專利名稱：FGFR2IIIc胞外段在制備預防、治療特發(fā)性肺纖維化藥物中的應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬于基因工程藥物領域，具體涉及FGFR2IIIc胞外段在制 備預防、治療特發(fā)性肺纖維化藥物中的應用。
技術背景特發(fā)性肺纖維化(idiopath ic pulmonary fibro sis, EPF)是指原因不 明并以普通型間質性肺炎(UIP)為特征性病理改變的一種慢性炎癥 性間質性肺疾病，主要病理表現為彌漫性肺泡炎、肺泡單位結構紊亂 和肺纖維化。本病臨床上多表現為進行性呼吸困難伴有刺激性干咳， 雙肺聞及velcro羅音，常有杵狀指(趾)，胸部X線示雙肺彌漫性網 狀陰影；肺功能為限制性通氣障礙。病情一般進行性發(fā)展，最終因呼 吸衰竭導致死亡。流行病學資料顯示，IPF發(fā)病率呈不斷上升趨勢，由于發(fā)病機制不 清,病死率高,至今尚無確切有效的治療方法，因此，積極尋找新的治療 方法已成為改善IPF患者預后，提高生存率的迫切需要。越來越多的證據表明IPF的病理變化源于肺泡上皮受損和修復 異常。分布廣泛的成纖維細胞灶是損傷和修復的主要部位。肺泡上皮 細胞損傷可導致纖維母細胞增殖和向肌成纖維細胞表型轉變。通常認 為肌成纖維細胞可促使傷口收縮、軟組織回縮，并可產生和分泌膠原 及包括致纖維化的多種細胞因子如細胞因子TGF-3、 FGF2等。活躍的纖維母細淑肌成纖維細胞可使ECM產生增多,導致ECM過度沉積 和肺泡結構破壞，最終導致肺纖維化和肺功能受損。此外，肌成纖維細 胞還可誘導肺泡上皮細胞死亡，從而維持肺泡上皮已有病變、抑制有 效的再上皮化.故肺泡上皮損傷修復過程中抗纖維活性和致纖維活性 之間的平衡最終決定了肺纖維化是否發(fā)生。成纖維細胞生長因子(Fibroblast growth factors FGFs)是一組同源 的肝素結合多肽，其家族包含23個成員。FGFs有廣泛的生物學活性， 例如在胚胎發(fā)育中調控細胞增殖、遷移和分化，有證據表明致纖維化 的細胞因子TGF - P通過分泌大量的FGF2而起作用，抑制FGF2的 活性可有效的抑制纖維化的產生。成纖維細胞生長因子受體(Fibroblast growth factor receptors FGFRs)屬于酪氨酸激酶受體家族，它們在特定的時間和空間表達， 是FGF信號通路上重要的調控點之一，FGFR正常功能的紊亂可導致 人類疾病的發(fā)生。本發(fā)明在已公開的發(fā)明(申請?zhí)?00710029286.6) 基礎上，通過大腸桿菌以包涵體形式高效表達FGFR2，對其進行一 定的變復性后，獲得具有活性的FGFR2IIIc產品。FGFR2IIIc胞外段 可以和FGF配體結合，但因缺乏胞內的酪氨酸激酶活性而不能傳導 信號，因此起到抑制FGF過量信號的作用，從而可顯著抑制肺的纖 維化。目前尚未有利用成纖維細胞生長因子受體的胞外段預防和/或治 療特發(fā)性肺纖維化的報道。發(fā)明內容本發(fā)明的目的在于針對現有技術的不足，提供FGFR2IIIc胞外段 在制備預防和/或治療特發(fā)性肺纖維化藥物中的應用。本發(fā)明的FGFR2IHc胞外段對特發(fā)性肺纖維化有明顯的治療作 用，也有明顯的預防作用，可以藥物組合物的形式使用，這種組合物 含有FGFR2HIc胞外段和可藥用輔料；可藥用輔料為藥學領域通用的 各種輔料。上述藥物組合物的主要劑型包括凍干粉針劑和注射液劑，通常以 靜脈注射途徑給藥。