專利名稱：：用于診斷IgA和IgM介導的腎臟疾病的方法和組合物的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及關于腎臟疾病的診斷方法以及在此類疾病"^斷中有用的組合物和試劑盒的領域。
背景技術：
：IgA腎病(IgAN、貝格爾氏(Berger's)病)的特征在于IgAl沉積在腎臟皮質的腎小J求系膜中，且是全世界最普遍的腎小球腎炎。IgA沉積通常在人生的第二個或第三個10年時自發(fā)地出現(xiàn)，且被認為是免疫復合物?？乖粗?；IgA自身可能是抗原。該病的流行率在美國和歐洲很高，但在亞洲最高。在日本的發(fā)病率可能是所有腎活檢的40-50%。多年持續(xù)或間歇性檢測到的顯微鏡性血尿和蛋白尿是這種疾病的臨床特征，且超過50%的患者還發(fā)展為高血壓。這不是曾經認為的良性病，約15-40%的患者最終發(fā)展成腎衰竭。事實上，IgA腎病是原發(fā)性腎小球疾病最終達到腎臟移植的患者中腎終末期疾病的主因。過敏性紫癜(Henoch-Sch6nleinpurpura,HSP)是另一種IgAl介導的感染后血管炎，在年齡2-11歲的兒童中最常見，而腎損害非常類似于IgAN。流行率在14歲以下是22/100,000,且在年齡4-6歲的群體中是70/100,000。HSP是如此類似于IgAN,以致于認為IgAN是病變局限于腎臟形式的HSP的觀念近來已獲得接受(Smith和Feehally,SpringerSemin.Immunopathol.24:477-493,2003)。IgM腎病(IgMN)引起腎病綜合征且特征在于IgM的腎小球系膜沉積。推測這些沉積來源于循環(huán)IgM聚集物或免疫復合物，類似于IgAN。Ig顧通常見于兒童中，且Ig顧的臨床特征非常類似于微小病變疾病(MCD),其中腎病綜合征是主要臨床表型，但Ig顧導致明顯高于MCD的高血壓發(fā)病率。在本發(fā)明之前，這些疾病的診斷通過取出腎組織樣品用于病理學檢查的腎活檢來進行。腎臟病理學家進行腎組織的免疫熒光染色。這需要連續(xù)應用抗人IgA抗體，隨后用熒光染料綴合的第二抗體顯色，以定位基于IgA的抗體-抗原復合物用于診斷IgAN和HSP。在Ig畫的診斷中，可以應用相同操作，但使用的抗體特異性是結合人的IgM。如果測試檢測到比共存的IgG更高的高水平的腎小球IgA,以及不同程度存在的補體組分，則可進行IgA腎病的診斷。對于IgMN也是如此，其中腎小球中的IgM沉積定義該疾病?；顧z時，患者通常取俯臥位躺著時進行，其腎臟已經過超聲或CAT掃描定位。在局部麻醉下，在皮膚上制造小切口。使用合適的憋氣規(guī)程，使用活檢針獲取大小1-1.5cmx2iran的樣品，隨后再取出活;險針?；颊吡粼卺t(yī)院里，仰臥12-24小時，伴隨監(jiān)測以檢測并發(fā)癥，所述并發(fā)癥可以包括出血、疼痛、動靜脈痿、泌尿道感染、以及罕見情況下的死亡。出血是腎活檢最常見的并發(fā)癥。盡管在活檢前，患者被測試凝血能力，但大多數(shù)患者經歷短時間的顯微鏡性血尿。罕見地，出血嚴重得足以需要輸血或手術。估計在經皮腎活檢中，有O.1-0.4%的病人需要經過手術才能控制出血，且在所有采用針吸活檢的病人中，大約有0.06%(6/10,000)需要切除腎以控制出血。疼痛是常見問題且是短暫的。持續(xù)超過]2小時的疼痛在大約4%的活檢中發(fā)生。在血塊阻塞輸尿管之一或在大包膜下血腫的情況下，可能發(fā)生嚴重或延長的疼痛。2根血管之間的動靜脈瘺可能起因于由活檢針引起的鄰近動脈和靜脈壁的損害。此類瘺是罕見的且通常在1到2年內自發(fā)地關閉。死亡在大約0.1%的腎活檢情況下發(fā)生。腎活檢并非對于所有患者都是合適的。禁忌癥包括無法補救的出血病癥、小腎、無法在醫(yī)學上控制的嚴重高血壓、多重雙側腎嚢腫或腎腫瘤、腎積水(尿流被阻塞導致腎損害的病癥)、腎臟或周圍組織的活動性感染、患者不能配合、和先天性單腎。經皮活檢的可替代方法是開放性手術活檢和經頸靜脈腎活檢。正因為以上各種原因，臨床上需求更安全、更可靠和侵襲性更少的方法用于診斷IgA腎病、HSP和IgM腎病。
發(fā)明內容本發(fā)明的特征是用于診斷哺乳動物(例如，人)中的IgA或IgM腎臟疾病的方法，所述方法包括給哺乳動物施用(例如，靜脈內)特異性結合IgA或IgM的化合物，和檢測哺乳動物腎中的該化合物，其中，所述哺乳動物腎中的該化合物的量相對于沒有腎臟疾病的哺乳動物腎臟中的該量的增加有助于診斷哺乳動物中的IgA或IgM腎臟疾病。化合物可以包括肽(例如，人FcaRl(SEQIDNO:2)、人Fca/m受體(SEQIDNO:6)、多聚Ig受體(SEQIDNO:7)、Sir22(SEQIDNO:3)、鏈球菌IgA結合肽(Sap;SEQIDNO:4)、修飾的Z-結構域蛋白質(SEQIDNO:12)和YDWIPSSAW(SEQIDNO:9)、或這些肽的IgA或IgM結合片段)。肽可以包括N末端帽、C末端帽、D氨基酸、氨基酸替代物、擬肽序列或間隔物的修飾。化合物可以包括抗體、或抗體的IgA或IgM結合片段(例如，抗人IgA或抗人IgM)?；衔锟梢院辛孔狱c?；衔镆部梢耘c放射性標記(例如，99raTc、mIn、"Ga、67Ga、68Ga、86Y、90Y、加Tl、55Co、6°Cu、"Cu、62Cu、64Cu、67Cu、s2Rb、185/187Re和186/mRe)連接。連接可以通過雙功能螯合劑，這可以包括^S、N2S2、PnAO、HYNIC、[M(CO)3(H20)3]+、PADA、DTPA、DOTA、組氨酸、三肽(例如，Lys-Gly-Cys、Cys-Gly-Cys和Gly-Gly-Cys)和四肽(例如，Gly-Ala-Gly-Gly或Cys-Gly-Cys-Gly)?；衔锟梢耘c順磁物質(例如，釓)連接。檢測可以通過成像技術(SPECT、PET、平面掃描和MRI)來進行。在一個進一步的實施方案中，化合物包括半乳糖和結合對的第一個成員(例如，鏈霉親和素)?；衔锏氖┯每梢赃M一步包括半乳糖-菲柯爾(Ficoll)的施用。檢測隨后可以通過下列來進行給哺乳動物施用與結合對的第二個成員(例如，生物素)以及半乳糖綴合的放射性標記(例如，，Tc、mIn、66Ga、67Ga、68Ga、86Y、9°Y、2Q1T1、55Co、6。Cu、"Cu、62Cu、MCu、"Cu、S2Rb、1S5/187Re或m/188Re標記)化合物(例如，人血清白蛋白)，隨后檢測哺乳動物腎中的該放射性標記化合物。本發(fā)明的第二個方面是包括IgA或IgM結合化合物、雙功能螯合劑和在藥學可接受載體中的可檢測標記的組合物，其中IgA或IgM結合化合物通過雙功能螯合劑與可檢測標記連接。化合物可以包括肽(例如，人FcccRl(SF」QIDNO:2)、人Fca/p受體(SEQIDNO:6)、多聚Ig受體(SEQIDNO:7)、Sir22(SEQIDNO:3)、鏈球菌IgA結合肽(Sap;SEQIDNO:4)、修飾的Z-結構域蛋白質(SEQIDNO:12)和YDWIPSSAW(SEQIDNO:9)、或這些肽之一的IgA或IgM結合片段)。肽可以包括N末端帽、C末端帽、D氨基酸、氨基酸替代物、擬肽序列或間隔物的修飾。該化合物還可以包括抗體(例如，抗人IgA或抗人IgM)、或抗體的IgA或IgM結合片段。雙功能螯合劑可以是N3S、N2S2、PnA0、HYNIC、[M(CO)3(120)3]+、PADA、DTPA、D0TA、組氨酸、三肽(例如，Lys-G.ly-Cys、Cys-Gly-Cys或Gly-Gly-Cys)或四肽(例如，Gly-Ala-Gly-Gly或Cys-Gly-Cys-Gly)。在第三個方面，本發(fā)明提供了包括IgA或IgM結合化合物、雙功能螯合劑、在藥學可接受載體中的可檢測標記和用于檢測哺乳動物中的IgA或IgM腎臟疾病的使用說明的試劑盒。該化合物可以包括半乳糖和結合對的第一個成員(例如，鏈霉親和素)；并且該可4企測標記可以包括放射性標記肽(例如，人血清白蛋白)，該放射性標記(例如，，Tc、出In、"Ga、67Ga、"Ga、，、，、2。iT1、"c。、，u、"Cu、"Cu、"Cu、67Cu、、、娜Re或i畫Re標記)肽包括半乳糖和結合對的第二個成員(例如，生物素)。"IgA或IgM腎臟疾病"意指由IgA或IgM在腎中沉積介導的腎臟病癥。這些病癥包括例如IgA腎病、過敏性紫癥和IgM腎病。"特異性結合"意指識別且結合例如IgA或IgM等化合物，但基本上不識別且不結合樣品例如生物樣品中天然地包括的其他化合物。在一個例子中，與IgAl(SEQIDNO:1)特異性結合的抗體識別IgAl中存在但IgA2中不存在的13個氨基酸的區(qū)域。希望地，化合物與目的化合物例如IgA的結合比它與樣品中其他組分的結合強至少5倍、10倍、25倍、5Q倍、100倍或1000倍。"N末端帽"意指對于肽或蛋白質氨基末端的任何化學修飾。在本發(fā)明中，給肽或蛋白質添加N末端帽希望與未加帽的蛋白質比較減少肽或蛋白質的體內降解率。N末端帽的例子包括乙酰化和肽環(huán)化。"C末端帽"意指對于肽或蛋白質羧基末端的任何化學修飾。在本發(fā)明中，給肽或蛋白質添加C末端帽希望與未加帽的蛋白質比較減少肽或蛋白質的體內降解率。