專利名稱：一種黃芪多糖提取物的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥成分黃芪多糖的提取工藝，黃芪多糖具有增強(qiáng)免疫力、降低 血糖等藥理活性。
背景技術(shù)：
黃苗是豆科植物蒙古黃苗 Astragalus membranaceus (Fisch. )Bge. var. mongholicus (bge. ) hsiao.禾口膜莢黃苗(A. membranaceus (Fisch. ) Bge.)的干燥根。黃苗為 多年生草本，主要為栽培品，主產(chǎn)與東北和華北地區(qū)，亦野生于海拔800-1500米的高原草 原和山地林緣草地，及路旁荒地，干燥向陽地最宜生長。黃芪多糖具有降低血糖、降低血脂、軟化血管、增強(qiáng)免疫力，廣泛用于制造藥品、保 健食品，也用于制造飼料添加劑，用于動物保健。

發(fā)明內(nèi)容
現(xiàn)行藥典記載，黃芪有生黃芪、制黃芪之分。本發(fā)明制備黃芪多糖使用的是生黃
氏ο本發(fā)明提供了黃芪多糖的提取、分離、純化的方法，該方法工藝路線是1、黃芪用水、或水與甲醇、乙醇、丙酮等溶劑組成的二種及多種混合溶劑提取，提 取液濃縮，并無有機(jī)溶劑(如沒有用有機(jī)溶劑提取時也可以直接上柱)，加水至合適的體 積，去除沉淀。2、提取水溶液，通過常規(guī)處理后的大孔樹脂柱，常規(guī)水洗脫至糖試驗反應(yīng)陰性。大 孔樹脂為非極性大孔樹脂和弱極性樹脂，包括苯乙烯樹脂，乙烯基苯乙烯樹脂，甲基苯乙烯 樹脂。例如DlOl型大孔樹脂，AB-8型大孔樹。3、大孔樹脂柱流出液通過顆?；钚蕴恐｜S芪與活性炭的重量比為1 0.5 1 20，活性炭優(yōu)選粒度大于40目的顆粒。4、用水、3-10%的稀乙醇、5-15%的稀甲醇或3-10%的稀丙酮，洗脫至糖試驗反應(yīng) 陰性。5、用10%以上的乙醇水溶液，或甲醇或者15%以上的甲醇水溶液，或者10%以上 的丙酮水溶液洗脫至糖試驗反應(yīng)陰性。收集洗脫液并且濃縮至干，即得黃芪多糖提取物。為保證黃芪多糖的質(zhì)量，在生產(chǎn)過程中需要對洗脫液和產(chǎn)品中的黃芪多糖的含量 進(jìn)行測定，用于測定黃芪多糖含量的方法可以借助任何可行的檢測手段和公知的方法，本 發(fā)明參照有關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行黃芪多糖含量的測定。(一 )黃芪多糖提取物的總多糖的含量測定照紫外分光光度法測定(《中國藥典》2005年版一部附錄VID)測定。1、對照品溶液的制備取葡萄糖對照品約5mg，精密稱定，置50ml容量瓶中，加水使 溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取IOml至25ml容量瓶中，加水稀釋至刻度、搖勻、即得。2、5%的a-萘酚溶液取a_萘酚5g，用乙醇約70ml溶解，并用乙醇稀釋成IOOml。
