專利名稱：新穎的佐劑組合物的制作方法
新穎的佐劑組合物發(fā)明背景 發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明一般涉及用于增強(qiáng)對(duì)抗原的免疫應(yīng)答的新穎的佐劑配制物，該新穎的佐劑 配制物用于免疫原性和疫苗組合物中，但不在受試者中產(chǎn)生毒性或不想要的副作用。本發(fā) 明還涉及所述佐劑、免疫原性組合物及疫苗組合物的制備方法和用途。相關(guān)技術(shù)的歷史和描述細(xì)菌、病毒及寄生蟲感染廣泛分布于人和動(dòng)物。由這些感染劑引起的疾病通常對(duì) 抗微生物藥學(xué)療法具有抗性，使得無有效的治療方法。因此，愈來愈多人使用疫苗學(xué)方法以 控制傳染病。完整的傳染性病原體可在經(jīng)化學(xué)滅活或合適的遺傳工程處理后變得適用于疫 苗配制物?；蛘撸蓪⒉≡w的蛋白質(zhì)亞基在重組表達(dá)系統(tǒng)中表達(dá)并純化，以用于疫苗配制 物中。疫苗可通過在組合物中包含合適的佐劑而變得更有效。使用疫苗學(xué)方法以治療動(dòng)物和人的癌癥的興趣亦持續(xù)增加。用于治療癌癥的所述 治療途徑涉及以包含腫瘤特異性抗原及佐劑的疫苗為癌癥患者接種疫苗。然而，研發(fā)中的 許多具有此性質(zhì)的疫苗無一被主管機(jī)關(guān)批準(zhǔn)。疫苗并未顯示出可縮小腫瘤——此為癌癥藥 物效力的標(biāo)準(zhǔn)度量。術(shù)語“佐劑”一般是指增加對(duì)抗原的體液或細(xì)胞性免疫應(yīng)答的任何物質(zhì)。佐劑被 用于達(dá)成二個(gè)目的其減緩抗原從注射部位釋出，且其刺激免疫系統(tǒng)。傳統(tǒng)疫苗通常由滅活 或被殺死或經(jīng)修飾的活致病微生物的粗制備物組成。與這些致病微生物的培養(yǎng)物相關(guān)的雜 質(zhì)可作為增強(qiáng)免疫應(yīng)答的佐劑。然而，以利用致病微生物或純化的蛋白質(zhì)亞基的同質(zhì)制備 物作為抗原而制成的疫苗所激發(fā)出的免疫力通常不夠。因此，加入某些外源物質(zhì)(諸如佐 劑)變得必要。再者，制造合成及亞基疫苗很昂貴。加入佐劑可容許使用較小劑量的抗原 來刺激類似的免疫應(yīng)答，從而減少疫苗的制造成本。因此，當(dāng)將藥劑與佐劑組合時(shí)可顯著增 加某些可注射藥劑的效力。在選擇佐劑時(shí)必須考慮許多因素。佐劑應(yīng)該以有效方式使抗原的釋出和吸收速率 緩慢，且對(duì)宿主的毒性、變應(yīng)原性、刺激及其它不想要的作用最小。為了使人滿意，佐劑應(yīng)為 非殺病毒性、可生物降解、可持續(xù)產(chǎn)生高水平的免疫力、能刺激交叉保護(hù)作用、可與多種抗 原兼容、在多種物種中有效、對(duì)宿主無毒且安全(如無注射部位反應(yīng))。其它期望的佐劑 特征為可微量給藥、劑量節(jié)省、具有優(yōu)良的貨架穩(wěn)定性、可承受干燥、可制成不含油、可作為 固體或液體存在、為等張性、容易制造且其制造并不昂貴。最后，高度期望能夠根據(jù)疫苗接 種方案的需要而將佐劑配置成誘導(dǎo)體液或細(xì)胞免疫應(yīng)答或二者兼有。然而，可符合上述條 件的佐劑的數(shù)量有限。佐劑的選擇系取決于疫苗的需要，無論所述需要是增加抗體應(yīng)答的幅度或功能、 增加由細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答、誘導(dǎo)黏膜免疫力或降低抗原劑量。已提出大量佐劑，然而，其 無一顯示出理想適用于所有疫苗。第一種在文獻(xiàn)中報(bào)導(dǎo)的佐劑為弗氏完全佐劑(Freimd' s Complete Adjuvant) (FCA)，其含有油包水乳液及分枝桿菌(mycobacterium)的提取物。不幸地，F(xiàn)CA的可耐受性差且可能引起無法控制的發(fā)炎。自從在超過80年前發(fā)現(xiàn)FCA起，人 們一直努力減少不想要的佐劑副作用。一些已作為佐劑使用的其它物質(zhì)包括金屬氧化物(如氫氧化鋁)、明礬、鹽的無 機(jī)螯合物、明膠、不同的石蠟型油、合成樹脂、藻酸鹽、類粘蛋白及多糖化合物、酪蛋白酸鹽 及從血液衍生的物質(zhì)諸如纖維蛋白凝塊。雖然這些物質(zhì)通?？捎行Т碳っ庖呦到y(tǒng)，但由于 宿主中的不利作用(如產(chǎn)生無菌膿腫、損傷、致癌性或變應(yīng)原性應(yīng)答)或令人不滿的藥學(xué) 性質(zhì)(例如物質(zhì)從注射部位快速分散或分散控制不良，或膨脹)，因此無一令人完全滿意。合成油及石油衍生物已被用作佐劑，因其顯示出在體內(nèi)分散得相對(duì)緩慢，但其可 能令人不滿意，因其經(jīng)常分裂成芳香烴，而此物質(zhì)可能具致癌性。再者，這些物質(zhì)中有些已 被發(fā)現(xiàn)能夠產(chǎn)生無菌膿腫且可能永遠(yuǎn)無法從身體完全排出。當(dāng)正確選擇且調(diào)制成正確濃度 時(shí)，油可相對(duì)安全且無毒性。自南美洲皂樹(Qui 1 laja saponaria)的樹皮取得的皂苷已作為佐劑一段 時(shí)間° 見，Lacaille-Dubois, M and Wagner H. (A review of the biological and pharmacological activities of saponins。許多現(xiàn)今使用的獸醫(yī)疫苗包含QuilA，其為來 自南美洲智利皂莢樹(Quillaja saponaria moIina)的樹皮的皂苷餾分。將Quil A進(jìn)一 步分餾則產(chǎn)生次餾分，包括QS-7、QS-17、QS-18及QS-21。(見美國專利No. 5，057，540)。使用皂苷作為佐劑有多種缺點(diǎn)。皂苷為可溶性，因此刺激非特異性免疫應(yīng)答。然 而，疫苗學(xué)的目的是刺激針對(duì)一種或多種特異性抗原的靶向應(yīng)答。皂苷對(duì)膽固醇具有強(qiáng)親 和力。其與細(xì)胞膜中所發(fā)現(xiàn)的膽固醇形成復(fù)合物而使細(xì)胞溶血。其亦顯示出引起注射位點(diǎn) 壞死且難以配制成微粒構(gòu)造。當(dāng)用于含有經(jīng)修飾的活包膜病毒的疫苗中時(shí)，皂苷可破壞病 毒被膜從而將病毒抗原滅活。為了克服Qui 1 A的溶血及殺病毒性質(zhì)，現(xiàn)已將其與膽固醇和磷脂組合而形成稱為 免疫刺激性復(fù)合物(ISCOM)或ISCOM基質(zhì)(ISC0MATRIX)的特殊構(gòu)造。見，Ozel M.，et al.； J. Ultrastruc. and Molec. Struc. Re 102，240-248 (1989)。當(dāng)與抗原組合時(shí)，ISCOM 通常會(huì) 誘導(dǎo)Thl細(xì)胞毒性T細(xì)胞應(yīng)答。然而，盡管大幅減弱Quil A的溶血性質(zhì)，但Quil A與膽固 醇組合并不會(huì)完全消除此類性質(zhì)。ISCOM的另一限制為蛋白質(zhì)抗原必須具有足夠大的疏水 結(jié)構(gòu)域來與ISCOM交互作用，從而被并入ISCOM中。高度親水的蛋白質(zhì)無法被并入ISCOM 中。最后，ISCOM可在受試者內(nèi)刺激不想要的自體免疫應(yīng)答。免疫調(diào)節(jié)劑已被用作佐劑，其例子包括二甲基雙十八烷基溴化銨(以下稱“DDA”) 和拉韋定(avirdine)。DDA為親脂性季銨化合物(胺)，其帶有結(jié)合正電荷季銨分子的二 個(gè)18碳烷基鏈及二個(gè)甲基基團(tuán)，分子量為631。其作為佐劑的用途由fell (Immunol. V. 11， p. 369,1966)發(fā)現(xiàn)。據(jù)報(bào)導(dǎo)，DDA可刺激強(qiáng)烈的經(jīng)細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答，亦顯示出可誘導(dǎo) 體液免疫應(yīng)答。許多論文已發(fā)表，證明DDA作為蛋白質(zhì)抗原、半抗原(hapten)、腫瘤、病 毒、原生動(dòng)物及細(xì)菌的佐劑的效力。(見，Korsholm, K S.，et al.，Immunology, vol. 121， PP. 216-226,2007)。大部分研究已在實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物中進(jìn)行，然而僅有少量在較大型的動(dòng)物諸 如雞(見,Katz, D.，et al. FEMSImmunol Med Microbiol. Vol 7(4) :303_313，1993)、豬和 牛中進(jìn)行。DDA可在實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物以及較大型的動(dòng)物中有效誘導(dǎo)延遲型超敏(DTH)反應(yīng)。然 而，其在水中不易溶。聚合物亦已被用作佐劑，其例子包括二乙基-氨乙基(DEAE)-葡聚糖、聚乙二醇及聚丙烯酸(如(CARBOPOL ))。本領(lǐng)域中已知多糖DEAE-葡聚糖為非常強(qiáng)的佐劑。然 而，其與令人無法接受的反應(yīng)原性(reactogenicity)有關(guān)。CARBOPOL 聚合物為丙烯 酸與聚鏈烯基醚或二乙烯乙二醇(divinyl glycol)交聯(lián)的聚合物。CARBOPOL 已用 于多種疫苗中，但其作為佐劑的用途并未被證實(shí)。一些佐劑已顯示刺激Th2應(yīng)答，其例子包括水合N-(2_脫氧基-2-L-亮氨酰氨 基-b-D-吡喃葡糖基)-N-十八烷基十二烷酰胺乙酸酯(當(dāng)其為乙酸酯形式時(shí)亦已知為商 標(biāo)名BayR1005 )及鋁。Bay R1005 與經(jīng)純化的病毒疫苗或亞基疫苗組合可增加經(jīng)病 毒攻擊的小鼠中抗體的生產(chǎn)。在其它動(dòng)物物種(豬、綿羊、馬)中進(jìn)行的臨床前試驗(yàn)在抗體 生產(chǎn)方面得到相當(dāng)?shù)慕Y(jié)果。由Bay R1005 誘導(dǎo)的抗體合成的增加特異性地取決于抗原而 非多克隆刺激的結(jié)果。在本發(fā)明之前并無佐劑配制物擁有理想佐劑所應(yīng)有的廣泛的期望的特征。尋求用 于疫苗中的可克服常規(guī)佐劑的缺陷的新佐劑的努力一直在進(jìn)行。特別地，高度期望下述佐 劑配制物，其可在人和動(dòng)物中引發(fā)針對(duì)廣泛抗原的有效的經(jīng)細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答及體液免 疫應(yīng)答，但無常規(guī)佐劑的副作用和配制困難。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明涉及新穎的佐劑、免疫原性組合物和疫苗組合物。特別地，本發(fā)明涉及包含 Thl刺激劑、免疫調(diào)節(jié)劑、聚合物及Th2刺激劑的佐劑配制物。本發(fā)明還涉及包含這類佐劑 配制物及一或多種抗原的免疫原性組合物及疫苗組合物，以及制備該佐劑和疫苗組合物的 方法。在一個(gè)實(shí)施方案中，該佐劑組合物包含皂苷、固醇及季銨化合物的組合。在一個(gè)實(shí) 施方案中，該佐劑組合物包含Quil A、膽固醇及DDA。在另一個(gè)實(shí)施方案中，該佐劑組合物包含皂苷、固醇、季銨化合物及聚合物的組 合。在一個(gè)實(shí)施方案中，該佐劑組合為Quil A、膽固醇、DDA及聚丙烯酸。在另一個(gè)實(shí)施方案中，該佐劑組合物包含皂苷、固醇、季銨化合物、聚合物及糖脂 的組合。在一個(gè)實(shí)施方案中，該佐劑組合為Quil A、膽固醇、DDA、聚丙烯酸及BayR1005 。在一個(gè)實(shí)施方案中，包含佐劑配制物及免疫有效量的抗原的免疫原性組合物(其 中該佐劑配制物包含皂苷、固醇、季銨化合物及聚合物)通過包括下列步驟的方法制備a)在緩沖液中制備抗原的組合物；b)將皂苷加入步驟a的組合物中；c)將固醇加入步驟b的組合物中；d)將季銨化合物加入步驟c的組合物中；e)將聚合物加入步驟d的組合物中。在所述方法的一個(gè)實(shí)施方案中，該皂苷為Quil A，該固醇為膽固醇，該季銨化合物 為DDA且該聚合物為聚丙烯酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，包含佐劑配制物及免疫有效量的抗原的疫苗(其中該佐劑配 制物包含皂苷、固醇、季銨化合物、聚合物及糖脂)系藉包含下列步驟的方法制備a)在緩沖液中制備該抗原成分的組合物；b)將皂苷加入步驟a的組合物中；
