專利名稱：酪氨酸激酶抑制劑的制作方法
背景技術：
蛋白激酶(PKs)是催化蛋白質的酪氨酸、絲氨酸和蘇氨酸殘基上羥基的磷酸化作用的酶。這種看似簡單的活性的重要性是非常巨大的，細胞生長、分化和增殖，即事實上是細胞生命的所有方面，以一種方式或另一種方式取決于PK活性。此外，異常PK活性已經涉及疾病的宿主，疾病的范圍是從相對無生命威脅的疾病例如牛皮癬直至非常致命的疾病例如噁性膠質瘤(腦癌)。PKs可以分為兩類，蛋白質酪氨酸激酶(PTKs)和絲氨酸-蘇氨酸激酶(STKs)。
某些具有PK活性的生長因子受體稱作受體酪氨酸激酶(RTKs)。它們包括一個大家族的具有不同生物活性的跨膜受體。目前，已經鑒定出至少十九種(19)不同的亞族RTKs。一種RTK亞族含有胰島素受體(IR)，胰島素樣生長因子I受體(IGF-1R)和胰島素受體有關的受體(IRR)。IR和IGF-1R與胰島素相互作用激活一種異源四聚體，該異源四具體由兩個完全細胞外葡基化α亞基和兩個β亞基組成，它們跨越細胞膜且含有酪氨酸激酶結構域。胰島素樣生長因子-I受體(IGF-1R)和其配體，IGF-1和IGF-2，異常地表達在許多腫瘤內，包括，但不限于，乳腺，前列腺，甲狀腺，肺，肝細胞，結腸，腦，神經內分泌和其他。
已知RTK亞族的更加完全的目錄由Plowman等公開在KN & P，1994，7(6)334-339中，其在此引入作為參考，如果在此提及，包括所有附圖
。
除了RTKs以外，還存在一個家族的完全細胞內PTKs，稱作″非受體酪氨酸激酶″或″細胞酪氨酸激酶″。本文使用后一命名，其縮寫為″CTK″。CTKs不含有細胞外和跨膜結構域。目前，已經鑒定出約24種11個亞族的CTKs(Src，F(xiàn)rk，Btk，Csk，Abl，Zap70，F(xiàn)es，F(xiàn)ps，F(xiàn)ak，Jak和Ack)。Src亞族似乎是CTKs的最大組且包括Src，Yes，F(xiàn)yn，Lyn，Lck，Blk，Hck，F(xiàn)gr和Yrk。有關CTKs的更加詳細的討論參見Bolen，Oncogene，1993，82025-2031，其在此引入作為參考，包括附圖，如果在此提及的話。
RTKs，CTKs和STKs均參與病癥的宿主中，包括嚴重的癌癥。其他與PTKs有關的病癥包括，但不限于，牛皮癬，肝硬變，糖尿病，動脈粥樣硬化，血管生成，再狹窄，眼科疾病，類風濕性關節(jié)炎和其他炎性疾病，自身免疫性疾病和多種腎病。
發(fā)明概述本發(fā)明涉及能夠抑制、調制和/或調節(jié)受體型和非受體型酪氨酸激酶兩者的信號傳導的化合物。本發(fā)明的化合物具有一種核心結構，其含有取代吡咯部分。本發(fā)明還涉及這些化合物的藥學可接受鹽和立體異構體。
發(fā)明詳述本發(fā)明的化合物有效抑制激酶并且表示為式I的化合物 其中R1選自1)取代或未取代C1-C10烷基，2)取代或未取代芳基，3)取代或未取代雜環(huán)基，和4)取代或未取代C3-C10環(huán)烷基；R2選自1)鹵素，2)取代或未取代C1-C10烷基，3)取代或未取代C2-C10鏈炔基，4)取代或未取代苯基，和5)取代或未取代雜環(huán)基選自吡啶基，苯并呋喃基，異噁唑基，呋喃基，吡咯基，和噻吩基；該烷基，鏈炔基，苯基和雜環(huán)基任選地被一個或多個R3取代；R3獨立地選自1)鹵素，2)-OR4，3)取代或未取代C1-C10烷基，4)取代或未取代C3-C10環(huán)烷基，5)取代或未取代芳基，6)取代或未取代芳烷基，7)取代或未取代雜環(huán)基，8)-C(O)R4，9)-C(O)OR4，10)-CN，和11)-NO2；R4獨立地選自1)氫，2)取代或未取代C1-C10烷基，3)取代或未取代C2-C10鏈烯基，4)取代或未取代C2-C10鏈炔基，5)取代或未取代芳基，和6)取代或未取代雜環(huán)基；或其藥學可接受鹽或立體異構體。
本發(fā)明的第二實施方式是式I的化合物，或其藥學可接受鹽或立體異構體，如上所述，其中R1是代或未取代C1-C6烷基；R2選自1)鹵素，2)取代或未取代C2-C10鏈炔基，3)取代或未取代苯基，和4)取代或未取代雜環(huán)基選自吡啶基，苯并呋喃基，異噁唑基，呋喃基，吡咯基，和噻吩基；該鏈炔基，苯基和雜環(huán)基任選地被一個或多個R3取代；和所有其他取代基和可變部分定義如上。
本發(fā)明的第三實施方式是式I的化合物，或其藥學可接受鹽或立體異構體，如上所述，其中R2是鹵素；和所有其他取代基和可變部分定義如上。
本發(fā)明的化合物的實例包括3-乙基-5-甲?；?4-碘-1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯；3-乙基-5-甲?；?4-(吡啶-2-基乙炔基)-1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯；3-乙基-5-甲酰基-4-(6-甲氧基吡啶-2-基)-1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯；4-(1-苯并呋喃-2-基)-3-乙基-5-甲?；?1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯；4-(3，5-二甲基異噁唑-4-基)-3-乙基-5-甲?；?1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯；4-(4-氟苯基)-3-乙基-5-甲酰基-1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯；4-(4-氯苯基)-3-乙基-5-甲酰基-1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯；3-乙基-5-甲?；?4-(5-甲酰基-2-呋喃基)-1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯；3-乙基-5-甲酰基-4-苯基-1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯；4′-乙基-2′-甲酰基-1H，1′H-2，3′-聯(lián)吡咯-1，5′-二羧酸二(叔丁酯)；3-乙基-5-甲酰基-4-(2-甲?；绶?3-基)-1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯；4-(4-氰基苯基)-3-乙基-5-甲?；?1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯；3-乙基-5-甲?；?4-甲基-1H-吡咯-2-羧酸乙酯；3，4-二乙基-5-甲?；?1H-吡咯-2-羧酸乙酯；3-乙基-5-甲?；?4-(4-硝基苯基)-1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯；3-乙基-5-甲?；?4-[4-(甲氧基羰基)苯基]-1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯；4-(2-氰基苯基)-3-乙基-5-甲酰基-1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯；4-(3-氰基苯基)-3-乙基-5-甲?；?1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯；4-(3-氯苯基)-3-乙基-5-甲?；?1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯；
4-(2，6-二氟苯基)-3-乙基-5-甲?；?1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯；3-乙基-5-甲?；?4-(5-甲基-2-呋喃基)-1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯；3-乙基-5-甲?；?4-(4-甲基苯基)-1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯；3-乙基-5-甲?；?4-(3-甲基苯基)-1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯；3-乙基-5-甲?；?-(2-甲基苯基)-1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯；3-乙基-5-甲?；?4-噻吩-3-基-1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯；3-乙基-5-甲酰基4-噻吩-2-基-1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯；3-乙基-5-甲?；?4-(4-甲氧基苯基)-1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯；3-乙基-5-甲?；?4-(3-甲氧基苯基)-1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯；3-乙基-5-甲?；?4-(2-甲氧基苯基)-1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯；或其藥學可接受鹽或立體異構體。
本發(fā)明化合物的具體實例包括3-乙基-5-甲?；?4-碘-1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯 3-乙基-5-甲?；?4-苯基-1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯 3-乙基-5-甲?；?4-(2-甲?；绶?3-基)-1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯
4-(2-氰基苯基)-3-乙基-5-甲?；?1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯 4-(2，6-二氟苯基)-3-乙基-5-甲?；?1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯 或其藥學可接受鹽或立體異構體。
本發(fā)明的化合物可以具有不對稱中心、手性軸和手性平面(如E.L.Eliel和S.H.Wilen，Stereochemistry of Carbon Compounds，John Wiley& Sons，New York，1994，pages 1119-1190所述)，并且存在外消旋體、外消旋混和物，和單獨的非對映異構體，以及其所有可能的異構體和混和物，包括光學異構體，均屬于本發(fā)明。此外，本文公開的化合物可以存在互變異構體，并且即使僅描繪或命名了一種互變異構結構，兩種互變異構體均術語本發(fā)明的范圍內，。
當任何可變部分(例如芳基、雜環(huán)、R4、Ra等)在任何取代基中出現(xiàn)不止一次時，在各種情況中其定義彼此獨立。另外，取代基和可變部分的組合只有在該組合得到穩(wěn)定化合物的條件下才允許。
應理解，本發(fā)明化合物的取代基和取代方式可以由本領域普通技術人員選擇，從而得到化學上穩(wěn)定的化合物，并且這些化合物可以很容易通過本領域已知技術，以及下列所述的方法，從容易獲得的起始原料來合成。
本文使用的，″烷基″是指具有特定數(shù)目碳原子的支鏈和直鏈兩種脂肪烴基。例如，C1-C10，在″C1-C10烷基″中被定義為包括在直鏈或支鏈排列中具有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個碳。例如，″C1-C10烷基″特別包括甲基，乙基，丙基，異丙基，丁基，叔丁基，戊基，己基，庚基，辛基，壬基，癸基等。
本文使用的“環(huán)烷基”是包括具有特定數(shù)目的碳原子的非芳族環(huán)狀烴基，它可以是或可以不是橋式的或結構受約束的。此類環(huán)烷基的實例包括，但不限于，環(huán)丙基，環(huán)丁基，環(huán)戊基，環(huán)己基，金剛烷基，環(huán)辛基，環(huán)庚基，四氫萘，亞甲基環(huán)己基等。本文使用的，″C3-C10環(huán)烷基″的實例可以包括，但不限于 如果沒有規(guī)定碳原子的數(shù)目，術語″鏈烯基″是指直鏈、支鏈或環(huán)狀的含有2-10個碳原子和至少一個碳-碳雙鍵的非芳族烴基。優(yōu)選存在1個碳-碳雙鍵，并且最多可存在4個非芳族碳-胺雙鍵。所以，″C2-C6鏈烯基″是指具有2-6個碳原子的鏈烯基。鏈烯基包括乙烯基，丙烯基，丁烯基和環(huán)己烯基。如上所述對于烷基而言，鏈烯基的直鏈、支鏈或環(huán)狀部分可以含有雙鍵，并且如果顯示為取代鏈烯基則可以被取代。
術語″鏈炔基″是指含有2-10個碳原子和至少一個碳-碳叁鍵的直鏈、支鏈或環(huán)狀的烴基。至多可以存在三個碳-碳叁鍵。所以，″C2-C6鏈炔基″是指具有2-6個碳原子的鏈炔基。鏈炔基包括乙炔基，丙炔基和丁炔基。鏈炔基的直鏈、支鏈或環(huán)狀部分可以含有叁鍵，并且如果顯示為取代鏈炔基時則表示可被取代。如上所述對于烷基而言，鏈炔基的的直鏈、支鏈或環(huán)狀部分可以含有叁鍵，并且如果顯示為取代鏈炔基則可以被取代。
在此使用的″芳基″是指各環(huán)內至多含7個原子的任何穩(wěn)定單環(huán)或雙環(huán)碳環(huán)，其中至少一個環(huán)是芳香性的。此類芳基單元的實例包括，但不限于，苯基，萘基，二氫茚基，二氫茚酮基，茚基，聯(lián)苯基，萘滿基，四氫萘酮基，芴基，菲基，蒽基，苊基(ace萘基)，四氫萘基等。在其中芳基取代基是雙環(huán)且一個環(huán)是非芳香性的情況中，理解為經該芳環(huán)連接。
本領域技術人員理解，在此使用的″鹵代″或″鹵素″包括氯，氟，溴和碘。
在此使用的術語雜芳基代表各環(huán)內至多7個原子的穩(wěn)定單環(huán)或雙環(huán)，其中至少一個環(huán)是芳族和含有1-4個選自O、N和S的雜原子。在此定義內的雜芳基包括但不限于吖啶基，咔唑基，噌啉基，喹喔啉基，吡唑基，吲哚基，苯并咪唑基，苯并二氧雜環(huán)戊烯基，苯并三唑基，苯并硫代呋喃基，苯并噻唑基，呋喃基，噻吩基，苯并噻吩基，苯并呋喃基，苯并喹啉基，咪唑基，異喹啉基，噁唑基，異噁唑基，吲哚基，吡嗪基，噠嗪基，吡啶基，嘧啶基，吡咯基，四氫萘基，四氫喹啉等。
在此使用的術語雜環(huán)或雜環(huán)狀或雜環(huán)基代表飽和或不飽和的5-至7-員單環(huán)或者穩(wěn)定的8-至11-員雙環(huán)雜環(huán)，并且其含有1-4個選自O、N和S的雜原子，并且包括其中任何上述雜環(huán)環(huán)于苯環(huán)稠合的雙環(huán)基團?！咫s環(huán)″或″雜環(huán)基″包括上述提及的雜芳基，以及其二氫和四氫類似物?！咫s環(huán)基″的其他實例包括，但不限于下列氮雜環(huán)庚烷基，氮雜環(huán)丁烷基，苯并咪唑基，苯并氧雜環(huán)戊烯基，苯并呋喃基，苯并呋咱基，苯并吡喃基，苯并吡唑基，苯并三唑基，苯并噻唑基，苯并噻吩基，苯并硫代呋喃基，苯并苯硫基，苯并噻喃基，苯并氧雜氮雜環(huán)庚三烯基，苯并噁唑基，咔唑基，carbolinyl，色滿基，噌啉基，二氮雜環(huán)庚烷基，diazapinonyl，二氫苯并呋喃基，二氫苯并呋喃基，二氫苯并咪唑基，二氫苯并噻吩基，二氫苯并噻喃基，二氫苯并噻喃基砜，二氫苯并苯硫基，二氫苯并噁唑基，二氫環(huán)戊烷基吡啶基，二氫呋喃基，二氫咪唑基，二氫吲哚基，二氫異噁唑基，二氫異喹啉基，二氫而且一噻唑基，二氫噁二唑基，二氫噁唑基，二氫吡嗪基，二氫吡唑基，二氫吡啶基，二氫咪唑基，二氫吡咯基，二氫喹啉基，二氫四唑基，二氫噻二唑基，二氫噻唑基，二氫噻吩基，二氫三唑基，二氫氮雜環(huán)丁烷烯基，二噁烷基，二氧化四氫噻吩基，二氧化硫代嗎啉基，呋喃基(furyl)，呋喃基(furanyl)，咪唑基，咪唑基，咪唑啉基，咪唑烷基，咪唑并三唑基，咪唑并吡啶基，吲唑基，indolazinyl，吲哚啉基，吲哚基，異苯并呋喃基，異色滿基，異吲哚基，異吲哚啉基，異喹啉酮基，異喹啉基，異噻唑基，異噻唑烷基，異噁唑啉基，異噁唑基，亞甲基二氧基苯甲?；?，嗎啉基，萘吡啶基，噁二唑基，噁唑基，噁唑啉基，氧雜環(huán)丁烷基，氧代氮雜環(huán)庚三烯基，噁二唑基，氧化硫代嗎啉基(oxidothio嗎啉基)，氧代二氫酞嗪基，氧代二氫吲哚基，氧代咪唑烷基，氧代哌嗪基，氧代哌啶基，氧代吡咯基烷基，氧代嘧啶基，氧代吡咯基，氧代三唑基，哌啶基，哌嗪基，吡喃基，吡嗪基，吡唑基，噠嗪基，吡啶酮基，吡啶并吡啶基，噠嗪基，吡啶基，嘧啶基，吡咯基，吡咯基烷基，喹唑啉基，喹啉基(喹啉基)，喹啉基(quinolyl)，喹啉酮基，喹喔啉基，四氫環(huán)庚吡啶基，四氫呋喃基，四氫呋喃基，四氫異喹啉基，四氫吡喃基，四氫喹啉基，四唑基，四唑并吡啶基，噻二唑基，噻唑基，噻唑啉基，噻吩并呋喃基，噻吩基，硫代嗎啉基，三唑基，氮雜環(huán)丁烷基，1，4-二噁烷基，六氫氮雜環(huán)庚三烯基等。
