專(zhuān)利名稱(chēng)：口蹄疫的抗原化抗體疫苗的制作方法
口蹄疫的抗原化抗體疫苗
本發(fā)明涉及能引發(fā)抗口蹄疫之免疫力的疫苗。
抗體是身體免疫系統(tǒng)對(duì)侵入體內(nèi)的已知為抗原的外源物質(zhì)作出反 應(yīng)而產(chǎn)生的蛋白質(zhì)。疫苗可引發(fā)免疫應(yīng)答，隨即可保護(hù)宿主免受致病 劑(抗原)的感染。
通常，疫苗由致病生物體或其部分組成。組成疫苗的生物體或其 某些部分經(jīng)常是滅活的或減毒的以使宿主體內(nèi)的致病生物體失去部分 或全部的致病能力。在大多數(shù)情況下，當(dāng)在體外培養(yǎng)細(xì)菌，和某種程 度上為病毒時(shí)，它們會(huì)慢慢失去在生物體內(nèi)生存并繁殖的能力。
有多種方法可產(chǎn)生疫苗，大多數(shù)類(lèi)型的疫苗包括病毒疫苗，生物 藥物疫苗，多抗原-肽疫苗和多蛋白疫苗。
口蹄疫(下文也稱(chēng)之為FMD)是感染所有偶蹄動(dòng)物的高傳染性，嚴(yán) 重導(dǎo)致衰弱的疾病。該病在世界上很多發(fā)展中國(guó)家流行，尤其是，亞 洲的豬經(jīng)常被FMD感染。FMD降低家畜的生產(chǎn)率，帶來(lái)很高的免疫 接種花費(fèi)，限制了家畜和家畜產(chǎn)品的國(guó)際貿(mào)易。FMD是病毒傳染性疾 病，口蹄疫病毒(下文也稱(chēng)之為FMDV)是具有約8000個(gè)核苷酸長(zhǎng)的單 鏈有義RNA基因組的小的動(dòng)物病毒。
針對(duì)FMD已產(chǎn)生了兩種主要類(lèi)型的疫苗，它們是常規(guī)疫苗和合成 的肽疫苗?？笷MDV的常規(guī)疫苗可使用滅活的FMD病毒或活的減毒 FMD病毒。盡管常規(guī)疫苗方法一般是有效的，但還有幾個(gè)相伴隨的不 符合要求的缺點(diǎn)。
首先，它在花費(fèi)上不合算。這一類(lèi)型的疫苗由大量活的傳染性病 毒制成，維持和加工大量傳染性病毒是昂貴的，費(fèi)力的，還需占用大 量空間。
第二，也是最重要的缺點(diǎn)是.，這些疫苗具有潛在的危險(xiǎn)性。最近 幾年大多數(shù)FMD的突然蔓延是由疫苗生產(chǎn)單位泄漏病毒引起的，或者
是由使用未完全滅活或未充分減毒的病毒引起的。例如，本世紀(jì)80年
代，包括意大利，英國(guó)，法國(guó)的歐洲國(guó)家發(fā)生了多次口蹄疫大流行，
臺(tái)灣于1996年也發(fā)生了口蹄疫大流行。由于經(jīng)常發(fā)現(xiàn)導(dǎo)致口蹄疫流行 的病毒與歐洲生產(chǎn)廠家所用的毒株密切相關(guān)或甚至相同，最初的口蹄
疫大流行可能是由未充分滅活的疫苗或由疫苗生產(chǎn)廠泄漏的病毒引起 的。
另一個(gè)與生產(chǎn)常規(guī)疫苗相關(guān)的問(wèn)題是它們是熱不穩(wěn)定的。當(dāng)暴露 于升高的溫度中時(shí)，常規(guī)的FMD疫苗相對(duì)不穩(wěn)定，不得不將它們置于 低溫中保存。持久地維持所需的低溫經(jīng)常是難以做到的，特別是在熱 帶國(guó)家更是如此。
常規(guī)疫苗生產(chǎn)方法之病毒培養(yǎng)方案中的另外一個(gè)潛在問(wèn)題是使 用胎牛血清病毒培養(yǎng)。疾病可能由胎牛血清傳入并影響經(jīng)免疫的動(dòng)物。
使用常規(guī)FMD疫苗的另一個(gè)主要缺點(diǎn)是使用常規(guī)方法產(chǎn)生的大 多數(shù)疫苗是滅活的組織培養(yǎng)病毒的相對(duì)粗的制品。這種組織培養(yǎng)的混 合物可導(dǎo)致嚴(yán)重的副作用，如變應(yīng)性反應(yīng)和易感家畜的流產(chǎn)。
