專利名稱：用于治療慢性腎臟疾病之醫(yī)藥組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明系關(guān)于治療慢性腎臟病之技術(shù)領(lǐng)域。具體而言，本發(fā)明系提供一種治療慢 性腎臟病之醫(yī)藥組合物，其包括臍帶間質(zhì)干細(xì)胞。本發(fā)明尚提供一種臍帶間質(zhì)干細(xì)胞之用 途，其系用以制備供治療慢性腎臟病之醫(yī)藥。
背景技術(shù)：
近年來由于人口老化再加上國人飲食習(xí)慣上的改變，造成糖尿病以及心血管疾病 不斷攀升，慢性腎臟病的盛行率也逐年增加。目前慢性腎臟病已經(jīng)高居國人十大死因的第 八位，有漸漸成為臺灣新國病的趨勢。根據(jù)統(tǒng)計(jì)，臺灣目前約有200多萬民眾罹患慢性腎 臟病，而進(jìn)入到末期腎衰竭洗腎的病患則約有六萬多名，并且每年以6%的成長率在成長。 雖然慢性腎臟病病患的增加是全球的趨勢，但根據(jù)研究指出臺灣慢性腎臟病盛行率高達(dá) 11. 9%，位居于世界第三。因此，如何預(yù)防慢性腎臟病的發(fā)生及治療慢性腎臟病是現(xiàn)今醫(yī)學(xué) 上十分重要的課題。干細(xì)胞療法是目前治療的新遠(yuǎn)景。人類臍帶間質(zhì)干細(xì)胞是一種生產(chǎn)后的廢物，來 源取得容易，沒有道德顧慮，處理方式簡單，而且數(shù)量極多、繁殖快速的一種干細(xì)胞來源。本 實(shí)驗(yàn)室先前也研究出，移植人類臍帶間質(zhì)干細(xì)胞于大白鼠紋狀體中，植入的細(xì)胞可以存活 在大白鼠腦中四個(gè)月，表示人類臍帶間質(zhì)干細(xì)胞，不會引起宿主的免疫及排斥反應(yīng)。因此， 人類臍帶間質(zhì)干細(xì)胞為一株適合用于進(jìn)行異體移植的良好干細(xì)胞來源。同時(shí)，我們利用四 氯化碳誘發(fā)大白鼠肝纖維化后，直接植入人類臍帶間質(zhì)干細(xì)胞到老鼠的肝臟內(nèi)，發(fā)現(xiàn)不但 可以有效降低大白鼠血清中的GOT與GTP，而且可以有效幫助肝纖維化的修復(fù)。

發(fā)明內(nèi)容
在一方面，本發(fā)明提供一種用于治療慢性腎臟病之醫(yī)藥組合物，其包括臍帶間質(zhì) 干細(xì)胞(umbilical mesenchymal stem cells)。特定而言，所述醫(yī)藥組合物可降低血清中 尿素氮、降低血清中肌酸酐，增加肌酸酐廓清率，減少尿液中蛋白質(zhì)含量及降低腎臟發(fā)炎。 在一具體實(shí)例中，所述醫(yī)藥組合物可植入至個(gè)體之腎臟位置。在另一具體實(shí)例中，所述臍帶 間質(zhì)干細(xì)胞系來自人類。在另一方面，本發(fā)明是針對一種臍帶間質(zhì)干細(xì)胞之用途，其系用以制備供治療腎 臟病之醫(yī)藥。特定而言，所述醫(yī)藥可降低血清中尿素氮、降低血清中肌酸酐，增加肌酸酐廓 清率，減少尿液中蛋白質(zhì)含量及降低腎臟發(fā)炎。在一具體實(shí)例中，所述醫(yī)藥可植入至個(gè)體之 腎臟位置。在另一具體實(shí)例中，所述臍帶間質(zhì)干細(xì)胞系來自人類。


前文的所述以及實(shí)施方式可藉由附圖達(dá)到更好的說明效果。為了加強(qiáng)本發(fā)明的說 明，將適當(dāng)?shù)膶?shí)施例的圖式列舉于此。要注意的是，本發(fā)明并不受限于列舉于此的說明。圖1至4顯示腎間質(zhì)纖維母細(xì)胞經(jīng)TGF β -1處理后之各種分析結(jié)果。
圖5及6顯示將人類臍帶間質(zhì)干細(xì)胞植入后，大白鼠腎臟外觀型態(tài)的改變。圖7至11顯示經(jīng)Hematoxylin-Eosin組織染色后大白鼠腎臟的組織切片圖。圖12至17顯示經(jīng)Sirius red組織染色后大白鼠腎臟的組織切片圖。圖18至20顯示大白鼠移植人類臍帶間質(zhì)干細(xì)胞后之各項(xiàng)分析。圖21顯示大白鼠移植人類臍帶間質(zhì)干細(xì)胞后之血液尿液生化檢測分析。