在本發(fā)明的實施方式中，雜環(huán)選自氧代氮雜環(huán)庚三烯基，苯并咪唑基，二氮雜環(huán)庚烷基，二氮雜pinonyl，咪唑基，氧代咪唑烷基，吲哚基，異喹啉基，嗎啉基，哌啶基，哌嗪基，吡啶基，吡咯烷基，氧代哌啶基，氧代嘧啶基，氧代吡咯烷基，喹啉基，四氫呋喃基，四氫呋喃基，四氫異喹啉基，噻吩基，呋喃基，呋喃基，吡嗪基，苯并呋喃基，異噁唑基，吡咯基，三唑基，苯并噻吩基，二氫異喹啉基，氮雜環(huán)庚烷基，硫代嗎啉基，二噁烷基，二氧化四氫噻吩基，咪唑并噻唑基，苯并噻唑基和三唑基。在本發(fā)明的另一實施方式中，雜環(huán)選自苯并呋喃基，噻吩基，吡咯基，異噁唑基，呋喃基，和吡啶基。
本文所用的″芳烷基″是指定義如上的經C1-C10烷基連接基相連的芳基部分，其中烷基定義如上。芳烷基的實例包括，但不限于，芐基，萘基甲基和苯基丙基。
本文使用的，″雜環(huán)基烷基″是指定義如下的經C1-C10烷基連接基相連的雜環(huán)部分，其中烷基定義如上。雜環(huán)基烷基的實例包括，但不限于，吡啶基甲基，咪唑基乙基，吡咯烷基甲基，嗎啉基乙基，喹啉基甲基，咪唑基丙基等。
本文使用的，術語″取代C1-C10烷基″是指具有特定數(shù)目碳原子的支鏈或直鏈烷基，其中碳原子可以被1-3個取代基取代，所述的取代基選自包括，但不限于，鹵素，C1-C20烷基，CF3，NH2，N(C1-C6烷基)2，NO2，氧代，CN，N3，-OH，-O(C1-C6烷基)，C3-C10環(huán)烷基，C2-C6鏈烯基，C2-C6鏈炔基，(C0-C6烷基)S(O)0-2-，(C0-C6烷基)S(O)0-2(C0-C6烷基)-，(C0-C6烷基)C(O)NH-，H2N-C(NH)-，-O(C1-C6烷基)CF3，(C0-C6烷基)C(O)-，(C0-C6烷基)OC(O)-，(C0-C6烷基)O(C1-C6烷基)-，(C0-C6烷基)C1-2(C0-C6烷基)-，(C0-C6烷基)OC(O)NH-，芳基，芳烷基，雜環(huán)，雜環(huán)基烷基，鹵代-芳基，鹵代-芳烷基，鹵代-雜環(huán)，鹵代-雜環(huán)基烷基，氰基-芳基，氰基-芳烷基，氰基-雜環(huán)和氰基-雜環(huán)基烷基。
本文使用的，術語″取代C3-C10環(huán)烷基″、″取代芳基″和″取代雜環(huán)基″包括除于該化合物其余部分連接的位點以外還具有1-3個取代基的環(huán)狀基團。優(yōu)選地，所述的取代基選自包括，但不限于，鹵素，C1-C20烷基，CF3，NH2，N(C1-C6烷基)2，NO2，氧代，CN，N3，-OH，-O(C1-C6烷基)，C3-C10環(huán)烷基，C2-C6鏈烯基，C2-C6鏈炔基，(C0-C6烷基)S(O)0-2-，(C0-C6烷基)S(O)0-2(C0-C6烷基)-，(C0-C6烷基)C(O)NH-，H2N-C(NH)-，-O(C1-C6烷基)CF3，(C0-C烷基)C(O)-，(C0-C6烷基)OC(O)-，(C0-C6烷基)O(C1-C6烷基)-，(C0-C6烷基)C(O)1-2(C0-C6烷基)-，(C0-C6烷基)OC(O)NH-，芳基，芳烷基，雜芳基，雜環(huán)基烷基，鹵代-芳基，鹵代-芳烷基，鹵代-雜環(huán)，鹵代-雜環(huán)基烷基，氰基-芳基，氰基-芳烷基，氰基-雜環(huán)和氰基-雜環(huán)基烷基。
本文使用的短語″被至少一個取代基取代″是指所述的被取代基團具有1-6個取代基。優(yōu)選地，除于該化合物其他部分相連的位點以外，所述被取代基團還含有1-3個取代基。
在本發(fā)明的一個實施方式中，R1是取代或未取代C1-C6烷基。在本發(fā)明的另一實施方式中，R1是乙基或叔丁基。
在本發(fā)明的一個實施方式中，R2是鹵素，取代或未取代苯基，或取代或未取代雜環(huán)基，選自吡啶基，苯并呋喃基，異噁唑基，呋喃基，吡咯基，和噻吩基。在本發(fā)明的另一實施方式中，R2是鹵素或取代或未取代C2-C10鏈炔基。在本發(fā)明的另一實施方式中，R2是鹵素。
任何取代基或可變部分(例如，R4，Ra，n等)在分子內特定位置上的定義獨立于其在分子內其他位置上的定義。所以，-N(R4)2表示-NHH，-NHCH3，-NHC2H5等。應理解本發(fā)明化合物上的取代基和取代方式可以由本領域普通技術人員來選擇以得到化學上穩(wěn)定的化合物且可以很容易通過本領域已知的技術、下面所述的那些方法從溶液獲得的起始原料來合成。
為了用于醫(yī)藥，式I的化合物的鹽可以是藥學可接受鹽。然而，其他鹽可以用于制備本發(fā)明的化合物或其藥學可接受鹽。當本發(fā)明的化合物是酸性的，適當?shù)摹逅帉W可接受鹽″是指由藥學可接受無毒堿制備的鹽，所述的堿包括無機堿和有機堿。衍生自無機堿的鹽包括鋁、銨、鈣、銅、鐵、亞鐵、鋰、鎂、錳鹽、亞錳、鉀、鈉、鋅等。特別優(yōu)選銨、鈣、鎂、鉀和鈉鹽。衍生自藥學可接受無毒有機堿的鹽包括一級、二級和三級胺、取代胺的鹽，包括天然取代胺、環(huán)胺類和堿性離子交換樹脂，例如精氨酸，甜菜堿，咖啡因，膽堿，N，N1-二芐基亞乙基二胺，二乙胺，2-二乙基氨基乙醇，2-二甲基氨基乙醇，乙醇胺，乙二胺，N-乙基-嗎啉，N-乙基哌啶，葡糖胺，氨基葡萄糖，組氨酸，hydrabamine，異丙胺，賴氨酸，甲基葡糖胺，嗎啉，哌嗪，哌啶，聚胺樹脂，普魯卡因，嘌呤類，可可堿，三乙胺，三甲胺，三丙胺，氨丁三醇等。
當本發(fā)明的化合物是堿性時，可以由藥學可接受無毒酸制備鹽，包括無機和有機酸。酸包括乙酸、苯磺酸、苯甲酸、樟腦磺酸、檸檬酸、乙磺酸、富馬酸、葡糖酸、谷氨酸、氫溴酸、鹽酸、羥乙基磺酸、乳酸、馬來酸、蘋果酸、扁桃酸、甲磺酸、粘酸、硝酸、撲酸、泛酸、磷酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸、對甲苯磺酸等。特別優(yōu)選檸檬酸、富馬酸、氫溴酸、鹽酸、馬來酸、磷酸、硫酸和酒石酸。
上述藥學可接受鹽和其他典型藥學可接受鹽的制備更全面地由Berg等公開在″Pharmaceutical Salts，″J.Parm.Sci.，1977661-19。
還應注意，本發(fā)明的化合物可能是內鹽或兩性離子，因為在生理條件下化合物中的脫質子酸性部分例如羧基可以是陰離子，并且該電荷可能被質子化或烷基化的堿性部分例如季氮原子的陽離子電荷在內部平衡掉。
在化學描述和下列實施例中可以使用的縮寫包括Ac2O(乙酸酐)；AcOH(乙酸)；AIBN(2，2′-偶氮二異丁腈)；Ar(芳基)；BINAP(2，2′-二(二苯基膦)-1，1′-聯(lián)萘基)；Bn(芐基)；BOC/Boc(叔丁氧基羰基)；BSA(牛血清白蛋白)；CAN(硝酸氨高鈰)；CBz(芐酯基)；CD3OD(甲基-d3醇-d)；CI(化學電離)；DBAD(偶氮二羧酸二叔丁酯)；DBU(1，8-二氮雜二環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯)；DCC(1，3-二氯己基碳二亞胺)；DCE(，2-二氯乙烷)；DCM(二氯甲烷)；DIEA(N，N-二異丙基乙基胺)；DMAP 4(二甲基氨基吡啶)；(DME 1，2-二甲氧基乙烷)；DMF(N，N-二甲基甲酰胺)；DMSO(甲基亞砜)；DPPA(二苯基磷?；B氮化物)；DTT(二硫蘇糖醇)；EDC(1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基-碳二亞胺-鹽酸鹽)；EDTA(乙二胺四乙酸)；ELSD(蒸發(fā)光散射檢測器)；ES(電子噴射)；ESI(電子噴射電離)；Et2O(乙醚)；Et3N(三乙胺)；EtOAc(乙酸乙酯)；EtOH(乙醇)；FAB(快速原子轟擊)；HEPES(4-(2-羥基乙基)-1-哌嗪乙磺酸)；HMPA(六甲基磷酰胺)；HOAc(乙酸)；HOBt(1-羥基苯并三唑水合物)；HOOBt(3-羥基-1，2，2-苯并三嗪-4(3H)-酮)；HPLC(高效液體色譜)；HRMS(高分辯質譜)；i-Pr2NEt(N，N-二異丙基乙基胺)；KOtBu(叔丁醇鉀)；LAH(氫化鋰鋁)；LCMS(液體色譜質譜)；MCPBA(間氯過氧苯甲酸)；Me(甲基)；MeOH(甲醇)；MP-Carbonate(大孔聚苯乙烯碳酸鹽)；Ms(甲磺?；?；MS(質譜)；MsCI(甲磺酰氯)；n-Bu(正丁基)；n-Bu3P(三正丁基膦)；NaHMDS(二(三甲基甲硅烷基)氨化鈉)；NBS(N-溴琥珀酰胺)；NMM(N-甲基嗎啉)；NMR(核磁共振)；Pd(PPh3)4(四(三苯基膦)鈀)；Pd2(dba)3(三(二亞芐基丙酮)二鈀(0))；Pd(Pt-Bu3)2(二(三-叔丁基膦)鈀)；Ph(苯基)；PMSF(α-甲苯磺酰氟)；PS-DCC(聚苯乙烯二環(huán)己基碳二亞胺)；PS-DMAP(聚苯乙烯二甲基氨基吡啶)；PS-NMM(聚苯乙烯N-甲基嗎啉)；Py或pyr(吡啶)；PYBOP(苯并三唑-1-基氧基三吡咯烷并鏻)(或PyBOP)(六氟磷酸鹽)；RPLC(反向液體色譜)；RT(室溫)；SCX SPE(強陽離子交換固相萃取)；t-Bu(叔丁基)；TBAF(四丁基氟化銨)；TBSC1(叔丁基二甲基甲硅烷基氯)；TFA(三氟乙酸)；THE(四氫呋喃)；TIPS(三異丙基甲硅烷基)；TMS(四甲基硅烷)；和Tr(三苯甲基)。
實用性另一方面，本發(fā)明涉及一種在需要其的哺乳動物中調制PKs(蛋白激酶)的催化活性的方法，該方法包括使PK與式I的化合物接觸。
在此使用的術語″調制作用″或″調制″是指改變受體酪氨酸激酶(RTKs)，細胞酪氨酸激酶(CTKs)和絲氨酸-蘇氨酸激酶(STKs)的催化活性。特別是，調制是指激活RTKs，CTKs和STKs的催化活性，優(yōu)選激活或抑制RTKs，CTKs和STKs的催化活性，這取決于與RTKs，CTKs或STKs接觸的化合物或鹽的濃度，更優(yōu)選抑制RTKs，CTKs和STKs的催化活性。
在此使用的術語″催化活性″是指在RTKs和/或CTKs的直接或間接影響下酪氨酸磷酸化的比率或在STKs的直接或間接影響下絲氨酸和蘇氨酸磷酸化的比率。
在此使用的術語″接觸″是指使本發(fā)明的化合物和靶向PK在一起，其方式是使該化合物可以直接作用于PK的催化活性，即通過與激酶本身相互作用，或間接作用于PK的催化活性，即通過與另一所述激酶的催化活性依賴的分子相互作用。這種″接觸″可以在″體外″完成，即在試管、培養(yǎng)皿或等中。在試管中，接觸可以僅僅涉及化合物和感興趣的PK，或者它可以涉及整個細胞。細胞還可以保持或生長在細胞培養(yǎng)皿中并與化合物在該環(huán)境中接觸。本文中，特定化合物影響PK相關性疾病的性能，即定義如下的化合物IC50，可以在嘗試將該化合物體內應用于更加復雜的活生物體之前測定。對于生物體外的細胞，存在多種方法，并且本領域技術人員熟知，使PKs與化合物接觸，包括，但不限于，直接細胞微射法和多種跨膜載體技術。
本發(fā)明的另一方面，上述PK選自包括RTK，CTK或STK的組。優(yōu)選地，PK是RTK。
此外，本發(fā)明的一個方面在于其催化活性通過本發(fā)明化合物調制的受體酪氨酸激酶(RTK)選自包括EGF，HER2，HER3，HER4，IR，IGF-1R，IRR，PDGFRα，PDGFRβ，TrkA，TrkB，TrkC，HGF，CSFIR，C-Kit，C-fms，F(xiàn)lk-lR，F(xiàn)lk4，KDR/Flk-1，F(xiàn)lt-1，F(xiàn)GFR-1R，F(xiàn)GFR-1R，F(xiàn)GFR-3R和FGFR-4R的組。優(yōu)選地，優(yōu)選RTK，該受體蛋白激酶選自IR，IGF-1R，或IRR。
此外，本發(fā)明的一個方面在于其催化活性通過本發(fā)明的化合物調制的細胞酪氨酸激酶選自Src，F(xiàn)rk，Btk，Csk，Abl，ZAP70，F(xiàn)es，F(xiàn)ps，F(xiàn)ak，Jak，Ack，Yes，F(xiàn)yn，Lyn，Lck，Blk，Hck，F(xiàn)gr和Yrk的組。
本發(fā)明的另一方面在于其催化活性通過本發(fā)明的化合物調制的絲氨酸-蘇氨酸蛋白激酶選自CDK2和Raf的組。
另一方面，本發(fā)明涉及一種在需要所述處理的哺乳動物中治療或預防PK相關疾病的方法，包括給該哺乳動物施用治療有效量的一種或多種上述化合物。
在此使用的″PK相關疾病″、″PK推進的疾病″和″異常PK活性″均是指特征在于不適當(即，減少或，更常見過度)PK催化活性的病癥，其中特定PK可以是RTK，CTK或STK。不適當催化活性可以由下列引起(1)PK表達在正常情況下不表達PKs的細胞中；(2)增高的PK表達，導致不希望的細胞增殖、分化和/或生長；或(2)減小的PK表達，導致細胞增殖、分化和/或生長的不期望減少。PK的過度活性是指編碼特定PK或其配體的基因的擴增，或產生一定水平的PK活性，其與細胞增殖、分化和/或生長疾病有關(也就是說，由于PK水平增高，所述細胞疾病的一種或多種癥狀的嚴重性隨著PK活性水平的降低而增高)。
有關PK相關性疾病的″治療″、″處理″或″療法″是指減輕或消除了PK相關性疾病的病因和/或作用。
在此使用的術語″預防″、″防止″和″預防作用″是指一種首位使哺乳動物不獲得pK相關性疾病的方法。
在本發(fā)明化合物的引用中術語″給藥″和其變化形式(例如″施用″化合物)是指將所述化合物或該化合物的前藥引入到需要治療的動物體系中。當本發(fā)明的化合物或其前藥與一種或多種其他活性劑(例如，細胞毒性劑等)聯(lián)合提供時，″給藥″及其變化形式各自理解為包括所述化合物或其前藥和其他藥物并行和順序引入。
在此使用的術語″治療有效量″是指由研究人員、獸醫(yī)、臨床醫(yī)生和其他臨床工作者尋找到的活性化合物或藥劑在組織、系統(tǒng)、動物或人體中產生生物或醫(yī)學反應的量。
術語″治療癌癥″或″癌癥的治療″是指向患有癌性病癥的哺乳動物給藥并且提供殺死癌細胞來減輕癌性病癥，而且產生抑制癌癥生長和/或遷移的結果。
本發(fā)明的另一方面中蛋白激酶相關疾病可以選自RTK、CTK或STK相關疾病。優(yōu)選地，該蛋白激酶相關性疾病時RTK相關性疾病。
在本發(fā)明的另一方面，上述PK相關性疾病可以選自EGFR相關性疾病、PDGFR相關性疾病、IGFR相關性疾病和flk相關性疾病。
本發(fā)明的另一方面中上述PK相關性疾病可以是選自下列的癌癥，但不限于，星形細胞瘤，基底或扁平細胞癌，腦癌，成膠質細胞瘤，膀胱癌，乳腺癌，結腸直腸癌，chrondro肉瘤，子宮頸癌，腎上腺癌，絨毛膜癌，食道癌，子宮內膜癌，紅白血病，尤因氏瘤，胃腸道癌，頭和頸癌，肝細胞，神經膠質瘤，肝細胞癌，白血病，平滑肌瘤，黑素瘤，非小細胞肺癌，神經癌，卵巢癌，胰腺癌，前列腺癌，腎細胞癌，橫紋肌肉瘤，小細胞肺癌，胸腺瘤(thyoma)，甲狀腺癌，睪丸癌和骨肉瘤。更優(yōu)選地，該PK相關性疾病是選自腦癌，乳腺癌，前列腺癌，結腸直腸癌，小細胞肺癌，非小細胞肺癌，腎細胞癌或子宮內膜癌的癌癥。