c)將固醇加入步驟b的組合物中；d)將季銨化合物加入步驟c的組合物中；e)將聚合物加入步驟d的組合物中；及f)將糖脂加入步驟e的組合物中。在所述方法的一個(gè)實(shí)施方案中，該皂苷為Quil A，該固醇為膽固醇，該季銨化合物 為DDA，該聚合物為聚丙烯酸且該糖脂為Bay R1005 。現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，本文中所報(bào)導(dǎo)的佐劑組合物具有令人驚訝且出人預(yù)料的超乎人對(duì)這類 組合所預(yù)期的性質(zhì)。令人驚訝地，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)這些佐劑組合物中的Quil A/膽固醇的殺病毒 性質(zhì)已被消除。其適合用作凍干的經(jīng)修飾的活病毒抗原的稀釋劑。本文所述的佐劑組合 物可被構(gòu)造成引發(fā)極有效的針對(duì)經(jīng)細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答、體液免疫應(yīng)答或此二者的免疫應(yīng) 答。此外，通過使用這些佐劑配制物可大幅避免注射部位反應(yīng)。該反應(yīng)原性低于包含該組 合佐劑的數(shù)種個(gè)別組分的反應(yīng)原性。此外，這些佐劑配制物提供長期貯存的能力。本申請(qǐng)人已發(fā)現(xiàn)當(dāng)這些新穎的佐劑組合物與橫跨大范圍物種的一或多種大量不 同抗原組合時(shí)具有高度免疫原性。其可與一或多種病毒、細(xì)菌、寄生蟲、重組蛋白質(zhì)和合成 的肽抗原及其組合一起使用。該新穎的疫苗佐劑組合物可用于治療性疫苗中以治療癌癥。因此，本發(fā)明提供佐劑、免疫原性組合物和疫苗組合物。此外，本發(fā)明提供用于制 造該組合物的方法。本發(fā)明亦提供該組合物于治療疾病的用途。本發(fā)明亦提供其用于制備 下述藥物的用途，所述藥物用于針對(duì)疾病(特別是針對(duì)下述疾病)治療受試者受試者。本 發(fā)明亦提供其用于制備用于預(yù)防或減輕受試者中疾病的藥物的用途。本發(fā)明還提供了它們?cè)谥苽湎率鏊幬镏械挠猛?，所述藥物用于針?duì)由貓白血病 病毒引起的感染治療貓，針對(duì)禽球蟲病(avian coccidiosis)治療禽類，針對(duì)由大腸桿菌 (Escherichia coli)引起的疾病治療牛，針對(duì)由牛病毒性腹瀉病毒引起的疾病治療牛，針 對(duì)由肺炎支原體(Mycoplasma hyopneumonia)引起的疾病治療豬，針對(duì)由貓流感病毒引起 的疾病治療貓，受試者針對(duì)癌癥治療受試者，針對(duì)由犬冠狀病毒(canine coronavirus)引 起的疾病治療犬，針對(duì)由牛輪狀病毒(bovine rotavirus)引起的疾病治療牛，以及針對(duì)由 犬流感病毒引起的疾病治療犬。本發(fā)明亦提供佐劑作為標(biāo)記物疫苗來幫助確認(rèn)已接受疫苗 接種的動(dòng)物的用途。本發(fā)明亦提供CpG用于增強(qiáng)佐劑效果的用途。附圖詳述

圖1展示了通過放射性免疫沉淀實(shí)驗(yàn)進(jìn)行的凝膠電泳，其顯示BVD病毒的NS2/3 蛋白和E2蛋白之間的抗體圖譜。經(jīng)I^reZent A處理的組顯示對(duì)NS2/3蛋白以及E2蛋白二 者的抗體應(yīng)答，而經(jīng)Q⑶C及Q⑶CR處理的組則顯示出僅對(duì)E2蛋白有抗體應(yīng)答，對(duì)NS2/3蛋 白則無。發(fā)明詳述定義當(dāng)與可測(cè)量的數(shù)值變量相關(guān)聯(lián)地使用時(shí)，“約”或“大約”是指所指示的變量值及 所有在所指示數(shù)值的實(shí)驗(yàn)誤差內(nèi)(如平均值的95%置信區(qū)間內(nèi))或所指示數(shù)值的10%內(nèi) (無論那一個(gè)數(shù)值較大)的變量值，除非“約”被用于表示以周計(jì)的間隔，其中“約3周”為 17至25天，而約2至約4周為10至40天?！白魟笔侵缚稍黾訉?duì)抗原的體液或細(xì)胞免疫應(yīng)答的任何物質(zhì)。佐劑通常被用于達(dá)成兩種目的減緩抗原從注射部位釋出及刺激免疫系統(tǒng)?！巴榛笔侵钢辨満椭ф湹娘柡蠠N部分。“胺”是指含氮的化學(xué)化合物。胺是通過以烴基團(tuán)取代氫原子而從氨衍生的一類化 合物?！凹景贰笔侵敢凿@為基礎(chǔ)，帶有4個(gè)烴基團(tuán)的化合物?！翱贵w”是指可因?yàn)閷?duì)抗原的免疫應(yīng)答而與特異抗原結(jié)合的免疫球蛋白分子。免疫 球蛋白是由具有“恒定”及“可變”區(qū)的“輕”及“重”多肽鏈所組成的血清蛋白質(zhì)，且根據(jù)該 恒定區(qū)的組成而區(qū)分為數(shù)類(如=IgA, IgD, IgE, IgG及IgM)?！翱乖被颉懊庖咴笔侵溉魏未碳っ庖邞?yīng)答的物質(zhì)。此名詞包括被殺死的、滅活 的、減毒的或經(jīng)修飾的活細(xì)菌、病毒或寄生蟲。術(shù)語抗原亦包括個(gè)別的或其任何組合的多核 苷酸、多肽、重組蛋白質(zhì)、合成的肽、蛋白質(zhì)提取物、細(xì)胞(包括腫瘤細(xì)胞)、組織、多糖、或脂 質(zhì)、或其片段。術(shù)語抗原亦包括抗體，諸如抗受試者遺傳型抗體或其片段，以及可模擬抗原 或抗原決定簇(表位)的合成肽模擬位(mimotopes)。“菌苗(bacterin)，，是指可作為疫苗或免疫原性組合物的組分使用的一或多種被 殺死的細(xì)菌的懸浮液?！熬彌_液”是指防止另一種化學(xué)物質(zhì)的濃度變化的化學(xué)系統(tǒng)，如質(zhì)子供體及受體 系統(tǒng)可作為防止氫離子濃度(PH)明顯改變的緩沖液。另一緩沖液例子為含有弱酸及其鹽 (共軛堿)或弱堿及其鹽(共軛酸)的混合物的溶液?！凹?xì)胞性免疫應(yīng)答”或“經(jīng)細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答”為一種由T-淋巴細(xì)胞或其它白細(xì) 胞或此二者介導(dǎo)的免疫應(yīng)答，其包括生產(chǎn)細(xì)胞因子、趨化因子及由活化的T細(xì)胞、白細(xì)胞或 此二者制造的類似分子。“膽固醇”是指化學(xué)式為C27H45OH的白色結(jié)晶型物質(zhì)。其為一種被歸類為脂質(zhì)的環(huán) 狀烴醇。其不溶于水，但可溶于多種有機(jī)溶劑中?！斑t發(fā)型超敏反應(yīng)(DTH) ”是指暴露于被免疫系統(tǒng)視為外來的抗原后M至72小時(shí) 時(shí)發(fā)展出的炎性應(yīng)答。此類型的免疫應(yīng)答主要涉及T細(xì)胞而非(由B細(xì)胞制造的)抗體?！皠┝俊笔侵附o予受試者的疫苗或免疫原性組合物?！暗谝粍┝俊被颉跋劝l(fā)疫苗 (priming vaccine) ”是指在第0天給予的這類組合物的劑量?！暗诙┝俊被颉暗谌齽┝俊?或“年劑量”是指在第一劑量之后給予的這類組合物的量，所述組合物可以是或不是與第一 劑量相同的疫苗或免疫原性組合物?！叭榛瘎笔侵赣糜谑谷橐焊€(wěn)定的物質(zhì)?！叭橐骸笔侵竷煞N不相溶混的液體的組合物，其中一種液體的小滴懸浮于另一種液 體的連續(xù)相中?！磅ヮ悺笔侵概c無機(jī)鹽對(duì)應(yīng)的任何一種類別的有機(jī)化合物，其系從有機(jī)酸單位與醇 分子的縮合反應(yīng)(其中消除一水分子)形成?！百x形劑”是指任何非抗原的疫苗的組分?！皠蚧笔侵笇⒁换蚨喾N相似或不相似的組分混合成均勻的混合物的過程?！绑w液免疫應(yīng)答”是指由抗體介導(dǎo)的免疫應(yīng)答?！笆杷浴笔侵覆蝗苡谒⒉灰孜账只蚴艿剿牟焕绊?；與水不相容或?qū)ζ?親和力低。受試者受試者中的“免疫應(yīng)答”是指應(yīng)答抗原的體液免疫應(yīng)答、細(xì)胞性免疫應(yīng)答或體液及細(xì)胞性免疫應(yīng)答的發(fā)生。免疫應(yīng)答通?？衫帽绢I(lǐng)域已知的標(biāo)準(zhǔn)免疫分析及中和分 析來測(cè)定?？乖摹懊庖弑Ｗo(hù)量”或“免疫有效量”或“產(chǎn)生免疫應(yīng)答的有效量”為可在接受者 體內(nèi)有效誘導(dǎo)免疫原性應(yīng)答的量。該免疫原性應(yīng)答可能足以用于診斷目的或其它試驗(yàn)，或 可能適合用于預(yù)防疾病的征兆或癥狀，包括由病原體引起的感染所造成的不利的健康結(jié)果 或其并發(fā)癥。體液免疫力或由細(xì)胞介導(dǎo)的免疫力或此二者均可被誘導(dǎo)。動(dòng)物對(duì)免疫原性組 合物的免疫應(yīng)答可通過例如測(cè)量抗體效價(jià)、淋巴細(xì)胞增殖分析而間接評(píng)估，或在以野生型 菌株攻擊后通過監(jiān)控征兆或癥狀來直接評(píng)估，而該由疫苗提供的保護(hù)性免疫力可通過測(cè)量 例如受試者的臨床征兆如死亡率、發(fā)病率的減少，溫度數(shù)值，受試者總體生理狀況及總體健 康和表現(xiàn)來評(píng)估。免疫應(yīng)答可包括，但不限于誘導(dǎo)細(xì)胞性和/或體液免疫力?！懊庖咴浴笔侵讣ぐl(fā)免疫或抗原應(yīng)答。因此，免疫原性組合物可為任何能誘導(dǎo)免 疫應(yīng)答的組合物?！懊庖叽碳ば詮?fù)合物”或ISCOM是指當(dāng)Quil A與膽固醇及磷脂組合時(shí)形成的特殊構(gòu)造?！懊庖叽碳し肿印笔侵府a(chǎn)生免疫應(yīng)答的分子。“脂質(zhì)”是指任何不溶于水但溶于非極性有機(jī)溶劑中，觸摸起來為油性，且與碳水 化合物及蛋白質(zhì)一起構(gòu)成活細(xì)胞的主要構(gòu)造物質(zhì)的任何有機(jī)化合物群組，包括脂肪、油、 蠟、固醇及三酸甘油脂?！坝H脂性”是指顯示出對(duì)脂質(zhì)的顯著親和力或在脂質(zhì)中顯示顯著的溶解度?！爸|(zhì)體”是指由包圍水性隔室的脂質(zhì)雙層形成的微小球形顆粒，其在醫(yī)學(xué)上被用 于在體內(nèi)攜帶藥物、抗原、疫苗、酶或另一物質(zhì)至靶向的細(xì)胞?！搬t(yī)療劑(Medicinal agent) ”是指任何用于預(yù)防、治愈或改善疾病，或預(yù)防一些生 理狀況或發(fā)病的藥劑?！澳c胃外施用”是指將物質(zhì)(諸如疫苗)通過或經(jīng)由不包括消化道在內(nèi)的途徑引入 受試者體內(nèi)。腸胃外施用包括皮下、肌內(nèi)、透皮、皮內(nèi)、腹膜內(nèi)、眼內(nèi)及靜脈內(nèi)施用。“藥學(xué)上可接受的”是指在明智的醫(yī)療判斷下適合與受試者組織接觸而無不當(dāng)毒 性、刺激、變應(yīng)原性應(yīng)答等，與合理的利益對(duì)風(fēng)險(xiǎn)的比率匹配并對(duì)其預(yù)期用途有效的物質(zhì)?！胺磻?yīng)原性”是指受試者受試者中應(yīng)答佐劑、免疫原性或疫苗組合物的施用所引出 的副作用。其可在施用部位發(fā)生，且通常就所發(fā)展出的癥狀數(shù)目來評(píng)估。這些癥狀可包括 發(fā)炎、發(fā)紅及膿腫。其亦可就發(fā)生、持續(xù)時(shí)間及嚴(yán)重性來評(píng)估。例如“低度”反應(yīng)將涉及僅 可通過觸摸而非由目視檢測(cè)到的腫脹，或持續(xù)時(shí)間短。較嚴(yán)重的反應(yīng)為，例如可目視檢測(cè)或 持續(xù)時(shí)間較長的反應(yīng)?！笆覝亍笔侵?8至25°C的溫度?！霸碥铡笔侵敢蝗涸醋灾参锏谋砻婊钚蕴擒?，其由與具有類固醇或三萜構(gòu)造的疏水 區(qū)結(jié)合的親水區(qū)(通常為數(shù)個(gè)糖鏈)所組成?！邦惞檀肌笔侵敢兹苡谟袡C(jī)溶劑而微溶于水的屬于生化類別脂質(zhì)的一群有機(jī)化合 物之任何。類固醇包含一個(gè)四-融合環(huán)系統(tǒng)，此環(huán)系統(tǒng)具有3個(gè)融合的環(huán)己烷(六碳)環(huán) 加第4個(gè)環(huán)戊烷(五碳)環(huán)?！肮檀肌笔侵竸?dòng)物體內(nèi)從萜類前體生物制造的化合物。其包含具有羥基(OH)基團(tuán)