具體實(shí)施例方式除非另外定義，本文中所用之所有技術(shù)及科學(xué)詞匯具有熟習(xí)本文所屬技藝者所通 常明了之相同意義。在本文中，冠詞“一”系指一個(gè)或一個(gè)以上(亦即，至少一個(gè))之該冠詞之文法客 體。舉例而言，“一組件”意謂一個(gè)組件或一個(gè)以上之組件。在一方面，本發(fā)明提供一種用于治療慢性腎臟病之醫(yī)藥組合物，其包括臍帶間質(zhì) 干細(xì)胞(umbilical mesenchymal stem cells)。本文所使用的“臍帶間質(zhì)干細(xì)胞” 一詞系指位于哺乳類動物臍帶，較佳為人類臍帶 間質(zhì)組織中之干細(xì)胞，可為未經(jīng)純化的細(xì)胞培養(yǎng)物或純化后的細(xì)胞。以下實(shí)例說明從個(gè)體 組織取得臍帶間質(zhì)干細(xì)胞之流程。臍帶為生產(chǎn)后廢棄物，來源取得容易，沒有道德顧慮，處 理方式簡單，數(shù)量極多、繁殖快速。且本實(shí)驗(yàn)室先前發(fā)現(xiàn)，移植人類臍帶間質(zhì)干細(xì)胞，不會引 起宿主產(chǎn)生免疫排斥反應(yīng)。所以人類臍帶間質(zhì)干細(xì)胞為一種適合用來進(jìn)行異體移植的良好 干細(xì)胞來源。本文所使用的“醫(yī)藥組合物”是指一種作為醫(yī)藥之混合物，其通常含有載體，諸如， 醫(yī)藥可接受之載體或賦形劑，其系技藝中所習(xí)知且適合投藥至對象中，以作為治療性、診斷 性或預(yù)防性之目的，其亦可包括細(xì)胞培養(yǎng)物或細(xì)胞。醫(yī)藥組合物之形式可為溶液、懸浮液、 錠劑、丸劑、膠囊或粉末，其給藥方式較佳為注射。本文所使用的“醫(yī)藥可接受之載體”系指任何習(xí)知類型之無毒固體、半固體或液體 之填充劑、稀釋劑、包膠囊材料、調(diào)配物輔助劑或賦形劑。醫(yī)藥可接受之載體系在所用之劑 量及濃度下，對接受者無毒性，且可與該調(diào)配物之其它成分兼容。醫(yī)藥可接受之載體一般均 可由公眾輕易取得。此外，醫(yī)藥可接受之輔助物質(zhì)，諸如，PH調(diào)節(jié)及緩沖劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑、 安定劑、濕潤劑及類似物，亦皆可由公眾取得。適當(dāng)之載體包括，但不限于，水、葡萄糖、甘油、鹽水、乙醇及其組合。 載體可含有額外之試劑，諸如，濕潤及乳化劑、pH緩沖劑或是佐劑，其可增強(qiáng)該調(diào) 配物之有效性。局部性載體包括液體石油、棕櫚酸異丙酯、聚乙二醇、乙醇(95%)、溶于水 中的聚氧乙烯單月桂酸酯(5% )或是溶于水中的十二烷基硫酸鈉(5% )。可視需要加入其 它材料，諸如，抗氧化劑、保濕劑、黏度穩(wěn)定劑及類似試劑。本發(fā)明之醫(yī)藥組合物可用于治療個(gè)體之慢性腎臟病，個(gè)體較佳為哺乳動物，更佳 為人類。特定而言，所述醫(yī)藥組合物可降低血清中尿素氮、降低血清中肌酸酐，增加肌酸酐 廓清率，減少尿液中蛋白質(zhì)含量及降低腎臟發(fā)炎。在一具體實(shí)例中，所述醫(yī)藥組合物可植入 至個(gè)體之腎臟位置，特別是腎臟結(jié)締組織被膜下層的位置。在另一具體實(shí)例中，所述臍帶間 質(zhì)干細(xì)胞系來自人類。在另一方面，本發(fā)明提供一種臍帶間質(zhì)干細(xì)胞之用途，其系用以制備供治療慢性腎臟病之醫(yī)藥。特定而言，所述醫(yī)藥可降低血清中尿素氮、降低血清中肌酸酐，增加肌酸酐 廓清率，減少尿液中蛋白質(zhì)含量及降低腎臟發(fā)炎。