專利名稱：新穎的脂質(zhì)體組合物的制作方法
相關(guān)申請(qǐng)的交叉參考本申請(qǐng)要求2005年3月10日提交的日本專利申請(qǐng)2005-67469號(hào)的權(quán)益，其公開內(nèi)容以整體并入本文作為參考。
背景技術(shù)：

在過去數(shù)十年中，對(duì)包括癌癥的許多疾病的治療有效性已得到顯著改進(jìn)，但是，許多治療方案需要應(yīng)用具有有害副作用的藥物，所述副作用包括，例如，脫發(fā)、惡心、嘔吐、疲倦等。一些治療方案也可能需要應(yīng)用在生理?xiàng)l件下不穩(wěn)定的藥物，例如，在給藥時(shí)容易降解或改變并且從而在實(shí)現(xiàn)所需治療結(jié)果之前降低其效率的生物治療劑(例如，基因或基因產(chǎn)物)和/或其它藥物。這種不穩(wěn)定性也使得藥物貯存和制備進(jìn)行施用更加困難和花費(fèi)大。

存在許多類型的抗癌劑，包括接近100種藥物，以及許多藥物聯(lián)合治療、輸送方法和治療方案?？梢愿鶕?jù)幾種標(biāo)準(zhǔn)對(duì)抗癌劑進(jìn)行分類，如化合物種類和被治療的疾病狀態(tài)。已經(jīng)開發(fā)了利用癌細(xì)胞快速分裂和靶向于細(xì)胞周期中的特定時(shí)期的一些藥劑，這提供了另一分類方法。也可以根據(jù)其副作用的類型和嚴(yán)重程度或輸送方法對(duì)藥劑進(jìn)行分組。然而，基于非生物治療的抗癌劑的最普通的分類是通過化學(xué)化合物分類，這廣義地包括這些化合物的作用機(jī)制。

根據(jù)所參考的參照來源，在抗癌劑的分類方面具有微小的差異?；衔锏姆N類描述于Physician′s Desk Reference，如下生物堿類、烷化劑、抗腫瘤抗生素、代謝拮抗劑、激素和激素類似物、免疫調(diào)節(jié)劑、光敏劑、和各種其它藥劑。

生物堿類化合物也稱為有絲分裂抑制劑，因?yàn)樗鼈兪羌?xì)胞周期特異性的，并且其作用是抑制有絲分裂或抑制有絲分裂所需的酶類。它們一般來自植物生物堿和其它天然產(chǎn)物并且在細(xì)胞周期的M期起作用。此類化合物通常用于治療腫瘤如急性成淋巴細(xì)胞性白血病、何杰金淋巴瘤和非何杰金淋巴瘤；成神經(jīng)細(xì)胞瘤和肺癌、乳腺癌和睪丸癌。

烷化劑構(gòu)成了化療劑的一個(gè)大的種類，包括下列亞類，其各自表示許多單獨(dú)的藥物烷基磺酸鹽；氮丙啶；氮雜環(huán)丙烷和甲基蜜胺(methylmelamines)；氮芥；亞硝基脲；和其它，包括鉑化合物。烷化劑通過直接烷基化細(xì)胞DNA并且從而引起DNA復(fù)制無能而攻擊贅生性細(xì)胞。這類化合物通常用于治療多種疾病，包括慢性白血病、非何杰金淋巴瘤、何杰金淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤和一些肺癌、乳腺癌和卵巢癌。

亞硝基脲通常被歸類為烷化劑，并且具有類似的作用機(jī)制，但是它們不是直接烷化DNA，而是抑制DNA修復(fù)酶，使得修復(fù)失敗。這些化合物具有能夠穿過血腦屏障的優(yōu)勢(shì)，從而可以用于治療腦腫瘤。

抗腫瘤抗生素具有抗微生物活性和細(xì)胞毒性活性，并且也通過化學(xué)抑制酶和有絲分裂或者通過改變細(xì)胞膜而干擾DNA。它們不是細(xì)胞周期特異性的，并且廣泛用于治療多種癌癥。

代謝拮抗劑類型的抗癌劑的干擾DNA和RNA的生長(zhǎng)，并且特異于細(xì)胞周期的S期。通過下述類型的化合物，它們可以被進(jìn)一步破壞，包括葉酸類似物、嘌呤類似物和嘧啶類似物。它們通常在慢性白血病、乳腺癌、卵巢癌和胃腸道腫瘤治療中被應(yīng)用。

存在用作抗癌劑的兩類激素或激素類似物，皮質(zhì)類固醇激素和性激素。雖然一些皮質(zhì)類固醇激素能夠殺死癌細(xì)胞并且減慢腫瘤的生長(zhǎng)，用于淋巴瘤、白血病等的治療中，但性激素的主要作用是減慢乳腺癌、前列腺癌和子宮內(nèi)膜癌的生長(zhǎng)。存在許多激素和激素類似物的亞類，包括雄激素、抗腎上腺素物質(zhì)(antiadrenals)、抗雄激素物質(zhì)、抗雌激素物質(zhì)、芳香酶抑制劑、雌激素、促黃體激素釋放激素(LHRH)類似物和孕酮。

其它更小類的抗癌劑被分類為免疫治療。這些是意圖于刺激免疫系統(tǒng)以便更有效地攻擊贅生性(癌)細(xì)胞的藥劑。此治療通常與其它治療聯(lián)合應(yīng)用。

也有許多化合物，如喜樹堿，其通常被列舉為“其它”抗癌劑并且可以用于治療多種腫瘤。

在治療許多癌癥中也應(yīng)用抗癌劑的聯(lián)合。例如，SanofiSyntholabo出售ELOXATINTM(注射用奧沙利鉑(oxaliplatin))-其用于治療結(jié)腸直腸癌，與5-氟尿嘧啶和leuvocorin聯(lián)合應(yīng)用。此藥物聯(lián)合通常與手術(shù)輔助性應(yīng)用，用于治療結(jié)腸直腸癌。奧沙利鉑是烷化劑，據(jù)認(rèn)為它通過抑制DNA復(fù)制和轉(zhuǎn)錄起作用。與其它鉑制劑不同，奧沙利鉑已經(jīng)證實(shí)了，耐受發(fā)生的可能性降低。奧沙利鉑進(jìn)一步描述于美國(guó)專利4,169,846；5,338,874；5,298,642；5,959,133；5,420,319；5,716,988；5,290,961和Wilkes GM.″New therapeutic options in colon cancerfocuson oxaliplatin″Clin J Oncol Nurs.(2002)6131-137中。

雖然存在過多的抗癌劑，但藥劑產(chǎn)生的副作用的嚴(yán)重程度通常超過這些化合物的益處。這一比較通常稱為治療指數(shù)，其描述了實(shí)現(xiàn)癌細(xì)胞破壞所需的劑量與所述物質(zhì)對(duì)于個(gè)體而言具有不可接受的毒性時(shí)的劑量之間的平衡。大多數(shù)抗癌劑的缺陷是相對(duì)小的治療指數(shù)范圍(即，癌細(xì)胞被破壞而對(duì)個(gè)體沒有不可接受的毒性的劑量的范圍窄)。這一特征限制了藥劑有用時(shí)的頻率和劑量，并且通常地，在癌癥被完全根除之前，副作用變得不可耐受。

大多數(shù)癌癥化療所經(jīng)歷的嚴(yán)重副作用是這些藥物的非特異性性質(zhì)的結(jié)果，其沒有將健康細(xì)胞和癌細(xì)胞區(qū)分開來，而是對(duì)兩種細(xì)胞都進(jìn)行破壞。一些細(xì)胞周期特異性藥物試圖減少這些作用，靶向于包含在細(xì)胞復(fù)制和分裂中的細(xì)胞周期的各個(gè)時(shí)期。然而，這些藥物不區(qū)分癌細(xì)胞和進(jìn)行正常細(xì)胞分裂的健康細(xì)胞。在這些類型的化療中風(fēng)險(xiǎn)最高的細(xì)胞是常常進(jìn)行細(xì)胞分裂的那些細(xì)胞，包括血細(xì)胞、毛囊細(xì)胞和生殖道及消化道的細(xì)胞。

抗癌劑的最普通副作用是惡心和嘔吐。大比例的個(gè)體也患有骨髓抑制(myelosuppression)或骨髓的抑制(suppression of the bonemarrow)，骨髓產(chǎn)生紅細(xì)胞、白血病和血小板。這些副作用和其它副作用也由于對(duì)免疫系統(tǒng)的抑制而被加重，所述對(duì)免疫系統(tǒng)的抑制伴有白細(xì)胞破壞和產(chǎn)生缺乏，和相關(guān)的機(jī)會(huì)性感染的風(fēng)險(xiǎn)。

寬范圍抗癌劑的普遍的其它副作用包括毛發(fā)丟失(脫發(fā))、食欲下降、體重減輕、味覺改變、口腔炎和食道炎(炎癥和疼痛)、便秘、腹瀉、疲勞、心臟損傷、神經(jīng)系統(tǒng)變化、肺臟損傷、生殖組織損傷、肝損傷、腎臟和泌尿系統(tǒng)損傷。

在已經(jīng)由于疾病和可能的免疫受損而疲勞過度的個(gè)體中與大多數(shù)抗癌劑有關(guān)的的寬范圍的副作用和它們的嚴(yán)重程度，使得研究者研究它們能夠緩解一些副作用同時(shí)保持治療效應(yīng)的機(jī)制。針對(duì)這一問題采取了幾種方法。它們包括聯(lián)合化療，其中多種抗癌藥同時(shí)給予；輔助療法，其中其它藥劑連同抗癌藥共同開處方，以便對(duì)抗抗癌劑的副作用；聯(lián)合形式的治療，其中化療與放射和/或手術(shù)聯(lián)合；以及用于施用抗癌劑的可選的輸送載體，如將抗癌劑包封在脂質(zhì)體中。

當(dāng)磷脂及其衍生物分散在水中時(shí)，形成脂質(zhì)體。當(dāng)分散在水中后，磷脂形成閉合的囊泡稱為″脂質(zhì)體″，其特征是包封含水核心的脂雙層。多種脂質(zhì)體已經(jīng)用于包封治療劑的載體，所述治療劑如醫(yī)學(xué)科學(xué)、藥物科學(xué)和生物化學(xué)中應(yīng)用的藥物、酶和遺傳序列。

脂質(zhì)體組合物的例子包括美國(guó)專利4,983,397；6,476,068；5,834,012；5,756,069；6,387,397；5,534,241；4,789,633；4,925,661；6,153,596；6,057,299；5,648,478；6,723,338；6,627218；美國(guó)專利申請(qǐng)公布2003/0224037；2004/0022842；2001/0033860；2003/0072794；2003/0082228；2003/0212031；2003/0203865；2004/0142025；2004/0071768；國(guó)際專利申請(qǐng)WO 00/74646；WO 96/13250；WO98/33481；Papahadjopolulos D，Allen TM，Gbizon A，et al.″Stericallystabilized liposomesImprovements in pharmacokinetics and antitumortherapeutic efficacy″Proc Natl Acad Sci U.S.A.(1991)8811460-11464；Allen TM，Martin FJ.″Advantages of liposomal delivery systems foranthracyclines″Semin Oncol(2004)315-15(suppl 13).Weissig et al.Pharm.Res.(1998)151552-1556。

在開發(fā)脂質(zhì)體的早期，應(yīng)用細(xì)胞膜中的天然發(fā)生的磷脂，如卵黃磷脂和大豆磷脂。然而，在靜脈給藥的情況下，應(yīng)用這些磷脂的脂質(zhì)體可能并入肝臟或脾臟的網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)中，引起血流停留時(shí)間短的問題，從而降低藥物效率。此后，作為解決此問題的手段，其脂類部分僅含有飽和鍵的合成磷脂被用作脂質(zhì)體膜的組分，目的是硬化脂質(zhì)體膜。

在延長(zhǎng)脂質(zhì)體的循環(huán)半衰期和避免被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)攝取的努力中，研究者開發(fā)了通過加入聚乙二醇或其它親水聚合物而被修飾的脂質(zhì)體(例如，PEG脂質(zhì)體，其中組分脂類中的一個(gè)或多個(gè)通過附著PEG而被修飾)。PEG-修飾脂質(zhì)體也常常被稱為“屏蔽了的”脂質(zhì)體(″shielded″liposomes)。DoxilTM(阿霉素HCl脂質(zhì)體注射劑)是脂質(zhì)體密閉的阿霉素，具有輔助聚乙二醇(PEG)，其用于避免網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)(reticuloendothelial system，RES)和延長(zhǎng)藥物循環(huán)時(shí)間。參見，Vail DM，Amantea MA，Colbern GT，et al，″Pegylated Liposomal DoxorubicinProof of Principle Using Preclinical Animal Models and PharmacokineticStudies.″Semin Oncol.(2004)31(Suppl 13)16-35。然而，副作用也由血液滯留延長(zhǎng)引起(例如，手足綜合癥，它是Doxil對(duì)外周系統(tǒng)的一個(gè)副作用，等)，這被認(rèn)為是一個(gè)問題。

脂質(zhì)體的例子包括美國(guó)專利4,983,397；5,013,556；6,316,024；6,056,973；5,945,122；5,891,468；6,126,966；5,593,622；5,676,971；6,586,559；和5,846,458；美國(guó)專利申請(qǐng)公布2003/0224037；2004/0022842；2003/0113262；2002/0136707；國(guó)際專利申請(qǐng)WO99/30686；WO 02/41870；Aliminana et al，Prep.Biochem.Biotech.(2004)34(1)77-96。脂質(zhì)體也描述于美國(guó)專利6,228,391；6,197,333；6,046,225；5,292,524；和美國(guó)專利申請(qǐng)公布20050271588；20040213833；20040029210；20030175205；20030162748；20030130190；20030059461；和20020034537。

除了PEG-修飾的脂質(zhì)體，研究者開發(fā)了多種其它衍生的脂類。這些衍生脂類也可以被并入脂質(zhì)體中。參見，例如，國(guó)際專利申請(qǐng)WO 93/01828；Park YS，Maruyama K，Huang L.″Some negativelycharged phospholipids derivatives prolong the liposome circulation in vivo.″Biochimica et Biophysica Acta(1992)1108257-260；Ahl et al，Biochirnica Biophys.Acta(1997)1329370-382。

其它脂類組合物描述于美國(guó)專利6,936,272；6,897,196；6,077,834；和美國(guó)專利申請(qǐng)公布20050136064；20040234588；20030215490；20030166601；和20010038851。

除了用PEG和其它親水聚合物修飾脂質(zhì)體之外，研究者也開發(fā)出目標(biāo)是特異靶向于特定細(xì)胞類型的脂質(zhì)體，通過摻入針對(duì)特定細(xì)胞類型的靶向因子(也稱為靶向配體)實(shí)施。靶向因子/配體的例子包括脫唾液酸糖蛋白、葉酸鹽、轉(zhuǎn)鐵蛋白、抗體等。在一些情況下，組成脂類中的一種或多種能夠通過附著靶向因子而被修飾。

包含靶向因子的脂類組合物的例子包括美國(guó)專利5,049,390；5,780,052；5,786,214；6,316,024；6,056,973；6,245,427；6,524,613；6,749,863；6,177,059；6,530,944；美國(guó)專利申請(qǐng)公開2004/0022842；2003/0224037；2003/143742；2003/0228285；2002/0198164；2003/0220284；2003/0165934；2003/0027779；國(guó)際專利申請(qǐng)WO95/33841；WO 95/19434；WO 2001037807；WO 96/33698；WO2001/49266；WO 9940789；WO 9925320；WO 9104014；WO 92/07959；EP 1369132；JP 2001002592；Iinuma H，Maruyama K，et al，″Intracellulartargeting therapy of cisplatin-encapsulated transferrin-polyethylene glycolliposome on peritoneal dissemination of gastric cancer″Int J Cancer(2002)99 130-137；Ishida O，Maruyama K，Tanahashi H，Iwatsuru M，Sasaki K，etal，″Liposomes bearing polyethylene glycol-coupled transferrin withintracellular targeting property to the solid tumors in vivo.″Pharmaceutical Research(2001)181042-1048；Holmberg et al，Biochem.Biophys.Res.Comm.(1989)165(3)1272-1278；Nam et al，J.Biochem.MoI Biol(1998)31(1)95-100；Nag et al，J.Drug Target.(1999)6(6)427-438。

特別地，Iinuma et al.開發(fā)了Tf-PEG-脂質(zhì)體，轉(zhuǎn)鐵蛋白(Tf)連接于所述脂質(zhì)體表面。Iinuma et al示出，Tf-PEG-脂質(zhì)體與PEG-脂質(zhì)體相比，更多數(shù)的脂質(zhì)體結(jié)合在腫瘤細(xì)胞的表面，腫瘤細(xì)胞對(duì)脂質(zhì)體的攝取更多。(Inuma et al，如上；Ishida et al，如上)。

然而，雖然近來在藥物和標(biāo)記化合物輸送領(lǐng)域中取得了進(jìn)展，包括應(yīng)用脂質(zhì)體組合物，但仍然存在著對(duì)將藥物和標(biāo)記化合物輸送到獲得治療或診斷效應(yīng)的特定細(xì)胞和/或組織的改進(jìn)的脂質(zhì)體組合物的需求。特別地，在癌癥領(lǐng)域，對(duì)于被治療的個(gè)體而言，需要具有改進(jìn)的特異性和降低的毒性的藥物制劑以確保治療益處而不負(fù)面影響健康細(xì)胞并且也不引起有害副作用。類似地，可以用于檢測(cè)疾病，特別是早期的威脅生命的疾病(例如，具有高特異性和/或高敏感性)并且也精確監(jiān)測(cè)疾病的嚴(yán)重程度/范圍(例如，治療或未治療時(shí)的進(jìn)展和/或消退)的標(biāo)記化合物，也會(huì)顯著改進(jìn)治療的質(zhì)量和成功率。
發(fā)明簡(jiǎn)述
本發(fā)明涉及新的含脂質(zhì)體組合物(包括脂質(zhì)體(例如，靶向脂質(zhì)體、空白脂質(zhì)體)，脂類混合物和含脂質(zhì)體組合物)，它們可以任選地?fù)饺胨幬锘驑?biāo)記化合物，或者可以被用在摻入藥物或標(biāo)記化合物的制劑的制備中，其中所述含脂類組合物提供降低藥物或標(biāo)記化合物的副作用的益處和/或也防止藥物或標(biāo)記化合物的降解和/或效應(yīng)喪失。本發(fā)明也包括制備和應(yīng)用本文所述的含脂類組合物的方法。在本發(fā)明的一些方面，含脂質(zhì)體組合物可以用于治療或診斷癌癥(例如，乳腺癌、胃癌、結(jié)腸直腸癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、非小細(xì)胞性肺癌、小細(xì)胞肺癌、腦癌、肝癌、腎癌、前列腺癌、膀胱癌、卵巢癌或血液惡性病(例如，白血病、淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤等)。

在一些實(shí)施方式中，提供了靶向脂質(zhì)體，其包括一種或多種磷脂、N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺、靶向因子-修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺、包封藥物或標(biāo)記化合物和任選地至少一種其它脂類，其中所述靶向因子-修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺包括靶向配體，其與第二N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺連接，并且其中所述N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺由式1表示，
式1 以及所述第二N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺由式3表示，
式3 其中R1，R2，R5和R6各自獨(dú)立為酰基，m和p獨(dú)立為1至10的整數(shù)，并且其中所述脂質(zhì)體不包括非衍生化磷脂酰乙醇胺或聚乙二醇，并且其中所述靶向配體不是完整抗體。

在其它實(shí)施方式中，提供了空白脂質(zhì)體，其包括一種或多種磷脂、N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺、靶向因子-修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺、和任選地至少一種其它脂類，其中所述靶向因子-修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺包括靶向配體，其與第二N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺連接，并且其中所述N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺由式1表示，
式1 以及如果存在第二N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺，則其由式3表示，
式3 其中R1，R2，R5和R6各自獨(dú)立為?；?，m和p獨(dú)立為1至10的整數(shù)，并且其中所述脂質(zhì)體不包括非衍生化磷脂酰乙醇胺、聚乙二醇、藥物或標(biāo)記化合物，并且其中所述靶向配體不是完整抗體。

在靶向脂質(zhì)體和空白脂質(zhì)體的一些實(shí)施方式中，R1、R2、R5和R6是油酰和硬脂酰，m和p是3。在一些實(shí)施方式中，靶向配體是轉(zhuǎn)鐵蛋白。在特定實(shí)施方式中，一種或多種磷脂是DMPC或DSPC，并且存在至少一種其它脂類，其為膽固醇。在靶向脂質(zhì)體和空白脂質(zhì)體的一些實(shí)施方式中，R1、R2、R5和R6是油酰，m和p是3，一種或多種磷脂是DMPC，并且其它脂類是膽固醇。

在靶向脂質(zhì)體和空白脂質(zhì)體的一些實(shí)施方式中，m和p各自獨(dú)立為2至4的整數(shù)。在一些實(shí)施方式中，m和p相等并且為2至4的整數(shù)。在特定實(shí)施方式中，m和p相等并且為3。在一些實(shí)施方式中，R1、R2、R5和R6各自獨(dú)立為油酰、硬脂酰、棕櫚?；蛉舛罐Ⅴ?。在一些實(shí)施方式中，R1和R2相同，并且R5和R6相同。在其它實(shí)施方式中，R1、R2、R5和R6相同。在特定實(shí)施方式中，R1、R2、R5和R6是油?；蛴仓?。在一些實(shí)施方式中，R1、R2、R5和R6是油酰。

在進(jìn)步的實(shí)施方式中，提供了脂類混合物，其包括一種或多種磷脂、N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺、N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯、和任選地至少一種其它脂類的混合物，其中所述N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺由式1表示，
式1 并且所述N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯由式2表示，
式2 其中，R1、R2、R3和R4各自獨(dú)立為酰基，m和n獨(dú)立為1至10的整數(shù)，并且其中所述混合物不包括非衍生化磷脂酰乙醇胺或聚乙二醇。

在脂類混合物的一些實(shí)施方式中，m和n各自獨(dú)立為2至4的整數(shù)。在一些實(shí)施方式中，m和n相等并且為2至4的整數(shù)。在特定實(shí)施方式中，m和n相等并且為3。

在脂類混合物的一些實(shí)施方式中，R1、R2、R3和R4各自獨(dú)立為油酰、硬脂酰、棕櫚?；蛉舛罐Ⅴ?。在一些實(shí)施方式中，R1和R2相同，并且R3和R4相同。在特定實(shí)施方式中，R1、R2、R3和R4相同。在一些實(shí)施方式中，R1、R2、R3和R4是油?；蛴仓?。在一些實(shí)施方式中，m和n是3，其中一種或多種磷脂是DMPC或DSPC，并且存在至少一種其它脂類，為膽固醇。在脂類混合物的一些實(shí)施方式中，R1、R2、R3和R4是油酰，m和n是3，一種或多種磷脂是DMPC并且至少一種其它脂類是膽固醇。

在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，提供了脂類混合物，其包括一種或多種磷脂、N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺、靶向因子-修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺、和任選地至少一種其它脂類的混合物，其中所述N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺由式1表示
式1 并且所述靶向因子-修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺包括與第二N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺連接的靶向配體；并且其中所述第二N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺由式3表示，
式3 其中R1、R2、R5和R6各自獨(dú)立為?；?，m和p獨(dú)立為1至10的整數(shù)；并且，其中所述混合物不包括非衍生化磷脂酰乙醇胺或聚乙二醇，并且其中所述靶向配體不是完整抗體。

在脂類混合物的特定實(shí)施方式中——其中存在靶向因子-修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺，m和p各自獨(dú)立為2至4的整數(shù)。在一些實(shí)施方式中，m和p相等并且為2至4的整數(shù)。在一些實(shí)施方式中，m和p相等并且是3。

在脂類混合物的特定實(shí)施方式中——其中存在靶向因子-修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺，R1、R2、R5和R6各自獨(dú)立為油酰、硬脂酰、棕櫚?；蛉舛罐Ⅴ?。在一些實(shí)施方式中，其中R1和R2相同，并且R5和R6相同。在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，R1、R2、R5和R6相同。在一些實(shí)施方式中，R1、R2、R5和R6是油酰或硬脂酰。在一些實(shí)施方式中，R1、R2、R5和R6是油?；蛴仓＃琺和p是3，一種或多種磷脂是DMPC或DSPC，至少一種其它脂類是膽固醇，靶向配體是轉(zhuǎn)鐵蛋白。在脂類混合物的一些實(shí)施方式中，R1、R2、R5和R6是油酰，m和p是3，一種或多種磷脂是DMPC，其它脂類是膽固醇，靶向配體是轉(zhuǎn)鐵蛋白。

在一些實(shí)施方式中，提供了包含脂質(zhì)體的含脂質(zhì)體的組合物，所述脂質(zhì)體包括一種或多種磷脂、N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺、N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯、和任選地至少一種其它脂類，其中所述N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺由式1表示，
式1 以及所述N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯由式2表示，
式2 其中，R1、R2、R3和R4各自獨(dú)立為?；琺和n獨(dú)立為1至10的整數(shù)；并且其中所述組合物不包括非衍生化磷脂酰乙醇胺或聚乙二醇。

在含脂質(zhì)體組合物的一些實(shí)施方式中，m和n各自獨(dú)立為2至4的整數(shù)。在一些實(shí)施方式中，m和n相等并且為2至4的整數(shù)。在特定實(shí)施方式中，m和n相等并且為3。

在含脂質(zhì)體組合物的一些實(shí)施方式中，R1、R2、R3和R4各自獨(dú)立為油酰、硬脂酰、棕櫚?；蛉舛罐Ⅴ！Ｔ谔囟▽?shí)施方式中，R1和R2相同，并且R3和R4相同。在一些實(shí)施方式中，R1、R2、R3和R4相同。在一些實(shí)施方式中，R1、R2、R3和R4是油酰或硬脂酰。在一些實(shí)施方式中，R1、R2、R3和R4是油酰或硬脂酰，m和n是3，一種或多種磷脂是DMPC、DSPC、POPC或DPPC。在一些實(shí)施方式中，R1、R2、R3和R4是油酰，m和n是3，一種或多種磷脂是DMPC并且其它脂類是膽固醇。

在含脂質(zhì)體組合物的進(jìn)一步實(shí)施方式中，提供了包含脂質(zhì)體的含脂質(zhì)體組合物，所述脂質(zhì)體包括一種或多種磷脂、N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺、靶向因子-修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺、和任選地至少一種其它脂類，其中所述N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺由式1表示
式1 以及所述靶向因子-修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺包括與第二N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺連接的靶向配體；并且其中所述第二N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺由式3表示，
式3 其中R1、R2、R5和R6各自獨(dú)立為?；琺和p獨(dú)立為1至10的整數(shù)；并且，其中所述組合物不包括非衍生化磷脂酰乙醇胺或聚乙二醇，并且其中所述靶向配體不是完整抗體。

在一些含脂質(zhì)體組合物中——其中靶向因子-修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺存在，m和p各自獨(dú)立為2至4的整數(shù)。在特定實(shí)施方式中，m和p相等并且為2至4的整數(shù)。在一些實(shí)施方式中，m和p相等并且是3。

在一些含脂質(zhì)體組合物中——其中靶向因子-修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺存在，R1、R2、R5和R6各自獨(dú)立為油酰、硬脂酰、棕櫚?；蛉舛罐Ⅴ?。在特定實(shí)施方式中，其中R1和R2相同，并且R5和R6相同。在一些實(shí)施方式中，其中R1、R2、R5和R6相同。
在一些實(shí)施方式中，R1、R2、R5和R6是油?；蛴仓?。在特定實(shí)施方式中，R1、R2、R5和R6是油?；蛴仓?，一種或多種磷脂是DMPC或DSPC，至少一種其它脂類是膽固醇，靶向配體是轉(zhuǎn)鐵蛋白。在一些實(shí)施方式中，R1、R2、R5和R6是油酰，m和p是3，一種或多種磷脂是DMPC，其它脂類是膽固醇，靶向配體是轉(zhuǎn)鐵蛋白。

在含脂質(zhì)體組合物的進(jìn)一步實(shí)施方式中，藥物被包含在內(nèi)。在一些實(shí)施方式中，一種或多種磷脂是DMPC或DSPC，R1和R2以及R5和R6——如果R5和R6存在——是油?；蛴仓?，m和p——如果p存在——是3，如果存在至少一種其它脂類，其為膽固醇，藥物是奧沙利鉑，如果存在靶向配體，其為轉(zhuǎn)鐵蛋白。在一些實(shí)施方式中，組合物還包括濃度約1％至約20％的糖百分含量(v/v)的糖。在一些實(shí)施方式中，一種或多種磷脂是DMPC或DSPC，R1、R2以及R5和R6——如果R5和R6存在——是油酰，m和p——如果p存在——是3，如果存在至少一種其它脂類，其為膽固醇，藥物是奧沙利鉑，如果存在靶向配體，其為轉(zhuǎn)鐵蛋白。

在含脂質(zhì)體組合物的進(jìn)一步實(shí)施方式中，標(biāo)記化合物被包含在內(nèi)。在一些實(shí)施方式中，標(biāo)記化合物包括放射性同位素部分。

在靶向脂質(zhì)體、空白脂質(zhì)體、脂類混合物和含脂質(zhì)體組合物的一些實(shí)施方式中，存在至少一種其它脂類。在特定實(shí)施方式中，至少一種其它脂類是膽固醇或膽固醇衍生物。

在靶向脂質(zhì)體、空白脂質(zhì)體、脂類混合物和含脂質(zhì)體組合物的特定實(shí)施方式中，一種或多種磷脂是磷脂酰膽堿、磷脂酸、磷脂酰絲氨酸或磷脂酰甘油。在特定實(shí)施方式中，一種或多種磷脂是中性磷脂。在一些實(shí)施方式中，一種或多種磷脂是磷脂酰膽堿。在特定實(shí)施方式中，磷脂酰膽堿包括飽和脂肪酸部分。在一些實(shí)施方式中，一種或多種磷脂是DMPC、DSPC、POPC或DPPC。在這些實(shí)施方式中，特別的是，存在至少一種其它脂類。在這些實(shí)施方式中的一些中，至少一種其它脂類是膽固醇或膽固醇衍生物。在特定實(shí)施方式中，DMPC和膽固醇，DSPC和膽固醇，POPC和膽固醇，或DPPC和膽固醇被并入。在一些實(shí)施方式中，DMPC和膽固醇。

在靶向脂質(zhì)體、空白脂質(zhì)體、脂類混合物和含脂質(zhì)體組合物的特定實(shí)施方式中，如果存在靶向配體，其指向靶細(xì)胞。在一些實(shí)施方式中，靶向配體指向靶細(xì)胞的細(xì)胞表面受體。在特定實(shí)施方式中，靶向配體是轉(zhuǎn)鐵蛋白、葉酸、透明質(zhì)酸、糖鏈或單克隆抗體的片段。在一些實(shí)施方式中，靶向配體是轉(zhuǎn)鐵蛋白、葉酸、透明質(zhì)酸或糖鏈。在其它實(shí)施方式中，靶向配體是轉(zhuǎn)鐵蛋白、葉酸、透明質(zhì)酸或糖鏈。在一些實(shí)施方式中，靶向配體是轉(zhuǎn)鐵蛋白。在特定實(shí)施方式中，轉(zhuǎn)鐵蛋白是全蛋白形式(holo-form)而不是脫鐵形式(apo-form)。在一些實(shí)施方式中，轉(zhuǎn)鐵蛋白是全轉(zhuǎn)鐵蛋白形式。

在靶向脂質(zhì)體和空白脂質(zhì)體的一些實(shí)施方式中，脂質(zhì)體的平均直徑是約50nm至約250nm。在其它實(shí)施方式中，脂質(zhì)體的平均直徑是約90nm至約200nm。

在靶向脂質(zhì)體和空白脂質(zhì)體的特定實(shí)施方式中，脂質(zhì)體的ζ(zeta)電位是負(fù)的。在一些實(shí)施方式中，ζ電位是約-75mV至約-90mV。在其它實(shí)施方式中，ζ電位是約-80mV至約-85mV。

在含脂質(zhì)體組合物、靶向脂質(zhì)體和空白脂質(zhì)體的一些實(shí)施方式中，制劑還包括溶液。

在靶向脂質(zhì)體和含脂質(zhì)體組合物的特定實(shí)施方式中，存在藥物。

在靶向脂質(zhì)體和含脂質(zhì)體組合物的特定實(shí)施方式中，藥物是奧沙利鉑。在藥物是奧沙利鉑的一些實(shí)施方式中，靶向配體是轉(zhuǎn)鐵蛋白。在一些實(shí)施方式中，存在至少一種其它脂類，為膽固醇。

在一些實(shí)施方式中，藥物是抗癌劑。在特定實(shí)施方式中，藥物是細(xì)胞毒性藥物。在一些實(shí)施方式中，藥物是拓?fù)洚悩?gòu)酶I抑制劑。在特定實(shí)施方式中，拓?fù)洚悩?gòu)酶I抑制劑是拓?fù)涮婵祷蛞懒⑻婵怠Ｔ谄渌鼘?shí)施方式中，藥物是長(zhǎng)春花生物堿。在特定實(shí)施方式中，長(zhǎng)春花生物堿是長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春花堿、長(zhǎng)春羅新(vinleurosine)、vinrodisine、脫水長(zhǎng)春花堿(vinorelbine)或脫乙酰長(zhǎng)春花堿(vindesine)。在一些實(shí)施方式中，其中藥物是核酸。在一些實(shí)施方式中，核酸是反義寡核苷酸或核酶。在一些實(shí)施方式中，藥物是烷化劑。在特定實(shí)施方式中，藥物是紫杉烷。在其它實(shí)施方式中，藥物是代謝拮抗劑。在一些實(shí)施方式中，藥物是抗腫瘤抗生素。在一些實(shí)施方式中，藥物是激素治療藥。在一些實(shí)施方式中，藥物是分子靶標(biāo)藥。

在靶向脂質(zhì)體和含脂質(zhì)體組合物的一些實(shí)施方式中，藥物是鉑化合物。在特定實(shí)施方式中，鉑化合物是biplatin、順鉑、卡鉑、奧馬鉑(ormaplatin)、奧沙利鉑(oxaliplatin)、折尼鉑(zeniplatin)、恩洛鉑(enloplatin)、洛鉑(lobaplatin)或螺鉑(spiroplatin)。在一些實(shí)施方式中，鉑化合物是奧沙利鉑。

在藥物是奧沙利鉑的一些實(shí)施方式中，R1、R2、R5和R6是油?；蛴仓?，m和p是3，靶向配體是轉(zhuǎn)鐵蛋白，一種或多種磷脂是DMPC或DSPC，至少一種其它脂類存在并且是膽固醇。在藥物是奧沙利鉑的一些實(shí)施方式中，R1、R2、R5和R6是油酰，m和p是3，靶向配體是轉(zhuǎn)鐵蛋白，一種或多種磷脂是DMPC，至少一種其它脂類存在并且是膽固醇。在特定實(shí)施方式中，靶向脂質(zhì)體和含脂質(zhì)體組合物不含其它脂類成分。

在藥物是奧沙利鉑的一些實(shí)施方式中，奧沙利鉑溶解于糖的水溶液中，所述糖選自海藻糖、麥芽糖、蔗糖、甘露糖、乳糖、甘露醇、甘油和葡萄糖。在一些實(shí)施方式中，糖的濃度是約1％至約20％的糖百分?jǐn)?shù)(v/v)。在特定實(shí)施方式中，奧沙利鉑的濃度是在脂質(zhì)體中約0.1mg/ml至約25mg/ml。在其它實(shí)施方式中，奧沙利鉑的濃度是在脂質(zhì)體中約0.5mg/ml至約10mg/ml。在其它實(shí)施方式中，奧沙利鉑的濃度是約0.5mg/ml至約3mg/ml。

在靶向脂質(zhì)體和含脂質(zhì)體組合物的特定實(shí)施方式中，存在標(biāo)記化合物。在一些實(shí)施方式中，標(biāo)記化合物是放射性同位素部分。在特定實(shí)施方式中，放射性同位素部分包含125I。

在靶向脂質(zhì)體和含脂質(zhì)體組合物的特定實(shí)施方式中，并入脂質(zhì)體中的靶向配體的濃度是約1.0mg/ml至約3.0mg/ml。在其它實(shí)施方式中，并入脂質(zhì)體中的靶向配體的濃度是約1.0mg/ml至約2.5mg/ml。

在靶向脂質(zhì)體和含脂質(zhì)體組合物的特定實(shí)施方式中——其中存在藥物并且是奧沙利鉑，靶向配體是轉(zhuǎn)鐵蛋白。在特定實(shí)施方式中，轉(zhuǎn)鐵蛋白是全轉(zhuǎn)鐵蛋白形式。在一些實(shí)施方式中，鐵(ferric iron)處于約0.4至約3.0μg/ml的濃度下。在其它實(shí)施方式中，鐵處于約0.4至約1.5μg/ml的濃度下。

在靶向脂質(zhì)體、空白脂質(zhì)體、脂類混合物和含脂質(zhì)體組合物的特定實(shí)施方式中，脂質(zhì)體、脂類混合物或含脂質(zhì)體組合物不包括陽離子脂類。在特定實(shí)施方式中，脂質(zhì)體、脂類混合物或含脂質(zhì)體組合物不包括陰離子脂類。在一些實(shí)施方式中，脂質(zhì)體、脂類混合物或含脂質(zhì)體組合物不包括陰離子脂類或陽離子脂類。

在靶向脂質(zhì)體、空白脂質(zhì)體、脂類混合物和含脂質(zhì)體組合物的特定實(shí)施方式中，制劑還包括溶液。在一些實(shí)施方式中，脂類混合物不含溶液。在特定實(shí)施方式中，溶液是水溶液或水溶液和易混合水的溶劑的混合物。

在靶向脂質(zhì)體、空白脂質(zhì)體、脂類混合物和含脂質(zhì)體組合物的特定實(shí)施方式中，制劑還包括蔗糖。

在本發(fā)明的又一方面，提供了上述含脂類組合物的藥物制劑。含脂質(zhì)體組合物、靶向脂質(zhì)體和空白脂質(zhì)體的特定實(shí)施方式包括本文所述的含脂質(zhì)體組合物、靶向脂質(zhì)體和空白脂質(zhì)體和一種或多種藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑、稀釋劑、穩(wěn)定劑或防腐劑。

在本發(fā)明的又一方面，提供了包含本文所述含脂類組合物的試劑盒。含脂質(zhì)體組合物、靶向脂質(zhì)體和空白脂質(zhì)體一些實(shí)施方式包括本文所述的含脂質(zhì)體組合物、靶向脂質(zhì)體和空白脂質(zhì)體，包裝和使用說明書。

在試劑盒的一些實(shí)施方式中，本文所述的含脂質(zhì)體組合物、靶向脂質(zhì)體或空白脂質(zhì)體包含在第一容器中，并且一種或多種藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑、稀釋劑、穩(wěn)定劑或防腐劑包含在第二容器中。

在特定實(shí)施方式中，提供了并入本文所述藥物制劑、包裝和使用說明書的試劑盒。

在本發(fā)明的另一方面，提供了制備本文所述含脂類組合物的方法。

在特定實(shí)施方式中，提供了制備本文所述靶向脂質(zhì)體的方法，包括步驟 a)混合一種或多種磷脂、N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺、靶向因子修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺，和任選地，至少一種其它脂類，形成脂類混合物； b)將藥物或標(biāo)記化合物加入步驟a)中形成的脂類混合物中； c)形成脂質(zhì)體。

在本方法的進(jìn)一步實(shí)施方式中，提供了步驟(d)，純化步驟(c)的脂質(zhì)體。在特定實(shí)施方式中，步驟(b)中的藥物在混合前在水溶液中。在一些實(shí)施方式中，步驟(c)包括超聲波處理或攪拌。在一些實(shí)施方式中，步驟(c)包括擠出。

在其它實(shí)施方式中，提供了制備本文所述的靶向脂質(zhì)體的方法，包括步驟 a)混合一種或多種磷脂、N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺、N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯，和任選地，至少一種其它脂類，形成脂類混合物， 其中N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯由式2表示，
式2 其中R3和R4各自獨(dú)立為?；?，n獨(dú)立為1至10的整數(shù)； b)將藥物或標(biāo)記化合物加入步驟a)中形成的脂類混合物中； c)形成脂質(zhì)體；和 d)將靶向配體連接于N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯。

在上述方法的一些實(shí)施方式中，方法也包括步驟e)，純化步驟(d)的脂質(zhì)體。

在特定實(shí)施方式中，步驟(b)中的藥物在混合前處于水溶液中。在一些實(shí)施方式中，步驟c)包括超聲波處理或攪拌。在一些實(shí)施方式中，步驟(c)包括擠出。在特定實(shí)施方式中，步驟(c)包括攪拌。

在特定實(shí)施方式中，提供了制備本文所述空白脂質(zhì)體的方法，包括步驟 a)混合一種或多種磷脂、N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺、靶向因子修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺，和任選地，至少一種其它脂類，形成脂類混合物，和 b)形成脂質(zhì)體。