12(通常附于碳-3上)的類固醇環(huán)構(gòu)造。該脂肪酸取代基的烴鏈的長度不同，通常為16至 20個(gè)碳原子，且可為飽和或不飽和的。固醇通常在環(huán)構(gòu)造中含有一或多個(gè)雙鍵以及多種不 同的附于環(huán)的取代基。固醇及其脂肪酸酯類基本上不溶于水?！笆茉囌摺笔侵溉魏涡枰┯米魟┙M合物的動(dòng)物。其包括哺乳動(dòng)物和非哺乳動(dòng)物， 包括靈長類、家畜、伴侶動(dòng)物、實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)動(dòng)物、圈養(yǎng)的野生動(dòng)物、鳥(包括卵)、爬行動(dòng)物和 魚。因此，該術(shù)語包括，但不限于猴子、人、豬；牛、綿羊、山羊、馬、小鼠、大鼠、荷蘭豬、倉鼠、 兔子、貓、犬、雞、火雞、鴨、其它禽類、青蛙和蜥蜴。"TCID5tl ”是指“組織培養(yǎng)感染劑量”且定義為感染50%指定批次的經(jīng)接種的細(xì)胞培 養(yǎng)物時(shí)所需要的病毒稀釋量。可使用多種方法來計(jì)算TCID5tl，包括本說明書全文中所使用的 斯皮爾曼-卡伯法(Spearman-Karber method)。斯皮爾曼-卡伯法的描述見B. W. Mahy&H. 0. Kangro, Virology Methods Manual, p.25-46(1996)。“治療有效量”是指可在接受抗原或疫苗的受試者內(nèi)誘導(dǎo)足以預(yù)防或減輕由于病 原體(諸如病毒或細(xì)菌)感染所引起的疾病的征兆或癥狀(包括不利的健康影響或其并發(fā) 癥)的免疫應(yīng)答的抗原或疫苗量?？梢哉T導(dǎo)體液免疫力或細(xì)胞介導(dǎo)的免疫力或體液與細(xì)胞 介導(dǎo)的免疫力二者。動(dòng)物對(duì)疫苗的免疫應(yīng)答可通過例如測(cè)量抗體效價(jià)、淋巴細(xì)胞增殖分析 來間接評(píng)估，或在以野生型菌株攻擊后通過監(jiān)控征兆或癥狀來直接評(píng)估。由疫苗提供的保 護(hù)性免疫力可通過測(cè)量例如受試者的臨床征兆諸如死亡率、發(fā)病率的減少，溫度數(shù)值，總體 生理狀況及總體健康和效能來評(píng)估。疫苗的治療有效量可根據(jù)所使用的具體佐劑、所使用 的具體抗原或受試者的狀況而有不同，且可由本領(lǐng)域技術(shù)人員決定?！爸委?treating) ”是指預(yù)防應(yīng)用了此術(shù)語的病癥、病況或疾病，或預(yù)防或減輕這 類病癥、病況或疾病的一或多種癥狀?！爸委?treatment) ”是指如上述定義的“治療(treating) ”的行為?！叭啤笔侵复罅壳叶鄻拥淖粤鶄€(gè)五-碳異戊二烯O-甲基-1，3-丁二烯)單位衍 生的天然存在的有機(jī)分子，其可以上千種方法裝配及修飾。其大部分為多環(huán)形構(gòu)造，彼此的 差異在于官能基及其基本的碳骨架。這些分子可在所有種類的活物中找到?！耙呙纭笔侵赴绫疚亩x的抗原的組合物。將疫苗施用給受試者可產(chǎn)生大致上 針對(duì)一種或多種特定疾病的免疫應(yīng)答。治療有效的疫苗量可根據(jù)所使用的具體抗原、或受 試者的狀況而有不同，且可由本領(lǐng)域技術(shù)人員決定。組合物的組分三萜和CpGs適用于佐劑組合物的三萜可來自多種來源(自植物衍生或合成的等同物)，包括， 但不限于皂樹、西紅柿素、人參提取物、蘑菇及構(gòu)造上類似于類固醇皂苷的生物堿糖苷。因 此，適合用于佐劑組合物中的三萜包括皂苷、角鯊烯及羊毛固醇。適合用于佐劑組合物中的 三萜的量取決于所使用的三萜的性質(zhì)。然而，其使用量通常為每劑量約1微克至約5000微 克。其使用量亦可為每劑量約1微克至約4000微克、每劑量約1微克至約3000微克、每劑 量約1微克至約2000微克及每劑量約1微克至約1000微克。其使用量亦可為每劑量約5 微克至約750微克、每劑量約5微克至約500微克、每劑量約5微克至約200微克、每劑量 約5微克至約100微克、每劑量約15微克至約100微克及每劑量約30微克至約75微克。若使用皂苷，該佐劑組合物通常含有來自皂樹樹皮的免疫活性皂苷餾分。該皂苷可為，例如Quil A或其它經(jīng)純化或部分純化的皂苷制劑(其可商業(yè)獲得)。因此，皂苷提 取物可以作為混合物或經(jīng)純化的個(gè)別組分(諸如QS-7、QS-17、QS-18及QS-21)來使用。在 一個(gè)實(shí)施方案中，Quil A為至少85%純。在另一個(gè)實(shí)施方案中，Quil A為至少90%、91 %、 92%,93%,94%,95%,96%,97%,98%,^； 99%純。CpG ODN為最近報(bào)告的一類藥物治療劑，其特征為在特異性堿基-序列上下文 (CpG 基序(motif))出現(xiàn)未甲基化的 CG 二核苷酸。(Hansel TT, Barnes PJ(eds) :New Drugs for Asthma,Allergy and COPD. Prog Respir Res. Basel, Karger,2001,vol 31,pp 229-232，該文獻(xiàn)通過引用并入本文)。這些CpG基序不存在于真核DNA (其中CG 二核苷酸 受遏制，且當(dāng)存在時(shí)通常系經(jīng)甲基化)中，但存在于可由這些CpG賦予免疫刺激性質(zhì)的細(xì)菌 DNA中。這些免疫刺激性質(zhì)包括誘導(dǎo)Thl型應(yīng)答并大量釋出IFN-A、IL-12及IL-18。CpG 0DN(長度為18-24bp)擁有類似于細(xì)菌DNA的免疫調(diào)節(jié)性質(zhì)。細(xì)胞表面蛋白質(zhì)可吸收這些 分子，得到不同結(jié)果。然而，通過載體諸如Q⑶C、Q⑶CR及其它本專利中所列舉的組合，可顯 著增強(qiáng)該免疫調(diào)節(jié)性質(zhì)及CpG的吸收。適合用于佐劑組合物中的CpG的量系取決于所使用的CpG及預(yù)期物種的性質(zhì)。然 而，其使用量通常為每劑量約1微克至約20毫克。其使用量亦可為每劑量約1微克至約10 毫克、每劑量約1微克至約5毫克、每劑量約1微克至約4毫克、每劑量約1微克至約3毫 克、每劑量約1微克至約2毫克及每劑量約1微克至約1毫克。其使用量亦可為每劑量約5 微克至約750微克、每劑量約5微克至約500微克、每劑量約5微克至約200微克、每劑量 約5微克至約100微克、每劑量約10微克至約100微克、每劑量約15微克至約100微克及 每劑量約30微克至約75微克。固醇適合用于佐劑組合物的固醇包括β-谷固醇、豆固醇、麥角固醇、麥角鈣化醇及膽 固醇。這些固醇為本領(lǐng)域公知并且可自市場上購得。例如膽固醇公開于Merck Index, 12th Ed.，p. 369中。適合用于佐劑組合物中的固醇的量取決于所使用的固醇的性質(zhì)。然 而，其使用量通常為每劑量約1微克至約5000微克。其使用量亦可為每劑量約1微克至約 4000微克、每劑量約1微克至約3000微克、每劑量約1微克至約2000微克及每劑量約1 微克至約1000微克。其使用量亦可為每劑量約5微克至約750微克、每劑量約5微克至約 500微克、每劑量約5微克至約200微克、每劑量約5微克至約100微克、每劑量約15微克 至約100微克及每劑量約30微克至約75微克。免疫調(diào)節(jié)劑佐劑組合物可還包括一或多種免疫調(diào)節(jié)劑，諸如季銨化合物(如DDA)及白介素、 干擾素或其它細(xì)胞因子。這些物質(zhì)可自市場購得。適合用于佐劑組合物中的免疫調(diào)節(jié)劑的 量取決于所使用的免疫調(diào)節(jié)劑的性質(zhì)及受試者。然而，其使用量通常為每劑量約1微克至 約5000微克。其使用量亦可為每劑量約1微克至約4000微克、每劑量約1微克至約3000 微克、每劑量約1微克至約2000微克及每劑量約1微克至約1000微克。其使用量亦可為 每劑量約5微克至約750微克、每劑量約5微克至約500微克、每劑量約5微克至約200微 克、每劑量約5微克至約100微克、每劑量約15微克至約100微克及每劑量約30微克至約 75微克。在一特殊例子方面，含DDA的佐劑組合物可通過單純將抗原溶液與新鮮制備的DDA 溶液混合來制備。
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聚合物佐劑組合物可還包括一或多種聚合物，諸如，例如DEAE葡聚糖、聚乙二醇和聚丙 烯酸，以及聚甲基丙烯酸(如CARBOPOL )。這類物質(zhì)可自市場購得。適合用于佐劑 組合物中的聚合物的量取決于所使用的聚合物的性質(zhì)。然而，其使用量通常為約0.0001% 體積比體積(ν/ν)至約75% ν/ν。在其他實(shí)施方案中，其使用量為約0. 001% ν/ν至約50% ν/ν、約 0. 005% ν/ν 至約 25% ν/ν、約 0. 01% ν/ν 至約 10% ν/ν、約 0. 05% ν/ν 至約 2% ν/ ν及約0. ν/ν至約0.75% ν/ν。在另一個(gè)實(shí)施方案中，其使用量為約0.02% ν/ν至約 0.4% v/v。DEAE-葡聚糖的分子大小可在50，OOODa至5，000, OOODa的范圍內(nèi)，或者，其可 在500，OOODa至2，000, OOODa的范圍內(nèi)。這些物質(zhì)可自市場購得或可從葡聚糖制得。另一特殊例子為聚丙烯酸(如CARBOPOL 聚合物)，其平均當(dāng)量為76。其 系從平均直徑約0. 2至6. 0微米的初始聚合物顆粒制得。CARBOPOL 聚合物在水中可 膨脹至多達(dá)其原始體積的1000倍及其原始直徑的10倍，以在暴露于PH環(huán)境高于羧酸化物 基團(tuán)的PKa時(shí)形成凝膠。在較羧酸化物基團(tuán)的PKa更高的PH下，該羧酸化物基團(tuán)離子化， 導(dǎo)致負(fù)電荷基團(tuán)間的排斥，使聚合物的膨脹增加。Th2刺激劑佐劑組合物可還包括一或多種Th2刺激劑，諸如，例如Bay R1005 及鋁。適合 用于佐劑組合物中的Th2刺激劑的量取決于所使用的Th2刺激劑的性質(zhì)。然而，其使用量 通常為每劑量約0. 01毫克至約10毫克。在其他實(shí)施方案中，其使用量為每劑量約0. 05毫 克至約7. 5毫克、每劑量約0. 1毫克至約5毫克、每劑量約0. 5毫克至約2. 5毫克及每劑量 約1毫克至約2毫克。一種特殊例子為BayR1005 ，其為一種化學(xué)名稱為“N-(2-脫氧 基-2-L-亮氨酰氨基-β -D-吡喃葡糖基)-N-十八烷基十二烷酰胺乙酸酯”的糖脂。其可 根據(jù) Lockhoff，0. (Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 30 :1611-1620 ；1991)中所找到的程序合成。 建議將其貯存在2-8°C的氣密容器中。其化學(xué)或物理性質(zhì)為輕微吸濕，不形成多形體，在溫 度高達(dá)50°C的空氣和光下以及環(huán)境溫度下pH 2-12的水性溶劑中為化學(xué)上穩(wěn)定。其為在水 溶液中形成膠束的兩親分子?？乖图膊∽魟┙M合物可含有一或多種抗原。該抗原可為能在受試者中產(chǎn)生期望的免疫應(yīng)答 的多種物質(zhì)的任一。雖然單獨(dú)的Quil A是殺病毒的，Quil A加上膽固醇在形成螺旋形膠束 時(shí)可解除Quil A的毒性(見，美國專利No. 7，122，191)?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，本文所述的佐劑組合物 是非-殺病毒的、非溶血的或是溶膜的。因此，與這些佐劑組合物一起使用的抗原可為個(gè)別 的或其任何組合的一或多種病毒(滅活、減毒及經(jīng)修飾的活病毒)、細(xì)菌、寄生蟲、核苷酸、 多核苷酸、肽、多肽、重組蛋白質(zhì)、合成的肽、蛋白質(zhì)提取物、細(xì)胞(包括腫瘤細(xì)胞)、組織、多 糖、碳水化合物、脂肪酸、磷壁酸(teichioc acid)、肽聚糖、脂質(zhì)、或糖脂。