在本發(fā)明的范圍內內包括一種藥物組合物，其含有上述式I的化合物和藥學可接受載體。本發(fā)明還包括一種在需要這種處理的哺乳動物中治療或預防癌癥的方法，該方法包括給該哺乳動物施用治療有效量的式I的化合物。本發(fā)明的另一方面，可以用式I的化合物治療的癌癥的類型包括，但不限于，星形細胞瘤，基底或扁平細胞癌，腦癌，成膠質細胞瘤，膀胱癌，乳腺癌，結腸直腸癌，chrondro肉瘤，子宮頸癌，腎上腺癌，絨毛膜癌，食道癌，子宮內膜癌，紅白血病，尤因氏瘤，胃腸道癌，頭和頸癌，肝細胞，神經膠質瘤，肝細胞癌，白血病，平滑肌瘤，黑素瘤，非小細胞肺癌，神經癌，卵巢癌，胰腺癌，前列腺癌，腎細胞癌，橫紋肌肉瘤，小細胞肺癌，胸腺瘤，甲狀腺癌，睪丸癌和骨肉瘤。更優(yōu)選地，被治療的癌癥選自乳腺癌，前列腺癌，結腸直腸癌，小細胞肺癌，非小細胞肺癌，腎細胞癌，或子宮內膜癌。
本發(fā)明的另一方面中上述PK相關性疾病可以是IGFR相關性疾病，其選自糖尿病，自身免疫性疾病，阿爾茨海默氏病和其他認知障礙，過度增殖性疾病，老化，癌，肢端肥大癥，克羅恩氏病，子宮內膜異位，糖尿病性腎病，再狹窄，纖維變性，牛皮癬，骨關節(jié)炎，類風濕性關節(jié)炎，炎性疾病和血管生成。
本發(fā)明還包括一種治療或預防視網(wǎng)膜血管形成的方法，該方法包括給需要所述治療的哺乳動物施用治療有效量的式I的化合物。本發(fā)明的一個部分是治療或預防眼科疾病的方法，例如糖尿病性腎病和老化有關的黃斑變性。
本發(fā)明的范圍內還包括一種治療或預防炎性疾病的方法，例如類風濕性關節(jié)炎，牛皮癬，接觸性皮炎和延遲性過敏反應，以及選自骨肉瘤，骨關節(jié)炎，和佝僂病的骨相關性病變的治療或預防。
其他可以用本發(fā)明的化合物治療的疾病包括，不限于，，免疫性和心血管疾病，例如動脈粥樣硬化。
所以，本發(fā)明的范圍包括上述化合物與第二化合物聯(lián)合應用，所述第二化合物選自1)雌激素受體調制劑，2)雄激素受體調制劑，3)視黃酸受體調制劑，4)細胞毒性/細胞抑制劑，5)抗增殖劑，6)異戊烯-蛋白質轉移酶抑制劑，7)HMG-CoA還原酶抑制劑，8)HIV蛋白酶抑制劑，9)逆轉錄酶抑制劑，10)血管生成抑制劑，11)PPAR-γ激動劑，12)PPAR-δ激動劑，13)固有多藥耐藥性的抑制劑，14)止吐劑，15)貧血治療藥，16)中性白血病減少癥治療藥，17)免疫增強藥，18)細胞增殖和存活信號抑制劑，和19)干擾細胞周期關卡的藥物。
在實施方式中，用作第二化合物的血管生成抑制劑選自酪氨酸激酶抑制劑，表皮衍生生長因子的抑制劑，成纖維細胞衍生生長因子的抑制劑，血小板鹽水生長因子的抑制劑，MMP(基質金屬蛋白酶)抑制劑，整聯(lián)蛋白阻斷劑，干擾素-α，白介素-12，戊聚糖多硫酸酯，環(huán)加氧酶抑制劑，羧酰胺基三唑，combretastatin A-4，squal胺，6-O-氯乙?；?羰基)-煙曲霉醇，沙利度胺，制管張素，肌鈣蛋白-1，或VEGF的抗體。在實施方式中，該雌激素受體調制劑為他莫昔芬或雷洛昔芬。
權利要求書的范圍內還在于一種治療癌癥的方法，該方法包括將治療有效量的式I的化合物聯(lián)合放射療法和/或聯(lián)合選自下列的化合物給藥1)雌激素受體調制劑，2)雄激素受體調制劑，3)視網(wǎng)膜(retinoid)受體調制劑，4)細胞毒性/細胞抑制劑，5)抗增殖劑，6)異戊烯-蛋白質轉移酶抑制劑，7)HMG-CoA還原酶抑制劑，8)HIV蛋白酶抑制劑，9)逆轉錄酶抑制劑，10)血管生成抑制劑，11)PPAR-γ激動劑，12)PPAR-8激動劑，13)固有多藥耐藥性的抑制劑，14)止吐劑，15)有效治療貧血的藥物，16)有效治療中性白血病減少癥的藥物，17)免疫增強藥，18)細胞增殖和存活信號的抑制劑，和19)干擾細胞周期關卡的藥物。
本發(fā)明的另一實施方式是一種治療癌癥的方法，該方法包括將治療有效量的式I的化合物聯(lián)合紫杉醇或司徒曼布。
本發(fā)明進一步包括一種治療或預防癌癥的方法，該方法包括將治療有效量的式I的化合物聯(lián)合COX-2抑制劑給藥。
本發(fā)明還包括一種用于治療或預防癌癥的藥物組合物，其包括治療有效量的式I的化合物和選自下列的化合物1)雌激素受體調制劑，2)雄激素受體調制劑，3)視黃酸受體調制劑，4)細胞毒性/細胞抑制劑，5)抗增殖劑，6)異戊烯-蛋白質轉移酶抑制劑，7)HMG-CoA還原酶抑制劑，8)HIV蛋白酶抑制劑，9)逆轉錄酶抑制劑，10)血管生成抑制劑，11)PPAR-γ激動劑，12)PPAR-δ激動劑，13)細胞增殖和存活信號的抑制劑，和14)干擾細胞周期關卡的藥物。
另一實施方式是一種利用上述聯(lián)合藥物形式結合放射療法治療癌癥的方法。
本發(fā)明的另一方面是一種治療癌癥的方法，該方法包括將治療有效量的式I的化合物聯(lián)合紫杉醇或司徒曼布給藥。其催化活性通過本發(fā)明的化合物調節(jié)的PKs包括蛋白質酪氨酸激酶，其中存在兩種類型，受體酪氨酸激酶(RTKs)和細胞酪氨酸激酶(CTKs)，和絲氨酸-蘇氨酸激酶(STKs)。RTK介導的信號傳導，是由具有特異性生長因子(配體)的細胞外相互作用引發(fā)的，隨后經過受體二聚作用(或在IR，IGF-1R或IRR的情況中是構型改變)，內在蛋白質酪氨酸激酶活性的瞬時刺激，自磷酸化和其他底物蛋白質的后續(xù)磷酸化。由此為細胞內信號傳導分子產生了結合位點且導致在胞質信號分子的范圍內形成復合物，其促使了適當?shù)募毎磻?例如，細胞分裂，對細胞外微環(huán)境的代謝作用等)。參見Schlessinger和Ullrich，1992，Neuron 9303-391。
已經證實，生長因子受體上的酪氨酸磷酸化位點充當信號分子的SH2(src同源性)結構域的高親和力結合位點。Fantl等，1992，Cell 69413-423；Songyang等，1994，Mol.，Cell.Biol.142777-2785)；Songyang等，1993，Cell 72767-778；和Koch等，1991，Science 252668-678。另一信號分子結構域被稱作PTB結構域，其與磷酸化酪氨酸相互作用。Blaikie等，1994，J.Biol.Chem.26932031-32034；Gustafson等，1995，Mol.Cell Biol.，152500-25008；Kavanaugh和Williams，1994，Science 2661862-1865。已經鑒定出數(shù)種與RTKs締合的細胞內底物蛋白質。它們可以分為兩種主要的組(1)具有催化結構域的底物；和(2)無這種結構域但充當接合體并具有催化活性分子的底物。Songyang等，1993，Cell 72767-778。受體和其底物的SH2結構域之間的相互作用的特異性是通過直接環(huán)繞在磷酸化酪氨酸殘基的氨基酸殘基來測定的。SH2或PTB結構域與特定受體上磷酸酪氨酸殘基四周氨基酸序列之間親和力的差異與觀察到的其底物磷酸化性能是一致的。Songyang等，1993，Cell 72767-778。這些結構提示了各RTK的功能不但由其表達的模式和配體有效性決定，而且由通過特定受體激活的下游信號傳導途徑的陣列決定。所以，磷酸化作用提供重要的調節(jié)步驟，其決定了由特定生長因子受體和分化因子受體募集的信號途徑的選擇性。
STKs主要是胞質的，它影響細胞的內部生物化學，經常作為對PTK事件的下游反應。STKs已經參與信號過程，其引發(fā)DNA合成和后續(xù)的導致細胞增殖的有絲分裂。因此，在其他反應中，PK信號傳導導致細胞增殖、分化、生長、代謝和細胞遷移。異常的細胞增殖可以造成大范圍的障礙和疾病，包括瘤形成的發(fā)展，例如癌，肉瘤，成膠質細胞瘤和血管瘤，障礙例如白血病，牛皮癬，動脈粥樣硬化，關節(jié)炎和糖尿病性腎病和其他與失控的血管生成和/或血管發(fā)生有關的障礙。
精確理解本發(fā)明化合物通過何種機理抑制Pks不一定是實施本發(fā)明所必需的。然而，不受任何特定機理或理論的約束，可以詳細所述的化合物與PKs催化區(qū)內的氨基酸相互作用。PKs通常具有兩裂片結構，其中ATP似乎結合在PKs中兩個裂片之間的保存所述氨基酸的淺裂內。PKs的抑制劑被認為通過非共價相互反應如氫鍵、范德華力和離子相互作用結合在同一通用區(qū)域內，其中上述ATP與該PKs結合。本文公開的化合物在體外試驗中可以對于此類蛋白質有用，并且通過與此類蛋白質相互作用具有體內治療作用。
另一方面，所述的蛋白激酶(PK)是蛋白質酪氨酸激酶(PTK)，其催化活性通過與接觸本發(fā)明的化合物而被調制，更特別是受體蛋白質酪氨酸激酶(RTK)。在其催化活性可以用本發(fā)明或其鹽調制的RTKs中，不限于是EGF，HER2，HER3，HER4，IR，IGF-1R，IRR，PDGFRα，PDGFRβ，TrkA，TrkB，TrkC，HGF，CSFIR，C-Kit，C-fms，F(xiàn)lk-lR，F(xiàn)lk4，KDR/Flk-1，F(xiàn)lt-1，F(xiàn)GFR-1R，F(xiàn)GFR-2R，F(xiàn)GFR-3R和FGFR-4R。最優(yōu)選地，該RTK選自IGF-1R。
其催化活性通過與接觸本發(fā)明的化合物或其鹽或前藥而被調制的蛋白質酪氨酸激酶還可以是非受體或細胞蛋白質酪氨酸激酶(CTK)。所以，CTKs例如，不限于Src，F(xiàn)rk，Btk，Csk，Abl，ZAP70，F(xiàn)es，F(xiàn)ps，F(xiàn)ak，Jak，Ack，Yes，F(xiàn)yn，Lyn，Lck，Blk，Hck，F(xiàn)gr和Yrk的催化活性可以通過接觸本發(fā)明或鹽來調制。
另一組其催化活性通過接觸本發(fā)明化合物調制的PKs是絲氨酸-蘇氨酸蛋白激酶，例如，不限于，CDK2和Raf。
本發(fā)明還涉及通過作用于RTKs、CTKs和/或STKs的酶活性、由此干擾此類蛋白質的信號傳導的調制PK信號傳導的化合物。更加具體地，本發(fā)明涉及調制RTK、CTK和/或STK介導的信號傳導途徑的方法，作為治愈多種類型的實體瘤的治療方法，實體瘤包括，但不限于，癌癥，肉瘤包括卡波濟氏肉瘤，成紅細胞瘤，成膠質細胞瘤，腦膜瘤，星形細胞瘤，黑素瘤和成肌細胞瘤。非實體癌例如白血病的治療或預防葉屬于本發(fā)明內。適應癥可以包括，但不限于腦癌類，膀胱癌類，卵巢癌類，胃癌類，胰腺癌類，結腸癌類，血液癌類，乳腺癌類，前列腺癌類，腎細胞癌類，肺癌和骨癌類。
與不適當PK活性有關的可以用本發(fā)明所述化合物預防、治療和研究的其他實例，不限于，細胞增殖性障礙，纖維變性疾病和代謝疾病。
如上所述，該胰島素樣生長因子-1受體(IGF-1R)屬于跨膜酪氨酸激酶受體例如血小板衍生生長因子受體、表皮生長因子受體和胰島素受體的家族。已知存在兩類IGF-1R受體的配體。它們是IGF-1和IGF-2。在此所用的術語″IGF″是指IGF-1和IGF-2兩者。胰島素樣生長因子家族的配體、受體和結合蛋白質在Krywicki和Yee的BreastCancer Research和Treatment，227-19，1992中評述。
IGF/IGF-1R引發(fā)的疾病的特征在于不適當或過度的IGF/IGF-1R活性。不適當?shù)腎GF活性是指(1)IGF或IGF-1R表達在正常情況下不表達IGF或IGF-1R的細胞內；(2)增高的IGF或IGF-1R表達，其導致不希望的細胞增殖例如癌癥；(3)增高的IGF或IGF-1R活性，其導致不希望的細胞增殖，例如癌癥；和/或過度的IGF或IGF-1R活性。過度的IGF或IGF-1R活性是指編碼IGF-1、IGF-2、IGF-1R的基因的擴增或產生一定水平的IGF活性，其與細胞增殖性疾病有關(即，隨著IGF水平的增高，細胞增殖性疾病的一種或多種癥狀的嚴重性增高)，IGF-1和IGF-2的生物利用度還可以受到存在或不存在的一組IGF結合蛋白(IGF BPs)影響，IGF蛋白中已知的有六種。
IGF/IGF-1R的過度活性還可能由于IGF-2的下調造成，其含有IGF-2結合結構域，但無細胞內激酶結構域。IGF/IGF-1R引發(fā)的疾病的實例包括不同的IGF/IGF-1R相關人體噁性腫瘤，它們由Cullen等在Cancers Investigation，9(4)443-454，1991中評述，其全文在此引入作為參考，包括任何附圖。IGF/IGF-1Rs在調節(jié)成骨細胞功能中的臨床重要性和作用由Schmid在Journal of Internal Medicine，234535-542，1993中評述。
所以，IGF-1R活性包括(1)IGF-1R蛋白質的磷酸化；(2)IGF-1R蛋白質底物的磷酸化；(3)與IGF接合體蛋白質的相互作用；(4)IGF-1R蛋白質表面表達。其他IGF-1R蛋白質活性可以利用標準技術進行確定。IGF-1R活性可以通過測定測定一種或多種下列活性來進行分析(1)IGF-1R的磷酸化；(2)IGF-1R底物的磷酸化；(3)IGF-1R接合體分子的活化；和(4)下游信號分子的活化，和/或(5)增強細胞分裂。這些活性可以利用下列技術和現(xiàn)有技術的已知技術來測定。
IGF-1R已經被推斷是建立和維持體外和體內數(shù)種細胞類型的轉化表型絕對必要的(R.Baserga，Cancer Research 55249-252，1995)。據(jù)稱除莠霉素A抑制人乳腺癌癥細胞中的IGF-1R蛋白質酪氨酸激酶和細胞增殖(Sepp-Lorenzino等，1994，J.Cell Biochem.Suppl.18b246)。研究IGF-1R在轉化中的作用的試驗已經采用反義方案，顯性失活突變體，和IGF-1R的抗體，并且得到IGF-1R可能是治療性干預的一個優(yōu)選靶向的啟示。
除了參與營養(yǎng)性支持和II型糖尿病以外，IGF-1R還與若干類型的癌癥有關。例如，IGF-1被認為是若干腫瘤類型的自分泌生長刺激物，例如人乳腺癌癥癌細胞(Arteago等，J.Clin.Invest.，1989，841418-1423)和小肺腫瘤細胞(Macauley等.，Cancer Res.，1989，502511-2517)。此外，盡管整體上參與神經系統(tǒng)的正常生長和分化，但IGF-1也似乎是人神經膠質瘤的自分泌刺激物。Sandberg-Nordqvist等.，Cancer Res.，1993，532475-2478。
IGF-2的潛在參與結腸直腸癌的一個實例可以在結腸腫瘤中IGF-2mRNA相對于正常結腸組織而言的上調中發(fā)現(xiàn)。(Zhang等，Science(1997)2761268-1272.)IGF-2還可以在低氧癥中起誘發(fā)腫瘤的新血管形成的作用。(Minet等.，Int.J.Mol.Med.(2000)5253-259.)IGF-2還可以在腫瘤發(fā)生中通過激活胰島素受體同工型-A發(fā)揮作用。胰島素受體同工型-A的IGF-2活化作用激活細胞中的細胞存活信號途徑，但現(xiàn)在還不清楚其對腫瘤細胞生長和存活的作用。胰島素受體同工型-A的激酶結構域與標準胰島素受體的。Scalia等，2001，J.CellBiochem.82610-618。
IGF-1R和其配體在培養(yǎng)中的細胞分型(成纖維細胞，上皮細胞，平滑肌細胞，T-淋巴細胞，骨髓細胞，軟骨細胞和成骨細胞(骨髓的干細胞))中的重要性是通過IGF-1刺激細胞生長和增殖的能力來說明的。Goldring和Goldring，Eukaryotic Gene Expression，1991，1301-326。在一系列的最新文獻中，Baserga和其他作者提出IGF-1R在轉化機理中發(fā)揮核心作用，并且由此可能是治療性干預廣譜人噁性腫瘤的一個優(yōu)選靶向。Baserga，Cancer Res.，1995，55249-252；Baserga，Cell，1994，79927-930；Coppola等，Mol.Cell.Biol.，1994，144588-4595；Baserga，Trends in Biotechnology，1996，14150-152；H.M。Khandwala等，Endocrine Reviews，21215-244，2000?？梢杂帽景l(fā)明化合物治療的主要癌癥包括，但不限于乳腺癌，前列腺癌，結腸直腸癌，小細胞肺癌，非小細胞肺癌，腎細胞癌，或子宮內膜癌。
