專利名稱：一種克拉屈濱經(jīng)注射給藥的制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于藥物制劑領(lǐng)域，更具體地說是涉及一種含活性成分克拉屈濱的經(jīng)注射
給藥的制劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
克拉屈濱(cladribine)是一種腺苷脫氧酶抑制劑，由美國強(qiáng)生集團(tuán)(Johnson& Johnson)下屬子公司奧多生物技術(shù)公司(0rtho Biotec)與美國斯克利普斯研究院(Scripps Research Institute)開發(fā)，用于治療多種腫瘤，包括急性骨髓性白血病、慢性淋巴細(xì)胞白血病、慢性骨髓性白血病、皮膚T細(xì)胞淋巴瘤、毛細(xì)胞白血病和非何杰金氏淋巴瘤；并于1993年2月首次在美國上市，同年隨后在加拿大和瑞典上市，商品名為Leustatin。 20世紀(jì)60年代，克拉屈濱(cladribine)首先作為合成2-脫氧核苷的中間體，直到1984年，它治療淋巴瘤的潛在藥效才被揭曉。2003年5月，Lipomed公司的Litak(cladribine，克拉屈濱)皮下給藥配方獲歐盟CPMP推薦批準(zhǔn)，用于毛細(xì)胞白血病的治療。 目前，有雪蘭諾(Serono)公司的口服多發(fā)性硬化癥(MS)治療藥Mylinax(cladribine)今年第一季度將推出本品的III期臨床研究。十幾年來的臨床應(yīng)用顯示出，克拉屈濱(cladribine)可以有效地治療淋巴細(xì)胞增殖類疾病，如毛細(xì)胞白血病、慢性淋巴細(xì)胞白血病、非何杰金氏淋巴瘤以及急性髓細(xì)胞白血病。但克拉屈濱(cladribine)的一個(gè)缺點(diǎn)是其口服生物利用度只有50 % ，原因是該化合物在酸性環(huán)境下不穩(wěn)定，并且能被細(xì)菌的核苷酸磷酸酶降解，所以做成注射劑型?？死鼮I注射液是一合成的抗腫瘤藥物，用于靜脈滴注治療毛細(xì)胞白血病，本品為無色、無菌、不含防腐劑的注射液，每瓶含有l(wèi)Omg克拉屈濱-種綠色的嘌呤核苷類似體；每毫升包含lmg的克拉屈濱活性成分和9mg的氯化鈉非活性成分。適應(yīng)癥用于治療毛細(xì)胞白血病，臨場上表現(xiàn)為貧血、嗜中性白血球減少、血小板減少等癥狀。作用特點(diǎn)本品是一種抗腺苷脫氨酶(ADA)的脫氧腺苷類似物。體外對類淋巴細(xì)胞和類髓細(xì)胞性腫瘤有廣譜性抑制作用，但對多發(fā)性髓細(xì)胞瘤和許多實(shí)體腫瘤株的毒性不大，單核細(xì)胞在體外對本品很敏感。本品對分化的和未分化的細(xì)跑都有活性。用法用量溶于500ml生理鹽水中緩慢靜脈滴注，推薦用量為每次0. 09mg/kg/d，連續(xù)7天為一療程。 白血病是造血系統(tǒng)的一種惡性疾病，其特點(diǎn)為體內(nèi)有大量白血病細(xì)胞廣泛而無控制地增生，出現(xiàn)于骨髓和許多其它器官和組織，并進(jìn)入外周血液中。急性白血病以其起病急、進(jìn)展快、病情兇險(xiǎn)，嚴(yán)重危害人類健康。隨著醫(yī)學(xué)進(jìn)步，急性白血病經(jīng)過積極治療，多數(shù)病人都能取得緩解，現(xiàn)在緩解白血病已不再是治療的終極目標(biāo)，如何提高治愈率，使大多數(shù)白血病病人得到根治，成為當(dāng)今血液學(xué)研究的重點(diǎn)。 本品是一種抗腺苷脫氨酶(ADA)的脫氧腺苷類似物。體外對類淋巴細(xì)胞和類髓細(xì)胞性腫瘤有廣譜性抑制作用，但對多發(fā)性髓細(xì)胞瘤和許多實(shí)體腫瘤株的毒性不大，單核細(xì)胞在體外對本品很敏感。本品對分化的和未分化的細(xì)跑都有活性。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供適合臨床治療毛細(xì)胞白血病要求的注射藥物，本發(fā)明以注射 給藥的制劑及其制備方法，尤其是靜脈注射給藥，解決了急性、慢性粒細(xì)胞白血病治療上的 需求。 本發(fā)明的技術(shù)方案一種含活性成分克拉屈濱經(jīng)注射給藥的制劑，其特征在于由