與本發(fā)明的佐劑一起使用的抗原亦包括核苷酸、多核苷酸、肽、多肽的免疫原性片 段，其可分離自本文中所提及的生物。不會(huì)在受試者中引起疾病的活病毒、經(jīng)修飾的活病毒及減毒的病毒株已以非毒性 形式被分離，或已利用本領(lǐng)域公知的方法(包括在合適的細(xì)胞系中進(jìn)行系列傳代或暴露于 紫外線或化學(xué)誘變劑)減毒。滅活或被殺死的病毒株為那些已藉本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方 法(包括以福爾馬林、β丙內(nèi)酯(BPL)、二乙烯亞胺(BEI)、滅菌輻射、加熱或其它這類方法處理)滅活的毒株。可將兩種或多種抗原組合在一起以制造可保護(hù)針對(duì)由病原體引起的多種疾病來 保護(hù)受試者的多價(jià)組合物。目前，疫苗的商品制造者以及終端使用者偏好多價(jià)疫苗產(chǎn)品。雖 然常規(guī)佐劑通常受限于可與其一起有效使用的不同抗原(單價(jià)或多價(jià))，但是本文所述的 佐劑可有效用于廣泛的抗原(單價(jià)以及多價(jià))中。因此，本文所述的抗原可合并在包含本 文所述的佐劑的單一組合物中。一些可作為抗原與佐劑組合物一起使用的細(xì)菌的例子包括，但不限于醋酸 丐 f 云力木干 (Aceinetobacter calcoaceticus)、 E T # $ JP Sl Sl ff ^ (Acetobacter paseruianus)、胸膜月市炎方文線桿菌(Actinobacillus pleuropneumoniae)、嗜水氣單 胞菌(Aeromonas hydrophila)> 月旨環(huán)酸桿菌(Alicyclobacillus acidocaldarius)、 閃爍古球菌(Arhaeglobus fulgidus)、短小芽孢桿菌(Bacillus pumilus)、嗜熱脂肪 芽孢掉菌(Bacillus stearothermophillus)、枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)、 熱鏈形芽孢桿菌(Bacillus thermocatenulatus)、支氣管敗血性博德特氏菌 (Bordetella bronchiseptica)、洋蔥伯克霍爾德菌(Burkholderia cepacia)、谷伯 克霍爾德菌(Burkholderia glumae)、大腸彎曲菌(Campylobacter coli)、胎兒彎 曲菌(Campylobacter fetus)、空腸彎曲菌(Campylobacter jejuni)、豬腸彎曲桿 菌(Campylobacter hyointestinalis)、鸚鵡熱衣原體(Chlamydia psittaci)、沙眼 衣原體(Chlamydia trachomatis)、衣原體屬(Chlamydophila spp.)、黏性染色菌 (Chromobacterium viscosum)、豬紅斑丹毒絲菌(Erysipelothrix rhusiopathieae)、 單核球增多性李斯特菌(Listeria monocytogenes)、犬埃立克體(Ehrlichia canis)、 大腸桿菌(Escherichia coli)、流感嗜血桿菌(Haemophilus influenzae)、睡眠嗜血 菌(Haemophilus somnus)、豬螺桿菌(Helicobacter suis)、細(xì)胞內(nèi)勞森菌(Lawsonia intracellularis)、口耆月市軍團(tuán)菌(Legionella pneumophilia)、莫氏木干菌屬(Moraxellsa sp·)、牛分枝桿菌(Mycobactrium bovis)、豬月市炎支原體(Mycoplasma hyopneumoniae)、 絲狀支原體亞種(Mycoplasma mycoides subsp. )、LC絲狀菌(Mycoides LC)、產(chǎn)氣莢膜梭 菌(Clostridium perfringens)、犬牙周臭味菌(Odoribacter denticanis)、溶血巴氏桿 |if (Pasteurella(Mannheimia)haemolytica) >^^rEiESIflii (Pasteurella multocida)、發(fā) 光光桿菌(Photorhabdus luminescens)、喉管口卜H|木單胞菌(Porphyromonas gulae)
口卜H|木單 1 (Porphyromonas gingivalis)、唾^夜口卜H|木單 1 (Porphyromonas salivosa) > 痤疫丙酸桿菌(Propionibacterium acnes)、普通變形桿菌(Proteus vulgaris)、威斯康 辛綠膿桿菌(Pseudomonas wisconsinensis)、綠膿桿菌、熒光假單胞菌C9 (Pseudomonas fluorescens C9)、熒光假單胞菌 SIKWl (Pseudomonas fluorescens SIKW1)、莓實(shí)假 單胞菌(Pseudomonas fragi)、淺黃假單胞菌(Pseudomonas luteola)、食油假單胞 菌(Pseudomonas oleovorans)、假單孢菌 Bll-1 (Pseudomonas sp B11-1)、富養(yǎng)產(chǎn)堿菌 (Alcaliges eutrophus)、不動(dòng)嗜冷單胞菌(Psychrobacter immobilis)、普氏立克次體 (Rickettsia prowazekii)、立克次氏立克次體(Rickettsia rickettsia)、鼠傷寒沙門 氏菌(Salmonella typhimurium)、邦哥利沙門氏菌(Salmonella bongiri)、腸沙門氏菌 (Salmonella enterica)、都柏林沙門氏菌(Salmonella dublin)、鼠傷寒沙門氏菌、霍亂 沙門氏菌(Salmonella choleraseuis)、紐波特沙門氏菌(Salmonella newport)、黏質(zhì)沙雷氏菌(Serratia marcescens)、鈍頂螺方寵藻(Spirlina platensis)、金黃色葡萄球菌、表 皮葡萄球菌、豬葡萄球菌(Staphylococcus hyicus)、白色鏈霉菌(Streptomyces albus)、 肉桂鏈霉菌(Streptomyces cinnamoneus)、豬鏈球菌(Streptococcus suis)、除角質(zhì)鏈 霉菌(Streptomyces exfoliates)、擠疫鏈霉菌(Streptomyces scabies)、嗜酸熱硫化 葉菌(Sulfolobus acidocaldarius)、集胞藻屬(Syechocystis 8卩.)、霍舌匕弧菌(Vibrio cholerae)、·{白氏舒lfe累旋菌(Borrelia burgdorferi)、齒密lfe累旋菌(Treponema denticola)、 小密螺旋菌(Treponema minutum)、噬齒密螺旋菌(Treponema phagedenis)、屈曲密螺旋菌 (Treponema refringens)、文氏密螺方寵菌(Treponema vincentii)、把密螺方寵體(Treponema palladium)及鉤端螺旋體種(Leptospira species)，諸如已知的病原體犬鉤端螺旋體 (Leptospira canicola) > ^ g1 MM^I^m WiMW (Leptospira grippotyposa) > Pp 端il旋體(Leptospira hardjo)、f専氏哈佐牛鉤端il旋體(Leptospira borgpetersenii hardjo-bovis)、t専氏哈佐普拉伊特 i若鉤端 il 旋體(Leptospira borgpetersenii hardjo-prajitno) > H^i^^m^MW (Leptospira interrogans)、HH 出HMi本 (Leptospira icterohaemorrhagiae)、波莫納鉤端螺方寵體(Leptospira pomona)禾口布拉迪 斯拉發(fā)鉤端螺旋體(Leptospira bratislava)，及其組合。滅活的病毒及減毒的活病毒可用于佐劑組合物中。一些可作為抗原使用的病毒例 子包括，但不限于鳥皰疹病毒、牛皰疹病毒、犬皰疹病毒、馬皰疹病毒、貓病毒性鼻氣管炎 病毒、馬立克氏病病毒(Marek' s disease virus)、羊皰疹病毒、豬皰疹病毒、偽狂犬病病 毒、鳥副黏病毒、牛呼吸道合胞體病毒、犬瘟熱病毒、犬副流感病毒、犬腺病毒、犬細(xì)小病毒、 牛副流感病毒3、羊副流感病毒3、牛疫病毒、邊界病病毒(Border disease virus)、牛病毒 性腹瀉病毒(BVDV)、I 型BVDV、II 型BVDV、古典豬瘟病毒(Classical swine fever virus)、 鳥白血病病毒、牛免疫缺陷病毒、牛白血病病毒、牛結(jié)核病病毒、豬感染性貧血病毒、貓免疫 缺陷病毒、貓白血病病毒O^eLV)、新城疫病毒(Newcastle Disease virus)、羊進(jìn)行性肺炎 病毒、羊肺腺癌病毒、犬冠狀病毒(CCV)、泛嗜性CCV(pantr0picCCV)、犬呼吸道冠狀病毒、 牛冠狀病毒、貓杯狀病毒、貓腸冠狀病毒、貓感染性腹膜炎病毒、豬流行性腹瀉病毒、豬凝血 性腦骨髓炎病毒、豬細(xì)小病毒、I型豬環(huán)病毒(PCV)、II型PCV、豬生殖及呼吸綜合征(PRRS) 病毒、傳染性胃腸炎病毒、火雞冠狀病毒、牛流行熱病毒、狂犬病輪狀病毒、水泡性口炎病 毒、慢病毒、鳥流感病毒、鼻病毒、馬流感病毒、豬流感病毒、犬流感病毒、貓流感病毒、人流 感病毒、東方馬腦炎病毒(EEE)、委內(nèi)瑞拉馬腦炎病毒、西尼羅河病毒、西方馬腦炎病毒、人 免疫缺陷病毒、人乳頭狀瘤病毒、水痘帶狀皰疹病毒、乙型肝炎病毒、鼻病毒和麻疹病毒，及 其組合。肽抗原的例子包括支氣管敗血性薄德特氏菌(Bordetella bronchis印tica)p68、 &iRH、IgE肽、Fel dl和癌癥抗原，及其組合。其它抗原例子包括核苷酸、碳水化合物、脂質(zhì)、 糖脂、肽、脂肪酸和磷壁酸和肽聚糖，及其組合。一些可作為抗原與佐劑組合物一起使用的寄生蟲例子包括，但不限于無形體屬 (Anaplasma)、肝片吸蟲(Fasciola h印atica)(肝吸蟲)、球蟲、艾美球蟲(Eimeria)屬、犬 新孢子蟲(Neospora caninum)、剛地弓形蟲(Toxoplasma gondii)、賈第蟲(Giardia)、惡 Vi^ (Dirofilaria)(Ancylostoma) ( )(Trypanosoma spp.)、禾丨J什曼原蟲屬(Leishmania spp.)、毛滴蟲屬(Trichomonas spp.)、小球隱孢子蟲(Cryptosporidium parvum)、巴貝西蟲(Babesia)、血吸蟲(Schistosoma)、練蟲 (Taenia)、類圓線蟲(Strongyloides)、蛔蟲(Ascaris)、毛線蟲(Trichinella)、肉孢子蟲 (Sarcocystis)、哈蒙德蟲(Hammondia)和等孢子球蟲(Isopsora)，及其組合。亦考慮的有 外寄生蟲，包括但不限于蜱(ticks)，包括硬蜱屬(Ixodes)、扇頭蜱屬O^hipic印halus)、 革蜱屬(Dermacentor)、鈍眼蜱屬(Amblyomma)、牛蜱屬(Boophilus)、琉眼蜱屬(Hyalomma) 和血蜱屬(Haemaphysalis)，及其組合。用于誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的抗原量根據(jù)所使用的抗原性質(zhì)、受試者及期望的應(yīng)答水平將 有相當(dāng)大的變化，且可由本領(lǐng)域技術(shù)人員決定。在含經(jīng)修飾的活病毒或減毒病毒的疫苗方 面，抗原的治療有效量通常在從約IO2組織培養(yǎng)感染劑量(TCID)5tl(含)至約IOiciTCID5ci(含) 的范圍內(nèi)。對(duì)許多這類病毒而言，治療有效的劑量通常系在從約IO2TCID5tl(含)至約 IO8TCID50 (含)的范圍內(nèi)。在一些實(shí)施方案中，治療有效的劑量通常系在約IO3TCID5tl (含)至 約IO6TCID5tl (含)的范圍內(nèi)。在一些其他實(shí)施方案中，治療有效的劑量系在約IO4TCID5tl (含) 至約IO5TCID5tl(含)的范圍內(nèi)。