在制備空白脂質(zhì)體的方法的一些實(shí)施方式中，方法還包括步驟(c)，純化步驟(b)的脂質(zhì)體。

在特定實(shí)施方式中，步驟(b)包括超聲波處理或攪拌。在一些實(shí)施方式中，步驟(b)包括擠出。

在其它實(shí)施方式中，提供了制備本文所述的空白脂質(zhì)體的方法，包括步驟 a)混合一種或多種磷脂、N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺、N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯，和任選地，至少一種其它脂類，形成脂類混合物， 其中N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯由式2表示，
式2 其中R3和R4各自獨(dú)立為?；?，n獨(dú)立為1至10的整數(shù)； b)形成脂質(zhì)體；和 c)將靶向配體連接于N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯，形成靶向因子修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺。

在制備空白脂質(zhì)體的一些方法中，方法還包括步驟(d)，純化步驟(c)的脂質(zhì)體。

在特定實(shí)施方式中，步驟(b)包括超聲波處理或攪拌。在一些實(shí)施方式中，步驟(b)包括擠出。

在其它實(shí)施方式中，提供了制備本文所述的含脂類組合物的方法，包括混合一種或多種磷脂、N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺和N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯的步驟。

在進(jìn)一步實(shí)施方式中，提供了制備含脂類組合物的方法，其中存在至少一種其它脂類，如本文所述，包括步驟混合一種或多種磷脂、至少一種其它脂類、N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺和N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯。

在另一實(shí)施方式中，提供了制備本文所述的含脂類組合物的方法，包括步驟混合一種或多種磷脂、N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺和靶向因子修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺。

在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，提供了制備含脂類組合物的方法，其中存在至少一種其它脂類，如本文所述，包括步驟混合一種或多種磷脂、至少一種其它脂類、N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺和靶向因子修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺。

也提供了制備本文所述的含脂質(zhì)體組合物的方法，包括步驟 a)混合一種或多種磷脂、N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺，以及，N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯或靶向因子修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺——如果它們存在，和任選地，至少一種其它脂類——如果其存在，以形成脂類混合物；和 b)將藥物加入步驟(a)中形成的脂類混合物；和 c)形成脂質(zhì)體。

在制備各種含脂類組合物(靶向脂質(zhì)體、空白脂質(zhì)體、含脂質(zhì)體組合物)的方法的一些實(shí)施方式中，其中存在藥物，藥物處于水溶液中。在一些實(shí)施方式中，步驟a)在有機(jī)溶劑存在的情況下進(jìn)行。在一些實(shí)施方式中，水溶液還包括糖。在一些實(shí)施方式中，水溶液也可以包括易混合水的有機(jī)溶劑。

在其它實(shí)施方式中，提供了制備含脂質(zhì)體組合物的方法，包括步驟 a)混合一種或多種磷脂和N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺和，N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯或靶向因子修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺——如果它們存在，和任選地，至少一種其它脂類——如果其存在，形成脂類混合物；和 b)將標(biāo)記化合物加入步驟(a)中形成的脂類混合物； c)形成脂質(zhì)體。

在制備各種含脂類組合物(靶向脂質(zhì)體、空白脂質(zhì)體、含脂質(zhì)體組合物)的方法的一些實(shí)施方式中，其中存在標(biāo)記化合物，標(biāo)記化合物處于水溶液中。在一些實(shí)施方式中，步驟a)在有機(jī)溶劑存在的情況下進(jìn)行。在一些實(shí)施方式中，水溶液也可以包括易混合水的有機(jī)溶劑。

在一些實(shí)施方式中，也提供了制備本文所述的含脂質(zhì)體組合物的方法，其中所述含脂質(zhì)體組合物包括靶向因子修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺，包括步驟 a)混合一種或多種磷脂、N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺和靶向因子修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺，和任選地，至少一種其它脂類，形成脂類混合物；和 b)將溶劑加入步驟(a)中形成的混合物中，形成含脂質(zhì)體組合物。

在特定實(shí)施方式中，混合步驟a)在有機(jī)溶劑存在的情況下進(jìn)行。在特定實(shí)施方式中，步驟(b)中的溶劑是水溶液或水溶液和易混合水的溶劑的混合物。

在一些實(shí)施方式中，步驟(b)包括超聲處理或攪拌。在一些實(shí)施方式中，步驟(b)包括擠出。

在制備含脂類組合物的方法的特定實(shí)施方式中，步驟(a)中存在至少一種其它脂類。

在制備含脂類組合物的方法的一些實(shí)施方式中，步驟(a)中存在N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯。

在制備含脂類組合物的方法的一些實(shí)施方式中，步驟(a)中存在靶向因子修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺。

在本發(fā)明的其它方面，提供了應(yīng)用本文所述含脂類組合物的治療或診斷方法。

在特定實(shí)施方式中，提供了治療癌癥的方法，包括a)將本文所述的靶向脂質(zhì)體以有效治療癌癥的量施用于需要的個(gè)體，其中所述靶向脂質(zhì)體包括藥物，并且所述藥物是抗癌劑。

在治療或診斷方法的一些實(shí)施方式中，個(gè)體是哺乳動(dòng)物。在特定實(shí)施方式中，個(gè)體是人。

在治療方法的一些實(shí)施方式中，癌癥是乳腺癌、胃癌、結(jié)腸癌、結(jié)腸直腸癌、胰腺癌、非小細(xì)胞性肺癌、小細(xì)胞肺癌、腦癌、肝癌、腎癌、前列腺癌、膀胱癌、卵巢癌或血液惡性病。

在治療方法的一些實(shí)施方式中，步驟(a)在聯(lián)合形式的癌癥治療之前、同時(shí)或之后實(shí)施。在特定實(shí)施方式中，聯(lián)合形式的癌癥治療包括化療、放療或手術(shù)。

在治療方法的特定實(shí)施方式中，步驟(a)在輔助癌癥治療之前、同時(shí)或之后實(shí)施。在特定實(shí)施方式中，輔助癌癥治療包括給予一種或多種藥劑以便減輕毛發(fā)丟失、嘔吐、免疫抑制、惡心、腹瀉、皮疹、感覺障礙、貧血、疲勞、口腔炎、或手足綜合癥。在一些實(shí)施方式中，步驟(a)在給予一種或多種其它抗癌劑之前、同時(shí)或之后實(shí)施。在一些實(shí)施方式中，一種或多種其它抗癌劑包括5-氟尿嘧啶、亞葉酸、卡培他濱(capecitabine)、UFT/LV(替加氟-尿嘧啶和亞葉酸)、依立替康、抗EGFR抗體、抗VEGF抗體、酪氨酸激酶抑制劑、或它們的聯(lián)合。

在治療方法的一些實(shí)施方式中，靶向脂質(zhì)體通過腸胃外投藥施用。在特定實(shí)施方式中，腸胃外投藥是通過注射或靜脈輸注。

也提供了診斷方法，包括步驟 a)將本文所述的靶向脂質(zhì)體以檢測(cè)有效量給予需要的個(gè)體，其中所述靶向脂質(zhì)體包括標(biāo)記化合物；和 b)檢測(cè)標(biāo)記化合物。

在診斷方法的其它實(shí)施方式中，方法還包括步驟(c)，比較檢測(cè)到的標(biāo)記化合物的水平和在前一時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)到的標(biāo)記化合物的量。

在診斷方法的進(jìn)一步實(shí)施方式中，步驟(b)包括通過γ計(jì)數(shù)器檢測(cè)。

在本發(fā)明的又一方面，提供了轉(zhuǎn)鐵蛋白修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺，其中所述N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺由式3表示，
式3 其中R5和R6各自獨(dú)立為?；?，并且p是1至10的整數(shù)，并且轉(zhuǎn)鐵蛋白連接于N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺。

在轉(zhuǎn)鐵蛋白修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的一些實(shí)施方式中，p是2至4的整數(shù)。在特定實(shí)施方式中，p是3。

在轉(zhuǎn)鐵蛋白修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的一些實(shí)施方式中，R5和R6各自獨(dú)立為油酰、硬脂酰、棕櫚?；蛉舛罐Ⅴ?。在特定實(shí)施方式中，R5和R6相同。在一些實(shí)施方式中，R5和R6是油?；蛴仓！Ｔ谝恍?shí)施方式中，R5和R6是油酰并且p是3。

在其它方面，也提供了包括本文所述的轉(zhuǎn)鐵蛋白修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺和一種或多種藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑、稀釋劑、穩(wěn)定劑或防腐劑的藥物制劑。

在一些實(shí)施方式中，提供了脂類混合物，包括至少兩種不同的中性脂類、N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺和N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯的混合物，其中N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺由式1表示，
式1 以及所述N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯由式2表示，
式2 其中R1、R2、R3和R4各自獨(dú)立為?；?，m和n獨(dú)立為1至10的整數(shù)；并且其中所述混合物不包括非衍生化磷脂酰乙醇胺或聚乙二醇。

在一些實(shí)施方式中，提供了含脂質(zhì)體組合物，包括至少兩種不同的中性脂類、N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺、N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯和包封的藥物或標(biāo)記化合物，其中所述N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺由式1表示，
式1 以及所述N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺琥珀酰亞胺酯由式2表示，
式2 其中R1、R2、R3和R4各自獨(dú)立為?；?，m和n獨(dú)立為1至10的整數(shù)；并且其中所述混合物不包括非衍生化磷脂酰乙醇胺或聚乙二醇。

在含脂質(zhì)體組合物和脂類混合物的特定實(shí)施方式中，m和n各自獨(dú)立為2至4的整數(shù)。在一些實(shí)施方式中，m和n相等并且是2至4的整數(shù)。在其它實(shí)施方式中，m和n相等并且是3。

在含脂質(zhì)體組合物和脂類混合物的一些實(shí)施方式中，R1、R2、R3和R4各自獨(dú)立為油酰、硬脂酰、棕櫚?；蛉舛罐Ⅴ！Ｔ谝恍?shí)施方式中，R1和R2相同，并且R3和R4相同。在特定實(shí)施方式中，R1、R2、R3和R4相同。在一些實(shí)施方式中，R1、R2、R3和R4是油酰。

在含脂質(zhì)體組合物和脂類混合物的特定實(shí)施方式中，中性脂類∶N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺∶N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯的摩爾比是約95∶4∶1。

在含脂質(zhì)體組合物和脂類混合物的一些實(shí)施方式中，其中中性脂類是DMPC和膽固醇，DMPC∶膽固醇∶(N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺+N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯)的摩爾比是50∶45∶5。在這些實(shí)施方式的一些中，N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺是NG-DOPE，而N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯是NHS-NG-DOPE。

在一些實(shí)施方式中，提供了靶向脂質(zhì)體，包括至少兩種不同的中性脂類、N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺、靶向因子修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺和包封的藥物或標(biāo)記化合物，其中靶向因子修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺包括與第二N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺連接的靶向配體，并且其中N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺由式1表示，
式1 并且第二N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺由式3表示，
式3 其中R1、R2、R5和R6各自獨(dú)立為?；?，m和p獨(dú)立為1至10的整數(shù)；并且其中所述脂質(zhì)體不包括非衍生化磷脂酰乙醇胺或聚乙二醇，并且其中所述靶向配體不是完整抗體。

在特定實(shí)施方式中，提供了靶向脂質(zhì)體，包括中性磷脂酰膽堿、膽固醇或膽固醇衍生物、N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺、轉(zhuǎn)鐵蛋白修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺和包封的奧沙利鉑，其中所述轉(zhuǎn)鐵蛋白修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺包括通過羧酸酰胺鍵與第二N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺連接的轉(zhuǎn)鐵蛋白；并且其中N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺由式1表示，
式1 以及N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯由式2表示，其中第二N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺由式3表示，
式3 其中R1、R2、R5和R6各自獨(dú)立為?；琺和p獨(dú)立為1至10的整數(shù)；并且其中所述脂質(zhì)體不包括非衍生化磷脂酰乙醇胺或聚乙二醇。在一些實(shí)施方式中，靶向脂質(zhì)體基本上不含EDC和/或DCC。

在靶向脂質(zhì)體的一些實(shí)施方式中，m和p各白獨(dú)立為2至4的整數(shù)。在一些實(shí)施方式中，m和p相等并且是2至4的整數(shù)。在特定實(shí)施方式中，m和p相等并且是3。

在靶向脂質(zhì)體的一些實(shí)施方式中，R1、R2、R5和R6各自獨(dú)立為油酰、硬脂酰、棕櫚?；蛉舛罐Ⅴ?。在一些實(shí)施方式中，R1和R2相同，并且R5和R6相同。在特定實(shí)施方式中，R1、R2、R5和R6相同。在一些實(shí)施方式中，R1、R2、R3和R4是油?；蛴仓！Ｔ谝恍?shí)施方式中，R1、R2、R3和R4是油酰。

在靶向脂質(zhì)體的一些實(shí)施方式中，靶向配體指向靶細(xì)胞。在特定實(shí)施方式中，靶向配體指向靶細(xì)胞的細(xì)胞表面受體。在一些實(shí)施方式中，靶向配體是轉(zhuǎn)鐵蛋白、葉酸、透明質(zhì)酸、糖鏈或單克隆抗體的片段。在一些實(shí)施方式中，靶向配體是轉(zhuǎn)鐵蛋白、葉酸、透明質(zhì)酸或糖鏈。在特定實(shí)施方式中，靶向配體是轉(zhuǎn)鐵蛋白。在這些實(shí)施方式的一些中，轉(zhuǎn)鐵蛋白是全蛋白形式而不是脫鐵形式。在其它實(shí)施方式中，轉(zhuǎn)鐵蛋白是脫鐵形式。

在脂類混合物、含脂質(zhì)體組合物和靶向脂質(zhì)體的一些實(shí)施方式中，制劑不包括陰離子脂類。在一些實(shí)施方式中，制劑不包括陽離子脂類。在一些實(shí)施方式中，制劑不包括陽離子脂類或陰離子脂類。在一些實(shí)施方式中，制劑不包括磷脂酰甘油或其衍生物。在特定實(shí)施方式中，制劑不包括卵磷脂酰膽堿。

在脂類混合物、含脂質(zhì)體組合物和靶向脂質(zhì)體的一些實(shí)施方式中，至少兩種不同的中性脂類是一種或多種磷脂和膽固醇或膽固醇衍生物。在一些實(shí)施方式中，至少兩種不同的中性脂類是磷脂。在脂類混合物、含脂質(zhì)體組合物和靶向脂質(zhì)體的一些實(shí)施方式中，至少兩種不同的中性脂類是磷脂酰膽堿和膽固醇。在特定實(shí)施方式中，至少兩種不同中性脂類之一是DMPC、DSPC或DPPC。在一些實(shí)施方式中，至少兩種不同中性脂類之一是膽固醇或膽固醇衍生物。在特定實(shí)施方式中，至少兩種不同中性脂類是DMPC和膽固醇、DSPC和膽固醇、或DPPC和膽固醇。在特定實(shí)施方式中，至少兩種不同中性脂類是DMPC和膽固醇。

在靶向脂質(zhì)體的一些實(shí)施方式中，脂質(zhì)體的平均直徑是約50nm至約250nm。在一些實(shí)施方式中，脂質(zhì)體的平均直徑是約90nm至約200nm。在特定實(shí)施方式中，脂質(zhì)體的平均直徑是約100nm至約140nm。

在靶向脂質(zhì)體的一些實(shí)施方式中，脂質(zhì)體的ζ電位是負(fù)值。在特定實(shí)施方式中，ζ電位是約-75mV至約-90mV。在一些實(shí)施方式中，ζ電位是約-80mV至約-85mV。

在脂類混合物、含脂質(zhì)體組合物和靶向脂質(zhì)體的一些實(shí)施方式中，N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺是NG-DOPE(其中NG-DOPE等價(jià)于R1和R2是油酰并且m是3)，并且，如果存在N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯，其為NHS-NG-DOPE(其中NHS-NG-DOPE等價(jià)于R3和R4是油酰并且n是3)，或者，如果存在靶向因子修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺，其為TF-NG-DOPE(其中TF-NG-DOPE等價(jià)于R5和R6是油酰并且p是3)。

在含脂質(zhì)體組合物和靶向脂質(zhì)體的一些實(shí)施方式中，制劑還包括溶液。

在靶向脂質(zhì)體的一些實(shí)施方式中，中性脂類∶N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺∶靶向因子修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的摩爾比是約95∶4∶1。

在靶向脂質(zhì)體的一些實(shí)施方式中，DMPC∶膽固醇∶(N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺+靶向因子修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺)的摩爾比是50∶45∶5。

在含脂質(zhì)體組合物和靶向脂質(zhì)體的特定實(shí)施方式中，存在標(biāo)記化合物。在一些實(shí)施方式中，標(biāo)記化合物包括放射性同位素部分。在特定實(shí)施方式中，標(biāo)記化合物包括125I。

在含脂質(zhì)體組合物和靶向脂質(zhì)體的一些實(shí)施方式中，存在藥物。在特定實(shí)施方式中，藥物是抗癌劑。在一些實(shí)施方式中，藥物是細(xì)胞毒性藥物。在一些實(shí)施方式中，藥物是拓?fù)洚悩?gòu)酶I抑制劑。在特定實(shí)施方式中，拓?fù)洚悩?gòu)酶I抑制劑是拓?fù)涮婵祷蛞懒⑻婵怠Ｔ谄渌鼘?shí)施方式中，藥物是長(zhǎng)春花生物堿。在一些實(shí)施方式中，長(zhǎng)春花生物堿是長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春花堿、長(zhǎng)春羅新(vinleurosine)、vinrodisine、脫水長(zhǎng)春花堿或脫乙酰長(zhǎng)春花堿。在其它實(shí)施方式中，藥物是核酸。在這些實(shí)施方式中的一些中，核酸是反義寡核苷酸或核酶。在特定實(shí)施方式中，藥物是鉑化合物。在一些實(shí)施方式中，鉑化合物是biplatin、順鉑、卡鉑、奧馬鉑、奧沙利鉑、折尼鉑、恩洛鉑、洛鉑或螺鉑。在特定實(shí)施方式中，鉑化合物是奧沙利鉑。在一些實(shí)施方式中，藥物是烷化劑。在特定實(shí)施方式中，藥物是紫杉烷。在其它實(shí)施方式中，藥物是代謝拮抗劑。在一些實(shí)施方式中，藥物是抗腫瘤抗生素。在一些實(shí)施方式中，藥物是激素治療藥物。在特定實(shí)施方式中，藥物是分子靶標(biāo)藥物。

在其中存在奧沙利鉑的特定實(shí)施方式中，奧沙利鉑溶解在糖的水溶液中，所述糖選自海藻糖、麥芽糖、蔗糖、乳糖、甘露糖、甘露醇、甘油和葡萄糖。在一些實(shí)施方式中，糖的濃度是約1％至約20％的糖百分?jǐn)?shù)(v/v)。在特定實(shí)施方式中，奧沙利鉑的濃度是在脂質(zhì)體中約0.1mg/ml至約25mg/ml。在其它實(shí)施方式中，奧沙利鉑的濃度是在脂質(zhì)體中約0.5mg/ml至約10mg/ml。在還有其它實(shí)施方式中，奧沙利鉑的濃度是約0.5mg/ml至約3mg/ml。

在特定實(shí)施方式中——其中存在靶向因子修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺，摻入脂質(zhì)體的靶向配體的濃度是約1.0mg/ml至約3.0mg/ml。在一些實(shí)施方式中，并入脂質(zhì)體的靶向配體的濃度是約1.0mg/ml至約2.5mg/ml。

在一些實(shí)施方式中——其中存在靶向因子修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺，靶向配體是轉(zhuǎn)鐵蛋白。在一些實(shí)施方式中，轉(zhuǎn)鐵蛋白是全蛋白形式而不是脫鐵形式。在一些實(shí)施方式中，轉(zhuǎn)鐵蛋白是脫鐵形式。在一些實(shí)施方式中，鐵的濃度是約0.4至約3.0μg/ml。在其它實(shí)施方式中，鐵的濃度是約0.4至約1.5μg/ml。

在脂類混合物、含脂質(zhì)體組合物和靶向脂質(zhì)體的一些實(shí)施方式中，制劑不含有除了兩種不同中性脂類、N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺和靶向因子修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺之外的脂類成分。在特定實(shí)施方式中，制劑不含有除了磷脂酰膽堿、膽固醇或膽固醇衍生物、N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺和轉(zhuǎn)鐵蛋白修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺之外的脂類成分。

在另一方面，提供了藥物制劑，其包括本文所述的靶向脂質(zhì)體或含脂質(zhì)體組合物以及一種或多種藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑、稀釋劑、穩(wěn)定劑或防腐劑。

在又一方面，提供了試劑盒，其包括本文所述的脂類混合物、含脂質(zhì)體組合物或靶向脂質(zhì)體中的一種或多種、包裝和使用說明書。

在一些實(shí)施方式中，試劑盒包括靶向脂質(zhì)體。在特定實(shí)施方式中，靶向脂質(zhì)體包含在第一容器中，并且一種或多種藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑、稀釋劑、穩(wěn)定劑或防腐劑包含在第二容器中。

如果沒有另外指出，本文所述的含脂類組合物意圖用于本文所述的治療方法和診斷方法，并且可以并入本文所述的藥物制劑和試劑盒中。如果沒有另外指出，本文所述的含脂類組合物(包括脂類混合物、含脂質(zhì)體組合物)、脂質(zhì)體(包括靶向脂質(zhì)體、空白脂質(zhì)體等)可以通過本文所述的生產(chǎn)方法制備。

在另一方面，提供了制備本文所述的含脂類組合物的方法，包括步驟混合至少兩種不同的中性脂類、N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺和N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯。

在一些實(shí)施方式中，提供了制備本文所述的含脂質(zhì)體組合物的方法，包括步驟 a)混合至少兩種不同的中性脂類、N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺和N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯，形成脂類混合物； b)將藥物加入步驟(a)中形成的脂類混合物；和 c)形成脂質(zhì)體。

在一些實(shí)施方式中，混合步驟(a)是在有機(jī)溶劑存在的情況下進(jìn)行的。

在一些實(shí)施方式中，步驟(b)中的藥物在混合前處于水溶液中。

在一些實(shí)施方式中，步驟(c)包括超聲波處理或攪拌。在特定實(shí)施方式中，步驟(c)包括擠出。

在進(jìn)一步實(shí)施方式中，提供了制備本文所述的靶向脂質(zhì)體的方法，包括步驟 a)混合至少兩種不同的中性脂類、N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺和N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯，形成脂類混合物； b)將藥物或標(biāo)記化合物加入步驟(a)中形成的脂類混合物； c)形成脂質(zhì)體；和 d)將靶向配體連接于N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯。

在上述方法的一些實(shí)施方式中，所述方法還包括步驟(e)，純化步驟(d)的脂質(zhì)體。在特定實(shí)施方式中，步驟(b)中的藥物在混合之前處于水溶液中。在一些實(shí)施方式中，步驟(c)包括超聲波處理或攪拌。在一些實(shí)施方式中，步驟(c)包括擠出。

也提供了制備靶向脂質(zhì)體的其它方法，包括步驟 a)混合磷脂酰膽堿、膽固醇或膽固醇衍生物、和N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺，形成脂類混合物； b)將奧沙利鉑加入步驟(a)中形成的脂類混合物； c)形成脂質(zhì)體；和 d)官能化N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的一部分，形成N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯；和 e)將轉(zhuǎn)鐵蛋白連接于N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯。

在一些實(shí)施方式中，方法還包括純化步驟(e)的脂質(zhì)體的步驟(f)。

在本方法的特定實(shí)施方式中，步驟(b)中的藥物在混合之前處于水溶液中。

在本方法的一些實(shí)施方式中，步驟(c)包括超聲波處理或攪拌。

在本發(fā)明的又一方面，提供了本文所述的含脂類組合物(包括靶向脂質(zhì)體)及其制劑在制備藥物中的應(yīng)用。特別地，制備藥物用于如本文所述的疾病診斷或治療。進(jìn)一步地，如果沒有另外指出，本文各處所述的藥物制劑也意圖用于制備約物，所述藥物用于治療和診斷疾病，以及根據(jù)本文所述的方法制備藥物。

在本發(fā)明的又一方面，提供了治療癌癥的方法，包括步驟 a)將本文所述的靶向脂質(zhì)體以有效量施用給需要的個(gè)體，以便治療癌癥，其中所述藥物是抗癌劑。

在一些實(shí)施方式中，個(gè)體是哺乳動(dòng)物。在特定實(shí)施方式中，個(gè)體是人。

在一些實(shí)施方式中，癌癥是乳腺癌、胃癌、結(jié)腸癌、結(jié)腸直腸癌、胰腺癌、非小細(xì)胞性肺癌、小細(xì)胞肺癌、腦癌、肝癌、腎癌、前列腺癌、膀胱癌、卵巢癌或血液惡性病。

在治療方法的一些實(shí)施方式中，步驟(a)在聯(lián)合形式癌癥治療之前、同時(shí)或之后實(shí)施。在特定實(shí)施方式中，聯(lián)合形式癌癥治療包括化療、放療或手術(shù)。

在治療方法的一些實(shí)施方式中，步驟(a)在輔助癌癥治療之前、同時(shí)或之后實(shí)施。在特定實(shí)施方式中，輔助癌癥治療包括給予一種或多種藥劑以便減輕毛發(fā)丟失、嘔吐、免疫抑制、惡心、腹瀉、皮疹、感覺障礙、貧血、疲勞、口腔炎、或手足綜合癥。在一些實(shí)施方式中，步驟(a)在給予一種或多種其它抗癌劑之前、同時(shí)或之后實(shí)施。在特定實(shí)施方式中，一種或多種其它抗癌劑包括5-氟尿嘧啶、亞葉酸、卡培他濱、UFT/LV(替加氟-尿嘧啶和亞葉酸)、依立替康、抗EGFR抗體、抗-VEGF抗體、酪氨酸激酶抑制劑、或其聯(lián)合。

在治療方法的一些實(shí)施方式中，靶向脂質(zhì)體通過腸胃外投藥施用。在特定實(shí)施方式中，腸胃外投藥是通過注射或靜脈輸注。
附圖簡(jiǎn)述


圖1示出了靶向脂質(zhì)體的示意性表示。

圖2示出了應(yīng)用靶向脂質(zhì)體進(jìn)行腫瘤細(xì)胞的活性藥物靶向的示意性表示。

圖3示出了含有奧沙利鉑的靶向脂質(zhì)體的建議作用方式的示意性表示。

圖4示出了靶向脂質(zhì)體的生產(chǎn)方法A的示意性描述。

圖5示出了靶向脂質(zhì)體的生產(chǎn)方法B的示意性描述。

圖6示出了在多種奧沙利鉑濃度下，奧沙利鉑對(duì)AsPC-1細(xì)胞的細(xì)胞毒性。

圖7示出了正常白細(xì)胞和腫瘤來源細(xì)胞系的細(xì)胞表面上存在的轉(zhuǎn)鐵蛋白受體的數(shù)目。

圖8示出了實(shí)施例6中制備的含脂質(zhì)體混合物的大小分布的結(jié)果，通過QELS獲得；A)條目1，B)條目2，C)條目3，D)條目4，E)條目5，F(xiàn))條目6。

圖9示出了血液中脂質(zhì)體的濃度，其中(◆)表示實(shí)施例6中制備的Tf-PEG-脂質(zhì)體，(■)表示實(shí)施例5中制備的Tf-NG-DSPE:NG-DSPE:DSPC:CH脂質(zhì)體，而(▲)表示實(shí)施例6中制備的Tf/PEG-NG-DSPE脂質(zhì)體。

圖10示出了癌癥組織中的脂質(zhì)體的濃度；其中(◆)表示實(shí)施例6中制備的Tf-PEG-脂質(zhì)體，(■)表示實(shí)施例5中制備的Tf-NG-DSPE:NG-DSPE:DSPC:CH脂質(zhì)體，而(▲)表示實(shí)施例6中制備的Tf/PEG-NG-DSPE脂質(zhì)體。

圖11示出了如實(shí)施例13所述而制備的NG-PE脂質(zhì)體在靜脈注射后，在腫瘤組織中的累積，其中將NGPE脂質(zhì)體包封的標(biāo)記有125I的酪胺菊粉(tyraminyl inulin)注射入帶有Colon 26腫瘤的小鼠中。數(shù)據(jù)表示為平均值。數(shù)據(jù)表示為平均值±SD(n＝5)。(□)0mol％(-)；(■)1mol％(+)Tf-NG-DOPE。*與0mol％(-)的顯著差(significantdifference)。

圖12示出了脂質(zhì)體對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的抑制作用，通過對(duì)腫瘤生長(zhǎng)比對(duì)治療起始后的時(shí)間進(jìn)行繪圖來表示，其中(◆)表示實(shí)施例9中制備的Tf-PEG-脂質(zhì)體；(■)表示實(shí)施例6中制備的PEG-脂質(zhì)體，不帶有Tf；(▲)表示實(shí)施例8中制備的Tf-NG-DSPE:NG-DSPE:DSPC:CH脂質(zhì)體；(o)表示實(shí)施例8中制備的NG-DSPE:NG-DSPE:DSPC:CH脂質(zhì)體，不帶有Tf；(*)表示實(shí)施例9中制備的Tf/PEG-NG-DSPE脂質(zhì)體；(·)表示實(shí)施例9中制備的PEG-NG-DSPE脂質(zhì)體，不帶有Tf；(+)表示l-OHP溶液；(-)表示沒有治療。

圖13示出了多種濃度的NG-PE(NG-DSPE)對(duì)血液中檢測(cè)的藥物劑量百分?jǐn)?shù)的作用，其中NG-DSPE的濃度(總脂類含量的百分?jǐn)?shù))如下(◆)0％，(■)1％；(▲)3％；(x)6％；(o)12％；并且?guī)в邢铝兄?·)MPB 6％；(+)PDP 6％。

圖14示出了應(yīng)用多種二羧酸接頭，帶有和不帶有Tf，脂質(zhì)體的血液滯留，其中(◆)Tf-NGPE，(■)Tf-NSPE；(▲)TF-MPB；(x)NGPE(沒有Tf)，(*)MPB(沒有Tf)。

圖15示出了通過電泳對(duì)脂質(zhì)體進(jìn)行的示范性分析泳道6(轉(zhuǎn)鐵蛋白-N-戊二酰基-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-脂質(zhì)體(Tf-NG-DSPE脂質(zhì)體))；泳道5(轉(zhuǎn)鐵蛋白-聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-脂質(zhì)體(Tf-PEG-DSPE脂質(zhì)體)。泳道1-4，分別包含h-apo-Tf(240ng)、h-apo-Tf(120ng)、h-apo-Tf(60ng)和h-apo-Tf(30ng)。

圖16示出了與Tf-NG-DSPE脂質(zhì)體結(jié)合的轉(zhuǎn)鐵蛋白的量，其中非-NG-DSPE摻入(泳道5)或不摻入(泳道4)所述脂質(zhì)體。泳道1-3，分別包含h-apo-Tf(400ng)、h-apo-Tf(200ng)和h-apo-Tf(50ng)。

圖17示出了，以5mg/kg施用(■)NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH脂質(zhì)體和以5mg/kg施用(·)Tf-PEG脂質(zhì)體后，血液中的累積奧沙利鉑。

圖18示出了在，以5mg/kg施用(■)NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH脂質(zhì)體和以5mg/kg施用(·)Tf-PEG脂質(zhì)體后，小鼠結(jié)腸26腫瘤中的累積奧沙利鉑。

圖19示出了NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH脂質(zhì)體在帶有結(jié)腸26腫瘤的小鼠中的抗腫瘤作用，其中(·)表示賦形劑對(duì)照(9％蔗糖)；(▲)表示l-OHP溶液，5mg/kg，(◆)表示NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH脂質(zhì)體，5mg/kg和(■)表示Tf-PEG脂質(zhì)體，5mg/kg。

圖20示出了NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH脂質(zhì)體在帶有HCT-116人結(jié)腸腫瘤異種移植物的小鼠中的抗腫瘤作用，其中(·)表示賦形劑對(duì)照(300mM(10.27％)蔗糖)；(O)表示空白(無藥物)脂質(zhì)體，(▲)表示l-OHP溶液，15mg/kg，(◆)表示NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH脂質(zhì)體，10mg/kg和(■)表示NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH脂質(zhì)體，15mg/kg。所有脂質(zhì)體都是通過精確體重、應(yīng)用注射體積0.103mL/10g體重給予的。

圖21示出了NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH脂質(zhì)體在帶有HT-29人結(jié)腸腫瘤的異種移植物的小鼠中的抗腫瘤作用，其中(·)表示賦形劑對(duì)照(300mM(10.27％)蔗糖，(▲)表示NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH脂質(zhì)體，15mg/kg，(■)表示NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH脂質(zhì)體，10mg/kg，和(◆)表示NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH脂質(zhì)體，6.7mg/kg。

圖22示出了NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH脂質(zhì)體在帶有MKN45人胃部腫瘤的異種移植物的小鼠中的抗腫瘤作用，其中(·)表示賦形劑對(duì)照(300mM(10.27％)蔗糖，(▲)表示NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH脂質(zhì)體，15mg/kg，(■)表示NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH脂質(zhì)體，10mg/kg，和(◆)表示NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH脂質(zhì)體，6.7mg/kg。

圖23示出了NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH脂質(zhì)體在帶有COLO 205人腫瘤異種移植物的小鼠中的抗腫瘤作用，其中(·)表示賦形劑對(duì)照(300mM(9％)蔗糖，(▲)表示l-OHP溶液，5mg/kg，q4d×3(第16天)，10mg/kg，q2d×2(第47天)，2mg/kg q2d×6(第51天)；(◆)表示NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH脂質(zhì)體，5mg/kgq4d×3(第16天)，10mg/kg，q2d×2(第47天)，2mg/kg q2d×6(第51天)；和(■)表示NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH脂質(zhì)體，10mg/kg q4d×3(第16天)，15mg/kg q2d×2(第47天)，4mg/kg q2d×6(第51天)。

圖24示出了用2-巰基乙醇還原后的SDS-PAGE樣式，其中泳道1是分子量標(biāo)記，泳道2是全轉(zhuǎn)鐵蛋白，泳道3-5是NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH脂質(zhì)體，泳道6是Tf-NG-DOPE。

圖25示出了具有系統(tǒng)適宜性的示范性HPLC色譜。
發(fā)明詳述
本文提供了含脂類組合物(包括靶向脂質(zhì)體、空白脂質(zhì)體、含脂質(zhì)體組合物、脂類混合物等)，和制備和應(yīng)用本文所述的含脂類組合物的方法。含脂類組合物，和脂質(zhì)體，特別是本文提供的，適于制備藥物制劑和用于治療或診斷多種疾病，包括癌癥。組合物，包括藥物制劑，提供了更有效的治療和診斷方案，其中與輸送到個(gè)體的藥物或標(biāo)記化合物有關(guān)的不利效應(yīng)減少。增加的效率和減少的不利效應(yīng)應(yīng)當(dāng)增加藥物制劑的治療指數(shù)，并且提供用于成功治療多種疾病的機(jī)會(huì)，包括癌癥，并且也應(yīng)當(dāng)增加功效和降低與診斷有關(guān)的不利效應(yīng)。藥物制劑的特異性增加同時(shí)伴有不利效應(yīng)降低，應(yīng)當(dāng)保證對(duì)更多數(shù)和更大范圍的被治療個(gè)體的治療益處，因而挽救或延長(zhǎng)生命以及改進(jìn)需要治療的個(gè)體的生活質(zhì)量。標(biāo)記化合物制劑的特異性增加同時(shí)伴有不利效應(yīng)降低，應(yīng)當(dāng)增加被成功診斷的個(gè)體的數(shù)目，例如，能夠耐受診斷制劑的個(gè)體，并且也增加診斷的準(zhǔn)確性(例如，敏感性)，包括使得對(duì)疾病進(jìn)行更早期的診斷和更有效監(jiān)測(cè)疾病的嚴(yán)重程度(例如，應(yīng)用或不應(yīng)用治療時(shí)的進(jìn)展或消退)。

目前描述的組合物中包括含脂類組合物的藥物制劑。本文所述的含脂類組合物包括但不限于脂質(zhì)體，其包封藥物和標(biāo)記化合物并且可以用在疾病治療或診斷中或需要治療或診斷的其它病癥的治療或診斷中，包括，例如，癌癥(例如，乳腺癌、胃癌、結(jié)腸直腸癌或結(jié)腸癌)。

當(dāng)傳統(tǒng)的抗癌劑(包括細(xì)胞毒性劑)經(jīng)靜脈給予時(shí)，整個(gè)身體被非選擇性地暴露于藥物并且受到其影響。結(jié)果，可以發(fā)生許多不利效應(yīng)，癌癥未被靶向，和/或藥物效應(yīng)在循環(huán)過程中可能失去。在給予之前將藥物包封在脂質(zhì)體組合物中，可以產(chǎn)生一種或多種益處，包括降低藥物對(duì)正常細(xì)胞的不利效應(yīng)，在藥物可能不穩(wěn)定的情況下保護(hù)藥物直至其達(dá)到靶向的病理細(xì)胞，延長(zhǎng)藥物在循環(huán)系統(tǒng)中的存在以便能夠輸送到病理細(xì)胞，和/或幫助輸送藥物到特定靶向病理細(xì)胞。藥物更特異地靶向和降低通過在RES中吸收而導(dǎo)致的藥物損失，也包括下列益處降低需要施用的藥物的量，從而也降低治療成本，以及本文所述的其它益處。

相似地，許多標(biāo)記化合物有不利效應(yīng)和/或可以在給藥和診斷(例如，進(jìn)行診斷技術(shù)的時(shí)間——例如，放射性同位素檢測(cè)、磁性共振成像、超聲等)之間的時(shí)間內(nèi)降解。在本文所述的含脂類化合物中摻入標(biāo)記化合物，應(yīng)當(dāng)增加標(biāo)記化合物的功效，如，例如，檢測(cè)閾值可以在較低劑量的標(biāo)記化合物下獲得，降低藥劑的不利效應(yīng)，和/或延長(zhǎng)進(jìn)行診斷的時(shí)窗。

含脂類化合物也包含用靶向配體修飾的脂類(例如，靶向脂質(zhì)體、空白脂質(zhì)體、含脂質(zhì)體組合物、脂類混合物)或其它衍生物。例如，摻入靶向因子(例如，轉(zhuǎn)鐵蛋白，葉酸鹽)和衍生脂類(例如，N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺)的脂質(zhì)體組合物被開發(fā)以改進(jìn)抗癌劑(例如，奧沙利鉑等)的安全性和功效，這通過延長(zhǎng)藥物在血漿中的循環(huán)時(shí)間(相比于單獨(dú)在溶液中給予的藥物)和通過腫瘤細(xì)胞上的靶向因子特異性受體進(jìn)行。這種改進(jìn)的生物利用度和腫瘤靶向，應(yīng)當(dāng)引起安全性改進(jìn)和抗腫瘤活性改進(jìn)，并且因而對(duì)需要的個(gè)體進(jìn)行有效治療的概率更大，同時(shí)也降低與許多藥物有關(guān)的不利效應(yīng)，特別是與大多數(shù)抗癌劑有關(guān)的嚴(yán)重不利效應(yīng)。類似地，這種衍生化和靶向因子也可以用于有效地靶向特定位點(diǎn)(例如，腫瘤類型、器官、組織等)用于輸送標(biāo)記化合物。

本發(fā)明也提供了轉(zhuǎn)鐵蛋白修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺，其可以用于本文所述的含脂類組合物及其制劑。

含脂類組合物，包括脂質(zhì)體，如本文所述，可以通過本文所述的方法制備，以及考慮到本說明書提供的教導(dǎo)，對(duì)技術(shù)人員已知和適當(dāng)?shù)闹|(zhì)體制造方法制備。如果沒有另外指出，本文所述的脂質(zhì)體和含脂質(zhì)體組合物可以沒有限制地?fù)饺胨幬镏苿┖?或試劑盒中，包括本文所述的藥物制劑和/或試劑盒，以及另外包括考慮到本說明書提供的教導(dǎo)，對(duì)技術(shù)人員將是顯而易見的制劑和/或試劑盒。類似地，如果沒有另外指出，脂質(zhì)體和含脂質(zhì)體組合物和摻入了脂質(zhì)體和含脂質(zhì)體組合物的藥物制劑可以被沒有限制地用在治療和診斷方法中，所述方法與貫穿本說明書提供的說明一致并且考慮到本文提供的教導(dǎo)、根據(jù)技術(shù)人員的實(shí)踐進(jìn)行。

