專利名稱：：綠原酸在制備治療骨髓感染的藥物中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及綠原酸的新用途，具體來(lái)說(shuō)，是綠原酸在制備治療骨髓感染的藥物中的用途。
背景技術(shù)：
：綠原酸廣泛存在于各種藥用植物如金銀花等中，目前對(duì)它的化學(xué)結(jié)構(gòu)研究已經(jīng)清楚，已有人對(duì)其進(jìn)行藥用研究，報(bào)道了綠原酸可以應(yīng)用于治療腫瘤等疾病。綠原酸(chlorogenicacid)是一種從雙子葉植物(如忍冬葉、咖啡豆、向日葵)的葉和果實(shí)分離得到的酚類，也是許多中草藥(如杜仲、金銀花、茵陳等)及中藥復(fù)方制劑抗菌消炎、清熱解毒的主要活性成分，目前已成為中草藥制劑質(zhì)量控制的主要指標(biāo)之一。綠原酸是植物體在有氧呼吸過(guò)程中經(jīng)莽草酸途徑產(chǎn)生的一種苯丙素類化合物。它是一種由咖啡酸(caffeicacid)與奎尼酸(雞納酸，quinicacid，即1_羥基六氫沒(méi)食子酸)縮合而成的縮酚酸，異名咖啡鞣酸，化學(xué)名3-0-咖啡?？崴?3-0-caffeoylquinicacid)，分子式為C16H1809，分子量345.30，半水合物為針狀晶體，時(shí)變?yōu)闊o(wú)水化合物，易溶于水、乙醇、丙酮，微溶于乙酸乙酯，常溫下呈淡黃色固體。綠原酸的結(jié)構(gòu)式如下植物中綠原酸的生物合成包括了一系列的酶促反應(yīng)。在酶的催化下，葡萄糖轉(zhuǎn)化成莽草酸(shikimicacid)，后者再轉(zhuǎn)化成苯丙氨酸，最后經(jīng)合成酶作用得綠原酸。綠原酸在植物中分布廣泛，從高等雙子葉植物到蕨類植物均有報(bào)道，但含量較高的植物不多，主要存在于忍冬科忍冬屬(Lonicera)、菊科蒿屬(Artemisia)植物中，其中包括杜仲、金銀花、向日葵、咖啡、可可樹(shù)。由于綠原酸是極性較強(qiáng)的有機(jī)酸，易溶于醇、水，難溶于氯仿、乙醚，因此綠原酸的提取方法較多，有醇(甲醇、乙醇)溶法、水提醇沉、醇提鉛沉、石灰乳沉淀法及聚酰胺柱層析法等?，F(xiàn)有文獻(xiàn)報(bào)道的綠原酸的藥理作用有l(wèi)、對(duì)透明質(zhì)酸酶及葡萄糖-6-磷酸酶的抑制作用透明質(zhì)酸梅(HAase)是裂解粘多糖的酶之一，可催化透明質(zhì)酸(HA)的分解，關(guān)系到血管系統(tǒng)的通透性和炎癥反應(yīng)。HA是由糖醛酸和乙酰氨基葡萄糖組成的一種粘多糖，具有多種功能，如治愈創(chuàng)傷，使皮膚潤(rùn)濕健康，潤(rùn)滑關(guān)節(jié)和防止炎癥等。從狹葉紫錐花(EchinaceaamgustifoliaDC)根的乙酸乙酯提取物中發(fā)現(xiàn)3，5_二咖啡?？崴?朝鮮薊酸)和綠原酸有較強(qiáng)的抑制HAase激活的作用。動(dòng)物體內(nèi)的研究證明，使用綠原酸可以降低由使用胰高血糖素引起的(肝糖分解造成的)高血糖峰值。因此，綠原酸可以降低血糖水平，提高肝臟葡萄糖-6-磷酸和肝糖原的濃度。2、自由基的清除及抗脂質(zhì)過(guò)氧化作用綠原酸抑制前列腺素代謝中脂氧化酶活性，抑制維生素A的氧化，保護(hù)腎上腺素免受氧化，抗維生素A酸(retinoicacid)5，6_環(huán)氧化的生物活性，綠原酸甲酯和二咖啡?？崴峥梢种凭€粒體和微粒體脂質(zhì)過(guò)氧化。綠原酸和3，5-二咖啡?？崴釋儆谛》肿踊衔?，能與過(guò)氧自由基快速反應(yīng)，因此它們是潛在重要的生物抗氧化劑。其可能的抗氧化機(jī)制為兒茶酚類(catechols)部分作為過(guò)氧自由基接受氫原子供體，繼而轉(zhuǎn)化成低活性產(chǎn)物。因此，它們可終止鏈自由基反應(yīng)。3、抗癌變作用綠原酸是植物代謝中的一種重要物質(zhì)，也是促佛波醇酯活性腫瘤的抑制劑。近來(lái)，日本學(xué)者研究了杜仲茶的變異原性抑制作用(Antimutagenicity)與杜仲葉所含的綠原酸、京尼平甙、京尼平甙酸等抗變異原性成分有關(guān)，揭示了杜仲茶對(duì)腫瘤的預(yù)防具有重要意義。4、預(yù)防心血管疾病綠原酸是咖啡中一種主要的酚類化合物。日常引用咖啡的人每日攝取量為0.5-lg。綠原酸和咖啡酸在體外是抗氧化劑，因此可能對(duì)預(yù)防心血管疾病有作用。5、抗菌、抗病毒作用綠原酸和異綠原酸對(duì)多種致病菌和病毒有較強(qiáng)的抑制和殺滅作用，還有利膽、降壓、消炎及顯著增加胃腸蠕動(dòng)和促進(jìn)胃液分泌等藥理作用。目前，關(guān)于綠原酸的制藥用途有相關(guān)報(bào)道，如CN200410022438.6，發(fā)明名稱高純度綠原酸制劑，該發(fā)明涉及高純度綠原酸為原料制備成藥學(xué)上可應(yīng)用于臨床的各種劑型的藥品。采用含量95%_105%的綠原酸制成含lmg-3g的各種注射液、無(wú)菌粉針、各種片劑、膠囊、口服液、滴眼液、軟膏、各種緩控釋制劑。綠原酸作為一種有效的中藥成分，是大約170余種中成藥的定性或者定量指標(biāo)。公開(kāi)的申請(qǐng)?zhí)枮镃N02829404.l，發(fā)明名稱"能作為抗白血病藥物的草藥分子"的專利申請(qǐng)中，該發(fā)明公開(kāi)了從萎葉葉提取物中或從任何其它來(lái)源分離到的化合物綠原酸在治療急性和慢性髓細(xì)胞性白血病和淋巴細(xì)胞性白血病中新的用途，還提供了含有綠原酸和可藥用添加劑的用于治療急性和慢性髓細(xì)胞性白血病和淋巴細(xì)胞性白血病的藥物組合物，它包含有效量的、從萎葉葉的任何植物部分或任何其它天然或合成來(lái)源分離到的綠原酸(CA)和/或3-o-p-香豆?？崴?PCQ)，和可藥用添加劑。白血病是骨髓的粒系統(tǒng)細(xì)胞異常增生而致的一種惡性腫瘤，因此，說(shuō)明綠原酸可以通過(guò)抑制白細(xì)胞的過(guò)度增生，從而對(duì)急性和慢性粒細(xì)胞性白血病即通常意義上的血癌有治療的作用。有些疾病，如血小板減少癥、貧血、白細(xì)胞減少癥等，與骨髓細(xì)胞功能低下有關(guān)。增強(qiáng)骨髓細(xì)胞功效實(shí)質(zhì)是通過(guò)對(duì)骨髓干細(xì)胞的作用，治療或糾正血小板減少癥、貧血、白細(xì)胞減少癥。而在現(xiàn)有技術(shù)中，尚未發(fā)現(xiàn)綠原酸對(duì)骨髓功效具有影響的相關(guān)報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的技術(shù)方案是提供綠原酸的新用途，具體地，是在制備具有增加骨髓細(xì)胞功效藥物的用途。本發(fā)明提供了綠原酸Chlorogenicacid在制備增加骨髓細(xì)胞功效的藥物中的用途。本發(fā)明采用的綠原酸可以是來(lái)自于天然植物提取、精制，也可采用合成方式合成。其中，所述的藥物是促進(jìn)骨髓細(xì)胞增殖、分化、成熟與釋放功能的藥物。進(jìn)一步地，所述的藥物是用于增加骨髓干細(xì)胞的藥物。增加骨髓細(xì)胞功效實(shí)質(zhì)是指通過(guò)對(duì)骨髓干細(xì)胞的作用，增加骨髓三大系統(tǒng)細(xì)胞的數(shù)量的作用。進(jìn)一步地，所述的藥物是用于增加骨髓造血干細(xì)胞的藥物。進(jìn)一步地，上述用于增加骨髓造血干細(xì)胞的藥物是用于增強(qiáng)造血功能，用于白細(xì)胞減少癥的藥物；更進(jìn)一步地，所述藥物是治療粒細(xì)胞減少癥的藥物?；蛘?，上述用于增加骨髓造血干細(xì)胞的藥物是用于治療血小板減少癥、貧血的藥物。更進(jìn)一步地，所述的貧血是失血性貧血、溶血性貧血、巨細(xì)胞貧血、再生障礙性貧血。由于綠原酸可對(duì)整個(gè)骨髓細(xì)胞有促進(jìn)作用，骨髓纖維化致整個(gè)骨髓三大系統(tǒng)(紅系、粒系、巨細(xì)胞系)的細(xì)胞減少，出現(xiàn)紅系的貧血，粒系的白細(xì)胞減少，巨細(xì)胞系的血小板減少。