就含有滅活病毒的疫苗而言，抗原的治療有效量通常為每劑量至少約100個(gè)相對(duì) 單位，通常在每劑量約1，000至約4，500個(gè)相對(duì)單位的范圍內(nèi)。在其他實(shí)施方案中，抗原 的治療有效量為每劑量約250(含)至約4，000個(gè)相對(duì)單位(含)、每劑量約500(含)至 約3，000個(gè)相對(duì)單位(含)、每劑量約750 (含)至約2，000個(gè)相對(duì)單位(含)，或每劑量約 1，000 (含)至約1，500個(gè)相對(duì)單位(含)。在含滅活的病毒的疫苗中，治療有效量的抗原亦可按照每毫升的相對(duì)效力(RP) 測(cè)量。治療有效量通常在每毫升約0.1(含)至約50冊(cè)(含)的范圍內(nèi)。在其他實(shí)施方案 中，抗原的治療有效量的范圍從每毫升約0.5(含)至約30ra(含)、每毫升約1(含)至約 25PR(含)、每毫升約2(含)至約(含)、每毫升約3(含)至約15PR(含)，或每毫升 約5(含)至約10PR(含)。在一個(gè)實(shí)施方案中，從持續(xù)受KT-FeLV-UCD-I貓白血病病毒株感染的FL74-UCD-1 細(xì)胞系(ATCC編號(hào)CRL-8012)中制造!^eLV抗原。疫苗中的!^eLV抗原量系以每毫升的gp70 病毒蛋白質(zhì)量來測(cè)量。當(dāng)通過每毫升的gp70病毒蛋白質(zhì)量來測(cè)量時(shí)，！^eLV抗原的治療有 效量通常在約100(含)至約350，000納克/毫升(含)的范圍內(nèi)。在另一個(gè)實(shí)施方案中， 該范圍從約1，000 (含)至約300，000納克/毫升(含)，或從約2，500 (含)至約250，000 納克/毫升(含)、或從約4，000(含)至約220，000納克/毫升(含)、或從約5，000(含) 至約150，000納克/毫升(含)、或從約10，000(含)至約100，000納克/毫升(含)。在疫苗中施用的細(xì)菌抗原的細(xì)胞數(shù)為每劑量約1 X IO6 (含)至約5 X 101° (含)個(gè) 菌落形成單位(CFU)。在其他實(shí)施方案中，該細(xì)胞數(shù)范圍為約1 X IO7 (含)至約5 X 101° (含) CFU/劑量、或約1X108(含)至約5X101(I (含)CFU/劑量。再還在其他實(shí)施方案中，該細(xì)胞 數(shù)范圍為約1X102(含)至約5X 101°(含)CFU/劑量、或約1X104(含)至約5X109(含) CFU/劑量、或約IX IO5(含)至約5X109(含)CFU/劑量、或約1X106(含)至約5X109(含) CFU/劑量、或約1X106(含)至約5X108(含)CFU/劑量、或約1X107(含)至約5X109(含) CFU/劑量。在疫苗中施用的寄生蟲抗原的細(xì)胞數(shù)為每劑量約1 X IO2 (含)至約1 X 101° (含)。 在其他實(shí)施方案中，該細(xì)胞數(shù)范圍為約1XIO3(含)至約1 X IO9(含)、或約1 X IO4(含)至約1X108(含)、或約1X105(含)至約1X107(含)、或約1X106(含)至約1X108(含)。本領(lǐng)域公知，使用常規(guī)佐劑時(shí)與經(jīng)修飾的活病毒或減毒病毒相比需要顯著更大量 的滅活病毒來刺激可比較的血清學(xué)應(yīng)答水平。然而，令人驚訝地發(fā)現(xiàn)，通過本文所述的佐劑 組合物，大約相同量的滅活病毒和經(jīng)修飾的活病毒刺激類似的血清學(xué)應(yīng)答水平。此外，當(dāng) 與常規(guī)佐劑相比較時(shí)，使用本文所述的佐劑時(shí)，為實(shí)現(xiàn)相同的血清學(xué)應(yīng)答水平需要更少量 的經(jīng)修飾的活病毒、減毒病毒及滅活病毒。這些出人意料的發(fā)現(xiàn)證明在制備免疫原性組合 物和疫苗組合物期間保護(hù)資源并降低成本。在具有廣泛用途的疫苗方面，每年需要制造數(shù) 百萬個(gè)劑量，因此這些節(jié)約是重要的。賦形劑水性佐劑提供某些優(yōu)點(diǎn)。其通常容易配制及施用，且可誘導(dǎo)很少或較少的嚴(yán)重注 射部位反應(yīng)。然而，帶有抗原的水性佐劑傾向從注射部位擴(kuò)散，由受試者的肝臟清除并產(chǎn)生 不想要的非特異性免疫應(yīng)答。令人驚訝地發(fā)現(xiàn)，本文所述的水性佐劑組合物可保持在注射 部位直到被生物代謝(這在很長的期間內(nèi)發(fā)生)，并提供靶向的免疫應(yīng)答。當(dāng)作為佐劑的組分加入時(shí)，油通常提供長且緩慢的釋出譜。本發(fā)明中，油可代謝或 不可代謝。油可為水包油、油包水或水包油包水乳液的形式。適合用于本發(fā)明的油包括烷、烯、炔，其對(duì)應(yīng)的酸及醇，及其醚及酯，及其混合物。 油的個(gè)別化合物為輕烴化合物，即，這類組分具有6至30個(gè)碳原子。該油可合成制備或從 石油產(chǎn)物純化。此部分可具有直鏈或支鏈構(gòu)造。其可為完全飽和或具有一個(gè)或多個(gè)雙鍵或 參鍵。用于本發(fā)明的一些不可代謝的油包括，例如礦物油、石蠟油及環(huán)烷烴。術(shù)語油亦欲包括“輕礦物油”，即以類似方法通過蒸餾石油取得，但其比重較白礦 物油稍低的油。可代謝的油包括可代謝的、無毒的油。油可為任何可被施用佐劑的受試者的身體 代謝且對(duì)受試者無毒性的植物油、魚油、動(dòng)物油或經(jīng)合成制備的油。植物油的來源包括堅(jiān) 果、種籽及谷粒。本發(fā)明提供的水包油乳液系由AMPHIGEN 配制物組成。此配制物包含水性組 分、卵磷脂、礦物油及表面活性劑。描述該配制物的組分的專利包括美國專利No. 5，084，269 和 US 6，572，861。典型地，本發(fā)明的油組分的存在量為至50% (以體積計(jì))；或?yàn)?0%至45% ； 或?yàn)?0%至40%。組合物的其它組分可包括藥學(xué)上可接受的賦形劑，諸如載體、溶劑和稀釋劑、等張 劑、緩沖液、穩(wěn)定劑、防腐劑、血管收縮劑、抗細(xì)菌劑、抗真菌劑等。典型的載體、溶劑和稀釋 劑包括水、鹽水、右旋糖、乙醇、甘油、油等等。代表性的等張劑包括氯化鈉、右旋糖、甘露醇、 山梨糖醇、乳糖等等。有用的穩(wěn)定劑包括明膠、白蛋白等等。表面活性劑被用于協(xié)助穩(wěn)定被選擇作為佐劑和抗原的載體的乳液。適合用于本發(fā) 明的表面活性劑包括天然的生物相容的表面活性劑和非天然的合成的表面活性劑。生物相 容的表面活性劑包括磷脂化合物或磷脂的混合物。優(yōu)選的磷脂為磷脂酰膽堿(卵磷脂)，諸 如大豆或卵的卵磷脂。通過水洗粗制植物油，再將得到的水合膠分開并干燥，可取得作為磷 脂與三酸甘油酯的混合物的卵磷脂。通過在丙酮清洗移除三酸甘油酯和植物油后，將剩余 的不溶于丙酮的磷脂與甘油脂的混合物分餾，可取得精制的產(chǎn)物?；蛘撸蓮牟煌纳唐穪?br> 19源取得卵磷脂。其它合適的磷脂包括磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、磷脂酰絲氨酸、磷脂酸、心磷 脂及磷脂酰乙醇胺。磷脂可從天然來源分離出或以常規(guī)方式合成。適合用于本發(fā)明的非天然的合成表面活性劑包括基于脫水山梨糖醇的非離 子性表面活性劑，如經(jīng)脂肪酸取代的脫水山梨糖醇表面活性劑(可以名稱SPAN 或ARLACEL 商業(yè)獲得)、聚乙氧基化山梨糖醇的脂肪酸酯(TWEEN )、來自諸 如蓖麻油的來源的脂肪酸的聚乙二醇酯(EMULFOR )、聚乙氧基化的脂肪酸(如 可以名稱SIMULS0LM-53 取得的硬脂酸)、聚乙氧基化的異辛酚/甲醛聚合物 (TYLOXAPOL )、聚氧乙烯脂肪醇醚(BRIJ )、聚氧乙烯壬苯基醚(TRITON N)、聚 氧乙烯異辛苯基醚(TRITON X)。一般而言，若使用兩種或更多表面活性劑時(shí)，表面活性劑或表面活性劑的組合 在乳液中的存在量為以體積計(jì)0. 01 %至10 %，優(yōu)選地0. 1 %至6. 0 %，更優(yōu)選地0. 2 %至 5. 0%。本文所使用的“藥學(xué)上可接受的載體”包括任何及所有溶劑、分散介質(zhì)、涂覆層、佐 劑、穩(wěn)定劑、稀釋劑、防腐劑、抗細(xì)菌劑及抗真菌劑、等張劑、吸收延遲劑等等。載體在可與組 合物的其它組分兼容且對(duì)受試者無害方面必須為“可接受的”。典型地，載體應(yīng)為無菌且不 含病原體，并根據(jù)欲使用的施用模式選擇。本領(lǐng)域技術(shù)人員已知包含組合物的藥學(xué)上可接 受的載體的優(yōu)選配制物為美國(UQ農(nóng)業(yè)部或美國食品藥物管理局或在非美國國家中的同 等政府機(jī)構(gòu)所發(fā)布的適用規(guī)則所核準(zhǔn)的藥物載體。因此，用于組合物的商業(yè)生產(chǎn)中的藥學(xué) 上可接受的載體為已被美國或外國的適當(dāng)政府機(jī)構(gòu)核準(zhǔn)或?qū)⒁藴?zhǔn)的載體。組合物任選地可包含作為藥學(xué)載劑、賦形劑或介質(zhì)發(fā)揮作用的，相容的藥學(xué)上可 接受(即，無菌或非毒性)的液體、半固體或固體稀釋劑。稀釋劑可包括水、鹽水、右旋糖、 乙醇、甘油等等。等張劑可包括氯化鈉、右旋糖、甘露醇、山梨糖醇及乳糖及其他。穩(wěn)定劑包 括白蛋白及其他。組合物亦可含有抗生素或防腐劑，包括，例如慶大霉素、硫柳汞、或氯甲酚。本領(lǐng) 域技術(shù)人員公知可用于選擇的不同類別的抗生素或防腐劑。組合物的制備方法佐劑配制物的制備方法ISCOM可通過組合皂苷、固醇及磷脂來制備。例如ISCOM可含有以重量計(jì)5%至 10%的Quil A、l%至5%的膽固醇和磷脂，以及剩余部分的蛋白質(zhì)。佐劑配制物中皂苷對(duì) 固醇的比例典型地為1 100 (重量對(duì)重量)(w/w)至5 1 (w/w) 0在一些實(shí)施方案中存 在過量的固醇，其中皂苷對(duì)固醇的比例為至少1 2(w/w)，或1 5(w/w)。在其他實(shí)施方 案中，皂苷相對(duì)于固醇而言為過量，并使用的皂苷對(duì)固醇的比例為約5 1 (w/w) 0 ISCOM及 ISC0MATRIX 可自 Isconova AB (瑞典)購得。在一些實(shí)施方案中，CARBOPOL 與DDA組合使用，其使用量為每重量份的DDA 至少使用0.1重量份的CARBOPOL 。在其他實(shí)施方案中，每重量份的DDA至少使用 0. 5重量份的CARBOPOL 。還在其他實(shí)施方案中，每重量份的DDA至少使用1重量份的 CARBOPOL 。CARBOPOL 與DDA組合形成復(fù)合物，藉此，DDA叔胺官能基將使聚合 物上的羧酸側(cè)基團(tuán)免疫官能化。這可令特定的免疫細(xì)胞同時(shí)靶向抗原及佐劑，且在最適的 時(shí)間和濃度下將抗原及佐劑共同投遞至所述細(xì)胞。
本文所述的佐劑通常不需要任何特殊載體，且將調(diào)制在水性或其他藥學(xué)上可接受 的緩沖液中。在一些情況下，公開的實(shí)施方案的疫苗將存于合適的載劑中，諸如，例如另外 的脂質(zhì)體、微球或經(jīng)包囊的抗原顆粒。該抗原可包含在囊泡膜中或包含在囊泡膜外。一般 而言，可溶性抗原在囊泡膜外，疏水性或經(jīng)脂化的抗原包含在囊泡膜內(nèi)或外。根據(jù)施用途徑、貯存需要等等，可將佐劑組合物制成多種不同的形式。例如，其可 制成適合注射用的無菌水溶液或分散液形式，或利用凍干、真空干燥或噴霧干燥技術(shù)制成 凍干形式。凍干的組合物可在使用前于穩(wěn)定化溶液例如鹽水或HEPES中重建。因此，佐劑 組合物可以作為固體、半固體或液體劑型使用。佐劑可利用本領(lǐng)域已知的技術(shù)制備。例如可將皂苷與膽固醇在合適的清潔劑中 混合，再通過溶劑萃取技術(shù)形成脂質(zhì)體或ISC0M。亦可如美國專利案No. 7，122，191中所述， 將皂苷與膽固醇組合以形成螺旋形膠束。磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)可作為水性緩沖介質(zhì)使用；該緩沖液的PH值可為中性或微 堿性或微酸性。因此，PH值可在pH 6至8的范圍內(nèi)。pH值一般為約7. 0至約7. 3。緩沖 液的強(qiáng)度可介于10至50mM PO4及10至150mM PO4之間。在一個(gè)例子中使用0. 063% PBS0 PH值可依需要利用NaOH或HCl調(diào)整。典型的濃度包括IN至ION HCl及IN至ION的NaOH。