C末端帽的例子包括使C末端酰胺化或還原，和肽環(huán)化。"擬肽"意指模擬肽特征包括識別生物分子的能力的分子。在本發(fā)明中，將擬肽插入肽或蛋白質內以防止經由肽鏈內切酶和肽鏈端解酶的體內降解。"間隔物"意指在內部或N或C末端處插入的代替肽序列中的氨基酸的小分子。間隔物的例子包括氨基己酸。與擬肽類似，間隔物在本發(fā)明中用于防止肽降解。"氨基酸替代物，，意指可以置于肽或蛋白質內代替氨基酸的任何化學化合物。氨基酸替代物的例子包括間隔物、擬肽、亞氨基酸、以及具有曱基化酰胺和/或曱基化側鏈氮的氨基酸。"片段"意指包含較大肽或多核苷酸的任何部分的至少4、5、6、8、10、15、20或25個氨基酸或核香酸的鏈。"肽"意指氨基酸或其類似物的任何鏈，任何長度或翻譯后修飾(例如，糖基化或磷酸化)均可。"量子點"意指熒光半導體納米晶體。制備量子點的材料的例子包括CdS、CdSe、CdTe、CdHgTe/ZnS、InP、InAs和PbSe。本發(fā)明的其他特征和優(yōu)點通過下列詳細描述、附圖和權利要求將顯而易見。圖1是二聚IgAl(SEQIDNO:1)、其鉸鏈區(qū)(SEQIDNO:14)和0-聚糖位點(Thr225、Thr228、Ser230、Ser232、Thr236)的圖示。圖2是IgA的Fc受體(FccxRl/CD89;SEQIDNO:2)的結構和特征圖示。描述了細胞外結構域1和3(EC-1和EC-2)以及y鏈關聯(lián)對與其信號轉導(ITAM)基序。此外概括了CD89的特征、其細胞分布及其已知功能。(來自Westerhuis,戶a〃70^"e/7eZ/c力i7eci^o尸T^^—yVe////"/^/.//2001PrintPartnersIpskamp,Enschede)圖3是鏈球菌Sir22(M22;SEQIDNO:3)蛋白質和來源于這種蛋白質的Sap肽(SEQIDNO:4)序列的圖示。Sap肽包括29個殘基的IgA結合區(qū)域(水平箭頭標記"IgA")和這個區(qū)域兩側的各10個殘基。另外，Sap包括促進其二聚作用但Sir22中不存在的C末端半胱氨酸殘基。指出了Sir22中已知包括對于C4BP(人補體調節(jié)劑)、IgA和IgG的結合位點的區(qū)域。C4BP結合區(qū)域是高變結構域。(名稱"C4BP"和"IgG"下的水平箭頭指出了用于結合C4BP和IgG的相應區(qū)域。對于這3個結合區(qū)域中的每一個均存在某些序列重疊)。還指出了保守的C重復區(qū)域的位置。Sir22的C末端與細菌細胞壁中的肽聚糖共價結合。圖4是完整Ig連同F(xiàn)ab和Fv片段以及單個V(有色的橢圓形；點表示抗原結合位點)和C結構域(未著色的)的圖示。工程化的重組抗體顯示為scFv單體、二聚體(雙價抗體)、三聚體(三價抗體)和四聚體(四價抗體)，而連接物由黑線表示。微型抗體顯示為由2個C結構域連接的2個scFv模塊。還顯示了Fab二聚體(由粘性多肽或蛋白質結構域綴合)和Fab三聚體(化學綴合)。顏色表示雙特異性scFv二聚體(雙價抗體)以及Fab二聚體和三聚體的不同特異性。圖5是關于"，c的雙功能螯合劑(BFCA)的結構圖示。顯示了三酰胺硫醇(Triatnidethiols)(N3S)、二酰胺二硫醇(diaoiidedithiols)(N2S2)、丙胺坊(PnA0)和肼基煙酸(HYNIC)。圖6是甲氨基吡啶-N，N-二乙酸(PADA)及其與Tc的復合物的結構圖示。顯示了PADA及其與水合離子[Tc(CO)3(H20)3]+反應后的復合物。圖7是關于mIn的BFCA的結構圖示。顯示了二乙烯三胺五乙酸(DTPA)和四氮雜環(huán)十二烷四乙酸(DOTA)。圖8是氨基酸和核酸序列表，包括IgAlC區(qū)(SEQIDNO:1)、CD89(SEQIDNO:2)、Sir22(SEQIDNO:3)、Sap(SEQIDNO:4)、可溶性CD89(SEQIDNO:5)、人Fca/mR(SEQIDNO:6)、plgR(SEQIDNO:7)、CD71(SEQIDNO:8)、IgM結合肽(SEQIDNO:9)、葡萄球菌A蛋白(SEQIDNO:10)、Z-結構域(SEQIDNO:1.1)、修飾的Z-結構域(SEQIDNO:12)、B-結構域(SEQIDNO:13)、IgAl鉸鏈區(qū)(SEQIDNO:14)、IgMp鏈氨基酸序列(SEQIDNO:15)、IgM)i鏈核酸序列(SEQIDNO:16)和IgM鉸鏈序列(SEQIDNO:17)。具體實施例方式本發(fā)明使用放射學掃描鑒定具有基于腎小球的腎臟病的患者，所述腎臟病例如是IgA腎病(IgAN)、過敏性紫癜(HSP)和IgM腎病(Ig麗)。IgAN的特征在于和時間(年)有關的IgAl免疫球蛋白(SEQIDNO:1)沉積在腎皮質的腎小球內。HSP與Ig緒緊密相關，具有相同模式的IgAl沉積和腎損傷。Ig顧的特征在于IgM沉積在腎小球的腎小球系膜中。為了鑒定具有IgAl或IgM沉積的腎臟病的那些患者，需要進行腎的閉合性針吸活檢，獲取用于病理學檢查的組織核塊、這是具有中等危險的、并且會帶給病人痛苦的操作。使用本發(fā)明，IgAl或IgM沉積可以使用放射學成像法進行診斷，其中腎皮質中的IgAl或IgM沉積使用注入的、標記的IgA結合或IgM結合分子進行檢測。當腎活檢以便進行腎臟疾病診斷時，用于診斷IgAN、HSP和Ig匪的關鍵標準是在作為IgA或IgM沉積的唯一位點的腎小球中存在顯著的IgAl或IgM沉積。因為正常人和具有非IgAN、非IgMN腎臟疾病的那些人在其腎小球中沒有顯著量的IgAl或IgM，所以本發(fā)明提出了用于腎皮質中的IgA或IgM的宏觀、非侵入性檢測方法。本發(fā)明的另一個優(yōu)點是掃描提供了關于2個腎中的完整腎皮質的信息，因此減少了針吸活檢方法中固有的取樣誤差(Sund等人,Nephrol.Dial.Transplant.14:2445-2454,1999)。本發(fā)明的特征在于靶向IgAl的幾種IgA特異性結合肽、可以標記肽的可用放射性同位素、和用于這種標記的連接物。在一個實施方案中，放射性核素標記的IgA結合肽或蛋白質用作診斷放射性藥物以檢測腎中的IgA沉積物。注入的放射標記的IgA結合肽與遍及全身的IgA結合。因為健康腎的腎小球中沉積的IgA很少，所以具有IgAN的患者腎小球中的IgA沉著物導致從腎小球所在的腎皮質發(fā)出高濃度的輻射。這種輻射可以通過各種核成像技術進行檢測，因此可以用于診斷IgAN。對于腎臟疾病的診斷，人來源的抗體、或人源化的抗體、或具有對人IgAl的特異性的動物單克隆抗體非常適合作為IgA結合化合物，且還可以用于檢測腎小球中的IgAl沉著物。另外類型的腎病包括IgM腎病可以類似地進行診斷。例如用抗人IgM抗體或其片段替換IgA結合蛋白質或抗體，IgM可以在IgM腎病中被檢測。IgA結構人免疫球蛋白A(IgA)合成超過所有其他免疫球蛋白種類的總和(Rifai等人，J.Exp.Med.191:2171-2181，2000)。與34mgIgG和7.9mgIgM比較，估計每天產生66mgIgA/kg體重。存在2種IgA同種型-IgAl(SEQIDNO:1)和lgA2。在粘膜表面(例如腸、呼吸道、生殖道)上存在由局部B細胞合成的IgAl和IgA2。然而，在血液中由骨髓、淋巴結和脾中的B細胞產生的IgAl占優(yōu)勢(Donadio和Grande,N.Engl.J.Med.347:738-748,2002)。IgAl(SEQIDNO:1)和IgA2亞類之間的主要差異是IgA2鉸鏈區(qū)中的13個氨基酸缺失。IgAl中的這個區(qū)段包含幾個0-糖基化的絲氨酸和蘇氨酸殘基。IgA2中這個區(qū)域的缺失解釋了IgA2上0-聯(lián)寡糖的缺乏(圖1)。IgM結構IgM(SEQIDNO:15)可以在B淋巴細胞表面上作為單體找到，但在循環(huán)中在由漿細胞分泌后它主要作為五聚體存在。IgM五聚體具有-SSO-IJOOkDa的分子量,而每個單體為180kDa。IgM代表~1.0%的總血清Ig,且是初次體液應答時合成的第一種抗體同種型。成人中的正常血漿IgM水平是約lmg/ral.,而半衰期為約5天。這與12mg/ml的IgG水平、25天的半衰期和1.8mg/ml的IgA、6天的半衰期形成對比。碳水化合物構成了IgM蛋白質的約12重量％。IgM的ju重鏈由4個C1結構域組成(只有y和e(IgE)重鏈各自具有4個恒定重區(qū)結構域-CHl、CH2、CH3和CH4，而y(IgG)、a(IgA)和5(IgD)各自具有3個恒定重區(qū)結構域。)由于在五聚體上存在IO個相同的抗原結合位點，所以IgM是極佳的凝集抗體。另外，IgM在補體激活方面也是有效的。IgM單體通過鏈間二硫鍵以及通過J鏈連接在一起形成五聚體，所述J鏈是附加至IgM的2個單體且使五聚體處于閉合的、外觀環(huán)狀的構象的15kDa肽。(J鏈還用于將IgA單體連接在一起，形成二聚體。)診斷組合物用于在本文使用的診斷放射性藥物的組分包括(1)特異性結合人IgA或IgM的化合物、肽、或蛋白質，和(2)在藥學可接受載體中、能夠通過放射學成像技術(例如，SPBCT)檢測的、與化合物、肽、或蛋白質螯合的化合物(例如，放射性同位素)。