活性成分克拉屈濱o. 001-50%和水溶性填充劑、ra調(diào)節(jié)劑、增溶劑、抗氧劑、注射用水、滲
透壓調(diào)節(jié)劑組成。 本發(fā)明所述的經(jīng)注射給藥的制劑，其特征在于所述的制劑是指含有克拉屈濱的凍
干粉針、小針注射液和小輸液。
本發(fā)明所述的經(jīng)注射給藥的制劑，其特征在于所述的制劑是
a.凍干劑中藥物成分與其它藥用輔料的重量百分比為0. 1-50% ;
b.小針注射液中藥物的濃度為50mg/ml-0. 5mg/ml ;
c.小輸液中藥物的濃度為lmg/ml-0. 02mg/ml。 本發(fā)明所述的經(jīng)注射給藥的制劑，其特征在于所述的小輸液是指克拉屈濱與水組 成的復(fù)方注射液。 本發(fā)明所述的經(jīng)注射給藥的制劑，其特征在于水溶性填充劑是甘露或吐溫；ra調(diào)
節(jié)劑是枸櫞酸、磷酸、蘋果酸等非揮發(fā)性的酸以及氫氧化鉀、氫氧化鈉、碳酸鈉或碳酸氫鈉
鹽、磷酸鈉或鉀或銨鹽；增溶劑是聚乙烯吡咯烷酮、PEG6000、PEG4000、泊洛沙姆、卡波姆、吐 溫80、低分子右旋糖苷或三羥甲基氨基甲烷；抗氧劑是亞硫酸鈉、焦亞硫酸鈉、硫代硫酸鈉 或亞硫酸氫鈉；有機(jī)硫抗氧劑為硫代甘油、硫脲素或1-硫代山梨糖醇。 本發(fā)明含活性成分克拉屈濱經(jīng)注射給藥制劑的制備方法，其特征在于該方法包括 下列步驟
1、組成 (1)凍干劑克拉屈濱0. 1 % -30 %，，水溶性填充劑50 % -70 %，增溶劑 0. 1% _12%，抗氧劑0. 003% _3%，滲透壓0. 9% ; (2)小針注射液克拉屈濱0. 05 % -1. 0 %，增溶劑0. 1 % -8 %，抗氧劑 0. 001% _5%，注射用水70% -90% ; (3)小輸液克拉屈濱0.005-0. 1%，增溶劑0. 1%-8%，抗氧劑0.003% _1%，滲 透壓O. 9%，注射用水88% -98% ; II.不同的經(jīng)注射給藥制劑的制備方法包括下列步驟 (1)凍干劑取克拉屈濱和水溶性填充劑、增溶劑、抗氧劑、滲透壓劑等，加入注射 用水適量，調(diào)節(jié)ra值至4-10使其溶解，加水至刻度，加入0. 1-0. 5%活性炭，在20-5(TC下 攪拌10-60分鐘，脫碳，采用微孔濾膜過濾除菌，濾液進(jìn)行分裝，采用冷凍干燥法，制得白色 疏松塊狀物，封口即的； (2)小針注射液取克拉屈濱和水溶性填充劑、增溶劑、抗氧劑、滲透壓劑等，加 入注射用水適量，調(diào)節(jié)ra值至4-10使其溶解，加水至刻度，加入0. 1-0. 5 %活性炭，在 20-5(TC下攪拌10-60分鐘，脫碳，精濾、灌封、滅菌； (3)小輸液取克拉屈濱和水溶性填充劑、增溶劑、抗氧劑、滲透壓劑等，加入注射用水適量約20%，調(diào)節(jié)ra值至4-10使其溶解，加入0. 1-0. 5%活性炭，在20-5(TC下攪拌 10-60分鐘，脫碳，加水至刻度，精濾、灌封、滅菌。 目前認(rèn)為已糖醇類抗癌活性主要來自其a ， " 二環(huán)氧化物的兩個(gè)三元環(huán)的張力， 它能和癌細(xì)胞的DNA結(jié)合，破壞DNA，從而阻止其復(fù)制，抑制癌細(xì)胞的增殖。引入兩個(gè)乙酰 基的DADAG脂溶性增加，易通過細(xì)胞膜，發(fā)揮對DNA烷化的潛力，故DADAG的療效優(yōu)于DAD。 