所使用的佐劑量系取決于所使用的抗原及期望施用的抗原劑量。其亦取決于計(jì)劃 的物種及所需的配制物。通常，佐劑的量在常規(guī)佐劑用量的范圍內(nèi)。例如在1毫升劑量 中，佐劑典型地包含約1微克(含)至約1000微克(含)。類似地，在1毫升劑量中，抗生 素典型地包含約1微克(含)至約60微克(含)?？蓪⒆魟┡渲莆飫蚧蛭⑸淞鲃蚧?microfluidizing)。對(duì)配制物進(jìn)行初級(jí)混合 步驟，這典型地通過將配制物通過一個(gè)或多個(gè)勻化器一次或多次來實(shí)現(xiàn)。任何可購得的勻 化器均可用于此目的，如Ross乳化器(Hauppauge，紐約)、Gaulin 勻化器(Everett，ΜΑ) 或Microfluidics (Newton，ΜΑ)。在一個(gè)實(shí)施方案中，將配制物在10，OOOrpm勻化3分鐘。通 過使用市售的微射流機(jī)(諸如自Microfluidics (Newton，麻州)取得的型號(hào)IlOY ；Gaul in 30CD 型(Gaulin 公司，Everett，MA)；及 Rainnie Minilab 8· 30H 型(Miro Atomizer Food and Dairy公司，Hudson，威斯康星州))可實(shí)現(xiàn)微射流勻化。這些微射流勻化器通過在高壓 下將流體用力推過小孔隙來操作，從而使二種流體流在交互作用室中以高速交互作用，形 成具有次微米大小的液滴的組合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，將配制物在10，000+/-500psi下 通過200微米的限制尺寸室來將其微射流勻化。本文所述的佐劑組合物可被勻化并且微射流勻化。在一個(gè)實(shí)施方案中，將抗原加 入合適的緩沖液中。攪拌溶液并將皂苷慢慢加入抗原溶液中。然后，將固醇慢慢加入抗原 /皂苷溶液中，再將季銨化合物慢慢加入抗原/皂苷/固醇溶液中。將得到的組合物勻化， 再微射流勻化。微射流勻化后，將聚合物加入微射流勻化組合物中。根據(jù)所使用的組分，可 改變這些步驟的次序，以將組合物的制備過程最優(yōu)化。免疫原性組合物和疫苗組合物的制備方法本文所述的佐劑組合物可用于制備免疫原性組合物和疫苗組合物。在疫苗或免疫 原性組合物方面，各劑量含有治療有效量的一種或多種抗原，此量根據(jù)受試者的年齡和一 般狀況、施用途徑、抗原性質(zhì)及其它因素而有所變化。疫苗或免疫原性組合物中的其它組分 的量和濃度可經(jīng)調(diào)整以修飾組合物的物理及化學(xué)性質(zhì)，且可由本領(lǐng)域技術(shù)人員輕易測(cè)出。
21佐劑組合物的有利性質(zhì)為其可完全根據(jù)該組合物的所需特征來構(gòu)建。例如若需要較強(qiáng)的 Thl應(yīng)答，則可增加Thl刺激劑的量。同樣地，若需要較強(qiáng)的Th2應(yīng)答，則可增加Th2刺激劑 的量。亦可取得平衡的Thl/Th2應(yīng)答。免疫原性組合物和疫苗組合物亦可依上述方法勻化 或微射流勻化。組合物的施用和用途組合物的施用根據(jù)受試者及抗原，組合物的劑量大小典型地在約1毫升(含)至約5毫升(含) 的范圍內(nèi)。例如在犬或貓方面典型地使用約1毫升的劑量，而在牛方面典型地使用約2至 5毫升。然而，這些佐劑亦可配制成微小劑量，其中可使用約100微升的劑量。佐劑組合物的施用途徑包括腸胃道外、口、口鼻、鼻內(nèi)、氣管內(nèi)、局部及卵內(nèi)等途 徑。任何合適的裝置均可用來施用組合物，包括注射器、滴管、無針注射裝置、貼片等等。被 選用的途徑及裝置取決于佐劑組合物、抗原及受試者，這些是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。組合物的用途用于商業(yè)用途的任何疫苗佐劑制劑的要求之一是建立佐劑溶液的穩(wěn)定性以供長 期貯存。本文中提供了容易制造且可保持穩(wěn)定至少18個(gè)月的佐劑配制物。在一個(gè)實(shí)施方 案中，該配制物可保持穩(wěn)定約18個(gè)月。在另一個(gè)實(shí)施方案中，該配制物可保持穩(wěn)定約18至 約24個(gè)月。在另一個(gè)實(shí)施方案中，該配制物可保持穩(wěn)定約M個(gè)月。加速測(cè)試程序亦指出 本文所述的配制物是穩(wěn)定的。本發(fā)明的佐劑組合物的一個(gè)有利特性是，其可安全且有效地施用很多種受試者。 本領(lǐng)域中預(yù)期佐劑的組合將顯示出較個(gè)別組分更強(qiáng)的反應(yīng)原性。然而，當(dāng)與其中使用任何 一種或二種組分的組合物相比較時(shí)，本文所述的組合物顯示出降低的反應(yīng)原性，同時(shí)仍保 持佐劑的效果。還令人驚訝地發(fā)現(xiàn)，當(dāng)與其它佐劑組合物相比較時(shí)，本文所述的佐劑組合物 顯示出安全性改善。本文所述的佐劑組合物可用于在受試者內(nèi)產(chǎn)生所需的免疫應(yīng)答。其在多種物種中 均有效。任何需要施用佐劑組合物的動(dòng)物均為合適的受試者。其包括哺乳動(dòng)物及非哺乳動(dòng) 物，包括靈長類、家畜、伴侶動(dòng)物、實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)動(dòng)物、圈養(yǎng)野生動(dòng)物、鳥類(包括卵)、爬行動(dòng) 物及魚。因此，該術(shù)語包括，但不限于猴子、人、豬；牛、綿羊、山羊、馬、小鼠、大鼠、荷蘭豬、 倉鼠、兔子、貓、犬、雞、火雞、鴨、其它禽類、青蛙和蜥蜴。本文所述的佐劑可用于顯示受感染與已接種疫苗的動(dòng)物間的血清學(xué)差異。因此， 其可在標(biāo)記物疫苗中使用，其中所述疫苗中的抗原可在已接種經(jīng)疫苗的動(dòng)物中引發(fā)與野生 型病毒不同的抗體模式)。標(biāo)記物疫苗通常與伴隨診斷試驗(yàn)(其測(cè)量抗體模式中的差異并 證明何種動(dòng)物已接受疫苗接種，何種動(dòng)物被野生型病毒感染)一起使用。這類技術(shù)可用于 控制及消滅來自受試者種群的病毒。下列實(shí)施例作為闡述性實(shí)施方案展示，但不應(yīng)被用來限制本發(fā)明的范圍。本領(lǐng)域 技術(shù)人員可明白本發(fā)明的許多改變、變化、修飾及其它用途及應(yīng)用。
實(shí)施例實(shí)施例1. Quil A/膽固醇(QC)溶液將Quil A(Superfos)溶解在水中，制備50毫克/毫升的儲(chǔ)備溶液。將膽固醇(Fabri Chem he.)溶解在乙醇中，制備18毫克/毫升的儲(chǔ)備溶液。然后，利用0. 2微米濾 器過濾膽固醇儲(chǔ)備溶液。不同配制物中Quil A和膽固醇的濃度范圍可從Quil A對(duì)膽固醇低至1/1 (微克 /毫升)到高達(dá)1000/1000(微克/毫升)。為了制備50/50(微克/毫升)的Quil A/膽 固醇儲(chǔ)備溶液，用水將Quil A儲(chǔ)備溶液稀釋成50微克/毫升的濃度。一邊攪拌此溶液，一 邊慢慢加入膽固醇儲(chǔ)備溶液，使最終濃度為50微克/毫升。實(shí)施例2. DDA (D)溶液將二甲基雙十八烷基溴化銨(DDA ；Fluka Analytical)溶解在乙醇中，制備18毫 克/毫升的儲(chǔ)備溶液。利用0. 2微米濾器過濾DDA儲(chǔ)備溶液。實(shí)施例3. Quil A/膽固醇/DDA⑴⑶)溶液依實(shí)施例1制備具所需濃度的Quil A/膽固醇儲(chǔ)備溶液。依實(shí)施例2制備DDA儲(chǔ) 備溶液并將其慢慢加入Quil A/膽固醇儲(chǔ)備溶液中。將溶液混合以取得所需的最終濃度。 依需要以NaOH或HCl調(diào)整該溶液的pH值以取得所需的最終pH(通常在約6. 9至約7. 5的 范圍內(nèi))。實(shí)施例4. CARBOPOL (C)溶液將CARBOPOL (Noveon，墨西哥)溶解在去離子水中，制備1. 5%的儲(chǔ)備溶液。 在另一個(gè)實(shí)施方案中，將CARBOPOL 溶解在去離子水中，制備0. 75%的儲(chǔ)備溶液。實(shí)施例5. DDA/ CARBOPOL (DC)溶液依實(shí)施例2制備DDA儲(chǔ)備溶液。依實(shí)施例4制備0. 75 %的CARBOPOL 儲(chǔ)備 溶液。將溶液混合以取得所需的最終濃度。實(shí)施例6. Quil A/ 膽固醇 /DDA/ CARBOPOL ^CDC)溶液依實(shí)施例3制備Quil A/膽固醇/DDA儲(chǔ)備溶液。依實(shí)施例4制備0. 75 %的 CARBOPOL 儲(chǔ)備溶液。將CARBOPOL 儲(chǔ)備溶液慢慢加入QuilA/膽固醇/DDA儲(chǔ) 備溶液中，以取得所需的最終濃度。以NaOH或HCl調(diào)整該溶液的pH值以取得所需的最終 PH(通常在約6. 9至約7. 5的范圍內(nèi))。實(shí)施例7. Bay R1005 (R)溶液為了制備Bay R1005 儲(chǔ)備溶液，將糖脂N-Q-脫氧基-2-L-亮氨酰氨 基-β-D-吡喃葡糖基)-N-十八烷基十二烷酰胺溶解在乙醇(60%，v/v)中。然后，加入吐 溫20及冰醋酸。在一個(gè)實(shí)施例中，將3. 49gm的N- (2-脫氧基-2-L-亮氨酰氨基-β -D-吡 喃葡糖基)-N-十八烷基十二烷酰胺溶解在44. 64毫升的乙醇/水(60%，v/v)中。將此溶 液與1. 12毫升吐溫20及0. 68毫升冰醋酸合并。實(shí)施例8. Quil A/ 膽固醇 /DDA/ CARBOPOL /Bay Rl005 ^CDCR)溶液依實(shí)施例6制備Quil A/膽固醇/DDA/CARBOPOL 儲(chǔ)備溶液。依實(shí)施 例7制備Bay Rl005 儲(chǔ)備溶液。將Bay Rl005 溶液慢慢加入Quil A/膽固醇/ DDA/ CARBOPOL 溶液中，以取得所需的最終濃度。依需要，以NaOH或HCl調(diào)整該溶液 的PH值以取得所需的最終pH(通常在約6. 9至約7. 5的范圍內(nèi))。實(shí)施例9. DEAE葡聚糖溶液(X)將200毫克/毫升的DEAE葡聚糖溶解在水中以制備DEAE葡聚糖(X)儲(chǔ)備溶液。 可將此溶液在攝氏120度(C)高壓滅菌約20分鐘。
實(shí)施例10. Quil A/ 膽固醇 /DDA/DEAE 溶液 ^CDX)依實(shí)施例3制備Quil A/膽固醇/DDA儲(chǔ)備溶液。依實(shí)施例9制備DEAE儲(chǔ)備溶液。 將溶液直接加入勻化器中以將其合并?；旌蠒r(shí)使用大于1000秒-1的剪力，利用閃蒸混合 法(flash blending method)進(jìn)行?；旌先缦逻M(jìn)行將水性溶液直接送入含有非極性佐劑 和抗原組分的油相中并攪拌至取得均勻穩(wěn)定的混合物。典型地，根據(jù)所需的顆粒大小此步 驟可能為至少幾分鐘或更久。實(shí)施例11.油組合物(0)將Drakeol礦物油與吐溫85及司盤85 (Span85)合并，加熱至約55°C，冷卻后再進(jìn) 行無菌過濾，以制備油儲(chǔ)備溶液。因此，此混合物包含用于基于油的載體的油相基質(zhì)組分。 若選擇膽固醇和/或DDA作為這些組合物之一的協(xié)作免疫調(diào)節(jié)劑，則在過濾前亦將其加入 此混合物中，因其可溶于油相中。實(shí)施例12. Quil A/ 膽固醇 /DDA/DEAE 溶液 ^CK(O)依實(shí)施例10制備Quil A/膽固醇/DDA/DEAE儲(chǔ)備溶液。依實(shí)施例11制備油貯存 組合物。該溶液是Quil-A、DEAE葡聚糖和水的組合，以實(shí)現(xiàn)所述濃度下的量。將反應(yīng)物在 室溫或更高的溫度下持續(xù)攪拌數(shù)分鐘或更久以混合水相，然后進(jìn)行無菌過濾并貯存，以供 加入油相中。將水相慢慢加入持續(xù)混合的油相中。實(shí)施例13.免疫原性組合物或疫苗組合物的制備方法為了制備包含抗原及一種上述佐劑的免疫原性組合物或疫苗組合物，將所需抗原 加入合適的緩沖液中。然后，依上述加入所需佐劑的組分。用緩沖液使得到的溶液達(dá)到最 終體積。實(shí)施例13a.抗原、Quil A、膽固醇、DDA、CARBOPOL 為了制備包含抗原、Quil A、膽固醇、DDA及CARBOPOL 的免疫原性組合物或 疫苗組合物，將所需抗原加入合適的緩沖液中。依實(shí)施例1制備Quil A儲(chǔ)備溶液，將其慢慢 加入該抗原溶液中。依實(shí)施例1制備膽固醇儲(chǔ)備溶液并將其慢慢加入該抗原/Quil A溶液 中。依實(shí)施例2制備DDA儲(chǔ)備溶液并將其慢慢加入該抗原/Quil A/膽固醇溶液中。將抗原 /Quil A/膽固醇/DDA/溶液勻化及微射流勻化。依實(shí)施例4制備0.75%CARBOPOL 溶液。微射流勻化后，將CARBOPOL 溶液(0.05%，ν/ν)加入經(jīng)微射流勻化的組合物 中，以NaOH或HCl將ρΗ值調(diào)整為約6. 9至約7. 5。實(shí)施例13b.抗原、Quil A、膽固醇、DDA、CARBOPOL 、BayR1005 為了制備包含抗原、Quil A、膽固醇、DDA、CARBOPOL 及BayR1005 的免疫