優(yōu)選試劑包括雙功能螯合劑(BFCA)，它用于螯合(1)和(2)。盡管任何IgA結合或IgM結合化合物、蛋白質、或肽都可以作為生物分子而用于診斷，但優(yōu)選候選物符合下述標準中的幾個或全部對人IgA或IgM的高特異性和親和力；對于IgA介導的腎病，要有區(qū)分IgAl與IgA2的能力；小分子，因為這樣免疫原性更?。蝗嗽吹牡鞍踪|；容易表達或化學合成；易于產生和修飾；和適當糖基化，包含用于無唾液酸糖蛋白受體(ASGPR)清除的半乳糖，由此使腎小管滯留減到最小。IgA和IgM結合化合物/肽IgA和IgM結合蛋白質或肽可以包括細胞上的天然人IgA結合受體；識別IgA和IgM的受體；細菌IgA結合蛋白質及其衍生的肽；抗人IgA或IgM抗體及其較小的衍生物(例如，F(xiàn)ab);和使用例如噬菌體展示法發(fā)現(xiàn)的結合IgA和IgM的特異性肽。IgA特異性受體的天然功能包括募集炎癥細胞和調節(jié)物至炎癥位點(CD89;SEQIDN0:2),以及使IgA在身體的分布，例如讓IgA進入分泌液的受體(plgR;SEQIDNO:7)。人FcccRl(CD89;SEQIDNO:2;參見圖2)是包含2個細胞外Ig樣結構域(206個氨基酸)、跨膜區(qū)(19個氨基酸)和胞質尾區(qū)(31個氨基酸)的膜糖蛋白。在跨膜區(qū)，帶正電荷的精氨酸殘基是CD89與FcRY鏈結合所必須的。如同缺乏細胞內信號轉導基序的其他Fc受體，F(xiàn)ccxR的信號轉導到細胞內經由其與FcRy鏈的關聯(lián)開始。FcRy鏈是大小為10kDa的同型二聚體信號轉導單位。與CD89結合導致Y鏈上的細胞內、基于免疫受體酪氨酸的活化基序(ITAM)的磷酸化，激活信號轉導途徑下游至細胞內。FcaRl結合單體和二聚形式的IgAl和IgA2。白細胞中的轉染研究顯示FcaRl不結合IgG。FcocRl只由髓樣細胞包括嗜中性粒細胞、單核細胞、巨噬細胞和嗜酸性細胞表達。有學者提出FcaRl在循環(huán)中有去除IgA抗原復合物的作用(Mattu等人，J.Bio.Chem.273:2260-2272,1998;Leung等人，J.Am.Soc.Nephrol.11:241-249,2000;Westerhu.is,戶"力塔認〃c"拜"o/"T^H/7力，"力/2001,第l章，第IV節(jié)IgAreceptorsandIgAN,2001,PrintParters,Ipskamp，Enschede)。重組CD89(SEQIDNO:5)的206個氨基酸的可溶部分已在幾個研究實驗室中成功表達，并且此類可溶受體具有用作IgA檢測肽用于診斷IgAN的潛力。盡管存在可溶性CD89可能加重IgAN的一些有爭議的報道(PierreLaunay等人，J.Exp.Med.191:1999-2009)，但由于其高特異性和親和力，這種片段對于與IgA的結合是優(yōu)選的。這種蛋白質是糖基化的，這可能加速其經由無唾液酸糖蛋白受體(ASGPR)的清除。這使循環(huán)中的未結合配體的本底噪聲減到最小，且可能使經由腎降解系統(tǒng)清除放射性核素的量減到最小，這也就減少了本底噪聲。更優(yōu)選地，使用保留IgA結合活性的這種肽的較小片段。^/《#好資謬人Fca/jLt受體(Fcoc/juR;SEQIDNO:6)以中到高親和力結合IgA和IgM。Fca/jaR在大多數(shù)B淋巴細胞和巨噬細胞上組成型表達(Sakamoto等人，Eur.J.Immunol.31:1310-1316,2001;Shibuya等人,Nat.Immunol.1:441-446,2000)。多聚Ig受體(plgR;SEQIDNO:7)是位于分泌性上皮細胞基底外側表面上的完整膜組分。它介導多聚Ig，主要是二聚IgA和五聚IgM的跨上皮運輸。plgR位于大多數(shù)的人體分泌性上皮細胞上，包括腸、支氣管、唾液腺、腎小管和子宮，并且它與多聚免疫球蛋白上的J鏈結合。IgA的結合導致蛋白質通過上皮細胞從粘膜固有層轉移到腸腔(或其他IgA分泌位點)以達到沐浴粘膜的無細胞流體。分泌型IgA(slgA)負責中和微生物和毒素且阻止不需要的抗原通過粘膜屏障(Mattu等人，J.Bio.Chem.273:2260-2272,1.998;Leung等人，J.Am.Soc.Nephrol.11:241-249，2000)。近來，其他IgA受體已被提議，包括在腎小球系膜細胞上表達的轉鐵蛋白受體(CD71;SEQIDNO:8)(Haddad等人，LAra.Soc.Nephrol.1.4:327-337,2003)。盡管這種蛋白質在IgAl沉積疾病中的作用未知，但它也可以在本發(fā)明中使用。/砂,潛^^屋結合人IgA-Fc的細菌表面蛋白質已在A組鏈球菌(化膿性鏈球菌(57/-e/^ococ"Ay;7y<^e/7eiO)和B組鏈J求菌(無乳鏈球菌(57r印Zococ""柳/ac〃se);Sandin等人,J.Immunol.169:1357-1364,2002;Pleass等人，J.Biol.Chem.276:8197-8204,2001;Johnsson等人，J,Biol.Chem.274:14521—14524,1999;Stenbere等人，J.Biol.Chem.269:13458-13464,1994)中得到描述。化膿性鏈球菌的IgA結合蛋白質是M蛋白家族成員，所述M蛋白家族是重要的毒力因子的二聚蛋白質的異質家族。所有M蛋白結合一種或多種人血漿蛋白，且所有化膿性鏈球菌林中約50%表達結合IgA-Fc的M蛋白。M蛋白具有促進IgA結合的結構特征，例如，在幾種情況下，七個重復;^莫式形成巻曲螺旋二聚體，所述巻曲螺旋二聚體與IgA上的特異性位點結合。已由Sandin等人(J.Imraunol.2002,169:1357-1364)詳細研究的蛋白質Sir22(也稱為蛋白質M22，因為它在M蛋白家族中；SEQIDN0:3),在其結構中含有一個由29個氨基酸組成的片斷,足以用于IgA的結合。已設計了50個殘基的合成肽(SEQIDNO:4),它包括29個殘基的IgA結合區(qū)域且與人IgA特異性結合。這種命名為鏈球菌IgA結合肽或Sap(SEQIDNO:4)的50聚體，具有分離IgA結合結構域的特性，并且它在IgA上的結合位點已知在Fc區(qū)中，與結合人CD89的位點相同。Sap是Sir22的氨基酸35-83的同系物，且被設計為包括Sir22中不存在的C末端半胱氨酸殘基。引入半胱氨酸以引起Sap肽二聚化，這個過程可以通過與CuCl2—起培養(yǎng)得到加強。由Lindahl等人進行的IgA結合測試指出Sap二聚化對于IgA結合是必需的。固定在固體載體上的Sap肽已顯示能夠完全吸收來自人血清的所有IgA同種型、單體和聚合體，且來自Sap色譜柱的洗脫物只包含IgA。因此，二聚化Sap代表用于IgAN診斷的優(yōu)選IgA結合肽，具有IgA結合特異性和顯然的高親和力。另外，Sap可以通過固相肽合成(SPPS)方法進行合成，且使用本領域標準方法在殘基仍在樹脂上的固相中時，可以向N或C末端添加雙功能螯合劑(BFCA;關于細節(jié)參見下文)。Sap類似物很小(對于單體為約5.5kDa且在二聚化時為11kDa),因此使抗原性減到最小。在金黃色葡萄球菌(i7^^//ococc〃s^/i^"i)A蛋白(SPA;SEQI[)NO:10)中，可以發(fā)現(xiàn)5個Ig結合結構域。SPA與免疫球蛋白的Fc區(qū)強烈結合。Z結構域(SEQIDNO:11)是來源于SPA中這5個同源結構域之一(B結構域；SEQIDNO:13)的58個氨基酸殘基的重組蛋白質。Z結構域最初通過改變B結構域的少數(shù)氨基酸而形成，以增強后者作為基因融合配偶體的穩(wěn)定性，用于通過使用包含IgG的樹脂的重組蛋白質的親和提純。使用噬菌體展示技術，瑞典卡羅林斯卡研究所(KarolinskaInstitute)的研究者將IgG結合Z結構域修改成命名為親和體w或修飾Z結構域(SEQIDNO:12)的IgA結合肽。(Graille等人，Proc.Natl.Acad.Sci..U.S.A.97:5399-5404,2000;Wahlberg等人，Pro"Natl.Acad.Sci.U.S.A.100:3185-3190,2003;R6細ark等人，Eur.J.Biochem.269:2647-2655,2002;Braisted和Wells，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.93:5688—5692，1996)。這種修飾后的肽具有結合人IgAl和IgA2的高特異性和親和力。由于這些修飾，最初的IgG結合親和力完全喪失。IgA上的結合位點被認為在Fc區(qū)中?？紤]到其結合人的IgA的能力，這種肽對于IgAN診斷也是優(yōu)選的。戎乂4'/^/戎#4'^戎#潛合^拔多克隆或單克隆抗人IgA或IgM抗體也可用于診斷IgA或IgM腎臟疾病。這些抗體可以來源于許多來源包括免疫動物，或者它們可以被制備為動物/人嵌合蛋白質或人源化嵌合蛋白質，或人來源蛋白質；所有這些都是本領域已知的用于進行蛋白質輸注療法和/或制備診斷劑的策略。