專利名稱：4-叔丁基-5-(1,2,4-三唑-1-基)-2-芐亞氨基噻唑的醫(yī)藥用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一類化合物的醫(yī)藥用途，具體是4-叔丁基-5-(1，2，4-三 唑-1-基)-2-芐亞氨基噻唑的醫(yī)藥用途。
背景技術(shù)：
專利(CN101602761)描述了 4_叔丁基_5_ (1，2，4_三唑-1-基)_2_芐亞氨基噻唑的制備與殺菌活性。4-叔丁基-5- (1，2,4-三唑-1-基)-2-芐亞氨基噻唑的醫(yī)藥用途沒 有研究報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一類化學(xué)結(jié)構(gòu)式⑴所示的4-叔丁基-5-(1，2，4-三 唑-1-基)-2-芐亞氨基噻唑的醫(yī)藥用途。 其中，I式中X1選自氫，羥基，甲氧基，硝基，氨基和氯；X2選自氫，硝基，氨基， 氯，溴和碘；χ3選自氫，甲基，乙基，硝基，甲氧基，氯，溴，氨基和二甲氨基；χ4選自氫，硝 基，氨基，氯，溴和碘。本發(fā)明的目的還在于提供所述4-叔丁基-5- (1，2,4-三唑基)_2_芐亞氨基 噻唑?qū)τ谌藢m頸癌細(xì)胞、人肝癌細(xì)胞、人鼻咽癌細(xì)胞等具有良好的抑制活性，在制備抗腫瘤 藥中應(yīng)用。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下優(yōu)點首次發(fā)現(xiàn)4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑基)_2_芐亞氨基噻唑?qū)τ谌藢m頸癌細(xì) 胞、人肝癌細(xì)胞、人鼻咽癌細(xì)胞等具有良好的抑制活性，可用于制備抗腫瘤藥物。
具體實施例方式以下實施例旨在說明本發(fā)明而不是對本發(fā)明的進一步限定。實施例1 94-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-芐亞氨基噻唑抗腫瘤活性本發(fā)明優(yōu)選化合物4_叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-(2_羥基芐亞氨 基)噻唑；4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-(2_羥基-5-溴芐亞氨基)噻唑；4-叔丁基-5- (1，2，4-三唑-1-基)-2- (2-羥基-3，5- 二溴芐亞氨基)噻唑；4-叔丁 基-5-(l，2，4-三唑-1-基)-2-(2_羥基-3，5- 二氯芐亞氨基)噻唑；4-叔丁基_5_(1， 2，4_三唑-1-基)-2-(2_羥基-3，5-二碘芐亞氨基)噻唑；4-叔丁基-5-(l，2，4-三 唑-1-基)-2-(4-二甲氨基芐亞氨基)噻唑；4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-(4-甲 氧基芐亞氨基)噻唑；4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-(4-乙氧基芐亞氨基)噻唑； 4-叔丁基-5- (1，2，4-三唑-1-基)-2- (2,4- 二氯芐亞氨基)噻唑。1.抗腫瘤活性原理MTT法生物活性測試又稱MTT比色法，是一種檢測細(xì)胞存活和生長的方法。MTT 分析法以活細(xì)胞代謝物還原劑噻唑藍(lán)[3-(4，5- 二甲基-2-噻唑)-2，5_ 二苯基溴化四氮 R^ ；3- (4, 5-dimethylthiazol-2-yl) -2, 5-diphenyl-tetrazolium bromide, MTT]為基石出。 MTT為黃色化合物，是一種接受氫離子的染料，可作用于活細(xì)胞線粒體中的呼吸鏈，在琥珀 酸脫氫酶和細(xì)胞色素C的作用下四氮唑環(huán)(tetrazolium)開裂，生成藍(lán)色水不溶性的甲瓚 (Formazan)結(jié)晶并沉積在細(xì)胞中，甲瓚結(jié)晶的生成量僅與活細(xì)胞數(shù)目成正比(死細(xì)胞中琥 珀酸脫氫酶消失，不能將MTT還原)。二甲基亞砜(DMSO)能溶解細(xì)胞中的甲瓚，用酶聯(lián)免 疫檢測儀在570nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi)， MTT結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。2.抗腫瘤活性實驗 試樣4_叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-芐亞氨基噻唑。細(xì)胞系宮頸癌細(xì)胞系HeLa ；肝癌細(xì)胞系Bel 7402 ；鼻咽癌細(xì)胞系CNE 2(中南大 學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院細(xì)胞庫提供)。試劑噻唑藍(lán)(MTT)、RPMI 1640培養(yǎng)液、新生牛血清、抗生素(美國英杰生命技術(shù) 公司)；胰酶(美國AMRESC0公司)；96孔培養(yǎng)板(美國英杰生命技術(shù)公司)；二甲基亞砜 (美國Sigma公司)。