專利名稱：：O/w型中鏈脂肪酸微乳的制備的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種o/w型中鏈脂肪酸微乳的制備方法，屬生物醫(yī)藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
：從營養(yǎng)生理學(xué)觀點(diǎn)看，中鏈脂肪酸(MCFA)是指碳元素為8的辛酸和碳元素為10的癸酸。MCFA具有許多獨(dú)特的生理功能，與在淋巴系統(tǒng)中吸收的長鏈脂肪酸相比，MCFA具有吸收快、無積蓄、幾乎全部作為能量來消耗等特點(diǎn)，它表現(xiàn)在以下方面(1)MCFA有較大的水溶性，不需要肉毒堿作為運(yùn)載，直接透過線粒體的雙層膜而進(jìn)入線粒體內(nèi)，氧化迅速完全，產(chǎn)生過多的乙酰輔酶A(CoA)可進(jìn)入三羧酸循環(huán)，不易在肝組織和脂肪組織中蓄積，可作為危癥病人的能量來源；(2)MCFA可節(jié)省蛋白，在大鼠試驗(yàn)中具有保持肌肉而不增加脂肪組織的作用，這正是運(yùn)動員以及減肥者所想要的結(jié)果；(3)在雞飼料中添加一定比例的MCFA可提高雞的采食量、提高產(chǎn)蛋率，增加蛋重，特別是在肉雞飼料中效果更理想，不影響增重，又能抑制體脂肪的形成，改善肉質(zhì)，且可有效抑制原蟲引起的疾??；(4)MCFA作為快速補(bǔ)充能量的物質(zhì)被直接利用，對初生弱仔豬的成活率可提高10%以上，曰增重可提高3%以上，降低吸收差的病畜的死亡率和提高增重有重要作用。微乳是一種透明或半透明狀、低粘度、熱力學(xué)穩(wěn)定且各向同性的油、水混合體系，由表面活性劑(用量較多)和助表面活性劑共同起穩(wěn)定作用。其粒徑大小一般在10-100nm之間，可分為水包油型(0/W)、油包水型(W/0)和雙連續(xù)相型。微乳口服后經(jīng)淋巴管吸收，克服了首過效應(yīng)及大分子通過胃腸道上皮細(xì)胞膜的障礙，可作為性能優(yōu)良的新型營養(yǎng)物質(zhì)或藥物的載體，提高生物利用度，應(yīng)用前景廣闊。制得的0/W型MCFA微乳，既能高效發(fā)揮MCFA的各種功能，又能夠添加水難溶性藥物或營養(yǎng)因子到體系中，以提高它們的溶解性，從而進(jìn)一步拓展了其運(yùn)用領(lǐng)域。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種穩(wěn)定安全、能快速補(bǔ)充能量的0/W型中鏈脂肪酸(MCFA)微乳的制備方法。本發(fā)明所述的0/W型MCFA微乳含有四種成分中鏈脂肪酸、表面活性劑、助表面活性劑和蒸餾水。其中中鏈脂肪酸主要由辛酸和癸酸組成，比例為3:2，雜質(zhì)含量少于1°/。；乳化油相MCFA的表面活性劑的親水親油平衡值(HLB值)范圍在14-7之間；表面活性劑選擇吐溫-80(HLB15)、吐溫-20(HLB16.7)、司盤-80(HLB4.3)、OP-IO(HLB13.9)、單硬酯酸甘油酯(HLB3.8);助表面活性劑選擇無水乙醇、乙二醇、異丙醇、丙三醇、正丁醇、異戊醇。本發(fā)明所述的自乳化法(HLB值法)制備0/W型中鏈脂肪酸(MCFA)微乳，它包括以下內(nèi)容滴定方法的選擇；最適HLB值和最佳表面活性劑的選擇；最佳Km值(表面活性劑/助表面活性劑)的確定；最佳助表面活性劑的選擇；配方產(chǎn)品的特性分析(類別鑒定、理化性質(zhì)的測定、穩(wěn)定性分析)；根據(jù)獲得的最佳表面活性劑、最佳助表面活性劑和最佳HLB值滴定制備0/W型中鏈脂肪酸(MCFA)微乳。1、滴定方法的選擇用吐溫-80作表面活性劑、異丙醇作助表面活性劑，固定MCFA、吐溫-80、異丙醇、蒸餾水的質(zhì)量比為1:8:4:10，將上述四組份分別互相滴定搖句，判斷終點(diǎn)是從澄清到混濁.-(1)用MCFA和蒸餾水的混合物滴定吐溫-80的混合物；(2)用異丙醇和蒸餾水的混合物滴定MCFA和吐溫-80的混合物；(3)用MCFA和蒸餾水的混合物滴定吐溫-80和異丙醇的混合物；(4)用MCFA和吐溫-80的混合物滴定異丙醇和蒸餾水的混合物；(5)用蒸餾水滴定MCFA、吐溫-80和異丙醇的混合物。