在一具體實(shí)例中，所述醫(yī)藥可植入至個(gè)體 之腎臟位置，特別是腎臟結(jié)締組織被膜下層的位置。在另一具體實(shí)例中，所述臍帶間質(zhì)干細(xì) 胞系來自人類。本發(fā)明之各個(gè)具體實(shí)例的細(xì)節(jié)說明如后。本發(fā)明之其它特征將會經(jīng)由以下各個(gè)具 體實(shí)例中的詳細(xì)說明及申請專利范圍而清楚呈現(xiàn)。此一領(lǐng)域具通常知識者可了解本發(fā)明具 有各種態(tài)樣，下述具體實(shí)例僅用以說明而非作為本發(fā)明之限制。實(shí)例 以下實(shí)例先以細(xì)胞培養(yǎng)方式，探討人類臍帶間質(zhì)干細(xì)胞對經(jīng)TGF β -1刺激的腎纖維母細(xì)胞株之影響。結(jié)果顯示，經(jīng)TGF β _1刺激后腎纖維母細(xì) 胞株，會在S期與G2/M期的比率增加，并且造成其增生，釋出大量的膠原蛋白。然而，在人 類臍帶間質(zhì)干細(xì)胞與腎纖維母細(xì)胞株共同培養(yǎng)系統(tǒng)中，可以觀察到人類臍帶間質(zhì)干細(xì)胞， 可以有效減少受到TGFi3 -1刺激后腎纖維母細(xì)胞株在S期與G2/M期的增加比率，并且減少 其增生，降低其釋出的膠原蛋白。后續(xù)以大白鼠腎臟進(jìn)行六分之五切除術(shù)，造成腎臟纖維化的情形，立即植入人類臍帶間質(zhì)干細(xì)胞，在四周及六周后觀察腎臟修復(fù)的情形。結(jié)果顯示， 植入人類臍帶間質(zhì)干細(xì)胞，從外觀上及橫切面組織圖發(fā)現(xiàn)干細(xì)胞可以有效減緩腎臟纖維化 的現(xiàn)象。經(jīng)由腎臟功能上的測定，也可以發(fā)現(xiàn)植入人類臍帶間質(zhì)干細(xì)胞可以有效降低血清 中尿素氮、血清中肌酸酐，增加肌酸酐廓清率，減少尿液中蛋白質(zhì)含量。并且在組織切片上 也可以觀察到腎絲球內(nèi)腎間質(zhì)細(xì)胞的增生、腎小管的萎縮、腎臟內(nèi)膠原蛋白合成量增加的 情形，以及腎絲球內(nèi)含有大量的單核球及巨噬細(xì)胞和活化的纖維母細(xì)胞，都在植入人類臍 帶間質(zhì)干細(xì)胞后有效獲得改善。實(shí)例1 人類臍帶間葉細(xì)胞之制備人類臍帶以無菌操作方式收集并在4°C下儲存于HBSS(BiOChrOmL201-10)不超過 24小時(shí)。臍帶先泡在75%之乙醇中30秒以消毒。在無菌操作臺中將消毒過之臍帶置于無 鈣及無鎂離子之緩沖溶液(CMF，Gibco 14185-052)，以消毒過之器具將臍帶縱切，并將其中 之血管及間葉組織(瓦頓氏凝膠)去除。將間葉組織切成0. 5立方公分之小塊，以250Xg 離心5分鐘。去除上清液，并以適量之無血清DMEM(Gibco 12100-046)清洗沉淀物二次，再 以250X g離心5分鐘。間葉組織在37°C下以膠原酶處理14至18小時(shí)，清洗后，再以2. 5% 之胰蛋白酶于37°C及震蕩下處理30分鐘。加入FBS(HycloneSH30071. 03)至間葉組織以終 止胰蛋白反應(yīng)。此時(shí)間葉組織已變成間葉細(xì)胞。間葉細(xì)胞以10% FBS-DMEM使其分散并計(jì) 算其數(shù)量后，便可直接用于培養(yǎng)及進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。