較新形式的FMDV疫苗不使用滅活的病毒。它們是合成的肽疫苗 和重組蛋白疫苗。FMDV病毒蛋白l(VPl)上的免疫顯性位點(diǎn)的鑒定為 設(shè)計(jì)合成肽和重組蛋白FMD疫苗提供了新的思路。與常規(guī)疫苗相比， 這兩種類(lèi)型的疫苗在生產(chǎn)和應(yīng)用中都是安全的。它們也很容易處理， 儲(chǔ)存，運(yùn)輸，經(jīng)設(shè)計(jì)能符合特殊的需要。
在每個(gè)末端加上半胱氨酸殘基之后，用戊二醛或空氣氧化使VP1
的141a.a.-160a.a.肽聚合化，從而開(kāi)始合成的FMDV肽疫苗研究，發(fā)現(xiàn) 未偶聯(lián)的肽可成為免疫原性的肽。1987年，F(xiàn)rancis及其同事報(bào)道了具 有游離巰基的C末端半胱氨酸的存在可大大增加游離的141-160a.a.肽 的免疫原性。當(dāng)加上多個(gè)半胱氨酸殘基時(shí)也可得到類(lèi)似的結(jié)果。這表 明游離巰基半胱氨酸殘基的存在可以形成導(dǎo)致更適宜的二級(jí)結(jié)構(gòu)的肽 二聚體，所述二級(jí)結(jié)構(gòu)可在體內(nèi)導(dǎo)致免疫復(fù)合物的形成(Francis， 1995)。 根據(jù)這一思路，將串聯(lián)重復(fù)(Cys 137-162(x2))的免疫原性與單拷貝Cys 137-163肽的免疫原性相比較，發(fā)現(xiàn)串聯(lián)重復(fù)的FMDV肽一般比單拷貝 的二硫鍵二聚體的免疫原性更強(qiáng)。增加半胱氨酸殘基可導(dǎo)致二硫鍵四 聚體結(jié)構(gòu)的形成，該結(jié)構(gòu)可進(jìn)一步改善免疫應(yīng)答。
使用Tam多抗原肽(MAP)系統(tǒng)(Tam 1988)進(jìn)一步檢測(cè)多拷貝合成 肽的想法。該系統(tǒng)可以在分支賴(lài)氨酸骨架上固相合成肽抗原以產(chǎn)生幾 個(gè)多賴(lài)氨酸八聚體構(gòu)建體。具有多拷貝肽的該系統(tǒng)導(dǎo)致大大增強(qiáng)的免 疫應(yīng)答。
為了應(yīng)用多拷貝FMDV肽，通過(guò)將小的肽序列與編碼較大蛋白質(zhì) 的基因融合應(yīng)用了重組DNA技術(shù)。這些較大的重組疫苗蛋白質(zhì)具有多 個(gè)特點(diǎn)。與通過(guò)化學(xué)交聯(lián)制備的那些結(jié)構(gòu)相比，將肽與載體連接的目 的是提供完全均一和確定的結(jié)構(gòu)以提供免疫原(Francis， 1991)。首先使 單或多拷貝的FMDV免疫原性肽與細(xì)菌蛋白質(zhì)，P-半乳糖苷酶的N-末 端融合以研究此方法(Broekhuijsen等，1986; Winther等，1986)。選擇P-半乳糖苷酶的原因是已表明它可引發(fā)產(chǎn)生針對(duì)位于N末端的VP1表 位的抗體，它也含有幾個(gè)T細(xì)胞表位(Krzych等，1982;Manca等，1985)。 已發(fā)現(xiàn)這個(gè)多拷貝FMDV肽-(3-半乳糖苷酶重組蛋白的免疫原性與使用 賴(lài)氨酸背景系統(tǒng)得到的(Broekhuijsen等，1987)相類(lèi)似。
然后，使用與乙肝病毒核心抗原(HBcAg)之N末端融合的FMDV
肽序列進(jìn)一步開(kāi)發(fā)多個(gè)肽的提供以產(chǎn)生HBC融合顆粒。據(jù)報(bào)道這一