這些抗體的完整選試劑是人來源的單克隆抗體，且在IgAN或HSP的情況下，優(yōu)選的抗體能夠區(qū)分IgAl與IgA2。而且，優(yōu)選保留IgA或IgM識別特異性的抗體蛋白質亞單位，所述亞單位優(yōu)先于全長抗體(Reff等人，Cane.Control9:152-166,2002;Gorman和Clark,Serain.Immunol.2:457-66,1990;力",/6c^/(^wyt/e"/"'/^2000byBiotechAnalytics)。在一個優(yōu)選實施方案中，使用抗人IgAl或抗人IgM的小抗體片段(例如，人來源片段、人源化嵌合片段、嵌合片段、和動物來源片段)。保留抗原結合活性的抗體片段可以是單價Fab、Fv或scFv;或二價F(ab)'2或雙價抗體。(參見下圖4中的示意圖(Hudson和Souriau，Nat.Med.9:129-134,2003)。優(yōu)選地，F(xiàn)c區(qū)從分子中刪除。在一個具體例子中，抗人IgAl抗體指向鉸鏈區(qū)中的表位，因為如上所述，這個區(qū)域是IgAl獨有的。此類人來源的抗人IgAl鉸鏈區(qū)Fab可以通過逸菌體展示技術，經由商業(yè)供應者例如CambridgeAntibodyTechnology(Cambridge,UK)開發(fā)的大噬菌體抗體文庫容易地制備。這種技術能夠快速做出抗體，并能方便進入基因進行修飾，所以具有遠超過常規(guī)產生單克隆抗體方法的許多優(yōu)點。在另一例子中，使用本領域標準方法(例如，本文描述的那些)產生的抗IgM單克隆抗體用于診斷Ig麗。這些抗體可以使用獨特的y鏈鉸鏈序列作為輩巴抗原(PLPVIAELPPKVSVFVPPRDGFFGNP;SEQIDNO:17)而產生，所述鉸鏈序列橋接恒定區(qū)的CH1和CH2結構域。另外，IgM特異性抗體可以針對IgM蛋白質的分離的完整Fc區(qū)產生，此類Fc通過高溫下胰蛋白酶切割產生(Plaut和Toraasi，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，65:318-322，1970)。/^/潛合化#參借助于噬菌體展示技術，已鑒定了以高親和力與鼠類IgM結合的肽YDWIPSSAW(SEQIDNO:9)。這種肽還抑制人類風濕因子(RF,主要是抗IgG自身免疫抗體的IgM類)誘導的IgG包被乳膠珠凝集，且顯示缺乏與其他免疫球蛋白結合的能力(PatiM,Glee等人JI,unol,1999,163:826-833)。者^4'7^#潛合^合參^#定本發(fā)明的方法和組合物還可以采用新型IgA結合或IgM結合化合物，所述化合物可以經過使用例如噬菌體展示技術得以鑒定。噬菌體展示是組合性的篩選技術，允許通過使用來自基因庫的多重基因開發(fā)和表征與所需靶相互作用的蛋白質(GeorgeP.Smith,Science228:1335,1985)。這些基因代表通過DNA重組技術產生的所需多樣性；因此，每個噬菌體展示獨特的隨機肽。這些基因通過替代先前存在的基因插入噬菌體內，從而制備噬菌體文庫。預先制備的文庫用伴隨試劑盒是容易獲得的(例如，NovagenT7Select)。Novagen的T7系統(tǒng)是cDNA文庫優(yōu)選的裂解性噬菌體展示(J.I誦.Meth.231:39;NatureBiotech.19:1193),但也可以使用其他噬菌體，例如基于與表面外殼蛋白pill和pVIII的N末端融合的非裂解性M13細菌絲狀噬菌體。修飾的噬菌體隨后將表達由其表面外殼上的插入DNA編碼的蛋白質。在M13的情況下，pill展示具有較低的效價(1-5/病毒體)且因此可以用于發(fā)現(xiàn)高親和力化合物，而pvni具有高效價(~200/病毒體)因此可以用于發(fā)現(xiàn)親和力非常低的結合化合物。噬菌體展示服務是通過公司包括DyaxCorp.ofCambridge,Mass.商購可得的，所述/^司提供4種噬菌體文庫人抗體、蛋白質、結構肽、和線性肽。來自整個噬菌體文庫的噬菌體與靶蛋白(例如，IgA的a鏈或IgM的/a鏈)一起培養(yǎng)。隨后可以挑選出對IgA或IgM具有高親和力和特異性的肽的噬菌體。繼而鑒定和檢測出編碼這些肽的多核苷酸序，從而產出更多這些肽用于進一步分析。隨后選擇最高親和力和特異性連同其他性質例如免疫原性的蛋白質，作為在本發(fā)明的方法或組合物中使用的最終候選物。噬菌體展示基因庫或文庫可以包括數(shù)百萬的相關基合化合物。顛奴一般而言，在本發(fā)明中使用的多肽可以通過任何標準技術產生；例如，通過用在合適的表達媒介物中的全部或部分多肽編碼多核苷酸分子或其片段轉化合適的宿主細胞來產生。分子生物學領域中的技術人員應當理解廣泛多樣的表達系統(tǒng)中的任何一種都可以用于提供重組多肽。使用的確切宿主細胞對本發(fā)明不是關^t的。在本發(fā)明中使用的多肽可以在原核宿主(例如大腸桿菌)或真核宿主(例如釀酒酵母(^ccA2r^z/cwcere「/s/se),昆蟲細胞例如SH1細胞，或哺乳動物細胞例如NIH3T3、海拉、或優(yōu)選C0S細胞)中產生。此類細胞來源廣泛(例如AmericanTypeCultureCollection(美國典型培養(yǎng)物保藏中心),Rockland,Md.;還參見例如CurrentProtocolsinMolecularBiology,Eds.Ausubel等人，JohnWileyandSons)。轉化或轉染方法以及表達媒介物的選擇將取決于所選宿主系統(tǒng)。轉化和轉染方法在例如Ausubel等人(同上)中描述；表達媒介物可以選自例如在CloningVectors:ALaboratoryManual(Po羅ls,P.H.等人,1985，Su卯.1987)中提供的那些。用于多肽生產的一種具體細菌表達系統(tǒng)是大腸桿菌pET表達系統(tǒng)(Novagen，Inc.,Madison,Wis.)。根據(jù)這種表達系統(tǒng)，將編碼多肽的DM以設計為允許表達的方向插入pET載體內。因為編碼此類多肽的基因在T7調節(jié)信號的控制下，所以多肽的表達通過誘導宿主細胞中的T7RNA聚合酶表達來完成。這一般通過使用響應IPTG誘導表達T7RNA聚合酶的宿主菌林來完成。一旦產生，重組多肽隨后根據(jù)本領域已知的標準方法，例如本文描述的那些來分離。用于多肽生產的另一種細菌表達系統(tǒng)是pGEX表達系統(tǒng)(Pharmacia)。這個系統(tǒng)使用GST基因融合系統(tǒng)，所述系統(tǒng)設計用于高水平表達作為融合蛋白的基因或基因片段，并能快速純化和回收功能基因產物。目的多肽與來自日本血吸蟲(^C力/WOiTM57^[JO/7/c咖)的谷胱甘肽S轉移酶蛋白質的羧基末端融合，且通過親和色i普法使用GlutathioneS印harose4B從細菌溶解產物很容易地純化。融合蛋白可以在溫和條件下通過用谷胱甘肽洗脫進行回收。谷胱甘肽S轉移酶結構域從融合蛋白的切割通過這個結構域上游的位點特異性蛋白酶的識別位點的存在得到促進。例如，在pGEX-2T質粒中表達的多肽可以用凝血酶切割；在pGEX-3X中表達的那些可以用因子Xa切割。一旦重組多肽凈皮表達，就使用例如親和色譜法將其進行分離。在一個例子中，針對用于本發(fā)明的多肽產生的抗體(例如，如本文所述產生的)抗體可以與柱附著，且用于分離重組多肽。在親和色譜法之前多肽錨著細胞的裂解和分餾可以通過標準方法進行(參見，例如，Ausubel等人，同上)。一旦被分離，必要時，重組多肽就可以通過例如高效液相色譜進一步純4匕(參見i"列^口，F(xiàn)isher,Za6ors/cr/7bc/w/《wei1A/(9C力e尕/5^/y爿/d船/ecz/7arA/o/c^/，eds.,.WorkandBurdon,Elsevier,1980)。用于本發(fā)明的多肽，特別是短肽片段還可以通過化學合成來產生(例如，通過夕o/^/,力，戶一油加〃臘/s,第2版，1.984ThePierceChemicalCo.,Rockford,111.中描述的方法)。多肽表達和純化的這些一般技術還可以用于生產和分離有用的肽片段或類似物(本文描述的)。短肽例如50聚體鏈球菌IgA結合肽(Sap)和58聚體修飾的Z結構域還可以被化學合成。為了產生抗體，也可以使用任何標準技術。例如，IgAl、IgM、或其片段的編碼序列(例如，IgAl鉸鏈區(qū)，氨基酸217-241)可以作為與谷胱甘肽S轉移酶(GST)的C末端融合進行化學合成或表達(Smith和Johnson,Gene67:31-40，1988)。融合蛋白在谷胱甘肽-S印harose珠上進行純化、用谷胱甘肽洗脫、用凝血酶切割(在工程化的切割位點處)、且純化至用于免疫接種小鼠或兔所需的程度。初次免疫接種使用弗氏完全佐劑或類似佐劑來進行，且后續(xù)免疫接種使用弗氏不完全佐劑。抗體滴度使用凝血酶切割的GST融合蛋白多肽片段，通過ELISA或蛋白質印跡和免疫沉淀分析來監(jiān)控。免疫血清使用CNBr-Sepharose-偶聯(lián)多肽進行親和提純。抗血清特異性使用一組無關GST蛋白質來測定。