綠原酸對(duì)白細(xì)胞有正常增生作用，是通過(guò)對(duì)正常的骨髓干細(xì)胞的促進(jìn)作用，從而促進(jìn)三大系統(tǒng)的骨髓細(xì)胞正常發(fā)生，因?yàn)閷儆谡４龠M(jìn)作用，不會(huì)對(duì)粒系統(tǒng)產(chǎn)生增生過(guò)度的作用。貧血系各種原因致骨髓紅系統(tǒng)增生障礙，使外周血紅細(xì)胞數(shù)量和或紅細(xì)胞血紅蛋白含量減少，或各種原因致外周血的紅細(xì)胞破壞丟失過(guò)多，使外周血紅細(xì)胞數(shù)量和或紅細(xì)胞血紅蛋白含量減少而產(chǎn)生的疾病、也是一種臨床癥狀。其中，所述的藥物是治療骨髓纖維化的藥物。其中，所述的藥物是治療骨髓感染的藥物。骨髓感染后也造成骨髓三大系統(tǒng)的細(xì)胞減少，綠原酸的作用是對(duì)整個(gè)骨髓細(xì)胞有促進(jìn)作用。其中，所述的藥物是對(duì)脾臟造血干細(xì)胞損傷有保護(hù)、修復(fù)作用的藥物。進(jìn)一步地，所述的藥物是治療脾功能亢進(jìn)的藥物。脾功能亢進(jìn)致三大系統(tǒng)的細(xì)胞在脾臟破壞加速，使細(xì)胞在外周血的周期縮短，綠原酸對(duì)整個(gè)骨髓細(xì)胞有促進(jìn)作用，加快產(chǎn)出。本發(fā)明還提供了一種具有增加骨髓細(xì)胞功效的藥物組合物，它是以有效量的綠原酸為活性成分，加上藥學(xué)上可接受的輔料或輔助性成分制備而成的藥劑。其中，所述的藥劑中每制劑單位含有綠原酸l-3000mg。根據(jù)綠原酸動(dòng)物安全性試驗(yàn)(長(zhǎng)期毒性試驗(yàn))結(jié)果(160mg/kg)推算人用安全劑量為不大于90mg/kg，若人體體重按50kg計(jì)算，人用劑量不超過(guò)4500mg/日。進(jìn)一步地，所述的藥劑中每制劑單位含有綠原酸l-3000mg。其中，所述的藥劑是口服制劑或注射劑。經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)綠原酸可升高白細(xì)胞；可剌激犬骨髓細(xì)胞增生，包括對(duì)正常的骨髓干細(xì)胞的增加作用，并且綠原酸對(duì)6°Co_Y射線致小鼠脾臟造血干細(xì)胞損傷有顯著地保護(hù)作用，從而促進(jìn)三大系統(tǒng)的骨髓細(xì)胞正常發(fā)生。機(jī)體的造血過(guò)程是一個(gè)活躍的細(xì)胞增殖、分化、成熟與釋放的過(guò)程。它是由多潛能造血干細(xì)胞的自我更新維持其數(shù)量的恒定，并由多潛能造血干細(xì)胞到各系定向祖細(xì)胞，再進(jìn)一步增殖、分化、釋放到外周血循環(huán)。藥物可通過(guò)影響造血干細(xì)胞、祖細(xì)胞的增殖分化等多種環(huán)節(jié)影響造血過(guò)程。因此，造血祖細(xì)胞體外培養(yǎng)技術(shù)的建立為本發(fā)明藥物的作用提供了手段和方法。本發(fā)明通過(guò)藥效試驗(yàn)，對(duì)9月齡小鼠為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ筒⒁酝慢g的小鼠為對(duì)照說(shuō)明了綠原酸對(duì)其造血功能的影響。研究結(jié)果顯示小鼠CFU-S、CFU-GM、CFU-E和BFU-E的增殖分化能力和外周血WBC數(shù)明顯低于同月齡的小鼠。而綠原酸可使小鼠降低的CFU-S數(shù)明顯增加，說(shuō)明綠原酸可剌激造血干細(xì)胞的增殖，同時(shí)綠原酸可明顯促進(jìn)小鼠骨髓粒單系祖細(xì)胞，早期、晚期紅系祖細(xì)胞的增殖分化，并可使其外周血WBC數(shù)升高，證明綠原酸可影響小鼠造血的整個(gè)過(guò)程，可知原酸可能調(diào)節(jié)機(jī)體內(nèi)造血調(diào)控系統(tǒng)。通過(guò)小鼠血清集落剌激活力的測(cè)定結(jié)果說(shuō)明綠原酸可通過(guò)促進(jìn)小鼠機(jī)體產(chǎn)生集落剌激因子來(lái)增強(qiáng)其祖細(xì)胞的增殖分化。組織學(xué)的研究結(jié)果則進(jìn)一步證實(shí)了綠原酸能增強(qiáng)小鼠的造血功能。由此，綠原酸可治療各種原因引起的貧血，且不僅僅限于失血性貧血、溶血性貧血，造血不良性貧血包括巨細(xì)胞性貧血、再生障礙性貧血和脾功能亢進(jìn)，對(duì)各種原因引起的白細(xì)胞減少狀態(tài)、粒細(xì)胞減少癥、粒細(xì)胞缺乏癥有治療作用，對(duì)各種原因引起的巨核系統(tǒng)改變?nèi)缣匕l(fā)性血小板減少性紫癜等有治療作用；對(duì)各種原因引起的骨髓纖維化，骨髓感染有一定治療作用?；谏鲜霭l(fā)現(xiàn)，綠原酸可以單獨(dú)或與其他具有已知功效的藥物一起采用各種制藥技術(shù)制備成各種藥用劑型如但不僅僅限于口服劑型、靜脈給藥劑型和外用劑型。以下通過(guò)實(shí)驗(yàn)對(duì)綠原酸所具有的上述功效加以證實(shí)。應(yīng)該理解的是，本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)例是用于說(shuō)明本發(fā)明而不是對(duì)本發(fā)明的限制。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)質(zhì)對(duì)本發(fā)明進(jìn)行的簡(jiǎn)單改進(jìn)都屬于本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。發(fā)明的具體實(shí)施例方式以下通過(guò)具體的藥效學(xué)試驗(yàn)證明本發(fā)明的有益效果。實(shí)驗(yàn)例1綠原酸對(duì)小鼠物理因素所致骨髓抑制的作用綠原酸，含量99.56%，用氯化鈉注射液配制成所需濃度。陽(yáng)性對(duì)照藥重組人粒細(xì)胞集落剌激因子注射液，300ug/支，1.2ml/支。SPF級(jí)ICR小鼠，體重2230g，240只。根據(jù)體重和性別隨機(jī)分為綠原酸高、中、低劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組、模型對(duì)照組及正常對(duì)照組，每組40只，雌雄各半。除正常對(duì)照組外其余動(dòng)物均用6°CoY射線全身照射，照射劑量為4Gy(劑量率為256Gy/h，照射時(shí)間為2min)，照射后各組根據(jù)表1給予相應(yīng)的受試物(對(duì)照組和模型組給予體積的氯化鈉注射液)，每天一次，連續(xù)給藥14天。在給藥第4、7、11、14天，定量取尾靜脈血20ul，將血液緩慢吹入加有500ul稀釋液的試管內(nèi)，使血液與稀釋液混勻，用全自動(dòng)血球計(jì)數(shù)儀檢測(cè)外周血象。每次采完血后每組隨機(jī)抽取10只動(dòng)物(最少不低于8只，盡量保持雌雄各半)，動(dòng)物安樂(lè)死后立即取股骨作骨髓推片，瑞氏染色，鏡下檢查骨髓象。取骨髓的同時(shí)，取脾臟稱重并計(jì)算脾臟指數(shù)。結(jié)果用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差統(tǒng)計(jì)分析。脾臟指數(shù)=^|，《1000體重表1分組與給藥劑量6<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>[OO43]與正常對(duì)照組比較*P<0.05，**P<0.01;與模型對(duì)照組比較:aP<0.05，b]<0.01;表3綠原酸治療性給藥對(duì)輻照小鼠血小板數(shù)的影響(X109/L)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>與正常對(duì)照組比較*P<0.05，**P<0.01;與模型對(duì)照組比較bP<0.01。表4綠原酸治療性給藥對(duì)輻照小鼠脾指數(shù)的影響(g/kg)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>注:"A"表示樣本數(shù)n二19。