IGF-1也與視網(wǎng)膜新血管形成有關。增殖性糖尿病視網(wǎng)膜病已經在某些具有高水平的IGF-1的患者中發(fā)現(xiàn)。(L.E.Smith等，NatureMedicine，1999，51390-1395.)本發(fā)明的化合物還可以用作抗老化藥物。已經觀察到IGF信號和老化之間存在聯(lián)系。實驗已經證實卡路里受限制的哺乳動物具有抵水平的胰島素和IGF-1并且具有較長的有效期。在昆蟲中也有類似的觀察結果(參見C.Kenyon，Cell，2001，105165-168；E.Strauss，Science，2001，29241-43；K.D.Kimura等，Science 1997，277942-946；M.Tatar等，Science，2001，292107-110)。
STKs被推斷參與多種癌癥，包括，特別是，乳腺癌癥(Cance等，Int.J.癌，1993，54571-77)。
異常PK活性和疾病之間的關聯(lián)并不局限于癌癥。譬如，RTKs與例如牛皮癬、糖尿病、子宮內膜異位、血管生成、動脈粥樣斑發(fā)展、阿爾茨海默氏病，表皮過度增殖、神經變性疾病、老化有關的黃斑變性和血管瘤的疾病有關。譬如，EGFR參與角膜和皮膚損傷愈合。胰島素-R和IGF-1R的缺少表現(xiàn)在II型糖尿病中。有關特定RTKs及其治療適應癥之間的更加全面的關系由Plowman等公開在DN & P，1994，7334-339中。
如上所述，不但RTKs，而且包括但不限于src、abl、fps、yes、fyn、lyn、lck、Zap70、blk、hck、fgr和yrk(由Bolen等在，F(xiàn)ASEB J.，1993，63403-3409中評述)的CTKs也參與增殖和代謝信號傳導途徑，并且由此期望，而且已經證實，參與許多本發(fā)明涉及的PTK介導性疾病。例如，已證實突變的src(v-src)是雞的癌基因蛋白質(pp60V-src)。此外，其細胞同系物，the protooncogene pp60c-src傳送多種受體的致癌基因信號。EGFR或HER2/neu在腫瘤內的過度表達導致pp60c-src的組成活化，這是噁性細胞的特性，但在正常細胞中并不存在。另一方面，小鼠在c-src表達上的缺陷顯現(xiàn)出骨硬化(osteopetrotic)表型，表明c-src在破骨細胞功能中的一個關鍵參與作用以及在相關疾病中的參與可能性。
同樣地，Zap70已經涉及T細胞信號，其可能與自身免疫性疾病有關。
STKs與炎癥、自身免疫性疾病、免疫反應和過度增殖性疾病例如再狹窄，纖維變性，牛皮癬，骨關節(jié)炎和類風濕性關節(jié)炎有關。
PKs也參與胚胎植入。所以，本發(fā)明的化合物可以提供防止這種胚胎植入的方法并由此成為生育控制藥物。
最后，RTKs和CTKs兩者統(tǒng)籌被推測與超免疫疾病有關。
本發(fā)明的這些和其他方面基于本文的教導應該是清楚的。
本發(fā)明的另一方面是一種鑒定出能夠調制一種或多種上述蛋白激酶的催化活性的化學化合物的方法。該方法包括使表達所需蛋白激酶的細胞與本發(fā)明的化合物(或其鹽或前藥)并監(jiān)測所述化合物對該細胞產生的作用。該作用可以是任何用肉眼或者利用儀器觀察到的細胞表型中的變化或變化的消失。這些細胞表型中的變化或者變化的消失可以是，例如，不限于，細胞中蛋白激酶催化活性的改變或改變的消失或具有天然結合配偶體的蛋白激酶的相互作用的改變或改變的消失。
組合物上述化合物的藥物組合物是本發(fā)明的另一方面。
本文使用的，術語″組合物″包括了含有特定量的特定組分的產品，以及任何直接或間接由特定量的特定組分的組合獲得的產品。
本發(fā)明海包括一種用于治療癌癥的藥物組合物，包括施用治療有效量的本發(fā)明化合物，并且含有或不含有藥學可接受載體或稀釋劑。本發(fā)明的適當組合物包括含有本發(fā)明的化合物的水溶液和藥理學可接受的載體，例如，處于一定pH水平的鹽水，例如，7.4。所述的溶液可以通過局部快速濃注引入到患者的血流內。
含有活性成分的藥物組合物可以是適合口服使用的形式，例如，作為片劑，錠劑，菱形錠劑，水或油混懸液，可分散散劑或顆粒劑，乳劑，硬或軟膠囊，或糖漿劑或酏劑。用于口服使用的組合物可以按照用于制造藥物組合物的已知方法來制備，并且所述的組合物可以含有一種或多種選自甜味劑、矯味劑、著色劑和防腐劑的試劑從而提供藥學上美觀和可口的制劑。片劑含有和適合制備片劑的藥學可接受賦形劑混和的活性成分。這些賦形劑可以例如，惰性稀釋劑，例如碳酸鈣，碳酸鈉，乳糖、磷酸鈣或磷酸鈉；造粒劑和崩解劑，例如，微晶纖維素，交聯(lián)羧甲基纖維素鈉，玉米淀粉或藻酸；粘合劑，例如淀粉，明膠，聚乙烯吡咯烷酮或阿拉伯膠，和潤滑劑，例如，硬脂酸鎂，硬脂酸或滑石粉。片劑可以未包衣，或者它們可以通過已知技術將其包衣以掩蔽藥物的不快味道或者延遲在胃腸道內的崩解和吸收并由此獲得長時間的緩釋作用。例如，水溶性味覺掩蔽材料例如羥丙基-甲基纖維素或羥丙基-纖維素，或者延時材料例如乙基纖維素，醋酸纖維素buryrate。
本發(fā)明的化合物還可以與其他按照其治療病癥的具體效用來選擇的已知治療劑聯(lián)合給藥。例如，在骨相關性疾病的情況中，有效的聯(lián)合包括具有抗吸收的雙膦酸類，例如阿侖特羅和利塞膦酸鈉；整聯(lián)蛋白阻斷劑(定義如下)，例如αvβ3拮抗劑；雌激素替代療法中的共軛雌激素，例如PREMPROO，PREMARIN；和ENDOMETRION；選擇性雌激素受體調制劑(SERMs)，例如雷洛昔芬，著洛昔芬著洛昔芬，CP-336，156(Pfizer)和拉索昔芬(lasofoxifen)；cathespin K抑制劑；和ATP質子泵抑制劑。
本發(fā)明化合物還適于與已知的抗癌藥聯(lián)合。已知的抗癌藥包括下列雌激素受體調制劑，雄激素受體調制劑，視黃酸受體調制劑，細胞毒性劑，抗增殖劑，異戊烯-蛋白質轉移酶抑制劑，HMG-CoA還原酶抑制劑，HIV蛋白酶抑制劑，反轉錄酶抑制劑，和其他血管生成抑制劑。當與放射療法聯(lián)合施用時本發(fā)明的化合物特別有效?，F(xiàn)有技術中已經描述了與放射療法結合施用抑制VEGF的協(xié)同作用。(參見WO00/61186.)″雌激素受體調制劑″是指無論其機理可干擾或抑制雌激素與受體的結合的化合物。雌激素受體調制劑的實例包括，但不限于，他莫昔芬，雷洛昔芬，艾多昔芬，LY353381，LY117081，托瑞米芬，fulvestrant，4-[7-(2，2-二甲基-l-氧代丙氧基-4-甲基-2-[4-[2-(l-哌啶基)乙氧基]苯基]-2H-l-苯并吡喃-3-基]-苯基-2，2-二甲基丙酸酯，4，4′-二羥基二苯酮-2，4-二硝基苯基-腙，和SH646。
″雄激素受體調制劑″是指無論其機理、可干擾或抑制雄激素結合受體的化合物。雄激素受體調制劑的實例包括非那雄胺和其他5α-還原酶抑制劑，尼魯米特，氟他胺，比卡米特，liarozole，和abirateroneacetate。
″視黃酸受體調制劑″是指無論其機理可干擾或抑制視黃酸結合受體的化合物。視黃酸受體調制劑的實例包括維生素A酸，13-cis-視黃酸，9-cis-視黃酸，α-二氟甲基鳥氨酸，ILX23-7553，反式-N-(4′-羥基苯基)雷替米特(retinamide)，和N-4-羧基苯基雷替米特。
″細胞毒性劑″是指主要通過直接干擾細胞活動或抑制或干擾細胞減數(shù)分裂引起細胞死亡的化合物，包括烷化劑，腫瘤壞死因子，嵌入劑，微管蛋白抑制劑，和拓撲異構酶抑制劑。
細胞毒性劑的實例包括，但不限于，替拉扎明，sertenef，腫瘤壞死因子，異環(huán)磷酰胺，tasonermin，氯尼達明，卡鉑，阿霉素，六甲蜜胺，潑尼莫司汀，二溴衛(wèi)矛醇，雷諾氮芥，福泰氮芥，奈達鉑，奧沙利鉑，泰莫佐羅，heptaplatin，雌莫司汀，二丙胺磺酯，氯乙環(huán)磷酰胺，尼莫司汀，螺溴丙酰胺，嘌米舌泊，樂鉑，satraplatin，profiromycin，順鉑，irofulven，dexifosfamide，順式-胺二氯(2-甲基-吡啶)鉑，芐基鳥嘌呤，glufosfamide，GPX100，(反式，反式，反式)-二-mu-(己烷-1，6-二胺)-mu-[二胺-鉑(II)]二[二胺(氯)鉑(n)]四氯化物，二氮雜環(huán)丁烷基精胺，三氧化砷，1-(11-十二烷基氨基-10-羥基十一氨基)-3，7-二甲基黃嘌呤，佐柔比星，伊達比星，柔紅霉素，比桑那，米托蒽醌，吡喃阿霉素，pinafide，戊柔比星，amrubicin，抗酮瘤，3′-脫氨基-3′-嗎啉代-13-脫氧-10-羥基洋紅霉素，安那霉素，galarubicin，elinafide，MEN10755，和4-脫甲氧基-3-脫氨基-3-氮雜環(huán)丙烷基-4-甲基磺?；?柔紅霉素(參見WO00/50032)。
微管蛋白抑制劑的實例包括紫杉醇，硫酸長春地辛，3′，4′-二氫-4′-脫氧-8′-去甲長春花鹼，多西紫杉，根霉素，dolastatin，mivobulin羥乙基磺酸鹽，auristatin，cemadotin，RPR109881，BMS184476，vinflunine，cryptophycin，2，3，4，5，6-五氟-N-(3-氟-4-甲氧基苯基)苯磺酰胺，脫水長春堿，N，N-二甲基-L-纈氨酰基-L-纈氨?；?N-甲基-L-纈氨?；?L-脯氨?；?L-脯氨酸-t-丁基酰胺，TDX258，和BMS188797。
拓撲異構酶抑制劑的一些實例是拓撲替康，hycapt胺，伊立替康，rubitecan，6-乙氧基p丙酰基-3′，4′-O-exo-亞芐基-教酒菌素，9-甲氧基-N，N-二甲基-5-硝基吡唑并[3，4，5-kl]吖啶-2-(6H)丙胺，l-氨基-9-乙基-5-氟-2，3-二氫-9-羥基-4-甲基-1H，12H-苯并[de]吡喃并[3′，4′b，7]吲嗪并[1，2b]喹啉-10，13(9H，15H)二酮，lurtotecan，7-[2-(N-異丙基氨基)乙基]-(20S)喜樹堿，BNP1350，BNPI1100，BN80915，BN80942，磷酸依托泊甙，替尼泊甙，sobuzoxane，2′-二甲基氨基-2′-脫氧-依托泊甙，GL331，N-[2-(二甲基氨基)乙基]-9-羥基-5，6-二甲基-6H-吡啶并[4，3-b]咔唑-1-羧酰胺，asulacrine，(5a，5aB，8aa，9b)-9-[2-[N-[2-(二甲基氨基)乙基]-N-甲基氨基]乙基]-5-[4-羥基-3，5-di甲氧基苯基]-5，5a，6，8，8a，9-六氫呋(3′，4′6，7)萘并(2，3-d)-1，3-二氧雜環(huán)戊烯-6-酮，2，3-(亞甲基二氧基)-5-甲基-7-羥基-8-甲氧基苯并[c]-菲啶鎓，6，9-二[(2-氨基乙基)氨基]苯并[g]異喹啉-5，10-二酮，5-(3-氨基丙基氨基)-7，10-二羥基-2-(2-羥基乙基氨基甲基)-6H-吡唑并[4，5，1-de]吖啶-6-酮，N-[1-[2(二乙基氨基)乙基氨基]-7-甲氧基-9-氧代-9H-噻噸-4-基甲基]甲酰胺，N-(2-(二甲基氨基)乙基)吖啶-4-羧酰胺，6-[[2-(二甲基氨基)乙基]氨基]-3-羥基-7H-茚[2，1-c]喹啉-7-酮，和dimesna。
″抗增殖劑″包括反義RNA和DNA低聚核苷酸，例如G3139，ODN698，RVASKRAS，GEM231和dE3001，和抗代謝藥，例如依諾他濱，卡莫氟，替加氟，噴托他丁，多西氟尿啶，曲麥克特，氟達拉賓，卡培他濱，galocitabine，阿糖胞苷酯，fosteabine鈉水合物，raltitrexed，paltitrexid，emitefur，噻唑呋林，脫氧氮雜胞苷，nolatrexed，pemetrexed，nelzarabine，2′-脫氧-2′-亞甲基胞苷，2′-氟亞甲基-2′-脫氧胞苷，N-[5-(2，3-二氫-苯并呋喃基)磺?；鵠-N′-(3，4-二氯苯基)脲，N6-[4-脫氧-4-[N2-[2(E)，4(E)-十四坦二烯酰基1]甘氨?；被鵠-L-甘油-B-L-甘露-吡喃庚糖基]腺嘌呤，aplidine，ecteinascidin，troxacitabine，4-[2-氨基4-氧代-4，6，7，8-四氫-3H-嘧啶并[5，4-b][1，4]噻嗪-6-基-(S)-乙基]-2，5-噻吩基-L-谷氨酸，氨基蝶呤，5-flurouracil，丙氨菌素，11-乙酰基-8-(氨基甲酰氧基甲基)4-甲?；?6-甲氧基-14-氧雜-1，11-二氮雜四環(huán)丙(7.4.1.0.0)-十四碳-2，4，6-三烯-9-基乙酸酯，swainsonine，洛美曲索，右丙亞胺，methioninase，2′-氰基-2′-脫氧-N4-palinitoyl-1-B-D-呋喃阿拉伯糖基胞嘧啶，和3-氨基吡啶-2-羧醛縮氨基硫脲?！蹇乖鲋硠暹€包括生長因子的單克隆抗體，不是″血管生成抑制劑″下所述的那些，例如司徒曼布，和腫瘤抑制基因，例如p53，他可以精重組病毒階段的基因轉化傳遞(參見例如美國專利6,069,134)。
″HMG-CoA還原酶抑制劑″是指3-羥基-3-甲基戊二醛-CoA還原酶的抑制劑。對HMG-CoA還原酶具有抑制活性的化合物可以很容易地通過本領域熟知的分析方法來鑒定。例如，參見美國專利4,231,938第6欄和WO84/02131第30-33頁中描述的引用的分析。
術語″HMG-CoA還原酶抑制劑″和″HMG-CoA還原酶的抑制劑″在本文使用時具有相同含義。
可以使用的HMG-CoA還原酶抑制劑的實例包括，但不限于，洛伐他汀(洛伐他汀)(MEVACOR，參見美國專利4,231,938，4,294,926和4,319,039)；辛伐他汀(辛伐他汀)(ZOCORO，參見美國專利4,444,784，4,820,850和4,916,239)；普伐他汀(pravastatin)(PRAVACHOLO，參見美國專利4,346,227，4,537,859，4,410,629，5,030,447和5,180,589)；氟伐他汀(LESCOLO，參見美國專利5,354,772,4,911,165，4,929,437，5,189,164，5,118,853，5,290,946和5,356,896)；阿伐他汀(LIP1TOR)，參見美國專利5,273,995，4,681,893，5,489,691和5,342,952)；和西伐他汀(也稱作利伐他汀(rivastatin)和BAYCHOL)，參見美國專利5,177,080)。本發(fā)明方法中可以使用的這些和其他HMG-CoA還原酶抑制劑的結構式公開在M.Yalpani，″Cholesterol Lowering Drugs″，Chemistry &Industry，pp.85-89(52月1996)的第97頁和美國專利4,782,084和4,885,314中。本文使用的術語HMG-CoA還原酶抑制劑包括所述化合物的具有HMG-CoA還原酶抑制活性的所有藥學可接受內酯和開環(huán)酸形式(即，其中內酯環(huán)打開形成游離酸)以及鹽和酯，并且由此這些鹽、酯、開環(huán)酸和內酯形式的應用屬于本發(fā)明的范圍內。內酯部分及其相應開環(huán)酸形式的舉例如結構I和II所示。
在其中開環(huán)酸形式可能存在的HMG-CoA還原酶抑制劑中，從開環(huán)酸可能優(yōu)先生成鹽和酯形式，并且所有的形式概括在本文使用的術語″HMG-CoA還原酶抑制劑″的含義內。優(yōu)選地，該HMG-CoA還原酶抑制劑選自洛伐他汀和辛伐他汀，并且最優(yōu)選辛伐他汀。文中，有關HMG-CoA還原酶抑制劑的術語″藥學可接受鹽″應是指本發(fā)明所用化合物的無毒鹽，它們一般是通過游離酸與適當有機或無機堿反應來制備的，特別是那些形成陽離子的鹽，例如鈉、鉀、鋁、鈣、鋰、鎂、鋅和四甲基銨，以及那些從胺形成的鹽，例如氨、乙二胺、N-甲基葡糖胺，賴氨酸，精氨酸，鳥氨酸，膽堿，N，N′-聯(lián)芐基乙二胺，氯普魯卡因，二乙醇胺，普魯卡因，N-芐基苯乙基胺，1-p-氯芐基-2-吡咯烷-1′-基-甲基苯并咪唑，二乙胺，哌嗪和三(羥基甲基)氨基甲烷。HMG-CoA還原酶抑制劑的鹽形式的其他實例可以包括，但不限于，乙酸鹽，苯磺酸鹽，苯甲酸鹽，碳酸氫鹽，硫酸氫鹽，酒石酸氫鹽，硼酸鹽，溴化物，乙底酸鈣，camsylate，碳酸鹽，氯化物，棒酸鹽，檸檬酸鹽，二氫氯化物，乙底酸鹽，edisylate，estolate，esylate，富馬酸鹽，gluceptate，葡糖酸鹽，谷氨酸鹽，乙醇酰基對氨酸苯胂酸鹽，己基間苯二酚，hydrab胺，氫溴化物，鹽酸鹽，羥基萘甲酸鹽，碘化物，isothionate，乳酸鹽，乳糖酸鹽，月桂酸鹽，蘋果酸鹽，馬來酸鹽，扁桃酸鹽，甲磺酸鹽，甲基硫酸鹽，粘酸鹽，napsylate，硝酸鹽，油酸鹽，草酸鹽，撲酸鹽，棕櫚酸鹽，panthothenate，磷酸鹽/磷酸氫鹽，聚半乳糖醛酸鹽，水楊酸鹽，硬脂酸鹽，堿式醋酸鹽，琥珀酸鹽，鞣酸鹽，酒石酸鹽，teoclate，甲苯磺酸鹽，triethiodide，和戊酸鹽。