3、50%硫酸乙醇溶液取乙醇約40ml，在攪拌下加入硫酸50ml，加乙醇至100ml， 攪拌均勻即得。4、標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備分別取葡萄糖的對照品溶液10，20，30，40，50，60μ 1，置于 IOml具塞刻度試管中，加5%的a-萘酚溶液0. 5ml，50%硫酸乙醇溶液5ml，搖勻，在80°C恒 溫水浴中加熱60分鐘后，取出，置于冰水浴中冷卻10分鐘后，在460nm處測定吸收度，繪出 標(biāo)準(zhǔn)曲線。線性范圍5-30 μ g ；回歸方程Y = 106. 54X+0. 086 ；相關(guān)系數(shù)R = O. 99955、樣品溶液制備取黃芪多糖提取物約0. 05克，精密稱定，置于50ml容量瓶中，用 水溶解并稀釋至刻度。4、含量的測定分別取葡萄糖的對照品溶液和樣品溶液各10 μ 1，置于具塞試管 中，加5%的a-萘酚溶液0. 5ml，50%硫酸乙醇溶液5ml，搖勻，在80°C恒溫水浴中加熱60 分鐘后，取出，置于冰水浴中冷卻10分鐘后，在460nm處測定吸收度，以吸收度計算含量。
具體實施例方式用以下的實施例對本發(fā)明作具體說明，但本發(fā)明并不限于下列實施例包含的內(nèi)容。[實施例一]取蒙古黃芪的干燥根500g，用70%的甲醇4000ml回流提取1小時，濾 取提取液，藥渣二次加70%的甲醇4000ml回流提取1小時，濾取提取液，藥渣三次加70% 的甲醇4000ml回流提取1小時，濾取提取液，合并三次提取液，濃縮至1000ml，并且無乙醇 味，加水1000ml，去除沉淀，通過常規(guī)處理后的DlOl型大孔樹脂柱(500克)，常規(guī)水洗脫至 近無色，并且糖試驗反應(yīng)陰性。流出液上已處理好的活性炭(IkglO目活性炭顆粒140°C加 熱烘烤4. 5小時)分離柱，用5%的稀甲醇洗至洗脫液糖試驗反應(yīng)陰性后，用60%的甲醇洗 脫至糖試驗反應(yīng)陰性。收集后洗脫液，真空濃縮至干，即得黃芪多糖提取物40. 4克。黃芪 多糖含量以葡萄糖計83.7%。[實施例二]取蒙古黃芪的干燥根1kg，用50%的甲醇8000ml回流提取1小時，濾 取提取液，藥渣二次加50%的甲醇8000ml回流提取1小時，濾取提取液，藥渣三次加50% 的甲醇8000ml回流提取1小時，濾取提取液，合并三次提取液，濃縮至1000ml，并且無甲醇 味，加水1000ml，去除沉淀，通過常規(guī)處理后的AB-8型大孔樹脂柱(500克)，常規(guī)水洗脫至 糖試驗反應(yīng)陰性，流出液上已處理好的活性炭(500g40目活性炭顆粒1401加熱烘烤4.5小 時)分離柱，用10%的稀甲醇洗至糖試驗反應(yīng)陰性，再用50%的甲醇3000ml洗脫，收集后 洗脫液，真空濃縮至干，即得黃芪多糖提取物70. 6克。黃芪多糖含量以葡萄糖計88. 8%。[實施例三]取膜莢黃芪的干燥根2kg，用30%的甲醇16升回流提取1小時，濾取 提取液，藥渣二次加30%的甲醇16升回流提取1小時，濾取提取液，藥渣三次加30%的甲 醇16升回流提取1小時，濾取提取液，三次提取液合并，濃縮至1000ml，并且無甲醇味，加水 1000ml，去除沉淀，通過常規(guī)處理后的DlOl型大孔樹脂柱(500克)，水洗脫至糖試驗反應(yīng)陰 性，流出液上已處理好的活性炭(2kgl0目活性炭顆粒140°C加熱烘烤4. 5小時)分離柱，用 13%的稀甲醇洗至洗脫液糖試驗反應(yīng)陰性，用60%的甲醇洗脫至糖試驗反應(yīng)陰性，收集后 洗脫液，真空濃縮至干，即得黃芪多糖提取物108. 