專利名稱：瓜氨酸用于治療與蛋白質(zhì)羰基化增加相關(guān)的病理學(xué)狀態(tài)的用途的制作方法
瓜氨酸用于治療與蛋白質(zhì)羰基化增加 相關(guān)的病理學(xué)狀態(tài)的用途
本發(fā)明的目標(biāo)在于瓜氨酸的新用途，即它在蛋白質(zhì)羰基化增加和 治療由此引起的病理學(xué)狀態(tài)方面的用途。
已明確確定，細(xì)胞外和細(xì)胞內(nèi)介質(zhì)的蛋白質(zhì)在體內(nèi)為關(guān)于活性氧
種類和活性氮種類的首選的靶。估計(jì)蛋白質(zhì)可以捕獲高達(dá)50-70%的由 細(xì)胞合成的自由基種類。觀察到幾種類型的損傷氨基酸側(cè)鏈的氧化 (或硝化)，或者多肽鏈的氧化(其中特別的情況是羰基化)，隨后 為鏈間和鏈內(nèi)鍵的斷裂和/或形成。
蛋白質(zhì)的羰基化是可以不依賴于氧化現(xiàn)象的現(xiàn)象。
蛋白質(zhì)的這些修飾一起可以引起結(jié)構(gòu)的修飾，其結(jié)果可以是它們 的失活，后者可能對(duì)于細(xì)胞來(lái)說(shuō)具有招致?lián)p害的后果。此外，在現(xiàn)有 技術(shù)中，看起來(lái)不存在用于修復(fù)羰基化的蛋白質(zhì)的系統(tǒng)。
"蛋白質(zhì)的羰基化"這一表述是指與CO基團(tuán)的產(chǎn)生相關(guān)的蛋白質(zhì) 的化學(xué)修飾。因此，這種羰基化(其可以是蛋白質(zhì)氧化的特別情況) 引起蛋白質(zhì)功能的喪失(參見(jiàn)Nystr6m， r力e/o"i72a/ (2005) 24， 1311-1317;和Dalle-Donne等人，/. Ce//. ，第10巻，no.
2， 2006，第389-406頁(yè))。盡管生物體具有一定數(shù)目的防御系統(tǒng)(谷 胱甘肽、過(guò)氧化氬酶、SOD等)，但在某些情況下這些防御系統(tǒng)可以 被越過(guò)且顯得不足。
羰基化的化合物構(gòu)成了伴隨衰老和許多病理學(xué)狀態(tài)的令人感興趣 的標(biāo)志物。這是因?yàn)?，這些生理病理學(xué)情況(神經(jīng)變性疾病、炎性疾 病等)的特征在于組織水平上的羰基化的蛋白質(zhì)的增加。因此，必需 開(kāi)發(fā)旨在減少蛋白質(zhì)的羰基化的策略。
瓜氨酸(或2-氨基-5-(氨基甲酰基氨基)戊酸)是ct-氨基酸，并 且首次從西瓜中分離出來(lái)。瓜氨酸是生物體從其他營(yíng)養(yǎng)物開(kāi)始產(chǎn)生的非必需氨基酸。例如，瓜氨酸與鳥(niǎo)氨酸和精氨酸一起在尿素循環(huán)中起 著特別重要的作用。最后，瓜氨酸在精氨酸和一氧化氮的體內(nèi)穩(wěn)態(tài)中 起著主要作用。
目前，瓜氨酸在某些藥物應(yīng)用范圍內(nèi)使用。因此，歐洲專利申請(qǐng)
EP 1 495 755涉及瓜氨酸在制備用于治療與腸功能不全相關(guān)的病理學(xué) 狀態(tài)的藥物中的用途。更具體地，這個(gè)申請(qǐng)中所提及的病理學(xué)狀態(tài)如 下腸切除術(shù)后的短腸綜合征、乳糜瀉、腸的慢性炎性疾病、與衰老 相關(guān)的腸功能不全和與輻射相關(guān)的腸功能不全。然而，這個(gè)申請(qǐng)未提 及蛋白質(zhì)的羰基化。
國(guó)際申請(qǐng)W0 2005/115371描述了包含與瓜氨酸相聯(lián)合的抑制素的 藥物組合物，其用于制備在治療原發(fā)性或繼發(fā)性動(dòng)脈粥樣硬化中，以 及在治療變性性疾病例如阿爾茨海默病中使用的藥物。與包含單獨(dú)的 抑制素或瓜氨酸的組合物相比較而言，這些組合物的^f吏用呈現(xiàn)出協(xié)同 作用。
申請(qǐng)F(tuán)R 2691359描述了瓜氨酸的蘋(píng)果酸鹽在患有慢性阻塞性支氣 管肺病(BPCO)的患者中和在患有雷-約(REYE-JOHNSON )肌病(線粒 體肌病)的患者中的用途。瓜氨酸的蘋(píng)果酸鹽的這種有益效應(yīng)可能是 由于肌肉的脂肪利用變好，這導(dǎo)致肌肉的蛋白水解減少。