重慶醫(yī)學(xué)院李維信等[6]用DAD進(jìn)行"慢粒"治療的超微結(jié)構(gòu)觀察結(jié)果與Kerr等人[7， 8] 所描述的"細(xì)胞收縮性壞死"以及后來改稱的"凋亡"在形態(tài)表現(xiàn)上相符合。但DADAG抗腫 瘤作用是否與誘導(dǎo)凋亡有關(guān)，目前尚不完全清楚。在本實(shí)驗(yàn)中，HL-60和K562細(xì)胞經(jīng)DADAG 作用后，其DNA經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳出現(xiàn)凋亡細(xì)胞特征性的生化學(xué)變化-梯狀條帶；流式細(xì)胞 儀同樣檢測到凋亡峰，并呈一定的量效和時(shí)效關(guān)系，這說明DADAG抗腫瘤作用與誘導(dǎo)細(xì)胞 凋亡有關(guān)。DADAG對K562細(xì)胞的IC50和誘導(dǎo)K562細(xì)胞凋亡的劑量明顯大于HL-60,且不 影響K562細(xì)胞的細(xì)胞周期分布，這與K562細(xì)胞連續(xù)表達(dá)有活性的Bcr/Abl酪氨酸激酶有 關(guān)。研究表明Bcr/Abl的表達(dá)可抑制生長因子的去除和Vp-16誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，Abl酪氨 酸激酶的功能與抑制凋亡的bcl-2相似[9， 10]。這表明凋亡有細(xì)胞類型特異性，HL-60和 K562細(xì)胞的凋亡信號途徑不一樣。對K562細(xì)胞生化途徑的深入研究，將有助于闡明K562 細(xì)胞對大多數(shù)化療藥不敏感和耐藥的機(jī)理。 本發(fā)明對二乙酰二克拉屈濱(diacetyldianhydrogalactitol， DADAG)在體內(nèi)外 的抗腫瘤作用進(jìn)行了藥理實(shí)驗(yàn)，探討其抗腫瘤作用與誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的關(guān)系。方法建立小 鼠腦內(nèi)接種艾氏腹水癌模型，觀察DADAG體內(nèi)抗瘤作用；MTT法觀察DADAG對人早幼粒白血 病細(xì)胞株HL-60和人紅白血病細(xì)胞株K562的生長抑制作用，DNA電泳和流式細(xì)胞儀分析 HL-60和K562細(xì)胞凋亡的情況。 結(jié)果DADAG10mg/kgip，每天1次，連續(xù)給藥7天，可顯著延長小鼠中位生存時(shí)間； 對HL-60和K562均有生長抑制作用，藥物作用72h的IC50分別為3. 7mg/L和25. 5mg/L ; 作用HL-60和K562細(xì)胞后電泳顯示有凋亡細(xì)胞特有的"梯狀"條帶，DNA直方圖出現(xiàn)亞Gl 峰。 結(jié)論DADAG抗腫瘤作用與誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡有關(guān)。對大鼠W256抑瘤率為90. 6 % (2mg/kg， ipX6)， Lewis肺癌抑瘤率為52. 1% (3mg/kg， ipX7)， B16黑色素瘤抑瘤率為 72.6% (3mg/kg， ipX7)，EAC實(shí)體瘤抑瘤率為32.8% (8mg/kg， ipX7)(待發(fā)表)。我們觀 察了 DADAG對腦內(nèi)移植性EAC實(shí)體瘤的作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在10mg/kg高劑量下，DADAG對顱內(nèi) 荷瘤小鼠的生命延長率是29%，表明DADAG有可能透過血腦屏障。DADAG對腦瘤的抑制作 用和對HL-60、 K562細(xì)胞的生長抑制作用，表明其有體內(nèi)外抗腫瘤作用，為DADAG臨床應(yīng)用 提供理論依據(jù)。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明做進(jìn)一步的說明，實(shí)施例僅為解釋性的說明，決不意味