結(jié)果是方法(5)用蒸餾水滴定MCFA、吐溫-80和異丙醇三組分的混合物，滴定終點(diǎn)明顯，反應(yīng)速度快且流動性好，不需要加熱或水浴，產(chǎn)生的氣泡較少又容易消失。2、最適HLB值和最佳表面活性劑的選擇將吐溫-80、吐溫-20與司盤-8O進(jìn)行復(fù)配得到不同HLB值的混合表面活性劑，復(fù)配后的HLB值按下式計算HLB=HLBA*A%+HLBB*B%。分別取MCFA、不同HLB值的混合表面活性劑或單一表面活性劑、異丙醇各O.50g、4.OOg、2.OOg,用蒸餾水滴定至終點(diǎn)，比較乳化效率，乳化效率=(MCFA+蒸餾水)/(MCF"蒸餾水+表面活性劑+助表面活性劑)。用OP-10做表面活性劑，未滴定前混合物已呈混濁態(tài)，用蒸餾水滴定，沒有終點(diǎn)；單甘酯溶解性不好，水浴中7(TC才能溶解，乳化效率較低，制得的微乳放置一定時間，溶液變成膠凝狀。結(jié)果如圖2所示MCFA的最適HLB值為15,最佳表面活性劑為單獨(dú)使用吐溫-80。3、最佳Km值(表面活性劑/助表面活性劑)的確定分別取Km值為l:l，2:1,3:1,4:1,固定表面活性劑吐溫-80、異丙醇和MCFA三組分的總量為5g，取(最佳表面活性劑+異丙醇)/MCFA的質(zhì)量比值分別為9:1，8:2,7:3，6:4,5:5，4:6,3:7，2:8,1:9。用蒸餾水滴定組分的混合物至終點(diǎn)，得到不同的用水量，比較繪制的偽三元相圖中形成微乳面積的大小(如圖3所示)和實(shí)驗(yàn)過程中的現(xiàn)象。結(jié)果是Km為2:l時在形成微乳過程流動性較好，消泡更快，確定為最佳值。4、最佳助表面活性劑的選擇選擇無水乙醇、乙二醇、異丙醇、丙三醇、正丁醇、異戊醇等作為助表面活性劑，用與前面確定最佳Km值的同樣方法，滴定得到的用水量，比較偽三元相圖形成微乳面積的大小(如圖4所示)和實(shí)驗(yàn)過程中的現(xiàn)象。結(jié)果是異戊醇形成微乳面積大，滴定終點(diǎn)明顯，成本低，確定為最佳助表面活性劑。5、對配方微乳產(chǎn)品進(jìn)行特性分析(1)類別鑒定鑒定微乳樣品是否屬0/W、W/0或其它類別。(2)理化性質(zhì)的測定對微乳樣品的表面張力、粘度、電導(dǎo)率、粒徑、Zeta電位等進(jìn)行測定。(3)配方產(chǎn)品穩(wěn)定性分析①對配方的微乳進(jìn)行離心處理，目測配方微乳有無分層現(xiàn)象，并在380nm波長下測量微乳樣品在離心前后的吸光度。②放置處理，在常溫下放置90天，各微乳樣品是否分層；在4t:放置40小時，檢測配方微乳的外觀特征、粒徑和zeta電位。根據(jù)穩(wěn)定性分析，確定穩(wěn)定性較好的微乳配方。6、根據(jù)上述選擇和穩(wěn)定性分析，以獲得的最佳表面活性劑、最佳助表面活性劑和最佳HLB值滴定制備0/W型中鏈脂肪酸(MCFA)微乳。本發(fā)明方法制備的0/W型MCFA微乳粒徑小，流動性好，易于快速吸收;本發(fā)明制備工藝科學(xué)合理，搡作簡易，成本低廉，具有較強(qiáng)的工業(yè)實(shí)施性;本發(fā)明所制得的產(chǎn)品可作為藥物和營養(yǎng)因子的載體、人與動物的快速能量補(bǔ)充等領(lǐng)域。附圖i為自乳化法制備o/w中鏈脂肪酸微乳參數(shù)選擇方框示意圖。附圖2為乳化效率與HLB值的關(guān)系曲線。附圖3為不同值Km(1.1、2.1、3.1、4.1)時的偽三元(MCFA、表面活性劑+助表面活性劑、蒸餾水)相圖。附圖4為不同助表面活性劑(無水乙醇、乙二醇、異戊醇、正丁醇)的偽三元相圖。具體實(shí)施例方式原料中鏈脂肪酸美國進(jìn)口，主要含有辛酸和癸酸，其比例為3:2,辛酸和癸酸總含量在99U乂上。具體實(shí)施例固定表面活性劑吐溫-80、助表面活性劑異戊醇和MCM三組分的總量為5g，在最佳Km值為2:1條件下，精密稱取(吐溫-80+異戊醇)/MCFA的質(zhì)量比分別為9:1，8:2,7:3,6:4，5:5，4:6的樣品混合物于六個錐形瓶中，邊搖勻邊用蒸餾水滴定至快要到終點(diǎn)，制得六種配方的澄清、透明、均一的微乳樣品。對六種配方產(chǎn)品進(jìn)行特性分析1、類型鑒別取相同體積的水溶性亞甲基藍(lán)和油溶性蘇丹紅染色液，同時滴入六種配方的微乳中觀察擴(kuò)散速度，結(jié)果都是亞甲基藍(lán)擴(kuò)散快，說明六種配方的微乳樣品都是0/W型。