該美國(guó)專利申請(qǐng)描述了在神經(jīng)變性疾病(癡呆、阿爾茨海默病、
帕金森病)、視網(wǎng)膜病變(年齡相關(guān)的黃斑變性)和肌萎縮性側(cè)索硬 化的情況下，L-瓜氨酸作為食品補(bǔ)充劑的口服用途。這種瓜氨酸攝取 增加了精氨酸的血漿濃度，并因此增加了后者在一氧化氮的產(chǎn)生中的 可用性。在這些適應(yīng)癥中，瓜氨酸與肌醇六磷酸和碳酸鈣相聯(lián)合。
美國(guó)專利申請(qǐng)US 2004/0235953描迷并要求保護(hù)用于預(yù)防和治療 性地治療與一氧化氮形成減少相關(guān)的病理學(xué)狀態(tài)(尤其是敗血癥(全 身性感染))的方法，所述方法包括施用一氧化氮的前體，其可以是 瓜氨酸。
美國(guó)專利申請(qǐng)US 2001/0056068涉及L-瓜氨酸用于治療與一氧化 氮缺乏相關(guān)的疾病的用途，所述疾病例如為動(dòng)脈粥樣硬化、腦缺血和阿爾茨海默病。
XP 00 24 56 361公開(kāi)了包含瓜氨酸的眼用制劑以及其以中醫(yī)學(xué) 在治療白內(nèi)障中的用途。這些制劑作用于睫狀血管系統(tǒng)和角膜周血管 網(wǎng)。
物的氧清除試劑，以及其尤其是在阿爾茨海默型癡呆、白內(nèi)障問(wèn)題和 皮膚損傷中的用途。
盡管這些文獻(xiàn)描述了單獨(dú)的或組合的瓜氨酸在制備在治療神經(jīng)變 性疾病例如阿爾茨海默病、動(dòng)脈粥樣硬化、白內(nèi)障問(wèn)題或全身性感染 (敗血癥)和治療線粒體肌病中有用的藥物，以及適合于在神經(jīng)變性 疾病(癡呆、阿爾茨海默病、帕金森病)、視網(wǎng)膜病變(年齡相關(guān)的 黃斑變性)和肌萎縮性側(cè)索硬化的情況下使用的營(yíng)養(yǎng)藥物制品 (nutraceutique)組合物中的用途，但這些文獻(xiàn)中無(wú)一描述了瓜氨酸 對(duì)蛋白質(zhì)的羰基化的直接影響。
如此，本發(fā)明的目的之一是提供用于預(yù)防和治療蛋白質(zhì)羰基化的 增加和由此引起的病理學(xué)狀態(tài)的手段。
本發(fā)明涉及下述式(I)的L-瓜氨酸
或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備藥物組合物中的用途，所述組合物用于
抑制在某些病理學(xué)狀態(tài)中觀察到的相關(guān)蛋白質(zhì)的羰基化的增加，因此 尤其用于治療神經(jīng)變性疾病例如阿爾茨海默病或帕金森病，用于治療 視網(wǎng)膜病變、類風(fēng)濕性多關(guān)節(jié)炎、動(dòng)脈粥樣硬化、肌萎縮性側(cè)索硬化、 腦缺血，用于治療白內(nèi)障問(wèn)題或全身性感染(敗血癥)，用于治療與 皮膚衰老相關(guān)的病理學(xué)狀態(tài)例如皺紋、色素減退和色素沉著過(guò)度的斑 點(diǎn)以及彈性的喪失，更特別地與組織例如眼、肌肉和腦的衰老相關(guān)的病理學(xué)狀態(tài)，用于治療與線粒體功能障礙相關(guān)的病理學(xué)狀態(tài)，即源自 于線粒體病的肌病，用于治療與哺乳動(dòng)物(特別是伴倡動(dòng)物)的營(yíng)養(yǎng) 缺乏和壽命增加相關(guān)的惡病質(zhì)。
本發(fā)明的目標(biāo)還在于包含L-瓜氨酸或其美容學(xué)上可接受的鹽的 組合物的用途，所述用途為用于與相關(guān)蛋白質(zhì)的羰基化相關(guān)的紊亂的 美容治療，尤其是在與皮膚衰老相關(guān)的病理學(xué)狀態(tài)(例如皺紋、色素 減退和色素沉著過(guò)度的斑點(diǎn)以及彈性的喪失)的情況下。
本發(fā)明的目標(biāo)還在于包含L-瓜氨酸或其營(yíng)養(yǎng)藥物制品學(xué)上可接
受的鹽的組合物的用途，所述用途為用于通過(guò)抑制相關(guān)蛋白質(zhì)的羰基
化的增加來(lái)對(duì)與蛋白質(zhì)羰基化增加相關(guān)的紊亂進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)藥物制品治療