表5綠原酸治療性給藥對(duì)輻照小鼠粒細(xì)胞系統(tǒng)一總數(shù)的影響(％)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>與正常對(duì)照組比較*P<0.05，**P<0.01;與模型對(duì)照組比較aP<0.05，bP<0.01;'Tn=9。表6綠原酸治療性給藥對(duì)輻照小鼠粒細(xì)胞系統(tǒng)-原始粒的影響(%)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>與正常對(duì)照組比較*P<0.05，**P<0.01;與模型對(duì)照組比較aP<0.05，bP<0.01;'Tn=9。表7綠原酸治療性給藥對(duì)輻照小鼠粒細(xì)胞系統(tǒng)-早幼粒的影響(%)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>與正常對(duì)照組比較*P<0.05，**P<0.01;與模型對(duì)照組比較aP<0.05，bP<0.01;'Tn=9。表8綠原酸治療性給藥對(duì)輻照小鼠粒細(xì)胞系統(tǒng)_中幼的影響(％)如fill輻照后給藥組別3d7d10d14d樣本數(shù)(n)10101010模型組6.70±3.066.50±2.01**7.80±3.229.10±U0*低劑量組8.80±1.75a*7.50±1.58**7.60±1.958.80±4.39中劑量組8.80±1.93a*5.30±1.42**7.56士1.6716.60±1.43b高劑量組10.10±0.57b**5,00±0.82a**5.30±1.42a**8.10±1.60陽(yáng)性對(duì)照組11.70±2.36b8.70±1.89b6.22±2.11'*6.30±1.70b正常對(duì)照組6.70±1.259.80±1.558.90±2.386.60±1.58與正常對(duì)照組比較*P<0.05，**P<0.01;與模型對(duì)照組比較，<0.05，b]<0.01;'Tn=9。表9綠原酸治療性給藥對(duì)輻照小鼠粒細(xì)胞系統(tǒng)-晚幼的影響(5々n創(chuàng)輻照后給藥組別3d7d10d14d樣本數(shù)(n)10101010模型組14.00±3.5914.60±2.726.70±3.34**00±2.21**低劑量組13.10±2.6415.30±3.237.40±1.51**12.50±2.92b中劑量組13.60±2.2215.50±2.8415.00±3.28lb15.70±3.62b**高劑量組17.00±2.36a16.80±1.7515.50±2.84b16.80±2.30b**陽(yáng)性對(duì)照組20.80±2.44b**14.90±3.2513.78±3.07lb8.20±2.49**正常對(duì)照組4"0±1.6015.00±2.1614.00±2.9412.10±3.04與正常對(duì)照組比較*P<0.05，**P<0.01;與模型對(duì)照組比較aP<0.05，b]<0.01;'Tn=9。表10綠原酸治療性給藥對(duì)輻照小鼠粒細(xì)胞系統(tǒng)_桿狀的影響(:%)招則輻照后給藥班力u3d7d10d14d樣本數(shù)(n)10101010模型組7.60±2.01**7.50±2.92**7.50±3.47**7.50±3.69**低劑量組6.70±1.77**7.40±2.07**7.20±1.62**7.70±3.65**中劑量組10.10±1.91b**10,00±1.63a**6.75±1.75lsi!*10.70±4.35a高劑量組8.40±2.07**6.30±1.64b10.20±1.48a**9.90±2.47*陽(yáng)性對(duì)照組8.卯±1.91**8,10±2,23**7.56土3.05"承10.90±2.02a正常對(duì)照組17.50±2.0717.50±3.3415.30±3.9213.60±3.89與正常對(duì)照組比較*P<0.05，**P<0.01;與模型對(duì)照組比較aP<0.05，bP<0.01;'Tn=9。表11綠原酸治療性給藥對(duì)輻照小鼠粒細(xì)胞系統(tǒng)_分葉的影響(％)^:曰fill輻照后給藥班力U3d7d脂14d樣本數(shù)(n)10101010模型組9.30±4.32**9.30±2.95"9.80±3.88**10.20±3.85**低劑量組10.70±3.59**8.60±2.12**7.80±1.14**9.40±5.28**中劑量組15.10±2.64b**15.00±2.06b**8.33±2.061hi*15.30±4.55高劑量組12.20±3.58a**20.00±1.25b15.20±2.04b**15.00±3.71陽(yáng)性對(duì)照組10.90±1.73**8.50±1.27**8.89士3.221^15.10±1.20a正常對(duì)照組20.80±2.8220.80±2.4419.30±4.5718.60±3.13與正常對(duì)照組比較*P<0.05，**P<0.01;與模型對(duì)照組比較aP<0.05，b]<0.01;'Tn=9。表12綠原酸治療性給藥對(duì)輻照小鼠紅細(xì)胞系統(tǒng)一總數(shù)的影響(%)々F1fill輻照后給藥組別3d7d10d14d樣本數(shù)(n)10101010模型組46.10±10.09**43.20±8.7841.40±9.19**36.60±8.37**低劑量組33.40±4.65b**41.80±7.68**19.00±4.67b27.50±5.32中劑量組32.60±6.31b**35.70±5.96**27.22zt9.39lb**24.50±3.75a高劑量組29.10±6.32b**20.40±4.12b38.40±8.41**19.60±4.14b陽(yáng)性對(duì)照組23.60±5.52b*23.80±1.62b**31.67士7.8611>**16.30±5.95b正常對(duì)照組17.70±4.1415.60±3.1317.70±4.1420.80士3.08與正常對(duì)照組比較*P<0.05，**P<0.01;與模型對(duì)照組比較aP<0.05，b]<0.01;'Tn=9。表13綠原酸治療性給藥對(duì)輻照小鼠紅細(xì)胞系統(tǒng)_原紅的影響(別輻照后給藥組另U3d7d10d14d樣本數(shù)(n)10101010模型組3.20±1.48**2.50土1.512.70±1.642.00±1.25低劑量組1.40±U7b2.10±1.601.00±0.67b2.40±1.26中劑量組1.90±0.99b2.30±0.68*3.56土1.0115^1.30±1.57高劑量組1.00±0.94b0.70±0.682.00±1.561.80±1.03陽(yáng)性對(duì)照組0.60±0.52b*3.20±0.92**1.78土1.20'0.30±0.48a**正常對(duì)照組1.80±0.790.90±0.991.80±0.791.60±0.70與正常對(duì)照組比較*P<0.05，**P<0.01;與模型對(duì)照組比較aP<0.05，bP<0.01;'Tn=9。表14綠原酸治療性給藥對(duì)輻照小鼠紅細(xì)胞系統(tǒng)_早幼的影響(％)々RPll輻照后給藥組另1」3d7d10d14d樣本數(shù)(n)10101010模型組18.70±4.78**16.00±3.83**15.00±4.1414.00±5.16低劑量組14.20±2.49b**15.40±2.99**8.10±2.2310.40±2.22中劑量組14.20±3.74b**11.60±2.76**10.44士3.3219.60±1.51高劑量組12.70±4.27b**8.50±2.07b13.70±2.837.10±1.73a陽(yáng)性對(duì)照組10.40±2.88b*9.40土0.84b10.56土2.7016.20±2.25a正常對(duì)照組6.40土l.卯6.卯±1.976.40±1.卯8.70±2.41與正常對(duì)照組比較*P<0.05，**P<0.01;與模型對(duì)照組比較aP<0.05，bP<0.01;'Tn=9。