27nm的雜合蛋白顆粒能完全保護(hù)豚鼠，其結(jié)果與滅活的FMDV VP1 142a.a.-160a.a.肽所引發(fā)的相似，可保護(hù)動(dòng)物免受攻擊性感染。
盡管最初是有希望的，但合成肽方法和重組蛋白疫苗方法似乎存 在缺點(diǎn)，其中有三級(jí)結(jié)構(gòu)的可預(yù)見(jiàn)性差和免疫原性弱。如果肽表現(xiàn)出
其所需功能必需的三維水平上特定的構(gòu)象的話，溶液中的肽卻以不總 是最適于受體結(jié)合(B細(xì)胞受體和可能是T細(xì)胞受體和主要組織相容性 基因產(chǎn)物)的構(gòu)象存在。
在合成肽相對(duì)較小的情況下，注射后容易在體內(nèi)降解。因此，它 們?cè)谔峁╅L(zhǎng)期免疫應(yīng)答方面不是很有效，這可能是因?yàn)橹亟M蛋白疫苗 不能表現(xiàn)出適當(dāng)?shù)臉?gòu)象。另外，肽合成是昂貴的，可導(dǎo)致疫苗的高生 產(chǎn)花費(fèi)。如上所述，通過(guò)與(3-半乳糖苷酶或HBcAg類(lèi)的微生物蛋白質(zhì) 之N末端融合可在肽疫苗上提供FMDV表位。然而，使用(3-半乳糖苷 酶可引發(fā)很多額外的和不必要的免疫應(yīng)答(Bona等，1994)。用此重組蛋 白疫苗重復(fù)免疫之后，可產(chǎn)生如即發(fā)性超敏反應(yīng)的副作用，導(dǎo)致動(dòng)物 患嚴(yán)重的枯草熱和氣喘病。
核酸疫苗或DNA疫苗代表著控制傳染因子的新方法。這些新疫苗 易于設(shè)計(jì)和制備。使用重組DNA技術(shù)將編碼用作免疫原的一種或多種 蛋白質(zhì)的DNA序列克隆至真核表達(dá)載體中。
抗原化抗體是其可變區(qū)經(jīng)基因工程改造可表達(dá)不同抗原之表位的 抗體?？乖贵w可用作針對(duì)特異性B或T細(xì)胞表位產(chǎn)生免疫應(yīng)答的 免疫原。因此，抗原化抗體可用于替代常規(guī)或合成肽免疫接種法。
因此，既可提供安全的可能性又可提供效力的最有效的疫苗類(lèi)型 是抗原化抗體疫苗?？贵w的抗原化方法由下列步驟組成，即將得自非 免疫球蛋白之抗原的肽表位移植到抗體分子的互補(bǔ)決定區(qū)("CDR")環(huán)中。由于CDR環(huán)暴露于抗體分子的表面，它們?yōu)榭贵w的抗原性作出了
主要的貢獻(xiàn)。與上述合成疫苗不同的是，抗原化抗體經(jīng)由Fc受體耙向 抗原呈遞細(xì)胞，籍此使II類(lèi)主要組織相容性(MHC)分子的抗原呈遞最 大化?？乖贵w也為B細(xì)胞提供了連續(xù)不斷的抗原肽來(lái)源以在I類(lèi) MHC分子中呈遞。除了 B細(xì)胞水平上的免疫原性外，抗原化抗體作為 經(jīng)加工的肽產(chǎn)物起作用以產(chǎn)生Th-細(xì)胞免疫原性。
因此，本發(fā)明的目的是提供抗口蹄疫的抗原化抗體疫苗以提供克 服了現(xiàn)有技術(shù)的一些缺點(diǎn)，較安全，更便宜和/或更有效的疫苗產(chǎn)品， 并為公眾提供有用的選擇。
盡管使用的是與奶牛IgG連接的奶牛FMDV病毒表位，本發(fā)明仍 可用于抗豬FMD，該疫苗也可用于如奶牛等的其它動(dòng)物。
本發(fā)明由疫苗組成，所述疫苗的功能可由四種不同形式提供，即 兩種蛋白質(zhì)疫苗構(gòu)建體和兩種相關(guān)的DNA疫苗對(duì)應(yīng)物構(gòu)建體。該疫苗 所有的形式都提供抗豬FMD和FMDV的免疫功能。特別的是，蛋白 質(zhì)形式的疫苗是抗原化抗體疫苗；此肽序列含有取代豬IgG之CDR環(huán) 的FMDV表位或FMDV單個(gè)或串聯(lián)重復(fù)的表位由豬IgG重鏈恒定區(qū)蛋 白質(zhì)攜帶的嵌合蛋白。