摻入藥物(奧沙利鉑)的示范性靶向脂質(zhì)體在圖1中示意性表示。建議的靶向脂質(zhì)體的攝取機(jī)制和作用方式提供在圖2和圖3中。如本文所用，術(shù)語“靶向脂質(zhì)體(targeted liposome)”一般是指帶有這樣組分的脂質(zhì)體包含至少一種或多種磷脂、NωPE、TF-NωPE，并且也包含本文所示的藥物或標(biāo)記化合物。如貫穿本說明書描述的這些組分中的每一種可以沒有限制地?fù)饺氲奖景l(fā)明的靶向組合物中，這與本文提供的教導(dǎo)一致。指出，本文更詳細(xì)描述的空白脂質(zhì)體，也可以是“靶向的”，這在于它們能夠摻入TF-修飾的NωPEs，但是一般不摻入藥物或標(biāo)記化合物。
N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺
本文所述的含脂類組合物包含至少一種根據(jù)式1的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺，式1如下
式1 其中R1和R2獨(dú)立為?；?，并且m是1至10的整數(shù)。

如本文所用，術(shù)語″N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺″及其同源詞，是指本文提供的式1包含的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺。類似地，縮寫NωPE用來指代式1包含的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺(例如，Nω-DOPE、Nω-DSPE、NG-DOPE等)，例如，如果沒有另外指明，NG-PE是指式1的N-戊二?；字Ｒ掖及?一種或多種)。

意圖在于，本文所述的含脂類組合物(包括靶向脂質(zhì)體)中包含的唯一的磷脂酰乙醇胺(一種或多種)是式1的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺或式2的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯或式3的靶向因子修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺，如下文更詳細(xì)描述。如本文所用，術(shù)語″非衍生化磷脂酰乙醇胺″及其同源詞，是指末被式1、式2或式3包含的磷脂酰乙醇胺、半合成磷脂酰乙醇胺、合成磷脂酰乙醇胺和/或它們的衍生物。

由R1和R2表示的寬范圍的?；梢杂迷谑?中，如本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所理解。

在一些實(shí)施方式中，?；鶃碜跃哂?2-22個(gè)碳原子的飽和或不飽和脂肪族羧酸。示范性?；ǖ幌抻?，來自下列的酰基月桂酸、十三烷酸、肉豆蔻酸、十五烷酸、棕櫚酸、十七烷酸、硬脂酸、十九烷酸、花生酸、二十一烷酸、二十二烷酸、2-十二烯酸、5-十二烯酸、11-十二烯酸、5-肉豆蔻腦酸、肉豆蔻腦酸、2-棕櫚油酸、7-棕櫚油酸、順-9-棕櫚油酸、反-9-棕櫚油酸、巖芹酸、異巖芹酸(petroselidinicacid)、油酸、反油酸、11-十八碳烯酸、二十碳-11-烯酸、反式-二十碳-11-烯酸、芥酸、亞油酸、反亞油酸、α-桐酸、β-桐酸、亞麻酸、假桐酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸、或二十二碳六烯酸。

在一些實(shí)施方式中，?；鶃碜?4-18個(gè)碳原子的飽和或不飽和脂肪族羧酸。此類示范性?；ǖ幌抻趤碜韵铝械孽；退?18碳)、棕櫚酸(16碳)、硬脂酸(18碳)或肉豆蔻酸(14碳)。如技術(shù)人員已知，相應(yīng)的?；謩e是油?；⒆貦磅；?、硬脂?；腿舛罐Ⅴ；?。

在其它實(shí)施方式中，?；鶃碜跃哂?4-18、14-20、14-22、16-18、16-20、16-22、18-20、18-22、12、14、16、18、20或22個(gè)碳的飽和或不飽和脂肪族羧酸。在一些實(shí)施方式中，?；鶃碜跃哂信紨?shù)碳原子數(shù)目的飽和或不飽和脂肪族羧酸。

在一些實(shí)施方式中，?；鶃碜杂退?油?；?、硬脂酸(硬脂?；?、棕櫚酸(棕櫚?；?、亞油酸(亞油?；?、18碳)或肉豆蔻酸(肉豆蔻酰)。在其它實(shí)施方式中，?；鶃碜杂退?油?；?。在一些實(shí)施方式中，酰基來自硬脂酸(硬脂?；?。在又一實(shí)施方式中，?；鶃碜宰貦八?棕櫚酰基)。在其它實(shí)施方式中，?；鶃碜匀舛罐⑺?肉豆蔻?；?。

在一些實(shí)施方式中，?；鶃碜燥柡椭咀弭人?，例如但不限于棕櫚酸(16碳)、硬脂酸(18碳)或肉豆蔻酸(14碳)。

在其它實(shí)施方式中，酰基來自不飽和脂肪族羧酸，例如但不限于油酸(油?；?，18碳)、亞油酸(亞油?；?8碳)或亞麻酸(亞麻?；?，18碳)。在一些實(shí)施方式中，?；鶃碜詠喡樗帷?br>
在一些實(shí)施方式中，m是1，2，3，4，5，6，7，8，9或10。在其它實(shí)施方式中，m是1-8，1-6，1-5，1-7，1-3，1-2，2-8，2-6，2-5，2-4，2-3，3-4，3-5，或3-6的整數(shù)。在一些實(shí)施方式中，m是2-4的整數(shù)，在一些實(shí)施方式中，m是1，2或3。

在一些實(shí)施方式中，m是1至4的整數(shù)。如普通技術(shù)人員所知，m＝1相應(yīng)于磷脂酰乙醇胺(PE)的丙二酸衍生物，而m＝2，3或4分別表示PE的琥珀酸衍生物、戊二酸衍生物和己二酸衍生物。在一些實(shí)施方式中，m是3(戊二酸)。

在一些實(shí)施方式中，R1和R2是相同的?；Ｔ谄渌鼘?shí)施方式中，R1和R2是不同的?；?。在一些實(shí)施方式中，R1和R2是油?；⒂仓；?、棕櫚?；蛉舛罐Ⅴ；?。在一些實(shí)施方式中，R1和R2是油?；Ｔ谄渌鼘?shí)施方式中，R1和R2是硬脂酰基。在特定實(shí)施方式中，R1和R2是棕櫚?；Ｔ谄渌鼘?shí)施方式中，R1和R2是肉豆蔻酰基。

在一些實(shí)施方式中，式1的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺是N-戊二酰基-二油酰磷脂酰乙醇胺(NG-DOPE(即，當(dāng)R1和R2是油酰基并且m是3))。在其它實(shí)施方式中，其為N-戊二?；?二硬脂?；字Ｒ掖及?NG-DSPE(即，R1和R2是硬脂?；⑶襪是3)。在其它實(shí)施方式中，其為N-戊二?；?二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺(NG-DMPE(即，其中R1和R2是肉豆蔻?；⑶襪是3))。在其它實(shí)施方式中，其為N-戊二?；?二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺(NG-DPPE(即，其中R1和R2是棕櫚酰基并且m是3))。在其它實(shí)施方式中，其為N-琥珀?；?二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(NS-DSPE(即，其中R1和R2是硬脂酰基并且m是2))。在其它實(shí)施方式中，其為N-己二酰基-一硬脂酰磷脂酰乙醇胺(NA-DSPE(即，其中R1和R2是硬脂酰基并且m是4))。在一些實(shí)施方式中，式1的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺是NG-DOPE或NG-DSPE。
N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的制備
通過將二羧酸結(jié)合到磷脂酰乙醇胺的氨基，可以獲得本文所述的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺。

磷脂，包括用于本文所述目的的磷脂酰乙醇胺及其衍生物，必須具有高的純度并且在理想上應(yīng)當(dāng)是均一的。制備高純度磷脂的已知方法包括從緩沖液提取脂類并且應(yīng)用柱層析純化。例如，N-琥珀酰二棕櫚酰基磷脂酰乙醇胺的生產(chǎn)方法描述于國(guó)際專利申請(qǐng)公布WO93/01828(JPAH7-501316)和美國(guó)專利號(hào)5,804,552和5,554,728中，它們的內(nèi)容以整體并入本文。這些生產(chǎn)方法包括從反應(yīng)混合物純化磷脂衍生物，其中應(yīng)用硅膠60對(duì)反應(yīng)混合物進(jìn)行柱層析。在氮?dú)夥障?，在室溫下，使二棕櫚酰磷脂酰乙醇?DPPE)與琥珀酸酐反應(yīng)16小時(shí)，應(yīng)用三乙胺催化劑。

N-(ω-羧基)酰氨基-磷脂酰乙醇胺磷脂衍生物的其它生產(chǎn)方法描述于日本公開專利申請(qǐng)JPA2001-261688中，其包括在將pH3.5-7.5的緩沖液加入反應(yīng)混合物之后通過分離液體層而進(jìn)行純化，其以整體并入本文作為參考。在這種情況下，應(yīng)用三乙胺堿性催化劑，使PE與無水二羧酸在4℃下反應(yīng)1小時(shí)。這種方法可能不是對(duì)所有磷脂酰乙醇胺衍生物都起良好的作用。

DOPE(二油?；?磷脂酰乙醇胺)也可以通過商業(yè)途徑得到或通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法制備。例如，簡(jiǎn)言之，卵磷脂(API起始物)可以被化學(xué)水解，產(chǎn)生甘油-磷酸-膽堿，其通過沉淀得以分離。隨后應(yīng)用活化的油酸?；?，通過正相柱層析分離DOPC(二油?；?磷脂酰膽堿)并且使其通過離子交換柱以便純化。應(yīng)用磷脂酶D，通過與乙醇胺反應(yīng)，可以從DOPC制得DOPE。

也可以以這樣的方式制備N-(ω-羧基)酰氨基-磷脂酰乙醇胺磷脂衍生物，如例如，描述于美國(guó)專利4,534,899中，其整體并入本文。簡(jiǎn)言之，使二羧酸酐與磷脂如磷脂酰乙醇胺反應(yīng)，得到二羧酸-衍生化磷脂酰乙醇胺。
N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯
本文所述的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯由下列式2表示
式2 其中R3和R4各自獨(dú)立是?；?，并且n是1至10的整數(shù)。

如本文所用，術(shù)語″N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯″及其同源詞是指，本文提供的式2包含的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯。類似地，縮寫SuccNωPE可以用于指代式2包含的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯(例如，SuccNω-DOPE，SuccNω-DSPE，SuccNG-DOPE等)，例如，如果沒有另外指明，NHS-NG-PE是指式2的N-戊二酰磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯，通過與NHS反應(yīng)形成。

可以應(yīng)用由R3和R4表示的寬范圍的酰基，如本領(lǐng)域技術(shù)人員公知和上文對(duì)R1和R2所述。如果本文沒有另外指明，明確地意圖于，本文中所提供的針對(duì)式1的?；?例如，R1和R2)描述等同地適用于針對(duì)式2的酰基(例如，R3和R4)。特別地，包含上文中標(biāo)題為“N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺”的部分中的描述。

在一些實(shí)施方式中，R3和R4是相同的?；?。在其它實(shí)施方式中，R3和R4是不同的?；Ｔ谝恍?shí)施方式中，R3和R4是油酰基、硬脂酰基、棕櫚?；蛉舛罐Ⅴ；?。在一些實(shí)施方式中，R3和R4是油?；Ｔ谄渌鼘?shí)施方式中，R3和R4是硬脂酰基。在一些實(shí)施方式中，R3和R4是棕櫚?；Ｔ谄渌鼘?shí)施方式中，R3和R4是肉豆蔻?；?。

在一些實(shí)施方式中，n是1，2，3，4，5，6，7，8，9或10。在其它實(shí)施方式中，n是1-8，1-6，1-5，1-7，1-3，1-2，2-8，2-6，2-5，2-4，2-3，3-4，3-5，或3-6的整數(shù)。在一些實(shí)施方式中，n是2-4的整數(shù)，在其它實(shí)施方式中，n是1，2或3。

在一些實(shí)施方式中，n是1至4的整數(shù)。如普通技術(shù)人員所知，n＝1相應(yīng)于磷脂酰乙醇胺(PE)的丙二酸衍生物，而n＝2，3或4分別表示PE的琥珀酸衍生物、戊二酸衍生物和己二酸衍生物。在一些實(shí)施方式中，n是3(戊二酸)。

在一些實(shí)施方式中，式2的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯是N-戊二?；?二油酰磷脂酰乙醇胺(NG-DOPE)的琥珀酰亞胺酯。在其它實(shí)施方式中，其為N-戊二?；?二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(NG-DSPE)的琥珀酰亞胺酯。在一些實(shí)施方式中，式2的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯是NG-DOPE或NG-DSPE的琥珀酰亞胺酯。

在一些實(shí)施方式中，式2的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯是N-戊二?；?二油酰磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯(SuccNG-DOPE(即，其中R3和R4是油?；⑶襫是3))。在其它實(shí)施方式中，其為N-戊二?；?二硬脂酰磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯(SuccNG-DSPE(即，其中R3和R4是硬脂酰基并且n是3)。在其它實(shí)施方式中，其為N-戊二酰基-二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯(SuccNG-DMPE(即，其中R3和R4是肉豆蔻?；⑶襫是3))。在其它實(shí)施方式中，其為N-戊二?；?二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯(SuccNG-DPPE(即，其中R3和R4是棕櫚?；⑶襫是3))。在其它實(shí)施方式中，其為N-琥珀酰-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯(SuccNS-DSPE(即，其中R3和R4是硬脂?；⑶襫是2))。在其它實(shí)施方式中，其為N-己二酰-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯(SuccNA-DSPE(即，其中R3和R4是硬脂?；⑶襫是4))。在一些實(shí)施方式中，式2的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯是SuccNG-DOPE或SuccNG-DSPE。

在一些實(shí)施方式中，N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺是Nω-DOPE并且N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯是SuccNω-DOPE。在其它實(shí)施方式中，N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺是Nω-DSPE并且N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯是SuccNω-DSPE。在其它實(shí)施方式中，N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺是Nω-DOPE并且N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯是SuccNω-DSPE。在一些其它實(shí)施方式中，N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺是Nω-DSPE并且N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯是SuccNω-DOPE。在這些實(shí)施方式中的一些中，琥珀酰亞胺酯可以是NHS(例如，NHS-Nω-DOPE，NHS-Nω-DSPE等)。

在一些實(shí)施方式中，N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺是NG-DOPE并且N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯是SuccNG-DOPE。在其它實(shí)施方式中，N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺是NG-DSPE并且N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯是SuccNG-DSPE。在其它實(shí)施方式中，N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺是NG-DOPE并且N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯是SuccNG-DSPE。在一些其它實(shí)施方式中，N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺是NG-DSPE并且N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯是SuccNG-DOPE。在這些實(shí)施方式中的一些中，琥珀酰亞胺酯可以是NHS(例如，NHS-NG-DOPE，NHS-NG-DSPE等)。N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯的制備
通過衍生化本文所述的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺，可以獲得本文所述的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯，如本領(lǐng)域已知和本文所述進(jìn)行制備。N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯的制備也在下文更詳細(xì)描述，包括在實(shí)施例中更詳細(xì)描述?？紤]到本說明書中提供的教導(dǎo)，技術(shù)人員也將能夠修改本文所述的方法。

本發(fā)明的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯的生產(chǎn)方法如下 向1當(dāng)量的本文所述式2表示的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺加入約0.7-1.3當(dāng)量NHS，其溶解在不含有活性氫的有機(jī)溶劑中。隨后于0-50℃使混合物與約0.7-1.3當(dāng)量的碳二亞胺化合物反應(yīng)約1-7天。

示范性地，不含有活性氫的有機(jī)溶劑包括但不限于酯(例如，乙酸乙酯，乙酸丁酯等)，脂肪烴(例如，己烷，庚烷等)，芳香烴(例如，甲苯，二甲苯等)，鹵代烴(例如，氯仿，二氯甲烷，二氯乙烷等)，醚(例如，THF，二烷、二乙醚等)，環(huán)烴(例如，環(huán)己烷等)，DMF和DMSO。有機(jī)溶劑也可以被脫氫。

可以應(yīng)用寬范圍的碳二亞胺化合物，只要所述化合物具有碳二亞胺基(-N＝C＝N-)即可。例如，可以使用的碳二亞胺化合物包括但不限于，碳二亞胺基如N，N′-二環(huán)己基-碳二亞胺(DCC)、N，N′-二異丙基-碳二亞胺、N-乙基-N′-(3-二甲基氨基丙基)-碳二亞胺氫氯化物(EDC)等。在一些實(shí)施方式中，應(yīng)用DCC。在其它實(shí)施方式中，應(yīng)用EDC。

上述反應(yīng)也可以在副產(chǎn)物產(chǎn)生最小或消除的條件下進(jìn)行。不需要的副產(chǎn)物包括脲化合物(例如，N，N′-二環(huán)己基脲、N-乙基-N′-(3-二甲基氨基丙基)脲等)、N-乙?；寤衔铩Ⅳ人狒衔锖?-唑酮化合物。不利于副產(chǎn)物形成或最小化副產(chǎn)物形成的條件和物質(zhì)包括，1)將碳二亞胺化合物緩慢溶解于有機(jī)溶劑中，2)在0℃以下進(jìn)行反應(yīng)以便防止反應(yīng)帶來的熱的放出等。優(yōu)化反應(yīng)和最小化副產(chǎn)物產(chǎn)生的其它方式將被本領(lǐng)域技術(shù)人員理解，特別是考慮到本文提供的教導(dǎo)。

能夠溶解碳二亞胺化合物的有機(jī)溶劑與上述不含有活性氫的有機(jī)溶劑相同。用于溶解碳二亞胺的溶劑和不含有活性氫的有機(jī)溶劑可以相同或不同。

反應(yīng)進(jìn)程可以通過薄層層析(TLC)系統(tǒng)、高效液相色譜(HPLC)和/或蒸發(fā)光散射(evaporated light scattering)檢測(cè)器監(jiān)測(cè)。監(jiān)測(cè)反應(yīng)進(jìn)程的其它方法將是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。

應(yīng)用氯仿和甲醇的混合物，通過硅膠柱層析，可以進(jìn)行純化。其它純化方法將是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。

在完全脫氫的有機(jī)溶劑中和不存在強(qiáng)酸或強(qiáng)堿時(shí)，本文所述的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯通常是穩(wěn)定的。靶向因子修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺
靶向因子修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺包括與第二N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺連接的靶向配體，其中第二N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺由式3表示，
式3 其中R5和R6獨(dú)立為?；⑶襭是1至10的整數(shù)。

如本文所用，術(shù)語″靶向因子修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺″及其同源詞，是指式3包括的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺，其應(yīng)用本文提供的靶向因子進(jìn)行修飾。類似地，縮寫TF-NωPE可以用于指代靶向因子修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺(例如，TF-Nω-DOPE，TF-Nco-DSPE，TF-NG-DOPE等)，例如，TF-NG-PE是指連接于式3的N-(ω)-戊二?；字Ｒ掖及返陌邢蚺潴w。

可以應(yīng)用由R5和R6表示的寬范圍的?；?，如本領(lǐng)域技術(shù)人員公知和上文對(duì)R1和R2所述。如果本文沒有另外指明，明確地意圖于，本文中所提供的針對(duì)式1的?；?例如，R1和R2)的描述等同地適用于針對(duì)式3的?；?例如，R5和R6)。特別地，包含上文中標(biāo)題為“N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺”的部分中的描述。

在一些實(shí)施方式中，R5和R6是相同的酰基。在其它實(shí)施方式中，R5和R6是不同的?；?。在一些實(shí)施方式中，R5和R6是油?；?、硬脂酰基、棕櫚?；蛉舛罐Ⅴ；?。在一些實(shí)施方式中，R5和R6是油?；?。在其它實(shí)施方式中，R5和R6是硬脂?；?。在一些實(shí)施方式中，R5和R6是棕櫚酰基。在其它實(shí)施方式中，R5和R6是肉豆蔻?；?。

在一些實(shí)施方式中，p是1，2，3，4，5，6，7，8，9或10。在其它實(shí)施方式中，p是1-8，1-6，1-5，1-7，1-3，1-2，2-8，2-6，2-5，2-4，2-3，3-4，3-5或3-6的整數(shù)。在一些實(shí)施方式中，p是2-4的整數(shù)，在其它實(shí)施方式中，p是1，2或3。

在一些實(shí)施方式中，p是1至4的整數(shù)。如普通技術(shù)人員所知，p＝1相應(yīng)于磷脂酰乙醇胺(PE)的丙二酸衍生物，而p＝2，3或4分別表示PE的琥珀酸、戊二酸和己二酸衍生物。在一些實(shí)施方式中，p是3(戊二酸)。

在一些實(shí)施方式中，靶向因子修飾的式3的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺是靶向因子修飾的N-戊二?；?二油酰磷脂酰乙醇胺(TF-NG-DOPE)。在其它實(shí)施方式中，其為靶向因子修飾的N-戊二?；?二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(TF-NG-DSPE)。在一些實(shí)施方式中，靶向因子修飾的式3的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺是是TF-NG-DOPE或TF-NG-DSPE。

在一些實(shí)施方式中，式3的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺是N-戊二酰基-二油酰磷脂酰乙醇胺(NG-DOPE(即，其中R5和R6是油?；⑶襭是3))。在其它實(shí)施方式中，其為N-戊二酰基-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(NG-DSPE(即，其中R5和R6是硬脂?；⑶襭是3))。在其它實(shí)施方式中，其為N-戊二?；?二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺(NG-DMPE(即，其中R5和R6是肉豆蔻酰基并且p是3)。在其它實(shí)施方式中，其為N-戊二?；?二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺(NG-DPPE(即，其中R5和R6是棕櫚酰基并且p是3))。在其它實(shí)施方式中，其為N-琥珀?；?二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(NS-DSPE(即，其中R5和R6是硬脂?；⑶襭是2))。在其它實(shí)施方式中，其為N-己二酰基-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(NA-DSPE(即，其中R5和R6是硬脂酰基并且p是4))。在一些實(shí)施方式中，式3的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺是NG-DOPE或NG-DSPE。

在一些實(shí)施方式中，靶向配體是轉(zhuǎn)鐵蛋白(Tf)，其在下文中更詳細(xì)描述，并且并入轉(zhuǎn)鐵蛋白修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺中的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺是式3的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺，如本文所述。

在一些實(shí)施方式中，N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺是Nω-DOPE并且靶向配體是轉(zhuǎn)鐵蛋白(Tf)，并且靶向因子修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺是Tf-Nω-DOPE。在其它實(shí)施方式中，N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺是Nω-DSPE并且靶向配體是轉(zhuǎn)鐵蛋白(Tf)，并且靶向因子修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺是Tf-Nω-DSPE。在其它實(shí)施方式中，N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺是Nω-DOPE并且靶向配體是轉(zhuǎn)鐵蛋白(Tf)，并且靶向因子修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺是Tf-Nω-DSPE。在一些其它實(shí)施方式中，N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺是Nω-DSPE并且靶向配體是轉(zhuǎn)鐵蛋白(Tf)，并且靶向因子修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺是Tf-Nω-DOPE。在這些實(shí)施方式中的一些中，m可以是3并且N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺是根據(jù)式1的NG-PE。

在一些實(shí)施方式中，N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺是NG-DOPE并且靶向因子修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺是TF-NG-DOPE。在其它實(shí)施方式中，N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺是NG-DSPE并且靶向因子修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺是TF-NG-DSPE。在又一實(shí)施方式中，N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺是NG-DOPE并且靶向因子修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺是TF-NG-DSPE。在一些其它實(shí)施方式中，N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺是NG-DSPE并且靶向因子修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺是TF-NG-DOPE。

通過與靶向配體和其它反應(yīng)物進(jìn)行反應(yīng)，可以從SuccNωPE制得靶向因子修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺，如本文更詳細(xì)描述。TF-NωPE可以在與本文所述的含脂類組合物的其它脂類組分混合之前被制備(和任選地被純化)或者可以通過預(yù)先制備的已摻入含脂類組合物中的SuccNωPE的反應(yīng)被原位制備。
其它脂類組分
除了本文所述的NωPE、SuccNωPE和/或TF-NωPE之外，本文所述的含脂類組合物也包含一種或多種其它脂類組分。各種其它脂類組分都可以被應(yīng)用，然而，術(shù)語″其它脂類組分(additional lipidcomponent(s))″不意圖于包括非衍生化的磷脂酰乙醇胺(PE)或如式1、2或3中的PE的衍生物。在一些實(shí)施方式中，一種或多種其它脂類組分可以是磷脂或一種或多種磷脂。在一些實(shí)施方式中，一種或多種其它脂類組分可以包括至少兩種中性脂類。在其它實(shí)施方式中，一種或多種磷脂可以存在，并且任選地，″其它脂類(additional lipid)″(其不是磷脂)可以存在。各種中性脂類都可以應(yīng)用，然而，所述至少兩種中性脂類不意圖于包括非衍生化的磷脂酰乙醇胺(PEs)或如式1、2或3中的PE的衍生物。意圖不在于，如本文應(yīng)用的術(shù)語″磷脂(phospholipid)″應(yīng)該包括PE或其衍生物，如式1、2或3中的。類似地，術(shù)語″其它脂類″不包括PEs或其衍生物，如式1、2或3中的，也不包括其它磷脂。

在特定實(shí)施方式中，磷脂(一種或多種)可以被用在本文所述的含脂類組合物和制劑中。例如，一種或多種、至少2種、至少3種、至少4種磷脂；或2種、3種、或4種磷脂。在特定實(shí)施方式中，存在一種磷脂。在一些實(shí)施方式中，組合物中的脂類組分被限制為一種磷脂、NωPE和SuccNωPE(或TF修飾的NωPE，其中進(jìn)行了與靶向因子的反應(yīng))。

在特定實(shí)施方式中，兩種或多種中性脂類可以被用在本文所述的含脂類組合物和制劑中。例如，至少2種、至少3種、至少4種中性脂類；或2種、3種、或4種脂類。在特定實(shí)施方式中，有2種中性脂類。在一些實(shí)施方式中，組合物中的脂類組分被限制為兩種中性脂類、NωPE和SuccNωPE(或TF-修飾的NωPE，其中進(jìn)行了與靶向因子的反應(yīng))。

在一些實(shí)施方式中，其中其它脂類組分包括磷脂，磷脂可以是磷脂酰膽堿，包括天然發(fā)生的、半合成的或合成的磷脂酰膽堿(例如，DSPC、DMPC等)。在一些實(shí)施方式中，磷脂酰膽堿是非天然發(fā)生的磷脂酰膽堿(例如，不是卵磷脂酰膽堿)。在特定實(shí)施方式中，磷脂酰膽堿是?；字Ｄ憠A(例如，DMPC、DPPC、POPC、DSPC等)。在一些實(shí)施方式中，磷脂是陽離子的。在其它實(shí)施方式中，磷脂是陰離子的。在其它實(shí)施方式中，磷脂是中性的。在特定實(shí)施方式中，一種或多種磷脂不是陰離子的。在其它實(shí)施方式中，一種或多種磷脂不是陽離子的。在一些實(shí)施方式中，其中存在多于一種的磷脂，陰離子的脂類和中性脂類可以包含在內(nèi)。示范性磷脂包括但不限于磷脂酰膽堿(PCs)、磷脂酸、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰甘油等。在一些實(shí)施方式中，含脂類組合物不包括磷脂酰絲氨酸或磷脂酰甘油。

在一些實(shí)施方式中，至少兩種中性脂類中的至少一種脂類可以是磷脂。在一些實(shí)施方式中，磷脂可以是磷脂酰膽堿，包括天然發(fā)生的、半合成的或合成的磷脂酰膽堿(例如，DSPC、DMPC等)。在一些實(shí)施方式中，磷脂酰膽堿是非天然發(fā)生的磷脂酰膽堿(例如，不是卵磷脂酰膽堿)。在特定實(shí)施方式中，磷脂酰膽堿是酰基磷脂酰膽堿(例如，DMPC、DPPC、POPC、DSPC等)。

在一些實(shí)施方式中，至少兩種中性脂類中的至少一種脂類可以是膽固醇或膽固醇衍生物(例如，膽固醇普魯蘭多糖(cholesterolpullulan)、帶正電膽固醇(例如，DC-Chol))，其摻入放射性同位素部分(例如，3H、14C、125I、130I等)，具有功能部分(例如，熒光部分等)。

在一些實(shí)施方式中，其中含脂類組合物包括一種或多種磷脂，所述組合物可以另外包括其它中性、非磷脂作為其它脂類。例如，如上述的膽固醇或膽固醇衍生物。

本文所述的含脂類組合物中應(yīng)用的磷脂(非PE)包括合成的、半合成的和天然發(fā)生的磷脂。示范性磷脂包括但不限于磷脂酰膽堿(PC)、磷脂酸、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰甘油等。在其它實(shí)施方式中，一種或多種磷脂包括磷脂酰膽堿(PC)或磷脂酸并且不包括磷脂酰絲氨酸或磷脂酰甘油。

在一些實(shí)施方式中，磷脂可以是磷脂酰膽堿。在一些實(shí)施方式中，磷脂酰膽堿可以是，例如，二硬脂酰磷脂酰膽堿(DSPC)、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿(DMPC)、二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)、棕櫚酰油酰磷脂酰膽堿(POPC)、卵磷脂酰膽堿(EPC)、氫化大豆磷脂酰膽堿(HSPC)等。在特定實(shí)施方式中，至少一種磷脂是磷脂酰膽堿。在這些實(shí)施方式中的一些中，磷脂酰膽堿是DMPC。在其它實(shí)施方式中，磷脂酰膽堿是DSPC。在其它實(shí)施方式中，磷脂酰膽堿是DPPC。在其它實(shí)施方式中，磷脂酰膽堿是POPC。在其它實(shí)施方式中，磷脂酰膽堿是EPC。在其它實(shí)施方式中，磷脂酰膽堿是HSPC。在一些實(shí)施方式中，包含一種磷脂，并且其為DMPC、DSPC、DPPC、POPC、EPC或HSPC。在特定實(shí)施方式中——其中含脂類組合物包括單一磷脂(非PE磷脂)，磷脂是DMPC。在其它實(shí)施方式中——其中含脂類組合物包括單一磷脂(非PE磷脂)，磷脂是DSPC。在其它實(shí)施方式中——其中含脂類組合物包括單一磷脂(非PE磷脂)，磷脂是DPPC。在其它實(shí)施方式中——其中含脂類組合物包括單一磷脂(非PE磷脂)，磷脂是POPC。在其它實(shí)施方式中——其中含脂類組合物包括單一磷脂(非PE磷脂)，磷脂是EPC。在其它實(shí)施方式中——其中含脂類組合物包括單一磷脂(非PE磷脂)，磷脂是HSPC。

在一些實(shí)施方式中，其它脂類組分可以包括至少一種磷脂，和任選的其它磷脂如膽固醇或膽固醇衍生物。在特定實(shí)施方式中，其它脂類組分是單一磷脂和膽固醇。在一些實(shí)施方式中，其它脂類組分包括至少一種磷脂酰膽堿和膽固醇。在特定實(shí)施方式中，其它脂類組分包括單一磷脂酰膽堿和膽固醇。在其中包含膽固醇的一些實(shí)施方式中，磷脂是DSPC、DMPC、DPPC、POPC、EPC或HSPC。在一些實(shí)施方式中，其它脂類組分包括膽固醇和DMPC。在其它實(shí)施方式中，其它脂類組分包括膽固醇和DSPC。在一些實(shí)施方式中，其它脂類組分是膽固醇和DMPC或DSPC中的一個(gè)。在一些實(shí)施方式中，其它脂類組分是膽固醇和DMPC。在其它實(shí)施方式中，其它脂類組分是膽固醇和DSPC。在其它實(shí)施方式中，其它脂類組分包括膽固醇和DPPC。在其它實(shí)施方式中，其它脂類組分包括膽固醇和POPC。在其它實(shí)施方式中，其它脂類組分包括膽固醇和EPC。在其它實(shí)施方式中，其它脂類組分包括膽固醇和HSPC。在一些實(shí)施方式中，其它脂類組分是膽固醇和DMPC、DSPC、DPPC、POPC、EPC或HSPC之一。在一些實(shí)施方式中，其它脂類組分是膽固醇和DMPC。在其它實(shí)施方式中，其它脂類組分是膽固醇和DSPC。在其它實(shí)施方式中，其它脂類組分是膽固醇和DPPC。在其它實(shí)施方式中，其它脂類組分是膽固醇和POPC。在其它實(shí)施方式中，其它脂類組分是膽固醇和EPC。在其它實(shí)施方式中，其它脂類組分是膽固醇和HSPC。

在特定實(shí)施方式中，存在一種磷脂，所述磷脂不是HSPC或EPC。

在特定實(shí)施方式中，存在一種或多種磷脂。在一些實(shí)施方式中，一種或多種磷脂包括磷脂酰膽堿。在特定實(shí)施方式中，包括一種或多種磷脂和膽固醇(或膽固醇衍生物)。在一些實(shí)施方式中，磷脂是磷脂酰膽堿并且組合物另外包括膽固醇(或膽固醇衍生物)。在特定實(shí)施方式中，磷脂酰膽堿是包含飽和脂肪酸部分的磷脂酰膽堿(例如，DMPC、DSPC或DPPC)。在一些實(shí)施方式中，磷脂酰膽堿不是卵磷脂酰膽堿。在特定實(shí)施方式中，磷脂酰膽堿不是HSPC。

在特定實(shí)施方式中，有兩種中性脂類。在一些實(shí)施方式中，這兩種中性脂類是膽固醇(或膽固醇衍生物)和磷脂酰膽堿。在特定實(shí)施方式中，磷脂酰膽堿是包含飽和脂肪酸部分的磷脂酰膽堿(例如，DMPC、DSPC或DPPC)。在一些實(shí)施方式中，磷脂酰膽堿不是卵磷脂酰膽堿。

如本文所述的其它脂類組分，以及本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其它脂類組分，可以從許多供應(yīng)商經(jīng)商業(yè)途徑得到，包括，例如，AvantiPolar Lipids，Inc.(Alabaster，AK)、Northern Lipid Inc.(Canada)、LipoidGmbH(Germany)、NOF Corporation(Japan)、Nippon Fine Chemical Co.，Ltd(Japan)。
藥物
多種藥物可以包含在本發(fā)明的含脂類組合物中，例如，化合物或基因。在一些實(shí)施方式中，藥物可以是抗癌劑，例如，適于包封在脂質(zhì)體中的抗癌劑?？紤]到本文提供的教導(dǎo)和根據(jù)所選的藥物以及意圖用于組合物或制劑的用途，考慮到特異于藥物和待治療個(gè)體的因素，如本文進(jìn)一步描述，技術(shù)人員能夠容易地確定欲包含在本文所述的含脂類組合物及其制劑中的藥物的量。

在一些實(shí)施方式中，藥物可以是核酸，例如，編碼具有抗癌性質(zhì)的序列的核酸。例如但不限于，反義寡核苷酸、核酶等。

在一些實(shí)施方式中，抗癌藥可以是細(xì)胞毒性藥物，包括本領(lǐng)域技術(shù)人員和醫(yī)學(xué)實(shí)踐者已知的那些藥物。示范性抗癌劑包括拓?fù)洚悩?gòu)酶I抑制劑、長(zhǎng)春花生物堿、烷化劑(包含鉑化合物)、紫杉烷和本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其它藥劑。

在一些實(shí)施方式中，抗癌藥可以是拓?fù)洚悩?gòu)酶I抑制劑，例如，但不限于拓?fù)涮婵?、依立替康等?br>
抗癌藥也可以是長(zhǎng)春花生物堿，例如，長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春花堿、長(zhǎng)春羅新、vinrodisine、脫水長(zhǎng)春花堿、脫乙酰長(zhǎng)春花堿等。

進(jìn)一步地，抗癌藥也可以是鉑化合物。鉑化合物的非限制性例子包括biplatin、順鉑、卡鉑、奧馬鉑、奧沙利鉑、折尼鉑、恩洛鉑、洛鉑、螺鉑等。

奧沙利鉑(反-1-1，2-二氨基環(huán)己烷的鉑(II)順-草酸基絡(luò)合物)是具有下示式子表示的結(jié)構(gòu)的鉑絡(luò)合物，更具體地是有機(jī)鉑絡(luò)合物。也已知奧沙利鉑為下列二氨基環(huán)己烷鉑、DACH-鉑、和順-[(1R，2R)-1，2- 環(huán)己烷二胺-N，N′][草酸基(2)-O，O’]鉑(C8Hi4N2O4Pt；MW 397.4g/mol)。如前所指出，奧沙利鉑是EloxatinTM中的活性藥物組分。


奧沙利鉑作為抗腫瘤劑是有用的，因?yàn)樗哂蓄愃朴陧樸K的治療活性和相對(duì)低的腎毒性和化療所致嘔吐(嘔吐)。奧沙利鉑的生產(chǎn)方法是本領(lǐng)域公知的(例如，在JP-A-9-40685；美國(guó)專利4,169,846；5,338,874；5,959,133；5,298,642；和5,290,961(其公開內(nèi)容以整體并入本文)。奧沙利鉑在Chaney SG et at.″Recognition and processing ofcisplatin-and oxaliplatin-DNA adducts.″Crit Rev Oncol Hematol.(2005)533-11中被進(jìn)一步描述(整體并入本文作為參考)。

在一些實(shí)施方式中，包封在脂質(zhì)體中的奧沙利鉑的濃度是約1mg/ml，例如，約0.8mg/ml。

一般地，本發(fā)明的脂質(zhì)體組合物包含約1至約50μg奧沙利鉑/mg脂類和約1至約150μg TF/mg脂類。例如，約10至約50μg奧沙利鉑/mg脂類和約10至約150μg TF/mg脂類。

在一些實(shí)施方式中，組合物包含約1至約45μg奧沙利鉑/mg脂類，約1至約40μg奧沙利鉑/mg脂類，約1至約35μg奧沙利鉑/mg脂類，約1至約30μg奧沙利鉑/mg脂類，約1至約25μg奧沙利鉑/mg脂類，約1至約20μg奧沙利鉑/mg脂類，約1至約15μg奧沙利鉑/mg脂類，約1至約10μg奧沙利鉑/mg脂類，約1至約5μg奧沙利鉑/mg脂類，約5至約50μg奧沙利鉑/mg脂類，約5至約45μg奧沙利鉑/mg脂類，約5至約35μg奧沙利鉑/mg脂類，約5至約25μg奧沙利鉑/mg脂類，約5至約20μg奧沙利鉑/mg脂類，約5至約15μg奧沙利鉑/mg脂類，約5至約10μg奧沙利鉑/mg脂類，約1μg奧沙利鉑/mg脂類，約2μg奧沙利鉑/mg脂類，約4μg奧沙利鉑/mg脂類，約5μg奧沙利鉑/mg脂類，約10μg奧沙利鉑/mg脂類，約15μg奧沙利鉑/mg脂類，約20μg奧沙利鉑/mg脂類，約30μg奧沙利鉑/mg脂類，約40μg奧沙利鉑/mg脂類，約50μg奧沙利鉑/mg脂類。

在一些實(shí)施方式中，組合物包含約1至約145μgTF/mg脂類，約1至約120μg TF/mg脂類，約1至約11 5μg TF/mg脂類，約1至約100μg TF/mg脂類，約1至約90μg TF/mg脂類，約1至約70μgTF/mg脂類，約1至約60μg TF/mg脂類，約1至約50μg TF/mg脂類，約1至約25μgTF/mg脂類，約10至約150μgTF/mg脂類，約10至約140μg TF/mg脂類，約10至約125μgTF/mg脂類，約10至約100μgTF/mg脂類，約10至約80μg TF/mg脂類，約10至約50μg TF/mg脂類，約10至約25μgTF/mg脂類，約1μg TF/mg脂類，約5μg TF/mg脂類，約10μg TF/mg脂類，約25μg TF/mg脂類，約40μg TF/mg脂類，約50μg TF/mg脂類，約70μg TF/mg脂類，約100μg TF/mg脂類，約120μg TF/mg脂類，約140μg TF/mg脂類，或約150μg TF/mg脂類。

在一些實(shí)施方式中，約0.5至約50μg奧沙利鉑/mg脂類和約1至約150μgTF/mg脂類。在一些實(shí)施方式中，約5至約50μg奧沙利鉑/mg脂類和約10至約100μgTF/mg脂類。在一些實(shí)施方式中，約2至約50μg奧沙利鉑/mg脂類和約5至約150μg TF/mg脂類；約3至約50μg奧沙利鉑/mg脂類和約5至約150μg TF/mg脂類；約4至約50μg奧沙利鉑/mg脂類和約5至約150μg TF/mg脂類；約2至約40μg奧沙利鉑/mg脂類和約5至約150μgTF/mg脂類；約3至約40μg奧沙利鉑/mg脂類和約5至約150μg TF/mg脂類；約4至約40μg奧沙利鉑/mg脂類和約5至約150μgTF/mg脂類；約2至約50μg奧沙利鉑/mg脂類和約10至約150μg TF/mg脂類；約3至約50μg奧沙利鉑/mg脂類和約10至約150μgTF/mg脂類；約4至約50μg奧沙利鉑/mg脂類和約10至約150μg TF/mg脂類；約5至約50μg奧沙利鉑/mg脂類和約5至約100μg TF/mg脂類；約5至約50μg奧沙利鉑/mg脂類和約5至約100μg TF/mg脂類；或約0.5至約50μg奧沙利鉑/mg脂類和約5至約100μg TF/mg脂類。