表15綠原酸治療性給藥對(duì)輻照小鼠紅細(xì)胞系統(tǒng)-中幼的影響(々F1Bll輻照后給藥?kù)杽e3d7d10d14d樣本數(shù)(n)10101010模型組6.10±1.60**7.70±2.63**6.70±1.95**4.80±1.69**低劑量組5.50±1.35**6.30±2.21**2.70±1.49b2.60±1.26b中劑量組5.40±2.46**9.80±2.10**2.89土2.0312.卯土1.45b高劑量組4.10±3.38a2.80±1.48b*5.90±2.77**2.40±1.26b陽(yáng)性對(duì)照組3.40±1.35b2.10±0.74b**8.33±3.64'*1.10±1.20b*正常對(duì)照組2.70±1.060.50±0.7622.70±1.062,60±0.84與正常對(duì)照組比較*P<0.05，**P<0.01;與模型對(duì)照組比較aP<0.05，<0.01;'Tn=9。表16綠原酸治療性給藥對(duì)輻照小鼠紅細(xì)胞系統(tǒng)-晚幼的影響(4>BSill輻照后給藥組別3d7d10d14d樣本數(shù)(n)10101010模型組18.10±4.20**17.00±3.74**17.00±3.23**15.80±2.82**低劑量組12.30±4.24b**18.00±4.30**7.20±2.15b12.10±2.60**中劑量組12.33±2.65lb**12,00±3.20*10.33士3.87V10.70±2.58b高劑量組11.30±2.11b**8.40±1.96b16.80±4.89**8.30±1.42b陽(yáng)性對(duì)照組9.20±2.00b9.10±1.37b11.00士3.04'b"8.70±3.02b正常對(duì)照組6.80±2.207.40±2.226.80土2.20b7.90±0.88與正常對(duì)照組比較*P<0.05，**P<0.01;與模型對(duì)照組比較aP<0.05，bP<0.01;'Tn=9。表17綠原酸性治療給藥對(duì)輻照小鼠淋巴的影響(％)11化Pll輻照后給藥組另u3d7d10d14d樣本數(shù)(n)10101010模型組8.20±3.68**12.60±4.2020.40±10.6819.80±7.70低劑量組19.30±5.66b12.50±4.9341.90±4.63b**27.50±3.92b**中劑量組10.20±3.26*13.20±4.1029.00士13.25"22.80±5.45高劑量組8.10±6.1018.10±2.85b*IO.IO土12.3223.30±5.50陽(yáng)性對(duì)照組16.80±4.16b22.90±4.04b**25.33土14.07135.70±7.54b**正常對(duì)照組15.10±1.2914.20±3.2918.20±11.9220.20±4.89與正常對(duì)照組比較*P<0.05，**P<0.01;與模型對(duì)照組比較bP<0.01;"l"n=9。表18綠原酸治療性給藥對(duì)輻照小鼠骨髓粒紅比的影響(％)招J2ll輻照后給藥虹別3d7d10d14d樣本數(shù)(n)10101010模型組1.07±0.49"1.09士0,40"0.99±0.40**1.24±0.37**低劑量組1.43±0,25"1.13±0.33**2.16i0.53b*1.71±0.54**中劑量組1.83±0.50a**1.49±0.35**1.69±0.37la**2.23±0.61b*高劑量組2.25±0.58b**3,14±0.73b1.41±0.26**3.01±0.61b陽(yáng)性對(duì)照組2,64±0.64b2.21±0.18b*1.40土0.301^3.23±1.10b正常對(duì)照組4.00±1.064.83±1,983.82±1.332,92±0.70與正常對(duì)照組比較*P<0.05，**P<0.01;與模型對(duì)照組比較bP<0.01;"l"n=9。表2、表3結(jié)果顯示造模后，模型動(dòng)物外周血白細(xì)胞和血小板明顯下降，與正常對(duì)照組比較有非常顯著差異(P<0.01)，治療給藥7天后藥物高、中、低劑量組動(dòng)物的白細(xì)胞均呈明顯上升趨勢(shì)，給藥第11天時(shí)高劑量組與模型對(duì)照組比較有顯著差異(P<0.05)。表518結(jié)果顯示造模后，各輻照組動(dòng)物的粒細(xì)胞總數(shù)均不同程度地下降，與正常對(duì)照組比較有顯著或非常顯著差異(P<0.05orP<0.01)，模型組動(dòng)物的桿狀和分葉粒細(xì)胞均不同程度地低于正常對(duì)照組(P<0.05orP<0.01)，各輻照組動(dòng)物紅細(xì)胞系總數(shù)及中幼、晚幼紅細(xì)胞均高于正常對(duì)照組(P<0.05orP<0.01)，其余各分類細(xì)胞有一定的升高趨勢(shì)，粒紅比均明顯低于正常對(duì)照組(P<0.05orP<0.01)。治療給藥后，藥物高、中劑量組的粒細(xì)胞總數(shù)明顯升高，與模型對(duì)照組比較差別有非常顯著意義(P<0.01)，高、中劑量組的晚幼、桿狀和分葉粒細(xì)胞與模型組比較有增高趨勢(shì)，且部分檢測(cè)值與模型組比較有顯著或非常顯著差異(P<0.05orP〈0.01)，高、中、低劑量組的紅細(xì)胞總數(shù)和早幼、中幼、晚幼紅細(xì)胞不同程度地低于模型組，且部分檢測(cè)值與模型組比較有顯著或非常顯著差異(P<0.05orP〈0.01)，高、中、低劑量組的粒紅比均高于模型組，與模型組比較有顯著或非常顯著意義(P<0.05orP<0.01)。實(shí)驗(yàn)例2綠原酸對(duì)犬化學(xué)因素所致骨髓抑制的作用綠原酸，含量99.56%，陽(yáng)性對(duì)照藥利可君片，20mg/片，一日三次(3片)，注射用環(huán)磷酰胺(簡(jiǎn)稱CY)，白色粉末，200mg/安瓿裝，5支/盒裝。Beagle犬，36只(雌雄各半)，正常、健康、體重均一、雌性未孕，體重67kg，年齡6月齡。劑量設(shè)計(jì)見(jiàn)表19。表19劑量設(shè)計(jì)~^^^^i給藥體積相當(dāng)于臨床擬定』別(只)(mg/kg.d.1)途徑ml/kg_成人日用量倍數(shù)除正常對(duì)照組外，其它5組犬靜脈注射8mg/ml的環(huán)磷酰胺0.8ml/kg(8mg/kg)，每日一次，連續(xù)5天。第6天開(kāi)始按表19給與各受試藥，模型對(duì)照組和正常對(duì)照組給生理鹽水，連續(xù)13天。在造模前、造模后每天、治療后的2、4、6、8、10、12、14天分別取外周血檢查各動(dòng)物的白細(xì)胞；造模前(注射環(huán)磷酰胺)、造模結(jié)束(注射環(huán)磷酰胺第5天)、治療第7天和第14天，分別取犬側(cè)臥彎腰，髂骨上脊穿剌抽取骨髓，涂片，瑞氏染液染色。顯微鏡下進(jìn)行分類計(jì)數(shù)、粒細(xì)胞、紅細(xì)胞、巨核細(xì)胞、單核細(xì)胞系統(tǒng)等。計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞。巨核細(xì)胞全片計(jì)數(shù)總和，血小板計(jì)數(shù)25個(gè)(成熟有血小板形成和成熟無(wú)血小板形成)，結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。給藥前1次，注射CY每天1次，治療給藥第1、2、3、4、6、7、9、11天、15天各1次。取空腹犬前肢靜脈血，作外周血檢測(cè)。給藥前1次，注射CY6天，治療給藥第7、14天各1次。作骨髓檢測(cè)。結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。骨髓像增生情況分6級(jí)，1極度活躍，2明顯活躍，3活躍，4減低，5明顯減低，6極度低下。表20各組動(dòng)物骨髓細(xì)胞增生情況~~"1~~i動(dòng)物數(shù)(只)造模前~~造模5天治療7天治療14天表20結(jié)果顯示注射環(huán)磷酰胺后，各組犬骨髓增生均減低，綠原酸各劑量組給藥第7天均明顯可看見(jiàn)犬骨髓細(xì)胞增生，其大、中劑量組略見(jiàn)明顯，陽(yáng)性藥組和模型組作用效果略差，模型組死亡1只犬，第14天藥物組恢復(fù)較好，模型組仍有1例處于增生低下，正常對(duì)照組未見(jiàn)異常。