所述HMG-CoA還原酶抑制劑化合物的酯衍生物可以起前藥的作用，當被吸收到溫血動物的血流內時，他可以以釋放除藥物形式的方式裂解丙允許藥物產生改進的治療功效。
″異戊烯-蛋白質轉移酶抑制劑″是指抑制一種或異戊烯-蛋白質轉移酶的任意組合的化合物，包括法呢基-蛋白質轉移酶(FPTase)，香葉基香葉基-蛋白質轉移酶I型(GGPTase-I)和香葉基香葉基-蛋白質轉移酶II型(GPTase-II，也稱作RabGGPTase)。異戊烯-蛋白質轉移酶抑制化合物的實例包括(±)-6-[氨基(4-氯苯基)(1-甲基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-(3-氯苯基)-1-甲基-2(1H)-喹啉酮，(-)-6-[氨基(4-氯苯基)(1-甲基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-(3-氯苯基)-1-甲基-2(1H)-喹啉酮，(+)-6-[氨基(4-氯苯基)(1-甲基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-(3-氯苯基)-1-甲基-2(1H)-喹啉酮，5(S)-正丁基-(2，3-二甲基苯基)-4-[1-(4-氰基芐基)-5-咪唑基甲基]-2-哌嗪酮，(S)-1-(3-氯苯基)-4-[1-(4-氰基芐基)-5-咪唑基甲基]-5-[2-(乙磺?；?甲基]-2-哌嗪酮，5(S)-正丁基-(2-甲基苯基)-4-[1-(4-氰基芐基)-5-咪唑基甲基]-2-哌嗪酮，1-(3-氯苯基)-4-[1-(4-氰基芐基)-2-甲基-5-咪唑基甲基]-2-哌嗪酮，1-(2，2-聯(lián)苯基乙基)-3-[N-(1-(4-氰基芐基)-1H-咪唑-5-基乙基)氨基甲?；鵠哌啶，4-{5-[4-羥甲基-4-(4-氯吡啶-2-基甲基)-哌啶-1-基甲基]-2-甲基咪唑-1-基甲基}苯甲腈，4-{5-[4-羥甲基-4-(3-氯芐基)-哌啶-1-基甲基]-2-甲基咪唑-1-基甲基}苯甲腈，4-{3-[4-(2-氧代-2H-吡啶-1-基)芐基]-3H-咪唑-4-基甲基}苯甲腈，4-{3-[4-(5-氯-2-氧代-2H-[1，2’]聯(lián)吡啶-5’-基)-3H-咪唑-4-基甲基}苯甲腈，4-{3-[4-2-氧代-2H-[1，2’]聯(lián)吡啶-5’-基)-3H-咪唑-4-基甲基}苯甲腈，4-[3-(2-氧代-1-二氫吡啶-4-基甲基)-3H-咪唑-4-基甲基]苯甲腈，18，19-二氫-19-氧代-5H，17H-6，10，12，16-二甲雄烯(dimetheno)-1H-咪唑[4，3-c][1，11，4]二氧雜氮雜環(huán)-nonadecine-9-甲腈，(±)-19，20-二氫-19-氧代-5H-18，21-乙烷并(ethano)-12，14-乙烯并(etheno)-6，10-甲烯-22H-苯并[d]咪唑并[4，3-k][1，6，9，12]氧雜三氮雜-環(huán)octadecine-9-甲腈，19，20-二氫-19-氧代-5H，17H-18，21-乙烷并(ethano)-6，1012，16-二甲烯-22H-咪唑并[3，4-h][1，8，11，14]氧雜三氮雜-環(huán)eicosine-9-甲腈，和(±)-19，20-二氫-3-甲基-19-氧代-5H-18，21-乙烷并(ethano)-12，14-乙烯并(etheno)-6，10-甲烯-22H-苯并[d]咪唑并[4，3-k][1，6，9，12]氧雜-三氮雜環(huán)octadecine-9-甲腈。
異戊烯蛋白轉移酶抑制劑的其他實例可參見下列文獻和專利WO96/30343，WO 97/18813，WO 97/21701，WO 97/23478，WO97/38665，WO 98/28980，WO 98/29119，WO 95/32987，美國專利5,420,245，美國專利5,523,430，美國專利5,532,359，美國專利5,510,510，美國專利5,589,485，美國專利5,602,098，歐洲專利公告0 618221，歐洲專利公告0 675 112，歐洲專利公告0 604 191，歐洲專利公告0 696 593，WO 9419357，WO 95/08542，WO 95/11917M WO95/12612，WO 95/12572，WO 95/10514，美國專利5,661,152，WO95/10515，WO 95/24612，WO 95/34851，WO 96/30017，WO 96/30018，WO 96/30362，WO 96/30363，WO 96/31111，WO 96/31477，WO96/31478，WO 96/31501，WO 97/00252，WO 9703050，WO 97/04785，WO 97/02920，WO97/17070，WO97/23478，WO97/26246，WO97/30053，WO97/44350，WO98/02436，和美國專利5,532,359。
對于血管生成的異戊烯-蛋白質轉移酶抑制劑的實例參見European J.of Cancer，Vol.35，No.9，pp.1394-1401(1999)。
HIV蛋白酶抑制劑的實例包括安潑那韋，阿波卡韋，CGP-73547，CGP-61755，DMP-450，吲哚那韋，奈非那韋，替普那韋，利托那韋，沙喹那韋，ABT-378，AG 1776，和BMS-232,632。反轉錄酶抑制劑的實例包括地拉韋定，依非韋倫，GS-840，HB Y097，拉米呋定，奈韋拉平，AZT，3TC，ddC，和ddI。
″血管生成抑制劑″是指無論機理如何抑制新血管形成的化合物。血管生成抑制劑的化合物包括，但不限于，酪氨酸激酶抑制劑，例如酪氨酸激酶受體Flt-1(VEGFR1])和Flk-1/KDR(VEGFR20)的抑制劑，表皮衍化的、成纖維細胞衍化的或血小板衍化的生長因子的抑制劑，MMP(基質金屬蛋白酶)抑制劑，整聯(lián)蛋白阻斷劑，干擾素-α，白介素-12，戊聚糖多硫酸酯，環(huán)加氧酶抑制劑，包括非甾類抗炎藥物(NSAIDs)如阿司匹林和布洛芬以及選擇性環(huán)加氧酶-2抑制劑如塞來昔布和洛芬昔布(PNAS，Vol.89，p.7384(1992)；JNCI，Vol.69，p.475(1982)；Arch.Opthalmol.，Vol.108，p.573(1990)；Anat.Rec.，Vol.238，p.68(1994)；FEBS Letters，Vol.372，p.83(1995)；Clin，Orthop.Vol.313，p.76(1995)；J.Mol.Endoerinol.，Vol.16，p.107(1996)；Jpn.J.Pharmacol.，Vol.75，p.105(1997)；CancerRes.，Vol.57，p.1625(1997)；Cell，Vol.93，p.705(1998)；Intl.J.Mol.Med.，Vol.2，p.715(1998)；J.Biol.Chem.，Vol.274，p.9116(1999))，羧酰胺基三唑，combretastatin A-4，squal胺，6-O-氯乙酰基-羰基)-煙曲霉醇，沙利度胺，制管張素，肌鈣蛋白-1，血管緊張素II拮抗劑(參見Fernandez等，J.Lab.Clin.Med.105141-145(1985))，和VEGF的抗體(參見，Nature Biotechnology，Vol.17，pp.963-968(October 1999)；Kim等，Nature，362，841-844(1993)；WO00/44777；和WO00/61186)。
如上所述，與NSAID的組合涉及NSAID的應用，其是有效的COX-2抑制劑。出于本說明書的目的，如果利用本文所述的細胞或微粒體試驗測定對COX-2的抑制作用具有等于或小于1μm的IC50，則該NSAID有效。本發(fā)明還包括與是選擇性COX-2抑制劑的NSAID的組合。出于本說明書的目的，作為COX-2的選擇性抑制劑的NSAID被定義為具有對COX-2的抑制作用高于對COX-1的至少100倍的特異性的化合物，這是通過下文所述細胞或微粒體試驗中評估的對COX-2的IC50與對COX-2的IC50的比率測定的。此類化合物包括，但不限于下列公開的那些美國專利5,474,995，授權于1995年12月12日，美國專利5,861,419，授權于1999年1月19日，美國專利6,001,843，授權于1999年12月14日，美國專利6,020,343，授權于2000年2月1日，美國專利5,409,944，授權于1995年4月25日，美國專利5,436,265，授權于1995年7月25日，美國專利5,536,752，授權于1996年7月16，美國專利5,550,142，授權于1996年8月27日，美國專利5,604,260，授權于1997年2月18日，美國專利5,698,584，授權于1997年12月16日，美國專利5,710,140，授權于1998年1月20日，WO 94/15932，公開于1994年7月21，美國專利5,344,991，授權于1994年6月6日，美國專利5,134,142，授權于1992年6月28日，美國專利5,380,738，授權于1995年1月10日，美國專利5,393,790，授權于1995年2月20，美國專利5,466,823，授權于1995年11月14日，美國專利5,633,272，授權于1997年5月27日，和美國專利5,932,598，授權于1999年8月3日，上述文獻均在此引入作為參考。
COX-2的抑制劑特別適用于本發(fā)明的治療方法中的是3-苯基-4-(4-(甲基磺?；?苯基)-2-(5H)-呋喃酮；和 5-氯-3-(4-甲基磺?；?苯基-2-(2-甲基-5-吡啶基)吡啶； 或其藥學可接受鹽。
制備上述COX-2抑制劑化合物的通用和具體合成方法參見美國專利5,474,995，授權于1995年12月12日，美國專利5,861,419，授權于1999年1月19日，和美國專利6,001,843，授權于1999年12月14日，上述文獻均引入作為參考。
已經被認為是COX-2的特異性抑制劑并因此適用于本發(fā)明的化合物包括，但不限于，下列 或其藥學可接受鹽。
已經被認為是COX-2的特異性抑制劑并因此適用于本發(fā)明的化合物，及其合成方法，可以參見下列專利、待決申請和文獻中，其在此引入作為參考WO 94/15932，公開于1994年6月21日，美國專利5,344,991，授權于1994年7月6日，美國專利5,134,142，授權于1992年6月28日，美國專利5,380,738，授權于1995年1月10日，美國專利5,393,790，授權于1995年2月20日，美國專利5,466,823，授權于1995年11月14日，美國專利5,633,272，授權于1997年5月27日，和美國專利5,932,598，授權于1999年8月3日。
被認為是COX-2的特異性抑制劑并因此適用于本發(fā)明的化合物，及其合成方法，可以參見下列專利、待決申請和文獻中，其在此引入作為參考美國專利5,474,995授權于1995年12月12日，美國專利5,861,419，授權于1999年1月19日，美國專利6,001,843，授權于1999年12月14日，美國專利6,020,343，授權于2000年2月1日，美國專利5,409,944，授權于1995年4月25日，美國專利5,436,265，授權于1995年6月25日，美國專利5,536,752，授權于1996年6月16日，美國專利5,550,142，授權于1996年8月27日，美國專利5,604,260，授權于1997年2月18日，美國專利5,698,584，授權于1997年12月16日，和美國專利5,710,140，授權于1998年1月20日。
血管生成抑制劑的其他實例包括，但不限于，endostation，ukrain，ranpirnase，IM862，5-甲氧基-4-[2-甲基-3-(3-甲基-2-丁烯基)環(huán)氧乙烷基]-1-氧雜螺[2，5]辛-6-基(氯乙?；?氨基甲酸酯，乙酰基dinanaline，5-氨基-1-[[3，5-二氯-4-(4-氯苯甲?；?苯基]甲基]-1H-1，2，3-三唑-4-甲酰胺，CM101，squal胺，combretastatin，RPI4610，NX31838，硫酸化甘露戊糖磷酸鹽，7，7-(羰基-二[亞氨基-N-甲基-4，2-吡咯并羰基-亞氨基[N-甲基-4，2-吡咯]-羰基亞氨基]-二-(1，3-萘二磺酸酯)，和3-[(2，4-二甲基吡咯基-5-基)亞甲基]-2-二氫吲哚酮(SU5416)。
如上所述，″整聯(lián)蛋白阻斷劑″是指選擇性拮抗、抑制或阻礙生理配體與αvβ3整聯(lián)蛋白結合的化合物，是指選擇性拮抗、抑制或阻礙生理配體與αvβ5整聯(lián)蛋白結合的化合物，是指選擇性拮抗、抑制或阻礙生理配體與αvβ3整聯(lián)蛋白和αvβ5整聯(lián)蛋白兩者結合的化合物，和是指拮抗、抑制或阻礙表達甾毛細管內皮細胞上的特定整聯(lián)蛋白的活性的化合物。該術語還是指αvβ6，αvβ8，α1β1，α2β1，α5β1，α6β1和α6β4整聯(lián)蛋白。術語還是指αvβ3，αvβ5，αvβ6，αvβ8，α1β1，α2β1，α5β1，α6β1和α6β4整聯(lián)蛋白的任意組合。
酪氨酸激酶抑制劑的一些具體實例包括N-(三氟甲基苯基)-5-甲基異噁唑-4-甲酰胺，3-[(2，4-二甲基吡咯基-5-劑)亞甲基)吲哚啉-2-酮，17-(烯丙基氨基)-17-脫甲氧基格爾德霉素，4-(3-氯-4-氟苯基氨基)-7-甲氧基-6-[3-(4-嗎啉基)丙氧基]喹唑啉，N-(3-乙炔基苯基)-6，7-二(2-甲氧基乙氧基)-4-喹唑啉胺，BIBX1382，2，3，9，10，11，12-六氫-10-(羥基甲基)-10-羥基-9-甲基-9，12-環(huán)氧-1H-二吲哚并[1，2，3-fg3′，2′，1′-kl]吡咯并[3，4-i][1，6]苯并二氮雜環(huán)辛間四烯-1-酮，SH268，染料木素，STI571，CEP2563，4-(3-氯苯基氨基)-5，6-二甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶甲磺酸酯，4-(3-溴-4-羥基苯基)氨基-6，7-二甲氧基喹唑啉e，4-(4′-羥基苯基)氨基-6，7-二甲氧基喹唑啉e，SU6668，STI571A，N-4-氯苯基-4-(4-吡啶基甲基)-1-酞嗪胺，和EMD121974。
本發(fā)明的化合物還可以單獨或與血小板纖維蛋白原受體(GPIIb/IIIa)拮抗劑，例如替羅非班聯(lián)合，用于抑制癌細胞的遷移。腫瘤細胞可以經凝血酶生成大量激活血小板。這種激活作用與VEGF的釋放有關。VEGF的釋放通過增加粘附點向血管內皮外滲來增強遷移作用(Amirkhosravi，Platelets 10，285-292，1999)。所以，本發(fā)明的化合物可以單獨或者與GP IIb/IIIa)拮抗劑聯(lián)合使用發(fā)揮抑制遷移的作用。其他纖維蛋白原受體拮抗劑的實例包括阿昔單抗，表非替得，sibrafiban，拉米非班，lotrafiban，cromofiban，和CT50352。
制劑本發(fā)明的化合物可以單獨或者，優(yōu)選地結合藥學可接受載體、賦形劑或稀釋劑，任選地與已知輔劑如明礬一起，成為一種藥物組合物，按照標準藥學實踐，施用給哺乳動物，優(yōu)選是人體。所述的化合物可以經口服或經非腸道給藥，包括靜脈內、肌肉內、腹膜內、皮下、直腸和/或局部途徑給藥。
如果配制為固定劑量，該采用本發(fā)明化合物的聯(lián)合產品是甾下述的劑量范圍內并且其他藥學活性劑也介于其被批準的劑量范圍內。當組合制劑不適宜時，本發(fā)明的化合物可以與已知的藥學可接受試劑依次使用。