在一些實(shí)施方式中，脂質(zhì)體制劑中的奧沙利鉑濃度是0.8+/-10％mg/ml。

在一些實(shí)施方式中，藥物是奧沙利鉑時(shí)，奧沙利鉑可以溶解在溶液中(例如，水溶液)。在一些實(shí)施方式中，溶液包括糖(例如，海藻糖、麥芽糖、蔗糖、乳糖、甘露糖、甘露醇、甘油、葡萄糖、果糖等)。糖的濃度可以是幾個(gè)百分?jǐn)?shù)。例如，糖濃度(v/v)是約0.1-12％、0.5-12％、1％-12％、2％-8％、2％-6％、2％-5％、2％-4％、2％-5％、2％-6％、2％-8％、2％-9％、2％-10％、4％-10％、4％-9％、4％-8％、4％-6％、3％-4％、約2％、約3％、約4％、約5％、約6％、約7％、約8％、約9％或約10％。在一些實(shí)施方式中，溶液包括糖并且是含水的。意圖在于，奧沙利鉑溶解于其中的溶液也可以包含其它成分，包括技術(shù)人員已知的那些成分。

在一些實(shí)施方式中，糖濃度是約5％、約7％、約8％、約9％或約10％。在其它實(shí)施方式中，糖濃度是約5％至約10％。在一些實(shí)施方式中，糖是葡萄糖并且奧沙利鉑溶液中的葡萄糖的濃度是約5％。在一些實(shí)施方式中，糖是葡萄糖并且奧沙利鉑溶液中的葡萄糖的濃度是約9％。在一些實(shí)施方式中，糖是葡萄糖并且奧沙利鉑溶液中的葡萄糖的濃度是約9％。在一些實(shí)施方式中，糖是葡萄糖并且奧沙利鉑溶液中的葡萄糖的濃度是約10％。

在一些實(shí)施方式中，溶液中的糖濃度可以是，例如，約50mg/ml至約150mg/ml、約50mg/ml至約130mg/ml、約50mg/ml至約120mg/ml、約50mg/ml至約100mg/ml、約80mg/ml至約100mg/ml、約90mg/ml至約150mg/ml、約90mg/ml至約130mg/ml、約60mg/ml、約80mg/ml、約90mg/ml、約100mg/ml、約110mg/ml、約105mg/ml、約120mg/ml或約140mg/ml。

溶液也包含本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其它成分，如同但不限于鹽、緩沖液、糖醇等。在一些實(shí)施方式中，奧沙利鉑溶解于其中的溶液包含磷酸鈉(例如，磷酸氫二鈉和/或磷酸二氫鈉)。

在一些實(shí)施方式中，磷酸鈉的濃度可以是約5至約15mM。例如，約5至約12mM、約5至約10mM、約5至約7mM、約7至約12mM、約7至約151mM、約9至約12mM、約5mM、約7mM、約10mM、約12mM或約15mM。

在一些實(shí)施方式中，糖溶液還可以包含約1.0至約1.5mg/ml磷酸鈉。例如，約1.2至約1.5mg/ml、1.0至約1.7mg/ml、1.0至約2mg/ml、1.0至約2.5mg/ml、1.0至約3mg/ml、0.5至約3.5mg/ml磷酸鈉。

在一些實(shí)施方式中，溶液pH值將是約6.5至約7.5、約6.7至約7.5、約7至約7.5、約7、約7.5、約6.8、或約6.5。

在一些實(shí)施方式中，藥物是奧沙利鉑，并且其包含在約9％蔗糖溶液中。在一些實(shí)施方式中，藥物是奧沙利鉑，并且其包含在約9％蔗糖溶液中，奧沙利鉑濃度是約1mg/ml。在一些實(shí)施方式中，藥物是奧沙利鉑，并且其包含在約105mg/ml蔗糖溶液中。在一些實(shí)施方式中，藥物是奧沙利鉑，并且其包含在約105mg/ml蔗糖溶液中，脂質(zhì)體中的奧沙利鉑濃度是約1mg/ml。在這些實(shí)施方式中的一些中，溶液還包含磷酸鈉。在一些實(shí)施方式中，奧沙利鉑的濃度為脂質(zhì)體溶液的約0.8+/-10％mg/ml。
標(biāo)記化合物
多種標(biāo)記化合物也可以包含在本發(fā)明的含脂類組合物中。一般地，標(biāo)記化合物可以是用于進(jìn)行體內(nèi)診斷方法的藥劑。

對(duì)于本文所述藥物的摻入和應(yīng)用，考慮到本文提供的教導(dǎo)和根據(jù)所選的標(biāo)記化合物和組合物或制劑的意圖應(yīng)用，考慮到特異于標(biāo)記化合物和待診斷個(gè)體的因素，如本文進(jìn)一步所述，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以容易地確定包含在如本文所述的含脂類組合物及其制劑中的標(biāo)記化合物的量。

示范性標(biāo)記化合物包括，例如，包括放射性同位素(例如，3H、14C、67Ga、111In、125I、131I、133Xe等)的物質(zhì)，包括熒光部分(例如，熒光黃，熒光素異硫氰酸酯等)的物質(zhì)，包括酶(例如，過氧化物酶、堿性磷酸酶等)的物質(zhì)，以及本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其它標(biāo)記化合物。

如技術(shù)人員將理解，對(duì)診斷中應(yīng)用的標(biāo)記化合物和方法的選擇將取決于待研究的器官(例如，肝臟、胰腺、前列腺等)、組織(例如，惡性或非惡性或組織類型(例如，乳腺等))。例如，摻入125I的含脂類組合物(例如，靶向脂質(zhì)體、含脂質(zhì)體組合物等)在利用γ計(jì)數(shù)器鑒定各種癌癥(例如，乳腺癌、胃癌、結(jié)腸直腸癌、結(jié)腸癌等)的存在和確定其嚴(yán)重程度(例如，起初，在療程期間，治療后)中特別有用。
靶向因子
如果沒有另外指出，術(shù)語″靶向因子″和″靶向配體″在本文中可以互換應(yīng)用。

通過摻入用針對(duì)特定靶細(xì)胞的靶向因子修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺(即，TF-NωPE)，本文所述的含脂類組合物得到表征。術(shù)語″靶向因子″是指能夠結(jié)合于靶細(xì)胞表面上存在的受體或表面抗原的部分。在一些實(shí)施方式中，靶向因子針對(duì)特定靶細(xì)胞上的細(xì)胞表面受體。靶向因子常常是能夠與含脂類組合物的脂類成分連接的蛋白質(zhì)或肽。

最有效地，選擇靶向因子以至于靶向受體或抗原僅存在于被靶向以進(jìn)行輸送藥物或標(biāo)記化合物的細(xì)胞(例如，致病細(xì)胞)上并且不存在于健康細(xì)胞上?？蛇x地，相比于非靶(例如，健康)細(xì)胞，數(shù)量更多的受體或抗原在靶細(xì)胞(例如，致病細(xì)胞或患病細(xì)胞)上表達(dá)。優(yōu)選地，結(jié)合靶向因子的受體或抗原不存在于健康細(xì)胞上或以少數(shù)存在于健康細(xì)胞上，以至于與靶向因子的結(jié)合不頻繁發(fā)生。換言之，靶向因子需要選擇性輸送本文所述的脂質(zhì)體(包含包封藥物)到達(dá)靶細(xì)胞(例如，致病的、不健康的細(xì)胞等)。包封藥物向靶細(xì)胞的選擇性輸送從而降低了不利效應(yīng)的發(fā)生，原因是包封藥物或標(biāo)記化合物對(duì)非靶向(例如，健康)細(xì)胞的作用降低，因而也降低給予組合物或其制劑的個(gè)體所經(jīng)歷的不利效應(yīng)。

示范性靶向因子包括但不限于，轉(zhuǎn)鐵蛋白、葉酸、葉酸鹽、透明質(zhì)酸、糖鏈(例如，半乳糖、甘露糖等)、單克隆抗體片段、脫唾液酸糖蛋白等、以及技術(shù)人員已知的其它靶向因子。

在特定實(shí)施方式中，靶向因子是針對(duì)表面受體的蛋白質(zhì)或肽(例如，轉(zhuǎn)鐵蛋白、葉酸鹽、葉酸、無唾液酸糖蛋白等)。

在其它實(shí)施方式中，靶向因子是針對(duì)抗原的(例如，單克隆抗體片段(例如Fab，F(xiàn)ab′，F(xiàn)(ab′)2，F(xiàn)c等))。靶向因子不意圖于包括完整的或全單克隆抗體。如本文所使用，術(shù)語″全抗體(whole antibody)″或″完整抗體(intact antibody)″及其同源詞，一般是指抗體免疫球蛋白IgG。單克隆抗體片段一般是指單克隆抗體的分解產(chǎn)物，例如，應(yīng)用蛋白酶如胃蛋白酶等的消化得到的片段。

在一些實(shí)施方式中，靶向因子不針對(duì)抗原(例如，不是單克隆抗體片段，例如，F(xiàn)ab，F(xiàn)ab′，F(xiàn)(ab′)2，F(xiàn)c等)。

在一些實(shí)施方式中，靶向因子是轉(zhuǎn)鐵蛋白。

轉(zhuǎn)鐵蛋白(Tf)是鐵結(jié)合蛋白，分子量為80,000，其在肝細(xì)胞中合成開且在血液中發(fā)現(xiàn)。轉(zhuǎn)鐵蛋白通過各個(gè)細(xì)胞表面的Tf受體將鐵(Fe)供給細(xì)胞。相比于正常組織，轉(zhuǎn)鐵蛋白受體一般在腫瘤組織中的表達(dá)量更大，不論腫瘤類型如何。已知腫瘤細(xì)胞膜過表達(dá)轉(zhuǎn)鐵蛋白受體以便維持細(xì)胞增殖。參見Shindelman JE，Ortmeyer AE，Sussman HH.″Demonstration of the transferrin receptor in human breast cancer tissue.Potential marker for identifying dividing cells.″Int J Cancer.(1981)27(3)329-34；Lloyd JM，O′Dowd T，Driver M，Tee DE.″Demonstration ofan epitope of the transferrin receptor in human cervical epithelium-apotentially useful cell marker.″J Clin Pathol.(1984)37(2)131-5和Habeshaw JA，Lister TA，Stansfeld AG，Greaves MF.″Correlation oftransferrin receptor expression with histological class and outcome in non-Hodgl

n lymphoma.″Lancet.(1983)1(8323)498-501。治療劑和轉(zhuǎn)鐵蛋白結(jié)合從而將增強(qiáng)藥物通過轉(zhuǎn)鐵蛋白受體攝入腫瘤細(xì)胞。雖然不意圖限于作用機(jī)制，本文所述的轉(zhuǎn)鐵蛋白脂質(zhì)體的可能的攝入途徑在圖2和3中示意性表示。轉(zhuǎn)鐵蛋白可以經(jīng)商業(yè)途徑得到，或者可以重組產(chǎn)生，如例如，美國(guó)專利5,026,651所述，其整體并入本文作為參考。

雖然不受限于理論，認(rèn)為轉(zhuǎn)鐵蛋白(Tf)與NωPE的偶聯(lián)通過伯胺與NωPE的反應(yīng)而發(fā)生，所述反應(yīng)使得脂質(zhì)錨和蛋白質(zhì)之間形成羧酸酰胺。

在一些實(shí)施方式中，靶向脂質(zhì)體產(chǎn)物中存在的Tf與總脂類的摩爾比是約0.00014∶1mol/mol(Tf∶總脂類)(0.015，wt/wt)。在其它實(shí)施方式中，Tf∶總脂類的摩爾比是約0.016至約0.029∶約126至約158mM/mM。
含脂類組合物
本文所述的含脂類組合物包括靶向脂質(zhì)體，其摻入了衍生化脂類、其它脂類和包封藥物或標(biāo)記化合物，以及用于制備靶向脂質(zhì)體的中間體，其包括脂類混合物和含脂類組合物，如本文所述，其中含脂類組合物(包含靶向脂質(zhì)體)不含非衍生化磷脂酰乙醇胺和親水聚合物，如同但不限于聚乙二醇。含脂類組合物也包括摻入TF但不包含藥物或標(biāo)記化合物的脂質(zhì)體(例如，空白脂質(zhì)體)。

如本文所用，術(shù)語″親水聚合物(hydrophilic polymer)″及其同源詞，是指聚合物如聚乙二醇(PEG)以及其它聚乙氧基化聚合物，所述聚合物用于脂質(zhì)體領(lǐng)域以屏蔽脂質(zhì)體，目的是增強(qiáng)脂質(zhì)體的循環(huán)半衰期。該術(shù)語意圖包括與脂質(zhì)體非共價(jià)連接的游離親水聚合物以及以某種方式與脂質(zhì)體的特定組分偶聯(lián)或共價(jià)連接的親水聚合物(例如，PEG-修飾的脂類等)。在本領(lǐng)域中，這種親水聚合物也可選地指″水溶性″聚合物。其它示范性親水性聚合物包括但不限于聚乙烯醇、聚乳酸、聚羥基乙酸(polyglycolic acid)、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酰胺、聚甘油、polyaxozlines等。

如本文所用，術(shù)語″脂類混合物″及其同源詞，是指本文所述脂類成分的混合物，其中脂類混合物不摻入溶液，例如，水溶液(例如，水、緩沖液或水和易混合水的溶劑(例如，糖(例如，海藻糖、蔗糖、乳糖、甘露糖、葡萄糖、果糖等)、糖醇(例如，山梨糖醇、麥芽糖醇、乳糖醇、甘油、甘露醇等)、醇(例如，乙醇、叔丁醇等)等))或有機(jī)溶劑的混合物。

術(shù)語″含脂類組合物″及其同源詞，是指脂類和任選地藥物(一種或多種)或標(biāo)記化合物(一種或多種)的混合物，其中已經(jīng)通過混合(例如，攪拌、振蕩等中的一種或多種)摻入了水溶液(例如，水、緩沖液(例如，乙酸鹽緩沖液、磷酸鹽緩沖液、檸檬酸鹽緩沖液、硼酸鹽緩沖液、酒石酸鹽緩沖液等)或水和易混合水的溶劑的混合物)。水溶液也可以包含其它成分，如一種或多種糖(例如海藻糖、麥芽糖、蔗糖、乳糖、甘露糖、葡萄糖、果糖等)、糖醇(例如，山梨糖醇、麥芽糖醇、乳糖醇、甘露醇、甘油等)、醇(例如，乙醇、叔丁醇等)等。水溶液也可以包含有機(jī)溶劑((例如，酯(例如，乙酸乙酯、乙酸丁酯)、脂肪烴(例如，己烷、庚烷等)、芳香烴(例如，甲苯、二甲苯等)、鹵代烴(例如，氯仿、二氯甲烷、二氯乙烷等)、醚(例如，THF、二烷、二乙醚、異丙醚等)、環(huán)烴(例如，環(huán)己烷等)、DMF、DMSO等)或它們的混合物)。含脂質(zhì)體組合物一般會(huì)含有脂類、水溶液和在100-10,000nm間廣泛分布并且平均直徑為500-2,000nm的脂質(zhì)體的非均一混合物。示范性含脂質(zhì)體組合物的表征在實(shí)施例中進(jìn)一步提供。

在一些實(shí)施方式中，含脂類組合物不摻入親水聚合物。在特定實(shí)施方式中，含脂類組合物不摻入PEG。

在一些實(shí)施方式中，中間體脂類混合物包括至少兩種不同的中性脂類或一種或多種磷脂，和N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺，其中所述脂類組分在本文中更詳細(xì)描述并且其中所述混合物不含非衍生化磷脂酰乙醇胺和親水聚合物如聚乙二醇。任選地，本文所述的水溶液可以與脂類成分混合，形成含脂質(zhì)體組合物。在一些實(shí)施方式中，脂類混合物不包括約物或標(biāo)記化合物。在特定實(shí)施方式中，脂類混合物可以被處理以形成含脂類組合物或脂質(zhì)體制劑。

在一些實(shí)施方式中，中間體脂類混合物包括至少兩種不同的中性脂類或一種或多種磷脂、N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺和藥物或標(biāo)記化合物，其中所述脂類組分和藥物/標(biāo)記化合物在本文中更詳細(xì)描述并且其中混合物不含非衍生化磷脂酰乙醇胺和親水聚合物如聚乙二醇。任選地，本文所述的水溶液可以與脂類成分混合，形成含脂質(zhì)體組合物，例如，當(dāng)藥物或標(biāo)記化合物作為藥物/標(biāo)記化合物的水溶液加入時(shí)。在一些實(shí)施方式中，含脂質(zhì)體組合物可以被處理(例如，通過擠出、大小排阻層析等或本領(lǐng)域中的方法中的一種或多種)，形成脂質(zhì)體。

在一些實(shí)施方式中，脂類混合物包括一種或多種磷脂或至少兩種不同的中性脂類、N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺和N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯，其中脂類組分在本文中更詳細(xì)描述并且其中混合物不含非衍生化磷脂酰乙醇胺和親水聚合物如聚乙二醇?；旌衔镆部梢曰旧喜缓cN-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯的合成有關(guān)的非-NHS起始物質(zhì)、副產(chǎn)物和/或分解產(chǎn)物(例如，碳二酰亞胺(例如，DCC，EDC等)、?；寤衔锏?。任選地，本文所述的水溶液可以與脂類成分混合，形成含脂質(zhì)體組合物。

在一些實(shí)施方式中，中間體脂類混合物包括一種或多種磷脂或至少兩種不同的中性脂類、N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺和靶向因子修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺，其中脂類組分在本文中更詳細(xì)描述并且其中混合物不含非衍生化磷脂酰乙醇胺和親水聚合物如聚乙二醇?；旌衔镆部梢曰旧喜缓cN-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯的合成有關(guān)的非-NHS起始物質(zhì)、副產(chǎn)物和/或分解產(chǎn)物(例如，碳二酰亞胺(例如，DCC，EDC等)、酰基化脲化合物等)。任選地，本文所述的水溶液可以與脂類成分混合，形成含脂質(zhì)體組合物。在一些實(shí)施方式中，脂類混合物不包含藥物或標(biāo)記化合物。脂類混合物可以被處理，形成含脂質(zhì)體組合物或脂質(zhì)體制劑。

在一些實(shí)施方式中，中間體脂類混合物包括一種或多種磷脂或至少兩種不同的中性脂類、N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺和N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯和藥物或標(biāo)記化合物，其中脂類和/或標(biāo)記化合物組分在本文中更詳細(xì)描述并且其中組合物不含非衍生化磷脂酰乙醇胺和親水聚合物如聚乙二醇。混合物也可以基本上不含與N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯的合成有關(guān)的非-NHS起始物質(zhì)、副產(chǎn)物和/或分解產(chǎn)物(例如，碳二酰亞胺(例如，DCC，EDC等)、?；寤衔锏?。任選地，本文所述的水溶液可以與脂類成分混合，形成含脂質(zhì)體組合物。

在一些實(shí)施方式中，含中間體脂類的組合物包括脂質(zhì)體，其含有一種或多種磷脂或至少兩種不同的中性脂類、N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺和N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯和包封藥物，其中脂類和藥物組分在本文中更詳細(xì)描述并且其中脂質(zhì)體不含非衍生化磷脂酰乙醇胺和親水聚合物如聚乙二醇。脂質(zhì)體也可以基本上不含與N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯的合成有關(guān)的非-NHS起始物質(zhì)、副產(chǎn)物和/或分解產(chǎn)物(例如，碳二酰亞胺(例如，DCC，EDC等)、?；寤衔锏?。在一些實(shí)施方式中，脂類混合物不包含藥物或標(biāo)記化合物。脂類混合物可以被處理，形成含脂質(zhì)體組合物或脂質(zhì)體制劑。

在一些實(shí)施方式中，脂類混合物包括一種或多種磷脂或至少兩種不同的中性脂類、N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺、靶向因子修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺和包封藥物或標(biāo)記化合物，其中脂類、靶向因子和藥物/標(biāo)記化合物組分在本文中更詳細(xì)描述并且其中脂質(zhì)體不含非衍生化磷脂酰乙醇胺和親水聚合物如聚乙二醇。在脂類混合物的一些實(shí)施方式中，脂質(zhì)體基本上不含與N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯的合成有關(guān)的非-NHS起始物質(zhì)、副產(chǎn)物和/或分解產(chǎn)物(例如，碳二酰亞胺(例如，DCC，EDC等)、?；寤衔锏?。在特定實(shí)施方式中，脂類混合物是含脂質(zhì)體組合物(例如，當(dāng)藥物或標(biāo)記混合物作為水溶液加入時(shí))。任選地，本文所述的水溶液可以與脂類成分混合，形成含脂質(zhì)體組合物。

在一些實(shí)施方式中，靶向脂質(zhì)體包括這樣的脂質(zhì)體，其含有一種或多種磷脂或至少兩種不同的中性脂類、N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺和靶向因子修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺和包封藥物或標(biāo)記化合物，其中脂類、靶向因子和藥物或標(biāo)記化合物組分在本文中更詳細(xì)描述并且其中脂質(zhì)體不含非衍生化磷脂酰乙醇胺和親水聚合物如聚乙二醇。在靶向脂質(zhì)體的一些實(shí)施方式中，脂質(zhì)體基本上不含與N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯的合成有關(guān)的非-NHS起始物質(zhì)、副產(chǎn)物和/或分解產(chǎn)物(例如，碳二酰亞胺(例如，DCC，EDC等)、?；寤衔锏?。然而，在一些實(shí)施方式中，N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯可以在靶向脂質(zhì)體制備的起始階段存在(例如，NHS-NG-PEs(例如，NHS-NG-DOPE，NHS-NG-DSPE等)，例如，在琥珀酰亞胺酯水解前，其在最終制劑中可以產(chǎn)生，例如，NHS和NG-DOPE。在一些實(shí)施方式中，當(dāng)SuccNωPE不摻入脂質(zhì)體內(nèi)部時(shí)，脂質(zhì)體或含脂質(zhì)體組合物也可以不含或基本上不含NHS，如TF-NωPE被預(yù)先形成和用作起始物質(zhì)時(shí)。在特定實(shí)施方式中，靶向脂質(zhì)體基本上不含DCC和EDC。在一些實(shí)施方式中，靶向脂質(zhì)體基本上不含DCC。

另外，可以對(duì)本文所述的任一含脂質(zhì)體組合物進(jìn)行處理，產(chǎn)生脂質(zhì)體。脂質(zhì)體的產(chǎn)生是本領(lǐng)域公知的，并且可以根據(jù)本文所述的方法實(shí)現(xiàn)，例如，如下文更詳細(xì)描述的生產(chǎn)方法A和B中。從含脂質(zhì)體組合物產(chǎn)生脂質(zhì)體的生產(chǎn)方法包括但不限于擠出、超聲、反相囊泡、凍融、大小排阻層析、超濾等和它們的組合。從本文所述的含脂質(zhì)體組合物形成的脂質(zhì)體可以摻入藥物或標(biāo)記化合物或可以不含藥物或標(biāo)記化合物(例如，對(duì)于也在本文中稱為″空白脂質(zhì)體″的脂質(zhì)體)。在特定實(shí)施方式中，含脂質(zhì)體組合物、脂質(zhì)體(包括空白脂質(zhì)體)和靶向脂質(zhì)體可以制備為藥物制劑，此外，可以用在本文所述的治療或診斷方法和/或試劑盒中。

術(shù)語″基本上不含″是指通過本領(lǐng)域中使用的常規(guī)分析方法，物質(zhì)的水平不可檢測(cè)或最低程度地被檢測(cè)。例如，HPLC(參見，例如，European Phmaracopoeia 5thEd.)、TLC、氣相色譜等，以及其它本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其它分析方法。

例如，含脂類組合物可以包含按重量計(jì)約0.1％以下、約0.5％以下、約1％以下、約2％以下、約3％，以下、約4％以下、約5％以下或約6％以下的與N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯的合成有關(guān)的特定起始物質(zhì)、副產(chǎn)物或分解產(chǎn)物比總脂類含量。在特定實(shí)施方式中，組合物含有約10％以下、約7％以下、約5％以下、約3％以下、約2％或約1％以下的總雜質(zhì)(例如，與N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯的合成有關(guān)的特定起始物質(zhì)、副產(chǎn)物和分解產(chǎn)物的總數(shù)百分?jǐn)?shù))。

在一些實(shí)施方式中，靶向脂質(zhì)體包括這樣的脂質(zhì)體，其含有磷脂酰膽堿(例如，中性、帶負(fù)電荷或正電荷)、膽固醇或膽固醇衍生物、N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺、靶向因子修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺和包封藥物或標(biāo)記化合物，其中脂類、靶向因子和藥物組分在本文中更詳細(xì)描述并且其中脂質(zhì)體不含非衍生化磷脂酰乙醇胺和親水聚合物如聚乙二醇。在特定實(shí)施方式中，磷脂酰膽堿是中性磷脂酰膽堿。

在一些實(shí)施方式中，靶向脂質(zhì)體包括這樣的脂質(zhì)體，其含有磷脂酰膽堿(例如，中性、陰離子或陽離子)、膽固醇或膽固醇衍生物、N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺、轉(zhuǎn)鐵蛋白修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺和包封藥物或標(biāo)記化合物，其中脂類組分和藥物或標(biāo)記化合物組分在本文中更詳細(xì)描述并且其中脂質(zhì)體不含非衍生化磷脂酰乙醇胺和親水聚合物如聚乙二醇。在特定實(shí)施方式中，磷脂酰膽堿是中性磷脂酰膽堿。

在特定實(shí)施方式中，靶向脂質(zhì)體包括這樣的脂質(zhì)體，其含有磷脂酰膽堿(例如，中性、陰離子或陽離子磷脂酰膽堿)、膽固醇或膽固醇衍生物、N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺、轉(zhuǎn)鐵蛋白修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺和包封的奧沙利鉑，其中脂類組分在本文中更詳細(xì)描述并且其中脂質(zhì)體不含非衍生化磷脂酰乙醇胺和親水聚合物如聚乙二醇。在特定實(shí)施方式中，磷脂酰膽堿是中性磷脂酰膽堿。

在一些實(shí)施方式中，本文所述的含脂類組合物(包括靶向脂質(zhì)體和空白脂質(zhì)體)及其制劑還可以包含通過用二羧酸衍生化磷脂酰甘油、鞘氨醇、神經(jīng)酰胺、膽固醇衍生物或類似物而得到的脂類。這些二羧酸衍生物可以如本文對(duì)N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺所述制備和根據(jù)技術(shù)人員已知的方法制備。

在一些實(shí)施方式中，本文所述的含脂類組合物(包括靶向脂質(zhì)體和空白脂質(zhì)體)及其制劑不包含陰離子脂類(例如，磷脂酰絲氨酸、磷脂酰肌醇(phosphatidylinsitosols)、磷脂酰甘油等)或陽離子脂類(例如，鞘氨醇、DOTAP、DOTMA、DC-CHOL等)。在特定實(shí)施方式中，組合物不包含陰離子脂類。在其它實(shí)施方式中，組合物不包含陽離子脂類。在一些實(shí)施方式中，組合物不包含陽離子和陰離子脂類。

在一些實(shí)施方式中，含脂類組合物，組合物包括藥物。在其它實(shí)施方式中，含脂類組合物包括標(biāo)記化合物。

在含脂類組合物的一些實(shí)施方式中，藥物是奧沙利鉑，靶向因子(TF)是轉(zhuǎn)鐵蛋白(Tf)并且脂類組分包含DMPC或DSPC，和膽固醇或膽固醇衍生物，和N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺，和轉(zhuǎn)鐵蛋白修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺，其中轉(zhuǎn)鐵蛋白修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺包括通過羧酸酰胺鍵與N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺連接的轉(zhuǎn)鐵蛋白。

在一些實(shí)施方式中，N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺和靶向因子修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺是NG-DOPE或NG-DSPE。

在特定實(shí)施方式中，含脂類組合物中的脂類組分是DMPC、膽固醇、NG-DOPE和TF-修飾的NG-DOPE。在其它實(shí)施方式中，脂類組分是DSPC、膽固醇、NG-DOPE和TF-修飾的NG-DOPE。在其它實(shí)施方式中，脂類組分是DMPC、膽固醇、NG-DSPE和TF-修飾的NG-DSPE。在一些其它實(shí)施方式中，脂類組分是DSPC、膽固醇、NG-DSPE和TF-修飾的NG-DSPE。在這些實(shí)施方式中的一些中，靶向因子(TF)是轉(zhuǎn)鐵蛋白，藥物是奧沙利鉑。

在特定實(shí)施方式中，脂類組分是DPPC、膽固醇、NG-DOPE和TF-修飾的NG-DOPE。在其它實(shí)施方式中，脂類組分是POPC、膽固醇、NG-DOPE和TF-修飾的NG-DOPE。在其它實(shí)施方式中，脂類組分是DPPC、膽固醇、NG-DSPE和TF-修飾的NG-DSPE。在一些其它實(shí)施方式中，脂類組分是POPC、膽固醇、NG-DSPE和TF-修飾的NG-DSPE。在這些實(shí)施方式中的一些中，靶向因子(TF)是轉(zhuǎn)鐵蛋白，藥物是奧沙利鉑。

在特定實(shí)施方式中，脂類組分是HSPC、膽固醇、NG-DOPE和TF-修飾的NG-DOPE。在其它實(shí)施方式中，脂類組分是EPC、膽固醇、NG-DOPE和TF-修飾的NG-DOPE。在其它實(shí)施方式中，脂類組分是HSPC、膽固醇、NG-DSPE和TF-修飾的NG-DSPE。在一些其它實(shí)施方式中，脂類組分是EPC、膽固醇、NG-DSPE和TF-修飾的NG-DSPE。在這些實(shí)施方式中的一些中，靶向因子(TF)是轉(zhuǎn)鐵蛋白，藥物是奧沙利鉑。
脂類組分的比例
一般地，起始物質(zhì)NG-DOPE的摩爾百分?jǐn)?shù)將是約2.5摩爾％至約4.5摩爾％，這是相比于總脂類含量而言的。另外，起始物質(zhì)NHS-NG-DOPE的摩爾百分?jǐn)?shù)將是約0.5摩爾％至約2.5摩爾％，這是相比于總脂類含量而言的。在一些實(shí)施方式中，NG-DOPE與NHS-NG-DOPE的相對(duì)摩爾比將是約3.4∶1。在一些實(shí)施方式中，NG-DOPE與NHS-NG-DOPE的相對(duì)摩爾比可以是約4∶1。在特定實(shí)施方式中，當(dāng)中性磷脂和中性脂類存在時(shí)，摩爾比(例如，DMPC∶Chol∶NG-DOPE∶NHS-NG-DOPE)可以是43.0∶38.5∶3.42∶1，也可以按摩爾百分?jǐn)?shù)計(jì)表示為50∶45∶4∶1。

在一些實(shí)施方式中，其它脂類比NωPE比SuccNωPE的相對(duì)摩爾百分?jǐn)?shù)(例如，至少兩種中性脂類NωPE∶SuccNωPE或一種或多種磷脂NωPE∶SuccNωPE或(一種或多種磷脂+中性脂類)∶NωPE∶SuccNωPE)可以是約98mol％至約87mol％的其它脂類∶約1mol％至約12mol％NωPE∶約0.5mol％至約1％SuccNωPE；其中所有組分的總摩爾百分?jǐn)?shù)是100mol％。例如，其它脂類NωPE∶SuccNωPE可以是約95∶4∶1、90∶9∶1、92∶7∶1、93∶6∶1等。

在特定實(shí)施方式中，當(dāng)其它脂類包括磷脂和另一脂類如膽固醇、膽固醇衍生物等時(shí)，每一脂類組分的摩爾百分?jǐn)?shù)范圍是約30mol％至約64％，其中其它脂類的總數(shù)是約98mol％至約87mol％。

在一些實(shí)施方式中，當(dāng)其它脂類是兩種不同的中性脂類時(shí)，每一中性脂類的摩爾百分?jǐn)?shù)范圍是約30mol％至約64％，其中中性脂類的總數(shù)是約98mol％至約87mol％。

在示范性實(shí)施方式中，當(dāng)一種其它脂類是磷脂酰膽堿并且第二其它脂類是膽固醇或膽固醇衍生物時(shí)，磷脂酰膽堿的摩爾百分?jǐn)?shù)范圍是約30至約70mol％，(例如，約50至約64mol％，約40至約65mol％，約40至約60mol％，約50至約62mol％，約55至約60mol％，約35至約55mol％，約30mol％，約40mol％，約45mol％，約50mol％，約55mol％，約60mol％，約65mol％，約70mol％)，并且膽固醇或膽固醇衍生物的摩爾百分?jǐn)?shù)是約30至約60mol％(例如，約32至約45mol％，約32至約42mol％，，約32至約40mol％，約40至約60mol％，約35至約55mol％，約35至約60mol％，約45至約60mol％，約35至約45mol％，約30mol％，約35mol％，約40mol％，約45mol％，約50mol％，約55mol％或約60mol％)。在一些實(shí)施方式中，磷脂酰膽堿是約50mol％，約52mol％，約55mol％，約58mol％，約60mol％，約62mol％，并且膽固醇或膽固醇衍生物是約30mol％，約32mol％，約34mol％，約35mol％，約37mol％，約38mol％，約40mol％，約42mol％，約43mol％，約45mol％。

在特定實(shí)施方式中，NωPE的摩爾百分?jǐn)?shù)是約1至約11mol％，約1至約10mol％，約1至約8mol％，約1至約6mol％，約1至約5mol％，約1至約4mol％，約1至約3mol％，約1至約2mol％，約2至約10mol％，約2至約5mol％，約1mol％，約2mol％，約3mol％，約4mol％，約5mol％，約7mol％，約8mol％，約9mol％，約10mol％，約11mol％，或約12mol％。

在一些實(shí)施方式中，第一其它脂類第二其它脂類NωPE∶SuccNωPE的相對(duì)摩爾百分?jǐn)?shù)是，例如，50∶45∶4∶1。在一些實(shí)施方式中，第一其它脂類是磷脂酰膽堿(例如，DMPC、DOPC、DPPC、DSPC等)，第二其它脂類是膽固醇。在一些實(shí)施方式中，NωPE的PE是DOPE或DSPE。在特定實(shí)施方式中，NωPE是NG-DOPE或NG-DSPE。在一些實(shí)施方式中，脂類是DMPC∶Chol∶NG-DOPE∶NHS-NG-DOPE并且它們的相對(duì)摩爾百分?jǐn)?shù)是50∶45∶4∶1。在其它實(shí)施方式中，脂類是DSPC∶Chol∶NG-DSPE∶NHS-NG-DSPE并且它們的相對(duì)摩爾百分?jǐn)?shù)是50∶45∶4∶1。在其它實(shí)施方式中，脂類是DSPC∶Chol∶NG-DSPE∶NHS-NG-DSPE并且它們的相對(duì)摩爾百分?jǐn)?shù)是62∶33∶4∶1。

在一些實(shí)施方式中，NωPE和TF-NωPE(NωPE+TF-NωPE)的總摩爾百分?jǐn)?shù)是總脂類含量的約2至約13mol％。例如，約2至約12mol％，約2至約10mol％，約2至約8mol％，約2至約6mol％，約2至約4mol％，約2mol％，約3mol％，約4mol％，約5mol％，約6mol％，約7mol％，約8mol％，約9mol％，約10mol％，約11mol％或約12mol％。

一般地，TF-NωPE的總摩爾百分?jǐn)?shù)是相對(duì)于總脂類含量的約0.002至約0.2mol％。例如，在一些實(shí)施方式中，TF-NωPE的總摩爾百分?jǐn)?shù)是約0.002至約0.15mol％，TF-NωPE的總摩爾百分?jǐn)?shù)是約0.002至約0.1mol％，0.002至約0.05mol％，約0.01至約0.03mol％，約0.005至約0.2mol％，約0.007至約0.2mol％，約0.007至約0.05mol％，約0.01至約0.025mol％，約0.015至約0.025mol％，約0.01至約0.2mol％，約0.02至約0.2mol％，約0.04至約0.2mol％，約0.06至約0.2mol％，約0.08至約0.2mol％，約0.002mol％，約0.008mol％，約0.01mol％，約0.02mol％，約0.03mol％，約0.025mol％，約0.015mol％，約0.06mol％，約0.08mol％，約0.1mol％，約0.15mol％，或約0.2mol％。
脂質(zhì)體和含脂質(zhì)體組合物的表征
除了應(yīng)用組分比例表征含脂類組合物之外(例如，脂類比例、藥物/標(biāo)記化合物與脂類的比例等)，也可以應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)的分析方法表征本文所述的含脂質(zhì)體組合物(例如，物理化學(xué)性質(zhì)等)，如技術(shù)人員所理解。這些分析方法包括但不限于，適當(dāng)?shù)?，平均直徑、包封體積、凈電荷(ζ電位)、封入(即，包封)藥物的量、顆粒大小、不同條件(例如，在保存中，當(dāng)制備用于施用時(shí)，體外)下的穩(wěn)定性、滲透性質(zhì)、偶聯(lián)的靶向因子的量等的確定方法。這些特性的示范性分析方法在下文中以及實(shí)施例加以闡述出，技術(shù)人員已知的其它方法也可以用于表征組合物。

如技術(shù)人員所理解，如本領(lǐng)域常規(guī)實(shí)施的，應(yīng)用已建立的HPLC分析方法，應(yīng)用合適的對(duì)照，另外，如實(shí)施例中所述，可以確定脂質(zhì)體的藥物含量。應(yīng)用合適的對(duì)照，通過HPLC，或者對(duì)于一些藥物(例如，含鉑藥物)通過分析方法如ICP-MS(電感耦合等離子體質(zhì)譜Inductively Coupled Plasma-Mass Spectrometry)，也可以鑒定包封約物，如本領(lǐng)域技術(shù)人員所實(shí)踐。

在一些實(shí)施方式中，脂質(zhì)體或含脂質(zhì)體組合物中包封的藥物(例如，奧沙利鉑等)或標(biāo)記化合物的量可以是，在脂質(zhì)體中約0.1mg/ml至約15mg/ml。例如，藥物濃度可以是在脂質(zhì)體中約0.5mg/ml至約15mg/ml，約0.5mg/ml至約10mg/ml，約0.1mg/ml至約10mg/ml，約0.5mg/ml至約5mg/ml，約0.5mg/ml至約3mg/ml，約0.5mg/ml至約2mg/ml，約0.5mg/ml至約1.5mg/ml，約0.8mg/ml至約3mg/ml，約0.8mg/ml至約2mg/ml，約0.8mg/ml至約1.5mg/ml，約0.7mg/ml至約3mg/ml，約0.7mg/ml至約2mg/ml，約0.7mg/ml至約1.7mg/ml，約0.7mg/ml至約1.5mg/ml，約0.7mg/ml至約1.4mg/ml，約0.7mg/ml至約1.3mg/ml，約0.5mg/ml，約0.7mg/ml，約0.8mg/ml，約0.9mg/ml，約1mg/ml，約1.1mg/ml，約1.2mg/ml，約1.3mg/ml，約1.4mg/ml，約1.5mg/ml，約1.6mg/ml，約2mg/ml，約3mg/ml，約4mg/ml，約5mg/ml，約6mg/ml，約7mg/ml，約8mg/ml，約9mg/ml，約10mg/ml或約15mg/ml。

剪切面(shear plane)處的電位被稱為脂質(zhì)體的ζ電位。如技術(shù)人員已知，應(yīng)用合適的儀器，例如，通過ELS-6000(OtsukaElectronics，Japan)，應(yīng)用激光多普勒微量電泳方法或技術(shù)人員可得的其它儀器和方案，可以通過試驗(yàn)確定脂質(zhì)體的zeta電位。例如，J.Colloidand Interface Sci，39，670-675(1972)，nition.com/en/products/zeecom_s.htm等等。

在一些實(shí)施方式中，本文所述的脂質(zhì)體(包括靶向脂質(zhì)體和含脂質(zhì)體組合物的脂質(zhì)體)將表現(xiàn)出總的凈負(fù)ζ電位。在一些實(shí)施方式中，ζ電位是約-10mV至約-200mV。例如，約-50mV至約-150mV，約-50mV至約-130mV，約-60至約-120mV，約-50至約-100mV，約-75mV至約-90mV，約-80mV至約-90mV，約-80mV至約-85mV，約-85my至約-90mV，約-75mV至約-85mV，約-70mV至約-90mV，約-75mV，約-80mV，約-85mV，約-83mV，約-90mV，約-100mV，約-120mV。

靜脈注射小脂質(zhì)體之后，它們被認(rèn)為經(jīng)過肝竇狀隙的窗并且會(huì)迅速與肝細(xì)胞接觸。據(jù)認(rèn)為中等大小的脂質(zhì)體保留在血液中并且可以循環(huán)相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)間。然而，大的脂質(zhì)體更緩慢地經(jīng)過肝竇狀隙，并且被枯否氏細(xì)胞(Kupffer cells)迅速攝取。因此，脂質(zhì)體的大小對(duì)于確定體內(nèi)行為是非常重要的。參見，例如，Liu et al.Biochim.Biophys.Acta(1992)1104(1)95-101；Harashima et al，J.Drug Target.(1995)3(4)253-261；(整體并入本文作為參考)等。