原性組合物或疫苗組合物，將所需抗原加入合適的緩沖液中。依實(shí)施例1制備Quil A儲(chǔ)備 溶液并將其慢慢加入該抗原溶液中。依實(shí)施例1制備膽固醇儲(chǔ)備溶液并將其慢慢加入該抗 原/Quil A溶液中。依實(shí)施例2制備DDA儲(chǔ)備溶液并將其慢慢加入該抗原/Quil A/膽固醇 溶液中。將抗原/Quil A/膽固醇/DDA/溶液勻化及微射流勻化。依實(shí)施例4制備0.75% CARBOPOL 溶液。微射流勻化后，將CARBOPOL 溶液(0. 05% ν/ν)加入微射流勻 化組合物中，以NaOH或HCl將ρΗ值調(diào)整為約6. 9至約7. 5。依實(shí)施例7制備Bay Rl005 儲(chǔ)備溶液，在加入DDA后，將Bay Rl005 組分加入水相中。實(shí)施例13c.抗原、Quil A、膽固醇、DDA、DEAE葡聚糖
為了制備包含抗原、Quil A、膽固醇、DDA及DEAE葡聚糖的免疫原性組合物或疫苗 組合物，將所需抗原加入合適的緩沖液中。依實(shí)施例1制備Quil A儲(chǔ)備溶液并將其慢慢加 入該抗原溶液中。將組合物勻化。依實(shí)施例1制備膽固醇儲(chǔ)備溶液并在勻化期間將其慢慢 加入抗原/Quil A溶液中。依實(shí)施例2制備DDA儲(chǔ)備溶液并在勻化期間將其慢慢加入該抗 原/Quil A/膽固醇溶液中。依實(shí)施例9制備DEAE葡聚糖溶液。在勻化期間加入DEAE葡 聚糖溶液并使得到的組合物達(dá)到最終體積。實(shí)施例13d.抗原、Quil A、膽固醇、DDA、DEAE葡聚糖、油為了制備包含抗原、Quil A、膽固醇、DDA、DEAE葡聚糖及油的免疫原性組合物或疫 苗組合物，將所需抗原加入合適的緩沖液中。依實(shí)施例1制備Quil A儲(chǔ)備溶液并將其慢慢 加入該抗原溶液中。將組合物勻化。依實(shí)施例1制備膽固醇儲(chǔ)備溶液并在勻化期間將其慢 慢加入抗原/Quil A溶液中。依實(shí)施例2制備DDA儲(chǔ)備溶液并在勻化期間將其慢慢加入該 抗原/Quil A/膽固醇溶液中。依實(shí)施例9制備DEAE葡聚糖溶液。在勻化期間，加入DEAE 葡聚糖溶液。依實(shí)施例11制備油組合物。勻化期間，通過將水相加入油相中同時(shí)勻化來加 入油組合物，并使得到的組合物達(dá)到最終體積。實(shí)施例14.貓白血病病毒O^eLV)疫苗利用隨機(jī)化完全區(qū)組設(shè)計(jì)(Randomized complete block design)將動(dòng)物隨機(jī)分 配至處理組。表1顯示該研究設(shè)計(jì)。區(qū)組以生日及胎次為基礎(chǔ)。先根據(jù)生日，再根據(jù)胎次 將動(dòng)物分類。使用4個(gè)區(qū)組。同一區(qū)組內(nèi)隨機(jī)指定動(dòng)7物所接受的治療。在研究的疫苗接 種階段方面，將二個(gè)連續(xù)區(qū)組組合以形成含8只動(dòng)物的組別。將各動(dòng)物組隨機(jī)分配至二個(gè) 房間，使每個(gè)房間含有5組(10個(gè)區(qū)組)動(dòng)物。在一組動(dòng)物中，將動(dòng)物隨機(jī)分配至彼此靠近 的四個(gè)籠子內(nèi)，使每個(gè)籠子內(nèi)包含二只接受相同治療的動(dòng)物。在研究的攻擊階段方面，將來 自一個(gè)疫苗接種室的動(dòng)物隨機(jī)分配至一或二個(gè)攻擊室。被選擇為分成二個(gè)攻擊室的疫苗接 種室具有五個(gè)隨機(jī)分配至各個(gè)攻擊室的區(qū)組(2. 5組；20只動(dòng)物)。另一攻擊室包含十個(gè)區(qū) 組(5組；40只動(dòng)物)。在一個(gè)攻擊室內(nèi)將同一區(qū)組的動(dòng)物隨機(jī)分配至四個(gè)彼此靠近的籠子 內(nèi)。依實(shí)施例13制備用于此研究的疫苗，但使用1. 5%的CARBOPOL 儲(chǔ)備溶液。 特定地，在經(jīng)!^LV轉(zhuǎn)化的淋巴樣細(xì)胞中繁殖!^eLV次群體A、B及C以制備LEUKOCELL 2 (Pfizer, Inc.) 0將病毒抗原以化學(xué)方式滅活，與無菌佐劑組合以增強(qiáng)免疫應(yīng)答，并以 液體形式包裝。制備總量為100毫升，含有貓白血病病毒及25微克Quil A/氫氧化鋁 (ALHYDROGEL )的研究用獸醫(yī)制品 anvestigational Veterinary Product, I VP)。 將總計(jì)94. 5毫升的1. 106X IO5納克/毫升!^eLV儲(chǔ)備溶液慢慢混合15分鐘。若需要，以 4NHC1或18% NaOH將pH值調(diào)整為5. 9至6. 1。一邊攪拌，一邊將0. 5毫升的5. 0毫克/毫升 Quil A溶液加入抗原溶液中。然后慢慢加入5. 0毫升的100% (v/v) ALHYDROGEL 。 將組合物在4°C下攪拌至少2小時(shí)。依需要，以18% NaOH或IN HCl將pH值調(diào)整為7. 0至 7. 3。依用于25微克Quil A IVP的相同方式制備包含貓白血病病毒及37. 5微克Quil A/氫氧化鋁(ALHYDROGEL )的IVP，但向該抗原溶液中加入7. 5毫升的Quil A儲(chǔ)備 溶液。制備總量為350毫升，含有貓白血病病毒、Quil A、膽固醇、DDA及CARBOPOL
25的研究用獸醫(yī)制品(IVP)。一邊攪拌349. 3毫升的1.106 X IO5納克/毫升!^eLV儲(chǔ)備溶液， 一邊將0. 14毫升的50.0毫克/毫升Quil A溶液慢慢加入該抗原溶液中。然后，慢慢加入 0. 39毫升的18毫克/毫升膽固醇/乙醇溶液。將組合物在10，OOOrpm勻化3分鐘。一邊 攪拌，一邊將總量為0. 19毫升的18. 0毫克/毫升DDA/乙醇溶液加入該組合物中。將總量 為5. 0毫升的1. 5%CARBOPOL 溶液慢慢加入145. 0毫升的貓白血病病毒、QuilAJi 固醇及DDA組合物中。依需要，以18% NaOH或IN HCl將pH值調(diào)整為7. 0至7. 3。表1:實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
權(quán)利要求
1.免疫原性組合物，其包含佐劑配制物及免疫有效量的抗原成分，其中所述佐劑配制 物包含皂苷、固醇、季銨化合物及聚合物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫原性組合物，其中所述皂苷的存在量為每劑量約1微克 至約5，000微克，所述固醇的存在量為每劑量約1微克至約5，000微克，所述季銨化合物的 存在量為每劑量約1微克至約5，000微克且所述聚合物的存在量為約0. 0001%體積比體積 (ν/ν)至約 75% ν/ν。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫原性組合物，其中所述皂苷為QuilA或其經(jīng)純化的餾 分，所述固醇為膽固醇，所述季銨化合物為二甲基雙十八烷基溴化銨(DDA)且所述聚合物 為聚丙烯酸。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫原性組合物，其還包含Th2刺激劑。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的免疫原性組合物，其中所述Th2刺激劑為糖脂。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的免疫原性組合物，其中所述Th2刺激劑為N-(2-脫氧 基-2-L-亮氨酰氨基-β -D-吡喃葡糖基)-N-十八烷基十二烷酰胺乙酸酯。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的免疫原性組合物，其中所述糖脂的存在量為每劑量約0.01毫 克至約10毫克。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫原性組合物，其中所述抗原成分包含滅活的病毒。
9.制備根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫原性組合物的方法，所述方法包括a)在緩沖液中制備所述抗原成分的組合物；b)將所述皂苷加入步驟a的組合物中；c)將所述固醇加入步驟b的組合物中；d)將所述季銨化合物加入步驟c的組合物中；e)將所述聚合物加入步驟d的組合物中。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中所述皂苷為QuilA或其經(jīng)純化的餾分，所述固醇 為膽固醇，所述季銨化合物為DDA且所述聚合物為聚丙烯酸。
11.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其還包括下述步驟將步驟a的組合物勻化，并在步 驟a至d的每個(gè)步驟期間持續(xù)勻化。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其還包括下述步驟，所述步驟包括將步驟d的組合物 微射流勻化。
13.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其還包括步驟f)將Th2刺激劑加入步驟e的組合物中。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，其中所述Th2刺激劑為糖脂。
15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中所述Th2刺激劑為N-(2-脫氧基-2-L-亮氨酰 氨基- β -D-吡喃葡糖基)-N-十八烷基十二烷酰胺乙酸酯。
16.疫苗組合物，其包含佐劑配制物及治療有效量的抗原成分，其中所述佐劑配制物包 含皂苷、固醇、季銨化合物及聚合物。
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的疫苗組合物，其中所述皂苷的存在量為每劑量約1微克至 約5，000微克，所述固醇的存在量為每劑量約1微克至約5，000微克，所述季銨化合物的存 在量為每劑量約1微克至約5，000微克且所述聚合物的存在量為約0. 0001% ν/ν至約75%
18.根據(jù)權(quán)利要求16所述的疫苗組合物，其中所述皂苷為QuilA或其經(jīng)純化的餾分， 所述固醇為膽固醇，所述季銨化合物為DDA且所述聚合物為聚丙烯酸。
19.根據(jù)權(quán)利要求16所述的疫苗組合物，其還包含Th2刺激劑。
20.根據(jù)權(quán)利要求19所述的疫苗組合物，其中所述Th2刺激劑為糖脂。
21.根據(jù)權(quán)利要求20所述的疫苗組合物，其中所述Th2刺激劑為N-(2-脫氧基-2-L-亮 氨酰氨基- β -D-吡喃葡糖基)-N-十八烷基十二烷酰胺乙酸酯。
22.根據(jù)權(quán)利要求20所述的疫苗組合物，其中所述糖脂的存在量為每劑量約0.01毫克 至約10毫克。
23.根據(jù)權(quán)利要求16所述的疫苗組合物，其中所述抗原成分包含滅活的病毒。
24.制備根據(jù)權(quán)利要求16所述的疫苗組合物的方法，所述方法包括a)在緩沖液中制備所述抗原成分的組合物；b)將所述皂苷加入步驟a的組合物中；c)將所述固醇加入步驟b的組合物中；d)將所述季銨化合物加入步驟c的組合物中；e)將所述聚合物加入步驟d的組合物中。