4克。黃芪多糖含量以葡萄糖計95. 7%。[實施例四]取膜莢黃芪的干燥根500g，用60%的丙酮4000ml回流提取1小時，濾 取提取液，藥渣二次加60%的丙酮4000ml回流提取1小時，濾取提取液，藥渣三次加60%的丙酮4000ml回流提取1小時，濾取提取液，三次提取液合并，濃縮至1000ml，并且無丙酮味，加水1000ml，去除沉淀，通過常規(guī)處理后的南大DM2型(甲基苯乙烯型)大孔樹脂柱， 常規(guī)水洗脫至糖試驗反應(yīng)陰性，流出液上已處理好的活性炭(5kg粗活性炭140°C加熱烘烤 4. 5小時)分離柱，用4%的稀丙酮洗至洗脫液糖試驗反應(yīng)陰性，用30%的丙酮洗脫至糖試 驗反應(yīng)陰性，收集后洗脫液，真空濃縮至干，即得黃芪多糖提取物44. 4克。黃芪多糖含量以 葡萄糖計71.8%。[實施例五]取蒙古黃芪的干燥根1kg，用45%的丙酮8000ml回流提取1小時， 濾取提取液，藥渣二次加45%的丙酮8000ml回流提取1小時，濾取提取液，藥渣三次加 45%的丙酮8000ml回流提取1小時，濾取提取液，三次提取液合并，濃縮至1000ml，并且無 丙酮味，加水1000ml，去除沉淀，通過常規(guī)處理后的南大Dl型(乙基苯乙烯型)大孔樹脂 柱(1kg)，常規(guī)水洗脫至糖試驗反應(yīng)陰性，流出液上已處理好的活性炭(IOkg粗?；钚蕴?140°C加熱烘烤4. 5小時)分離柱，用7%的稀丙酮洗至洗脫液糖試驗反應(yīng)陰性，用50%的 丙酮洗脫至糖試驗反應(yīng)陰性，收集后洗脫液，真空濃縮至干，即得黃芪多糖提取物76. 9克。 黃芪多糖含量以葡萄糖計80. 3%。[實施例六]取黃芪的干燥根500g，用30%的丙酮4000ml回流提取1小時，濾取 提取液，藥渣二次加30%的丙酮4000ml回流提取1小時，濾取提取液，藥渣三次加30%的 丙酮4000ml回流提取1小時，濾取提取液，三次提取液合并，濃縮至1000ml，并且無丙酮味， 加水1000ml，去除沉淀，通過常規(guī)處理后的南大D8型大孔樹脂柱(1000克)，常規(guī)水洗脫至 糖試驗反應(yīng)陰性，流出液上已處理好的活性炭(500g20目活性炭140°C加熱烘烤4. 5小時) 分離柱，用10%的稀丙酮洗至洗脫液糖試驗反應(yīng)陰性，用70%的丙酮洗脫至糖試驗反應(yīng)陰 性，收集后洗脫液，真空濃縮至干，即得黃芪多糖提取物34. 2克。黃芪多糖含量以葡萄糖計 95. 3%。[實施例七]取黃芪的干燥根500g，用70%的乙醇4000ml回流提取1小時，濾取提 取液，藥渣二次加70%的乙醇4000ml回流提取1小時，濾取提取液，藥渣三次加70%的乙 醇4000ml回流提取1小時，濾取提取液，三次提取液合并，濃縮至1000ml，并且無乙醇味，加 水1000ml，去除沉淀，通過常規(guī)處理后的MD型大孔樹脂柱(100克)，常規(guī)水洗脫至糖試驗 反應(yīng)陰性，流出液上已處理好的活性炭(3kg活性炭顆粒140°C加熱烘烤4. 5小時)分離柱， 用4%的稀乙醇洗至洗脫液糖試驗反應(yīng)陰性，用20%的乙醇洗脫至糖試驗反應(yīng)陰性，收集 后洗脫液，真空濃縮至干，即得黃芪多糖提取物43. 4克。黃芪多糖含量以葡萄糖計62. 5%。