例如，用基因工程的方法改造用于移植到CDR中的特定FMDV 表位。當(dāng)單個(gè)IgG載體為質(zhì)粒形式時(shí)，對(duì)應(yīng)于第一種形式蛋白質(zhì)疫苗 的第一種形式的DNA對(duì)應(yīng)物利用FMDV表位cDNA序列。對(duì)應(yīng)于第 二種形式蛋白質(zhì)疫苗的第二種形式的DNA對(duì)應(yīng)物利用FMDV表位 DNA序列，所述序列不同地與豬IgG的重鏈恒定區(qū)cDNA連接。另夕卜， 可使用此疫苗進(jìn)行抗豬FMD或FMDV的免疫接種方法。施用此疫苗 的方法各不相同，對(duì)于蛋白質(zhì)形式的疫苗而言，可通過(guò)例如常規(guī)的注 射來(lái)給藥。當(dāng)施用DNA形式的疫苗時(shí)，使用表皮基因槍或注射給藥。
利用實(shí)施例并參照附圖可解釋本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案，其中
圖la圖解顯示了使用豬IgG的抗原化抗體疫苗的結(jié)構(gòu)即使用豬 IgG的抗原化抗體疫苗，F(xiàn)MDV表位取代了豬IgG重鏈和輕鏈上的 CDR2禾卩CDR3區(qū)域；
圖lb圖解顯示了使用FMDV單個(gè)或串聯(lián)重復(fù)表位的抗原化嵌合 疫苗的結(jié)構(gòu)即使用與豬IgG重鏈恒定區(qū)連接的FMDV單個(gè)或串聯(lián)重 復(fù)表位的抗原化抗體疫苗；
圖2a顯示了抗原化抗體疫苗的相應(yīng)cDNA,該疫苗使用IgG cDNA 作為質(zhì)粒載體即使用豬IgGcDNA為質(zhì)粒載體的DNA疫苗，F(xiàn)MDV 表位DNA序列被移植到豬IgG重鏈和輕鏈cDNA的CDR2和CDR3 區(qū)域；
圖2b顯示了抗原化嵌合疫苗的相應(yīng)cDNA，該疫苗使用FMDV單 個(gè)或串聯(lián)重復(fù)表位即使用與豬IgG重鏈恒定區(qū)cDNA連接的單個(gè)或 串聯(lián)重復(fù)FMDV表位DNA序列的DNA疫苗；
圖3顯示了抗原化抗體重鏈分子的氨基酸序列，其中CDR3區(qū)域 被FMDV VP1 aa 200至213取代；
圖4顯示了圖3所示氨基酸相應(yīng)的cDNA序列；
圖5顯示了抗原化抗體重鏈分子的氨基酸序列，其中CDR3區(qū)域 被FMDV VP1 aa 141至160取代；
圖6顯示了圖5所示氨基酸相應(yīng)的cDNA序列；
圖7顯示了抗原化嵌合疫苗分子的cDNA序列，黑體部分表示 FMDV VP1的表位(aa 141至160, aa 200至213)，其余序列屬于豬IgG 重鏈恒定區(qū)；
圖8顯示了抗原化嵌合疫苗分子的蛋白質(zhì)序列，黑體部分表示 FMDV VP1的表位(aa 141至160， aa 200至213)，其余序列屬于豬IgG 重鏈恒定區(qū)；
圖9顯示了對(duì)應(yīng)于圖8中IgG輕鏈之cDNA序列的4個(gè)cDNA序
列；


圖10顯示了編碼IgG輕鏈的4個(gè)氨基酸序列，黑體序列是構(gòu)架區(qū) 域，下劃線序列是CDR區(qū)域，CDR2或CDR3序列可被相應(yīng)的FMDV表位序列取代；
圖11A顯示了所發(fā)生的重疊(延伸)PCR:即兩個(gè)階段發(fā)生的重疊/ 延伸PCR，首先，擴(kuò)增CDR1/CDR2區(qū)域，同時(shí)擴(kuò)增Ck/CDR3區(qū)域。 CDR3的寡核苷酸是互補(bǔ)的，較長(zhǎng)的引物3也含有VP1 141-160或 200-213殘基，這使得在隨后的PCR中可融合這兩個(gè)產(chǎn)物(a和b);