25.根據(jù)權(quán)利要求M所述的方法，其中所述皂苷為QuilA或其經(jīng)純化的級(jí)分，所述固 醇為膽固醇，所述季銨化合物為DDA且所述聚合物為聚丙烯酸。
26.根據(jù)權(quán)利要求M所述的方法，其還包括下述步驟將步驟a的組合物勻化，并在步 驟a至d的每個(gè)步驟期間持續(xù)勻化。
27.根據(jù)權(quán)利要求沈所述的方法，其還包括下述步驟，所述步驟包括將步驟d的組合物 微射流勻化。
28.根據(jù)權(quán)利要求M所述的方法，其還包括將Th2刺激劑加入步驟e的組合物中的步 驟f)。
29.根據(jù)權(quán)利要求28所述的方法，其中所述Th2刺激劑為糖脂。
30.根據(jù)權(quán)利要求觀所述的方法，其中所述Th2刺激劑為N-(2-脫氧基-2-L-亮氨酰 氨基- β -D-吡喃葡糖基)-N-十八烷基十二烷酰胺乙酸酯。
31.根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫原性組合物，其還包含油。
32.根據(jù)權(quán)利要求16所述的疫苗組合物，其還包含油。
33.根據(jù)權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)所述的免疫原性組合物，其中所述抗原成分包含貓白血病病毒。
34.根據(jù)權(quán)利要求9至15中任一項(xiàng)及權(quán)利要求M至30中任一項(xiàng)所述的方法，其中所 述抗原成分包含貓白血病病毒。
35.根據(jù)權(quán)利要求16至23中任一項(xiàng)所述的疫苗組合物，其中所述抗原成分包含貓白血病病毒。
36.根據(jù)權(quán)利要求35所述的疫苗組合物，其中所述貓白血病病毒的存在量為約100納 克/毫升(含)至約350，000納克/毫升(含)。
37.根據(jù)權(quán)利要求1所述的疫苗組合物，其中所述抗原成分包含由持續(xù)受 KT-FeLV-UCD-I貓白血病病毒株感染的FL-74細(xì)胞系所制造的gp70。
38.針對(duì)由貓白血病病毒引起的感染來治療貓的方法，所述方法包括對(duì)所述貓施用根據(jù)權(quán)利要求35所述的疫苗組合物。
39.如權(quán)利要求35所述的疫苗組合物在制備下述藥物中的用途，所述藥物用于針對(duì)由 貓白血病病毒引起的感染來治療貓。
40.用于卵內(nèi)施用的禽球蟲病疫苗，其包含(a)佐劑，所述佐劑包含QuilA或其包括QS21在內(nèi)的經(jīng)純化的餾分、膽固醇、 CARB0P0L、DDA 及 R1005 ；及(b)選自下列的原生動(dòng)物抗原(1)一或多種經(jīng)重組表達(dá)的蛋白質(zhì)，( 一或多種通過 常規(guī)手段從所述原生動(dòng)物分離的蛋白質(zhì)或其它大分子，及(3)來自所述原生動(dòng)物的全細(xì)胞 提取物或制劑。
41.根據(jù)權(quán)利要求1至7及31中任一項(xiàng)所述的免疫原性組合物，其中所述抗原成分包 含大腸桿菌J-5株菌苗。
42.根據(jù)權(quán)利要求9至15中任一項(xiàng)及權(quán)利要求M至30中任一項(xiàng)所述的方法，其中所 述抗原成分包含大腸桿菌J-5株菌苗。
43.根據(jù)權(quán)利要求16至22及32中任一項(xiàng)所述的疫苗組合物，其中所述抗原成分包含 大腸桿菌J-5株菌苗。
44.針對(duì)由大腸桿菌引起的感染來治療牛的方法，所述方法包括對(duì)所述牛施用根據(jù)權(quán) 利要求43所述的疫苗組合物。
45.根據(jù)權(quán)利要求43所述的疫苗組合物在制備下述藥物中的用途，所述藥物用于針對(duì) 由大腸桿菌引起的感染來治療牛。
46.根據(jù)權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)所述的免疫原性組合物，其中所述抗原成分包含牛病 毒性腹瀉病毒(BVDV)。
47.根據(jù)權(quán)利要求46所述的免疫原性組合物，其中所述抗原成分包含1型 BVDV (BVDV-I)及 2 型 BVDV(BVDV_2)。
48.根據(jù)權(quán)利要求9至15中任一項(xiàng)及權(quán)利要求M至30中任一項(xiàng)所述的方法，其中所 述抗原成分包含BVDV。
49.根據(jù)權(quán)利要求48所述的方法，其中所述抗原成分包含BVDV-I及BVDV-2。
50.根據(jù)權(quán)利要求16至23中任一項(xiàng)所述的疫苗組合物，其中所述抗原成分包含BVDV。
51.根據(jù)權(quán)利要求50所述的疫苗組合物，其中所述抗原成分包含BVDV-I及BVDV-2。
52.針對(duì)由BVDV引起的感染來治療牛的方法，所述方法包括對(duì)所述牛施用根據(jù)權(quán)利要 求50或51所述的疫苗組合物。
53.根據(jù)權(quán)利要求50或51所述的疫苗組合物于制備下述藥物的用途，所述藥物用于針 對(duì)由BVDV引起的感染來治療牛。
54.根據(jù)權(quán)利要求1至7中任一項(xiàng)所述的免疫原性組合物，其中所述抗原成分包含豬肺 炎支原體(M. hyopneumonia)。
55.根據(jù)權(quán)利要求9至15中任一項(xiàng)及權(quán)利要求M至30中任一項(xiàng)所述的方法，其中所 述抗原成分包含豬肺炎支原體。
56.根據(jù)權(quán)利要求16至22中任一項(xiàng)所述的疫苗組合物，其中所述抗原成分包含豬肺炎 支原體。
57.針對(duì)由豬肺炎支原體引起的感染來治療豬的方法，所述方法包括對(duì)所述豬施用根據(jù)權(quán)利要求56所述的疫苗組合物。
58.根據(jù)權(quán)利要求56所述的疫苗組合物于制備下述藥物的用途，所述藥物用于針對(duì)由 豬肺炎支原體引起的感染來治療豬。
59.根據(jù)權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)所述的免疫原性組合物，其中所述抗原成分包含貓流 感病毒(FIV)。
60.根據(jù)權(quán)利要求9至15中任一項(xiàng)及權(quán)利要求M至30中任一項(xiàng)所述的方法，其中所 述抗原成分包含F(xiàn)IV。
61.根據(jù)權(quán)利要求16至23中任一項(xiàng)所述的疫苗組合物，其中所述抗原成分包含F(xiàn)IV。
62.針對(duì)由FIV引起的感染來治療貓的方法，所述方法包括對(duì)所述貓施用根據(jù)權(quán)利要 求61所述的疫苗組合物。
63.根據(jù)權(quán)利要求61所述的疫苗組合物于制備下述藥物的用途，所述藥物用于針對(duì)由 FIV引起的感染來治療貓。
64.根據(jù)權(quán)利要求1至7中任一項(xiàng)所述的免疫原性組合物，其中所述抗原成分包含癌癥 抗原。
65.根據(jù)權(quán)利要求9至15中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述抗原成分包含癌癥抗原。
66.根據(jù)權(quán)利要求16至22中任一項(xiàng)的疫苗組合物，其中所述抗原成分癌癥抗原。
67.針對(duì)癌癥來治療受試者的方法，所述方法包含對(duì)所述受試者施用根據(jù)權(quán)利66所述的疫苗組合物。
68.根據(jù)權(quán)利要求66的疫苗組合物在制造用于針對(duì)癌癥來治療受試者的藥物的用途。
69.根據(jù)權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)所述的免疫原性組合物，其還包含ORN/ODN。
70.根據(jù)權(quán)利要求63所述的免疫原性組合物，其中所述ORN/ODN為CpG。
71.根據(jù)權(quán)利要求9至15中任一項(xiàng)及權(quán)利要求M至30中任一項(xiàng)所述的方法，其還包含將ORN/ODN加入步驟a的組合物中的步驟。
72.根據(jù)權(quán)利要求71所述的方法，其中所述ORN/ODN為CpG。
73.根據(jù)權(quán)利要求16至23中任一項(xiàng)所述的疫苗組合物，其還包含ORN/ODN。
74.根據(jù)權(quán)利要求73所述的疫苗組合物，其中所述ORN/ODN為CpG。
75.根據(jù)權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)所述的疫苗組合物，其中所述抗原成分包含大冠狀病毒(CCV)。
76.根據(jù)權(quán)利要求9至15中任一項(xiàng)及權(quán)利要求M至30中任一項(xiàng)所述的方法 ，其中所述抗原成分 CCV。
77.根據(jù)權(quán)利要求16至23中任一項(xiàng)所述的疫苗組合物，其中所述抗原成分包含CCN。
78. 針對(duì)由CCV引起的感染來治療犬的方法，所述方法包括對(duì)所述犬施用根據(jù)權(quán)利要求77所述的疫苗組合物。
79.根據(jù)權(quán)利要求77所述的疫苗組合物在制備下述藥物中用途，所述藥物用于針對(duì)由CCV引起的感染來治療犬。
80.根據(jù)權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)所述的疫苗組合物，其中所述抗原成分包含牛輪狀病。
81.根據(jù)權(quán)利要求9至15中任一項(xiàng)及權(quán)利要求M至30中任一項(xiàng)所述的方法，其中所 述抗原成分包含牛輪狀病毒。
82.根據(jù)權(quán)利要求16至23中任一項(xiàng)所述的疫苗組合物，其中所述抗原成分包含牛輪狀病毒。
83.針對(duì)由牛輪狀病毒引起的感染來治療牛的方法，所述方法包括對(duì)所述牛施用根據(jù) 權(quán)利要求82所述的疫苗組合物。
84.根據(jù)權(quán)利要求82所述的疫苗組合物于制備下述藥物的用途，所述藥物用于針對(duì)由 牛輪狀病毒引起的感染來治療牛。
85.根據(jù)權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)所述的免疫原性組合物，其中所述抗原成分包含犬流 感病毒(CIV)。
86.根據(jù)權(quán)利要求9至15中任一項(xiàng)及權(quán)利要求M至30中任一項(xiàng)所述的方法，其中所 述抗原成分包含CIV。
87.根據(jù)權(quán)利要求16至23中任一項(xiàng)所述的疫苗組合物，其中所述抗原成分包含CIV。
88.針對(duì)由CIV引起的感染來治療犬的方法，所述方法包括對(duì)所述犬施用根據(jù)權(quán)利要 求87所述的疫苗組合物。
89.根據(jù)權(quán)利要求97所述的疫苗組合物在制備下述藥物中的用途，所述藥物用于針對(duì) 由CIV引起的感染來治療犬。
90.區(qū)分被BVDV自然感染的動(dòng)物與接種了根據(jù)權(quán)利要求50或51所述的疫苗組合物的 動(dòng)物的方法，所述方法包括從測(cè)試動(dòng)物取得樣品，并測(cè)量所述樣品中E2蛋白質(zhì)及NS2/3蛋 白質(zhì)的含量，其中所述NS2/3蛋白質(zhì)的不存在表示所述動(dòng)物接種了所述疫苗組合物。
全文摘要
本發(fā)明涉及包含三萜、固醇、免疫調(diào)節(jié)劑、聚合物及Th2刺激劑的多種組合的佐劑配制物；用于制備該佐劑組合物的方法；及該佐劑配制物在含有不同抗原的免疫原性組合物和疫苗組合物中的用途。本發(fā)明還涉及該配制物在動(dòng)物治療中的用途。
文檔編號(hào)A61K39/00GK102076358SQ200980124560
公開日2011年5月25日 申請(qǐng)日期2009年6月24日 優(yōu)先權(quán)日2008年6月27日
發(fā)明者保羅·約瑟夫·多米諾斯基, 克多·馬丁·巴吉, 張樹成, 拉瑪薩米·曼娜·曼南, 泰德·艾倫·奇爾德斯, 瑪麗·凱瑟琳·奧爾森, 理查德·李·克萊博斯, 羅伯特·約翰·小燕西, 詹姆斯·理查德·湯普森, 里斯尼·達(dá)米卡·維拉特納 申請(qǐng)人:輝瑞有限公司