中性粒細(xì)胞桿狀為主，占全片總數(shù)4550%，其次為中幼、晚幼、分葉細(xì)胞。偶見(jiàn)嗜酸粒細(xì)胞，未見(jiàn)原始、早幼粒細(xì)胞。未見(jiàn)中幼和晚幼粒細(xì)胞。紅細(xì)胞系統(tǒng)以晚幼紅細(xì)胞為主，約占全片計(jì)數(shù)2530%左右，其次為中幼紅細(xì)胞，全片鏡下未見(jiàn)原紅、早幼紅、早巨、中巨、晚巨紅細(xì)胞。淋巴系統(tǒng)以成熟淋巴細(xì)胞為主(約占1012%)，未見(jiàn)原始和幼稚淋巴細(xì)胞。單核系統(tǒng)各組各犬未見(jiàn)有原始、幼稚、單核細(xì)胞。巨核細(xì)胞以成熟有血小板形大劑量組綠原酸6中劑量組綠原酸6小劑量組綠原酸6陽(yáng)性藥組6模型對(duì)照組6正常對(duì)照組63級(jí)5例3級(jí)、l例2級(jí)3例3級(jí)、3例2級(jí)3例3級(jí)、3例2級(jí)2例3級(jí)3例4級(jí)2級(jí)2級(jí)3級(jí)3例3級(jí)3例4級(jí)5例3級(jí)1例4級(jí)4例3級(jí)1例4級(jí)2級(jí)模型對(duì)照組6生理鹽水正常對(duì)照組6生理鹽7K級(jí)級(jí)級(jí)級(jí)級(jí)級(jí)級(jí)級(jí)級(jí)級(jí)級(jí)級(jí)oooo滴滴滴服滴滴斷,靜□斷,MS5^酸酸酸鄉(xiāng)原原原投成為主，成熟無(wú)血小板形成次之，未見(jiàn)幼稚巨核細(xì)胞。其它細(xì)胞未見(jiàn)漿細(xì)胞，未見(jiàn)網(wǎng)狀、內(nèi)皮、吞噬、寄生蟲(chóng)、組織巨細(xì)胞、不明細(xì)胞以及特殊細(xì)胞。粒細(xì)胞系統(tǒng)與紅細(xì)胞系統(tǒng)之比各組間比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。表21實(shí)驗(yàn)前正常骨髓細(xì)胞檢查(％x±s)指標(biāo)高劑量中劑量低劑量模型組陽(yáng)性組正常照(n=6)(n=6)(n=6)(n=6)(n=6)(n=6)原始血細(xì)胞000000原始粒細(xì)胞000000早幼粒細(xì)胞000000中幼粒細(xì)胞5.25土0.825.42±0.585.25±0.525.25±0.614.75±0.525.50±0.71中性晚幼粒細(xì)胞3.33±0.413.33±0.523.83±0.683.58±0.383.75±0.523.33±0.41中性桿狀粒細(xì)胞50.50±1.0050.75±0.2750.42±0.9250.50±0.6350.5純9750.67±0.61中性分葉核粒細(xì)胞2.92±0.582.67±0.613.00±1.183.00±0.712.92±0.583.00±0.63嗜酸中幼粒細(xì)胞000000嗜酸晚幼粒細(xì)胞000000嗜酸桿狀粒細(xì)胞000000嗜酸分葉粒細(xì)胞000000嗜鹼中幼粒細(xì)胞000000嗜鹼晚幼粒細(xì)胞000000嗜鹼桿狀粒細(xì)胞000000嗜鹼分葉粒細(xì)胞000000原始紅細(xì)胞000000早幼紅細(xì)胞000000中幼紅細(xì)胞000000晚幼紅細(xì)胞25.42±0.9225.08±0.7425.33±0.5225.25±0.7625.33±0.6125.42±0.38早巨紅細(xì)胞000000中巨紅細(xì)胞000000晚巨紅細(xì)胞000000粒系紅系(M:E)2.40士0.132.43±0.102.42±0.052.42±0.082.40士0.062.43±0.05原始淋巴細(xì)胞000000幼稚淋巴細(xì)胞000000淋巴細(xì)胞12.58±0.5812.75±0.6112.17±0.4112.50±1.0512.67±1.1712.08±0.49原始單核細(xì)胞000000幼稚單核細(xì)胞000000單核細(xì)胞000000全片巨核細(xì)胞總數(shù)跳0±23.9120.0±28.7127.7±14.7126.5±50.2133.2±23.8135.8±32.0原始巨核細(xì)胞000000幼稚巨核細(xì)胞000000成熟有血小板形成20.8±1.720.3±1.221.0±1.720.0±1.320.5±1.920.3±1.2■IA士上-JL<,丄r"TT,戰(zhàn)熱兀皿小極形諷4.2±1.74.7±1.24.0±1.75.0±1.34.5±1.94.7±1.2裸核細(xì)胞000000網(wǎng)狀細(xì)胞000000內(nèi)皮細(xì)胞000000吞噬細(xì)胞000000槳細(xì)胞000000組織巨細(xì)胞000000不明細(xì)胞000000退化細(xì)胞000000表22CY造模6天骨髓細(xì)胞檢查(％x±s)指標(biāo)高劑量中劑量低劑量模型組陽(yáng)性組正常照(n=6)(n=6)(n=6)(n=6)(n=6)(n=6)原始血細(xì)胞000000原始粒細(xì)胞000000早幼粒細(xì)胞000000中幼粒細(xì)胞1.42±1.391.67±0.411.42±0.381.08±0.741.67±1.665.42±0.58中性晚幼粒細(xì)胞1.25±0.941.00±0.320.67±0.260.50±1.211.00±1.143.42±0.74中性桿狀粒細(xì)胞25.67±I0.924.25土5.8224.25±1.6421.75±2.0722.17±1.6949.25±0.61中性分葉核粒細(xì)34.08±4.8537.25±1.9236.42±2.1137.25±1.3335.83±3.594.75±0.61嗜酸中幼粒細(xì)胞000000嗜酸晚幼粒細(xì)胞000000嗜酸桿狀粒細(xì)胞000000嗜酸分葉粒細(xì)胞000000嗜鹼中幼粒細(xì)胞000000嗜鹼晚幼粒細(xì)胞000000嗜鹼桿狀粒細(xì)胞000000嗜鹼分葉粒細(xì)胞000000原始紅細(xì)胞000000早幼紅細(xì)胞000000中幼紅細(xì)胞000000晚幼紅細(xì)胞2.50±2,211.71±0.981.25±0.762條1.247.92±6.2125.08士0.80早巨紅細(xì)胞000000中巨紅細(xì)胞000000晚巨紅細(xì)胞000000粒系紅系(M:E)38.7士55.926.1±21.733.6±27.922.3±13.711.5±6.62.50±0.06原始淋巴細(xì)胞000000幼稚淋巴細(xì)胞000000淋巴細(xì)胞36.33±6.8936.42±2.0136.0±1.8736.75±2.3431.33±6.1512.08±0.58原始單核細(xì)胞000000幼稚單核細(xì)胞000000單核細(xì)胞000000全片巨核細(xì)胞總數(shù)4.5±4.60.5±0,88.7±14.11.8±1.65.8±8.746.2±13.0原始巨核細(xì)胞000000幼稚巨核細(xì)胞000000成熟有血小板形成1.33±1.750002.3±3.619.2±1.2成熟無(wú)血小板形成3.17±2.930003.2±5.0產(chǎn)O■1。裸核細(xì)胞000000網(wǎng)狀細(xì)胞000000內(nèi)皮細(xì)胞000000吞噬細(xì)胞000000漿細(xì)胞000000組織巨細(xì)胞000000不明細(xì)胞000000退化細(xì)胞000000表22結(jié)果除正常對(duì)照組外，其余各組犬骨髓像增生明顯受到抑制，粒紅比嚴(yán)重異常，非造血細(xì)胞淋巴細(xì)胞增多，粒系細(xì)胞，紅系細(xì)胞，巨核細(xì)胞總數(shù)減少，未見(jiàn)成熟有血小板形成和成熟無(wú)血小板形成。正常骨髓像各細(xì)胞計(jì)數(shù)平均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差增大，表明注射CY8mg/kg4天，粒細(xì)胞系統(tǒng)明顯受到抑制，造模是成功的。