著它以任何方式限制本發(fā)明的范圍。
實(shí)施例1 取克拉屈濱3g，置于容器中，加增溶劑聚乙烯吡咯烷酮0. lg，注射用水80ml，加氫 氧化鈉0. 2g，攪拌使溶解，加lmol/L的枸櫞酸調(diào)節(jié)PH至7-9. O，加入甘露醇28g、攪拌使溶
5解，補(bǔ)加水至lOOml。加入0.5g活性碳，在3(TC下攪拌20分鐘，脫碳，采用微孔濾膜過濾除菌，濾液按每支1ml進(jìn)行分裝，預(yù)凍2小時(shí)后，冷凍下減壓干燥12小時(shí)，至樣品溫度到室溫后，再干燥5小時(shí)，制得白色疏松塊狀物，封口即得克拉屈濱凍干粉針。
實(shí)施例2 取克拉屈濱50g，置于容器中，加PEG-6000 2g，注射用水180ml，攪拌使溶解，以lmol/L的鹽酸或氫氧化鈉調(diào)節(jié)PH至5. 0-9. 0，加入甘露醇80g、山梨醇20g，攪拌使溶解，補(bǔ)加水至2000ml。加入0. 5g活性碳，在3(TC下攪拌20分鐘，脫碳，采用微孔濾膜過濾除菌，濾液按每支2ml進(jìn)行分裝，預(yù)凍2小時(shí)后，冷凍下減壓干燥18小時(shí)，至樣品溫度到室溫后，再干燥5小時(shí)，制得白色疏松塊狀物，封口即得克拉屈濱凍干粉針。
實(shí)施例3 取克拉屈濱10g，木糖醇0. 3g，加入到已溶解5g十二烷基硫酸鈉的注射用水440ml中，加入2g硫代硫酸鈉攪拌溶解，加入碳酸氫鈉調(diào)節(jié)PH為5. 5-8. 5，加入0. 5g活性炭，室溫?cái)嚢栉?0分鐘，除炭，補(bǔ)加水至500ml，精濾、以每支5ml灌封、滅菌，即得克拉屈濱注射液。 實(shí)施例4 取克拉屈濱10g，木糖醇0. 3g，三羥甲基氨基甲烷5g的注射用水440ml中，加入2gEDTA-2Na攪拌溶解，加入碳酸氫鈉調(diào)節(jié)Kl為7. 5-9. 0，補(bǔ)加水至500ml，加入5g活性炭，室溫?cái)嚢栉?0分鐘，除炭，精濾，以每支2ml灌封、滅菌，即得克拉屈濱注射液。
實(shí)施例5 取克拉屈濱lg，木糖醇0. lg加入注射用水180ml中，加0. 5克NaOH攪拌使溶解，加入3g焦亞硫酸鈉，攪拌溶解，調(diào)節(jié)PH為7. 0-9. 0，補(bǔ)加注射用水至200ml，加入2g活性炭，攪拌吸附30分鐘，除炭、精濾、以每支2ml灌封、滅菌，即得克拉屈濱注射液。
實(shí)施例6 取克拉屈濱5g，木糖醇0. 5g加入15g磷酸氫二鈉和90g氯化鈉，再加注射用水2000ml，攪拌使溶解，調(diào)節(jié)PH為7. 5_9. 0，加入10g活性炭，攪拌吸附30分鐘，除炭，補(bǔ)加水至10000ml，精濾、灌封每瓶100ml，滅菌，即得克拉屈濱氯化鈉注射液。
實(shí)施例7 取克拉屈濱10g，加入15g氫氧化鈉和lg木糖醇，15g焦亞硫酸鈉，再加注射用水2000ml，攪拌使溶解，調(diào)節(jié)ra為5. 0-8. 0，加入10g活性炭，攪拌吸附30分鐘，除炭，補(bǔ)加水至10000ml，精濾、灌封每瓶100ml，滅菌，即得克拉屈濱木糖醇注射液。
實(shí)施例8 取克拉屈濱3. Og，木糖醇0. 5g，加入PEG-400020g，注射用水2000ml，攪拌使溶解，再加入15g磷酸氫二鈉和500g低分子右旋糖苷，15gEDTA-2Na，攪拌使溶解，調(diào)節(jié)ffl為7. 0-8. 5，加入10g活性炭，攪拌吸附30分鐘，除炭，補(bǔ)加水至5000ml，精濾、灌封每瓶50ml，滅菌，即得克拉屈濱低分子右旋糖苷注射液。
權(quán)利要求
一種活性成分克拉屈濱經(jīng)注射給藥的制劑，其特征在于由活性成分克拉屈濱0.001-50％和水溶性填充劑、PH調(diào)節(jié)劑、增溶劑、抗氧劑、注射用水、滲透壓調(diào)節(jié)劑組成。