圖11B顯示了所發(fā)生的重疊(延伸)PCR:即兩個(gè)階段發(fā)生的重疊/ 延伸PCR。首先，擴(kuò)增CDR1/CDR2區(qū)域，同時(shí)擴(kuò)增CH/CDR3區(qū)域。 CDR3的寡核苷酸是互補(bǔ)的，較長(zhǎng)的引物7也含有VP1 141-160或 200-213殘基，這使得在隨后的PCR中可融合這兩個(gè)產(chǎn)物(c和d)。
本發(fā)明基于一種新的抗FMD疫苗類(lèi)型，這種新的疫苗類(lèi)型可引發(fā) 抗FMD的免疫應(yīng)答。本發(fā)明由編碼FMDV表位之cDNA序列的基因 工程改造構(gòu)成。疫苗也含有豬IgG cDNA構(gòu)建體作為FMDV表位的載 體。通過(guò)將FMDV肽表位移植到豬IgG CDR環(huán)或?qū)MDV表位與圖 lb所示的豬IgG恒定區(qū)連接進(jìn)行FMDV表位和豬IgG蛋白質(zhì)形式的綴 合。
因此，如圖la和lb所示，將得自FMDV的肽表位移植到豬抗體 CDR環(huán)中可產(chǎn)生蛋白質(zhì)形式的抗原化抗體疫苗分子。通過(guò)以FMDV之 VP1基因?yàn)榛A(chǔ)進(jìn)行PCR可合成FMDV肽表位。使用重疊PCR法將 FMDV肽表位插入到豬免疫球蛋白重鏈和輕鏈基因的CDR區(qū)域內(nèi)。所 得抗原化抗體基因被克隆至哺乳動(dòng)物表達(dá)載體。將質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至CHO或 骨髓瘤細(xì)胞中。
本發(fā)明的疫苗實(shí)際上具有兩個(gè)優(yōu)選的類(lèi)型，每個(gè)類(lèi)型具有兩種優(yōu) 選的形式，因此，如圖la，lb和圖2a，2b所示，本發(fā)明總共有4種不同 的實(shí)施方案將在本文中討論。其中兩種是蛋白質(zhì)形式(圖la, lb)，已知 它們是可通過(guò)注射給藥的抗原化抗體疫苗。第一種類(lèi)型是利用豬IgG 蛋白為FMDV表位的載體，并被注射至豬肌肉組織的抗原化抗體疫苗。 第一種形式的這種抗原化抗體疫苗(圖la)將FMDV表位插入到豬IgG重鏈和輕鏈的CDR2和CDR3區(qū)域內(nèi)。第二種形式的這種抗原化抗體 疫苗C圖lb)利用了僅與豬IgG重鏈恒定區(qū)連接的單個(gè)或串聯(lián)重復(fù)的 FMDV表位，形成了嵌合的蛋白質(zhì)。因此，第二種形式的這種抗原化 抗體疫苗也被稱(chēng)為抗原化嵌合疫苗。
本發(fā)明的第二種類(lèi)型被稱(chēng)為裸露的DNA疫苗，通過(guò)基因槍注射可 施用該疫苗。各種DNA形式具有相應(yīng)的蛋白質(zhì)形式的對(duì)應(yīng)物。兩種形 式的這種裸露的DNA疫苗對(duì)應(yīng)于上述的其蛋白質(zhì)對(duì)應(yīng)物。施用后，宿 主細(xì)胞機(jī)制可表達(dá)這兩種DNA形式。相應(yīng)的蛋白質(zhì)等同物可直接施用 于動(dòng)物，其功能與裸露的DNA疫苗形式相同。第一種形式的這種裸露 DNA疫苗將FMDV表位DNA序列移植到豬IgG重鏈和輕鏈cDNA的 CDR2和CDR3區(qū)域內(nèi)。第二種形式的這種DNA疫苗利用僅與豬IgG 重鏈恒定區(qū)cDNA連接的FMDV表位DNA序列(圖4)。當(dāng)轉(zhuǎn)錄和翻譯 過(guò)程在宿主細(xì)胞機(jī)器內(nèi)產(chǎn)生產(chǎn)物時(shí)，這兩種形式的裸露DNA疫苗將分 別發(fā)揮兩種形式的抗原化抗體疫苗的功能。