作為GST融合蛋白的可替代物或附加免疫原，可以產生對應IgA或IgM的相對獨特免疫原性區(qū)域的肽，且通過引入的C末端賴氨酸與鑰孔血藍蛋白(KLH)偶聯(lián)。針對這些肽中每一種的抗血清在與BSA綴合的肽上類似地親和提純，且通過使用肽綴合物的ELISA和蛋白質印跡，以及通過使用作為GST融合蛋白表達的多肽的蛋白質印跡和免疫沉淀進行特異性測試?？商娲?，特異性結合IgA或IgM的單克隆抗體根據(jù)標準雜交瘤技術進行制備(參見，例如，Kohler等人，Nature256:495,1975;Kohler等人，Eur.J.Immunol,6:511,1976;Kohler等人，Eur.J.Immunol.6:292,1976;Hammer1ing等人,在lomc^/es犯"6W////6r油鵬s中，Elsevier,N.Y.,1981;Ausubel等人，同上)。一旦被產生，單克隆抗體就同樣通過蛋白質印跡或免疫沉淀分析(通過Ausubel等人，同上中描述的方法)測試特異性。特異性識別IgA特別是IgAl同種型、或IgM的抗體被認為在本發(fā)明中有用?？商娲?，單克隆抗體可以使用IgA或IgM和噬菌體展示文庫進行制備(Vaughan等人，Nat.Biotechnol.1.4:309-314,1996)。優(yōu)選地，抗體使用IgA或IgM片段產生，所述片段位于一般保守區(qū)域以外(例如，在IgA2中缺乏但IgAl具有的13個氨基酸的區(qū)域；參見圖1)或是IgM鉸鏈區(qū)中的獨特序列；參見SEQIDNO:14,且通過例如高頻率的帶電殘基的標準看來可能是抗原。在一個具體例子中，此類片段通過標準PCR技術產生且克隆到pGEX表達載體內(Ausubel等人，同上)。融合蛋白在大腸桿菌中表達，且如Ausubel等人(同上)中所述使用谷胱甘肽瓊脂糖親和基質進行純化',為了嘗試使抗血清低親和力或特異性的潛在問題減到最小，對于每種多肽產生2種或3種此類融合物，且將每種融合物注入至少2只兔中?？寡逋ㄟ^系列注射產生，優(yōu)選包括至少3次加強注射。針對IgAl產生的抗體可以用于診斷IgAN和HSP,且抗體抗IgM可以用于診斷IgMN。肽的修飾可能希望修飾在本發(fā)明方法和組合物中使用的肽，因為進入循環(huán)的肽在血漿中被快速降解。因此需要修飾以延長其半衰期而不降低生物活性和結合親和力。例如，十四肽生長抑素在人血漿中的半衰期只有3分鐘，太短而不能在癌癥診斷中用作放射性藥物。因此，開發(fā)了在人循環(huán)中具有90分鐘半衰期的其類似物善得定(Langer和Beck-Sickinger,Curr.Med.Chem.Anti-Cane.Agents1:71-93,2001)。為了抵抗經由肽鏈端解酶的降解，肽可以在N和/或C末端進行加帽。這包括例如N末端乙?；?、C末端酰胺化或還原、以及N至C的環(huán)化。這些方法是本領域標準的方法。為了減少對肽鏈內切酶的敏感性，肽可以通過引入D氨基酸、氨基酸替代物、或擬肽序列和間隔物進行修飾。改善穩(wěn)定性的其他方法包括肽鍵的修飾、用亞氨基替換氨基、酰胺氮的甲基化、和縮短天然氨基酸序列。再一次，這些方法是本領域標準的方法。如上所述，診斷劑進一步包括可檢測標記，例如放射性標記如放射性金屬。各種放射性金屬在閃爍掃描中使用，且其用途隨閃爍掃描類型、嘗試進行的診斷、以及同位素的成本和可用性而變。同位素選擇中的關鍵決定因素是閃爍掃描類型，和需要的放射性衰變。SPECT和PET使用不同的同位素，因為SPECT使用Y發(fā)射體，而PET使用正電子發(fā)射體。同位素可以以4種不同方式產生，這與成本有關聯(lián)。在發(fā)生器中產生的那些來自長半衰期放射性同位素轉變成較短半衰期的同位素。這使得它們能夠實際用于甚至在小醫(yī)院中的使用，并且它們的成本較低。其他放射性金屬更昂貴，因為它們在核反應器、回旋加速器、和線性加速器中產生，并且這可能限制其在較小型醫(yī)院以及較偏僻地區(qū)中的醫(yī)院的使用。就診斷而言，使用的放射性金屬部分也受限于什么時候能送達到使用場地和與靶結合的時間的快慢。在IgA結合肽的情況下，4-80小時的較長半衰期可能是優(yōu)選的。亞穩(wěn)的锝-99ra(99mTc)在85%的掃描中使用，這僅在美國每年就是約7百萬例。S9mTc的特性對于診斷成像是非常理想的；140keV的Y輻射在今天的Y射線成像機的理想范圍內，且6小時半衰期的長度足以合成標記放射性藥物、進行質量控制、將其注入患者內、且進行成像。但半衰期短得足以使得能夠施用具有最低限度的患者風險的足夠高劑量，且在使用的濃度水平(<10—6M)下，所產生的y輻射和"Tc的軟P衰變都不危險。99ffiTc以低成本在"Mo/""Tc發(fā)生器中可由其親本核素"Mo(t^66小時)容易地獲得。y發(fā)射的銦-111(mIn)已廣泛用于標記單克隆抗體和肽。由FDA批準用于臨床使用的第一種肽方史射性藥物是mIn標記的生長抑素類似物OctreoScan(Mallinckrodt,St.Loius,Mo)。這種同位素的化學和半衰期(67，9小時)使得它對于標記免疫球蛋白是理想的，而成像可以在初次注射后數(shù)天進行。min在回旋加速器中由鎘-111產生，且因此與，Tc比較而言它較難獲得。離子交換和溶劑萃取是通常用于分離銦-111與親本鎘的方法。然而，為了放射性標記IgA結合肽的目的，與，Tc比較J"In更長的半衰期提供了IgA結合肽更多的時間達到IgA在腎中沉積，且提供了更多的時間用于清除循環(huán)的標記IgA。鎵-67("Ga)在回旋加速器中由鋅-68(68Zn)產生，且是于1953年生產的用于人使用的第一種核素。分離技術可以包括溶劑萃取和離子交換、或兩者。"Ga的半衰期超過78小時，且其能量衰變特征使得其適合于Y閃爍掃描或PET成像。銅的放射性核素提供了診斷表位的選擇，包括，u、"Cu、"Cu和"Cu。正電子發(fā)射的"Cu是回旋加速器產生的。64Cu優(yōu)選用于標記蛋白質、肽和具有長血液清除率的試劑，所述較長時間的血液清除率可能是IgA結合蛋白質的有利特性。"Cu具有12.7小時的半衰期。下表1和2顯示用于診斷用途的許多y和發(fā)射正電子的放射性金屬、其衰變特征、半衰期和生產方法(Anderson和Welch,Chera.Rev.99:"19-2234，1999)。這些放射性金屬中的任何一種都可以在本文描述的方法和組合物中使用。表l.y和P發(fā)射放射性核素<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>了用于99fflTc的各種BFCA,包括三酰胺硫醇N3S、二酰胺二硫醇N2S2、丙胺月f(PnAO)和肼基煙酸(HYNIC)。某些結構顯示于圖5中。較新的方法使用有機金屬種類[M(CO)3(H20)3]+(M=wTc、，9raTc、ls5/187Re、'拳Re),這是用于標記藥效團的Tc/Re(I)前體。短反應時間后經由高純度放射化學獲得的陽離子種類提供了幾個優(yōu)點，包括氧化狀態(tài)的維持、血清中的穩(wěn)定性、以及與生物學配體形成穩(wěn)定復合物。組氨酸和PADA(曱氨基吡啶-N,N-二乙酸；圖6)已鑒定為合適的BFCA。組氨酸已用于放射標記神經降壓素衍生物，且PADA用于標記含99fflTc的蛙皮素和神經肽Y衍生物。選擇用于銦-111的BFCA是二乙烯三胺五乙酸(DTPA)，且多種肽已用DTPA進行標記(圖7)。對于mIn第二種最廣泛使用的螯合劑是四氮雜環(huán)十二烷四乙酸(DOTA)(圖7),這也可以用于復合治療放射性核素釔-90('。Y)。三肽和四肽例如Lys-Gly-Cys、Cys-Gly-Cys、Gly-Gly-Cys和Gly-Ala-Gly-Gly，也可以用作BFCA(Langer和Beck-Sickinger,Curr.Med.Chem.Anti-Cane.Agents1:71-93,2001)。例如，他Tc已用于標記血管活性腸肽(VIP)及其類似物TP3654,所述類似物TP3654在VIP的C末端上攜帶螯合氨基酸序列GAGG(Thakur等人，J.Nucl.Med.，41:107,2000)。在另一報道中，經由N末端Ac-Cys-Gly-Cys-Gly(CGCG)螯合作用于a-促黑素細胞激素(MSH)的""Tc標記產生用于基于肽的放射診斷的有希望的候選物(Chen等人，Nucl.Med.Biol.26:687-693，1999)。非放射性標記除了放射性標記化合物之外，順磁物質和量子點(qdot)技術也可以在本發(fā)明的方法和組合物中使用。將順磁物質與IgA結合或IgM結合化合物偶聯(lián)允許經由MRI成像，且量子點允許熒光成像。如果在本發(fā)明中使用不需要放射性的成像技術(例如，MRI),那么非放射性標記可以取代上文描述的放射性金屬。例如，順磁物質(例如，亂)可以使用本領域標準方法與IgA結合蛋白質綴合。當化合物注入哺乳動物內且通過MRI成像時，在其中順磁物質沉下的地方磁性特性存在差異。這些差異可以用于鑒定腎的腎小球中的IgA或IgM沉積，因此用于診斷IgA或IgM腎臟疾病。量f^量子點(qdot)是由各種材料制成的熒光半導體納米晶體，所述材料例如是CdS、CdSe、CdTe、CdHgTe/ZnS、InP、InAs和PbSe。