集包含抗前列腺素氏抗體的體液或器官，并且分離 抗前列腺素氏抗體的步驟。
91.一種包括抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域的人源化抗體，所述人源化抗體能夠結(jié)合前列腺素E2，所 述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包括包含選自SEQ ID NOs 54-59的氨基酸序列的至少一個(gè)⑶R區(qū)。
92.一種包括抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域的人源化抗體，所述人源化抗體能夠結(jié)合前列腺素E2, 所述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包括包含氨基酸序列的至少一個(gè)⑶R區(qū)，所述氨基酸序列與選自SEQ ID NOs 54-59的氨基酸序列至少約60%、至少約65%、至少約70%、至少約75%、至少約 80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%或至少約98%同源。
全文摘要
本發(fā)明包括前列腺素E2(PGE2)結(jié)合蛋白。本發(fā)明涉及其為野生型、嵌合、CDR移植的和人源化的抗體。優(yōu)選抗體對(duì)于前列腺素E2具有高親和力，并且在體外和體內(nèi)中和前列腺素E2活性。本發(fā)明的抗體可以是全長(zhǎng)抗體或其抗原結(jié)合部分。還提供了制備方法和使用本發(fā)明的抗體的方法。本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合部分用于檢測(cè)前列腺素E2且用于抑制前列腺素E2活性，例如在患有其中前列腺素E2活性是有害的病癥的人受試者中。
文檔編號(hào)A61K39/395GK102143760SQ200980134669
公開(kāi)日2011年8月3日 申請(qǐng)日期2009年7月8日 優(yōu)先權(quán)日2008年7月8日
發(fā)明者穆?tīng)査?A., W. 哈欽斯 C., 塔查 E., 貝朗格 E., 沈 J., C. 哈里斯 M., 朱 R-R., B. 斯泰恩 W., 謝仲明, 顧繼杰 申請(qǐng)人:雅培制藥有限公司