表23綠原酸治療第7天骨髓細(xì)胞變化(％x±s)指標(biāo)高劑量中劑量低劑量模型組陽(yáng)性組正常照(n=6)(n=6)(n=6)(n=5)(n-6)(n=6)原始血細(xì)胞000000原始粒細(xì)胞000000早幼粒細(xì)胞000000中幼粒細(xì)胞5豫0.924.83±0.935.42土0.665.67±0.612.40±2.274.67±0.93中性晚幼粒細(xì)胞3.25±0.614,00±0.453.58±0.203.50±0.451.60±1.563.50±0.55中性桿狀粒細(xì)胞50.5±0.6350.25±0.6150.25±0.8250.08±0.8634.0±14.8550.33±0.61中性分葉核粒細(xì)胞3.67±1.083.58±0,583.75±0.763.42±0.7424.40±19.13.17±0.61嗜酸中幼粒細(xì)胞000000嗜酸晚幼粒細(xì)胞000000嗜酸桿狀粒細(xì)胞000000嗜酸分葉粒細(xì)胞000000嗜鹼中幼粒細(xì)胞000000嗜鹼晚幼粒細(xì)胞000000嗜鹼桿狀粒細(xì)胞000000嗜鹼分葉粒細(xì)胞000000原始紅細(xì)胞000000早幼紅細(xì)胞000000中幼紅細(xì)胞000000晚幼紅細(xì)胞24.75±0.6925.42±0.7425.08±0.6625.42±0.8010.10±13.625.33±0.75早巨紅細(xì)胞000000中巨紅細(xì)胞000000晚巨紅細(xì)胞000000粒系紅系(M:E)2.48士0.122.43±0.082.45±0.082.43±0.1026.1±55.82.40±0.09原始淋巴細(xì)胞000000幼稚淋巴細(xì)胞000000淋巴細(xì)胞12.75±1.1711.92±0.9712.08±1,0711.83±0.6127.6±13.113.0±0.89原始單核細(xì)胞000000幼稚單核細(xì)胞000000單核細(xì)胞000000全片巨核細(xì)胞總數(shù)43.8±42.246.8±10.852.2±15.557.3士13.58.40±11.253.5±18.9原始巨核細(xì)胞000000幼稚巨核細(xì)胞000000成熟有血小板形成8.67±9.719.0±1.420.7±1.220.2±1.56.2士0.120.2±1.3成熟無(wú)血小板形成3.2±3.56.0±1.44.3±1.24.8±1.52.4±3.44.8±1.3裸核細(xì)胞000000網(wǎng)狀細(xì)胞000000內(nèi)皮細(xì)胞000000吞噬細(xì)胞000000漿細(xì)胞000000組織巨細(xì)胞000000不明細(xì)胞000000退化細(xì)胞000000表23:治療第7天藥物組各犬骨髓像增生基本恢復(fù)正常，粒細(xì)胞系，紅細(xì)胞系，淋巴細(xì)胞系，巨核細(xì)胞總數(shù)，成熟有血小板形成和成熟無(wú)血小板形成，鏡下計(jì)數(shù)與正常對(duì)照組相差不大。而模型對(duì)照組2只動(dòng)物增生仍低下，非造血細(xì)胞淋巴細(xì)胞增多，淋系減少。結(jié)果表明藥物組犬骨髓像受CY急性抑制，比模型對(duì)照組恢復(fù)快，藥物對(duì)白細(xì)胞下降有升高的作用。表24綠原酸治療結(jié)束(14天)骨髓細(xì)胞檢查(％x±s)指標(biāo)高劑量中劑量低劑量模型組陽(yáng)性組正常照(n=6)(n=6)(n=6)(n=5)(n=6)(n=6)原始血細(xì)胞000000原始粒細(xì)胞000000早幼粒細(xì)胞000000中幼粒細(xì)胞4.58±0.864.67±0.981.83±2.143.42±2.183.00±2.034.75±0.52中性晚幼粒細(xì)胞3.25±0,523.25±0.271.92±1.532.58±1.322.00±1.273.08±0.38中性桿狀粒細(xì)胞50.2±1.2150.08±0.6638.33±13.844.75±11.243.3±11.7548.83±0.68中性分葉核粒細(xì)胞3.50±1.523.50±1.0518.92±16.29.83±14.112.0±13.93.75±0.52嗜酸中幼粒細(xì)胞000000嗜酸晚幼粒細(xì)胞000000嗜酸桿狀粒細(xì)胞000000嗜酸分葉粒細(xì)胞000000嗜鹼中幼粒細(xì)胞000000嗜鹼晚幼粒細(xì)胞000000嗜鹼桿狀粒細(xì)胞000000嗜鹼分葉粒細(xì)胞000000原始紅細(xì)胞000000早幼紅細(xì)胞000000中幼紅細(xì)胞000000晚幼紅細(xì)胞25.17±0.6925.25±0.4216.2±8.7322.00±6.4019.90±5.85:24.33±0.61早巨紅細(xì)胞000000中巨紅細(xì)胞000000晚巨紅細(xì)胞000000粒系紅系(M:E)2.40士0.092.38±0.083.15±1.242.42±0.152.卯±0.932.43±0.05原始淋巴細(xì)胞000000幼稚淋巴細(xì)胞000000淋巴細(xì)胞13.33±1.3313.25±1.1322.83±10.0617.50±6.6019.20±6.6615.3±0.94原始單核細(xì)胞000000幼稚單核細(xì)胞000000單核細(xì)胞000000全片巨核細(xì)胞總數(shù)11.3±1.312.7±9.13.2±6.01.83±2.72.8±2.02.5±1.1原始巨核細(xì)胞000000幼稚巨核細(xì)胞000000成熟有血小板形成5.50土8.67.3±8.21.7±4.1000成熟無(wú)血小板形成2.3±3,63.8土4.51.0±2.5000裸核細(xì)胞000000網(wǎng)狀細(xì)胞000000內(nèi)皮細(xì)胞000000吞噬細(xì)胞000000漿細(xì)胞000000組織巨細(xì)胞000000不明細(xì)胞000000退化細(xì)胞000000治療第14天，低劑量組2只犬，模型組1只犬骨髓象增生低下，非造血細(xì)胞淋巴細(xì)胞增多，粒系細(xì)胞，紅細(xì)胞系統(tǒng)減少，骨髓增生未能恢復(fù)，其余各犬骨髓細(xì)胞增生活躍，恢復(fù)正常。造模后(i.vCY)動(dòng)物白細(xì)胞明顯下降，與對(duì)照組和自身造模前有非常顯著性差17異(P〈0.01)，治療6天后藥物組和對(duì)照組白細(xì)胞均升高，但組間比較無(wú)明顯差異(P>0.05)。結(jié)果見(jiàn)表25、26。表25不同時(shí)間各組動(dòng)物的白細(xì)胞(xl07Lx±s)指標(biāo)大劑量中齊u量小劑量(11=6)陽(yáng)性對(duì)照模型對(duì)照空白對(duì)照(n=6)(n=6)(n=6)(n=6)(n=6)造模前正常11.98±3.3916.70±2.9616.92±楊12.95±1.7313.03±2.5717.93±3.89造模第一大10.95±2.2815.93±3.2211.37±2.6012條2.1011.58±3.2717.55±2.72造模第二天8.13±0.899.18±2.5813.85±8.548.25±1,556.