應(yīng)用光子相關(guān)光譜法(PCS；動(dòng)態(tài)光散射或準(zhǔn)彈性光散射(QELS，Quasi-Elastic Light Scattering))，通過應(yīng)用各種算法，可以從相關(guān)功能獲得脂質(zhì)體的顆粒大小。通過這些技術(shù)獲得的顆粒大小比得上PCS確定的平均直徑。PCS應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)偏差和x2以描述大小分布。在PCS系統(tǒng)中，x2確定系統(tǒng)是否是單峰的(高斯分布)或是多峰的(Nicomp分布)。可以應(yīng)用強(qiáng)度加權(quán)測(cè)定(intensity weighted measurements)來確定平均粒徑，如果x2≤5，則從高斯分布報(bào)告。如果x2＞5，則從Nicomp分布中的主要的峰的均值報(bào)告。這種分析將是技術(shù)人員熟悉的，并且適于硬件，例如，Nicomp QELS Particle Sizer，PSS Model 380ZLS，S/N0103301；pssnicomp.com/zetaspec.htm。

在本文所述的脂質(zhì)體，特別是靶向脂質(zhì)體的一些實(shí)施方式中，脂質(zhì)體平均直徑將是約50至約275nm。例如，脂質(zhì)體平均直徑可以從約50至約200nm，從約50至約265nm，從約50至約250nm，從約50至約225nm，從約50至約175mm，從約50至約150nm，從約50至約120nm，從約50至約100nm，從約75至約250nm，從約75至約200nm，從約75至約175nm，從約75至約150nm，從約75至約120nm，從約75至約100nm，從約90至約100nm，從約90至約120nm，從約90至約150nm，從約90至約200nm，從約95至約100nm，從約95至約120nm，從約95至約125nm，從約95至約130nm，從約95至約150nm，從約95至約175nm，約90nm，約95nm，約100nm，約120nm，約130nm或約150nm。對(duì)于特定的脂質(zhì)體組合物，靶向脂質(zhì)體的直徑將比由相同成分形成但未摻入靶向因子的脂質(zhì)體的直徑大大約15至約25nm。

本文所述的脂質(zhì)體(例如，靶向脂質(zhì)體，空白脂質(zhì)體，含脂質(zhì)體組合物中的脂質(zhì)體)也可以應(yīng)用摻入脂質(zhì)體的靶向配體的濃度加以表征。根據(jù)所選的靶向配體，對(duì)靶向配體的數(shù)量進(jìn)行定量的各種方法對(duì)技術(shù)人員將是顯而易見的。例如，如實(shí)施例中所述，可以應(yīng)用脂質(zhì)體電泳遷移(例如，SDS-PAGE所測(cè)定)，與合適的對(duì)照相比較，確定脂質(zhì)體的轉(zhuǎn)鐵蛋白(Tf)含量。

簡(jiǎn)言之，可以應(yīng)用針對(duì)偶聯(lián)于脂質(zhì)體的轉(zhuǎn)鐵蛋白的含量和/或身份的兩種分析，對(duì)脂質(zhì)體中的轉(zhuǎn)鐵蛋白含量的確認(rèn)進(jìn)行評(píng)價(jià)。首先，可以將通過SDS-PAGE分析的脂質(zhì)體轉(zhuǎn)鐵蛋白的電泳遷移與純化的偶聯(lián)轉(zhuǎn)鐵蛋白例如TF-NωPE的遷移方式相比較。此外，偶聯(lián)轉(zhuǎn)鐵蛋白的電泳遷移也可以與游離轉(zhuǎn)鐵蛋白標(biāo)準(zhǔn)參照物相比較。對(duì)脂質(zhì)體中轉(zhuǎn)鐵蛋白的身份的其它支持可以應(yīng)用ELISA——一種證明抗轉(zhuǎn)鐵蛋白抗體與靶向脂質(zhì)體的特異結(jié)合的研究級(jí)形式——獲得。轉(zhuǎn)鐵蛋白靶向脂質(zhì)體的濃度可以用比色蛋白定量試驗(yàn)如BCA測(cè)定，所述測(cè)定是技術(shù)人員公知的。技術(shù)人員考慮到本文的教導(dǎo)，也會(huì)理解本領(lǐng)域已知的用于確定各種靶向因子的量的相似方法和其它方法。

簡(jiǎn)言之，應(yīng)用二辛可寧酸(BCA，bicinchoninic acid)分析試劑，可以分析脂質(zhì)體中轉(zhuǎn)鐵蛋白的量。在堿性條件下，銅(II)被蛋白質(zhì)還原為銅(I)。產(chǎn)生的銅(I)離子與BCA形成可溶性、顏色鮮明的絡(luò)合物。通過已知量的微粒懸浮物與BCA試劑的反應(yīng)，測(cè)定總的微粒結(jié)合蛋白。一旦顏色形成，通過過濾移去微粒并且熒光光度分析測(cè)定顏色。

在一些實(shí)施方式中，脂質(zhì)體中摻入的靶向配體的濃度將是約0.5mg/ml至約5.0mg/ml，約0.5mg/ml至約2.0mg/ml，約1.0mg/ml至約2.0mg/ml，約1.0mg/ml至約3.0mg/ml，約1.0mg/ml至約2.5mg/ml，約1.0mg/ml至約2.0mg/ml，或約1.3mg/ml至約2.5mg/ml。

在將轉(zhuǎn)鐵蛋白結(jié)合到腫瘤細(xì)胞表面中，鐵離子的作用非常重要。因此，摻入Tf的靶向脂質(zhì)體的鐵離子含量是表征脂質(zhì)體的又一有意義的途徑。雖然本領(lǐng)域技術(shù)人員已知許多確定鐵離子含量的方法，但一種方法是ICP-MS。

當(dāng)脂質(zhì)體含有轉(zhuǎn)鐵蛋白時(shí)，脂質(zhì)體的鐵離子含量可以是，例如，約0.25μg/mL至約3μg/mL，0.4μg/mL至約3μg/mL，0.25μg/mL至約2μg/mL，0.25μg/mL至約1.5μg/mL，0.25μg/mL至約1μg/mL，0.4μg/mL至約2μg/mL，0.4μg/mL至約1.5μg/mL，0.5μg/mL至約2μg/mL，約0.5μg/mL至約1.4μg/mL，或約0.5μg/mL至約1.5μg/mL。

脂質(zhì)體，包括靶向脂質(zhì)體和空白脂質(zhì)體，也可以應(yīng)用它們?cè)谥付囟认碌臐B透壓來表征。指定溫度下的滲透壓取決于糖(蔗糖)溶液的摩爾濃度。它也取決于溶液中的總離子密度和分子的大小。通常，應(yīng)用已知為滲透壓計(jì)的儀器，可以測(cè)定滲透壓，滲透壓計(jì)以合適的壓力單位測(cè)定滲透壓，如技術(shù)人員所理解。

在一些實(shí)施方式中，脂質(zhì)體，特別是靶向脂質(zhì)體和空白脂質(zhì)體在室溫下的滲透壓，將是約310至約410mOsm/kg。例如，滲透壓可以是室溫下約310至約400mOsm/kg，約310至約380mOsm/kg，約320至約360mOsm/kg，約315至約375mOsm/Kg，約320至約375mOsm/Kg，約315至約370mOsm/Kg，約320至約370mOsm/Kg，約360mOsm/Kg，約350mOsm/Kg，約340mOsm/Kg，約370mOsm/Kg或約380mOsm/Kg。

在本文所述的各種條件下(例如，貯存條件、制備用于施用和/或體內(nèi)條件)，當(dāng)在與本文所述各種條件有關(guān)的特定時(shí)間段內(nèi)監(jiān)測(cè)時(shí)，滲透壓可以變化約25％以下，約20％以下，約15％以下。例如，360+/-50mOsm/kg。
含脂類組合物的產(chǎn)生
對(duì)意圖于在治療過程中施用于個(gè)體的藥物和標(biāo)記化合物有三個(gè)主要要求，即，效應(yīng)、安全性和質(zhì)量保證。雖然已證實(shí)了效應(yīng)和安全性，但如果在制造和銷售期間不能持續(xù)保證質(zhì)量(例如，純度、同質(zhì)性、劑量再現(xiàn)性、經(jīng)時(shí)穩(wěn)定性等)，則在治療中應(yīng)用藥物的能力受到破壞。產(chǎn)生不持續(xù)確保高質(zhì)量藥物的藥物或標(biāo)記化合物的方法也增加了對(duì)其施用藥物的個(gè)體中發(fā)生不利反應(yīng)的概率。在藥物或標(biāo)記化合物的有效期內(nèi)，重要的是，被制造和銷售的產(chǎn)品滿足與該產(chǎn)品最初獲得規(guī)章批準(zhǔn)時(shí)相同的標(biāo)準(zhǔn)。因此，持續(xù)產(chǎn)生高質(zhì)量藥物或標(biāo)記化合物的能力對(duì)于生產(chǎn)安全的藥物或標(biāo)記化合物產(chǎn)品是必須的，并且能夠被常規(guī)和容易地制造和純化的藥物或標(biāo)記化合物在商業(yè)和安全性前景中具有優(yōu)勢(shì)。例如，標(biāo)記化合物的效應(yīng)是指，在批次與批次之間或貯存期間，標(biāo)記化合物在與特定診斷方法聯(lián)合診斷特定疾病或癥狀中有用的能力(例如，標(biāo)記化合物的活性(例如，γ計(jì)數(shù)器可視能力等))不受到不可接受的水平的損害。

下文描述的是生產(chǎn)本文所述組合物的一般方法，所述組合物用于持續(xù)產(chǎn)生高質(zhì)量(例如，高純度、同質(zhì)性等)靶向脂質(zhì)體(及其中間體)和空白脂質(zhì)體。這些方法在圖4(生產(chǎn)方法A)和圖5(生產(chǎn)方法B)中示意性表示。

本文所述的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯和N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺用作磷脂復(fù)合物如脂質(zhì)體、聚合物膠束、微球和納米球、乳劑和水溶性聚合物的組分。這些PE衍生物的制備描述在本文中并且它們的制備方法也是本領(lǐng)域已知的，如前文所述。

特別地，N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯和N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺也用作本文所述的含脂類組合物的組分。含脂類組合物可以根據(jù)本文所述方法制備，雖然對(duì)這些方法的修改對(duì)技術(shù)人員也將是顯而易見的。例如，在從脂類組分形成脂質(zhì)體中，可以應(yīng)用技術(shù)人員已知的各種方法(例如，超聲、攪拌、擠出、脫氫等)。例如，如美國(guó)專利申請(qǐng)公開2004/0142025號(hào)所描述，其內(nèi)容整體并入本文作為參考。

本文——包括實(shí)施例——中所述的產(chǎn)生靶向脂質(zhì)體的一般方法的應(yīng)用，也包括用于產(chǎn)生其它含脂類組合物(例如，脂類混合物、含脂質(zhì)體組合物、空白脂質(zhì)體和中間體脂質(zhì)體)的方法，如本文所述。
生產(chǎn)方法A
生產(chǎn)方法A示意性描述于圖4中。
ANωPE:SuccNωPE:其它脂類混合物(中間體1)的產(chǎn)生
將本文所述的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯(SuccNωPE)和N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺(NωPE)與其它脂類((例如，至少一種磷脂(例如，PC(例如，DMPC、DSPC等)、PI、鞘磷脂、磷脂酸等)和至少一種其它脂類(例如，膽固醇))混合，隨后溶解于合適的溶劑中(例如，乙醇，t-BuOH，氯仿，異丙醚等)。溶劑的量一般是1至100v/w(相對(duì)于脂類總重量)。在一些實(shí)施方式中，這是2至20v/w。

通過本文所述方法或技術(shù)人員已知的方法，可以制備和純化如前段所描述采用的SuccNωPE和NωPE。SuccNωPE和NωPE以及本文所述的用于產(chǎn)生靶向脂質(zhì)體及其中間體的其它組分，應(yīng)該具有足夠的純度和同質(zhì)性，以便最終產(chǎn)生具有足夠純度和同質(zhì)性的靶向脂質(zhì)體，以符合向個(gè)體施用靶向脂質(zhì)體的規(guī)章指南中和根據(jù)實(shí)驗(yàn)室優(yōu)化管理規(guī)則(good laboratory practice)(GLP)和良好操作規(guī)范(good manufacturingpractice)(GMP)指南的規(guī)章指南中。

當(dāng)其它脂類(除了一種或多種磷脂外)與磷脂共同應(yīng)用時(shí)，磷脂與另外的其它脂類的比例是約2∶1。SuccNωPE衍生物與磷脂的混合比例是總濃度約1至約12％(1∶99至12∶88)或約3-6％(3∶97至6∶94)/(NHS-NGPE+NGPE)與(CHOL+磷脂)的比例。例如，示范性比例包括50∶45∶4∶1(例如，PC∶Chol∶NG-PE∶NHS-NG-PE)，其中，例如，在1g混合物中有17.5mg的NHS-NG-DOPE，63.1mg的NG-DOPE，312mg的Chol和607mg的磷脂。
B藥物:NωPE:SuccNωPE:其它脂類混合物(中間體2)的產(chǎn)生
隨后，將步驟A中制備的NωPE:SuccNωPE:其它脂類混合物與含有待包封的藥物或標(biāo)記化合物(例如，抗癌藥(例如，奧沙利鉑、拓?fù)洚悩?gòu)酶I抑制劑、長(zhǎng)春花堿等))的水溶液(例如，緩沖液等)混合，以便得到藥物:NωPE:SuccNωPE:中性脂類混合物(中間體2)。

當(dāng)藥物是奧沙利鉑時(shí)(l-OHP)，奧沙利鉑的濃度是，在約9％的蔗糖溶液中約8mg/ml。例如，靶向脂質(zhì)體中的奧沙利鉑的濃度是約0.8mg/mL+/-10％。
C藥物:NωPE:SuccNωPE:其它脂類脂質(zhì)體(中間體3)的產(chǎn)生
隨后，對(duì)步驟B中獲得的藥物:NωPE:SuccNωPE:其它脂類混合物(中間體2)進(jìn)行超聲或攪拌，隨后蒸發(fā)溶劑，形成藥物:NωPE:SuccNωPE:其它脂類脂質(zhì)體(中間體3)。進(jìn)行超聲、攪拌和蒸發(fā)的方法和條件，以及實(shí)現(xiàn)這些步驟的手段是技術(shù)人員公知的，也進(jìn)一步描述于實(shí)施例中。參見，例如，通過反相囊泡(REV)方法的生產(chǎn)方法，美國(guó)專利4,235,871(整體并入本文作為參考)。也可以應(yīng)用技術(shù)人員已知的一般脂質(zhì)體生產(chǎn)方法如簡(jiǎn)單的水合方法和乙醇注射方法。

隨后，將上述形成的藥物:NωPE:SuccNωPE:其它脂類脂質(zhì)體按照大小擠壓出，并且分離該藥物:NωPE:SuccNωPE:其它脂類脂質(zhì)體。任選地，隨后可以應(yīng)用超濾，濃縮脂質(zhì)體溶液。

當(dāng)脂質(zhì)體含有l(wèi)-OHP(藥物)、DMPC(其它脂類/磷脂(中性))、膽固醇(CHOL、其它脂類/中性脂類)、N-戊二酰基-DOPE(NG-DOPE)和NHS-NG-DOPE時(shí)，平均直徑是約0.2微米(200nm)的脂質(zhì)體可以被分離。對(duì)于含有l(wèi)-OHP(藥物)、DSPC(其它脂類/磷脂(中性)、膽固醇、N-戊二?；?DSPE(NG-DSPE)和NHS-NG-DSPE的脂質(zhì)體，也可以獲得類似大小的脂質(zhì)體。脂類組分的示范性目標(biāo)量是，例如，約40mg/mLDMPC(其它脂類/磷脂酰膽堿/磷脂/中性脂類)，約20mg/mL CHOL(其它脂類/中性脂類)和約5mg/mL NG-DOPE(組合量的NG-PE和NHS-NG-PE)。脂類組分的示范性比例是50∶45∶5(其它脂類1(例如，磷脂酰膽堿))∶其它脂類2(例如，CHOL)∶NG-PE(例如，NG-DOPE+NHS-NG-DOPE)。
D藥物:NωPE:TF-NωPE:其它脂類脂質(zhì)體(靶向脂質(zhì)體)的產(chǎn)生
隨后，可以應(yīng)用選擇的靶向因子對(duì)步驟C中描述形成的藥物:NωPE:SuccNωPE:其它脂類脂質(zhì)體進(jìn)行官能化，產(chǎn)生藥物:NωPE:TF-NωPE:其它脂類脂質(zhì)體(也稱為″靶向脂質(zhì)體″)。

靶向因子(TF)的連接(例如，用靶向因子進(jìn)行中間體脂質(zhì)體(中間體3)的官能化)是通過將靶向因子共價(jià)結(jié)合于SuccNωPE實(shí)現(xiàn)的，通過琥珀酰亞胺基部分與靶向因子的反應(yīng)進(jìn)行。通過合適的反應(yīng)條件，脂質(zhì)體暴露表面的琥珀酰亞胺基(在脂雙層的外部，其中藥物或標(biāo)記化合物包封在脂質(zhì)體內(nèi)部)可以被共價(jià)修飾，形成靶向因子修飾的N-(ω)-二衍生化磷脂酰乙醇胺(TF-NωPE)。靶向因子與脂質(zhì)體連接，引起藥物:NωPE:TF-NωPE:其它脂類脂質(zhì)體(靶向脂質(zhì)體)形成。

更具體地，在合適的條件下，本文所述的SuccNωPE的琥珀酰羧基部分(succinyl carboxyl moiety)被官能化。如果靶向因子具有氨基，則靶向因子上的氨基與琥珀酰羧基部分反應(yīng)，形成羧酸酰胺鍵。本文進(jìn)一步描述了適于此反應(yīng)的條件，包括在實(shí)施例中進(jìn)行描述，這也是技術(shù)人員充分理解的。根據(jù)本文的教導(dǎo)，技術(shù)人員也將能夠修改反應(yīng)條件，以便優(yōu)化條件進(jìn)行靶向因子和脂質(zhì)體的特定組合，而不需要過多的試驗(yàn)。

本文所述和技術(shù)人員已知的各種靶向因子可以經(jīng)商業(yè)途徑得到或者通過普通技術(shù)人員已知的方法產(chǎn)生。

例如，當(dāng)選擇轉(zhuǎn)鐵蛋白作為靶向因子時(shí)，轉(zhuǎn)鐵蛋白可以以純化蛋白經(jīng)商業(yè)途徑得到，例如，從Celliance Corp.，GA，USA得到。轉(zhuǎn)鐵蛋白也可以應(yīng)用本領(lǐng)域公知的重組方法得到(例如，通過應(yīng)用原核細(xì)胞(大腸桿菌等)、通過應(yīng)用真核細(xì)胞(CHO，BHK等)等)。如充分理解，轉(zhuǎn)鐵蛋白可以以脫鐵形式或全蛋白形式得到和應(yīng)用在靶向脂質(zhì)體中?？蛇x地，可以用鐵化合物如檸檬酸鐵、氯化鐵(III)等處理摻入脫鐵轉(zhuǎn)鐵蛋白的靶向脂質(zhì)體，產(chǎn)生摻入全轉(zhuǎn)鐵蛋白衍生化脂質(zhì)體的靶向脂質(zhì)體。

轉(zhuǎn)鐵蛋白作為靶向因子的示范性量是，例如，約2mg/mL轉(zhuǎn)鐵蛋白。這樣的量對(duì)于含有約40mg/mL DMPC、約20mg/mL CHOL和約5mg/mL NG-DOPE(組合量的NG-PE和NHS-NG-PE)的示范性靶向脂質(zhì)體是合適的。

在脂質(zhì)體(中間體3)用上述靶向因子官能化獲得靶向脂質(zhì)體后，可以應(yīng)用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法對(duì)得到的脂質(zhì)體任選地進(jìn)一步純化，包括本文所述的那些純化方法，特別是與上述步驟C有關(guān)的方法。

當(dāng)脂質(zhì)體包含l-OHP(藥物)、DMPC、膽固醇(CHOL)、N-戊二酰基-DOPE(NG-DOPE)和Tf-NG-DOPE時(shí)，平均直徑為約0.05微米至約0.2微米(約50nm至約200nm)的脂質(zhì)體可以被分離。對(duì)于含有l(wèi)-OHP(藥物)、DSPC、膽固醇、N-戊二酰基-DSPE(NG-DSPE)和NHS-NG-DSPE的脂質(zhì)體，也可以得到類似大小的脂質(zhì)體。

通過上述方法產(chǎn)生靶向脂質(zhì)體(為了方便稱為生產(chǎn)方法A)可再現(xiàn)地產(chǎn)生具有高純度和同質(zhì)性的靶向脂質(zhì)體。特別地，靶向脂質(zhì)體基本上不含與SuccNωPEs的生成有關(guān)的非-NHS起始物質(zhì)(本文所述)和副產(chǎn)物(例如，?；寤衔锏?。特別地，在脂質(zhì)體形成之前制備和純化SuccNωPEs，產(chǎn)生了基本上不含用于官能化NωPEs而形成SuccNωPEs的碳二酰亞胺起始物(例如，DCC，EDC等)的脂質(zhì)體(中間體3)和靶向脂質(zhì)體。如前述，藥物和標(biāo)記化合物，包括摻入藥物或標(biāo)記化合物的靶向脂質(zhì)體——意圖于在治療或診斷過程中將它們施用給個(gè)體，必須具有高質(zhì)量。

任選地，可以用靶向因子處理A中描述的脂類混合物(中間體1)，形成含有TF-NωPE的脂類混合物。進(jìn)一步地，這種脂類混合物可以和水溶液混合，形成含脂質(zhì)體組合物。最后，含脂質(zhì)體組合物可以被處理以便產(chǎn)生脂質(zhì)體制劑。任選地，水溶液可以包括藥物或標(biāo)記化合物。
可選的生產(chǎn)方法(方法B)
生產(chǎn)方法B在圖5中示意性描述。
A.藥物:NωPE:其它脂類脂質(zhì)體的產(chǎn)生
通過將其它脂類和NωPE溶解在合適的溶劑中(例如，乙醇、t-BuOH、氯仿、異丙醚等)，將得到的溶液分散在任選包含藥物或標(biāo)記化合物的水溶液中，和隨后對(duì)得到的分散液進(jìn)行超聲處理或反相囊泡形成脂質(zhì)體(藥物:NωPE:中性脂類)，也可以產(chǎn)生本文所述的脂質(zhì)體。脂質(zhì)體溶液可以通過超濾而濃縮。

作為非限制性例子，可以通過反相囊泡(REV)方法(美國(guó)專利4,235,871，并入作為參考)產(chǎn)生脂質(zhì)體。當(dāng)然，一般的脂質(zhì)體組合物方法如簡(jiǎn)單水合方法和乙醇注射方法也可以應(yīng)用。

為了使NωPE(一種或多種)穩(wěn)定保持在脂雙層中，根據(jù)技術(shù)人員已知的方法，可以制備和純化NωPE(一種或多種)，隨后NωPE(一種或多種)與其它脂類(例如，磷脂、膽固醇等)共同用于制備脂質(zhì)體。

作為非限制性例子，其它脂類(例如，一種或多種磷脂(例如，DSPC、DMPC等)和任選地，另一其它脂類(例如，膽固醇等)和至少一種NωPE被混合在一起，溶解在合適的有機(jī)溶劑中。

當(dāng)其它脂類是磷脂和膽固醇時(shí)，磷脂和膽固醇的混合比是，例如，約1∶1，例如，約1.1∶1，約1.2∶1，約0.9∶1(例如，DMPC和膽固醇，50∶45(mol％))。NωPE(一種或多種)的含量占總脂類含量的比例是，例如，相對(duì)于磷脂為6％。隨后，將得到的溶液與奧沙利鉑溶液在緩沖水溶液中混合。NωPE可以是相對(duì)于總脂類含量的約0.8mol％至約12mol％。例如，約1mol％至約10mol％，約1mol％至約8mol％，約1mol％至約6mol％，約1mol％至約5mol％，約1mol％至約4mol％，約1mol％至約3mol％，約1mol％至約2mol％，約2mol％至約12mol％，約2mol％至約10mol％，約3mol％至約8mol％，約1mol％，約2mol％，約3mol％，約4mol％，約5mol％，約6mol％，約8mol％，約10mol％，或約12mol％。

藥物或標(biāo)記化合物在溶液中的濃度可以如本文所述，特別是如上述生產(chǎn)方法A所述。類似地，含有藥物或標(biāo)記化合物的溶液包括本文所述的溶液組分。

本方法制備的摻入l-OHP(藥物)、膽固醇和N-戊二?；?DSPE(NG-DOPE)的脂質(zhì)體可以被分離，提供含平均直徑約0.2μm的含奧沙利鉑脂質(zhì)體(例如，通過凝膠過濾、通過大小排阻層析、通過超濾、通過超速離心等)。
B.藥物:SuccNωPE:NωPE:其它脂類脂質(zhì)體的產(chǎn)生
步驟A之后，步驟A中制備的脂質(zhì)體(藥物:NωPE:其它脂類脂質(zhì)體)中存在的一部分NωPE被官能化，產(chǎn)生摻入SuccNωPE的脂質(zhì)體(即，藥物:SuccNωPE:NωPE:其它脂類脂質(zhì)體)，其以后可以被修飾形成TF-NωPE。

為了形成SuccNωPE，可以修飾NωPE的末端羧基，形成琥珀酰亞胺基。這種官能化可以用描述用于產(chǎn)生SuccNωPE(一種或多種)的方法實(shí)現(xiàn)。

例如，在脂質(zhì)體存在的情況下，使碳二亞胺(例如，EDC，DCC等)和N-羥基硫代琥珀酰亞胺(NHS)反應(yīng)，產(chǎn)生藥物:SuccNωPE:NωPE:其它脂類脂質(zhì)體。
C.藥物:TF-NωPE:NωPE:其它脂類脂質(zhì)體的產(chǎn)生
步驟B之后，使B中制備的藥物:SuccNωPE:NωPE:其它脂類脂質(zhì)體與靶向因子反應(yīng)，形成藥物:TF-NωPE:NωPE:其它脂類脂質(zhì)體。反應(yīng)方法和條件如生產(chǎn)方法A步驟D所述。

可以應(yīng)用本文所述的方法和技術(shù)人員已知的方法純化和濃縮由生產(chǎn)方法B獲得的藥物:TF-NωPE:NωPE:其它脂類脂質(zhì)體。
生產(chǎn)方法的比較
生產(chǎn)方法A相對(duì)于生產(chǎn)方法B具有幾個(gè)優(yōu)勢(shì)，雖然兩者都可以用于獲得藥物:TF-NωPE:NωPE:其它脂類脂質(zhì)體(靶向脂質(zhì)體，任選地含有藥物或標(biāo)記化合物)。更顯著地，方法A獲得的脂質(zhì)體將不含，或基本上不含與SuccNωPE的產(chǎn)生有關(guān)的雜質(zhì)(例如，非-NHS起始物質(zhì)和/或副產(chǎn)物)。特別地，如前所述，生產(chǎn)方法A制備的靶向脂質(zhì)體將不含，或基本上不含，例如，碳二亞胺(例如，EDC、DCC等)和?；濉Ｔ谝恍?shí)施方式中，當(dāng)SuccNωPE不摻入脂質(zhì)體內(nèi)時(shí)，脂質(zhì)體或含脂質(zhì)體組合物也可以不含或基本上不含NHS。此外，反應(yīng)規(guī)模越大，制備時(shí)間越長(zhǎng)。生產(chǎn)方法A的時(shí)間大大短于生產(chǎn)方法B。

雖然由生產(chǎn)方法B制備的藥物:TF-NωPE:NωPE:其它脂類脂質(zhì)體的純化會(huì)降低這些雜質(zhì)的量，但純化脂質(zhì)體(例如，生產(chǎn)方法B的步驟B中獲得的藥物:SuccNωPE:NωPE:其它脂類脂質(zhì)體)比脂類(例如，在生產(chǎn)方法A的步驟A之前制備和純化的SuccNωPEs)更難。由于一些SuccNωPE可能被導(dǎo)向脂質(zhì)體內(nèi)部(例如，琥珀酰亞胺酯官能基位于脂雙層內(nèi)并且難于與靶向因子反應(yīng))，可能的是，生產(chǎn)方法A的制備的靶向脂質(zhì)體可能具有一些摻入其中的殘余SuccNωPE。

生產(chǎn)方法A的另一優(yōu)勢(shì)是，應(yīng)用生產(chǎn)方法A時(shí)，最終的藥物:TF-NωPE:NωPE:其它脂類脂質(zhì)體中TF-NωPE對(duì)NωPE的相對(duì)含量可以得到更精確的控制。這些脂類的相對(duì)量直接與生產(chǎn)方法A的步驟A中用作起始物的SuccNωPE和NωPE的相對(duì)量相關(guān)。因此，TF-修飾的SuccNωPE的量也可以得到更精確的控制。

應(yīng)用生產(chǎn)方法B時(shí)，NωPE對(duì)SuccNωPE的相對(duì)量取決于方法B步驟B的反應(yīng)效率。認(rèn)為脂質(zhì)體中存在約10％的NωPE時(shí)，此反應(yīng)完成，但是隨批次將預(yù)期到試驗(yàn)變化。反應(yīng)效率低可能是部分由于預(yù)先形成的脂質(zhì)體的空間位阻。當(dāng)SuccNωPE形成自分離的NωPE(僅脂類)，空間位阻少得多并且反應(yīng)更進(jìn)一步地完成。同樣，形成SuccNωPE之后(以僅脂類的形式)，可以從反應(yīng)混合物純化所得到的產(chǎn)物，從而去除未反應(yīng)的NωPE、碳二亞胺和NHS以及可能在反應(yīng)期間形成的其它副產(chǎn)物。

任一方法形成的脂質(zhì)體似乎比摻入PEG或其它親水性聚合物的脂質(zhì)體——如本說明書的背景部分描述的脂質(zhì)體——更加均一(并且從而能夠用于產(chǎn)生更加可再現(xiàn)的藥物/診斷產(chǎn)品)?？傊?dāng)PEG或其它親水性聚合物被用來增加脂質(zhì)體的循環(huán)時(shí)間(例如，屏蔽RES對(duì)脂質(zhì)體的攝取)時(shí)，由于PEG或親水性聚合物本身的寬的分布，應(yīng)用它們形成具有分子大小分布的脂質(zhì)體。所述分布增加與制造有關(guān)的困難(例如，可再現(xiàn)性和/或純化)并且也可能增加臨床效率的可變性。在這些方面，方法A或B制備的靶向脂質(zhì)體應(yīng)該較好。
其它生產(chǎn)方法
通過修改生產(chǎn)方法A和B，也可以制備脂類混合物和含脂質(zhì)體組合物(其可以用于制備脂質(zhì)體)。例如，在一些實(shí)施方式中，通過下文描述的生產(chǎn)方法，以及考慮到本說明書的教導(dǎo)由技術(shù)人員預(yù)期的對(duì)方法的其它修改，可以制備摻入其它脂類組分NωPE:TF-NωPE或其它脂類組分(一種或多種)NωPE:TF-NωPE:藥物/標(biāo)記化合物(其中″其它脂類組分(一種或多種)″是指一種或多種磷脂(例如，一種或多種中性磷脂、一種或多種陰離子磷脂、一種或多種陽離子磷脂或前述兩種或多種的組合)、任選地另外包括本文所述的一種或多種其它脂類(例如，膽固醇或其衍生物)；或至少兩種本文所述的不同中性脂類(例如，至少一種磷脂(例如，PC(例如，DMPC，DSPC等)、PI、鞘磷脂、磷脂酸等)和至少一種其它中性脂類(例如膽固醇))的脂類混合物和含脂質(zhì)體組合物。其它脂類、NωPE、TF-NωPE和藥物或標(biāo)記化合物組分——如果存在該組分，可以是如貫穿本說明書所述的那些。類似地，組分的相對(duì)量也如貫穿本說明書所述。

在一些實(shí)施方式中，在生產(chǎn)方法B的第一步產(chǎn)生的脂類混合物(通過將其它脂類和NωPE溶解在合適的有機(jī)溶劑中而產(chǎn)生的脂類混合物)可以被修飾，以便摻入NHS，隨后應(yīng)用TF修飾，產(chǎn)生其它脂類組分(一種或多種)NωPE:TF-NωPE脂類混合物。隨后，可以將此脂類混合物與水溶液(任選地含有藥物或標(biāo)記化合物)混合，形成含脂質(zhì)體組合物?？蛇x地，在制備含脂質(zhì)體組合物之后可以摻入藥物或標(biāo)記化合物。在一些實(shí)施方式中，不含水溶液的藥物或標(biāo)記化合物可以被摻入應(yīng)用NHS和TF修飾后形成的脂類混合物中，形成其它脂類組分(一種或多種)NωPE:TF-NωPE:藥物/標(biāo)記化合物脂類混合物。隨后可以將此脂類混合物與水溶液混合，形成含脂質(zhì)體組合物。

在一些實(shí)施方式中，生產(chǎn)方法B的第一步中產(chǎn)生的脂類混合物(通過將其它脂類組分(一種或多種)和NωPE溶解在合適的溶劑中產(chǎn)生的脂類混合物)可以與水溶液混合，形成含脂質(zhì)體組合物(其它脂類組分(一種或多種)NωPE)。隨后，可以用NHS和TF處理此含脂質(zhì)體組合物，隨后與藥物或標(biāo)記化合物混合，形成含其它脂類組分(一種或多種)NωPE:TF-NωPE:藥物/標(biāo)記化合物脂質(zhì)體的組合物。可選地，可以用藥物或標(biāo)記化合物處理含其它脂類組分(一種或多種):NωPE脂質(zhì)體的組合物，然后用NHS修飾，隨后用TF修飾。

在一些實(shí)施方式中，生產(chǎn)方法B的第一步中產(chǎn)生的脂類混合物(通過將其它脂類組分(一種或多種)和NωPE溶解在合適的溶劑中產(chǎn)生的脂類混合物)可以隨后與藥物或標(biāo)記化合物(任選地包含水溶液)混合，形成脂類混合物(其中藥物或標(biāo)記化合物不包含水溶液)或含脂質(zhì)體組合物。當(dāng)形成了脂類混合物，可以用NHS和TF隨后處理脂類混合物，形成其它脂類組分(一種或多種)NωPE:TF-NωPE:藥物/標(biāo)記化合物脂類混合物，隨后其可以與水溶液混合，形成含脂質(zhì)體組合物?？蛇x地，當(dāng)形成了含脂質(zhì)體組合物(例如，當(dāng)藥物或標(biāo)記化合物摻入水溶液時(shí))，可以隨后用NHS和TF處理此含脂質(zhì)體組合物，也產(chǎn)生其它含脂類組分(一種或多種)NωPE:TF-NωPE:藥物/標(biāo)記化合物脂質(zhì)體的組合物。

在進(jìn)一步可選的生產(chǎn)方法——方法C中，在有機(jī)溶劑中同時(shí)混合各個(gè)組分，形成脂類混合物(C-1)(例如，組分其它脂類組分(一種或多種)；NωPE；TF-NωPE或組分其它脂類組分(一種或多種)NωPE:TF-NωPE:藥物或標(biāo)記化合物)，其中在混合前制備并且任選地純化TF-NωPE。隨后可以將脂類混合物C-1與水溶液混合，形成含脂質(zhì)體組合物C-2(其它脂類組分(一種或多種)NωPE:TF-NωPE(任選地含有藥物或標(biāo)記化合物)。當(dāng)如此形成的含脂質(zhì)體組合物不包含藥物或標(biāo)記化合物時(shí)，可以在含脂質(zhì)體組合物(C2-A)形成后加入藥物或標(biāo)記化合物。可選地，當(dāng)包含水溶液的藥物或標(biāo)記化合物被用作最初的起始成分時(shí)，在所有起始成分混合時(shí)可以同時(shí)形成含脂質(zhì)體組合物。

隨后，可以處理C-2(任選地包含藥物或標(biāo)記化合物)或C2-A，形成脂質(zhì)體(C-3)。當(dāng)C-3不包含藥物或標(biāo)記化合物時(shí)，脂質(zhì)體將是空白脂質(zhì)體，如前述(例如，其它脂類組分(一種或多種)NωPE:TF-NωPE脂質(zhì)體)。當(dāng)C-3包含藥物或標(biāo)記化合物時(shí)，脂質(zhì)體將是靶向脂質(zhì)體，如本文所述。當(dāng)C-3是空白脂質(zhì)體時(shí)，在隨后的步驟中，可以將藥物或標(biāo)記化合物如前述地加入空白脂質(zhì)體中，形成靶向脂質(zhì)體，其可以在制備C-3之后即刻或在延遲之后預(yù)先形成，所述延遲可包括貯存C-3空白脂質(zhì)體一段時(shí)間。

在進(jìn)一步可選的生產(chǎn)方法——方法D中，在有機(jī)溶劑中同時(shí)混合各個(gè)組分，形成脂類混合物(D-1)(例如，組分:其它脂類組分(一種或多種)；NωPE；或組分:其它脂類組分(一種或多種)NωPE:藥物或標(biāo)記化合物)。隨后可以將脂類混合物D-1與水溶液混合，形成含脂質(zhì)體組合物D-2(其它脂類組分(一種或多種):NωPE:(任選地含有藥物或標(biāo)記化合物))。隨后可以將含脂質(zhì)體組合物D-2與TF-NωPE混合，形成含脂質(zhì)體組合物D-3(其它脂類組分(一種或多種)NωPE:TF-NωPE(任選地含有藥物或標(biāo)記化合物))，其中在混合前制備和任選地純化TF-NωPE。當(dāng)如此形成的含脂質(zhì)體組合物不包含藥物或標(biāo)記化合物時(shí)，可以在含脂質(zhì)體組合物(D3-A)形成后加入藥物或標(biāo)記化合物?？蛇x地，當(dāng)包含水溶液的藥物或標(biāo)記化合物被用作最初的起始成分時(shí)，在所有起始成分混合時(shí)可以同時(shí)形成含脂質(zhì)體組合物。

隨后，可以處理D-3(任選地包含藥物或標(biāo)記化合物)或D3-A，形成脂質(zhì)體(D-4)。當(dāng)D-4不包含藥物或標(biāo)記化合物時(shí)，脂質(zhì)體將是空白脂質(zhì)體，如前述(例如，其它脂類組分(一種或多種)NωPE:TF-NωPE脂質(zhì)體)。當(dāng)D-4包含藥物或標(biāo)記化合物時(shí)，脂質(zhì)體將是靶向脂質(zhì)體，如本文所述。當(dāng)D-4是空白脂質(zhì)體時(shí)，在隨后的步驟中，可以將藥物或標(biāo)記化合物如前述地加入空白脂質(zhì)體中，形成靶向脂質(zhì)體，其可以在制備D-4之后即刻或在延遲之后預(yù)先形成，所述延遲可包括貯存D-4空白脂質(zhì)體一段時(shí)間。

當(dāng)應(yīng)用生產(chǎn)方法A形成的脂類混合物、含脂質(zhì)體組合物和脂質(zhì)體(包括靶向脂質(zhì)體、空白脂質(zhì)體等)，生產(chǎn)方法C或D制備的含脂類組合物將基本上不含與N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯的合成有關(guān)的非-NHS起始物質(zhì)、副產(chǎn)物和/或分解產(chǎn)物(例如，碳二亞胺(例如，DCC，EDC等)、?；寤衔锏?，只要在生產(chǎn)方法C或D的起始步驟之前，起始物(例如，TF-NG-PE)基本上不含這些物質(zhì)即可。當(dāng)SuccNωPE不作為起始物摻入(因而不摻入脂質(zhì)體內(nèi)部)時(shí)，脂質(zhì)體或含脂質(zhì)體組合物也可以不含或基本上不含NHS，如TF-NωPE預(yù)先形成并用作起始物時(shí)。在特定實(shí)施方式中，生產(chǎn)方法C或D制備的含脂類組合物基本上不含DCC和EDC。在一些實(shí)施方式中，生產(chǎn)方法C或D制備的含脂類組合物基本上不含DCC。

在一些實(shí)施方式中，其它脂類組分(一種或多種)包括一種或多種磷脂(例如，磷脂酰膽堿等)和膽固醇或膽固醇衍生物。在特定實(shí)施方式中，磷脂酰膽堿是DMPC、POPC、DSPC等，如本文所述。在一些實(shí)施方式中，磷脂酰膽堿是DMPC或DSPC。在特定實(shí)施方式中，其它脂類(一種或多種)是磷脂和膽固醇。在一些實(shí)施方式中，磷脂是中性磷脂。