2. 如權(quán)利要求1所述的經(jīng)注射給藥的制劑，其特征在于所述的制劑是指含有克拉屈濱 的凍干粉針、小針注射液和小輸液。
3. 如權(quán)利要求1所述的經(jīng)注射給藥的制劑，其特征在于所述的制劑是a. 凍干劑中藥物成分與其它藥用輔料的重量百分比為0. 1-50% ;b. 小針注射液中藥物的濃度為50mg/ml-0. 5mg/ml ;c. 小輸液中藥物的濃度為lmg/ml-O. 02mg/ml。
4. 如權(quán)利要求3所述的經(jīng)注射給藥的制劑，其特征在于所述的小輸液是指克拉屈濱與 水組成的復(fù)方注射液。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的經(jīng)注射給藥的制劑，其特征在于水溶性填充劑是甘露或吐溫；ra調(diào)節(jié)劑是枸櫞酸、磷酸、蘋果酸等非揮發(fā)性的酸以及氫氧化鉀、氫氧化鈉、碳酸鈉或碳酸氫鈉鹽、磷酸鈉或鉀或銨鹽；增溶劑是聚乙烯吡咯烷酮、PEG6000、 PEG4000、泊洛沙姆、 卡波姆、吐溫80、低分子右旋糖苷或三羥甲基氨基甲烷；抗氧劑是亞硫酸鈉、焦亞硫酸鈉、 硫代硫酸鈉或亞硫酸氫鈉；有機(jī)硫抗氧劑為硫代甘油、硫脲素或1-硫代山梨糖醇。
6. —種含活性成分克拉屈濱經(jīng)注射給藥制劑的制備方法，其特征在于該方法包括下列 步驟I、 組成(1) 凍干劑克拉屈濱O. 1% _30%，，水溶性填充劑50% -70%，增溶劑0. 1% -12%， 抗氧劑O. 003% -3%，滲透壓0. 9% ;(2) 小針注射液克拉屈濱0.05% -1.0%，增溶劑0. 1% _8%，抗氧劑0.001% -5%， 注射用水70% -90% ;(3) 小輸液:克拉屈濱0.005-0. 1%，增溶劑0. 1% -8%，抗氧劑0.003% _1%，滲透壓 0. 9%，注射用水88% -98% ;II. 不同的經(jīng)注射給藥制劑的制備方法包括下列步驟(1) 凍干劑取克拉屈濱和水溶性填充劑、增溶劑、抗氧劑、滲透壓劑等，加入注射用水適量，調(diào)節(jié)ra值至4-10使其溶解，加水至刻度，加入0. 1-0. 5%活性炭，在20-5(TC下攪拌 10-60分鐘，脫碳，采用微孔濾膜過濾除菌，濾液進(jìn)行分裝，采用冷凍干燥法，制得白色疏松 塊狀物，封口即的；(2) 小針注射液取克拉屈濱和水溶性填充劑、增溶劑、抗氧劑、滲透壓劑等，加入注射 用水適量，調(diào)節(jié)ra值至4-10使其溶解，加水至刻度，加入0. 1-0. 5%活性炭，在20-5(TC下 攪拌10-60分鐘，脫碳，精濾、灌封、滅菌；(3) 小輸液取克拉屈濱和水溶性填充劑、增溶劑、抗氧劑、滲透壓劑等，加入注射用水 適量約20% ，調(diào)節(jié)ra值至4-10使其溶解，加入0. 1-0. 5%活性炭，在20-5(TC下攪拌10-60 分鐘，脫碳，加水至刻度，精濾、灌封、滅菌。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種克拉屈濱經(jīng)注射給藥的制劑及其制備方法。其特征在于由克拉屈濱和水溶性填充劑、pH調(diào)節(jié)劑、注射用水、滲透壓調(diào)節(jié)劑組成。其中克拉屈濱的重量百分比為0.001-50％，余量為藥用輔料或水。本發(fā)明制備的克拉屈濱經(jīng)注射給藥的制劑，穩(wěn)定性好、生物利用度高，解決了臨床急性、慢性粒細(xì)胞白血病治療要求的注射藥物的需求。
文檔編號A61P35/02GK101756891SQ200810153359
公開日2010年6月30日 申請日期2008年11月25日 優(yōu)先權(quán)日2008年11月25日
發(fā)明者宋德成 申請人:天津太平洋制藥有限公司