上述藥物組合物的劑型為凍干粉針劑時，該藥物組合物為固體的 滅菌組合物形式，該組合物除了 FGFR2IIIc胞外段還可以含有輔料 (或賦形劑)，如甘露醇、右旋糖苷、水解明膠、檸檬酸鈉、甘露酸 等。該滅菌組合物在使用時溶解于滅菌注射用水或其它注射用滅菌介 質中，靜脈注射即可。上述藥物組合物為注射液劑時，該藥物組合物為水溶液形式，使 用時直接靜脈注射即可。該組合物除了 FGFR2inc胞外段還可以含有 添加劑，如甘露醇、氯化鈉、葡萄糖等。與現有技術相比，本發(fā)明的優(yōu)點為TGFP是纖維化過程中最重 要的細胞因子，通過釋放FGF2而促進纖維化，而FGFR2IIIc可結合 FGF2，降低其有效濃度，從而抑制纖維化進程，因此本發(fā)明將 FGFR2IIIc用于制備預防和/或治療特發(fā)性肺纖維化藥物，能夠起到較 好的預防、治療作用。


圖1為三組大鼠肺泡炎和肺纖維化程度(HE染色X 200)比較的對 照組電鏡圖；圖2為三組大鼠肺泡炎和肺纖維化程度(HE染色X200)比較的模 型組電鏡圖；圖3為三組大鼠肺泡炎和肺纖維化程度(HE染色X 200)比較的治 療組電鏡圖。
具體實施方式
以下通過實施例對本發(fā)明作進一步說明。實施例1制備FGFR2IIIc胞外段干粉針取過濾滅菌的FGFR2IIIc胞外段(根據專利200710029286.6生 產)'300mg;加7.5克甘露醇，調節(jié)pH'至中性，力l/注射用水至500 毫升，無菌過濾，分裝1000個安瓿中，無菌條件下冷凍干燥，即得。實施例2制備FGFR2UIc胞外段注射液取過濾滅菌的FGFR2inc胞外段水溶300mg，調節(jié)pH至中性， 加注射用水至500ml，加氯化鈉調節(jié)等滲，無菌過濾，分裝1000個 安瓿中，即得。實施例3 FGFR2IIIc胞外段對小鼠特發(fā)性肺纖維化的作用1、實驗方法選擇雌性C57BL/6小鼠，6—8周，體重20 —25g，用2%戊巴比 妥鈉40mg/kg腹腔內注射麻醉小鼠后，按無菌操作原則，在小鼠頸部 正中處切開皮膚，暴露氣管。用彎尖眼科鉗經氣管下方穿過，輕微抬起氣管，模型組和治療組向氣管內注入博來霉素BLM(50mg/kg)50ul， 對照組注入等體積的生理鹽水，建立小鼠肺纖維化模型。注入博萊霉素后，再向氣管內注入0.2ml的空氣2 3次，以使 藥物在肺部分布均勻。注藥完畢后縫合皮膚，局部碘氟消毒防止感染， 將小鼠直立，旋轉，盡量使藥物在肺內分布均勻。模型建立第二天起，治療組小鼠每天腹腔內注入FGFR2IIIc胞外 段蛋白(50微克/只)。對照組和模型組注入等體積的生理鹽水。在模 型建立后第21天，分別處理各組小鼠。用2%戊巴比妥鈉40mg/kg 腹腔內注射麻醉小鼠后，剖胸取出肺部。2、肺泡炎、肺纖維化程度判斷左肺石蠟切片進行蘇木精-伊紅染色(HE)及Masson染色(M asson染色是在酸性復紅，橙黃，亮綠3種特殊染料共同作用—卜,使膠原纖 維染成綠色,肌纖維染成紅色,紅細胞染成橘黃色的一種特殊染)，在光 學顯微鏡下觀察肺組織病理學改變。按Szapiel等提供的力法評定肺組 織肺泡炎和肺組織纖維化程度(Szapiel S V， Elson N A， Fulmer J D， et al. Bleomycin-induced interstitial pulmonary disease in the n ude athymicmouse.Am Rev Respir Dis， 1979， 120(4):893-899.)。