在一些實(shí)施方式中，其它脂類組分(一種或多種)包括至少兩種不同的中性脂類，其包括磷脂(例如，磷脂酰膽堿等)和膽固醇或膽固醇衍生物。在特定實(shí)施方式中，磷脂酰膽堿是DMPC、POPC、DSPC等，如本文所述。在一些實(shí)施方式中，磷脂酰膽堿是DMPC或DSPC。在特定實(shí)施方式中，至少兩種不同的中性脂類是磷脂和膽固醇。

在一些實(shí)施方式中，NωPE是NG-PE。在特定實(shí)施方式中，NωPE是Nω-DOPE或Nω-DSPE。在一些實(shí)施方式中，NωPE是NG-DOPE或NG-DSPE。

在特定實(shí)施方式中，TF是，例如，脫唾液酸糖蛋白、葉酸鹽、轉(zhuǎn)鐵蛋白等。在一些實(shí)施方式中，TF是轉(zhuǎn)鐵蛋白(Tf)。在一些實(shí)施方式中，TF-NωPE是Tf-NωPE(例如，Tf-NG-DOPE或Tf-NG-DSPE)。

在特定實(shí)施方式中，藥物是，例如，抗癌藥(例如，奧沙利鉑、拓?fù)洚悩?gòu)酶I抑制劑、長(zhǎng)春花堿等)。在其它實(shí)施方式中，脂類混合物或含脂質(zhì)體組合物包含標(biāo)記化合物。在一些實(shí)施方式中，脂類混合物或含脂質(zhì)體組合物不包含標(biāo)記化合物或藥物。

如前述，每一脂類混合物都可以與水溶液混合，形成含脂質(zhì)體組合物，并且每一含脂質(zhì)體組合物都可以被處理，形成相應(yīng)的脂質(zhì)體(例如，靶向脂質(zhì)體(例如，摻入藥物或標(biāo)記化合物)、中間體脂質(zhì)體、空白脂質(zhì)體等)，如本文所詳述。

對(duì)于本文所述的生產(chǎn)方法的變化，意圖在于，給出本說明書提供的教導(dǎo)，特別包括生產(chǎn)方法A和B中的詳細(xì)描述和如實(shí)施例中出現(xiàn)的詳細(xì)描述，技術(shù)人員可以如本文所述而實(shí)施用NHS修飾NωPE，用TF修飾NHS-NωPE，從脂類混合物制備含脂質(zhì)體組合物，和從含脂質(zhì)體組合物制備脂質(zhì)體，而無需過多的試驗(yàn)。
藥物制劑
另一方面，本發(fā)明提供了用于治療或診斷有需求的個(gè)體的藥物制劑，包括本文所述的含脂類組合物和一種或多種藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑、稀釋劑、穩(wěn)定劑、防腐劑或其它無活性成分，包括前述的組合，這是技術(shù)人員已知的和本文進(jìn)一步描述的。

在藥物制劑的一些實(shí)施方式中，含脂類組合物是本文所述的靶向脂質(zhì)體。在其它實(shí)施方式中，含脂類組合物是含脂質(zhì)體組合物。在一些實(shí)施方式中，含脂類組合物是空白脂質(zhì)體。在一些實(shí)施方式中，組合物包括藥物。在其它實(shí)施方式中，組合物包括標(biāo)記化合物。

在一些實(shí)施方式中，載體可以包括無菌水、緩沖液或鹽水、稀釋液以及它們的組合中的一種或多種。

藥物制劑還可以包括一種或多種不同的鹽、糖、蛋白質(zhì)、淀粉、明膠、植物油、聚乙二醇和類似物，包括前述兩種或多種的組合。

本發(fā)明的其它方面包括在藥物制備中應(yīng)用本文所述的組合物及其制劑。特別地，制造藥物用于治療或診斷本文所述的疾病。進(jìn)一步地，如果沒有另外指出，本文不同描述的活性組合物及其制劑，也意圖用于制備藥物，所述藥物用于治療或診斷疾病，并且根據(jù)本文所述的方法應(yīng)用。
組合物的應(yīng)用 施用
如前述，一方面，提供了應(yīng)用本文所述的含藥物或標(biāo)記化合物的含脂類組合物(例如，靶向脂質(zhì)體、含有含藥物/標(biāo)記化合物的脂質(zhì)體的組合物)和藥物制劑治療或診斷本文所述的疾病的方法。

在一個(gè)實(shí)施方式中，所述方法可以作為針對(duì)本文所述疾病的治療的治療性途徑而實(shí)施。因此，在特定實(shí)施方式中，含有含藥物脂類的組合物或藥物制劑可以用于在所需個(gè)體——包括人類——中治療本文所述的疾病。所述方法一般包括給予所述個(gè)體一定量的本文所述組合物或制劑，所述量有效治療所述疾病。

在另一實(shí)施方式中，所述方法可以作為針對(duì)本文所述疾病的診斷的診斷性途徑而實(shí)施。因此，在特定實(shí)施方式中，含有含標(biāo)記化合物脂類的組合物或藥物制劑可以用于在所需個(gè)體——包括人類——中診斷本文所述的疾病。所述方法一般包括給予所述個(gè)體一定量的本文所述組合物或制劑，所述量有效診斷所述疾病。這種施用一般與檢測(cè)疾病的方法共同采取。

在一些實(shí)施方式中，個(gè)體是哺乳動(dòng)物，包括但不限于人、牛、馬、貓、犬、嚙齒動(dòng)物或靈長(zhǎng)類動(dòng)物。在其它實(shí)施方式中，個(gè)體是人。

術(shù)語″藥學(xué)有效量″或″治療有效量″是指組合物的量足以治療特定紊亂、病癥或疾病或其癥狀中的一種或多種和/或預(yù)防疾病或紊亂的發(fā)生。參照癌癥，藥學(xué)有效量或治療有效量包括足以引起腫瘤收縮或降低腫瘤生長(zhǎng)速度等等的量。

術(shù)語″有效診斷的量″或″診斷有效量″或″有效用于診斷的量″及其同源詞，是指組合物的量足以診斷特定紊亂、病癥或疾病、和/或其表現(xiàn)中的一種或多種，其中診斷包括鑒定疾病的存在情況和/或檢測(cè)疾病的程度或嚴(yán)重性。例如，參照癌癥，″診斷有效量″包括足以檢測(cè)，例如，惡性細(xì)胞、腫瘤或其它癌癥表現(xiàn)中的一種或多種的存在和/或濃度的量。常常地，診斷將參照不患有疾病的個(gè)體中觀察到的基線或背景檢測(cè)水平而進(jìn)行。檢測(cè)水平高于背景或基線水平(檢測(cè)水平增加)提示疾病存在，在一些情況下，提示疾病的嚴(yán)重性。

當(dāng)針對(duì)治療方法和應(yīng)用含有含藥物脂類的組合物而應(yīng)用時(shí)，″需要”的個(gè)體(individual in need thereof)可以是已經(jīng)診斷為患有待治療疾病或以前針對(duì)待治療疾病治療過的個(gè)體。對(duì)于診斷方法和應(yīng)用含含標(biāo)記化合物脂類的組合物而應(yīng)用時(shí)，″需要”的個(gè)體可以是懷疑患有疾病，處于疾病風(fēng)險(xiǎn)中的個(gè)體(例如，有疾病家族史，表明疾病風(fēng)險(xiǎn)的生活方式因素(例如，吸煙作為肺癌的風(fēng)險(xiǎn)因素等))或者以前被診斷為患有疾病的個(gè)體(例如，診斷可以包括在一定時(shí)間段內(nèi)和/或聯(lián)合治療監(jiān)測(cè)疾病的嚴(yán)重性(例如，進(jìn)展/退化))。

在一些實(shí)施方式中，待治療或診斷的疾病是癌癥。在一些實(shí)施方式中，癌癥可以是胃癌、結(jié)腸癌、結(jié)腸直腸癌或乳腺癌。在一些實(shí)施方式中，癌癥是結(jié)腸癌。在其它實(shí)施方式中，癌癥是乳腺癌。在其它實(shí)施方式中，癌癥是胃癌。在一些實(shí)施方式中，癌癥是胰腺癌、非小細(xì)胞性肺癌、小細(xì)胞肺癌、腦癌、肝癌、腎癌、前列腺癌、膀胱癌、卵巢癌或造血惡性病(例如，白血病、淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤等)。

含藥物組合物，包括本文所述的制劑，可以單獨(dú)應(yīng)用或與其它治療方式(例如，輔助癌癥治療、組合方式治療)聯(lián)合應(yīng)用(例如，在其之前、同時(shí)或之后)。例如，與其它治療藥(例如，本文所述和本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的癌癥化療藥(例如，烷化劑、紫杉烷、代謝拮抗劑、抗腫瘤抗生素、植物堿、激素治療藥、分子靶標(biāo)藥等))、手術(shù)和/或放療聯(lián)合。當(dāng)待治療疾病是癌癥時(shí)，本文所述的組合物可以與本文所述和本領(lǐng)域已知的其它抗癌藥或細(xì)胞毒性化合物中的一種或多種、降低副反應(yīng)和/或其臨床表現(xiàn)的發(fā)生和/或嚴(yán)重性的一種或多種其它藥劑、手術(shù)(例如，去除腫瘤或淋巴結(jié)等)或放射聯(lián)合。當(dāng)手術(shù)或放射中的一種或多種是治療方案的一部分時(shí)，組合物可以在放療或手術(shù)之前、同時(shí)或之后施用。類似地，本文所述的組合物及其制劑，可以在給予一種或多種抗癌藥之前、同時(shí)或之后施用。本文所述的靶向脂質(zhì)體及其制劑也可以與減輕疾病或治療方案相關(guān)癥狀的藥物(例如，降低嘔吐、脫發(fā)、免疫抑制、腹瀉、皮疹、感覺紊亂、貧血、疲勞、口腔炎、手足綜合癥等的藥物)聯(lián)合施用(例如，之前、同時(shí)或之后)。靶向脂質(zhì)體也可以在治療方案的一個(gè)階段以上(包括貫穿整個(gè)治療方案)施用(例如，手術(shù)后和與放療同時(shí)或在放療之后等)。

含標(biāo)記化合物組合物，包括本文所述的制劑，可以單獨(dú)應(yīng)用或與治療方式(例如，輔助癌癥治療、組合方式治療)聯(lián)合應(yīng)用(例如，在其之前、同時(shí)或之后)。例如，組合物可以用于監(jiān)測(cè)治療進(jìn)展。例如，在治療方案之前、之后或同時(shí)確定待治療疾病是否可檢測(cè)(如上關(guān)于治療方法的描述)。

在一些實(shí)施方式中，在手術(shù)(例如，去除腫瘤或淋巴結(jié)等)之前或之后施用組合物。在其它實(shí)施方式中，在手術(shù)后和放療之前、同時(shí)或之后施用合組合物。手術(shù)和/或放療中的一種或多種，與給予本文所述組合物和任選地其它一種或多種化療藥的最佳聯(lián)合，可以由主治醫(yī)師根據(jù)個(gè)體并考慮影響特定個(gè)體的各個(gè)因素而確定，包括本文所述的那些因素。

在特定實(shí)施方式中，含藥物組合物或藥物制劑可以與5-氟尿嘧啶和/或亞葉酸中的一種或兩種聯(lián)合施用。在其它實(shí)施方式中，含藥物組合物或藥物制劑可以與一種或多種其它抗癌藥聯(lián)合施用，如卡培他濱、UFT/LV(替加氟-尿嘧啶(tegafur-uracil)和亞葉酸)、依立替康、抗EGFR抗體(例如，西妥昔單抗等)、抗VEGF抗體(例如，阿瓦斯丁等)、酪氨酸激酶抑制劑(例如，埃羅替尼)等。這種施用也可以與包含放療和/或手術(shù)的治療方案聯(lián)合。在一些實(shí)施方式中，靶向脂質(zhì)體中的包封藥物是奧沙利鉑。

結(jié)合本文所述的方法和應(yīng)用，可以腸胃外給予本發(fā)明的含脂類組合物或藥物制劑。腸胃外給予可以通過彈丸注射(IV)、輸注(IV)、腹膜內(nèi)注射或通過局部注射(如顱內(nèi)注射)實(shí)現(xiàn)。在一些實(shí)施方式中，施用是通過彈丸注射或持續(xù)輸注進(jìn)行的。

持續(xù)靜脈內(nèi)輸注可以在數(shù)分鐘或數(shù)小時(shí)期間施用。例如，但不限于，約10分鐘至約5小時(shí)，約15分鐘至約4小時(shí)；約30分鐘至約4小時(shí)；約45分鐘至約4小時(shí)，約60分鐘至約4小時(shí)，約45分鐘至約3小時(shí)，約60分鐘至約2小時(shí)，約90分鐘至約3小時(shí)，約90分鐘至約2小時(shí)，約10分鐘，約15分鐘，約20分鐘，約30分鐘，約45分鐘，約50分鐘，約60分鐘，80分鐘，約1.5小時(shí)，約2小時(shí)，約2.5小時(shí)，約3小時(shí)，約3.5小時(shí)，約4小時(shí)，約5小時(shí)，約12小時(shí)，約24小時(shí)，約36小時(shí)，或約48小時(shí)。
制劑和劑量
如前述，本文所述的含脂類組合物和藥物制劑可以被施用給需要的個(gè)體，用于結(jié)合本文所述的應(yīng)用方法治療或診斷本文所述的疾病。

本文所述的含脂類組合物，特別是本文所述的靶向脂質(zhì)體，一般將以實(shí)現(xiàn)意圖結(jié)果的有效量使用，例如，以治療或預(yù)防所治療的特定疾病的有效量使用。所述組合物(一種或多種)可以被治療性給予，以便獲得治療益處。治療益處是指所治療的基礎(chǔ)疾病的根治或改善和/或與基礎(chǔ)疾病有關(guān)的一種或多種癥狀的根治或改善，使得患者在感覺和狀態(tài)方面報(bào)告有改進(jìn)，雖然該患者可能仍然受到基礎(chǔ)疾病的折磨。治療益處也包括疾病進(jìn)展的停止或減緩，不論是否實(shí)現(xiàn)改進(jìn)。

在一些實(shí)施方式中，當(dāng)所治療的疾病是癌癥時(shí)，有效量是足以降低腫瘤生長(zhǎng)(例如，由治療前和/或后的平均腫瘤體積的增加速度所測(cè)定)的量。在一些實(shí)施方式中，有效量是足以降低平均腫瘤體積的量(例如，當(dāng)治療后的平均腫瘤體積相比于治療前的平均腫瘤體積降低時(shí))。

為了給予有效量的包封藥物(例如，奧沙利鉑)而施用的組合物的量將取決于多種因素，包括，例如，所治療的特定疾病、給藥方式、所治療疾病的嚴(yán)重性和患者的年齡和體重、組合物的生物利用度、所治療個(gè)體經(jīng)歷的不利效應(yīng)等。考慮到本文提供的教導(dǎo)，對(duì)有效劑量的確定完全在本領(lǐng)域技術(shù)人員的能力范圍內(nèi)。

在一些實(shí)施方式中，在特定時(shí)間點(diǎn)施用的包封的奧沙利鉑的劑量將是約1至約400mg/m2/日的范圍。例如，約1至約350mg/m2/日、1至約300mg/m2/日、1至約250mg/m2/日、1至約200mg/m2/日、1至約150mg/m2/日、1至約100mg/m2/日、約5至約80mg/m2/日、約5至約70mg/m2/日、約5至約60mg/m2/日、約5至約50mg/m2/日、約5至約40mg/m2/日、約5至約20mg/m2/日、約10至約80mg/m2/日、約10至約70mg/m2/日、約10至約60mg/m2/日、約10至約50mg/m2/日、約10至約40mg/m2/日、約10至約20mg/m2/日、約20至約40mg/m2/日、約20至約50mg/m2/日、約20至約90mg/m2/日、約30至約80mg/m2/日、約40至約90mg/m2/日、約40至約100mg/m2/d日、約80至約150mg/m2/日、約80至約140mg/m2/日、約80至約135mg/m/日、約80至約130mg/m2/日、約80至約120mg/m2/日、約85至約140mg/m2/日、約85至約135mg/m2/日、約85至約135mg/m2/日、約85至約130mg/m2/m2/日或約85至約120mg/m2/日的范圍。特定時(shí)間點(diǎn)施用的劑量也可以是約130mg/m2/日、約120mg/m2/日、約100mg/m2/日、約90mg/m2/日、約85mg/m2/日、約80mg/m2/日、約70mg/m2/日、約60mg/m2/日、約50mg/m2/日、約40mg/m2/日、約30mg/m2/日、約20mg/m2/日、約15mg/m2/日或約10mg/m2/日。

施用的劑量可以高于或低于本文所述的劑量范圍，這取決于組合物的生物利用度、個(gè)體對(duì)不利副作用的耐受性、給藥方式和上述各種因素等因素。根據(jù)處方醫(yī)師的判斷，可以對(duì)給藥劑量和給藥間隔單獨(dú)調(diào)節(jié)，以便提供足以維持治療作用的組合物血漿水平?？紤]到本文提供的教導(dǎo)，技術(shù)人員將能夠優(yōu)化有效局部劑量而無需過多的試驗(yàn)。

應(yīng)用體內(nèi)動(dòng)物模型，也可以估計(jì)劑量，如本領(lǐng)域技術(shù)人員所理解。

多劑量的(例如，持續(xù)或彈丸)本文所述組合物也可以被施用于需要的個(gè)體，持續(xù)數(shù)小時(shí)、數(shù)日、數(shù)周或數(shù)月。例如，但不限于，每日、每隔一日、每10日、每周、每月、每周兩次、每周三次、每月兩次、每月三次、每月四次、每月五次、每?jī)蓚€(gè)月、每三個(gè)月、每四個(gè)月等。
試劑盒
也提供了施用本文所述組合物的試劑盒，其包括含有組合物的藥物制劑。

在一些實(shí)施方式中，試劑盒可以包括給藥劑量(例如，用于治療或診斷的劑量)的至少一種含脂類組合物或其藥物制劑，如本文所公開。試劑盒還可以包括合適的包裝和/或組合物的使用說明書。試劑盒也可以包括輸送組合物、或其藥物制劑的工具，如用于注射的注射器或本文所述和本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其它工具。

在一些實(shí)施方式中，試劑盒可以包括給藥劑量(例如，用于治療或診斷的劑量)的空白脂質(zhì)體或其藥物制劑，如本文所公開。試劑盒還可以包括合適的包裝和/或組合物的使用說明書。試劑盒也可以包括輸送組合物、或其藥物制劑的工具，如用于注射的注射器或本文所述和本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其它工具。此外，在一些實(shí)施方式中，試劑盒可以含有待摻入空白脂質(zhì)體的單獨(dú)劑量的藥物或標(biāo)記化合物。

此外，含脂類組合物或其藥物制劑可以以試劑盒形式裝配。試劑盒提供了含脂類組合物或其藥物制劑和用于制備施用組合物的試劑。組合物可以是干燥或凍干形式，或者在溶液中，特別是無菌溶液中。當(dāng)組合物為干燥形式時(shí)，試劑可以包括藥學(xué)上可接受的稀釋劑，用于制備液體制劑。這種稀釋劑包括本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的稀釋劑，例如，糖溶液，諸如葡萄糖、蔗糖等。在一些實(shí)施方式中，試劑盒可以包括約1％至約20％、約1％至約18％、約1％至約15％、約1％至約10％、約3％至約10％、約3％至約6％、約1％、約2％、約3％、約4％、約5％、約6％、約7％、約8％、約9％、約10％、約12％、約15％、約18％或約20％糖的糖溶液。在一些實(shí)施方式中，溶液可以是葡萄糖溶液(例如，約1％、約2％、約5％的葡萄糖等)。在一些實(shí)施方式中，含脂類組合物可以是，例如，靶向脂質(zhì)體、空白脂質(zhì)體、脂類混合物或含脂質(zhì)體組合物(任選地包含藥物或標(biāo)記化合物)。

試劑盒也可以包括施用或分配組合物的工具，包括但不限于，注射器、吸液管或本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其它工具。當(dāng)處于濕形式時(shí)，組合物可以貯存在安瓿或其它無菌密封容器中，包括本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的那些。

試劑盒可以包括其它治療化合物，用于與本文所述化合物聯(lián)合使用。在一個(gè)實(shí)施方式中，治療藥是其它抗癌藥。這些藥劑可以以單獨(dú)形式提供，或者與本發(fā)明化合物混合，只要這種混合不降低本文所述組合物和制劑中的任一其它治療藥的效率即可。類似地，試劑盒可以包括其它藥劑用于輔助治療。例如，降低藥物副作用的藥劑(例如，抗惡心藥、抗脫發(fā)藥、免疫增強(qiáng)劑等)。

試劑盒將包括制備和施用組合物、組合物的副作用和任何其它相關(guān)信息的合適的說明書。說明書可以是任何適當(dāng)形式，包括但不限于印刷物、錄像帶、計(jì)算機(jī)可讀盤、或光盤。

在本發(fā)明的另一方面，提供了治療遭受本文所述疾病或易受本文所述疾病影響的個(gè)體的試劑，其包括含有給藥劑量的本文所述含脂類組合物或其制劑的第一容器，和使用說明書。容器可以是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知并且適于貯存和輸送靜脈制劑的任何容器。在一些實(shí)施方式中，試劑盒還包括第二容器，其包含藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑、輔劑等，用于制備待施用于個(gè)體的組合物。

也提供了含有足夠量的本文公開的組合物或其制劑的試劑盒，以便為個(gè)體提供有效治療延長(zhǎng)的一段時(shí)期，如1周、2周、3周、4周、6周、8周、3個(gè)月、4個(gè)月、5個(gè)月、6個(gè)月、7個(gè)月、8個(gè)月、9個(gè)月或更長(zhǎng)。

試劑盒也可以包括多劑量的含脂類組合物或其制劑，以及使用說明書，并且以足以在藥房中貯存和使用的量包封，例如，醫(yī)院藥房和配藥房。

本文提及的所有專利、專利申請(qǐng)和公布以整體并入本文作為參考。
實(shí)施例
本發(fā)明將參照下列實(shí)施例進(jìn)一步描述，然而，這些實(shí)施例不限制本發(fā)明的范圍。
實(shí)施例1奧沙利鉑的細(xì)胞毒性試驗(yàn)
通過以8mg/ml濃度將奧沙利鉑溶解在9％蔗糖溶液(蔗糖/蒸餾水)中，制備奧沙利鉑(l-OHP)溶液。應(yīng)用商業(yè)可得的細(xì)胞毒性分析試劑盒WST-1 kit，Wako Pure Chemical Industries，Ltd.，Japan)確定細(xì)胞存活。

在37℃，在5％CO2下，應(yīng)用l-OHP溶液濃縮液[200×(1/2)(0-10)nM]處理在補(bǔ)充有10％FCS(胎牛血清；SIGMA，USA)的RPMI 1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)的AsPC-1細(xì)胞(由Research Center for Advanced Science andTechnology，the University of Tokyo，Japan的Hironobu Yanagie博士提供)48小時(shí)。然后，去除培養(yǎng)基并且向細(xì)胞加入底物(WST-1，CellCounting Kit，Dojindo Laboratories，Japan)，所述細(xì)胞在37℃，在5％CO2下溫育2小時(shí)，產(chǎn)生著色產(chǎn)物。在Immuno Mini NJ-2300(Cosmo Bio Co.，Ltd.，Japan)上，以450nm下的吸光度測(cè)定生成的顏色(參考波長(zhǎng)620nm)。

結(jié)果示于圖6中。發(fā)現(xiàn)l-OHP的細(xì)胞毒性是LD50＞8μg/ml。
實(shí)施例2細(xì)胞表面上轉(zhuǎn)鐵蛋白受體數(shù)目的確定
在試驗(yàn)中應(yīng)用人正常白細(xì)胞和人惡性腫瘤衍生細(xì)胞系(K562，MKN45P和HL60)，所述如下獲得K562TKG0210(CellResource Center for Biomedical Research，Institute of Department，Agingand Cancer，Tohoku University，Japan)；MKN45PDr.Hisae Iinuma，Teikyo University School of Medicine，Japan；HL60TKG0345(CellResource Center for Biomedical Research，Institute of Department，Agingand Cancer，Tohoku University，Japan)。

每一細(xì)胞表面上Tf(轉(zhuǎn)鐵蛋白)受體數(shù)目由Scatchard分析(Comp.Biochem.Physiol.，116B，137-160(1949)，應(yīng)用Microsoft Excel)測(cè)定。通過碘化(iodogen)方法混合125I-標(biāo)記Tf(Na-125I(PerkinElmerJapan Co.，Ltd.，Japan)和h-Tf(T-4132，SIGMA，USA)溶液(Biochem.Biophys.Res.Commun.，122，319-325(1984))，以范圍是[300×(1/2)(0-9)nM]的不同濃度將其在4℃下加入到各個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)物，并溫育1小時(shí)。

應(yīng)用Lowry方法，通過蛋白質(zhì)定量試驗(yàn)測(cè)定125I-標(biāo)記的Tf的濃度(J.Biol.Chem.，193，265-270(1951))，應(yīng)用γ計(jì)數(shù)器測(cè)定放射活性(Auto Well Gamma System ARC-300，Aloka Co.，Ltd.，Japan]。簡(jiǎn)言之，離心溶液以便沉淀細(xì)胞，應(yīng)用冰冷的PBS洗滌細(xì)胞片段(180×g(重力)，持續(xù)3分鐘，重復(fù)3次，隨后應(yīng)用γ計(jì)數(shù)器測(cè)定放射活性，以便確定與細(xì)胞表面結(jié)合的Tf的濃度。應(yīng)用Lowry方法，通過蛋白質(zhì)定量試驗(yàn)測(cè)定細(xì)胞數(shù)(J.Biol.Chem.，193，265-270(1951))。

對(duì)于每一數(shù)據(jù)點(diǎn)，從加入的Tf的已知濃度減去結(jié)合Tf的濃度，確定未結(jié)合的Tf的濃度。在橫軸上繪制結(jié)合的Tf的濃度，在縱軸上繪制結(jié)合的Tf的濃度與未結(jié)合的Tf的濃度的比值，繪制Scatchard曲線。從曲線的x軸截距確定結(jié)合Tf的數(shù)目(即，受體數(shù))，如Proc.Natl.Acad Sci USA，80 2263-2266(1983)；J.Cell Physiol，132，492-500(1987)；Proc.Natl.Acad Sci USA，92 3318-3322(1995)；J.Pharm.Sci，84，216-220(1995)；Eur.J.Biochem.，186，367-373(1989)；J.Biol，Chem.，258，4715-4724(1983)所述，其整體并入本文作為參考。

與不同細(xì)胞類型的細(xì)胞表面結(jié)合的125I-Tf數(shù)目在圖7中示出。經(jīng)確定，來源于人惡性腫瘤的細(xì)胞系的細(xì)胞表面上的轉(zhuǎn)鐵蛋白(Tf)受體數(shù)目明顯高于正常白細(xì)胞上的數(shù)目。
實(shí)施例3NHS-NG-DOPE的制備
將質(zhì)量200mg的NG-DOPE(Avanti Polar Lipids，Inc.，USA)(Cat.No.870242，MW 880.13))稱入2腿錐形瓶中。向瓶中加入39.2mgNHS(Sigma，USA，MW＝115.09)。隨后，加入5mL氯仿/乙酸乙酯(1∶1(v/v)，Wako Pure Chemical Industries，Ltd.，Japan)并攪拌，開始溶解NG-DOPE和NHS。觀察到輕微渾濁。

在初始攪拌之后，加入攪棒，并且所述瓶開始(充滿氮?dú)獾臍饽?逐漸吹入氮?dú)獾狡康囊粋€(gè)腿中，用橡膠塞封住。應(yīng)用攪棒和攪板在氮?dú)庀逻M(jìn)行攪拌。用管封住第二腿。室溫(20-23℃)下進(jìn)行反應(yīng)。攪拌混合物5-10分鐘。留出20μL的脂+NHS反應(yīng)混合物樣品，用作TLC對(duì)照。

在單獨(dú)的瓶中，通過將70mg的DCC溶解在5mL乙酸乙酯中，制備DCC(99％，Aldrich，USA，MW206.33g/mol)溶液。DCC在溶劑中快速溶解，產(chǎn)生清澈的溶液。隨后，在10-15分鐘期間內(nèi)，將如此制備的DCC溶液(約5mL)逐滴加到脂/NHS反應(yīng)混合物中。加入DCC后，反應(yīng)混合物變得更加混濁。

在時(shí)間為0時(shí)，在對(duì)照(脂/NHS)上和脂/NHS/DCC等分試樣上進(jìn)行TLC，用作參照，如下。在TLC板(鋁片-硅膠60F254，來自EMScience(Gibbstown，NJ，USA)Cat No.SP05554M)上點(diǎn)樣50μg(2.5μL，20mg/mL)，干燥，隨后放置在展開室(developing chamber)中，在那里允許溶劑(70％氯仿、28％甲醇、2％水)遷移。標(biāo)記出溶劑前沿，隨后將TLC板浸入鉬酸銨(5％鉬酸銨，在10％H2SO4中)，并用干燥劑脫水。

氮?dú)饬飨聰嚢柚?NHS/DCC反應(yīng)混合物，監(jiān)測(cè)隨時(shí)間的產(chǎn)物形成(Rf0.3-0.4)。

18小時(shí)之后，向NHS-NG-DOPE的轉(zhuǎn)化并非完全轉(zhuǎn)化，加入更多NHS(26mg，在2mL乙酸乙酯中)和DCC(47mg，在1mL乙酸乙酯中)。于T＝20hr，再次用TLC檢測(cè)反應(yīng)進(jìn)程。

室溫下使反應(yīng)在周末期間持續(xù)，其中應(yīng)用氮?dú)饬鞑嚢?防止光線)。純化前保持一些起始物。

純化在冰上冷凍反應(yīng)混合物約30分鐘。隨后使冷凍的反應(yīng)混合物濾過Buckner漏斗，隨后用2×5mL氯仿洗滌三次。收集得到的所有液體并通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)干燥。蒸發(fā)后得到半固態(tài)糊狀物。隨后將糊狀物重懸浮于2-3mL氯仿中。

應(yīng)用硅石(400目)4g——在氯仿中水合——制備純化懸浮糊狀物的硅膠。將硅膠填充在1cm×28cm帶活塞的柱上。床的大致大小是1cm×14cm。用氯仿平衡柱子(重力填充)。

將樣品上樣于平衡過(但未干燥)的硅膠柱上。向柱加入10mL氯仿(5×2mL)。收集5×2mL級(jí)分。流速是重力的函數(shù)，但是在10-20分鐘內(nèi)收集5×10mL級(jí)分并命名為級(jí)分1-5。

下一步，將50mL氯仿/甲醇(90/10，vol/vol)加入柱子(5×10mL)。收集5×10mL級(jí)分并命名為級(jí)分6-10。

收集級(jí)分6-10之后，將體積為100mL的氯仿/甲醇(5/1(v/v))加入柱子(10×10mL)。收集另外的10×10mL級(jí)分并命名為級(jí)分11-15。

如上所述，通過TLC分析級(jí)分6-15(5μL等分試樣)。

級(jí)分6-15進(jìn)行TLC之后，匯合級(jí)分7-11并應(yīng)用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)將其干燥至薄膜層。蒸發(fā)后得到的最終產(chǎn)物是130mg(收率65％)，如針對(duì)末純化反應(yīng)產(chǎn)物的TLC并與得自NOF(Japan)的標(biāo)準(zhǔn)產(chǎn)物(NHS-NG-DOPE)比較所測(cè)定。
實(shí)施例4NHS-NG-DOPE的制備
對(duì)預(yù)先制備并純化的NG-DOPE(200mg)(NOF CorporationJapan)和NHS(N-羥基硫代琥珀酰亞胺；34mg)進(jìn)行稱重，并置于帶有2個(gè)開口的5mL錐形瓶中。用橡膠塞密閉一個(gè)開口，通過剩余的開口加入攪棒。

隨后將錐形瓶置于真空下，用氮?dú)饬髦饾u填滿(重復(fù)三次)。隨后應(yīng)用氮?dú)饽覍㈠F形瓶保持在氮?dú)庀隆?br>
放置于氮?dú)庀轮螅蝈F形瓶加入2.5mL干燥氯仿，隨后用攪棒和攪板攪拌。室溫下進(jìn)行反應(yīng)約30分鐘，漩渦溶解起始物。留出20μL的脂+NHS樣品，用在反應(yīng)的TLC對(duì)照/監(jiān)測(cè)中。

隨后制備溶解在2.5mL干燥氯仿中的61mg的DCC(1，3-二環(huán)己基碳二亞胺)溶液(清澈，迅速溶解)。在15分鐘期間將DCC溶液逐滴加到脂/NHS混合物中。加入DCC后，溶液變?yōu)榛鞚帷?br>
在時(shí)間點(diǎn)0時(shí)，通過將50mg氯仿點(diǎn)到TLC板上，使其干燥，隨后將其放置在反應(yīng)室中(70％氯仿，30％甲醇，5％水)以便遷移，對(duì)脂/NHS和脂/NHS/DCC進(jìn)行TLC(70％氯仿，30％甲醇，5％水)，以便監(jiān)測(cè)反應(yīng)。

氮?dú)饬飨鲁掷m(xù)攪拌反應(yīng)混合物，隨時(shí)間的推移監(jiān)測(cè)產(chǎn)物的形成(Rf0.3-0.4)。

室溫下使反應(yīng)在2-3天期間進(jìn)行，同時(shí)應(yīng)用氮?dú)饬鞑嚢琛?br>
隨后使反應(yīng)混合物濾過Bruchner漏斗，應(yīng)用2×5mL氯仿洗滌兩次。收集全部溶液并通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)干燥。得到半固態(tài)糊狀物。

將半固態(tài)糊狀物重懸浮于2-3mL氯仿中，隨后過濾和干燥。重復(fù)此過程三次。最后，三次后將產(chǎn)物重懸浮于2×3mL氯仿中。

通過在氯仿中混合硅石制備柱硅膠，隨后填充于帶有活塞的1cm×28cm柱子上。柱床的大致尺寸是1cm×14cm。用氯仿平衡柱子(重力填充)。

將樣品上樣子平衡過(但未干燥)的硅膠柱上。隨后向柱加入100mL氯仿，收集100mL級(jí)分等分試樣。流速是重力的函數(shù)。(級(jí)分1)
級(jí)分1.向柱子加入100mL氯仿/甲醇(90/10，vol/vol)。收集100mL級(jí)分。(級(jí)分2)
將200mL氯仿/甲醇(50/10，v/v)加入柱子(20×10mL)。收集20×10mL級(jí)分。(級(jí)分3-23)
通過TLC應(yīng)用5ml等分試樣分析級(jí)分1至23。

匯合級(jí)分9至22，應(yīng)用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)和凍干，干燥至薄膜層。來自這些級(jí)分的NHS-NG-DOPE的最終重量是61.9mg(收率27.9％)。
實(shí)施例5脂類混合物(NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH)的制備
45-50℃下，混合583mg DMPC(NOF公司，Japan)、299mg膽固醇(Wako Pure Chemical Industries，Ltd.，Japan)和75.7mg NG-DOPE(NOF公司，Japan)并溶解在t-BuOH中(10v/w，相對(duì)于脂類(10mL))。

將得到的溶液倒入瓶中并在-40℃于架子上冷凍約8小時(shí)。使其減壓至約0.1mmHg并于減壓下保持2天，同時(shí)溫度從-40℃逐步升高至25℃，從該過程得到凍干脂混合物。

如上得到的凍干脂混合物粉末與20mg的粉末狀Tf-NG-DOPE(如實(shí)施例29制備)混合并擊碎。從而得到脂混合物的均一粉末，脂類比是50∶45∶5(DMPC∶Chol∶NG-DOPE+Tf-NG-DOPE)。
實(shí)施例6含脂質(zhì)體組合物的制備
按照前面的實(shí)施例制備脂混合物，成分詳述如下 條目1DMPC/Chol/NG-DOPE(155mg/79.4mg/16.1mg) 條目2DMPC/Chol/NG-DOPE(155mg/79.4mg/16.1mg) 條目3DMPC/Chol/NG-DOPE/NHS-NG-DOPE (152mg/77.9mg/15.8mg/4.38mg) 條目4DMPC/Chol/NG-DOPE/NHS-NG-DOPE (152mg/77.9mg/15.8mg/4.38mg) 條目5DMPC/Chol/NG-DOPE/Tf-NG-DOPE (148mg/76.0mg/15.4mg/4.8mg) 條目6DMPC/Chol/NG-DOPE/Tf-NG-DOPE (148mg/76.0mg/15.4mg/4.8mg)
45-50℃下，各自水合條目(Entries)1、3和5，與300mM蔗糖水溶液(20v/w，相對(duì)于脂類(5mL)(將5mL蔗糖溶液(20v/w)加入干燥的脂類混合物并攪拌)一起攪拌30分鐘。45-50℃下，各自水合條目2、4和6，并與l-OHP水溶液(8mg l-OHP/mL，20v/w，相對(duì)于液體(5mL)，在300mM蔗糖溶液中)一起攪拌30分鐘。從而得到含脂質(zhì)體混合物。

通過QELS測(cè)定脂質(zhì)體直徑，結(jié)果示于圖8中。含脂質(zhì)體混合物中存在的脂質(zhì)體具有平均直徑500-2,000nm并且具有約100-10,000nm的寬的大小分布。
實(shí)施例7含奧沙利鉑脂質(zhì)體(NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH)的制備
脂質(zhì)體的組分如下 二肉豆蔻?；字Ｄ憠A(1，2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油-3-磷酸膽堿DMPC)(NOF Corporation，Japan) 膽固醇(CH)(Solvay Pharmaceuticals B.V.，Netherlands) N-戊二?；?二油酰基磷脂酰乙醇胺(N-戊二?；?1，2-二油?；?sn-甘油-3-磷酸乙醇胺鈉鹽DOPE-CO-(CH2)3-COOH；下文表示為NG-DOPE)(NOF Corporation，Japan) Succ-N-戊二?；?二油?；字Ｒ掖及?N-(琥珀酰亞胺基-戊二?；?-1，2-二油?；?sn-甘油-3-磷酸乙醇胺鈉鹽DOPE-CO-(CH2)3-CO-OSu；下文表示為NHS-NG-DOPE)(NOFCorporation，Japan) DMPC∶CH∶NG-DOPE∶NHS-NG-DOPE＝50∶45∶4∶1(m/m)。

作為水相，應(yīng)用l-OHP水溶液(8mg/ml，在300mM蔗糖溶液中)。

將DMPC、CH、NG-DOPE和NHS-NG-DOPE(摩爾比50∶45∶4∶1)溶解在4v/w(相對(duì)于脂總重量)的溫?zé)嵋掖?叔丁醇/水溶劑中。約45℃下，將脂溶液注射入含約8mg/ml l-OHP的300mM蔗糖溶液中，因而溶劑濃度成為約14％v/v。

約45℃下，在壓力約200-800psi下，使懸浮液通過重疊有5片100nm濾膜(Cat.No.112105，Whatman pic，UK)(lapped over fivepieces of 100nm filters)的擠出機(jī)。從而得到脂質(zhì)體，其平均直徑是大約100nm。應(yīng)用QELS測(cè)定脂質(zhì)體直徑。

混合6L磷酸鹽緩沖液(pH7.9)、6L轉(zhuǎn)鐵蛋白(Cat.No.4455，Selorogicals，GA，USA)溶液(20mg/ml)和18L脂質(zhì)體懸浮液并于30℃攪拌15-60分鐘。這得到了含有4mg/ml轉(zhuǎn)鐵蛋白和20mg/ml脂類的反應(yīng)混合物。

根據(jù)賣主提供的說明書，應(yīng)用二辛可寧酸(BCA)試驗(yàn)進(jìn)行轉(zhuǎn)鐵蛋白定量分析。

應(yīng)用SDS-PAGE(十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳)研究摻入轉(zhuǎn)鐵蛋白后的分子量增加情況。對(duì)NG-DOPE的分析是通過具有蒸發(fā)光散射檢測(cè)器(ELSD2000，Alltech，MD，USA)的高效液相色譜(HPLC)進(jìn)行的，其中應(yīng)用硅膠柱(YMC PVA Silica Column，4.6×250mm，5μm)。
實(shí)施例8含奧沙利鉑脂質(zhì)體(NG-DSPE:TF-NG-DSPE:DSPC:CH)的制備
脂質(zhì)體的組成如下 二硬脂?；字Ｄ憠A(1，2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-膽堿磷酸:DSPC)膽固醇(CH) N-戊二?；?二硬脂?；字Ｒ掖及?N-戊二酰基-1，2-二硬脂?；?sn-甘油-3-磷酸乙醇胺鈉鹽DSPE-(CH2)3-COOH；下文表示為NG-DSPE) DSPC∶CH∶NG-DSPE＝2∶1∶0.2(mol/mol)
作為水相，應(yīng)用l-OHP水溶液(8mg/ml，在9％蔗糖溶液中)，如實(shí)施例1所述。