實(shí)例2 腎間質(zhì)纖維母細(xì)胞株的培養(yǎng)正常老鼠腎間質(zhì)纖維母細(xì)胞株(Normalrat kidney fibroblast cells,NRK-49F ； 購自財(cái)團(tuán)法人食品工業(yè)發(fā)展研究所)，將含有NRK-49F細(xì)胞的冷凍管快速以37°C水浴解凍， 吸起管中的培養(yǎng)液收集到含有IOml 10% CS(PAA B15-001)DMEM的50ml離心管中，離心 1200rpm, 5分鐘，去除上清液后，再加入10% CS DMEM，清洗3次，之后再加入4ml的10% CS DMEM，充分混和后計(jì)數(shù)細(xì)胞，將細(xì)胞種于10公分的培養(yǎng)皿內(nèi)(細(xì)胞密度為5X 105/dish)，待細(xì)胞長到八分滿時(shí)，即可進(jìn)行下列各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)。_丨3:入碰砠丨_〒_與丨腕佳_胞燃_胃碰+，而觀1_入 類臍帶間質(zhì)干細(xì)胞,，可以有效減φ等到TGF β -ι mmfs, nmmmmmm^.比率，并H.有 效降低膠原蛋白的釋出。我們利用PI的熒光強(qiáng)度，來測量腎纖維母細(xì)胞受損程度。由于經(jīng)過Triton X-100 處理過的細(xì)胞，會造成細(xì)胞膜的受損，其DNA均會被PI所標(biāo)示，因而使G2/M phase即為DNA 復(fù)制期，其PI所表現(xiàn)出的熒光強(qiáng)度應(yīng)為Gl期的兩倍，可藉此判斷細(xì)胞周期之變化 。將腎間質(zhì)纖維母細(xì)胞經(jīng)TGFii-I處理24小時(shí)后，利用流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞受損的 情形。結(jié)果顯示，控制組細(xì)胞平均熒光強(qiáng)度與經(jīng)TGFii-I處理腎間質(zhì)纖維母細(xì)胞，其平均熒 光強(qiáng)度無異，所以TGFii-I并不會造成腎間質(zhì)纖維母細(xì)胞死亡(圖1)。同樣地，利用流式細(xì) 胞儀分析細(xì)胞周期的變化。經(jīng)TGF β -1處理后的腎間質(zhì)纖維母細(xì)胞，在S期與G2/M期的比 率增加，表示TGFii-I會促進(jìn)腎間質(zhì)纖維母細(xì)胞的增生，人類臍帶間質(zhì)干細(xì)胞與腎間質(zhì)纖 維母細(xì)胞共同培養(yǎng)時(shí)，給予TGFii-I刺激后，人類臍帶間質(zhì)干細(xì)胞可以有效降低腎間質(zhì)纖 維母細(xì)胞株在S期與G2/M期的比例(圖2) (η = 3，ρ < 0. 05，*表與控制組有顯著差異 ’# 表與加入TGFii-I的腎間質(zhì)纖維母細(xì)胞實(shí)驗(yàn)組有顯著差異)。另外，我們以MTT作為受質(zhì)，測量存活細(xì)胞粒腺體中dehydrogenase的活性，以 偵測細(xì)胞存活率，進(jìn)而分析細(xì)胞的增生情形。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，經(jīng)TGFii-I處理24小時(shí)后，會造 成腎間質(zhì)纖維母細(xì)胞的增生，人類臍帶間質(zhì)干細(xì)胞與腎間質(zhì)纖維母細(xì)胞共同培養(yǎng)并給予 TGFii-I刺激后，人類臍帶間質(zhì)干細(xì)胞可以有效降低腎間質(zhì)纖維母細(xì)胞增生的情形，且與控 制組無顯著差異(圖3) (η = 9，ρ < 0. 05，*表與控制組有顯著差異)。再者，我們以SircolTM Soluble Collagen Assay kit偵測腎間質(zhì)纖維母細(xì)胞 所釋出膠原蛋白的濃度。結(jié)果顯示，處理TGFii-124小時(shí)后，其腎間質(zhì)纖維母細(xì)胞培養(yǎng)液 內(nèi)膠原蛋白的含量大幅上升，當(dāng)人類臍帶間質(zhì)干細(xì)胞與腎間質(zhì)纖維母細(xì)胞共同培養(yǎng)并給予 TGFii-I刺激后，人類臍帶間質(zhì)干細(xì)胞可以降低腎間質(zhì)纖維母細(xì)胞釋出的膠原蛋白濃度，且 與控制組無顯著差異(圖4) (η = 3，ρ < 0. 