(traitement nutraceutique )， 因此尤其用于治療神經(jīng)變性疾病例
如阿爾茨海默病或帕金森病，用于治療視網(wǎng)膜病變、類風(fēng)濕性多關(guān)節(jié)
炎、動(dòng)脈粥樣硬化、肌萎縮性側(cè)索硬化、腦缺血，用于治療白內(nèi)障問(wèn)
題或全身性感染(敗血癥)，用于治療與皮膚衰老相關(guān)的病理學(xué)狀態(tài)
例如皺紋、色素減退和色素沉著過(guò)度的斑點(diǎn)以及彈性的喪失，更特別
地與組織例如眼、肌肉和腦的衰老相關(guān)的病理學(xué)狀態(tài)，用于治療與線
粒體功能障礙相關(guān)的病理學(xué)狀態(tài)，即源自于線粒體病的肌病，用于治 療與哺乳動(dòng)物的營(yíng)養(yǎng)缺乏和壽命增加相關(guān)的惡病質(zhì)。
營(yíng)養(yǎng)藥物制品意指宣稱健康的任何產(chǎn)品(健康食品、功能食品 (alicament)、 邊緣產(chǎn)品(produits fron"6res)等)。
本發(fā)明的目標(biāo)還在于包含L-瓜氨酸的組合物的用途，所述組合物 用于作為適合于在下述的情況下使用的食品補(bǔ)充劑神經(jīng)變性疾病例 如阿爾茨海默病或帕金森病，視網(wǎng)膜病變，類風(fēng)濕性多關(guān)節(jié)炎，動(dòng)脈 粥樣硬化，肌萎縮性側(cè)索硬化，腦缺血，白內(nèi)障問(wèn)題或全身性感染(敗 血癥)，皮膚衰老例如皺紋、色素減退和色素沉著過(guò)度的斑點(diǎn)以及彈 性的喪失，更特別地組織例如眼、肌肉和腦的衰老，與線粒體功能障 礙相關(guān)的病理學(xué)狀態(tài)，即源自于線粒體病的肌病，與哺乳動(dòng)物(特別 是伴倡動(dòng)物)的營(yíng)養(yǎng)缺乏和壽命增加相關(guān)的惡病質(zhì)。
在本發(fā)明的范圍內(nèi)，L-瓜氨酸意指商購(gòu)可得的產(chǎn)品，尤其是由Sigma、 Biocodex或Kyowa Hakko供應(yīng)的，或者源自植物(尤其是西 瓜(/a/2a&s))的尤其以果汁、果肉或提取物形式存在的 天然產(chǎn)品。
"藥學(xué)上可接受的鹽"、"美容學(xué)上可接受的鹽"和"營(yíng)養(yǎng)藥物 制品學(xué)上可接受的鹽"意指諸如下列的瓜氨酸的鹽瓜氨酸的蘋(píng)果酸 鹽、瓜氨酸的oc-酮戊二酸鹽、瓜氨酸的檸檬酸鹽或瓜氨酸的oc-酮異 己酸鹽。
在本發(fā)明的一個(gè)有利的實(shí)施方案中，如此地使用如上定義的L-瓜 氨酸來(lái)制備藥物組合物、用于美容治療的組合物、用于作為食品補(bǔ)充 劑的組合物、和用于營(yíng)養(yǎng)藥物制品治療的組合物或健康食品，從而使 得對(duì)于大約0. 1 g/kg/天至大約0. 5 g/kg/天，尤其是大約0. 25 g/kg/ 天的施用劑量而言，L-瓜氨酸的單位劑量為大約2 g至大約20 g，尤 其是大約10 g。
在本發(fā)明的一個(gè)有利的實(shí)施方案中，以每日l(shuí)-3劑，優(yōu)選地以1 劑攝取L-瓜氨酸。
根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)有利的實(shí)施方案，所述藥物組合物和所述用 于營(yíng)養(yǎng)藥物制品治療的組合物(或健康食品)以干的形式、水溶液的 形式、水醇性或油性形式、水包油或油包水或復(fù)合型乳劑的形式、水 性或油性凝膠的形式存在。關(guān)于用于美容治療的組合物，可以使用任 何合適的載體，即任何美容學(xué)上，尤其是皮膚病學(xué)上可接受的賦形劑、 載體或支持物。此類支持物對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是眾所周知的， 并且也由具有一般應(yīng)用范圍的美容或皮膚病學(xué)組合物所產(chǎn)生。例如， 可以采用混合物、配制劑、單層包嚢物(二微團(tuán)(micelles))、雙層 包嚢物(脂質(zhì)體)、多層包嚢物(球粒(sph&ulites))和美容學(xué)中 已知的任何其他支持物。