口服使用的制劑也可以作為硬明膠膠囊存在，其中活性成分與惰性固體稀釋劑混和，該惰性固體稀釋劑例如，碳酸鈣、磷酸鈣或高嶺土，或作為軟明膠膠囊，其中該活性成分與水可溶性載體例如聚乙二醇或油介質例如花生油，液體石蠟或橄欖油混和。
對于本發(fā)明化合物的口服應用，特別對于化療而言，所選化合物可以以例如片劑或膠囊的形式，或作為水溶液或混懸液的形式給藥。在口服使用片劑的情況中，常用的載體包括乳糖和玉米淀粉，并且通常加入潤滑劑，例如硬脂酸鎂。對于膠囊形式的口服給藥，適用的稀釋劑包括乳糖和干燥玉米淀粉。當需要水混懸液口服使用時，活性成分與乳化劑和助懸劑混和。如果需要，可以加入某些甜味劑和/或矯味劑。為了肌肉內、腹膜內、皮下和靜脈內使用，通常制備活性成分的滅菌溶液，并且該溶液的pH應當進行適當調整和緩沖。為了靜脈內使用，溶質的總濃度應受到控制，從而使制劑等滲。
含水混懸液含有與適合制備水混懸液的賦形劑混和在一起的活性物質。該賦形劑為助懸劑，例如羧甲基纖維素鈉，甲基纖維素，羥丙基甲基-纖維素，藻酸鈉，聚乙烯-吡咯烷酮，黃芪膠和阿拉伯膠；分散或濕潤劑可以是天然磷脂，例如卵磷脂，或烯化氧與脂肪酸的縮合產物，例如聚氧乙烯硬脂酸酯，或環(huán)氧乙烷和長鏈脂肪醇例如十七碳乙烯-氧基鯨蠟醇的縮合產物，或環(huán)氧乙烷與衍生自脂肪酸和己糖醇的偏酯的縮合產物，例如聚氧乙烯山梨糖醇一油酸酯，或環(huán)氧乙烷與衍生自脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的縮合產物，例如聚氧乙烯脫水山梨糖醇一油酸酯。含水混懸液還可以含有一種或多種防腐劑，例如對羥基苯甲酸乙酯或正丙酯，一種或多種著色劑，一種或多種矯味劑，和一種或多種甜味劑，例如蔗糖，糖精或天冬甜素。
油性混懸液可以通過將活性成分懸浮在植物油，例如花生油、橄欖油、芝麻油或椰子油或礦物油例如液體石蠟中來配制。油性混懸液可以含有增稠劑，例如蜂蠟，硬石蠟或鯨蠟醇。甜味劑例如上述那些，和可以加入矯味劑以提供可口的口服制劑。這些組合物可以通過加入抗氧劑來防腐，例如丁基羥基苯甲醚或α-生育酚。
適合通過加入水制成水混懸液的可分散粉末和顆粒是將活性成分與分散或濕潤劑、混懸劑和一種或多種防腐劑混和。適當?shù)姆稚⒒驖駶檮┖椭鷳覄├缟鲜鲆呀浱峒暗哪切?。其他賦形劑例如甜味劑、矯味劑和著色劑也可以存在。這些組合物可以通過加入抗氧劑例如抗壞血酸防腐。
本發(fā)明的藥物組合物還可以是水包油乳液的形式。油相可以是植物油，例如橄欖油或花生油，或礦物油，例如液體石蠟，磷脂類，例如大豆卵磷脂，和衍生自脂肪酸和己糖醇酐的酯或偏酯，例如脫水山梨糖醇一油酸酯，該偏酯與環(huán)氧乙烷的縮合產物，例如聚氧化乙烯脫水山梨糖醇一油酸酯。乳液還可以含有甜味劑、矯味劑、防腐劑和抗氧劑。
糖漿劑和酏劑可以配制為甜味劑，例如甘油，丙二醇，山梨糖醇或蔗糖。此類制劑還可以含有緩和劑、防腐劑、矯味劑和著色劑和抗氧劑。
該藥物組合物可以是滅菌可注射水溶液的形式。在可接受載體和溶劑酯可以使用的是水、林格氏溶液和等滲氯化鈉溶液。
滅菌可注射制劑還可以是一種滅菌可注射水包油微乳液，其中該活性成分溶于油相內。例如，活性成分首先可以溶解在大豆油和卵磷脂的混和物中。該油溶液隨后被加入到水和甘油混和物中并處理形成微乳液。
可注射溶液或微乳液可以通過局部快速濃注被引入到患者的血液內?；蛘?，可以優(yōu)選將溶液或微乳液以維持本發(fā)明化合物恒定循環(huán)濃度的方式給藥。為了維持恒定濃度，可以采用連續(xù)靜脈內給藥裝置。該裝置的實例是Deltec CADD-PLUSTM5400型靜脈內泵。
該藥物組合物可以是用于肌肉內和皮下給藥的滅菌可注射水或油型混懸液的形式。該混懸液可以按照已知技術利用適當?shù)姆稚┗蛩芤汉椭鷳覄﹣砼渲疲缟纤?。滅菌可注射制劑還可以是存在于無毒非腸道可接受稀釋劑或溶劑中的滅菌溶液或混懸液，例如存在于1，3-丁二醇中的溶液。此外，滅菌、非揮發(fā)性油通常用作溶劑或助懸介質。出于此目的，可以使用任何系列的非揮發(fā)性油，包括合成甘油一-或二酯。此外，脂肪酸例如油酸可以用于可注射劑的制備中。
式I的化合物還可以以栓劑的形式用于藥物的直腸給藥。這些組合物可以通過將藥物與適當無刺激賦形劑混和制成，所述的無刺激賦形劑在常溫下為固體而在直腸溫度下為液體并由此在直腸內融化釋放藥物。該物質包括可可脂，甘油化明膠，氫化植物油，不同分子量的聚乙二醇的混和物和聚乙二醇的脂肪酸酯。
為了局部使用，可以采用含有式I化合物的霜劑、軟膏、凝膠、溶液或混懸液等。(出于本申請的目的，局部施用硬包括口腔清洗劑和含漱劑)。
本發(fā)明的化合物可以以鼻內形式經局部使用適當鼻內載體和給藥裝置給藥，或者經透皮途徑給藥，采用本領域普通技術人員熟知的透皮貼劑的形式給藥。為了以透皮給藥體系的形式給藥，顯然，劑量給藥應當連續(xù)而不是在劑量方案中間斷。本發(fā)明的化合物還可以作為栓劑、采用基質如可可脂、甘油化明膠、氫化植物油、不同分子量的聚乙二醇的混和物和聚乙二醇的脂肪酸酯給藥。
當本發(fā)明的化合物施用到人體對象中時，日劑量一般可以由主治醫(yī)生判斷，并且該劑量一般根據(jù)患者個體的年齡、體重和反應以及患者癥狀的嚴重性來判斷。
在一個舉例應用中，將適量的化合物施用給解釋癌癥治療的哺乳動物。給藥的量在約0.1mg/kg體重-約60mg/kg體重/天的范圍內，優(yōu)選0.5mg/kg體重-約40mg/kg體重/天。
除了文獻中已知的其他標準技術或試驗方法中例舉的以外，本發(fā)明的化合物可以通過下列路線所示的反應來制備。這些路線不對所述化合物構成限定，也不對所用特定取代基構成限定，僅僅是舉例說明的目的。合成路線中所示的取代基編號不一定與權利要求書中所用的有關。
路線1詳細描述了吡咯2的合成。所需β-酮基酯中間體1的示例合成方法采用Yonemitsu，等(JOC(1978)Vol.43，2087-2088)的方法。
路線1 路線2 路線3
路線4 路線5 實施例提供的實施例用于幫助進一步理解本發(fā)明。采用的具體材料、物質和調節(jié)是舉例說明本發(fā)明且不對本發(fā)明的合理范圍構成限定。
實施例13-乙基-5-甲酰基-4-碘-1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯 步驟A5-(1-羥基亞丙基)-2，2-二甲基-1，3-二噁烷-4，6-二酮將Meldrum氏酸(10g，69.4mmol)在CH2Cl2(170mL)中的溶液冷卻至0℃。腈注射器加入吡啶(11.2ml，138.8mmmol)和丙酰氯(10.1mL，76.3mmol)。所得溶液在0℃下攪拌1小時，隨后升至室溫和攪拌1小時。該反應用CH2Cl2稀釋并用HCl水溶液(15mL濃HCl在200mL水中，1x)和水(1x)洗滌。有機溶液用Na2SO4干燥且濃縮得到深紅色固體。
步驟B3-氧代戊酸叔丁酯5-(1-羥基亞丙基)-2，2-二甲基-1，3-二噁烷-4，6-二酮(18.2g，69.4mmol)、tBuOH(19.9ml，208mmol)和苯(400ml)的溶液加熱回流6小時。真空濃縮得到紅色液體。
步驟C3-乙基-5-甲基-1H-吡咯-2，4-二羧酸4-芐基酯2-叔丁基酯3-氧代戊酸叔丁酯(69.4mmol)在AcOH(44mL)中的向14℃溶液內經套管加入存在于12mLH2O中的NaNO2(4.55g，65.9mmol)。加入的速率控制在使穩(wěn)定維持在20℃以下。所得橙褐色溶液在室溫下攪拌過夜，隨后經套管加入到3-氧代丁酸芐酯(9.7ml，76.3mmol)、NH4OAc(13.4g，173.5mmol)和Zn(14.1g，215.1mmol)在26mLAcOH中的混和物內。加入的速率控制在使穩(wěn)定維持在55-70℃。將所得混懸液攪拌過夜。加入150mL的冰水，過濾該混懸液。固體用CH2Cl2徹底洗滌，隨后分離水溶液冰用CH2Cl2洗滌1次。合并的有機溶液用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌(2x)，此后用Na2SO4干燥和濃縮。通過快速色譜純化得到白色固體。
步驟D3-乙基-5-甲酰基-1H-吡咯-2，4-二羧酸4-芐基酯2-叔丁基酯用套管一次性向3-乙基-5-甲基-1H-吡咯-2，4-二羧酸4-芐基酯2-叔丁基酯(2.75mmol)在THF(32mL)、AcOH(40mL)和H2O(32mL)中的溶液內加入CAN。該反應在室溫下攪拌4小時，隨后傾入水(500mL)和用CH2Cl2萃取(3×100mL)。合并的有機溶液用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌(1×200mL)，用Na2SO4干燥和濃縮?？焖偕V純化得到白色固體。HRMS(ES)精確質量C20H23NO5(M+H+)計算值358.1649。實測值(M+Na+)380.1478步驟E5-(叔丁氧基羰基)4-乙基-2-甲?；?1H-吡咯-3-羧酸向3-乙基-5-甲?；?1H-吡咯-2，4-二羧酸4-芐基酯2-叔丁基酯(1.316g，3.682mmol)在乙醇(15.0mL)中的溶液內加入10％碳載鈀(1.300g，3.68mmol)和1，4-環(huán)己二烯(3.50mL，36.82mmol)。該反應在N2下攪拌2小時，之后經Celite墊過濾。濾液用50mL的乙酸乙酯洗滌且真空濃縮合并的有機物。所得殘余物通過制備反相HPLC純化。產物的質子NMR于標題化合物的吻合。1H NMR(500MHz，CD3OD)δ10.23(s，1H)；3.10(q，J＝7.3Hz，2I；1.61(s，9H)；1.16(t，J＝7.3Hz，3H)。HRMS(ES)精確質譜C13H17NNaO5(M+Na+)
計算值290.1001。實測值290.1001。
步驟F3-乙基-5-甲?；?4-碘-1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯向5-(叔丁氧基羰基)-4-乙基-2-甲酰基-1H-吡咯-3-羧酸(0.548g，2.05mmol)在CH2Cl2(8.30mL)中的溶液內加入存在于水(8.2mL)中的NaHCO3(0.691g，8.21mmol)溶液。該混和物在加入KI(1.021g，6.15mmol)和I2(0.570g，2.23mmol)在水中(11.15mL)的溶液的過程中劇烈攪拌。所得化合物加熱至45℃共60分鐘直至初始的紅色/褐色退色為止。將該反應冷卻至室溫和用飽和Na2SO3水溶液(25ml)終止，之后分離各相。水層用CH2Cl2(1×30mL)萃取。合并的有機層用Na2SO4干燥，過濾和濃縮。所得殘余物通過正相色譜純化(10-30％乙酸乙酯/己烷)。產物的質子NMR與標題化合物的吻合。1H NMR(500MHz，CD3OD)δ9.59(s，1H)；2.77(q，J＝7.6Hz，2H)；1.60(s，9H)；1.10(t，J＝7.6Hz，3H).HRMS(ES)精確質量C12H16INNaO3(M+Na+)計算值372.0072。實測值372.0067。
實施例23-乙基-5-甲?；?4-(吡啶-2-基乙炔基)-1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯 3-乙基-5-甲?；?4-碘-1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯按照實施例1的方法獲得。Pd(Pt-Bu3)2(7.0mg，0.010mmol)，Pd2(dba)3(6.0mg，0.010mmol)和CuI(2.0mg，0.010mmol)在干燥燒瓶內N2下混和，之前將燒瓶抽空冰充入氬氣。向燒瓶加入二噁烷(2.0mL)后，噴入氬氣，隨后依次加入i-Pr2NEt(0.0259mL，0.19mmol)，3-乙基-5-甲?；?4-碘-1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯(56.0mg，0.16mmol)在二噁烷(1.0mL)中的溶液，和2-乙炔基吡啶(0.0194mL，0.19mmol)。將該反應加熱至80℃直至起始原料完全消耗掉。使該反應冷卻至室溫后，經硅膠塞過濾且真空濃縮。所得殘余物溶液乙腈并通過反相HPLC純化。產物的質子NMR與標題化合物的吻合。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ10.23(s，1H)；3.10(q，J＝7.3Hz，2H)；1.61(s，9H)；1.16(t，J＝7.3Hz，3H).HRMS(ES)精確質量C21H21F3N2O5(M+H)計算值325.1547.實測值325.1549。
實施例33-乙基-5-甲?；?4-(6-甲氧基吡啶-2-基)-1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯 3-乙基-5-甲?；?4-碘-1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯按照實施例1所述方法制得。向溴(6-甲氧基吡啶-2-基)鋅(0.076g，0.30mmol)在THF(0.6mL)和N-甲基吡咯烷(0.44mL)中的溶液內在氬氣下加入Pd(Pt-Bu3)2(0.002g，0.0032mmol)和3-乙基-5-甲?；?4-碘-1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯(0.070g，0.20mmol)。將該反應加熱至100℃和氬氣下回流20小時。冷卻至室溫后，該反應經硅膠墊過濾和濃縮。所得殘余物通過正相色譜純化(5-15％乙酸乙酯/己烷)。產物的質子NMR與標題化合物的吻合。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ9.86(s，1H)；7.66(t，J＝7.8Hz，1H)；7.02(d，J＝7.1Hz，1H)；6.76(d，J＝8.3Hz，1I-；3.95(s，3H)；2.90(q，J＝7.3Hz，2H)；1.61(s，9H)；1.23(t，J＝7.3Hz，3H).HRMS(ES)精確質量C18H23N2O4(M+H+)計算值331.1656.實測值331.1656。
實施例44-(1-苯并呋喃-2-基)-3-乙基-5-甲?；?1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯
3-乙基-5-甲?；?4-碘-1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯按照實施例1所述方法制得。向3-乙基-5-甲酰基-4-碘-1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯(0.0597g，0.172mmol)、K3PO4(0.180g，0.85mmol)、Pd(PPh3)4(0.0120g，0.010mmol)和1-苯并呋喃-2-基硼酸(0.0330g，0.21mmol)的混和物中N2下加入二甲氧基乙烷(2.5mL)。將該反應加熱至85℃并回流5小時。冷卻至室溫后，該反應經硅膠墊過濾和濃縮。所得殘余物通過正相色譜純化(5-15％乙酸乙酯/己烷)。產物的質子NMR與標題化合物的吻合，其阻轉非對映異構體的為2∶1混和物。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ10.17(s，0.7H)；9.59(s，0.3H)；7.64(app.d，J＝7.6Hz，1H)；7.52(app.d，J＝8.1Hz，1H)；7.34(app.t，J＝7.7Hz，1H)；7.28(app.t，J＝7.6Hz，1H)，6.92(s，0.7H)；6.80(s，0.3H)；3.00(q，J＝7.3Hz，1.4H)；2.79(q，J＝7.5Hz，0.6H)；1.62(s，6.3H)；1.59(s，2.7H)；1.28(t，J＝7.3Hz，2.1H)；1.23(t，J＝7.6Hz，0.9H)。
*HRMS(ES)精確質量C20H21NNaO4(M+Na+)計算值362.1362.實測值362.1362。
實施例54-(3，5-二甲基異噁唑-4-基)-3-乙基-5-甲酰基-1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯
按照實施例4所述的方法，1-苯并呋喃-2-基硼酸用3，5-二甲基-異噁唑-4-硼酸代替，得到標題化合物。產物的質子NMR與標題化合物的吻合。HRMS(ES)精確質量C19H23F3N2O6(M+H+)計算值319.1653.實測值319.1653。
實施例64-(4-氟苯基)-3-乙基-5-甲?；?1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯 按照實施例4所述的方法，1-苯并呋喃-2-基硼酸用4-氟苯基硼酸代替，得到標題化合物。產物的質子NMR與標題化合物的吻合。HRMS(ES)精確質量C18H20FNNaO3(M+Na+)計算值340.1318.實測值340.1319。
實施例74-(4-氯苯基)-3-乙基-5-甲?；?1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯 按照實施例4所述的方法，1-苯并呋喃-2-基硼酸用4-氯苯基硼酸代替，得到標題化合物。產物的質子NMR與標題化合物的吻合。HRMS(ES)精確質量C18H20ClNNaO3(M+Na+)計算值356.1023.實測值356.1023。
實施例83-乙基-5-甲?；?4-(5-甲?；?2-呋喃基)-1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯 按照實施例4所述的方法，1-苯并呋喃-2-基硼酸用5-甲?；?2-呋喃基硼酸代替，得到標題化合物。產物的質子NMR與標題化合物的吻合。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ10.11(s，1H)；9.69(s，1H)；7.37(dd，J＝3.7，0.7Hz，1H)；6.75(dd，J＝3.7，0.7Hz，1H)；2.96(q，J＝7.6Hz，2H)；1.62(s，9H)；1.24(t，J＝7.6Hz，3H).HRMS(ES)精確質量C17H19NNaO5(M+Na+)計算值340.1156.實測值340.1156。
實施例93-乙基-5-甲?；?4-苯基-1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯
按照實施例4所述的方法，1-苯并呋喃-2-基硼酸用苯基硼酸代替，得到標題化合物。產物的質子NMR與標題化合物的吻合。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ9.43(s，1H)；7.34-7.47(m，5H)；2.71(q，J＝7.3Hz，2H)；1.61(s，9H)；1.12(t，J＝7.3Hz，3H)。HRMS(ES)精確質量C18H22NO3(M+H+)計算值300.1594.實測值300.1595。
實施例104′-乙基-2′-甲?；?1H，1′H-2，3′-聯(lián)吡咯-1，5′-二羧酸二(叔丁基)酯 按照實施例4所述的方法，1-苯并呋喃-2-基硼酸用1-(叔丁氧基羰基)吡咯-2-硼酸代替，得到標題化合物。產物的質子NMR與標題化合物的吻合。HRMS(ES)精確質量C21H29N2O5(M+W)計算值389.2071.實測值389.2073。
實施例113-乙基-5-甲?；?4-(2-甲酰基噻吩-3-基)-1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯 按照實施例4所述的方法，1-苯并呋喃-2-基硼酸用2-甲?；?3-噻吩硼酸代替。得到標題化合物。產物的質子NMR與標題化合物的吻合。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ9.68(s，1H)；9.39(s，1H)；7.85(d，J＝4.9Hz，1H)；7.16(d，J＝4.9Hz，1H)；2.75(m，1H)；2.60(m，1H)；1.62(s，9H)；1.05(t，J＝7.6Hz，3H).HRMS(ES)精確質量C17H20NO4S(M+H+)計算值334.1108.實測值334.1138。
實施例124-(4-氰基苯基)-3-乙基-5-甲酰基-1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯 按照實施例4所述的方法，1-苯并呋喃-2-基硼酸用4-氰基苯基硼酸代替，得到標題化合物。產物的質子NMR與標題化合物的吻合。HRMS(ES)精確質量C18H20N2NaO3(M+Na+)計算值347.1366.實測值347.1366。
實施例133-乙基-5-甲?；?4-甲基-1H-吡咯-2-羧酸乙酯 向3-乙基-4，5-二甲基-1H-吡咯-2-羧酸乙酯(Salor-Aldrich)(0.0147g，0.077mmol)在乙酸(5mL)、THF(4mL)和水(4mL)中的溶液內加入硝酸氨高鈰(0.169g，0.31mmol)并且將該反應室溫下攪拌。1.5小時后，將該反應傾入水(10mL)并用CH2Cl2(3×5mL)萃取。合并的有機層用飽和NaHCO3洗滌，用Na2SO4干燥，過濾，和濃縮。所得殘余物通過正相色譜純化。產物的質子NMR與標題化合物的吻合。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ9.78(s，1H)；4.36(q，J＝7.1Hz，2H)；2.76(q，J＝7.6Hz，2H)；1.62(s，3H)；1.38(t，J＝7.1Hz，3H)；1.13(t，J＝7.6Hz，3H).HRMS(ES)精確質量C11H16NO3(M+H)計算值209.1052.實測值209.1050。
實施例143，4-二乙基-5-甲酰基-1H-吡咯-2-羧酸乙酯 按照實施例13所述的方法，3-乙基4，5-二甲基-1H-吡咯-2-羧酸乙酯用3，4-二乙基-5-甲基-1H-吡咯-2-羧酸乙酯代替，得到標題化合物。產物的質子NMR與標題化合物的吻合。HRMS(ES)精確質量C12H18NO3(M+H+)計算值223.1208.實測值223.1209。
實施例153-乙基-5-甲?；?4-(4-硝基苯基)-1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯 按照實施例4所述的方法，1-苯并呋喃-2-基硼酸用4-硝基苯基硼酸代替，得到標題化合物。產物的質子NMR與標題化合物的吻合。HRMS(ES)精確質量C18H20NaN2O3(M+Na+)計算值367.1263.實測值367.1263。
實施例163-乙基-5-甲?；?4-[4-(甲氧基羰基)苯基]-1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯
按照實施例4所述的方法，1-苯并呋喃-2-基硼酸用4-(甲氧基羰基)苯基硼酸代替，得到標題化合物。產物的質子NMR與標題化合物的吻合。HRMS(ES)精確質量C20H24NO5(M+H+)計算值358.1647.實測值358.1647。
實施例174-(2-氰基苯基)-3-乙基-5-甲?；?1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯 按照實施例4所述的方法，1-苯并呋喃-2-基硼酸用2-氰基苯基硼酸代替，得到標題化合物。產物的質子NMR與標題化合物的吻合。1HNMR(500MHz，CDCl3)δ9.34(s，1H)；7.81(app.d，J＝7.8Hz，1H)；7.69(dt，J＝1.0，7.8Hz，1H)；7.55(t，J＝7.8Hz，1H)；7.45(d，J＝7.8Hz，1H)；2.74(m，1H)；2.57(m，1H)；1.62(s，9H)；1.04(t，J＝7.6Hz，3H)。HRMS(ES)精確質量C19H20N2NaO3(M+Na+)計算值347.1363.實測值347.1363。
實施例18
4-(3-氰基苯基)-3-乙基-5-甲?；?1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯 按照實施例4所述的方法，1-苯并呋喃-2-基硼酸用3-氰基苯基硼酸代替，得到標題化合物。產物的質子NMR與標題化合物的吻合。HRMS(ES)精確質量C19H20N2NaO3(M+Na+)計算值347.1366.實測值347.1370。
實施例194-(3-氯苯基)-3-乙基-5-甲酰基-1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯 按照實施例4所述的方法，1-苯并呋喃-2-基硼酸用3-氯苯基硼酸代替，得到標題化合物。產物的質子NMR與標題化合物的吻合。HRMS(ES)精確質量C19H21N2O3(M+H)計算值334.1205.實測值334.1208。
實施例204-(2，6-二氟苯基)-3-乙基-5-甲?；?1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯
按照實施例4所述的方法，1-苯并呋喃-2-基硼酸用2，6-二氟苯基硼酸代替，得到標題化合物。產物的質子NMR與標題化合物的吻合。1HNMR(500MHz，CDCl3)δ9.37(s，1H)；6.95-7.05(m，3H)；2.62(broad m，2H)；1.61(s，9H)；1.06(t，J＝7.5Hz，3H).HRMS(ES)精確質量C18H19F2NNaO3(M+Na+)計算值358.1225.實測值358.1228。
實施例213-乙基-5-甲酰基-4-(5-甲基-2-呋喃基)-1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯 按照實施例4所述的方法，1-苯并呋喃-2-基硼酸用5-甲基-呋喃-2-硼酸代替，得到標題化合物。產物的質子NMR與標題化合物的吻合。通過LC/MS(ESI)的精確質量C17H22NO4(M+H+)計算值304.1551.實測值304.19。
實施例223-乙基-5-甲酰基-4-(4-甲基苯基)-1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯
按照實施例4所述的方法，1-苯并呋喃-2-基硼酸用4-甲基苯基硼酸代替，得到標題化合物。產物的質子NMR與標題化合物的吻合。HRMS(ES)精確質量C19H24NO3(M+H+)計算值314.1751.實測值314.1773。
實施例233-乙基-5-甲?；?4-(3-甲基苯基)-1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯 按照實施例4所述的方法，1-苯并呋喃-2-基硼酸用3-甲基苯基硼酸代替，得到標題化合物。產物的質子NMR與標題化合物的吻合。1HNMR(500MHz，CDCl3)δ9.44(s，1H)；7.34(t，J＝7.8Hz，1H)；7.23(d，J＝6.6Hz，1I-，7.14(m，2H)；2.71(q，J＝7.3，2H)；2.42(s，3H)；1.62(s，9H)；1.12(t，J＝7.3Hz，3H)。HRMS(ES)精確質量C19H24NO3(M+H+)計算值314.1751.實測值314.1768。
實施例243-乙基-5-甲?；?4-(2-甲基苯基)-1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯
按照實施例4所述的方法，1-苯并呋喃-2-基硼酸用2-甲基苯基硼酸代替，得到標題化合物。產物的質子NMR與標題化合物的吻合。HRMS(ES)精確質量C18H24NO3(M+H+)計算值314.1751.實測值314.1761。
實施例253-乙基-5-甲酰基-4-噻吩-3-基-1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯 按照實施例4所述的方法，1-苯并呋喃-2-基硼酸用3-噻吩硼酸代替，得到標題化合物。產物的質子NMR與標題化合物的吻合。HRMS(ES)精確質量C16H20NO3S(M+H+)計算值306.1159.實測值306.1163。
實施例263-乙基-5-甲?；?4-噻吩-2-基-1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯
按照實施例4所述的方法，1-苯并呋喃-2-基硼酸用2-噻吩硼酸，得到標題化合物。產物的質子NMR與標題化合物的吻合。HRMS(ES)精確質量C16H20NO3S(M+H+)計算值306.1159.實測值306.1141。
實施例273-乙基-5-甲?；?4-(4-甲氧基苯基)-1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯 按照實施例4所述的方法，1-苯并呋喃-2-基硼酸用4-甲氧基苯基硼酸代替，得到標題化合物。產物的質子NMR與標題化合物的吻合。HRMS(ES)精確質量C19H24NO4(M+H+)計算值330.1700.實測值330.1712。
實施例283-乙基-5-甲?；?4-(3-甲氧基苯基)-1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯
按照實施例4所述的方法，1-苯并呋喃-2-基硼酸用3-甲氧基苯基硼酸代替，得到標題化合物。產物的質子NMR與標題化合物的吻合。HRMS(ES)精確質量C19H24NO4(M+H+)計算值330.1700.實測值330.1715。
實施例293-乙基-5-甲酰基-4-(2-甲氧基苯基)-1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯 按照實施例4所述的方法，1-苯并呋喃-2-基硼酸用2-甲氧基苯基硼酸代替，得到標題化合物。產物的質子NMR與標題化合物的吻合。HRMS(ES)精確質量C19H24NO4(M+H+)計算值330.1700.實測值330.1702。
試驗本發(fā)明上述實施例所述的化合物通過下列試驗分析并發(fā)現(xiàn)具有激酶抑制活性。特別是，本發(fā)明的化合物抑制IGF-1R或胰島素受體激酶活性并且IC50小于或等于約100μM。其他試驗是文獻酯已知的且很容易由本領域技術人員實施(參見例如，Dhanabal等，Cancer Res.59189-197；Xin等，J.Biol.Chem.2749116-9121；Sheu等，AnticancerRes.184435-4441；Ausprunk等，Dev.Biol.38237-248；Gimbrone等，J.Natl.Cancer Inst.52413-427；Nicosia等，In Vitro 18538-549)。
IGF-1R激酶試驗IGF-1R受體激酶活性是通過將磷酸鹽摻入到含有酪氨酸殘基的肽底物中來制備。肽底物的磷酸化利用抗-IGF-1R和抗-磷酸酪氨酸抗體在HTRF(Homogeneous Time Resolved Fluorescence)檢測系統(tǒng)內進行測定(Park，Y-W.，等Anal.Biochem.，(1999)269，94-104)。
材料IGF-1R受體激酶結構域人IGF-1R的細胞內激酶結構域被克隆為谷胱甘肽S-轉移酶融合蛋白質。IGF-1R β-亞基氨基酸殘基930-1337(編碼體系如同perUllrich等，EMBO J.(1986)5，2503-2512)克隆在桿狀病毒轉移運載體pAcGHLT-A(BD-Pharmingen)內，使IGF-1R殘基的N-末端融合于編碼轉移運載體pAcGHLT-A的GST結構域的C-末端。產生重組病毒且該融合蛋白質表達在SF-9昆蟲細胞(BD-Pharmingen)內。霉通過谷胱甘肽瓊脂糖柱的方式來純化。
胰島素受體激酶結構域將人胰島素受體的細胞內激酶結構域克隆為谷胱甘肽S-轉移酶融合蛋白質。胰島素受體β-亞基氨基酸殘基941-1343(編碼體系如同perUllrich等，Nature，(1985)313，756-761)克隆在桿狀病毒轉移運載體pAcGHLT-A(BD-Pharmingen)內，使IGF-1R殘基的N-末端融合于編碼轉移運載體pAcGHLT-A的GST結構域的C-末端。產生重組病毒且該融合蛋白質表達在SF-9昆蟲細胞(BD-Pharmingen)內。酶通過谷胱甘肽瓊脂糖柱的方式來純化.