05，*表與控制組有顯著差異)。實(shí)例4:棺入人類臍帶丨旬Jli干細(xì)朐,，可以有效降低大白薩想結(jié)利云力Mc成腎 flff纖維化的現(xiàn)象雄性大白鼠，根據(jù)Floege等人的腎臟六分之五切除術(shù)，將大白鼠的右側(cè)腎臟全 部摘除，左側(cè)腎臟結(jié)扎三分之二條血管，造成大白鼠的腎纖維化(renal mass reduction, RMR)。將人類臍帶間質(zhì)干細(xì)胞植入后，觀察其腎臟外觀型態(tài)的改變，結(jié)果顯示，腎臟有明顯 修復(fù)纖維化的情形(圖5)。同樣地，在腎臟橫切面組織型態(tài)上可以觀察到植入干細(xì)胞后組 織發(fā)炎的情形主要在腎臟的外圍沒有擴(kuò)散到內(nèi)部(圖6)。實(shí)例言人類臍帶丨旬Jli干細(xì)朐,，可以有效減緩大白薩想結(jié)利云力Mc成腎 小球纖維化的現(xiàn)象將組織玻片置于以濾紙過濾的Hematoxyline中作細(xì)胞核染色30分鐘，染色完畢 后將組織玻片放回二次水中清洗2次每次30秒。接著將組織玻片置入以濾紙過濾的Eosin Y solution 0.2%中呈色2分鐘作細(xì)胞質(zhì)染色，之后將組織玻片放到Aceric acid進(jìn)行退 染5秒。經(jīng)Hematoxylin-Eosin組織染色后正常大白鼠左側(cè)腎臟的組織切片圖(圖7)?？刂平M四周后的組織染色圖(圖8)?？刂平M六周后，組織染色圖(圖9)。大白鼠腎臟移植干 細(xì)胞四周后，經(jīng)Hematoxylin-Eosin組織染色照片(圖10)。大白鼠腎臟移植干細(xì)胞六周 后，組織染色圖(圖11)。大白鼠的腎臟造成腎纖維化后四周與六周，我們分別計(jì)算控制組 與干細(xì)胞組腎絲球內(nèi)細(xì)胞數(shù)目，結(jié)果顯示，控制組大白鼠在結(jié)痂區(qū)近端腎絲球內(nèi)細(xì)胞數(shù)與 正常組相比，無論是四周或六周均有顯著增加，而干細(xì)胞組在四周及六周時(shí)細(xì)胞數(shù)與控制 組相比有顯下降(S表結(jié)痂區(qū)、P表結(jié)痂近端區(qū)、D表結(jié)痂遠(yuǎn)程區(qū)Scale bar :1mm inA, 100 μ m in B、C、D)。
_丨6:_入碰砠丨_〒_，聊捕隨姑_對丨1丨__翩丨皆 臟內(nèi)纖維化的面積以及膠原蛋白的合成量將組織玻片置入以濾紙過濾的0. 1% Sirius Red染劑中呈色8分鐘。取大白鼠左 腎組織切片經(jīng)Sirius red組織染色后，以Sirius red染劑標(biāo)定膠原蛋白的含量，并且將含 有大量膠原蛋白的紅色區(qū)域定義為結(jié)痂區(qū)。在正常大白鼠的腎組織中，沒有觀察到結(jié)痂的 區(qū)域(圖12A)。在控制組四周的大白鼠，可以在腎組織外側(cè)看到結(jié)痂區(qū)(圖12B)，另外，在 控制組六周的大白鼠，其結(jié)痂區(qū)域有明顯增加，且往內(nèi)擴(kuò)大(圖12C)。在移植干細(xì)胞組四 周，其結(jié)痂區(qū)域明顯減少(圖12D)。在移植干細(xì)胞組六周，其結(jié)痂區(qū)域變小且分布在組織的 邊緣(圖12E)。(比例尺為Imm)統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，正常組幾乎無結(jié)痂區(qū)域的存在，而在控制 組四周及六周，其結(jié)痂區(qū)面積百分比增加且明顯高于正常組。而經(jīng)由移植人類臍帶間質(zhì)干 細(xì)胞組四周及六周與控制組四周及六周相比都有顯著減少的情形。