[實施例八]取黃芪的干燥根500g，用50%的乙醇4000ml回流提取1小時，濾取 提取液，藥渣再用50%的乙醇4000ml回流提取1小時，濾取提取液，藥渣再用50%的乙醇 4000ml回流提取1小時，濾取提取液，三次提取液合并，濃縮至1000ml，并且無乙醇味，加水 1000ml，去除沉淀，通過常規(guī)處理后的DlOl型大孔樹脂柱，常規(guī)水洗脫至糖試驗反應(yīng)陰性， 流出液上已處理好的活性炭(6kg活性炭顆粒140°C加熱烘烤4. 5小時)分離柱，用7%的 稀乙醇洗至洗脫液糖試驗反應(yīng)陰性，用40%的乙醇洗脫至糖試驗反應(yīng)陰性，收集后洗脫液， 真空濃縮至干，即得黃芪多糖提取物38. 7克。黃芪多糖含量以葡萄糖計73. 4%。[實施例九]取黃芪的干燥根500g，用30%的乙醇4000ml回流提取1小時，濾取 提取液，藥渣二次加30%的乙醇4000ml回流提取1小時，濾取提取液，藥渣三次加30%的 乙醇4000ml回流提取1小時，濾取提取液，三次提取液合并，濃縮至1000ml，并且無乙醇味，加水1000ml，去除沉淀，通過常規(guī)處理后的大孔樹脂柱，常規(guī)水洗脫至糖試驗反應(yīng)陰性，流 出液上已處理好的活性炭(5kg活性炭顆粒140°C加熱烘烤4. 5小時)分離柱，用10%的稀 乙醇洗至洗脫液糖試驗反應(yīng)陰性，用40%的乙醇洗脫至糖試驗反應(yīng)陰性。收集后洗脫液，真 空濃縮至干，即得黃芪多糖提取物33. 5克。黃芪多糖含量以葡萄糖計93. 7%。[實施例十]取黃芪的干燥根500g，用水4000ml煎煮0.5小時，濾取提取液，藥渣 二次加水3000ml煎煮1小時，濾取提取液，藥渣三次加水4000ml煎煮0. 5小時，濾取提取 液，三次提取液合并，去除沉淀(如有沉淀)，通過常規(guī)處理后的大孔樹脂柱，常規(guī)水洗脫至 糖試驗反應(yīng)陰性，流出液通過活性炭(Ikg活性炭105°C活化4小時)分離柱，用4%的稀乙 醇洗至洗脫液糖試驗反應(yīng)陰性，用40%的乙醇洗脫至糖試驗反應(yīng)陰性，收集后洗脫液，真空 濃縮至干，即得黃芪多糖提取物43. 3克。黃芪多糖含量以葡萄糖計80. 5%。[實施例i^一]取黃芪的干燥根lkg，用水6000ml煎煮0. 5小時，濾取提取液，藥渣 二次加水4000ml煎煮1小時，濾取提取液，藥渣三次加水4000ml煎煮1小時，濾取提取液， 三次提取液合并，去除沉淀，通過常規(guī)處理后的DlOl型大孔樹脂柱(1000克)，常規(guī)水洗脫 至糖試驗反應(yīng)陰性，流出液通過活性炭(0. 5kg活性炭110°C活化4小時)分離柱，用7%的 稀乙醇洗至洗脫液糖試驗反應(yīng)陰性，用40%的乙醇洗脫至糖試驗反應(yīng)陰性，收集后洗脫液， 真空濃縮至干，即得黃芪多糖提取物93. 3克。黃芪多糖含量以葡萄糖計85. 9%。[實施例十二]取黃芪的干燥根2kg，用水12升煎煮0. 5小時，濾取提取液，藥渣 二次加水8升煎煮1小時，濾取提取液，藥渣三次加水8升煎煮小時，濾取提取液，三次提取 液合并，去除沉淀，通過常規(guī)處理后的AB-8型大孔樹脂柱(500克)，常規(guī)水洗脫至糖試驗反 應(yīng)陰性，流出液通過活性炭(Ikg活性炭顆粒120°C活化4小時)分離柱，用10%的稀乙醇 洗至洗脫液糖試驗反應(yīng)陰性，用40%的乙醇洗脫至糖試驗反應(yīng)陰性，收集后洗脫液，真空濃 縮至干，即得黃芪多糖提取物153. 