將DSPC(MC8080，NOF，Japan)、膽固醇(038-03005，WakoPure Chemical Industries，Ltd.，Japan)和NG-DSPE(Dr.Kazuo Maruyama，Teikyo University，F(xiàn)aculty of Pharmaceutical Scierces，Japan)以比例2∶1∶0.2(m/m)溶解在氯仿和異丙醚中。

向得到的溶液加入l-OHP溶液(在9％蔗糖溶液中)，隨后對(duì)得到的混合物超聲波處理約15-30分鐘。隨后通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)于60℃蒸發(fā)溶液，以便去除溶劑并重復(fù)凍/融五次。冷凍懸浮液(通過浸沒在干冰/丙酮浴中)和融化(通過使其靜止并浸沒在溫水中)。重復(fù)五次。

隨后，于60℃應(yīng)用EXTRUDER濾膜對(duì)得到的產(chǎn)物進(jìn)行大小篩分(兩次在400nm，隨后五次在100nm)，(LipexTM Extruder，ModelNo.T-001，Northern Lipids Inc.，Canada)并超速離心(200,000×g，60min，于大約4℃下)。將沉淀物重懸浮于9％蔗糖溶液或MES緩沖液中(pH5.5)(MES緩沖液Cat.No.345-01625，Dojindo Laboratories，Japan)，得到包封l-OHP的NG-DSPE:DSPC:CH脂質(zhì)體。

隨后，對(duì)包封l-OHPNG-DSPE:DSPC:CH脂質(zhì)體應(yīng)用轉(zhuǎn)鐵蛋白(Tf)衍生化。向因此得到的包封l-OHP的NG-DSPE脂質(zhì)體加入1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺氫氯化物(EDC；Cat.No.#22980，Pierce Biotechnology，Inc.，USA)(其量相對(duì)于脂類重量是2.7％)和N-羥基硫代琥珀酰亞胺(S-NHS；038-0432，Wako Pure Chemical Industries，Ltd.，Japan)(其量相對(duì)于脂類重量是7.3％)，并使混合物在室溫下放置10分鐘。

隨后，向得到的溶液加入轉(zhuǎn)鐵蛋白(Tf)(其量相對(duì)于脂類重量是20％；(Cat.No.T4132，SIGMA，USA))并于室溫下攪拌3小時(shí)。加入1mM轉(zhuǎn)鐵蛋白(Tf)(其量相對(duì)于反應(yīng)混合物總體積是20％)的PBS(磷酸鹽緩沖液)溶液和1mM PBS(其量相對(duì)于反應(yīng)混合物總體積是20％)，室溫下攪拌得到的溶液1小時(shí)。

向如此得到的脫鐵蛋白形式的Tf-NG-DSPE脂質(zhì)體，將10-40當(dāng)量(相對(duì)于轉(zhuǎn)鐵蛋白)的檸檬酸鐵-檸檬酸鈉(Wako Pure ChemicalIndustries，Ltd.，Japan)加入懸浮液并于室溫下攪拌15分鐘。如上超濾得到的溶液。隨后將沉淀物重懸于9％蔗糖溶液中，從而得到全蛋白形式的Tf-NG-DSPE脂質(zhì)體。對(duì)溶液超速離心(200,000×g，60min，大約4℃)，隨后將沉淀物重懸浮于9％蔗糖溶液中。

根據(jù)賣主提供的說明書，應(yīng)用二辛可寧酸(BCA)試驗(yàn)進(jìn)行轉(zhuǎn)鐵蛋白定量分析(Cat.No.23227，BCATM Protein Assay Kit，PierceBiotechnology，Inc.，USA)。

應(yīng)用SDS-PAGE(十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳)研究衍生化后的分子量增加情況。對(duì)NG-DSPE的分析是通過具有蒸發(fā)光散射檢測(cè)器(ELSD2000，Alltech，MD，USA)的高效液相色譜(HPLC)進(jìn)行的，其中應(yīng)用硅膠柱(YMC PVA Silica Column，4.6×250mm，5μm)。
實(shí)施例9PEG化的含奧沙利鉑脂質(zhì)體的制備
按照實(shí)施例8中的試驗(yàn)方案，制備DSPC:膽固醇:DSPE-PEG(2K)-OMe:DSPE-PEG(3.4K)-COOH脂質(zhì)體(Tf-PEG-脂質(zhì)體)。在這些脂質(zhì)體中，組分比例如下DSPC∶膽固醇∶DSPE-PEG(2K)-OMe∶DSPE-PEG(3.4K)-COOH＝2∶1∶0.16∶0.03。

此脂質(zhì)體含有以摩爾計(jì)6％的PEG-脂和以摩爾計(jì)1％的PEG-COOH-脂，Tf通過PEG-COOH結(jié)合于脂質(zhì)體。

實(shí)施例8的方法也制備Tf/PEG-DSPE脂質(zhì)體(Tf/PEG-NG-DSPE脂質(zhì)體)。

在這些脂質(zhì)體中，組分比例如下DSPC∶膽固醇∶DSPE-PEG(2K)-OMe∶NG-DSPE＝2∶1∶0.16∶0.03。

用PEG衍生化此脂質(zhì)體，而Tf通過NG-DSPE與脂質(zhì)體結(jié)合。PEG-衍生化脂質(zhì)體也可以通過美國(guó)專利申請(qǐng)公開2003/0224037和2004/0022842中描述的方法產(chǎn)生，其公開內(nèi)容整體并入本文。
實(shí)施例10空白脂質(zhì)體的制備
將DMPC、Chol(Wako Pure Chemical Industries，Ltd.，Japan)、NG-DOPE(NOF Corporation，Japan)和NHS-NG-DOPE(NOFCorporation，Japan)的混合物(摩爾比是50∶45∶4∶1；分別為410g DMPC，211g Chol，43g NG-DOPE和12g NHS-NG-DOPE)溶解在4 v/w(相對(duì)于脂總重量)的溫?zé)嵋掖?叔丁醇/水溶劑中。在45℃下攪拌溫育20L體積的所得到的懸液，并使之在壓力約200-800psi下于約45℃通過重疊有5層聚碳酸酯100nm濾膜(Cat.No.112105，Whatman pic，UK)的擠出機(jī)(Stevested Machinery&Engineering Ltd.，Canada)。因而得到脂質(zhì)體，其平均直徑是大約100nm。脂質(zhì)體直徑通過QELS測(cè)定。

混合脂質(zhì)體懸浮液、PBS緩沖液(pH7.9)和轉(zhuǎn)鐵蛋白(Cat.No.4455，Selorogicals，GA，USA)的PBS溶液(pH7.0)，比例是3∶1∶1(v/v)，隨后于30℃下攪拌15-60分鐘。因而得到約6L空白脂質(zhì)體。

將20g(約19mL)脂質(zhì)體溶液倒入瓶中并在架子上于-40℃冷凍約8小時(shí)。對(duì)其減壓至約0.1mmHg并保持在減壓下約2天，同時(shí)在2天期間逐漸使溫度從-40℃升高到25℃。此方法完成時(shí)，因而得到約3.5g的凍干空白脂質(zhì)體。隨后于4℃貯存脂質(zhì)體。
實(shí)施例11奧沙利鉑在預(yù)先制備的空白脂質(zhì)體中的包封
將l-OHP水溶液(8mg/mL，在300mM蔗糖溶液中)加入約3.5g的凍干空白脂質(zhì)體中并通過40℃下攪拌2小時(shí)再水合。攪拌之后，通過應(yīng)用Sephadex G-25(1×45cm)分離，從游離l-OHP分離脂質(zhì)體l-OHP。分別應(yīng)用VIS 600nm和UV 210nm監(jiān)測(cè)脂質(zhì)體l-OHP和游離l-OHP。

測(cè)定l-OHP和膽固醇的量。對(duì)于將脂質(zhì)體級(jí)分濃縮至原始膽固醇濃度的情況，計(jì)算l-OHP濃度，最終，通過比較脂質(zhì)體的l-OHP濃度和l-OHP的給予濃度來測(cè)定l-OHP的收率。

對(duì)于將脂質(zhì)體級(jí)分濃縮至原始膽固醇濃度的情況，l-OHP總濃度是210μg/mL。l-OHP的收率是2.6％。

這表明210μg/mL的l-OHP被包封在凍干空白脂質(zhì)體中。
實(shí)施例12血液和器官中脂質(zhì)體水平的比較
在帶有腫瘤的小鼠中，進(jìn)行比較研究以評(píng)價(jià)包封l-OHP的Tf-修飾脂質(zhì)體組合物的血液滯留和在器官中的累積。用5周齡的雄性BALB/c小鼠作為動(dòng)物模型，應(yīng)用Colon 26細(xì)胞(衍生自小鼠結(jié)腸癌)作為腫瘤細(xì)胞。細(xì)胞得自Laboratoryof Biopharmaceutics，TeikyoUniversity School of Pharmaceutical Sciences，Japan。

將體外傳代培養(yǎng)的Colon 26細(xì)胞(2×106細(xì)胞)皮下植入小鼠的背區(qū)。使用帶有直徑約8至10mm的腫瘤(平均生長(zhǎng)8至10天后)的小鼠作為帶有結(jié)腸癌的小鼠。將實(shí)施例5和6中制備的每一脂質(zhì)體的溶液或l-OHP(8mg/ml，在9％蔗糖溶液中)注射入尾靜脈。在每一情況下，以5mg l-OHP/kg體重調(diào)整奧沙利鉑濃度。作為脂質(zhì)體，應(yīng)用Tf-NG-DSPE脂質(zhì)體((■)；實(shí)施例5)、Tf/PEG-NG-DSPE脂質(zhì)體((▲)；實(shí)施例6)和Tf-PEG-DSPE脂質(zhì)體((◆)；實(shí)施例6)。

施用后1、3、6、24、48和72小時(shí)，對(duì)每一組在每一時(shí)間點(diǎn)，從3只小鼠收集血液、血漿、肝臟、脾臟、腎臟、心臟、肺臟和腫瘤組織。用原子吸附(AA)測(cè)定血液、每一器官和腫瘤組織中的Pt濃度，計(jì)算l-OHP濃度并報(bào)告為與劑量的比例(％)。血液中的濃度在圖9中表示。

相比于Tf-PEG-DSPE脂質(zhì)體和Tf/PEG-NG-DSPE脂質(zhì)體，在施用后3小時(shí)，Tf-NG-DSPE脂質(zhì)體表現(xiàn)出基本上相同的血液滯留。然而，6小時(shí)后，Tf-NG-DSPE脂質(zhì)體表現(xiàn)出一些血液滯留，但是相比于PEG脂質(zhì)體，其更迅速地從血液中消失。腫瘤組織中的濃度在圖10中示出。Tf-NG-DSPE脂質(zhì)體表現(xiàn)出與Tf-PEG-DSPE脂質(zhì)體和Tf/PEG-DSPE脂質(zhì)體基本上相同的腫瘤組織累積，雖然隨著時(shí)間的推移其以較低的濃度保持在血液中。

從上面的結(jié)果，發(fā)現(xiàn)施用后約6小時(shí)的血液滯留時(shí)間是必要的并且足以以顯著水平或較高水平輸送足夠濃度的藥物到達(dá)小鼠的腫瘤組織。認(rèn)為血液中的滯留時(shí)間長(zhǎng)于這一時(shí)間可以增加在正常組織中引起副作用的可能性。
實(shí)施例13診斷性脂質(zhì)體的制備和125I在腫瘤組織中的累積
以與實(shí)施例7中相同的方式制備脂質(zhì)體，除了[125I]-酪胺菊粉(在PBS溶液中)替換l-OHP，得到DMPC/CH/NG-DOPE/Tf-NG-DOPE/[125I]-酪胺菊粉脂質(zhì)體。也如實(shí)施例7所述得到脂類組分。應(yīng)用下示組分制備脂質(zhì)體制劑。缺少Tf-NG-DOPE的脂質(zhì)體作為脂質(zhì)體的非靶向分布的對(duì)照。靶向脂質(zhì)體DMPC/CH/NG-DOPE/Tf-NG-DOPE(63.3/31.7/4/1(m/m))非靶向脂質(zhì)體(對(duì)照)DMPC/CH/NG-DOPE(63.3/31.7/5(m/m))
通過混合Na-125I(PerkinElmer Japan Co.，Ltd.，Japan)和酪胺菊粉(Dr.Kazuo Maruyama，Teikyo University，F(xiàn)aculty of PharmaceuticalSciences，Japan)，應(yīng)用碘化方法(Biochem.Biophys.Res.Commun.，122，319-325(1984)，整體并入本文作為參考)，將125I結(jié)合于酪胺菊粉。從而得到125I-酪胺菊粉。隨后將濃度約1mg/mL的125I-酪胺菊粉/PBS(-)溶液包封入實(shí)施例7所述的脂質(zhì)體中。

將100μl每一脂質(zhì)體溶液注射入如實(shí)施例12所述的帶有鼠結(jié)腸癌的小鼠的尾靜脈中。施用后1、6、24和48小時(shí)，對(duì)于每一組，在每一時(shí)間點(diǎn)，從5只小鼠收集腫瘤組織和尾。測(cè)定腫瘤組織重量，應(yīng)用γ計(jì)數(shù)器，測(cè)定腫瘤組織和尾中的放射活性(單位cpm)(Aloka AutoGamma System ARC-300，Japan)。結(jié)果被評(píng)價(jià)為腫瘤組織中的分布量(劑量百分?jǐn)?shù)/g-腫瘤)＝[(腫瘤組織中的計(jì)數(shù)值)-(b.g.值)]×100/[(Std.計(jì)數(shù)值)-(尾中的計(jì)數(shù)值)]/(腫瘤組織的重量(g))。125I放射活性半衰期是約60天。

100μl施用溶液(標(biāo)準(zhǔn)物Std.)的放射活性被定義為100％，空試管的計(jì)數(shù)值被定義為背景(b.g.)值。結(jié)果在圖11中表示。如從圖11顯而易見的，Tf-修飾脂質(zhì)體表現(xiàn)出向腫瘤組織的高累積，而非靶向脂質(zhì)體不表現(xiàn)出高累積。這些結(jié)果證明，包封放射活性化合物的脂質(zhì)體對(duì)于腫瘤組織的檢測(cè)是有用的。
實(shí)施例14脂質(zhì)體的抗腫瘤效應(yīng)的比較
對(duì)于包封l-OHP的Tf-修飾脂質(zhì)體組合物(實(shí)施例9中制備的Tf-PEG-脂質(zhì)體，實(shí)施例8中制備的Tf-NG-DSPE:NG-DSPE:DSPC:CH脂質(zhì)體，實(shí)施例9中制備的Tf/PEG-NG-DSPE脂質(zhì)體；每組9只小鼠)和未結(jié)合轉(zhuǎn)鐵蛋白的每一脂質(zhì)體組合物((-)TF；每組6只小鼠)，進(jìn)行比較試驗(yàn)，以便評(píng)價(jià)它們對(duì)帶有結(jié)腸癌Colon 26的小鼠的抗腫瘤效應(yīng)。

以與實(shí)施例12中相同的方式制備帶有腫瘤的小鼠。作為對(duì)照，應(yīng)用l-OHP溶液(8mg/ml，在9％蔗糖溶液中)。以5mg/kg劑量給予l-OHP的日期定義為起始日期，在第4天，以劑量5mg/kg再次給予l-OHP。第0天的腫瘤大小定義為1，大小顯示為基于此起始大小的比例。在第0、2、5、7、10、13、15、18和21天測(cè)定腫瘤大小，研究存活天數(shù)。

結(jié)果在圖12中示出。

如圖12所見，結(jié)合有轉(zhuǎn)鐵蛋白的脂質(zhì)體組合物表現(xiàn)出對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的抑制作用。另一方面，相比于結(jié)合轉(zhuǎn)鐵蛋白的脂質(zhì)體組合物，未結(jié)合轉(zhuǎn)鐵蛋白的脂質(zhì)體組合物對(duì)腫瘤生長(zhǎng)有更弱的抑制作用。從圖9和10中描述的結(jié)果來看，發(fā)現(xiàn)施用后約6小時(shí)的滯留時(shí)間是必要的并且足以使結(jié)合轉(zhuǎn)鐵蛋白的脂質(zhì)體對(duì)腫瘤生長(zhǎng)有抑制作用和使得累積到腫瘤組織的藥物濃度明顯并且基本上為同一水平。認(rèn)為血液中的滯留時(shí)間長(zhǎng)于此時(shí)間可以增加對(duì)正常組織引起副作用的可能性。
實(shí)施例15NG-DSPE含量的優(yōu)化
為了確定脂質(zhì)體中NG-DSPE的最佳混合比，研究正常小鼠中未包封抗癌藥的NG-DSPE的血液滯留。以如實(shí)施例8中相同的方式制備未包封抗癌藥的脂質(zhì)體組合物，但是用水替代l-OHP溶液作為水相，其具有不同量的NG-DSPE。

構(gòu)成脂質(zhì)體的全部脂類成分的總摩爾含量被確定為100％，并且NG-DSPE的含量顯示為NG-DSPE與總脂類組分的比例(摩爾百分?jǐn)?shù))。此外，也制備含有按摩爾計(jì)6％的MPB脂類(MPB-DSPE)或PDP脂類(PDP-DSPE)作為組成脂類的脂質(zhì)體。通過將馬來酰亞胺基苯基丁酸鹽(MPB)(870013(16:0)，Avanti Polar Lipids，Inc，USA)結(jié)合到脂類的乙醇胺的氨基形成脂質(zhì)體，和通過MPB將Tf結(jié)合到所述脂質(zhì)體，得到MPB脂質(zhì)體。通過將2-吡啶基硫代丙酸酯(PDP)(870205(16:0，AvantiPolar Lipids，Inc，USA)結(jié)合到脂類的乙醇胺的氨基形成脂質(zhì)體，和通過PDP將Tf結(jié)合到所述脂質(zhì)體，得到PDP脂質(zhì)體。

在本試驗(yàn)中，應(yīng)用105只小鼠(ICR，雄性，6周齡)(TokyoLaboratory Animal Science Co.，Ltd.，Japan)。作為示蹤劑，將125I結(jié)合于酪胺菊粉(如實(shí)施例13所述而制備)，將約1mg/ml濃度的此菊粉溶液包封進(jìn)脂質(zhì)體。測(cè)定每一情況下收集的血液和器官的重量，應(yīng)用γ計(jì)數(shù)器(Aloka Auto Gamma System ARC-300，Japan)測(cè)定脂質(zhì)體標(biāo)記物的放射活性(單位cpm)。此外，測(cè)定施用于尾靜脈的每一溶液(100μl)的放射活性。將100μl施用溶液(標(biāo)準(zhǔn)物Std.)的放射活性定義為100％，每一器官的值(劑量百分?jǐn)?shù))表示為百分?jǐn)?shù)。估計(jì)血液總量是體重的7.3％，血液中的脂質(zhì)體量表示為全部血液中的量。空試管中的計(jì)數(shù)值定義為背景(b.g.)值，從每一樣品的計(jì)數(shù)值減去該值。

血液中的分布量(％)＝[(血液中的計(jì)數(shù)值)-(b.g.值)]×(小鼠的體重(g))×0.073×100/[(Std.計(jì)數(shù)值)-(尾部的計(jì)數(shù)值)×(血液重量(g))]。

結(jié)果在圖13中示出。當(dāng)脂類含量按摩爾計(jì)是3％或更高時(shí)，對(duì)于6小時(shí)后血中的濃度，NG-DSPE脂質(zhì)體表現(xiàn)出高的血液滯留。對(duì)于馬來酰亞胺-脂質(zhì)體(MPB 6％)，血液滯留低。
實(shí)施例16Tf和二羧酸對(duì)血液滯留的效應(yīng)
為了研究結(jié)合脂質(zhì)體的轉(zhuǎn)鐵蛋白存在與否和二羧酸類型(例如，戊二酰基、琥珀?；?的效應(yīng)，在正常小鼠中檢測(cè)其中未包封抗癌藥的結(jié)合轉(zhuǎn)鐵蛋白的脂質(zhì)體的血液滯留情況。試驗(yàn)方法與實(shí)施例15中所述的方法相同。

制備含有結(jié)合琥珀酸而不是戊二酸的磷脂的脂質(zhì)體。

如下制備NG-DSPE(戊二酸)。在暗處，在氮?dú)饬飨拢瑢SPE(ME-8080，NOF Corporation，Japan)懸浮于10倍于DSPE體積的脫水氯仿中。隨后，加入1.3當(dāng)量的三乙胺(208-02643，Wako Pure ChemicalIndustries，Ltd.，Japan)，并在室溫下逐滴加入無水戊二酸的脫水氯仿溶液(G0071，Tokyo Chemical Industry，Japan)(溶解在與DSPE體積相同的脫水氯仿中)。完成之后，使溶液在30℃反應(yīng)2小時(shí)，同時(shí)攪拌。

隨后，用醋酸鹽緩沖液(pH4.5)洗滌反應(yīng)液3次，用硫酸鎂對(duì)有機(jī)層脫水，并用水流吸氣器(water flow aspirator)抽吸過濾而過濾。隨后，減壓下于30℃濃縮濾液。當(dāng)其變得油性時(shí)(DSPE體積的約2倍)，加入甲醇形成晶體，隨后過濾。再次將其溶解在氯仿中，此過程重復(fù)兩次。隨后，室溫下減壓下干燥晶體，從而得到目標(biāo)產(chǎn)物，為白色晶體。通過與實(shí)施例8相同的方法制備NG-DSPE脂質(zhì)體。

結(jié)果在圖14中示出。通過二羧酸結(jié)合轉(zhuǎn)鐵蛋白的脂質(zhì)體(NG-DSPE:N-戊二酰基-二硬脂?；字Ｒ掖及罚琋S-DSPE:N-琥珀?；?二硬脂?；字Ｒ掖及?表現(xiàn)出高的血液滯留。然而，在通過馬來酰亞胺經(jīng)S-S鍵結(jié)合轉(zhuǎn)鐵蛋白的脂質(zhì)體(MPB)的情況下，甚至在結(jié)合相同配體轉(zhuǎn)鐵蛋白時(shí)，血液滯留低。
實(shí)施例17脂質(zhì)體的電泳分析
作為表征脂質(zhì)體的分析方法的一個(gè)例子，示出了一個(gè)電泳例子。在含有2.5％SDS和5％的2-巰基乙醇的樣品緩沖液中，溶解脂質(zhì)體并于95℃下變性5分鐘。通過應(yīng)用約7.5％至10％的聚丙烯酰胺凝膠(Funakoshi，Easy gel(II)，預(yù)制凝膠(precast gel)，Japan)，將每一樣品5μl施用到凝膠上，在恒定電流20mA下進(jìn)行電泳1至2小時(shí)。

電泳之后，用銀染試劑盒(Wako Pure Chemical Industries，Silver Staining II Kit Wako，Japan)對(duì)凝膠進(jìn)行銀染。對(duì)于下列脂質(zhì)體，結(jié)果在圖15中示出示出了泳道6(轉(zhuǎn)鐵蛋白-N-戊二酰基-二硬脂?；字Ｒ掖及?脂質(zhì)體(Tf-NG-DSPE脂質(zhì)體))；泳道5(轉(zhuǎn)鐵蛋白-聚乙二醇-二硬脂?；字Ｒ掖及?脂質(zhì)體(Tf-PEG-DSPE脂質(zhì)體))。泳道1-4，分別含有h-apo-Tf(240ng)、h-apo-Tf(120ng)、h-apo-Tf(60ng)和h-apo-Tf(30ng)。

在比較實(shí)施例的情況下，Tf-PEG-DSPE脂質(zhì)體，由于聚乙二醇具有一些分子量分布，顯示出具有幾條帶的復(fù)雜的電泳圖像。在Tf-NG-DSPE脂質(zhì)體的情況下，出現(xiàn)單條帶，對(duì)其更容易分析，并且增強(qiáng)了純化脂質(zhì)體的能力。這些結(jié)果表明，對(duì)于根據(jù)本發(fā)明的脂質(zhì)體組合物，分析試驗(yàn)方法比對(duì)于PEG-衍生的脂質(zhì)體組合物的分析試驗(yàn)方法簡(jiǎn)單。
實(shí)施例18游離PE對(duì)脂質(zhì)體組合物的作用
為了研究脂質(zhì)體中游離磷脂酰乙醇胺(非-NG-PE)存在的作用，對(duì)Tf-NG-DSPE脂質(zhì)體和通過加入二硬脂?；字Ｒ掖及?DSPE)制備的脂質(zhì)體(無NG存在)，測(cè)定Tf的結(jié)合能力。以與實(shí)施例8中相同的方式，從DSPC(64份)、CH(32份)和NG-DSPE(4份)制備Tf-NG-DSPE脂質(zhì)體，從DSPC(64份)、CH(32份)、NG-DSPE(4份)和DSPE(10份)制備Tf-NG-DSPE+DSPE脂質(zhì)體。

隨后，應(yīng)用10當(dāng)量的NHS和ECD/HCl和0.05當(dāng)量的Tf將Tf結(jié)合到NG-DSPE。隨后，用SDS-PAGE分離其量相當(dāng)于1mg脂的脂質(zhì)體樣品，并且通過銀染可見到條帶，如實(shí)施例17所述。

結(jié)果在圖16中示出。發(fā)現(xiàn)相比于含有非-NG-DSPE的NG-DSPE脂質(zhì)體而言，在加入按摩爾計(jì)10％DSPE的NG-DSPE+DSPE脂質(zhì)體的情況下，Tf的結(jié)合量顯著低。這可能是由于Tf的氨基和DSPE的氨基在Tf結(jié)合于NG-DSPE的羧基的反應(yīng)中互相競(jìng)爭(zhēng)。
實(shí)施例19血液和器宮中脂質(zhì)體水平的比較
應(yīng)用實(shí)施例12描述的方案，比較血液和腫瘤中NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH(Tf-NG-DOPE:NG-DOPE)脂質(zhì)體(實(shí)施例7中制備)和Tf-PEG-DSPE脂質(zhì)體(實(shí)施例9中制備)的水平。血液中滯留的脂質(zhì)體量的結(jié)果在圖17中描述，腫瘤中檢測(cè)的脂質(zhì)體量在圖18中示出。

圖17和18中的結(jié)果表明，雖然Tf-NG-DOPE:NG-DOPE脂質(zhì)體在血液中(圖17)表現(xiàn)出的累積比Tf-PEG-DSPE脂質(zhì)體低，但它們能夠輸送數(shù)量更多的奧沙利鉑到達(dá)腫瘤(圖18)。血液中較低的脂質(zhì)體累積可能降低了奧沙利鉑的全身副作用。
實(shí)施例20帶有Colon 26腫瘤的小鼠中脂質(zhì)體抗腫瘤效應(yīng)的比較
應(yīng)用實(shí)施例14所述的方案，在小鼠中比較NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH脂質(zhì)體(在實(shí)施例7中制備)和Tf-PEG-DSPE脂質(zhì)體(在實(shí)施例9中制備)對(duì)colon 26腫瘤的效應(yīng)。結(jié)果描述在圖19中。

如圖19所示，相比于奧沙利鉑溶液，兩種脂質(zhì)體都表現(xiàn)出對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的抑制，然而，如實(shí)施例19所示，血液(血漿)中NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH累積較少，可能意味著這些脂質(zhì)體被給予它們的個(gè)體更好地耐受。
實(shí)施例21脂質(zhì)體對(duì)異種移植物HCT-116結(jié)腸腫瘤模型的抗腫瘤效應(yīng)
當(dāng)針對(duì)皮下植入的HCT-116人結(jié)腸腫瘤異種移植物給予NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH脂質(zhì)體(在實(shí)施例7中制備)時(shí)，測(cè)試所述脂質(zhì)體的抗腫瘤功效。試驗(yàn)在Southern Research Institute，AL，USA進(jìn)行，研究無胸腺NCr-nu小鼠(02/A/08F17T9，F(xiàn)rederick CancerResearch and Development Center，MD，USA；50只小鼠)，溶液中的奧沙利鉑作為參照化合物。NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH脂質(zhì)體的抗腫瘤活性總結(jié)于圖20中。

每4天靜脈給予NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH脂質(zhì)體，以每次注射15和10mg/kg的劑量進(jìn)行四次注射(q4d×4)。以相同時(shí)間表以每次注射15mg/kg的劑量給予奧沙利鉑。以相同時(shí)間表注射賦形劑(約10.3％蔗糖)和空白脂質(zhì)體對(duì)照組。

對(duì)于15mg/kg組，應(yīng)用NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH脂質(zhì)體每四周處理的HCT-116結(jié)腸腫瘤模型的平均腫瘤體積是對(duì)照腫瘤體積的28.9％，而對(duì)于10mg/kg組，是對(duì)照腫瘤體積的35.9％。也在HCT-116模型中比較NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH脂質(zhì)體與非脂質(zhì)體奧沙利鉑的抗腫瘤活性，其中當(dāng)以15mg/kg(對(duì)照腫瘤體積的28.9％)每四天(4×)給予時(shí)，就相對(duì)腫瘤體積而言，NG-DOPE:f-NG-DOPE:DMPC:CH脂質(zhì)體表現(xiàn)出更強(qiáng)的效應(yīng)。以15mg/kg每四天(4×)輸送的非脂質(zhì)體奧沙利鉑得到對(duì)照腫瘤體積的39.3％。
實(shí)施例22脂質(zhì)體對(duì)異種移植物HT-29結(jié)腸腫瘤模型的抗腫瘤效應(yīng)
當(dāng)針對(duì)皮下植入的HT-29人結(jié)腸腫瘤異種移植物給予NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH脂質(zhì)體(在實(shí)施例7中制備)時(shí)，檢測(cè)所述脂質(zhì)體的抗腫瘤功效。試驗(yàn)在Panapharm Laboratories Co.，Ltd.，Japan對(duì)雌性無胸腺BALB/cA Jcl-nu小鼠(CLEA Japan，Inc.，Japan；50只小鼠)進(jìn)行，結(jié)果總結(jié)在圖21中。對(duì)4只小鼠的組施用NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH脂質(zhì)體，劑量是6.7、10或15mg/kg，或者施用賦形劑對(duì)照。在第10、14和19天注射賦形劑以及6.7和10mg/kg處理組，而在第10和14天注射15mg/kg處理組。

對(duì)于6.7mg/kg組，應(yīng)用NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH脂質(zhì)體處理的HT-29結(jié)腸腫瘤模型的平均腫瘤體積是對(duì)照腫瘤體積的66.3％，而對(duì)于10mg/kg組，是對(duì)照腫瘤體積的39.5％(p值≤0.01)。
實(shí)施例23脂質(zhì)體對(duì)異種移植物MKN45胃腫瘤模型的抗腫瘤效應(yīng)
當(dāng)針對(duì)皮下植入的MKN45人胃腫瘤異種移植物給予NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH脂質(zhì)體(在實(shí)施例7中制備)時(shí)，檢測(cè)所述脂質(zhì)體的抗腫瘤功效。試驗(yàn)在Panapharm Laboratories Co.，Ltd.，Japan進(jìn)行，研究雄性無胸腺BALB/cA Jcl-nu小鼠(CLEA Japan，Inc.，Japan；50只小鼠)，并總結(jié)于圖22中。

對(duì)4只小鼠的組施用6.7、10或15mg/kg的NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH脂質(zhì)體，或賦形劑對(duì)照。在第7、12和24天注射賦形劑組以及6.7和10mg/kg處理組，在第7和24天注射15mg/kg處理組。對(duì)于6.7mg/kg組，應(yīng)用NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH脂質(zhì)體處理后MKN45胃腫瘤模型的平均腫瘤體積是對(duì)照腫瘤體積的65.4％(p值≤0.05)，對(duì)于10mg/kg組，是對(duì)照腫瘤體積的49.6％(p值≤0.01)，對(duì)于15mg/kg組，是對(duì)照腫瘤體積的48.5％(p值≤0.01；每17天輸送)。
實(shí)施例24脂質(zhì)體對(duì)異種移植物COLO 205結(jié)腸腫瘤模型的抗腫瘤效應(yīng)
當(dāng)針對(duì)皮下植入的COLO 205結(jié)腸腫瘤異種移植物給予NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH脂質(zhì)體(在實(shí)施例7中制備)時(shí)，檢測(cè)所述脂質(zhì)體的抗腫瘤功效。試驗(yàn)在Southern Research Institute，AL，USA進(jìn)行，研究雄性無胸腺NCr-nu小鼠(01/A/09F3T8，F(xiàn)ederic CancerResearch and Development Center，MD，USA)，溶液中的奧沙利鉑作為參照化合物并總結(jié)于圖23中。

對(duì)40只小鼠施用NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH脂質(zhì)體，每4天靜脈注射，進(jìn)行三次注射(q4d×3)，每次注射劑量是10和5mg/kg。以相同時(shí)間表，以每次注射5mg/kg的劑量施用奧沙利鉑。以相同時(shí)間表注射對(duì)照組。對(duì)于所有的組，從第47天開始，晚期腫瘤退卻。

施用NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH脂質(zhì)體，隔日施用，進(jìn)行2次注射，每次注射劑量是15和10mg/kg，隨后隔日治療，進(jìn)行6次注射，每次注射劑量分別是4和2mg/kg。以相同時(shí)間表，以每次注射10和2mg/kg的劑量施用奧沙利鉑。以相同時(shí)間表處理對(duì)照組。

用起始劑量10和5mg/kg施用NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH脂質(zhì)體，隨后以劑量15和10mg/kg用NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH脂質(zhì)體治療晚期的、預(yù)先治療的腫瘤，隨后是劑量4和2mg/kg的NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH脂質(zhì)體，應(yīng)用各種治療方案治療之后，COLO 205結(jié)腸腫瘤模型的平均腫瘤體積是對(duì)照腫瘤體積的53.2％和69.5％之間(p值≤0.05或0.01)。
實(shí)施例25奧沙利鉑在靶向脂質(zhì)體中的包封
為了測(cè)定實(shí)施例7中制備的NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH(Tf-NG-DOPE:NG-DOPE)脂質(zhì)體中包封的奧沙利鉑的比例，應(yīng)用下列方法。

通過使樣品的等分試樣通過3,000 MWCO(截留分子量)離心柱(30K MWCO纖維素超濾膜柱，Cat.No.42410，Millipore Corp.，USA)和應(yīng)用HPLC測(cè)定洗脫液中的奧沙利鉑濃度，測(cè)定包封程度，其中所述HPLC用稀磷酸水溶液中(pH3.0)的1％乙腈等度洗脫。

使用HPLC分析來定量未包封(游離)藥物的水平，在膜濾過之后測(cè)定奧沙利鉑的水平。如實(shí)施例7中所述制備的，3批的包入效率在98％以上(參見表1)。
表1奧沙利鉑在脂質(zhì)體中的包封比例 實(shí)施例26靶向脂質(zhì)體的pH值
通過將本發(fā)明脂質(zhì)體放在蒸餾水中并應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)pH計(jì)如下測(cè)定，能夠確定靶向脂質(zhì)體的pH值。

用帶有凝膠填充的Ag/AgCl電極的pH計(jì)(VWR Model 8000)測(cè)定NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH脂質(zhì)體(實(shí)施例7中制備)的pH值。4批脂質(zhì)體的pH值的范圍是pH7.17-7.23，如下面的表2中所示。
表2脂質(zhì)體的pH值
不同pH下脂質(zhì)體的外觀總結(jié)于表3中。這些結(jié)果表明，低pH值引起凝集、沉降和沉淀，這可以是由于NG-DOPE和Tf質(zhì)子化，隨后雙層聚集和轉(zhuǎn)鐵蛋白變性引起。
表3不同pH值下的脂質(zhì)體情況 實(shí)施例27偶聯(lián)轉(zhuǎn)鐵蛋白的鑒定和靶向脂質(zhì)體中轉(zhuǎn)鐵蛋白的SDS-PAGE圖
進(jìn)行本研究以確認(rèn)實(shí)施例7中制備的NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH脂質(zhì)體中與NG-DOPE偶聯(lián)的轉(zhuǎn)鐵蛋白。在本方法中，當(dāng)轉(zhuǎn)鐵蛋白被偶聯(lián)到NG-DOPE時(shí)，復(fù)合物表現(xiàn)出比非偶聯(lián)轉(zhuǎn)鐵蛋白高的分子量。

在95℃下，在含有2.5％SDS和5％2-巰基乙醇的樣品緩沖液中溶解脂質(zhì)體并變性5分鐘。隨后將樣品施加到5-10％梯度聚丙烯酰胺凝膠中，隨后在SDS存在下對(duì)它們進(jìn)行電泳。通過使用膠狀亮蘭G(B2025，SIGMA5 USA)，使遷移的蛋白條帶可見。

脂質(zhì)體中的轉(zhuǎn)鐵蛋白被檢測(cè)為偶聯(lián)于NG-DOPE的轉(zhuǎn)鐵蛋白，其表現(xiàn)出比完整轉(zhuǎn)鐵蛋白高的分子量(參見圖24)。具有較低分子量的小條帶被檢測(cè)為游離轉(zhuǎn)鐵蛋白。

應(yīng)用Scion Image軟件(在www.microsoft.com.DirectX免費(fèi)得到)，以峰面積計(jì)算SDS-PAGE上游離轉(zhuǎn)鐵蛋白與偶聯(lián)于NG-DOPE的轉(zhuǎn)鐵蛋白的比(圖24)。游離Tf在NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH脂質(zhì)體的總Tf中的比值是約4.7％。
實(shí)施例28滲透壓分析
給定溫度下的滲透壓取決于蔗糖和鹽，如氯化鈉和磷酸鹽緩沖液。它不取決于溶質(zhì)，而是取決于溶液中總離子密度和分子大小。正常地，應(yīng)用已知為滲透壓計(jì)的儀器，可以測(cè)定滲透壓，其以合適的壓力單位測(cè)量滲透壓。

應(yīng)用滲透壓計(jì)(Vapro Vapor Pressure OsmometerModel5520，Wescor，Inc.，USA)測(cè)定室溫下如實(shí)施例7制備的NG-DOPE:Tf-NG-DOPE:DMPC:CH脂質(zhì)體的滲透壓。3個(gè)脂質(zhì)體制備物的滲透壓值范圍為360-370 mOsm/kg，如表4所報(bào)告。
表4滲透壓 實(shí)施例29Tf-NG-DOPE的分離
將900mL的EtOH加入100mL空白脂質(zhì)體中(DMPC/Chol/NG-DOPE/Tf-NG-DOPE)(凍干前如實(shí)施例10制備)并充分?jǐn)嚢?。隨后對(duì)混合物進(jìn)行離心(9,000rpm，10min，20℃；CF16RX，Hitachi Koki Co.，Ltd.，Japan)，得到沉淀物。

隨后將100mL的EtOH加入到此沉淀物中并充分?jǐn)嚢?。?duì)混合物再次離心(9,000rpm，10min，20℃；CF16RX，Hitachi Koki Co.，Ltd.，Japan)，得到白色(淺橙色)沉淀。再次重復(fù)這一洗滌步驟。

用N2氣干燥上面得到的沉淀物30分鐘。隨后將干燥的物質(zhì)溶解在10mL蒸餾水中并通過無菌濾器(0.22μm)(Millipore Corp.，USA)。

將濾液倒入瓶中，于-40℃在架子上冷凍約8小時(shí)。使樣品減壓至約0.1mmHg并保持在減壓下2天，同時(shí)將溫度從-40℃逐漸升高到25℃。從而得到約444mg的Tf-NG-DOPE(空白脂質(zhì)體的轉(zhuǎn)鐵蛋白含量約45％)。
實(shí)施例30Tf-NG-DSPE的制備
在50mmol/L MES緩沖液中(pH5.5)混合200μL NHS(Wako Pure Chemical Industries，Ltd.，Japan)水溶液(0.1mol/L)、200μLEDC(N-乙基-N′-(3-二甲基氨基丙基)-碳二亞胺氫氯化物)(TokyoChemical Industry Co.，Ltd.，Japan)水溶液(0.25mol/L)和含有2％(w/v)OG(正辛基-D-吡喃葡糖苷)(Wako Pure Chemical Industries，Ltd.，Japan)的1mL NG-DSPE溶液(2mmol/L)，攪拌10分鐘。

通過Sephadex G-15柱(1.5cm×20cm，0.1％(w/v)的OG溶解在50mmol/L HEPES緩沖液(pH8.0)，GE Healthcare Bio-SciencesCorp.，USA)去除過剩試劑，并分餾為約1mL/管。

將5mL的1％轉(zhuǎn)鐵蛋白(Sigma，USA)水溶液逐滴加入含有NG-DSPE的級(jí)分中，并在4℃下輕輕攪拌20小時(shí)。通過MS確定每一級(jí)分而進(jìn)行鑒定。