昆蟲細胞溶解緩沖液10mM Tris pH7.5；130mM NaCl；2mM DTT；1％Triton X-100；10mMNaF；10mM NaPi；10mM NaPPi；1X蛋白酶抑制劑雞尾酒(Pharmingen)。
洗滌緩沖液磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)137Mm NaCl，2.6mMKCl，10mM Na2HPO4，1.8mM KH2PO4，pH7.4；1mM DTT；1X蛋白酶抑制劑雞尾酒透析緩沖液20mM Tris pH7.5；1mM DTT；200mMNaCI；0.05％Triton X-100和50％甘油酶稀釋緩沖液50mM Tris pH7.5；1mM DTT；100mMNaCI；10％甘油；lmg/ml BSA酶反應緩沖液20mM Tris pH7.4；100mMNaCI；1mg/ml BSA；5mM MgCl2；2mMDTT終止緩沖液125mM Tris pH7.8；75mM EDTA；500mM KF；0.125％Triton X-100；1.25％BSA；60nM SA-XL665(Packard)；300pM銪穴狀化物標記的抗磷酸酪氨酸抗體(Eu-PY20)肽底物序列LCB-EQEDEPEGDYFEWLE-NH2；儲備液為1mM溶解在DMSO中；在1X酶反應緩沖液中稀釋至1μMdd 10X工作儲備液。(LCB＝氨基己?；锼?ATP儲備液是0.5M ATP(Boehringer)pH7.4；儲備液在酶反應緩沖液中稀釋至40mM得到20X工作儲備液HEK-21細胞系將人配體腎細胞(HEK-293)(ATCC)用含有完整IGF-1R編碼序列的表達質粒來轉染。選擇抗生素后，通過蛋白質印跡分析法篩選對IGF-1R過度表達的克隆。一個被稱作HEK-21的克隆被選擇用于基于IGF-1R自磷酸化分析的細胞。
HEK細胞生長培養(yǎng)基Dulbecco改進的Eagle氏培養(yǎng)基(DMEM)，10％胎牛血清，1XPenn/Strep，1X谷氨酸，1X非必需氨基酸(全部得自Life Technologies)細胞溶解緩沖液50mM Tris-HCl pH7.4；150mMNaCI；1％Triton X-100(Sigma)；1X哺乳動物蛋白酶抑制劑(Sigma)；10mM NaF；1mM釩酸Na蛋白質封阻緩沖液
20mM Tris-HCl pH8.0；150mMNaCI；5％BSA(Sigma)；0.1％吐溫20(Biorad)方法A.蛋白質純化草地夜蛾SF9細胞用編碼GST-IGF-1Rβ-亞基或GST-InsR融合蛋白質的重組病毒轉染為4病毒粒/細胞的MOI。使細胞在27℃下生長48小時，通過離心收獲并用PBS洗滌1次。將細胞沉淀團在末次離心后冷凍在-70℃下。所有后續(xù)的純化步驟是在4℃下進行。將10克冷凍細胞糊在90ml體積的昆蟲細胞溶解緩沖液(BD-Pharmingen)中融化且保持在冰上，并且偶爾攪拌20分鐘。將溶胞產物在12000g下離心除去細胞碎片。將溶胞上清液與45ml的谷胱甘肽瓊脂糖珠(BD-Pharmingen)混和冰在4℃下緩慢攪拌1小時，此后離心該瓊脂糖珠并用3X洗滌緩沖液洗滌。該珠子重新懸浮在45ml的洗滌緩沖液內且以漿液形式傾入色譜柱。該色譜柱用5體積的洗滌緩沖液洗滌且用含5mM谷胱甘肽的洗滌緩沖液洗脫出柱內的GST-IGF-1R。合并的餾分相對于透析緩沖液透析并儲存在-20℃下。
B.IGF-1R激酶試驗IGF-1R酶反應在96孔平板格內進行。該酶反應是由酶反應緩沖液加0.1nM GST-IGF-1R，100nM肽底物和2mM ATP以60微升的終體積組成。存在于DMSO中的抑制劑被加入到1微升的體積內且在22℃下預培養(yǎng)10分鐘。終抑制劑濃度可以在100uM-1nM的范圍內。該激酶反應用3微升的40mM ATP引發(fā)。22℃下20分鐘后，該反應用40微升終止緩沖液停止且允許在22℃下平衡2小時。用Discovery平板讀數(shù)器(Packard)讀取相對熒光單位?；衔锏腎C50是由4點乙狀曲線擬合測定的。
C.胰島素受體激酶試驗胰島素受體的激酶反應預分析IGF-1R所用的相同(上文)，除GST-InsR被替換為終濃度為0.1nM之外。
D.細胞基礎的IGF-1R自磷酸化試驗測試IGF-1R抑制化合物在IGF-1R轉染人配體腎細胞系(HEK-21)中阻斷IGF-I誘導的IGF-IR自磷酸化作用的性能。過度表達在人IGF-1R受體中的HEK-21細胞在6孔平板中(37℃，在5％CO2氣氛下)于HEK細胞生長培養(yǎng)基內培養(yǎng)達到80％的融合。細胞在含0.5％胎牛血清的HEK生長培養(yǎng)基中急需血清4小時。將存在于生長培養(yǎng)基內的10X濃度的抑制劑加入到細胞達到十分之一的最終培養(yǎng)基體積，并且在37℃下預培養(yǎng)1小時。抑制劑濃度可以在10nM-100uM之間。將IGF-I(Sigma)加入到急需血清的細胞至30ng/ml的終濃度。在37℃和IGF-I不存在下培養(yǎng)10分鐘后，除去培養(yǎng)基，該細胞用PBS洗滌1次且加入0.5ml的冷細胞溶解緩沖液。在冰上保溫5分鐘后，從孔內敲碎細胞且將溶胞緩沖液和細胞轉移到1.5ml微量(microfuge)管中。全部溶胞產物在4℃下保持20分鐘且隨后以最高速在微量離心管內離心。除去上清液且儲存?zhèn)溆诜治?。受體的磷酸化狀態(tài)使通過蛋白質印跡法評估的。溶胞產物在8％變性Tris-甘氨酸聚丙烯酰胺凝膠上電泳并且用電印跡法將蛋白質轉移到硝基纖維素濾膜上。印跡用封阻劑封阻10分鐘，此后將抗磷酸酪氨酸抗體(4G10，Upstate Biotechnology)加入至1∶1500的最終稀釋度。印跡，并且初級抗體在4℃下培養(yǎng)過夜。用PBS加0.2％吐溫20(Biorad)洗滌后，加入HRP偶聯(lián)抗小鼠次級抗體(Jackson Labs)至1∶15000的稀釋度且在4℃下培養(yǎng)2小時。印跡隨后用PBS-吐溫洗滌且用ECL(Amersham)發(fā)光試劑展開。印跡上的磷酸化IGF-1R通過方式自顯影法目測或者用Kodak Image Station 440成像。IC50經纖維測密度掃描法測定或者用Kodak Digital Science軟件定量。
權利要求
1.式I的化合物 其中R1選自1)取代或未取代C1-C10烷基，2)取代或未取代芳基，3)取代或未取代雜環(huán)基，和4)取代或未取代C3-C10環(huán)烷基；R2選自1)鹵素，2)取代或未取代C1-C10烷基，3)取代或未取代C2-C10鏈炔基，4)取代或未取代苯基，和5)取代或未取代雜環(huán)基選自吡啶基，苯并呋喃基，異噁唑基，呋喃基，吡咯基，和噻吩基；該烷基，鏈炔基，苯基和雜環(huán)基任選地被一個或多個R3取代；R3獨立地選自1)鹵素，2)-OR4，3)取代或未取代C1-C10烷基，4)取代或未取代C3-C10環(huán)烷基，5)取代或未取代芳基，6)取代或未取代芳烷基，7)取代或未取代雜環(huán)基，8)-C(O)R4，9)-C(O)OR4，10)-CN，和11)-NO2；R4獨立地選自1)氫，2)取代或未取代C1-C10烷基，3)取代或未取代C2-C10鏈烯基，4)取代或未取代C2-C10鏈炔基，5)取代或未取代芳基，和6)取代或未取代雜環(huán)基；或其藥學可接受鹽或立體異構體。
2.權利要求1的化合物，其中R1是取代或未取代C1-C6烷基；R2選自1)鹵素，2)取代或未取代C2-C10鏈炔基，3)取代或未取代苯基，和4)取代或未取代雜環(huán)基選自吡啶基，苯并呋喃基，異噁唑基，呋喃基，吡咯基，和噻吩基；該鏈炔基、苯基和雜環(huán)基任選地被一個或多個R3取代；或其藥學可接受鹽或立體異構體。
3.權利要求2的化合物，其中R2是鹵素；或其藥學可接受鹽或立體異構體。
4.選自下列的化合物3-乙基-5-甲?；?4-碘-1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯；3-乙基-5-甲?；?4-(吡啶-2-基乙炔基)-1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯；3-乙基-5-甲?；?4-(6-甲氧基吡啶-2-基)-1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯；4-(1-苯并呋喃-2-基)-3-乙基-5-甲酰基-1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯；4-(3，5-二甲基異噁唑-4-基)-3-乙基-5-甲?；?1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯；4-(4-氟苯基)-3-乙基-5-甲?；?1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯；4-(4-氯苯基)-3-乙基-5-甲?；?1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯；3-乙基-5-甲?；?4-(5-甲酰基-2-呋喃基)-1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯；3-乙基-5-甲酰基-4-苯基-1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯；4′-乙基-2′-甲?；?1H，1′H-2，3′-聯(lián)吡咯-1，5′-二羧酸二(叔丁酯)；3-乙基-5-甲?；?4-(2-甲?；绶?3-基)-1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯；4-(4-氰基苯基)-3-乙基-5-甲?；?1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯；3-乙基-5-甲?；?4-甲基-1H-吡咯-2-羧酸乙酯；3，4-二乙基-5-甲?；?1H-吡咯-2-羧酸乙酯；3-乙基-5-甲?；?4-(4-硝基苯基)-1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯；3-乙基-5-甲?；?4-[4-(甲氧基羰基)苯基]-1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯；4-(2-氰基苯基)-3-乙基-5-甲?；?1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯；4-(3-氰基苯基)-3-乙基-5-甲?；?1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯；4-(3-氯苯基)-3-乙基-5-甲?；?1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯；4-(2，6-二氟苯基)-3-乙基-5-甲?；?1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯；3-乙基-5-甲?；?4-(5-甲基-2-呋喃基)-1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯；3-乙基-5-甲?；?4-(4-甲基苯基)-1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯；3-乙基-5-甲酰基-4-(3-甲基苯基)-1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯；3-乙基-5-甲?；?-(2-甲基苯基)-1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯；3-乙基-5-甲?；?4-噻吩-3-基-1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯；3-乙基-5-甲?；?-噻吩-2-基-1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯；3-乙基-5-甲?；?4-(4-甲氧基苯基)-1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯；3-乙基-5-甲?；?4-(3-甲氧基苯基)-1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯；3-乙基-5-甲酰基-4-(2-甲氧基苯基)-1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯；或其藥學可接受鹽或立體異構體。
5.權利要求4的化合物是3-乙基-5-甲?；?4-碘-1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯 或其藥學可接受鹽或立體異構體。
6.權利要求4的化合物是3-乙基-5-甲?；?4-苯基-1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯 或其藥學可接受鹽或立體異構體。
7.權利要求4的化合物是3-乙基-5-甲?；?4-(2-甲酰基噻吩-3-基)-1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯 或其藥學可接受鹽或立體異構體。
8.權利要求4的化合物是4-(2-氰基苯基)-3-乙基-5-甲酰基-1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯 或其藥學可接受鹽或立體異構體。
9.權利要求4的化合物是4-(2，6-二氟苯基)-3-乙基-5-甲酰基-1H-吡咯-2-羧酸叔丁酯 或其藥學可接受鹽或立體異構體。
10.一種藥物組合物，器含有權利要求1所述的化合物和藥學可接受載體。
11.一種在需要其的哺乳動物中調制蛋白激酶的催化活性的方法，包括使該蛋白激酶與權利要求1的化合物接觸。
12.權利要求11的方法，其中該蛋白激酶使RTK。
13.權利要求12的方法，其中該RTK選自IR，IGF-1R和IRR。
14.一種在需要其的哺乳動物中治療PK相關疾病的方法，包括給該哺乳動物施用治療有效量的權利要求1的化合物。
15.權利要求14的方法，其中PK相關疾病是IGF-1R相關性疾病選自1)癌癥，2)糖尿病，3)自身免疫性疾病，4)過度增殖性疾病，5)老化，6)肢端肥大癥，和7)克羅恩氏病。
16.一種在需要其的哺乳動物中預防PK相關疾病的方法，包括給該哺乳動物施用治療有效量的權利要求1的化合物。
17.權利要求16的方法，其中PK相關疾病是IGF-1R相關性疾病選自1)癌癥，2)糖尿病，3)自身免疫性疾病，4)過度增殖性疾病，5)老化，6)肢端肥大癥，和7)克羅恩氏病。
18.一種在需要其的哺乳動物中治療癌癥的方法，包括給該哺乳動物施用治療有效量的權利要求1的化合物。
19.一種在需要其的哺乳動物中治療視網(wǎng)膜血管形成的方法，包括給該哺乳動物施用治療有效量的權利要求1的化合物。
全文摘要
本發(fā)明涉及能夠抑制、調制和/或調節(jié)受體型和非受體型兩種酪氨酸激酶的信號傳導的方法。本發(fā)明的化合物具有含有取代吡咯部分的核心結構。本發(fā)明還涉及這些化合物的藥學可接受鹽、水合物和立體異構體。
文檔編號C07D207/30GK1829507SQ200480021448
公開日2006年9月6日 申請日期2004年7月20日 優(yōu)先權日2003年7月24日
發(fā)明者A·S·金 申請人:麥克公司