經(jīng)Sirius red組織染 色后正常大白鼠左側(cè)腎臟的組織切片圖(圖13)。腎臟經(jīng)六分之五切除術(shù)造成腎臟纖維化 四周后的組織染色圖(圖14)。大白鼠腎臟經(jīng)六分之五切除術(shù)造成腎臟纖維化六周后，組織 染色圖(圖15)。大白鼠腎臟移植人類臍帶間質(zhì)干細(xì)胞四周后，經(jīng)Sirius red組織染色照 片(圖16)。大白鼠腎臟移植人類臍帶間質(zhì)干細(xì)胞六周后，組織染色圖(圖17)。(S表結(jié)痂 區(qū)、P表結(jié)痂近端區(qū)、D表結(jié)痂遠(yuǎn)程區(qū)，A比例尺為1mm，B、C、D比例尺為100 μ m)實(shí)例言人類臍帶丨、曰IJIi干細(xì)朐,，可大白薩想結(jié)利云力McΙ^ ^成lIfflff^l 亥3求、巨卩策細(xì)朐,IU及活仆,杰的鄉(xiāng)千維母細(xì)朐,的含量，并目.可以發(fā)現(xiàn)棺入的人類臍帶丨旬Jli干
細(xì)胞廣泛存在于腎小球內(nèi)ED-I表現(xiàn)于大白鼠的單核球及巨噬細(xì)胞，當(dāng)其大量表現(xiàn)表示發(fā)炎反應(yīng)正進(jìn)行。 α -smooth muscle actin(a-SMA)存在于血管內(nèi)的平滑肌細(xì)胞，同時(shí)也存在肌肉纖維母細(xì) 胞內(nèi)，所以當(dāng)其表現(xiàn)表示有纖維母細(xì)胞被活化。利用抗體Anti-Human Nuclei標(biāo)定存在于 大白鼠腎臟內(nèi)人類核所在的位置。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，控制組四周后(圖18B)及六周(圖18C)，腎臟中單核球及巨噬細(xì)胞含 量與正常組(圖18A)相比有增加的趨勢；而植入人類臍帶間質(zhì)干細(xì)胞的組別，無論是四周 (圖18D)或六周(圖18E)，其腎臟中單核球及巨噬細(xì)胞含量，有相對減少的情形。α -SMA表 現(xiàn)表示纖維母細(xì)胞被活化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，控制組四周后(圖19Β)及六周(圖19C)，腎臟中活 化態(tài)的纖維母細(xì)胞與正常組(圖19Α)相比有增加的趨勢；而植入干細(xì)胞，無論是四周(圖 19D)或六周(圖19Ε)，其腎臟中活化態(tài)的纖維母細(xì)胞，有相對減少的情形。大白鼠腎臟移植 人類臍帶間質(zhì)干細(xì)胞六周后，以Anti-human specific nuclei antigen antibody作組織 免疫染色，結(jié)果發(fā)現(xiàn)植入的人類臍帶間質(zhì)干細(xì)胞廣泛存在于腎絲球內(nèi)(圖20A)，并且可以 從放大的圖中發(fā)現(xiàn)人類臍帶間質(zhì)干細(xì)胞存在于腎絲球的微血管網(wǎng)管上(圖20D的箭頭處)。但在控制組老鼠的組織切片上，都沒有被Anti-human nuclei antigen antibody染到，腎 絲球內(nèi)沒有發(fā)現(xiàn)到任何細(xì)胞(圖20B、20E)。同時(shí)，我們在大白鼠腎臟移植人類臍帶間質(zhì)干 細(xì)胞六周后，作組織的染色，但不加入Anti-human nuclei antigen antibody，也跟控制組 一樣無法發(fā)現(xiàn)任何一顆細(xì)胞的存在(圖20C、F)。(比例尺為100 μ m)實(shí)例8 移棺人類臍帶間質(zhì)干細(xì)胞，可以有效降低大白鼠因結(jié)扎腎動脈所造成腎 臟功能的損失雄性大白鼠以腹腔麻醉后，將人類臍帶間質(zhì)干細(xì)胞5X IO5個(gè)細(xì)胞，以Hamilton針 植入大白鼠 左腎臟結(jié)締組織被膜下層(subcapsule)的位置。