隨后用TOYOPEARL HW-55S柱(1.5cm×45cm，0.9％NaCl，Tosoh Bioscience LLC，USA)將反應(yīng)產(chǎn)物分餾為約1.7mL/管。通過質(zhì)譜測(cè)定(MALDI-TOF/MS)和應(yīng)用CBB(考馬斯亮蘭，Wako PureChemical Industries，Ltd.，Japan)染色的SDS-PAGE，測(cè)定Tf-NG-DSPE。
權(quán)利要求
1.靶向脂質(zhì)體，包括一種或多種磷脂、N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺、靶向因子-修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺、包封藥物或標(biāo)記化合物和任選地至少一種其它脂類，
其中1所述靶向因子-修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺包括與第二N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺連接的靶向配體；和
其中
所述N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺由式1表示，
和
式1
所述第二N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺由式3表示，
式3
其中R1、R2、R5和R6各自獨(dú)立為?；?，m和p獨(dú)立為1至10的整數(shù)；和
其中所述脂質(zhì)體不包括非衍生化磷脂酰乙醇胺或聚乙二醇，并且其中所述靶向配體不是完整抗體。
2.權(quán)利要求1的靶向脂質(zhì)體，其中所述至少一種其它脂類存在。
3.權(quán)利要求2的靶向脂質(zhì)體，其中所述至少一種其它脂類是膽固醇或膽固醇衍生物。
4.權(quán)利要求1的靶向脂質(zhì)體，其中所述一種或多種磷脂選自磷脂酰膽堿、磷脂酸、磷脂酰絲氨酸和磷脂酰甘油。
5.權(quán)利要求1的靶向脂質(zhì)體，其中所述一種或多種磷脂是中性磷脂。
6.權(quán)利要求1的靶向脂質(zhì)體，其中所述一種或多種磷脂是磷脂酰膽堿。
7.權(quán)利要求6的靶向脂質(zhì)體，其中所述磷脂酰膽堿包含飽和脂肪酸部分。
8.權(quán)利要求6的靶向脂質(zhì)體，其中所述一種或多種磷脂是DMPC、DSPC、POPC或DPPC。
9.權(quán)利要求7的靶向脂質(zhì)體，其中所述至少一種其它脂類存在。
10.權(quán)利要求9的靶向脂質(zhì)體，其中所述至少一種其它脂類是膽固醇或膽固醇衍生物。
11.權(quán)利要求10的靶向脂質(zhì)體，其中所述脂質(zhì)體包括DMPC和膽固醇、DSPC和膽固醇、POPC和膽固醇、或DPPC和膽固醇。
12.權(quán)利要求10的靶向脂質(zhì)體，其中所述脂質(zhì)體包括DMPC和膽固醇。
13.權(quán)利要求1的靶向脂質(zhì)體，其中所述靶向配體選自轉(zhuǎn)鐵蛋白、葉酸、透明質(zhì)酸、糖鏈和單克隆抗體的片段。
14.權(quán)利要求13的靶向脂質(zhì)體，其中所述靶向配體選自轉(zhuǎn)鐵蛋白、葉酸、透明質(zhì)酸和糖鏈。
15.根據(jù)權(quán)利要求14的靶向脂質(zhì)體，其中所述靶向配體是轉(zhuǎn)鐵蛋白。
16.根據(jù)權(quán)利要求15的靶向脂質(zhì)體，其中所述轉(zhuǎn)鐵蛋白是全蛋白形式而不是脫鐵形式。
17.根據(jù)權(quán)利要求1的靶向脂質(zhì)體，其中所述脂質(zhì)體的平均直徑是約50nm至約250nm。
18.權(quán)利要求1的靶向脂質(zhì)體，其中所述R1、R2、R5和R6是油?；蛴仓；?，并且m和p是3。
19.權(quán)利要求18的靶向脂質(zhì)體，其中所述一種或多種磷脂是DMPC或DSPC，并且所述至少一種其它脂類存在并且是膽固醇。
20.權(quán)利要求1的靶向脂質(zhì)體，其中m和p各自獨(dú)立為2至4的整數(shù)。
21.權(quán)利要求1的靶向脂質(zhì)體，其中m和p相等并且為2至4的整數(shù)。
22.權(quán)利要求21的靶向脂質(zhì)體，其中m和p相等并且為3。
23.權(quán)利要求1的靶向脂質(zhì)體，其中所述R1、R2、R5和R6各自獨(dú)立為油?；⒂仓；⒆貦磅；蛉舛罐Ⅴ；?。
24.權(quán)利要求1的靶向脂質(zhì)體，其中所述R1和R2相同，并且R5和R6相同。
25.權(quán)利要求1的靶向脂質(zhì)體，其中所述R1、R2、R5和R6相同。
26.權(quán)利要求18的靶向脂質(zhì)體，其中所述靶向配體是轉(zhuǎn)鐵蛋白。
27.權(quán)利要求26的靶向脂質(zhì)體，其中所述藥物存在。
28.權(quán)利要求27的靶向脂質(zhì)體，其中所述藥物是奧沙利鉑。
29.權(quán)利要求28的靶向脂質(zhì)體，其中所述至少一種其它脂類存在并且是膽固醇。
30.權(quán)利要求26的靶向脂質(zhì)體，其中所述標(biāo)記化合物存在。
31.根據(jù)權(quán)利要求1的靶向脂質(zhì)體，其中所述藥物是抗癌藥。
32.根據(jù)權(quán)利要求1的靶向脂質(zhì)體，其中所述藥物是細(xì)胞毒性藥。
33.根據(jù)權(quán)利要求1的靶向脂質(zhì)體，其中所述藥物是拓?fù)洚悩?gòu)酶I抑制劑。
34.根據(jù)權(quán)利要求33的靶向脂質(zhì)體，其中所述拓?fù)洚悩?gòu)酶I抑制劑是拓?fù)涮婵祷蛞懒⑻婵怠?br> 35.根據(jù)權(quán)利要求1的靶向脂質(zhì)體，其中所述藥物是長(zhǎng)春花生物堿。
36.根據(jù)權(quán)利要求35的靶向脂質(zhì)體，其中所述長(zhǎng)春花生物堿是長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春花堿、長(zhǎng)春羅新、vinrodisine、脫水長(zhǎng)春花堿或脫乙酰長(zhǎng)春花堿。
37.根據(jù)權(quán)利要求1的靶向脂質(zhì)體，其中所述藥物是核酸。
38.根據(jù)權(quán)利要求37的靶向脂質(zhì)體，其中所述核酸是反義寡核苷酸或核酶。
39.根據(jù)權(quán)利要求1的靶向脂質(zhì)體，其中所述藥物是鉑化合物。
40.根據(jù)權(quán)利要求39的靶向脂質(zhì)體，其中所述鉑化合物是biplatin、順鉑、卡鉑、奧馬鉑、奧沙利鉑、折尼鉑、恩洛鉑、洛鉑或螺鉑。
41.根據(jù)權(quán)利要求40的靶向脂質(zhì)體，其中所述鉑化合物是奧沙利鉑。
42.根據(jù)權(quán)利要求41的靶向脂質(zhì)體，其中所述R1、R2、R5和R6是油?；琺和p是3，所述靶向配體是轉(zhuǎn)鐵蛋白，所述一種或多種磷脂是DMPC，并且所述至少一種其它脂類存在并且是膽固醇。
43.根據(jù)權(quán)利要求1的靶向脂質(zhì)體，其中所述藥物是烷化劑。
44.根據(jù)權(quán)利要求1的靶向脂質(zhì)體，其中所述藥物是紫杉烷。
45.根據(jù)權(quán)利要求1的靶向脂質(zhì)體，其中所述藥物是代謝拮抗劑。
46.根據(jù)權(quán)利要求1的靶向脂質(zhì)體，其中所述藥物是抗腫瘤抗生素。
47.根據(jù)權(quán)利要求1的靶向脂質(zhì)體，其中所述藥物是激素治療藥。
48.根據(jù)權(quán)利要求1的靶向脂質(zhì)體，其中所述藥物是分子靶標(biāo)藥。
49.根據(jù)權(quán)利要求41的靶向脂質(zhì)體，其中所述奧沙利鉑溶解于糖的水溶液中，所述糖選自海藻糖、麥芽糖、蔗糖、甘露糖、乳糖、甘露醇、甘油和葡萄糖。
50.權(quán)利要求49的靶向脂質(zhì)體，其中所述糖的濃度是約1％至約20％的糖百分?jǐn)?shù)(v/v)。
51.權(quán)利要求41的靶向脂質(zhì)體，其中所述奧沙利鉑的濃度是在脂質(zhì)體中約0.1mg/ml至約25mg/ml。
52.權(quán)利要求15的靶向脂質(zhì)體，其中所述轉(zhuǎn)鐵蛋白是全蛋白形式。
53.權(quán)利要求1的靶向脂質(zhì)體，其中所述脂質(zhì)體不包含陽離子脂類。
54.權(quán)利要求1的靶向脂質(zhì)體，其中所述脂質(zhì)體不包含陰離子脂類。
55.制造權(quán)利要求1的靶向脂質(zhì)體的方法，包括步驟
a)混合所述一種或多種磷脂、所述N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺、所述靶向因子修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺，和任選地，所述至少一種其它脂類，形成脂類混合物；
b)將藥物或標(biāo)記化合物加入步驟a)中形成的所述脂類混合物中；
c)形成脂質(zhì)體。
56.權(quán)利要求55的方法，還包括步驟
(d)純化步驟(c)所述的脂質(zhì)體。
57.權(quán)利要求55的方法，其中在混合之前，步驟(b)中所述的藥物在水溶液中。
58.權(quán)利要求55的方法，其中步驟(c)包括超聲波處理或攪拌。
59.權(quán)利要求55的方法，其中步驟(c)包括擠出。
60.制造權(quán)利要求1的靶向脂質(zhì)體的方法，包括步驟
a)混合所述一種或多種磷脂、所述N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺、N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯，和任選地，所述至少一種其它脂類，形成脂類混合物，
其中所述N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯由式2表示，
式2
其中R3和R4各自獨(dú)立為?；?br> n獨(dú)立為1至10的整數(shù)；
b)將藥物或標(biāo)記化合物加入步驟a)中形成的所述脂類混合物中；
c)形成脂質(zhì)體；和
d)將靶向配體連接于所述N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯。
61.權(quán)利要求60的方法，還包括步驟
e)，純化步驟(d)的脂質(zhì)體。
62.權(quán)利要求60的方法，其中步驟(b)中的所述藥物在混合前處于水溶液中。
63.權(quán)利要求60的方法，其中步驟c)包括超聲波處理或攪拌。
64.權(quán)利要求60的方法，其中步驟(c)包括擠出。
65.治療癌癥的方法，包括
a)將根據(jù)權(quán)利要求1所述的靶向脂質(zhì)體以有效治療癌癥的量施用于需要的個(gè)體，其中所述靶向脂質(zhì)體包括藥物，并且所述藥物是抗癌劑。
66.診斷方法，包括步驟
a)將根據(jù)權(quán)利要求1所述的靶向脂質(zhì)體以有效檢測(cè)的量施用于需要的個(gè)體，其中所述靶向脂質(zhì)體包標(biāo)記化合物；和
b)檢測(cè)所述標(biāo)記化合物。
67.藥物制劑，其包括根據(jù)權(quán)利要求1的靶向脂質(zhì)體和一種或多種藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑、稀釋劑、穩(wěn)定劑或防腐劑。
68.轉(zhuǎn)鐵蛋白修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺，其中所述N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺由式3表示，
式3
其中R5和R6各自獨(dú)立為?；⑶襭是1至10的整數(shù)，
并且轉(zhuǎn)鐵蛋白被連接到所述N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺。
69.權(quán)利要求68的轉(zhuǎn)鐵蛋白修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺，其中p是2至4的整數(shù)。
70.權(quán)利要求69的轉(zhuǎn)鐵蛋白修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺，其中p是3。
71.權(quán)利要求69的轉(zhuǎn)鐵蛋白修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺，其中R5和R6各自獨(dú)立為油?；?、硬脂酰基、棕櫚酰基或肉豆蔻?；?。
72.權(quán)利要求69的轉(zhuǎn)鐵蛋白修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺，其中R5和R6相同。
73.權(quán)利要求69的轉(zhuǎn)鐵蛋白修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺，其中R5和R6是油?；蛴仓；?br> 74.權(quán)利要求69的轉(zhuǎn)鐵蛋白修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺，其中R5和R6是油酰基或硬脂?；⑶襭是3。
75.藥物制劑，其包括權(quán)利要求69或74的轉(zhuǎn)鐵蛋白修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺和一種或多種藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑、稀釋劑、穩(wěn)定劑或防腐劑。
76.空白脂質(zhì)體，其包括一種或多種磷脂、N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺、靶向因子-修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺，和
任選的，至少一種其它脂類，
其中所述靶向因子-修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺包括與第二N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺連接的靶向配體；和其中
所述N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺由式1表示，
和
式1
所述第二N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺由式3表示，
式3
其中R1、R2、R5和R6各自獨(dú)立為?；?，m和p獨(dú)立為1至10的整數(shù)，并且，
其中所述脂質(zhì)體不包括非衍生化磷脂酰乙醇胺或聚乙二醇，并且其中所述靶向配體不是完整抗體。
77.權(quán)利要求76的空白脂質(zhì)體，其中所述至少一種其它脂類存在。
78.權(quán)利要求77的空白脂質(zhì)體，其中所述至少一種其它脂類是膽固醇或膽固醇衍生物。
79.權(quán)利要求76的空白脂質(zhì)體，其中所述一種或多種磷脂選自磷脂酰膽堿、磷脂酸、磷脂酰絲氨酸和磷脂酰甘油。
80.權(quán)利要求76的空白脂質(zhì)體，其中所述一種或多種磷脂是中性磷脂。
81.權(quán)利要求76的空白脂質(zhì)體，其中所述一種或多種磷脂是磷脂酰膽堿。
82.權(quán)利要求81的空白脂質(zhì)體，其中所述磷脂酰膽堿包含飽和脂肪酸部分。
83.權(quán)利要求81的空白脂質(zhì)體，其中所述一種或多種磷脂是DMPC、DSPC、POPC或DPPC。
84.權(quán)利要求83的空白脂質(zhì)體，其中所述脂質(zhì)體包括至少一種其它脂類。
85.權(quán)利要求84的空白脂質(zhì)體，其中所述至少一種其它脂類是膽固醇或膽固醇衍生物。
86.權(quán)利要求85的空白脂質(zhì)體，其中所述混合物包括DMPC和膽固醇、DSPC和膽固醇、POPC和膽固醇、或DPPC和膽固醇。
87.權(quán)利要求86的空白脂質(zhì)體，其中所述混合物包括DMPC和膽固醇。
88.權(quán)利要求76的空白脂質(zhì)體，其中所述靶向配體選自轉(zhuǎn)鐵蛋白、葉酸、透明質(zhì)酸、糖鏈和單克隆抗體的片段。
89.權(quán)利要求88的空白脂質(zhì)體，其中所述靶向配體選自轉(zhuǎn)鐵蛋白、葉酸、透明質(zhì)酸和糖鏈。
90.根據(jù)權(quán)利要求89的空白脂質(zhì)體，其中所述靶向配體是轉(zhuǎn)鐵蛋白。
91.根據(jù)權(quán)利要求88的空白脂質(zhì)體，其中所述靶向配體是轉(zhuǎn)鐵蛋白。
92.根據(jù)權(quán)利要求90的空白脂質(zhì)體，其中所述轉(zhuǎn)鐵蛋白是全蛋白形式而不是脫鐵形式。
93.根據(jù)權(quán)利要求76的空白脂質(zhì)體，其中所述脂質(zhì)體的所述平均直徑是約50nm至約250nm。
94.權(quán)利要求76的空白脂質(zhì)體，其中R1、R2、R5和R6是油?；蛴仓；?，并且m和p是3。
95.權(quán)利要求94的空白脂質(zhì)體，其中所述一種或多種磷脂是DMPC或DSPC，并且所述至少一種其它脂類存在并且是膽固醇。
96.權(quán)利要求76的空白脂質(zhì)體，其中m和p各自獨(dú)立為2至4的整數(shù)。
97.權(quán)利要求76的空白脂質(zhì)體，其中m和p相等并且為2至4的整數(shù)。
98.權(quán)利要求97的空白脂質(zhì)體，其中m和p相等并且為3。
99.權(quán)利要求76的空白脂質(zhì)體，其中R1、R2、R5和R6各自獨(dú)立為油?；?、硬脂酰基、棕櫚酰基或肉豆蔻?；?。
100.權(quán)利要求76的空白脂質(zhì)體，其中R1和R2相同，并且R5和R6相同。
101.權(quán)利要求76的空白脂質(zhì)體，其中R1、R2、R5和R6相同。
102.權(quán)利要求94的空白脂質(zhì)體，其中R1、R2、R5和R6為油酰基。
103.權(quán)利要求94的空白脂質(zhì)體，其中所述靶向配體是轉(zhuǎn)鐵蛋白。
104.權(quán)利要求103的空白脂質(zhì)體，其中所述轉(zhuǎn)鐵蛋白是全蛋白形式。
105.權(quán)利要求76的空白脂質(zhì)體，其中所述脂質(zhì)體不包括陽離子脂類。
106.權(quán)利要求76的空白脂質(zhì)體，其中所述脂質(zhì)體不包括陰離子脂類。
107.制造權(quán)利要求76的空白脂質(zhì)體的方法，包括步驟
a)混合所述一種或多種磷脂、所述N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺、所述靶向因子修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺，和任選地所述至少一種其它脂類，形成脂類混合物，和
b)形成脂質(zhì)體。
108.權(quán)利要求107的方法，還包括步驟
c)純化步驟(b)中所述的脂質(zhì)體。
109.權(quán)利要求107的方法，其中步驟(b)包括超聲波處理或攪拌。
110.權(quán)利要求107的方法，其中步驟(b)包括擠出。
111.制造權(quán)利要求76的空白脂質(zhì)體的方法，包括步驟
a)混合所述一種或多種磷脂、所述N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺、N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯，和任選地所述至少一種其它脂類，形成脂類混合物，
其中所述N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯由式2表示，
式2
其中R3和R4各自獨(dú)立為?；?，
n獨(dú)立為1至10的整數(shù)；
b)形成脂質(zhì)體；和
c)將靶向配體連接于所述N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯，形成靶向因子修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺。
112.權(quán)利要求111的方法，還包括步驟
(d)純化步驟(c)的所述脂質(zhì)體。
113.權(quán)利要求111的方法，其中步驟(b)包括超聲波處理或攪拌。
114.權(quán)利要求111的方法，其中步驟(b)包括擠出。
115.權(quán)利要求111的方法，其中所述靶向配體是轉(zhuǎn)鐵蛋白。
116.制備治療脂質(zhì)體的方法，包括步驟
a)將藥物包封到權(quán)利要求76的空白脂質(zhì)體中。
117.制備診斷脂質(zhì)體的方法，包括步驟
a)將標(biāo)記化合物包封到權(quán)利要求76的空白脂質(zhì)體中。
118.制備治療脂質(zhì)體的方法，包括步驟
a)將藥物包封到權(quán)利要求87的空白脂質(zhì)體中。
119.制備診斷脂質(zhì)體的方法，包括步驟
a)將標(biāo)記化合物包封到權(quán)利要求87的空白脂質(zhì)體中。
120.藥物制劑，其包括根據(jù)權(quán)利要求76的空白脂質(zhì)體和一種或多種藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑、稀釋劑、穩(wěn)定劑或防腐劑。
121.脂類混合物，包括一種或多種磷脂、N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺、N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯、和任選的至少一種其它脂類的混合物，
其中
所述N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺由式1表示，
和
式1
所述N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯由式2表示，
式2
其中R1、R2、R3和R4各自獨(dú)立為?；?br> m和n獨(dú)立為1至10的整數(shù)；和
其中所述混合物不包括非衍生化磷脂酰乙醇胺或聚乙二醇。
122.權(quán)利要求121的脂類混合物，其中所述至少一種其它脂類存在。
123.權(quán)利要求122的脂類混合物，其中所述至少一種其它脂類是膽固醇或膽固醇衍生物。
124.權(quán)利要求121的脂類混合物，其中所述一種或多種磷脂選自磷脂酰膽堿、磷脂酸、磷脂酰絲氨酸和磷脂酰甘油。
125.權(quán)利要求121的脂類混合物，其中所述一種或多種磷脂是中性磷脂。
126.權(quán)利要求124的脂類混合物，其中所述一種或多種磷脂是磷脂酰膽堿。
127.權(quán)利要求126的脂類混合物，其中所述一種或多種磷脂是DMPC、DSPC、POPC或DPPC。
128.權(quán)利要求126的脂類混合物，其中所述至少一種其它脂類存在。
129.權(quán)利要求128的脂類混合物，其中所述至少一種其它脂類是膽固醇或膽固醇衍生物。
130.權(quán)利要求129的脂類混合物，其中所述混合物包括DMPC和膽固醇、DSPC和膽固醇、POPC和膽固醇、或DPPC和膽固醇。
131.權(quán)利要求130的脂類混合物，其中所述混合物包括DMPC和膽固醇。
132.權(quán)利要求121的脂類混合物，其中所述m和n各自獨(dú)立為2至4的整數(shù)。
133.權(quán)利要求121的脂類混合物，其中所述m和n相等并且為2至4的整數(shù)。
134.權(quán)利要求133的脂類混合物，其中所述m和n相等并且為3。
135.權(quán)利要求121的脂類混合物，其中R1、R2、R3和R4各自獨(dú)立為油?；⒂仓；?、棕櫚?；蛉舛罐Ⅴ；?。
136.權(quán)利要求121的脂類混合物，其中R1和R2相同，并且R3和R4相同。
137.權(quán)利要求121的脂類混合物，其中R1、R2、R3和R4相同。
138.權(quán)利要求137的脂類混合物，其中R1、R2、R3和R4為油酰基或硬脂?；?br> 139.權(quán)利要求138的脂類混合物，其中m和n是3，其中所述一種或多種磷脂是DMPC或DSPC并且所述至少一種其它脂類存在并且是膽固醇。
140.脂類混合物，包括一種或多種磷脂、N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺、靶向因子修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺、和任選的至少一種其它脂類的混合物，
其中
所述N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺由式1表示，
和
式1
所述靶向因子修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺包括與第二N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺連接的靶向配體；和
其 中所述第二N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺由式3表示，
式3
其中R1、R2、R5和R6各自獨(dú)立為酰基，
m和p獨(dú)立為1至10的整數(shù)；和
其中所述混合物不包含非衍生化磷脂酰乙醇胺或聚乙二醇，并且其中所述靶向配體不是完整抗體。
141.權(quán)利要求140的脂類混合物，其中所述至少一種其它脂類存在。
142.權(quán)利要求141的脂類混合物，其中所述至少一種其它脂類是膽固醇或膽固醇衍生物。
143.權(quán)利要求140的脂類混合物，其中所述一種或多種磷脂選自磷脂酰膽堿、磷脂酸、磷脂酰絲氨酸和磷脂酰甘油。
144.權(quán)利要求140的脂類混合物，其中所述一種或多種磷脂是中性磷脂。
145.權(quán)利要求143的脂類混合物，其中所述一種或多種磷脂是磷脂酰膽堿。
146.權(quán)利要求145的脂類混合物，其中所述一種或多種磷脂是DMPC、DSPC、POPC或DPPC。
147.權(quán)利要求145的脂類混合物，其中所述至少一種其它脂類存在。
148.權(quán)利要求147的脂類混合物，其中所述至少一種其它脂類是膽固醇或膽固醇衍生物。
149.權(quán)利要求148的脂類混合物，其中所述混合物包括DMPC和膽固醇、DSPC和膽固醇、POPC和膽固醇、或DPPC和膽固醇。
150.權(quán)利要求149的脂類混合物，其中所述混合物包括DMPC和膽固醇。
151.權(quán)利要求140的脂類混合物，其中m和p各自獨(dú)立為2至4的整數(shù)。
152.權(quán)利要求140的脂類混合物，其中m和p相等并且為2至4的整數(shù)。
153.權(quán)利要求152的脂類混合物，其中m和p相等并且為3。
154.權(quán)利要求140的脂類混合物，其中R1、R2、R5和R6各自獨(dú)立為油?；?、硬脂?；⒆貦磅；蛉舛罐Ⅴ；?。
155.權(quán)利要求140的脂類混合物，其中R1和R2相同，并且R5和R6相同。
156.權(quán)利要求140的脂類混合物，其中所述R1、R2、R5和R6相同。
157.權(quán)利要求156的脂類混合物，其中所述R1、R2、R5和R6是油?；蛴仓；?。
158.權(quán)利要求140的脂類混合物，其中所述靶向配體選自轉(zhuǎn)鐵蛋白、葉酸、透明質(zhì)酸、糖鏈和單克隆抗體的片段。
159.權(quán)利要求158的脂類混合物，其中所述靶向配體選自轉(zhuǎn)鐵蛋白、葉酸、透明質(zhì)酸和糖鏈。
160.根據(jù)權(quán)利要求159的脂類混合物，其中所述靶向配體是轉(zhuǎn)鐵蛋白。
161.根據(jù)權(quán)利要求160的脂類混合物，其中所述轉(zhuǎn)鐵蛋白是全蛋白形式而不是脫鐵形式。
162.根據(jù)權(quán)利要求141的脂類混合物，其中R1、R2、R5和R6是油?；蛴仓；?，m和p是3，所述一種或多種磷脂是DMPC或DSPC，所述至少一種其它脂類是膽固醇，并且所述靶向配體是轉(zhuǎn)鐵蛋白。
163.制備權(quán)利要求121所述的脂類混合物的方法，包括混合所述一種或多種磷脂、所述N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺和所述N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯的步驟。
164.制備權(quán)利要求122所述的脂類混合物的方法，包括混合所述一種或多種磷脂、所述至少一種其它脂類、所述N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺和所述N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯的步驟。
165.制備權(quán)利要求140所述的脂類混合物的方法，包括混合所述一種或多種磷脂、所述N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺和所述靶向因子修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的步驟。
166.制備權(quán)利要求141所述的脂類混合物的方法，包括混合所述一種或多種磷脂、所述至少一種其它脂類、所述N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺和所述靶向因子修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的步驟。
167.含脂質(zhì)體組合物，其包括脂質(zhì)體，所述脂質(zhì)體包含一種或多種磷脂、N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺、N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯、和任選地，至少一種其它脂類，
其中
所述N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺由式1表示，
和
式1
所述N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯由式2表示，
式2
其中R1、R2、R3和R4各自獨(dú)立為?；?，
m和n獨(dú)立為1至10的整數(shù)；和，
其中所述組合物不包括非衍生化磷脂酰乙醇胺或聚乙二醇。
168.權(quán)利要求167的含脂質(zhì)體組合物，其中所述至少一種其它脂類存在。
169.權(quán)利要求168的含脂質(zhì)體組合物，其中所述至少一種其它脂類是膽固醇或膽固醇衍生物。
170.權(quán)利要求167的含脂質(zhì)體組合物，其中所述一種或多種磷脂選自磷脂酰膽堿、磷脂酸、磷脂酰絲氨酸和磷脂酰甘油。
171.權(quán)利要求167的含脂質(zhì)體組合物，其中所述一種或多種磷脂是中性磷脂。
172.權(quán)利要求170的含脂質(zhì)體組合物，其中所述一種或多種磷脂是磷脂酰膽堿。
173.權(quán)利要求172的含脂質(zhì)體組合物，其中所述一種或多種磷脂是DMPC、DSPC、POPC或DPPC。
174.權(quán)利要求173的含脂質(zhì)體組合物，其中R1、R2、R3和R4是油?；蛴仓；?，并且m和n是3。
175.權(quán)利要求173的含脂質(zhì)體組合物，其中所述至少一種其它脂類存在。
176.權(quán)利要求175的含脂質(zhì)體組合物，其中所述至少一種其它脂類是膽固醇或膽固醇衍生物。
177.權(quán)利要求176的含脂質(zhì)體組合物，其中所述脂質(zhì)體包括DMPC和膽固醇、DSPC和膽固醇、POPC和膽固醇、或DPPC和膽固醇。
178.權(quán)利要求177的含脂質(zhì)體組合物，其中所述脂質(zhì)體包括DMPC和膽固醇。
179.權(quán)利要求167的含脂質(zhì)體組合物，其中m和n各自獨(dú)立為2至4的整數(shù)。
180.權(quán)利要求167的含脂質(zhì)體組合物，其中m和n相等并且為2至4的整數(shù)。
181.權(quán)利要求180的含脂質(zhì)體組合物，其中m和n相等并且為3。
182.權(quán)利要求167的含脂質(zhì)體組合物，其中R1、R2、R3和R4各自獨(dú)立為油?；⒂仓；?、棕櫚酰基或肉豆蔻?；?。
183.權(quán)利要求167的含脂質(zhì)體組合物,其中R1和R2相同,并且R3和R4相同。
184.權(quán)利要求167的含脂質(zhì)體組合物，其中R1、R2、R3和R4相同。
185.權(quán)利要求184的含脂質(zhì)體組合物，其中R1、R2、R3和R4是油?；蛴仓；?。
186.權(quán)利要求167的含脂質(zhì)體組合物，還包括溶液。
187.權(quán)利要求186的含脂質(zhì)體組合物，其中所述溶液是水溶液或水溶液與易混合水的溶劑的混合物。
188.含脂質(zhì)體組合物，其包括脂質(zhì)體，所述脂質(zhì)體包含一種或多種磷脂、N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺、靶向因子修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺、和任選地，至少一種其它脂類，
其中
所述N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺由式1表示，
和
式1
所述靶向因子修飾N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺包括與第二N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺連接的靶向配體；和
其中所述第二N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺由式3表示，
式3
其中R1、R2、R5和R6各自獨(dú)立為?；?br> m和p獨(dú)立為1至10的整數(shù)；和
其中所述組合物不包括非衍生化磷脂酰乙醇胺或聚乙二醇，并且其中所述靶向配體不是完整抗體。
189.權(quán)利要求188的含脂質(zhì)體組合物，其中所述至少一種其它脂類存在。
190.權(quán)利要求189的含脂質(zhì)體組合物，其中所述至少一種其它脂類是膽固醇或膽固醇衍生物。
191.權(quán)利要求188的含脂質(zhì)體組合物，其中所述一種或多種磷脂選自磷脂酰膽堿、磷脂酸、磷脂酰絲氨酸和磷脂酰甘油。
192.權(quán)利要求188的含脂質(zhì)體組合物，其中所述一種或多種磷脂是中性磷脂。
193.權(quán)利要求191的含脂質(zhì)體組合物，其中所述一種或多種磷脂是磷脂酰膽堿。
194.權(quán)利要求193的含脂質(zhì)體組合物，其中所述一種或多種磷脂是DMPC、DSPC、POPC或DPPC。
195.權(quán)利要求193的含脂質(zhì)體組合物，其中所述至少一種其它脂類存在。
196.權(quán)利要求195的含脂質(zhì)體組合物，其中所述至少一種其它脂類是膽固醇或膽固醇衍生物。
197.權(quán)利要求196的含脂質(zhì)體組合物，其中所述脂質(zhì)體包括DMPC和膽固醇、DSPC和膽固醇、POPC和膽固醇、或DPPC和膽固醇。
198.權(quán)利要求197的含脂質(zhì)體組合物，其中所述脂質(zhì)體包括DMPC和膽固醇。
199.權(quán)利要求188的含脂質(zhì)體組合物，其中m和p各自獨(dú)立為2至4的整數(shù)。
200.權(quán)利要求188的含脂質(zhì)體組合物，其中m和p相等并且為2至4的整數(shù)。
201.權(quán)利要求200的含脂質(zhì)體組合物，其中m和p相等并且為3。
202.權(quán)利要求188的含脂質(zhì)體組合物，其中R1、R2、R5和R6各自獨(dú)立為油?；⒂仓；?、棕櫚?；蛉舛罐Ⅴ；?。
203.權(quán)利要求188的含脂質(zhì)體組合物，其中R1和R2相同，并且R5和R6相同。
204.權(quán)利要求188的含脂質(zhì)體組合物，其中R1、R2、R5和R6相同。
205.權(quán)利要求188的含脂質(zhì)體組合物，其中R1、R2、R5和R6是油?；蛴仓；?。
206.權(quán)利要求188的含脂質(zhì)體組合物，其中所述靶向配體選自轉(zhuǎn)鐵蛋白、葉酸、透明質(zhì)酸、糖鏈和單克隆抗體的片段。
207.權(quán)利要求206的含脂質(zhì)體組合物，其中所述靶向配體選自轉(zhuǎn)鐵蛋白、葉酸、透明質(zhì)酸和糖鏈。
208.根據(jù)權(quán)利要求206的含脂質(zhì)體組合物，其中所述靶向配體是轉(zhuǎn)鐵蛋白。
209.根據(jù)權(quán)利要求208的含脂質(zhì)體組合物，其中所述轉(zhuǎn)鐵蛋白是全蛋白形式而不是脫鐵蛋白形式。
210.權(quán)利要求194的含脂質(zhì)體組合物，其中R1、R2、R5和R6是油酰基或硬脂?；?，所述至少一種其它脂類存在并且是膽固醇，并且所述靶向配體是轉(zhuǎn)鐵蛋白。
211.權(quán)利要求210的含脂質(zhì)體組合物，其中所述一種或多種磷脂是DMPC或DSPC。
212.權(quán)利要求188的含脂質(zhì)體組合物，還包括溶液。
213.權(quán)利要求212的含脂質(zhì)體組合物，其中所述溶液是水溶液或水溶液與易混合水的溶劑的混合物。
214.權(quán)利要求189的含脂質(zhì)體組合物，其中R1、R2、R5和R6是油?；蛴仓；?，所述一種或多種磷脂是DMPC或DSPC，所述至少一種其它脂類是膽固醇，并且所述靶向配體是轉(zhuǎn)鐵蛋白。
215.權(quán)利要求167、168、173、188、189或194中的任一項(xiàng)所述的含脂質(zhì)體組合物，還包括藥物。
216.根據(jù)權(quán)利要求215的含脂質(zhì)體組合物，其中所述藥物是抗癌藥。
217.根據(jù)權(quán)利要求215的含脂質(zhì)體組合物，其中所述藥物是細(xì)胞毒性藥。
218.根據(jù)權(quán)利要求215的含脂質(zhì)體組合物，其中所述藥物是拓?fù)洚悩?gòu)酶I抑制劑。
219.根據(jù)權(quán)利要求218的含脂質(zhì)體組合物，其中所述拓?fù)洚悩?gòu)酶I抑制劑是拓?fù)涮婵祷蛞懒⑻婵怠?br> 220.根據(jù)權(quán)利要求215的含脂質(zhì)體組合物，其中所述藥物是長(zhǎng)春花生物堿。
221.根據(jù)權(quán)利要求220的含脂質(zhì)體組合物，其中所述長(zhǎng)春花生物堿是長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春花堿、長(zhǎng)春羅新、vinrodisine、脫水長(zhǎng)春花堿或脫乙酰長(zhǎng)春花堿。
222.根據(jù)權(quán)利要求215的含脂質(zhì)體組合物，其中所述藥物是核酸。
223.根據(jù)權(quán)利要求222的含脂質(zhì)體組合物，其中所述核酸是反義寡核苷酸或核酶。
224.根據(jù)權(quán)利要求215的含脂質(zhì)體組合物，其中所述藥物是鉑化合物。
225.根據(jù)權(quán)利要求224的含脂質(zhì)體組合物，其中所述鉑化合物是biplatin、順鉑、卡鉑、奧馬鉑、奧沙利鉑、折尼鉑、恩洛鉑、洛鉑或螺鉑。
226.根據(jù)權(quán)利要求225的含脂質(zhì)體組合物，其中所述鉑化合物是奧沙利鉑。
227.根據(jù)權(quán)利要求226的含脂質(zhì)體組合物，其中如果存在所述至少一種其它脂類，則其為膽固醇或膽固醇衍生物。
228.根據(jù)權(quán)利要求227的含脂質(zhì)體組合物，其中所述至少一種或多種磷脂是DMPC或DSPC。
229.根據(jù)權(quán)利要求227的含脂質(zhì)體組合物，其中所述一種或多種磷脂是中性磷脂。
230.根據(jù)權(quán)利要求229的含脂質(zhì)體組合物，其中當(dāng)所述脂質(zhì)體包括其它脂類時(shí)，所述脂類是膽固醇或膽固醇衍生物。
231.根據(jù)權(quán)利要求226的含脂質(zhì)體組合物，其中所述一種或多種磷脂是磷脂酰膽堿。
232.根據(jù)權(quán)利要求226的含脂質(zhì)體組合物，其中所述奧沙利鉑的濃度是在所述脂質(zhì)體中約0.1mg/ml至約25mg/ml。
233.根據(jù)權(quán)利要求215的含脂質(zhì)體組合物，其中所述藥物是烷化劑。
234.根據(jù)權(quán)利要求215的含脂質(zhì)體組合物，其中所述藥物是紫杉烷。
235.根據(jù)權(quán)利要求215的含脂質(zhì)體組合物，其中所述藥物是代謝拮抗劑。
236.根據(jù)權(quán)利要求215的含脂質(zhì)體組合物，其中所述藥物是抗腫瘤抗生素。
237.根據(jù)權(quán)利要求215的含脂質(zhì)體組合物，其中所述藥物是激素治療藥。
238.根據(jù)權(quán)利要求215的含脂質(zhì)體組合物，其中所述藥物是分子靶標(biāo)藥。
239.根據(jù)權(quán)利要求226的含脂質(zhì)體組合物，其中所述奧沙利鉑溶解于糖的水溶液中，所述糖選自海藻糖、麥芽糖、蔗糖、乳糖、甘露糖、甘露醇、甘油和葡萄糖。
240.根據(jù)權(quán)利要求215的含脂質(zhì)體組合物，其中如果存在所述靶向配體，則其為轉(zhuǎn)鐵蛋白。
241.根據(jù)權(quán)利要求215的含脂質(zhì)體組合物，其中所述一種或多種磷脂是DMPC或DSPC，R1、R2以及R5和R6——如果R5和R6存在——是油?；蛴仓?，m和p——如果p存在——是3，如果存在所述至少一種其它脂類，其為膽固醇，所述藥物是奧沙利鉑，如果存在所述靶向配體，其為轉(zhuǎn)鐵蛋白。
242.權(quán)利要求239的含脂質(zhì)體組合物，其中所述糖的濃度是約1％至約20％的糖百分?jǐn)?shù)(v/v)。
243.權(quán)利要求167、168、173、188、189或194中的任一項(xiàng)所述的含脂質(zhì)體組合物，還包括標(biāo)記化合物。
244.權(quán)利要求243的含脂質(zhì)體組合物，其中所述標(biāo)記化合物包括放射性同位素部分。
245.制造權(quán)利要求215的含脂質(zhì)體組合物的方法，包括步驟
a)混合所述一種或多種磷脂和所述N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺和，
如果存在，N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯或靶向因子修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺，和任選地，至少一種其它脂類——如果其存在，形成脂類混合物；和
b)將藥物加入步驟(a)中形成的所述脂類混合物；和
c)形成含脂質(zhì)體組合物。
246.制造權(quán)利要求243的含脂質(zhì)體組合物的方法，包括步驟
a)混合所述一種或多種磷脂和所述N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺和，
如果存在，N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯或靶向因子修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺，和任選地，至少一種其它脂類——如果其存在，形成脂類混合物；和
b)將標(biāo)記化合物加入步驟(a)中形成的所述脂類混合物；和
c)形成含脂質(zhì)體組合物。
247.制造權(quán)利要求188的含脂質(zhì)體組合物的方法，包括步驟
a)混合所述一種或多種磷脂、所述N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺和所述靶向因子修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺，和任選地，至少一種其它脂類，形成脂類混合物；和
b)將溶劑加入步驟(a)中形成的所述混合物中，形成含脂質(zhì)體組合物。
248.權(quán)利要求247的方法，其中所述混合步驟(a)在有機(jī)溶劑存在的情況下進(jìn)行。
249.權(quán)利要求247的方法，其中所述步驟(b)中的溶劑是水溶液或水溶液與易混合水的溶劑的混合物。
250.權(quán)利要求247的方法，其中所述步驟(b)包括超聲波處理或攪拌。
251.權(quán)利要求247的方法，其中所述步驟(b)包括擠出。
252.權(quán)利要求245的方法，其中在步驟(a)中，所述至少一種其它脂類存在。
253.權(quán)利要求252的方法，其中在步驟(a)中，所述N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺的琥珀酰亞胺酯存在。
254.權(quán)利要求252的方法，其中在步驟(a)中，所述靶向因子修飾的N-(ω)-二羧酸衍生化磷脂酰乙醇胺存在。
全文摘要
本公開內(nèi)容提供了含有脂類的組合物，包括包封藥物的靶向脂質(zhì)體及其藥物制劑，以及制備和應(yīng)用所述含脂類組合物的方法，包括所述靶向脂質(zhì)體在癌癥和其它疾病的治療中的應(yīng)用。
文檔編號(hào)A61K9/127GK101170995SQ200680015967
公開日2008年4月30日 申請(qǐng)日期2006年3月8日 優(yōu)先權(quán)日2005年3月10日
發(fā)明者岡田一志, 伊吹忠之, 金東賢, 藤澤忠司 申請(qǐng)人:美生物藥物株式會(huì)社