卯±1.7717.57±4.59造模第三天7.12±0.407.97±1.668.73土3.329.08±2.926.53土0.4115.73±3.25造模第四天5.18±1.196.03±1.408.20±3.236.55±1.405.05±0.9713.32±2.43造模第五天3,97±1.214.95±2.425.25±2.535.33±2.674.30±1.4413.22±2.10治療第二天2.75±2.223.05±1.964.25±1.932.43±0.442.48±0.6514.70±1.20治療第四天1.35±0.671.13±0.661.62±1.011.82±0.851.30±0.4413.42±1.31治療第六天3.80±1.554.98±0.796.33±1.687.65±5.437.48±4.4514.57±2.16治療第八天5.93±3.195.65士2.0612.73±2.886.88±0.227.18±5.3616.78±2.48治療第十天5.03±1.688.50±4.2613.52±3.148.10±2.48"7.88土6.3312.80±2.55治療第十二天9.82±0.8212,13±5.6012.57±4.559,45±9.1810,24土3.7813.90±1.84治療第十四天12.27±5.9913.93±1.5912.47±5.2511.58±4.1610.98±2.9712.37±1.63注第6天起模型組動(dòng)物數(shù)為5只表26治療后動(dòng)物白細(xì)胞的變化率(治療后_造模第5天)/造模第5天(％，x±s)指標(biāo)大劑量01=6)中劑量(11=6)小劑量(11=6)陽(yáng)性對(duì)照模型對(duì)照對(duì)照(11=6)(n=6)造模第五天3.97±1.214.95±2.425.25±2.535.33±2.674.30±1.4413.22±2.10治療第二夭-39.30±38.57-30.57±22.87-28,52±32.49-35.58±15.14-36.20±19.2715.99±5.95治療第四天-66.31±10.40-76.22±16.35-72.57±9.11-61.52±19.07-58.02±29.533.68±15.10治療第六夭-3.75±21.8158.50±121.628.47±51,8428,07±47.2656.71±52.3712.52±9.98治療第八天49.07±55.12跳10±331.4111.11±133.750.51±51.81102.48±195.236.43±15.83治療第十天35.55±55.09232.49±319.6135.25±143.257.14±72.32126.14±221.6-1.40±17.71治療第十二天173.16±102.9247.33±217.3143.20±85.9252.36±48.7399.43±98.4110.63±8.29治療第十四天256.42±264.7245.07±138.4123.71±1]2.0134.51±56.70134.26±114.72.28±12.82注第6天起模型組動(dòng)物數(shù)為5只表25、26結(jié)果表明，注射CY使白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)下降，藥物治療后使下降的WBC計(jì)數(shù)明顯升高，三個(gè)受試藥組均顯示藥物有升高作用，大劑量組在第12天后，中劑量組在第8天后略顯明顯，陽(yáng)性對(duì)照組與模型組不明顯。正常對(duì)照組在正常值范圍內(nèi)波動(dòng)。由此可見(jiàn)，綠原酸對(duì)無(wú)論是物理還是化學(xué)因素所致的骨髓抑制，均有明顯促進(jìn)骨髓細(xì)胞增生的作用。實(shí)驗(yàn)例3綠原酸對(duì)6°Co_Y射線致小鼠脾臟造血干細(xì)胞損傷的保護(hù)作用1、實(shí)驗(yàn)方法取健康C57小鼠60只，依性別體重隨機(jī)分成5組。按分組分別給藥，陰性組各鼠腹腔注射生理鹽水0.4ml/20g體重，陽(yáng)性組(粒細(xì)胞集落剌激因子)各鼠腹腔注射給予0.4ml/20g體重(2ug/kg)，其余三組分別以0.1%、0.05%和0.025%的綠原酸藥液給各組各鼠腹腔注射0.4ml/20g體重(劑量20、10和5mg/kg)。以上5組各鼠均每日給藥一次，連續(xù)7日，第7日稱存活動(dòng)物體重，末次給藥后l小時(shí)。各組小鼠全身一次照射后第9天頸椎脫臼處死，取出脾臟，除去粘連的脂肪，然后置于Bouins液中固定3min，用放大鏡觀察并進(jìn)行內(nèi)源性脾結(jié)節(jié)計(jì)數(shù)(CFU-S)，骨髓單個(gè)核細(xì)胞計(jì)數(shù)(BMNC)。組間比較顯著差異。2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果表27綠原酸對(duì)6°Co_Y射線致小鼠脾臟造血干細(xì)胞損傷的保護(hù)作用劑量(mg/kg)動(dòng)物數(shù)(只)CFU-S"~~(10—Vspleen)(107fermr)與模型對(duì)照組比較***P<0.001**P<0.01*P<0.053、結(jié)論表27的結(jié)果表明，綠原酸20、10和5mg/kg給小鼠腹腔注射，每日一次，連續(xù)7日，對(duì)6°Co_Y射線致小鼠脾臟造血干細(xì)胞損傷有較強(qiáng)的保護(hù)作用。實(shí)驗(yàn)例4綠原酸對(duì)小鼠造血功能的影響1、實(shí)驗(yàn)方法骨髓細(xì)胞(BMC)的制備將C57動(dòng)物安樂(lè)死后，酒精消毒，無(wú)菌剝?nèi)∫粋?cè)股骨，用RPMI-1640液通過(guò)6號(hào)針頭反復(fù)沖洗骨髓腔數(shù)次，再將沖出的骨髓細(xì)胞液通過(guò)4號(hào)針頭制備成單細(xì)胞懸液。小鼠骨髓造血干細(xì)胞(CFU-S)的測(cè)定C57小鼠，無(wú)菌制備BMC懸液，計(jì)數(shù)有核細(xì)胞后配成每毫升5X104個(gè)細(xì)胞，給經(jīng)8.0Gy60Go照射后小鼠尾靜脈輸注0.2ml細(xì)胞懸液，第9天安樂(lè)死受體鼠，取脾用Bouin液固定24h后計(jì)數(shù)表面結(jié)節(jié)數(shù)。骨髓粒單系祖細(xì)胞(CFU-GM)的測(cè)定將定量(1X105)的骨髓細(xì)胞懸液加馬血清與RPMI-1640培養(yǎng)液在37。C水浴中保溫1020min，加入30g/L瓊脂后混勻，轉(zhuǎn)入含有0.2ml鼠肺條件剌激液的瓊脂培養(yǎng)皿中，于37°C，0.05%C02飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)57天，置低倍鏡下計(jì)數(shù)含50個(gè)細(xì)胞以上的集落(CFU-GM)數(shù)。骨髓早期、晚期紅系祖細(xì)胞(BFU-E、CFUE)的測(cè)定將培養(yǎng)體系配成終濃度為10%骨髓細(xì)胞懸液(5X104ml)，200g/L馬血清，100g/L小牛血清白蛋白，1X10-5mol/L二巰基乙醇、10%爆式集落促進(jìn)活性(BPA)，0.8X甲基纖維素及每毫升1UEPO等充分混合后，加10iU至微孔塑料培養(yǎng)板中，置培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3天，用聯(lián)苯胺染色后在倒置顯微鏡下計(jì)數(shù)8個(gè)以上染色陽(yáng)性細(xì)胞集落計(jì)為紅系集落形成單位(CFU-E)，培養(yǎng)8天計(jì)數(shù)含50個(gè)以上聯(lián)苯胺染色陽(yáng)性細(xì)胞集落為爆式紅系集落形成單位(BFU-E)。小鼠外周血象的測(cè)定小鼠尾靜脈采血，Coulter血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀計(jì)數(shù)。小鼠骨髓組織學(xué)觀察安樂(lè)死小鼠取完整左側(cè)股骨，入Hellyps液固定，石蠟包埋切片，HE染色，光鏡下觀察組織學(xué)變化。2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果(1)綠原酸小鼠骨髓造血干細(xì)胞的影響將C57小鼠隨機(jī)分為3組1組為C57對(duì)照組，2、3組為綠原酸10，20mg/kg/天X80.02520105121212121223.6±1.778.2±12.2*林82.8±5.3***72.4士12.6林53.10±8.2*21±3.5188.6±12.9林*89.8±13.7***69.2±6.8林51.2±11.2*且經(jīng)照組酸酸酸對(duì)性原原原型陽(yáng)綠綠綠模天，靜脈注射。另取同月齡C57對(duì)照組，每天給予生理鹽水。9天安樂(lè)死各組小鼠，制備BMC懸液，按前述方法輸注給受體鼠。9天安樂(lè)死取脾固定觀察結(jié)果，結(jié)果顯示模型對(duì)照組C57小鼠CFU-S數(shù)9.583±1.084(n=12)。與給予綠原酸后C57小鼠相比較CFU-S數(shù)明顯減少，予綠原酸后C57小鼠CFU-S數(shù)分別為20.667±2.103和23.250±2.379結(jié)果提示綠原酸對(duì)C57小鼠骨髓造血干細(xì)胞的增殖分化有一定剌激作用。