實(shí)驗(yàn)大白鼠于手術(shù)前、腎臟六分之五切除術(shù)后四周及六周與植入人類臍帶間質(zhì)干 細(xì)胞后四周及六周后，抽取尾靜脈的血液約Iml以及利用代謝籠收集老鼠24小時(shí)的尿液， 待送交北榮檢驗(yàn)部以Binesion檢測血清中的尿素氮(blood urea nitrogen，BUN)、血清中 肌酸酐(plasma creatinine,Per)、尿中肌酸酐(urine creatinine,Ucr)的濃度以及計(jì)算 肌酸酐的廓清率(creatinine clearance，Ccr)。尿液同時(shí)也以Bradford之蛋白質(zhì)定量方 法測訂尿中蛋白質(zhì)的含量。結(jié)果顯示，造成纖維化并植入人類臍帶間質(zhì)干細(xì)胞的大白鼠(RMR+HUMSCs)，其血 清中BUN的含量與未移植干細(xì)胞的控制組相比，有明顯降低的情形(圖21A)。同樣地，在植 入人類臍帶間質(zhì)干細(xì)胞的大白鼠(RMR+HUMSCs)，其血清中Pcr的含量與未移植干細(xì)胞的控 制組大白鼠相比，有明顯降低的情形(圖21B)。植入人類臍帶間質(zhì)干細(xì)胞的大白鼠，其血清 中Ccr的含量與控制組大白鼠相比，有明顯增加的情形(圖21C)。腎臟進(jìn)行六分之五切除 術(shù)造成腎纖維化的控制組大白鼠(RMR)，其尿蛋白的含量，與正常組大白鼠相比，有明顯增 加的情形。而植入人類臍帶間質(zhì)干細(xì)胞的大白鼠，其尿液中蛋白質(zhì)的含量與控制組大白鼠 相比，有明顯降低的情形，且與正常組大白鼠沒有差異(圖21D)。綜上，我們證實(shí)人類臍帶間質(zhì)干細(xì)胞具有治療慢性腎臟病之功效與應(yīng)用價(jià)值。
權(quán)利要求
一種用于治療慢性腎臟病之醫(yī)藥組合物，其包括臍帶間質(zhì)干細(xì)胞(umbilical mesenchymal stem cells)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1之醫(yī)藥組合物，其特征為可降低血清中尿素氮、降低血清中肌酸酐， 增加肌酸酐廓清率，減少尿液中蛋白質(zhì)含量及降低腎臟發(fā)炎。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2之醫(yī)藥組合物，其特征為可植入至個(gè)體之腎臟位置。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2之醫(yī)藥組合物，其特征為臍帶間質(zhì)干細(xì)胞系來自人類。
5.根據(jù)權(quán)利要求4之醫(yī)藥組合物，其特征為臍帶間質(zhì)干細(xì)胞系來自人類。
6.一種臍帶間質(zhì)干細(xì)胞用于制備供治療慢性腎臟病之醫(yī)藥之用途。
7.根據(jù)權(quán)利要求6之用途，其特征為該醫(yī)藥可降低血清中尿素氮、降低血清中肌酸酐， 增加肌酸酐廓清率，減少尿液中蛋白質(zhì)含量及降低腎臟發(fā)炎。
8.根據(jù)權(quán)利要求6或7之用途，其特征為該醫(yī)藥可植入至個(gè)體之腎臟位置。
9.根據(jù)權(quán)利要求6或7之用途，其特征為臍帶間質(zhì)干細(xì)胞系來自人類。
10.根據(jù)權(quán)利要求8之用途，其特征為臍帶間質(zhì)干細(xì)胞系來自人類。
全文摘要
本發(fā)明提供一種用于治療慢性腎臟疾病之醫(yī)藥組合物，其包括臍帶間質(zhì)干細(xì)胞。
文檔編號A61K35/44GK101837014SQ200910129518
公開日2010年9月22日 申請日期2009年3月20日 優(yōu)先權(quán)日2009年3月20日
發(fā)明者傅毓秀 申請人:傅毓秀;鄭宏志