本發(fā)明涉及如上定義的L-瓜氨酸在制備藥物組合物中的用途，所 述藥物組合物以通過(guò)口服、經(jīng)腸或腸胃外途徑可施用的形式存在。在 經(jīng)腸營(yíng)養(yǎng)或腸胃外營(yíng)養(yǎng)的情況下，它可以與所迷營(yíng)養(yǎng)相混合，或者優(yōu) 選地，在經(jīng)腸營(yíng)養(yǎng)的探頭中以推注形式或在腸胃外營(yíng)養(yǎng)中以Y形管形式進(jìn)行施用o
本發(fā)明還涉及如上定義的L-瓜氨酸在制備用于美容治療的組合 物中的用途，所述組合物以通過(guò)局部途徑可施用的形式存在。本發(fā)明 還涉及如上定義的L-瓜氨酸在制備用于營(yíng)養(yǎng)藥物制品治療的組合物 中的用途，所述組合物以通過(guò)口服途徑可施用的形式存在。
通過(guò)經(jīng)腸途徑的施用尤其相應(yīng)于通過(guò)鼻胃管或鼻腸管、通過(guò)胃切 開(kāi)術(shù)或空腸造口術(shù)來(lái)進(jìn)行的施用；通過(guò)腸胃外途徑的施用尤其相應(yīng)于 通過(guò)中央、外周或皮下靜脈內(nèi)灌注來(lái)進(jìn)行的施用。
根據(jù)一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，在本發(fā)明的范圍內(nèi)使用L-瓜氨酸來(lái)制 備藥物組合物、用于美容治療的組合物、用于食品補(bǔ)充劑的組合物或 用于營(yíng)養(yǎng)藥物制品治療的健康食品，所迷組合物還包含一種或多種用 于治療與營(yíng)養(yǎng)缺乏相關(guān)的惡病質(zhì)的其他化合物，例如亮氨酸、谷氨酰 胺、精氨酸、鳥(niǎo)氨酸以及它們的各種可使用的鹽例如a-酮戊二酸鹽或 a-酮異己酸鹽。
在用于營(yíng)養(yǎng)藥物制品治療的組合物的情況下，可以單獨(dú)地或者在 用于口服營(yíng)養(yǎng)的營(yíng)養(yǎng)混合物中使用所述化合物。
根據(jù)一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，在本發(fā)明的范圍內(nèi)使用L-瓜氨酸來(lái)制 備藥物組合物、用于美容治療的組合物、食品補(bǔ)充劑或用于營(yíng)養(yǎng)藥物 制品治療的組合物(健康食品)，所述組合物還包含一種或多種用于 治療與營(yíng)養(yǎng)缺乏相關(guān)的惡病質(zhì)的其他化合物，例如亮氨酸、谷氨酰胺、 精氨酸、鳥(niǎo)氨酸以及它們的各種可使用的鹽例如a-酮戊二酸鹽或oc-酮異己酸鹽，這些物質(zhì)單獨(dú)地存在或者在用于口服營(yíng)養(yǎng)的營(yíng)養(yǎng)混合物 中。
根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明涉及這樣的產(chǎn)品，其包含 - L-瓜氨酸或者其藥學(xué)上或營(yíng)養(yǎng)藥物制品學(xué)上可接受的鹽，和 -至少 一種用于治療與營(yíng)養(yǎng)缺乏相關(guān)的惡病質(zhì)的其他化合物，例 如亮氨酸、谷氨酰胺、精氨酸、鳥(niǎo)氨酸以及它們的各種可使用的鹽例 如a-酮戊二酸鹽或oc-酮異己酸鹽，這些物質(zhì)單獨(dú)地存在，或者在用 于腸胃外營(yíng)養(yǎng)的營(yíng)養(yǎng)混合物中，或在用于經(jīng)腸營(yíng)養(yǎng)的混合物或用于口服營(yíng)養(yǎng)的混合物中，
以作為用于在治療與蛋白質(zhì)羰基化增加相關(guān)的病理學(xué)狀態(tài)的情況
下同時(shí)、分開(kāi)或在時(shí)間上錯(cuò)開(kāi)使用的聯(lián)合產(chǎn)品(produit de combinaison), 所述病理學(xué)狀態(tài)如上定義。
下文的實(shí)施例1和2以及

圖1舉例說(shuō)明了本發(fā)明。