對于比所謂的玻爾激子半徑(數(shù)納米)更小的納米晶體，能級是量子化的，值直接與晶體大小相關(稱為量子局限的效應)。因此，它們具有與常用熒光團不同的某些區(qū)別特征。量子點的一個優(yōu)點在于其大小和形狀可以通過合成中使用的持續(xù)時間、溫度和配體分子得到精確控制。量子點的吸收和發(fā)射特性也可以被控制，因為它們是組成和大小依賴性的。量子點核可以通過聚合物涂層材料進行包裹，以使得它們可溶于水溶液且防止細胞毒性Cd^或Se^離子從量子點核中釋放。為了給量子點增加功能，最外層可以包括給予特異功能性(例如IgA或IgM結合)的綴合化合物(例如，抗體和生物活性肽)。如果希望減少在肝和骨髓中的積聚，那么可以向涂層中添加高分子量聚乙二醇(PEG)分子。在一個實施方案中，量子點可以單獨用于成^f象目的。用抗體(例如抗IgA或抗IgM抗體)或結合化合物(例如IgA或IgM結合化合物)標記的量子點，可以用于將量子點靶向特異性分子。此類量子點可以注入哺乳動物中，且使用如Gao等人(Nat.Biotech.22:969-976，2004)描述的熒光技術進行成寸象。在另一實施方案中，量子點可以與放射性標記化合物(例如，本文描述的放射性金屬)或順f茲物質(例如，軋)偶聯(lián)。這些量子點可以注入哺乳動物中，且使用合適的成像4支術(例如，MRI、SPECT、PET或平面掃描)進行顯現(xiàn)。診斷組合物的配制在本發(fā)明的組合物和方法中使用的化合物可以以任何合適的量包含在任何合適的載體物質中，且一般以組合物總重量1-95重量％的量存在。組合物優(yōu)選以適合于腸胃外(例如，靜脈內)施用途徑的劑型提供。診斷組合物可以根據(jù)常規(guī)藥學實踐(參見，例如，Reraington,TheScienceandPracticeofPharmacy(第20版),ed.A.R.Gennaro,LippincottWi1Hams&Wilkins，2000以及EncyclopediaofPharmaceuticalTechnology,cds.J.Swarbrick和J.C.Boylan,1988-1999，MarcelDekker,NewYork)進行配制。腸胃外組合物診斷組合物可以以劑型、制劑、或經由合適的遞送裝置或包含常規(guī)無毒的藥學可接受載體和佐劑的埋植劑，通過注射、輸注或植入(靜脈內等)進行腸胃外施用。此類組合物的配制和制備是藥學制備領域技術人員眾所周知的。組合物可以是溶液、懸浮液、乳狀液、輸注裝置、或用于植入的遞送裝置的形式，或者它可以呈現(xiàn)為在使用前用水或另一種合適4某介物重構的干燥粉末。除了診斷化合物之外，組合物還可以包括合適的腸胃外可接受載體和/或賦形劑。此外，組合物可以包括懸浮劑、增溶劑、穩(wěn)定劑、pH調節(jié)劑、張力調節(jié)劑、和/或分散劑。如上所述，根據(jù)本發(fā)明的診斷組合物可以是適合于無菌注射的形式。為了制備此類組合物，將i貪斷化合物溶解或懸浮于腸胃外可接受的液體媒介物中?？梢允褂玫目山邮艿膇某介物和溶劑包括水、通過添加合適量的鹽酸、氬氧化鈉或合適的緩沖液調整至合適pH的水、1,3-丁二醇、林格氏(Ringe"s)溶液、葡萄糖溶液、和等滲氯化鈉溶液。水制劑還可以包含一種或多種防腐劑(例如，曱基、乙基或正丙基對羥苯酸酯)。在化合物之一僅少量或微溶于水的情況下，可以添加溶解增強或增溶劑，或溶劑可以包括10-60%w/w的丙二醇等?；衔飫┝勘M管主治醫(yī)師將最終決定用于診斷IgA或IgM腎臟疾病的一種或多種化合物的合適量，但一般地l、2、3、4、5、6、7、8、9或10mCi的放射性標記化合物將在藥學可接受載體中靜脈內施用。劑量基于幾個考慮來確定，包括使用的成像技術(例如，SPECT)所需劑量以及化合物的清除和吸收特征。放射性劑量測定可以用于確保輻射量不超過所公布的每個器官的最大輻射。成像技術任何標準成像技術可以在本發(fā)明中使用，而閃爍掃描是最優(yōu)選的方法。本領域技術人員將知道對于特定放射照相試劑使用何種類型的掃描儀。艦賴吝閃爍掃描涉及使用放射性同位素診斷和治療各種疾病。它在神經學、心臟病學、腫瘤學、內分泌學、淋巴系統(tǒng)、泌尿功能、腸胃病學、肺病學及其他領域具有應用。一般地，放射性同位素與特異性化合物化學結合，且隨后進行靜脈內注射。不同的放射性同位素用于不同的閃爍掃描方法，且3種常用方法是SPECT、PET和平面掃描(Anderson和Welch，Cheni.Rev.99:2219-2234，1999;Langer和Beck-Sickinger，Curr.Med.Chera.Anti-Cane.Agents1:71-93,2001)。SPECT(單光子發(fā)射計算機斷層攝影)是使用Y射線的核成像技術。同位素注射后，旋轉Y射線照相成像機收集患者周圍360度的圖像，只選擇某一能量的光子。來自身體各種水平的圖像被加工且重組以形成3D圖像。PET(正電子發(fā)射斷層攝影)是使用放射性同位素的核成像技術，所述放射性同位素通過正電子發(fā)射而衰變，導致釋放相反方向的2種光子。360度掃描儀檢測這些光子，但只處理成對的光子。PET掃描的安全性高于身體CT,因為由PET掃描吸收的輻射平均為5mSv，而由身體CT掃描吸收的輻射為6-16mSv。平面掃描儀是第一代閃爍檢測裝置且目前在許多診斷程序中使用。它們很常用且產生二維圖像。組除了閃爍掃描法之外，磁共振成像(MRI)也可以在本發(fā)明的方法中使用。MRI使用強磁場以產生患者身體的三維斷層攝影圖像，且不需要放射性。放射學優(yōu)化為了進一步優(yōu)化本發(fā)明的診斷方法，可以減少腎小管滯留且使用預靶向策略。i^W^合參^IV、^滯蘿小于約60kDa的放射標記肽、蛋白質或其片段在腎小球被過濾且進入腎小管(Langer和Beck-Sickinger，Curr.Med.Chem.Ant卜Canc.Agents1:71-93,2001;Thakur等人，J.Nucl.Med.,41:107,2000)。在生理條件下，近端小管細胞大量重吸收這些肽，隨后對所述肽實施溶酶體降解。這種重吸收捕獲的放射性金屬螯合物，導致放射標記物在腎髓質細胞中大量滯留，降低對于檢測來自腎髓質區(qū)的特定的較高發(fā)射的閃爍法敏感性。然而，在IgAN中，IgA沉積在位于腎皮質的腎小球中，使腎臟的放射性金屬滯留和相關干擾的問題得以減小。在IgA或IgM腎臟疾病診斷中仍希望盡可能減少腎小管滯留，且可以通過使用更親脂的分子來完成。這些分子在肽中具有高含量的親脂性氨基酸，或在分子上具有添加的脂肪?；糠?。在一個例子中，此類親脂性修飾可以在RC-160中看到，所述RC-160是親脂性增加而腎臟排泄傾向減小的生長抑素類似物(P.Dasgupta和R.Mukherjee，BrJPharmacol(2000)129，101-109)。第二個例子是硬脂酰-Nle17-VIP,28聚體血管活性腸肽VIP的親脂性類似物。(Gozes等人，J.Pharmacol.Exper.Therap.273(1995)161-167)。親脂性修飾可以促進通過肝而不是腎的代謝性降解。減少放射性金屬的腎小管積聚的另一途徑是，使放射標記試劑的大小增加至足夠大以避免通過腎小球的過濾(Langer和Beck-Sickinger，Curr.Med.Chem.Anti-Cane.Agents1:71-93，2001)。第三種方法是在診斷劑施用后施用口服或注射堿性氨基酸(例如，賴氨酸)或其衍生物，從而抑制蛋白質和肽的腎小管細胞攝取且誘導瞬間蛋白尿(Bdir等人，Eur.J.Nucl.Med.25:201-212，1998)。絲命泉膝預靶向遞送通常在腫瘤放射免疫閃爍掃描法(RIS)和放射免疫療法(RIT)中使用(Anderson和Welch,Chera.Rev,99:2219—2234,1999;Langer和Beck-Sickinger,Curr.Med.Ch.em.Anti-Cane.Agents1:71-93,2001;Chang等人，Mol.Cane.Ther.1:553-563，2002;Rossi等人，Clin.Cane.Res.9:3886s-3896s，2003)。在結合濃度最高時，預靶向減少或清除循環(huán)中的未結合放射標記分子。最廣泛使用的系統(tǒng)是生物素-鏈霉親和素(SA)對。一般地，首先注入未放射標記的mAb-SA。因為循環(huán)中的抗體清除緩慢，因此未結合抗體必須在遞送放射標記生物素之前被清除。因此，在第一次注射后1-2天，注入與mAb-SA相互作用的半乳糖基化清除劑。這種試劑快速清除任何循環(huán)中的raAb-SA,但它不能清除已經與沉積在腎臟的IgA，IgM結合的mAb-SA。另外1-10小時后，注入放射標記的生物素-BFCA。因此，只將放射性螯合物遞送至結合部位而不是循環(huán)抗體。其他可能策略包括使用除生物素-鏈霉親和素以外的結合對的類似方法，或只需要2個步驟例如，如下文描述的系統(tǒng)?？?法為了減少血管內的IgA或IgM放射性本底，還可以使用兩步法。在這種方法中，首先制備抗IgAl抗體或抗IgM抗體，通過選擇性蛋白水解由所述抗體獲得Fab結構域。