疫苗的構(gòu)建包括三個(gè)主要的步驟，即l)克隆豬單個(gè)IgG重鏈恒定 區(qū)，和豬輕鏈，2)將兩個(gè)FMDV免疫原的序列連接在一起和3)將豬IgG 單個(gè)重鏈恒定區(qū)與FMDV免疫原的序列連接在一起，然后插入細(xì)菌表 達(dá)載體。該方法的細(xì)節(jié)解釋如下。
l)克隆豬單個(gè)IgG重鏈恒定區(qū)
使用可商購(gòu)的試劑盒(mRNA制備試劑盒，Pharmacia),根據(jù)廠商 的描述進(jìn)行豬脾臟mRNA的提取和純化。簡(jiǎn)單地說(shuō)，用1.2ml提取緩 沖液勻漿3g新鮮豬脾臟，用2.4ml洗脫緩沖液稀釋經(jīng)勻漿的組織提取 物并徹底混合。將勻漿物轉(zhuǎn)移到無(wú)菌試管中，離心1分鐘得到澄清的 勻漿物。將lml澄清的勻槳物放在寡(dT)-纖維素小球頂端。將試管倒 轉(zhuǎn)3分鐘以重新懸浮寡(dT)-纖維素。于16,000Xg下離心IO秒鐘以收 集沉淀物，為了進(jìn)行洗滌，用lml高鹽緩沖液將寡(dT)-纖維素洗滌5 次，并于16,000Xg下離心IO秒鐘，接著用lml低鹽緩沖液洗滌3次，并于16，000Xg下離心10秒鐘。然后將沉淀物重新懸浮于0.3ml低鹽 緩沖液中并轉(zhuǎn)移到MicroSpinTM柱上，將該柱全速離心5秒鐘，棄去 流出液，用新的收集管替代舊管，重復(fù)2次此步驟。將柱置于無(wú)菌微 量離心管中，加入0.2ml預(yù)溫的洗脫緩沖液，全速離心5秒鐘以收集含 mRNA的洗脫物。在樣品中加入10ml糖原溶液和1/10體積的醋酸鉀溶 液，將樣品與500ml 100%乙醇混合并在—20。C下放置至少30分鐘。于 4°C， 14,000 rpm下離心5分鐘以收集沉淀的mRNA。棄去上清液，將 沉淀的mRNA溶解于經(jīng)DEPC-處理的水中。通過(guò)260nm下的UV吸收 測(cè)定RNA的量。
RT-PCR分析
使用一套豬IgG 5'和3'特異性引物，通過(guò)RT-PCR擴(kuò)增編碼豬IgG 重鏈恒定區(qū)的cDNA片斷。使用豬IgG3'特異性引物引發(fā)由總RNA合 成第一條cDNA鏈。于37'C，通過(guò)MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄60分 鐘，于70。C終止15分鐘。在豬IgG5'特異性引物的存在下，通過(guò)PCR 擴(kuò)增cDNA產(chǎn)物。PCR的設(shè)置如下，并進(jìn)行30輪循環(huán)94'C變性1分 鐘，50'C退火1分鐘，72'C延伸2分鐘，最后于72'C延伸6分鐘。在 1.0。/。低融點(diǎn)瓊脂糖凝膠上分級(jí)分離PCR產(chǎn)物，使用苯酚:氯仿提取和乙 醇沉淀從凝膠中純化大小相當(dāng)于IgG重鏈恒定區(qū)的帶。然后將DNA與 較后的FMDV免疫原的序列(F1)連接。
由豬IgG基因(Kacskovics等，1994)設(shè)計(jì)所用的PCR引物，引物序 列如下
豬lgG3'特異性引物
5' GAC GCT CGA GTC ATC ATT TAC CCT GAG T 3'
豬lgG5'特異性引物
5' AGC TAA GCT TGC CCC CAA GAC GGC CCC A 3' 2)連接兩個(gè)FMDV免疫原的序列