圖1顯示了在大鼠中的肌蛋白質(zhì)的羰基化。縱坐標(biāo)軸相應(yīng)于以
,ol/g表示的羰基化的蛋白質(zhì)的量。柱"1"相應(yīng)于健康的大鼠；柱 "2"相應(yīng)于營(yíng)養(yǎng)缺乏的大鼠；柱"3"相應(yīng)于用標(biāo)準(zhǔn)飲食制度(regime)
再飼喂的大鼠；和柱"4"相應(yīng)于用富含瓜氨酸的飲食制度再飼喂的大鼠。
實(shí)施例1:瓜氨酸在營(yíng)養(yǎng)缺乏-再飼喂的大鼠中的影響
材料和方法
I -繼
^H吏用的戶斤有4匕學(xué)i式劑來(lái)自 Sigma ( Saint—Quentin—Fallavier， France) 。 L-瓜氨酸由Laboratoires Biocodex (Compi^gne， France) 無(wú)償提供。
II -動(dòng)物的維持
將年齡為19個(gè)月的Sprague-Dawley雄性大鼠(Charles River Laboratories, L，arbresles， France)在恒溫環(huán)境(23"C土1。C)下 置于單個(gè)的籠中，并經(jīng)歷12小時(shí)的光照/黑暗(8點(diǎn)至20點(diǎn)為黑暗) 循環(huán)。該計(jì)戈寸的負(fù)責(zé)人被農(nóng)業(yè)和林業(yè)部(Ministerede "Agriculture et de la For")批準(zhǔn)(編號(hào)75, 522 )可以施行這種類型的實(shí)驗(yàn)。此 外，實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物的使用和維持是遵守法規(guī)的(D2001-486 )，并且與歐 洲法律(Journal 0fficiel de la Communau" Europ6enne L358 12/18/1986 ) —致。
將大鼠馴化2周，在此期間測(cè)量自發(fā)的飲食消費(fèi)。用含有17%的蛋白質(zhì)，3%的脂質(zhì)，59%的糖類以及21%的水、纖維、維生素和礦物質(zhì) 的標(biāo)準(zhǔn)飲食制度(A04， UAR， ViUemoisson-sur-Orge， France )來(lái) 飼喂大鼠。在該時(shí)間段期間的平均飲食攝入量為34.4 g/天。 III -實(shí)驗(yàn)方案
在馴化期后，將大鼠隨機(jī)分為4組由隨意(acT //6/^邁，AL) 飼喂12周的大鼠(n=10)組成的對(duì)照組，和在同一時(shí)間段期間經(jīng)歷飲 食限制的另外3個(gè)組用僅50%的自發(fā)攝入物(即17. 2 g)，用標(biāo)準(zhǔn) 飲食制度(UAR A04)進(jìn)行飼喂。在限制期結(jié)束時(shí)，將一個(gè)組的動(dòng)物 (n=10)處死(R組)，并且將其余2個(gè)組的大鼠用90%的自發(fā)才聶入物 (即30. 9 g )，即用富含非必需氨基酸的飲食制度(AANE組以等摩 爾方式提供的丙氨酸、天冬酰胺、甘氨酸、絲氨酸、組氨酸和脯氨酸) 或富含瓜氨酸的飲食制度(5g/kg/天)(瓜氨酸組)再飼喂l周。這 2個(gè)組的攝取是等氮的和等熱量的。限制于90%的自發(fā)攝取使得能夠確 保大鼠消費(fèi)掉提供給它們的所有食物。 III.1蛋白質(zhì)的羰基化水平的評(píng)估
影響構(gòu)成蛋白質(zhì)的氨基酸的結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)氧化過(guò)程是復(fù)雜的，并 且全部引起羰基的形成。這就是為什么，選擇通過(guò)從300 mg脛骨前肌 樣品中定量羰基化的衍生物來(lái)總體地評(píng)估肌蛋白質(zhì)的氧化。因此，所 使用的方法是非特異于氨基酸類型的技術(shù)，其基于采用分光光度測(cè)定 法對(duì)通過(guò)稱為二硝基苯肼(DNPH)的化合物結(jié)合在羰基上而形成的復(fù) 合物進(jìn)行含量測(cè)定。分離肌蛋白質(zhì)。將蛋白質(zhì)粒狀沉淀接納在600 u 1 SET緩沖液中。