這種Fab隨后進行修飾以包括鏈霉親和素(SA)和半乳糖(Gal)。加入鏈霉親和素作為生物素配體，且加入Gal以促進循環(huán)Fab-IgAl或Fab-IgM復合物的去除。因為SA-Gal-Fab通過肝ASGPR(去唾液酸糖蛋白受體)的清除比與IgA或IgM的結合更快，所以注入合適的竟爭性抑制劑例如半乳糖-菲柯爾，這是有效抑制ASGPR功能的半乳糖合成聚合物(Rifai等人，J.Exp.Med.191:2171-2181,2000)。與半乳糖-菲柯爾注入同時或緊在其后，將SA-Gal-Fab抗IgAl或SA-Gal-Fab抗IgM注入患者內用于預靶向，與循環(huán)IgAl和腎皮質中沉積的IgAl、或循環(huán)IgM和腎皮質中沉積的IgM結合。在24-48小時，當半乳糖-菲柯爾的作用結束時，循環(huán)SA-Gal-Fab-IgAl或SA-Gal-Fab-IgM復合物經由肝ASGPR從循環(huán)中被清除。然而，腎小球中固定的SA-Gal-Fab-IgAl或SA-Gal-Fab-IgM復合物仍然存在，且可用于成像。第一次注射后大約1或2天，血管內循環(huán)的本底SA-Gal-Fab-IgAl或SA-Gal-Fab-IgM復合物基本上被清除，然后，注入放射標記的TmTc或mIn)生物素-HSA-Gal(與半乳糖綴合的生物素化的人血清白蛋白)且與腎中的SA-Gal-Fab-IgAl或SA-Gal-Fab-IgM復合物結合。另一4-24小時后，未結合的(游離)放射標記的生物素-HSA-Gal通過肝ASGPR從循環(huán)中去除，導致腎皮質中靶與噪聲的比率增加。另外，白蛋白的大小(66kDa)排除了放射性復合物從腎小球中被過濾的可能性，從而減少了由于放射性螯合物沉降在腎近端小管細胞中的相關本底輻射。這種設計的另一個優(yōu)點是鏈霉親和素是四聚體(匿4x13kDa=52kDa),結合4個生物素化配體分子。腎皮質中暴露的每摩爾鏈霉親和素結合4摩爾放射性生物素-HSA-Gal,這增加了影像信號。為了執(zhí)行這種方法，產生抗人IgAl抗體或抗人IgM抗體及其Fab片段，以診斷IgA或IgM腎臟疾病。小鼠或嵌合單克隆抗人IgAl鉸鏈區(qū)或抗人IgM抗體通過例如本文描述的常規(guī)方法產生。Fab片段隨后通過任何標準技術，例如木瓜蛋白酶消化來獲得，且隨后通過例如凝膠過濾色譜法和抗原親和色譜法來純化。為了將半乳糖分子綴合在Fab上，將氰曱基-2,3,4,6-四-1-乙?；?1-硫代-e-D-吡喃半乳糖苷(C-4141;Sigma)以0.1M溶解于曱醇中，且與0.1體積曱氧基鈉(曱醇鈉衍生物；J.T.BakerChemicalCo.，Phi].1ipsburg,NJ)混合。于室溫48小時后，將這種混合物于4'C貯存數(shù)周。將綴合物放回包含l.Omg/mlFab的0.25M硼酸鈉緩沖液，pfl8.5中。于室溫2小時后，將樣品透析到磷酸鹽緩沖鹽水中。抗體的抗原結合功能沒有被綴合改變(0ng等人，Cane.Res.51:1619-1626,1991)。鏈霉親和素(SA;匿~52kDa)與生物素(244Da)特異性結合。它由細菌鏈霉親生物素蛋白獲得，且在三維結構和以極高親和力(Kd=l(T15M)結合生物素的能力方面具有與雞蛋白抗生物素蛋白的相似性。它是能夠結合高達4個生物素分子的四聚體蛋白質(4x13kDa)。與抗生物素蛋白不同，鏈霉親和素是非糖基化的且在電荷方面基本上是中性的，而抗生物素蛋白(pl~10.5)在中性pH下是堿性的。由于這點，鏈霉親和素具有明顯更少的非特異性結合，導致更少的本底，且已替代抗生物素蛋白作為優(yōu)選試劑用于其中蛋白質相互作用可能引起不希望的本底的應用。為了使SA與Gal-Fab綴合，Gal-Fab使用琥珀酰亞胺基4-(f馬來酰亞胺-甲基)環(huán)己胺-l-羧酸酉旨(SMCC)與SA(Genzyme，Cambridge,Mass)化學綴合。過量SMCC以3:1的摩爾比在pH8包含5%麗S0的硼酸鈉中提供給SA。30分4中后，SMCC-SA通過SephadexG-25(AmersharaPharmacia)凝膠過濾除去鹽分。Gal-Fab用DTT還原，通過凝膠過濾除去鹽分，且在PBS中5mg/ml總蛋白濃度下以1:1摩爾比與SMCC-SA混合。反應通過大小排阻HPLC進行監(jiān)控，且在足夠的綴合物已形成后，大約50分鐘，反應通過添加連四;克酸鈉至5mM來結束，以再氧化未反應的石充醇。綴合物通過QS印harose色^普法與游離SA分開。綴合物也通過使用在0.05M碳酸鈉、0.5M氯化鈉、pH11中平^f釺的固定亞氨基生物素(Pierce)的親和色i普法與未綴合的Gal-Fab分開，且用0.05M乙酸鈉/0.5M氯化鈉，pH4洗脫。約80%的綴合物由1:1比率的SA/抗體組成，而剩余物主要為2:1或更高的比率(Axworthy等人，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.97:1802—1807，2000)。HSA(人血清白蛋白)是包含584個氨基酸的單多肽鏈蛋白質(66kDa),且是血液中最豐富的蛋白質，占血漿中蛋白質的約60%。HSA專一地在肝中產生，且與大多數(shù)其他血漿蛋白不同，它不包含碳水化合物。H:SA具有約19天的半衰期。HSA的主要功能包括維持血管中的膠體滲透壓、促成酸/堿代謝的維持和運輸內在物質和藥物。藥學賦形劑質量的高度純化、無病毒的重組人白蛋白可以商購獲得(例如,GTCBiotherapeutics)。為了制備生物素-HSA-Gal，HSA在0.5M硼酸鈉(p〖I8.5),5%DMS0中與3倍過量的N-鞋基琥珀酰亞胺-LC-生物素(Pierce)組合。大約4小時后，將該溶液加入200倍過量的新鮮配制的純2-亞氨基-2-曱氧乙基1-硫代-|3-D-吡喃半乳糖苦。混合物于室溫攪動8小時且通過在PBS中透析過濾進行純化。最終材料包含如通過從SA的2-(4，-羥基苯偶氮)-苯曱酸(HABA)置換所測定的1.6摩爾生物素/摩爾HSA和通過比色蒽酮測定法(Axworthy等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.97:1.802—1807，2000)測定的30—40摩爾硫代半乳糖/摩爾HSA。為在生物素-HSA-半乳糖上綴合雙功能螯合劑(BFCA)DOTA(1,4，7,1.0-四氮雜環(huán)十二烷-1,4,7,10-四乙酸)，DOTA的COOH基團通過碳化二亞胺試劑激活。簡言之，將DOTA于80。C溶解于無水DMSO中，且使溶液在氬下冷卻。向攪動的DOTA溶液中逐滴加入溶于麗SO的N-羥基-2,5-吡咯烷二酮溶液，隨后逐滴加入溶于畫SO的N,N-二環(huán)己基碳二亞胺。DOTA:N-羥基-2,5-吡咯烷二酮N，N，-二環(huán)己基碳二亞胺之間的摩爾比為1:1.4:0.8。將反應混合物攪動過夜且隨后進行過濾以分離副產品二環(huán)己基脲。通過向溶解于0.1M磷酸鹽緩沖液(pH8.0)的生物素-HSA-Gal中加入足夠體積的DOTA活化酯溶液，DOTA與生物素-HSA-Gal之間的綴合以50:1的摩爾比進行。過夜反應后，綴合通過反相柱在與UV探測器和檢波器連接的FPLC系統(tǒng)中進行純化。使用0.1%三氟乙酸水溶液(溶劑A)和甲醇(溶劑B)應用線性梯度方法。洗脫劑以4ml/分鐘的流速遞送，由37ml中的0°/。溶劑A開始到1.00%溶劑B。在UV曲線中觀察到對應含D0TA的生物素-HSA-Gal綴合物的2個峰。含D0TA的生物素-HSA-Gal綴合物的保留體積不同于未綴合的生物素-HSA-Gal的保留體積。使用整合的分段收集器回收每種化合物，且在必要時可以進行通過MALDI-T0F(基質輔助激光解吸/電離飛行時間)質譜法的進一步分析(Bussolati等人，Cane.Res.61:4393-4397,2001)。為了與放射標記綴合，從例如Mallinckrodt,Inc.(St.Louis,MO)獲得不添加載體的銦-ll.l-氯化物(mInCl3)。將DOTA-生物素-HSA-半乳糖綴合物溶解于O.2M乙酸銨緩沖液(不含金屬；pH7)中，且隨后于100'C與minCl3以約20MBqmIn/l誦l綴合物的比率孵育30分鐘。放射標記綴合物的純度通過快速薄層色譜法(ITLC)進行評估。ITLC系統(tǒng)使用ITLC-SG(硅膠)載體(GelmanSciences,AnnArbor,MI)和4mMEDTA(pH4.0)作為移動相。肽結合活性保留在起點，且先前未復合的放射性金屬在溶劑前沿作為EDTA復合物移動。放射性標記效率一般大于97%,且決定性地依賴于出InCl3的化學純度(金屬陽離子)(Smith-Jones等人，Endocrinology140:5136-5148，1999)。半乳糖-菲柯爾可以如下容易地合成。將氰甲基1-硫代-P-D-吡喃半乳糖苷以大約l.0毫摩爾/10ml的比率溶解于甲醇中，在曱醇中添加O.5ml的O.5M甲氧基鈉。在蓋緊的玻璃管形瓶中于室溫攪動48小時后，甲醇將用氮流蒸發(fā)干燥。