肺泡炎分為四級①0級:無肺泡炎；②I級:肺泡間隔因炎性細 胞浸潤而增寬，病變局限,范圍<20 % ，肺泡結構完整；③n級:其受累 面積占全肺的20 % 50 % ; 111級:彌漫性肺泡炎,其受累面積>50 % ,偶可見肺泡腔內細胞及出血造成的實變。肺纖維化也分為四級①0級:無纖維化；②I級:范圍< 20 % ,累及胸膜及胸膜下肺實質，肺泡結構發(fā)生紊亂；③II級:病變范圍占全肺 20 % 50 % ,肺纖維化從胸膜開始延伸，但仍屬局部；④m級:彌散性 肺纖維化，范圍> 50 % ，融合損傷并伴有廣泛肺實質結構紊亂。3、 統(tǒng)計學處理采用SPSS12. 0軟件，數據以(x土s)表示，等級資料轉化為計量資料,o級為o分，i級為i分，n級為2分，ni級為3分。3個組間進行單因素方差分析,以LSD、SNK法進行不同組別之間的比較，P < 0. 05為差異有統(tǒng)計學意義。LSD和SNK法是統(tǒng)計學中常用的多組數據間兩兩比較的方法。4、 實驗分組雌性C57BL/6小鼠，隨機分為對照組，模型組和治療組，每組 i(J只。5、 實驗結果由圖K 2、 3及表1可見，對照組肺泡化良好,肺泡間隔薄,肺m 次級隔較多，肺泡數目較多；模型組失去正常肺組織結構、結構紊亂、 肺泡間隔變寬、肺泡次級隔明顯減少,肺泡數量減少,可見肺泡內出血、 滲出；治療組肺泡間隔較模型組變薄、間質細胞減少、纖維化明顯減 輕、但肺泡次級隔數目少，肺泡腔呈蜂窩樣改變，肺泡數量較對照組減 少。6、 實驗結論TGF 3是纖維化過程中最重要的細胞因子，通過釋放FGF2而促 進纖維化。FGFR2IHc可結合FGF2，降低其有效濃度，從而抑制纖維化進程，起到較好的治療作用。表l三組大鼠肺泡炎、肺纖維化程度評分(X士S)比較組別N(只)肺泡炎程度評分肺纖維化程度評分對照組 (生理鹽水)150.2 ±0.30.0 ±0.0模型組 (博萊霉素)151.7±0.7'*2.1 ±0.7**處理組 (FGFR2IIIc)150.9 ±0.6"1.1±0.7''A上述表1中，'P<0.05， ''P<0. Olvs對照組；a尸〈0. Olvs模型組。
權利要求
1、FGFR2IIIc胞外段在制備預防、治療特發(fā)性肺纖維化藥物中的應用。
2、 根據權利要求1所述的應用，其特征在于所述FGFR2IIIc胞 外段在制備預防、治療特發(fā)性肺纖維化藥物時的劑型為凍干粉針劑或 注射液劑。
3、 根據權利要求1或2所述的應用，其特征在于所述藥物的注 射途徑為靜脈注射。
4、 一種制備預防、治療特發(fā)性肺纖維化的藥物，其特征在于該 藥物的活性成分為FGFR2IIIc胞外段。
全文摘要
本發(fā)明公開FGFR2IIIc胞外段在制備預防、治療特發(fā)性肺纖維化藥物中的應用。FGFR2IIIc可結合FGF2，降低其有效濃度，從而抑制纖維化進程，本發(fā)明將FGFR2IIIc用于制備預防和/或治療特發(fā)性肺纖維化藥物，能夠起到較好的預防、治療作用。本發(fā)明的FGFR2IIIc胞外段一般以藥物組合物的形式使用，這種組合物含有FGFR2IIIc胞外段和可藥用輔料；FGFR2IIIc胞外段的用量可根據病情嚴重程度、治療時間而定，一般注射給藥每次250-300μg，每天1-2次。本發(fā)明的藥物組合物可制成凍干粉針劑或注射液劑兩種劑型，通過靜脈注射使用。
文檔編號A61K38/43GK101401933SQ20081019896
公開日2009年4月8日 申請日期2008年10月7日 優(yōu)先權日2008年10月7日
發(fā)明者穎 何, 炬 汪, 岸 洪 申請人:暨南大學