將溶解的蛋白質(zhì)分成2個(gè)相等的級(jí)分，以便具有2個(gè) 包含相同量的蛋白質(zhì)(1-1. 5 mg/ml )的杯子(cupule)。 一杯充當(dāng)空 白，而另一杯用于定量羰基。將500jal 12.5 mMDNPH加入到測(cè)量杯 中，和將500 m 1 2mhc1加入到空白杯中。在環(huán)境溫度下溫育15分鐘 后，用500jj1 30% TCA使樣品進(jìn)行沉淀，并且在15000 rpm下離心 IO分鐘。將粒狀沉淀接納在1 ml 10% TCA中，并且在15000 rpm下 再次離心10分鐘。然后，用乙醇乙酸乙酯相繼洗滌4次。將最后的 粒狀沉淀在50。C的水浴中加熱30分鐘。在1500Q rpm下再次離心5分鐘后，在280 nm處(蛋白質(zhì)的含量測(cè)定)和在380 nm處(DNPH的 含量測(cè)定)對(duì)800 in 1上清液施行分光光度測(cè)定法的閱讀。以"nmol/mg 蛋白質(zhì)"來(lái)表示羰基含量。 III. 2結(jié)果
所獲得的結(jié)果顯示在圖1中。
清楚地顯示，與健康大鼠相比較，營(yíng)養(yǎng)缺乏導(dǎo)致蛋白質(zhì)的羰基化 增加(柱2對(duì)柱1)。再詞喂仍增加這個(gè)現(xiàn)象，并且營(yíng)養(yǎng)缺乏-再飼喂 的事件伴隨著肌蛋白質(zhì)的羰基化的劇烈增加(柱3對(duì)柱2)。相反地， 當(dāng)飲食富含瓜氨酸時(shí)，這個(gè)現(xiàn)象被完全消除(柱4對(duì)柱3),其中蛋 白質(zhì)的羰基化類似于在健康大鼠中所觀察到的。
實(shí)施例2:瓜氨酸在老年大鼠中的影響
材料和方法
I -她
所使用的所有化學(xué)試劑來(lái)自Sigma ( Saint-Quentin-Fallavier， France) 。 L-瓜氨酸由Laboratoires Biocodex (Compiegne， France) 無(wú)償提供。
II -動(dòng)物的維持
將年齡為25個(gè)月的Sprague-Dawley雄性大鼠(Charles River Laboratories, L，arbresles， France)在恒溫環(huán)境(23°C±1。C)下 置于單個(gè)的籠中，并經(jīng)歷12小時(shí)的光照/黑暗(8點(diǎn)至20點(diǎn)為黑暗) 循環(huán)。該計(jì)劃的負(fù)責(zé)人被農(nóng)業(yè)和林業(yè)部(Ministerede l，Agriculture et de la For")批準(zhǔn)(編號(hào)75， 522 )可以施行這種類型的實(shí)驗(yàn)。此 外，實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物的使用和維持是遵守法規(guī)的(D2001-486 )，并且與歐 洲法律(Journal Officiel de la Communau" Europ6enne L358 12/18/1986 ) —致。
將大鼠馴化2周，在此期間測(cè)量自發(fā)的飲食消費(fèi)。用含有17%的 蛋白質(zhì)，3°/ 的脂質(zhì)，59%的糖類以及21%的水、纖維、維生素和礦物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)飲食制度(A04,醒，Villemoisson-sur-Orge， France)來(lái) 伺喂大鼠。在該時(shí)間段期間的平均飲食攝入量為34.4 g/天。
III -實(shí)驗(yàn)方案
在馴化期后，將大鼠隨機(jī)分為2組
CIT組(n-5):在l個(gè)月期間，動(dòng)物接受富含CIT ( 1 g/kg/天) 的標(biāo)準(zhǔn)飲食。
AANE組(n-4):在1個(gè)月期間，動(dòng)物接受通過(guò)添加非必需氨基 酸(以等摩爾方式提供的丙氨酸、天冬酰胺、甘氨酸、絲氨酸、組氨 酸和脯氨酸)而變得與CIT組等氮的標(biāo)準(zhǔn)飲食。