表28綠原酸對(duì)60Co-Y射線致小鼠脾臟造血干細(xì)胞損傷的CFU-S<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>與模型對(duì)照組比較***P<0.001**P<0.01*P<0.05(2)綠原酸對(duì)小鼠骨髓造血祖細(xì)胞增殖的影響動(dòng)物分組，給藥與前相同，于給藥第9天安樂(lè)死小鼠，無(wú)菌制備BMC懸液按前述方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明C57小鼠骨髓造血祖細(xì)胞的增殖能力明顯低于C57小鼠，二者之間有明顯差異。而綠原酸則可使C57小鼠的粒單系造血祖細(xì)胞，早期及晚期紅系祖細(xì)胞的增殖能力均明顯增。表29綠原酸對(duì)小鼠骨髓造血祖細(xì)胞增殖CFU-E組別劑量(mg/kg)動(dòng)物數(shù)(只)CFU-E模型對(duì)照組201012121259.000±7.520102.167±5.149**104.750±6.917**與模型對(duì)照組比較***P<0.001**P<0.01*P<0.05表30綠原酸對(duì)小鼠骨髓造血祖細(xì)胞增殖BFU-E組別劑量(mg/kg)動(dòng)物數(shù)(只)BRJ-E模型對(duì)照組綠原酸綠原酸201012121237.167±5.79781.833±5.306**85.250±7.569**與模型對(duì)照組比較***P<0.001**P<0.01(3)綠原酸對(duì)小鼠外周血象的影響表31綠原酸對(duì)小鼠外周血象WBC*P<0.05組別劑量(mg/kg)動(dòng)物數(shù)(只)WBC(108個(gè))模型對(duì)照組綠原酸綠原酸20101212121.533±0.3316.625±0.669**7.025±0.703**與模型對(duì)照組比較***P<0.001**P<0.01*P<0.05結(jié)果表明C57小鼠外周血象中，其WBC數(shù)明顯低于同月齡小鼠。綠原酸10，20mg/kg則可明顯使其WBC數(shù)增加,20(4)綠原酸對(duì)小鼠血清CSA的影響將各組小鼠分別心臟采血，靜止離心制備血清，以血清取代肺條件剌激液(CSF-GM)，觀察其對(duì)CFU-GM增殖的影響，以CFU-GM的產(chǎn)率代表CSA。結(jié)果證明C57小鼠血清的CFU-GM的產(chǎn)率77.333±6.706明顯低于給予綠原酸后C57小鼠CFU-GM173.000±14.283和201.833±18.065(n=12，P<0.01)。而給予綠原酸后10，20mg/kgC57小鼠的CFU-GM明顯增加(CFU-GM分別為173.000±14.283和201.833±18.065)與C57組相比有顯著差異，提示綠原酸可明顯增強(qiáng)C57小鼠體內(nèi)的CSA，促進(jìn)C57小鼠骨髓造血祖細(xì)胞的增殖分化。表32綠原酸對(duì)小鼠骨髓造血祖細(xì)胞增殖CFU-GM組另u劑量(mg/kg)動(dòng)物數(shù)(只)CFU-GM模型對(duì)照組1277.333±6.706綠原酸2012173.000±14.283**綠原酸1012201.833±18.065**與模型對(duì)照組比較***P<0.001**P<0.01*P<0.05(5)綠原酸對(duì)小鼠骨髓組織學(xué)的影響組織學(xué)研究結(jié)果顯示小鼠骨髓腔內(nèi)造血祖細(xì)胞豐富，各系細(xì)胞均可見(jiàn)到，并且形態(tài)良好，增殖旺盛，血竇較多。而同月齡C57小鼠骨髓腔內(nèi)造血細(xì)胞明顯減少，增生不活躍，以中晚幼粒細(xì)胞為主，甚至局部缺少造血細(xì)胞，纖維結(jié)締組織增生，血竇較少。給予綠原酸后的C57小鼠與未用藥C57小鼠相比其骨髓腔內(nèi)造血細(xì)胞明顯增多，增生活躍，血竇較多，但較C57小鼠骨髓造血細(xì)胞及血竇為少。這一結(jié)果說(shuō)明綠原酸可明顯改善C57小鼠骨髓造血功能。以下通過(guò)具體實(shí)施例說(shuō)明綠原酸在本發(fā)明的新用途下，可制備成藥學(xué)上常規(guī)的制劑，但綠原酸的用量并不僅僅限于所述的實(shí)施例的范圍內(nèi)。實(shí)施例1制備氯化鈉0.9%的靜脈注射用注射液處方一純度大于95%的綠原酸lg枸櫞酸l.Og枸櫞酸鈉0.5g氯化鈉18g注射用水2000ml_按注射劑的常規(guī)操作共制成2ml的注射劑1000支，每支含綠原酸1毫克處方二純度大于95%的綠原酸3000g氯化鈉2250g注射用水2000，000ml_按注射劑的常規(guī)操作共制成1000ml的注射劑1000瓶，每瓶含綠原酸3克生理可用的pH值調(diào)節(jié)劑檸檬酸、富馬酸、谷氨酸、L-天冬氨酸、乳酸、乳糖酸、半乳糖醛酸、葡萄糖醛酸、抗壞血酸、鹽酸、醋酸。實(shí)施例4綠原酸片劑處方一綠原酸(純度大于95%)1.00g填充劑180.00g崩解劑10.00g黏合劑6.00g潤(rùn)滑劑3.00g共計(jì)200.00g按片劑常規(guī)方法制備，共制成1000片，每片含綠原酸300mg。綠原酸的純度大于95%。填充劑如淀粉、糊精、糖粉、預(yù)膠化淀粉、乳糖、葡萄糖、微晶纖維素、碳酸鈣、硫酸鈣、碳酸氫鈣。黏合劑如羥丙甲纖維素、聚維酮、淀粉漿、糊精漿、糖漿、膠漿、海藻酸鈉、聚乙二醇、桃膠、阿拉伯膠。崩解劑如交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、交聯(lián)聚維酮、羧甲淀粉鈉、羥丙基淀粉、低取代羥填充劑155.OOg崩解劑20.OOg黏合劑15.OOg潤(rùn)滑劑10.OOg共計(jì)500.OOg按片劑常規(guī)方法制備，共制成1000片，每片含綠原酸lmg。處方二綠原酸(純度大于95%)100.OOg按片劑常規(guī)方法制備，共制成1000片，每片含綠原酸100mg。處方三綠原酸(純度大于95%)300.OOg丙基纖維素、檸檬酸、酒石酸、酸酐、碳酸氫鈉、碳酸鈉。潤(rùn)滑劑如硬脂酸鎂、滑石粉、微粉硅膠、液體石蠟、聚乙二醇。實(shí)施例5綠原酸膠囊劑處方一綠原酸(純度大于95%)1.OOg填充齊U184.OOg黏合劑5.OOg潤(rùn)滑劑10.OOg共計(jì)200.OOg按膠囊劑常規(guī)方法制備，共制成1000粒膠囊，每粒膠囊含綠原酸lmg。處方二綠原酸(純度大于95%)100.OOg填充劑85.OOg黏合劑5.OOg潤(rùn)滑劑10.OOg共計(jì)200.OOg按膠囊劑常規(guī)方法制備，共制成1000粒膠囊，每粒膠囊含綠原酸100mg。處方三綠原酸(純度大于％%)300.OOg填充劑85.OOg黏合劑5.OOg潤(rùn)滑劑10.OOg共計(jì)400.OOg按膠囊劑常規(guī)方法制備，共制成1000粒囊，每粒膠囊含綠原酸300mg。綠原酸的純度大于95%。填充劑如淀粉、糊精、糖粉、預(yù)膠化淀粉、乳糖、葡萄糖、微晶纖維素、碳酸鈣、硫酸鈣、碳酸氫鈣。黏合劑如羥丙甲纖維素、聚維酮、淀粉漿、糊精漿、糖漿、膠漿、海藻酸鈉、聚乙二醇、桃膠、阿拉伯膠。潤(rùn)滑劑如硬脂酸鎂、滑石粉、微粉硅膠、液體石蠟、聚乙二醇。權(quán)利要求1.綠原酸Chlorogenicacid在制備治療骨髓感染的藥物中的用途。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于所述的藥物是以有效量的綠原酸為活性成分，加上藥學(xué)上可接受的輔料或輔助性成分制備而成的藥劑。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用途，其特征在于所述的藥劑中每制劑單位含有綠原酸l-3000mg。4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的用途，其特征在于所述的藥劑是口服制劑、注射劑。全文摘要文檔編號(hào)A61P43/00GK101695484SQ20091024613公開(kāi)日2010年4月21日申請(qǐng)日期2006年7月21日優(yōu)先權(quán)日2006年7月21日發(fā)明者包旭,張亮,張潔,張舒,徐小平,易大朝申請(qǐng)人:四川九章生物化工科技發(fā)展有限公司;