儀器HFSafe-1500型超凈工作臺、HF151UV型CO2培養(yǎng)箱(上海力申科學(xué)儀器有 限公司)；XSP-15C型倒置顯微鏡(上海長方光學(xué)儀器有限公司)；Multiskan MK3型酶標(biāo)儀 (美國Thermo公司)；超純水制備儀(美國Milli-Q公司)。實驗操作試樣對于hela細(xì)胞、Bel 7402細(xì)胞和CNE 2細(xì)胞的測試。每種細(xì)胞 的實驗操作過程相同，一次實驗過程中，每種試樣設(shè)置5個濃度梯度，每個濃度四個平行試 樣，并通過空白組對照得出結(jié)論。1)倒掉長滿癌細(xì)胞的培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，加入5mL PBS清洗，倒掉PBS，加入ImL 胰酶，放入37°C、5% CO2培養(yǎng)箱。2)取出培養(yǎng)瓶，加入RPMI 1640培養(yǎng)基，用吸管反復(fù)吸打吹散細(xì)胞。3)細(xì)胞懸液接種于96孔培養(yǎng)板，第1孔不加細(xì)胞懸液，其余每板100 μ L (約10000 個細(xì)胞)，放入37°C、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)中48小時。4)試樣配置。用DMSO作為溶劑，配置濃度梯度為0. 5 μ mol/mL、0. 25 μ mol/mL、 0. 1 μ mol/mL、0. 05 μ mol/mL、0. 0025 μ mol/mL 的溶液。5)吸取每孔內(nèi)的懸浮液，加入試樣，放入37°C、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)中48小時。 每組實驗平行3次。6)取出上藥48小時的96孔培養(yǎng)板，吸出每孔培養(yǎng)液，每孔120μ L PBS清洗一次，加入每孔20 μ L 5mg/mLMTT液，放入37°C、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)中3 4小時。7)吸出孔內(nèi)MTT后，加入每孔150 μ L DMSO液(包括第1空)，將培養(yǎng)板置于微孔
板扳蕩器上振蕩，使結(jié)晶物溶解。
8)酶標(biāo)儀檢測各孔OD值(檢測波長570nm)。3.抗腫瘤活性評價1)細(xì)胞抑制率計算細(xì)胞抑制率(％ )=(正常OD值-加藥OD值)/正常OD值X 100%2) IC5。值計算試樣濃度對數(shù)值與細(xì)胞抑制率線性回歸，計算試樣對細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度IC5tl
值。試樣對于hela細(xì)胞、Bel 7402細(xì)胞和CNE 2細(xì)胞的IC5tl見表1。表1 4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-芐亞氨基噻唑?qū)τ趆ela細(xì)胞、Bel 7402細(xì)胞和CNE 2細(xì)胞的抑制活性 測試結(jié)果顯示，被測試的4-叔丁基-5- (1，2，4-三唑-1-基)~2~芐亞氨基噻唑?qū)τ谌藢m頸癌細(xì)胞(hela細(xì)胞)、人肝癌細(xì)胞(Bel 7402細(xì)胞)、人鼻咽癌細(xì)胞(CNE 2細(xì)胞) 等具有良好的抑制活性，可用于制備抗腫瘤藥物。
權(quán)利要求
一類化學(xué)結(jié)構(gòu)式(I)所示的4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-芐亞氨基噻唑的醫(yī)藥用途。其特征在于，其中，I式中X1選自氫，羥基，甲氧基，硝基，氨基和氯；X2選自氫，硝基，氨基，氯，溴和碘；X3選自氫，甲基，乙基，硝基，甲氧基，氯，溴，氨基和二甲氨基；X4選自氫，硝基，氨基，氯，溴和碘。4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-芐亞氨基噻唑(I)對于人宮頸癌細(xì)胞、人肝癌細(xì)胞、人鼻咽癌細(xì)胞等具有良好的抑制活性，可用于制備抗腫瘤藥物。F2009102267285C00011.tif
全文摘要
本發(fā)明公開了一類化學(xué)結(jié)構(gòu)式(I)所示的4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-芐亞氨基噻唑的醫(yī)藥用途。其中，I式中X1選自氫，羥基，甲氧基，硝基，氨基和氯；X2選自氫，硝基，氨基，氯，溴和碘；X3選自氫，甲基，乙基，硝基，甲氧基，氯，溴，氨基和二甲氨基；X4選自氫，硝基，氨基，氯，溴和碘。4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-芐亞氨基噻唑(I)對于人宮頸癌細(xì)胞、人肝癌細(xì)胞、人鼻咽癌細(xì)胞等具有良好的抑制活性，可用于制備抗腫瘤藥物。
文檔編號A61K31/427GK101836979SQ200910226728
公開日2010年9月22日 申請日期2009年12月25日 優(yōu)先權(quán)日2009年12月25日
發(fā)明者向建南, 夏曙, 李珺姊, 胡艾希, 覃智 申請人:湖南大學(xué)