在研究結(jié)束時(shí)，對(duì)動(dòng)物實(shí)施安樂(lè)死，并且將腦取出，稱重，在液 氮中冷凍并貯存于-8(TC，直至進(jìn)行分析。
蛋白質(zhì)的羰基化水平的評(píng)估
影響構(gòu)成蛋白質(zhì)的氨基酸的結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)氧化過(guò)程是復(fù)雜的，并 且全部引起羰基的形成。這就是為什么，選擇通過(guò)從l g腦樣品中定 量羰基化的衍生物來(lái)總體地評(píng)估肌蛋白質(zhì)的氧化。因此，所使用的方 法是非特異于氨基酸類型的技術(shù)，其基于采用分光光度測(cè)定法對(duì)通過(guò) 二硝基苯肼(DNPH)結(jié)合在羰基上而形成的復(fù)合物進(jìn)行含量測(cè)定。分 離腦蛋白質(zhì)。將蛋白質(zhì)粒狀沉淀接納在600ja 1 SET緩沖液中。將溶解 的蛋白質(zhì)分成2個(gè)相等的級(jí)分，以便具有2個(gè)包含相同量的蛋白質(zhì) (l-1.5mg/ml)的杯子(cupule)。 一杯充當(dāng)空白，而另一杯用于定 量羰基。將500 y 1 12. 5 mMDNPH加入到測(cè)量杯中，和將500 m 1 2MHC1 加入到空白杯中。在環(huán)境溫度下溫育15分鐘后，用500|il 30% TCA 使樣品進(jìn)行沉淀，并且在15000 rpm下離心10分鐘。將粒狀沉淀接納 在l ml 10°/。 TCA中，并且在15000 rpm下再次離心10分鐘。然后， 用乙醇乙酸乙酯相繼洗滌4次。將最后的粒狀沉淀在5(TC的水浴中 加熱30分鐘。在15000 rpm下再次離心5分鐘后，在280 nm處(蛋 白質(zhì)的含量測(cè)定)和在380 nm處(DNPH的含量測(cè)定)對(duì)800|i 1上清 液施行分光光度測(cè)定法的閱讀。以"jLimol/g器官"來(lái)表示羰基含量。
IV -結(jié)果羰基化的蛋白質(zhì)
_ (|nmol/g)
AANE
CIT_
平均值± SEM
所獲得的結(jié)果顯示在上表中。顯然地，在老年健康大鼠中富含CIT 的營(yíng)養(yǎng)供給引起腦蛋白質(zhì)的羰基化減少了大約10%。
180 ± 28 164 ± 1權(quán)利要求
1.下述式(I)的L-瓜氨酸或者其藥學(xué)上、美容學(xué)上或營(yíng)養(yǎng)藥物制品學(xué)上可接受的鹽在制備組合物中的用途，所述組合物用于抑制在某些病理學(xué)狀態(tài)中觀察到的相關(guān)蛋白質(zhì)的羰基化的增加，因此尤其用于治療神經(jīng)變性疾病，例如阿爾茨海默病或帕金森病，用于治療視網(wǎng)膜病變、類風(fēng)濕性多關(guān)節(jié)炎、動(dòng)脈粥樣硬化、肌萎縮性側(cè)索硬化、腦缺血，用于治療白內(nèi)障問(wèn)題或全身性感染(敗血癥)，用于治療與皮膚衰老相關(guān)的病理學(xué)狀態(tài)，更特別地與組織例如眼、肌肉和腦的衰老相關(guān)的病理學(xué)狀態(tài)，用于治療與線粒體功能障礙相關(guān)的病理學(xué)狀態(tài)，即源自于線粒體病的肌病，用于治療與哺乳動(dòng)物的營(yíng)養(yǎng)缺乏和壽命增加相關(guān)的惡病質(zhì)。
2. 根據(jù)權(quán)利要求l的用途，其特征在于，所述組合物是包含L-瓜氨酸或其藥學(xué)上可接受的鹽的藥物組合物，用于美容治療的包含L-瓜氨酸或其美容學(xué)上可接受的鹽的組合物，包含L-瓜氨酸的食品補(bǔ)充劑，或者用于營(yíng)養(yǎng)藥物制品治療的包含L -瓜氨酸或其營(yíng)養(yǎng)藥物制品學(xué)上可接受的鹽的組合物。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2中任一項(xiàng)的用途，其特征在于，如此使用L-瓜氨酸，從而使得對(duì)于大約0. 1 g/kg/天至大約0. 5 g/kg/天，尤其是大約0. 25 g/kg/天的施用劑量而言，L-瓜氨酸的單位劑量為大約2 g至大約20 g，尤其是大約IO g，按照每日l(shuí)-3劑，優(yōu)選以1劑。