2、理化性質(zhì)的評價對六種配方微乳的理化性質(zhì)進(jìn)行檢測，包括對微乳表面張力、粘度、電導(dǎo)率、粒徑、Zeta電位等的測定。測量儀器采用表面張力分析儀(SEODST60A)測定表面張力0nN/cm),流變儀DV-fflULTRA(Brookfield公司)測定粘度(cP),多功能PH/電導(dǎo)率/離子綜合測定儀(Mett1erTo1edo公司)測定電導(dǎo)率(ias/cm)，NICOMP380/ZLS激光納米粒度分析儀(美國PSS公司)測定粒徑(nm)/zeta電位(mv)，檢測得各種性質(zhì)指標(biāo)如表1所示。表1六種配方微乳的理化性質(zhì)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>3、初步穩(wěn)定性分析(1)離心處理在室溫下，用lx10、/pm轉(zhuǎn)速的離心機(jī)對六種配方的微乳進(jìn)行離心處理，離心處理時間為20min，離心處理顯示，六種配方微乳均無分層現(xiàn)象；在380mn波長下測量微乳樣品在離心前后的吸光度，六種配方微乳離心前后的吸光度的變化見表2。表2六種配方微乳離心前后的吸光度的變化<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>注I一離心前吸光度；II一離心后吸光度；n/I—離心后吸光度/離心前吸光度。(2)放置處理在常溫下放置90天，各微乳樣品均不分層；在4'C放置40小時，六種配方微乳的外觀特征、粒徑和zeta電位如表3。表3冷藏后六種配方微乳的外觀、粒徑/zeta電位<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>通過微乳的類型、理化性質(zhì)、初步穩(wěn)定性等考察，(吐溫-80+異戊醇)/MCFA的比值為5:5的微乳粒徑小，zeta電位絕對值高，離心和放置處理前后性質(zhì)變化小，因此為最佳配方。權(quán)利要求1、一種以中鏈脂肪酸(MCFA)為原料，采用自乳化法(HLB值法)制備水包油(O/W)型中鏈脂肪酸微乳的方法，其特征在于，固定中鏈脂肪酸、吐溫-80、異丙醇、蒸餾水的質(zhì)量比為1∶8∶4∶10，邊搖勻邊進(jìn)行各組分間的互相滴定，確定用蒸餾水滴定MCFA、表面活性劑和助表面活性劑三個組分的混合物為最佳滴定方法。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的水包油(0/W)型中鏈脂肪酸微乳的制備方法，其特征在于，選擇各組分，比較乳化效率和偽三元相圖中形成微乳面積的大小以及實(shí)驗(yàn)過程中的結(jié)果，得到MCFA的最適HLB值(親水親油平衡值)為15,最佳表面活性劑為單獨(dú)使用吐溫-80，最佳Km值為2:1，最佳助表面活性劑是異戊醇。3、根據(jù)權(quán)利要求l所述的水包油型中鏈脂肪酸(MCFA)微乳的制備方法，測定微乳樣品的各種性質(zhì)，其特征在于所述MCFA微乳表面張力為23-27mN/cm,粘度為60-70cP，電導(dǎo)率為1-2jus/cm,粒徑為15-30nm，zeta電位絕對值為6-8Mv,穩(wěn)定性良好。全文摘要一種以中鏈脂肪酸(MCFA)為原料，采用自乳化法(HLB值法)制備水包油(O/W)型中鏈脂肪酸微乳的方法，屬生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。本發(fā)明所述的自乳化法(HLB值法)制備O/W型中鏈脂肪酸(MCFA)微乳，它包括以下內(nèi)容滴定方法的選擇；最適HLB值(親水親油平衡值)和最佳表面活性劑的選擇；最佳Km值(表面活性劑/助表面活性劑)的確定；最佳助表面活性劑的選擇；配方產(chǎn)品的特性分析(類別鑒定、理化性質(zhì)的測定、穩(wěn)定性分析)；根據(jù)獲得的最佳表面活性劑、最佳助表面活性劑和最佳HLB值滴定制備O/W型中鏈脂肪酸(MCFA)微乳。文檔編號A61K31/19GK101428001SQ20081013652公開日2009年5月13日申請日期2008年12月16日優(yōu)先權(quán)日2008年12月16日發(fā)明者婕萬,偉劉,劉成梅,劉瑋琳,梁瑞紅,鐘業(yè)俊申請人:南昌大學(xué)