5克。黃芪多糖含量以葡萄糖計96. 5%。[實施例十三]取黃芪的干燥根500g，用水4000ml煎煮0.5小時，濾取提取液，藥 渣加水3000ml煎煮1小時，濾取提取液，藥渣再用水3000ml煎煮1小時，濾取提取液，三次 提取液合并，去除沉淀，通過常規(guī)處理后的DlOl型大孔樹脂柱(100克)，常規(guī)水洗脫至糖試 驗反應(yīng)陰性，流出液通過活性炭(Ikg活性炭顆粒130°C活化4小時)分離柱，用水常規(guī)洗至 糖試驗反應(yīng)陰性，用40%的乙醇洗脫至糖試驗反應(yīng)陰性，收集后洗脫液，真空濃縮至干，即 得黃芪多糖提取物52. 6克。黃芪多糖含量以葡萄糖計51. 5%。[實施例十四]取黃芪的干燥根10kg，用水60升煎煮30小時，濾取提取液，藥渣二 次加水50升煎煮1小時，濾取提取液，藥渣三次加水50升煎煮1小時，濾取提取液，三次提 取液合并，去除沉淀，通過常規(guī)處理后的AB-g型大孔樹脂柱(Ikg)，常規(guī)水洗脫至糖試驗反 應(yīng)陰性，流出液上已處理好的活性炭(5kg活性炭顆粒140°C加熱烘烤4. 5小時)分離柱，用 5%的稀乙醇洗至洗脫液糖試驗反應(yīng)陰性，用40%的乙醇洗脫至糖試驗反應(yīng)陰性，收集后洗 脫液，真空濃縮至干，即得黃芪多糖提取物965克。黃芪多糖含量以葡萄糖計61. 7%。
權(quán)利要求
一種黃芪多糖提取物的制備方法，其特征是由以下步驟組成①、黃芪用極性溶劑提取，提取液濃縮至無有機(jī)溶劑；②、提取液通過大孔樹脂柱，水洗脫至糖試驗反應(yīng)陰性；③、水洗流出液通過活性炭顆粒柱；④用是水、3-10％的稀乙醇、5-15％的稀甲醇或3-10％的稀丙酮洗脫至糖試驗反應(yīng)陰性；⑤用10％以上的乙醇水溶液、15％以上的甲醇水溶液、10％以上的丙酮水溶液或者甲醇洗脫至糖試驗反應(yīng)陰性；⑥收集步驟⑤洗脫部分并且濃縮至干，即得黃芪多糖提取物。
2.按照權(quán)利要求1中所述方法，其中①項的極性溶劑是水、或水與甲醇、乙醇、丙酮組 成的二種或二種以上的混合溶劑。
3.按照權(quán)利要求1中所述方法，其中②項大孔樹脂是非極性大孔樹脂，包括苯乙烯樹 月旨，乙烯基苯乙烯樹脂，甲基苯乙烯樹脂。
4.按照權(quán)利要求1中所述方法，其中③項活性炭顆粒是粒度大于40目的活性炭顆粒。
5.按照權(quán)利要求1中所述方法，其中③項的活性炭與黃芪的重量之比為0.5 1 10 1。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種黃芪多糖提取物的制備方法，該方法是將黃芪的提取液通過大孔樹脂柱，流出液通過活性炭吸附，用水，或者較低濃度有機(jī)溶劑水溶液洗脫雜質(zhì)，再用較高濃度有機(jī)溶劑水溶液洗脫黃芪多糖，后洗脫液濃縮至干，即得黃芪多糖提取物。黃芪多糖提取物的多糖含量可達(dá)50％以上。
文檔編號A61P37/04GK101812136SQ20091007850
公開日2010年8月25日 申請日期2009年2月25日 優(yōu)先權(quán)日2009年2月25日
發(fā)明者羅河生 申請人:羅河生