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)的用途，其特征在于，所述組合物以干的形式、水溶液的形式、水醇性或油性形式、水包油或油包水或復(fù)合型乳劑的形式、水性或油性凝膠的形式存在。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)的用途，其特征在于，所述藥物組合物以通過(guò)口服、局部、經(jīng)腸或腸胃外途徑可施用的形式存在，所述美容組合物以通過(guò)局部途徑可施用的形式存在，所述營(yíng)養(yǎng)藥物制品組合物和所述食品補(bǔ)充劑以通過(guò)口服途徑可施用的形式存在。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5的用途，其特征在于，在通過(guò)經(jīng)腸或腸胃外途徑可施用的形式的情況下，它可以與經(jīng)腸或腸胃外營(yíng)養(yǎng)相混合，或者在經(jīng)腸營(yíng)養(yǎng)的探頭中以推注形式或在腸胃外營(yíng)養(yǎng)中以Y形管形式進(jìn)行施用。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)的用途，其特征在于，所述組合物還包含一種或多種用于治療與營(yíng)養(yǎng)缺乏相關(guān)的惡病質(zhì)的其他化合物，例如亮氨酸、谷氨酰胺、精氨酸、鳥(niǎo)氨酸以及它們的各種可使用的鹽例如ot-酮戊二酸鹽或oc-酮異己酸鹽。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1 - 7中任一項(xiàng)的用途，其特征在于，L-瓜氨酸用于制備藥物組合物，所述藥物組合物還包含一種或多種用于治療與營(yíng)養(yǎng)缺乏相關(guān)的惡病質(zhì)的其他化合物，例如亮氨酸、谷氨酰胺、精氨酸、鳥(niǎo)氨酸以及它們的各種可使用的鹽例如a-酮戊二酸鹽或oc-酮異己酸鹽，這些物質(zhì)單獨(dú)地存在，或者在用于腸胃外營(yíng)養(yǎng)的營(yíng)養(yǎng)混合物中，或在用于經(jīng)腸營(yíng)養(yǎng)的混合物或用于口服營(yíng)養(yǎng)的混合物中。
9. 組合物，其包含- L-瓜氨酸或者其藥學(xué)上或營(yíng)養(yǎng)藥物制品學(xué)上可接受的鹽，和-至少一種用于治療與營(yíng)養(yǎng)缺乏相關(guān)的惡病質(zhì)的其他化合物，例如亮氨酸、谷氨酰胺、精氨酸、鳥(niǎo)氨酸以及它們的各種可使用的鹽例如ot-酮戊二酸鹽或oc-酮異己酸鹽，這些物質(zhì)單獨(dú)地存在，或者在用于腸胃外營(yíng)養(yǎng)的營(yíng)養(yǎng)混合物中，或在用于經(jīng)腸營(yíng)養(yǎng)的混合物或用于口服營(yíng)養(yǎng)的混合物中，以作為用于在治療與蛋白質(zhì)羰基化增加相關(guān)的病理學(xué)狀態(tài)的情況下同時(shí)、分開(kāi)或在時(shí)間上錯(cuò)開(kāi)使用的聯(lián)合產(chǎn)品。
全文摘要
本發(fā)明涉及式(I)的L-瓜氨酸在制備美容組合物、食品或營(yíng)養(yǎng)藥物制品組合物、或者藥物組合物中的用途，所述這些組合物用于治療與蛋白質(zhì)羰基化增加相關(guān)的病理學(xué)狀態(tài)，尤其是用于治療神經(jīng)變性疾病，例如阿爾茨海默病或帕金森病。
文檔編號(hào)A61P21/00GK101686919SQ200880009440
公開(kāi)日2010年3月31日 申請(qǐng)日期2008年3月20日 優(yōu)先權(quán)日2007年3月22日
發(fā)明者C·莫納德, L·希諾伯, S·沃蘭德, Y·伯瑞 申請(qǐng)人:笛卡爾巴黎大學(xué);國(guó)家農(nóng)藝研究院;公共救濟(jì)事業(yè)局-巴黎醫(yī)院;奧弗涅大學(xué);克萊蒙費(fèi)朗大學(xué)醫(yī)療中心