向干燥殘基中加入溶于100mlBBS(0.16M氯化鈉-0.2M硼酸鈉，pH8.0)、來自Pharmacia或其他制造商的1.克菲柯爾70或菲柯爾400，然后在室溫下攪動24小時，隨后反應通過加入10ml的1.0N乙酸來終止。反應混合物將針對蒸鎦水徹底透析(Plotz和Rifai,"/oc力咖/Wr/1982，21,301—308;Lee等人，及/oc/7，/Wtt1976，15,3956-3963)。本發(fā)明的化合物的施用可以是靜脈內的。在一個例子中，經過30-60秒的時間^殳將2.0mCimIn由靜脈內注入患者中。如下所述在注入后24-48小時獲取圖像；然而，必要時或基于診斷方法中使用的具體化合物的清除和保留特4正，可以改變施用和成像之間的時間。幾種商購可得的SPECT掃描儀中的任何一種都可以在這種方法中使用(例如，GEMyoSIGHT,GeneralElectricCompany)。本領域才支術人員將知道對于特定放射性金屬或同位素可以使用什么設定(例如，準直器、窗口大小和能量)。在一個例子中，對于山In使用中等能量準直器，而15-20%的對稱窗設定為173和247keVC"In的光峰)。在另一例子中，對于衡Tc使用低能準直器，而20%的對稱窗設定為140keV。拍攝圖像的數(shù)目取決于掃描系統(tǒng)的能力和所需圖4象質量。通常使用360度移動、具有64光圈的照相機，可以拍攝64x64矩陣設定的圖像。如果需要更高的圖像質量，那么可以拍攝128x128或256x256矩陣設定的圖像。掃描可以進行30-60分鐘，在這段時間患者必須保持絕對靜止。必要時，可以進行另外的患者準備(例如，口月l水合、瀉藥和灌腸)以獲得最佳圖像。圖像可以用于測定患者腎中放射性的量。通過比較這種放射性的量與已知沒有IgA腎病或HSP的患者腎中的放射性，腎中檢測到的放射性增加有助于診斷IgA腎病或HSP。類似地，在使用抗人IgM代替抗人IgA的情況下，由圖像測定的放射性相對于已知沒有IgM腎病的患者腎中的放射性的量的增加有助于診斷IgM腎病。其他實施方案本說明書中提及的所有出版物、專利申請包括2005年8月3日提交的美國臨時申請60/705,282號被通過引用包含于本文中。不背離本發(fā)明的范圍和精神的本發(fā)明的方法和系統(tǒng)的各種修改和變化對于本領域技術人員將是顯而易見的。盡管本發(fā)明已結合具體所需實施方案進行了描述，但應當理解，請求保護的本發(fā)明不應該不適當?shù)厥艽祟惥唧w實施方案的限制。權利要求1.一種用于診斷哺乳動物中的IgA或IgM腎臟疾病的方法，所述方法包括(a)給所述哺乳動物施用特異性結合IgA或IgM的化合物；和(b)檢測所述哺乳動物腎臟中的所述化合物，其中，所述哺乳動物的所述腎臟中的所述化合物的量相對于沒有所述腎臟疾病的哺乳動物腎臟中的所述量的增加有助于診斷所述哺乳動物中的所述IgA或IgM腎臟疾病。2.權利要求l的方法，其中所述哺乳動物是人。3.權利要求l的方法，其中所述施用是靜脈內的。4.權利要求l的方法，其中所述化合物包含肽。5.權利要求4的方法，其中所述肽選自人FcaRl(SEQIDNO:2)、人Fca/y受體(SEQIDNO:6)、多聚Ig受體(SEQIDNO:7)、Sir22(SEQIDNO:3)、鏈球菌IgA結合肽(Sap;SEQIDNO:4)、修飾的Z-結構域蛋白質(SEQIDNO:12)和YDWIPSSAW(SEQIDNO:9)、或其IgA或IgM結合片段。6.權利要求4的方法，其中所述肽包含選自N末端帽、C末端帽、D氨基酸、氨基酸替代物、擬肽序列和間隔物的修飾。7.權利要求l的方法，其中所述化合物包含抗體、或其IgA或IgM結合片段。8.權利要求7的方法，其中所述抗體是抗人IgA、或其IgA結合片段。9.權利要求7的方法，其中所述抗體是抗人IgM、或其IgM結合片段。10.權利要求l的方法，其中所述化合物包含量子點。11.權利要求l的方法，其中所述化合物與放射性標記連接。12.權利要求11的方法，其中所述標記選自99n'Tc、mIn、"Ga、67Ga、6sGa、，、90Y、201T1、55Co、60Cu、61Cu、"Cu、"Cu、67Cu、s2Rb、1S5/!87Re和I86/1S8Re。13.權利要求ll的方法，其中所述化合物通過雙功能螯合劑與所述放射性標記連接。14.權利要求13的方法，其中所述雙功能螯合劑選自N3S、N2S2、PnAO、HYNIC、[M(CO)3(H20)3]+、PADA、DTPA、D0TA、組氨酸、三肽和四肽。15.權利要求14的方法，其中所述三肽是Lys-Gly-Cys、Cys-Gly-Cys或Gly-Gly-Cys。16.權利要求14的方法，其中所述四肽是Gly-Ala-Gly-Gly或Cys-Gly-Cys-Gly。17.權利要求l的方法，其中所述化合物與順磁物質連接。18.權利要求17的方法，其中所述順磁物質是釓。19.權利要求l的方法，其中所述檢測通過成像技術來進行。20.權利要求19的方法，其中所述成像技術選自SPECT、PET、平面掃描和MRI。21.權利要求].的方法，其中所述化合物進一步包含半乳糖和結合對的第一個成員。22.權利要求21的方法，其中所述結合對的第一個成員是鏈霉親和素。23.權利要求21的方法，其中所述施用進一步包含半乳糖-菲柯爾的施用。24.權利要求21的方法，其中所述檢測通過下述進行給所述哺乳動物施用與(a)結合對的第二個成員和(b)半乳糖綴合的放射性標記化合物，隨后檢測所述哺乳動物的所述腎臟中的所述放射性標記化合物。25.權利要求24的方法，其中所述放射性標記化合物用選自下列的同位素進行標記99mTc、mIn、66Ga、67Ga、68Ga、，、9。Y、2，1、"Co、6°Cu、61Cu、62Cu、64Cu、67Cu、82Rb、185/I87Re和186/188Re。26.權利要求24的方法，其中所述放射性標記化合物是人血清白蛋白。27.權利要求24的方法，其中所述結合對的第二個成員是生物素。28.—種組合物，其包含；(a)IgA或IgM結合化合物；(b)雙功能螯合劑；和(c)在藥學可接受載體中的可檢測標記，其中所述IgA或IgM結合化合物通過所述雙功能螯合劑與所述可檢測標記連接。29.權利要求28的組合物，其中所述化合物包含肽。30.權利要求29的組合物，其中所述肽選自人FcocRl(SEQIDN0:2)、人Fca/ja受體(SEQIDNO:6)、多聚Ig受體(SEQIDNO:7)、Sir22(SEQIDNO:3)、鏈球菌IgA結合肽(Sap;SEQIDNO:4)、修飾的Z-結構域蛋白質(SEQIDNO:12)和YDWIPSSAW(SEQIDNO:9)、或其IgA或IgM^合片段。31.權利要求29的組合物，其中所述肽包含選自N末端帽、C末端帽、D氨基酸、氨基酸替代物、擬肽序列和間隔物的修飾。32.權利要求28的組合物，其中所述化合物包含抗體、或其IgA或IgM結合片段。33.權利要求32的組合物，其中所述抗體是抗人IgA、或其IgA結合片段。34.權利要求32的組合物，其中所述抗體是抗人IgM、或其IgM結合片段。.35.權利要求28的組合物，其中所述雙功能螯合劑選自N3S、N2S2、PnA0、HYNIC、[M(CO)3(H20)3]+、PADA、DTPA、D0TA、組氨酸、三肽和四肽。36.權利要求35的組合物，其中所述三肽是Lys-Gly-Cys、Cys-Gly-Cys或Gly-Gly-Cys。37.權利要求35的組合物，其中所述四肽是Gly-Ala-Gly-Gly或Cys-Gly-Cys-Gly。38.權利要求28的組合物，其中所述可檢測標記是放射性標記。39.權利要求38的組合物，其中所述放射性標記選自"，c、mIn、66Ga、67Ga、68Ga、S6Y、9。Y、2，1、55Co、6°Ci"6ICu、62Cu、64Cu、67Cu、S2Rb、i85/187Re和攀Re。40.—種試劑盒，其包含(a)IgA或IgM結合化合物；(b)雙功能螯合劑；和(c)在藥學可接受載體中的可檢測標記，(d)用于檢測哺乳動物中的IgA或IgM腎臟疾病的使用說明。41.權利要求40的試劑盒，其中所述化合物進一步包含半乳糖和結合對的第一個成員；并且所述可^r測標記包含放射性標記肽，所述放射性標記肽包含半乳糖和結合對的第二個成員。42.權利要求41的試劑盒，其中所述放射性標記選自'，c、mIn、"'Ga、67Ga、68Ga、S6Y、9。Y、2"1.、55Co、，u、"Cu、62Cu、64Cu、67Cu、S2Rb、！S5/187Re和靡Re。43.權利要求41的試劑盒，其中所述結合對的第一個成員是鏈霉親和素，所述結合對的第二個成員是生物素。44.權利要求41的試劑盒，其中所述放射性標記肽是人血清白蛋白。全文摘要本發(fā)明的特征在于用非侵入性方法診斷哺乳動物中的IgA或IgM腎臟病癥，例如IgA腎病、過敏性紫癜和IgM腎病。本發(fā)明的特征還在于在這些病癥診斷中有用的組合物和試劑盒。文檔編號A61K49/00GK101287503SQ200680028357公開日2008年10月15日申請日期2006年8月3日優(yōu)先權日2005年8月3日發(fā)明者仇家舟,安德魯·G.·普勞特,羅伯特·思東·仇申請人:Rq生物科技有限公司;新英格蘭醫(yī)學中心醫(yī)院有限公司