制備對(duì)應(yīng)于FMDV的VPl(Kurz等，1981)之殘基141-160和200-213(以殘基155-160序列為重疊區(qū)域制備兩個(gè)序列)的兩個(gè)寡核苷 酸序列。通過(guò)重疊PCR連接兩個(gè)序列。PCR設(shè)置如下并進(jìn)行5輪循環(huán) 94'C1分鐘，63。C3分鐘。使用兩個(gè)引物VP1 3'引物和VP1 5'引物在3' 末端加上一個(gè)Hind III限制性位點(diǎn)，在5'末端加上一個(gè)Nde I限制性位 點(diǎn)。PCR的設(shè)置如下，并進(jìn)行24輪循環(huán)94'C變性1分鐘，5(TC退火 1分鐘，72'C延伸2分鐘，最后于72'C延伸6分鐘。在1.5%低融點(diǎn)瓊 脂糖凝膠上分析PCR產(chǎn)物，切下具有正確大小的產(chǎn)物并純化之。將連 接的片斷稱(chēng)為FMDV-免疫-序列。由 VP1 141a.a,160a.a.和 200a.a,213a.a. (Kurz等，1981)設(shè)計(jì)所用的VP1 3'和5'引物，引物序列如 下
VP1 5'引物
5' ATG CCA TAT GGT ACC AAA C 3' VPl 3'引物
5' ATG CAA GCT TCA ACT TCT G 3'
圖11A闡明了兩個(gè)階段發(fā)生的重疊(延伸)PCR。首先，擴(kuò)增 CDR1/CDR2區(qū)域，同時(shí)擴(kuò)增Ck/CDR3區(qū)域。CDR3的寡核苷酸是互補(bǔ) 的；較長(zhǎng)的引物3也含有VP1 141-160或200-213殘基。這使得在隨后 的PCR中可融合這兩個(gè)產(chǎn)物(a和b)。圖IIB闡明了兩個(gè)階段發(fā)生的重 疊(延伸)PCR。首先，擴(kuò)增CDR1/CDR2區(qū)域，同時(shí)擴(kuò)增CH/CDR3區(qū) 域。CDR3的寡核苷酸是互補(bǔ)的；較長(zhǎng)的引物7也含有VP1 141-160或 200-213殘基。這使得在隨后的PCR中可融合這兩個(gè)產(chǎn)物(c和d)。
3)連接豬IgG單個(gè)重鏈恒定區(qū)，F(xiàn)MDV-免疫-序列片斷和細(xì)菌表達(dá)
載體
用Nde I和Hind III消化上述片斷；用Hind III和Xho I消化豬單 個(gè)IgG重鏈恒定區(qū)，用Nde I和Xho I消化細(xì)菌表達(dá)載體。通過(guò)苯酚/ 氯仿提取和乙醇沉淀純化這3個(gè)經(jīng)消化的片斷，然后于16。C使用T4 DNA連接酶連接過(guò)夜，將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化到JM109中，通過(guò)微量質(zhì)粒分 離，再通過(guò)限制性酶消化篩選菌落。通過(guò)DNA測(cè)序分離和檢査正確克隆的質(zhì)粒。最后，將正確的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BL(21)DE3pLysE中， 質(zhì)粒被稱(chēng)為pFl-IgG。
因此，本發(fā)明可提供抗口蹄疫的抗原化抗體疫苗，以提供克服了 現(xiàn)有技術(shù)的一些缺點(diǎn)，較安全，更便宜和/或更有效的疫苗產(chǎn)品。
本發(fā)明想在本文所述的整個(gè)內(nèi)容中摻入等價(jià)物，其中這種等價(jià)物 對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見(jiàn)的。本發(fā)明的內(nèi)容是利用實(shí)施例提 供的，但并不能認(rèn)為是對(duì)本發(fā)明范圍的限制，本發(fā)明的范圍由所附權(quán) 利要求書(shū)限定。
序列表
:110:
:120:
:130:
:160:
:210: :211: :212: :213: :400:
香港科技大學(xué) U蹄疫的抗原化抗體疫苗 SP工081546-01 22
470 PRT
Sus sp.
Met Glu Phe Arg Leu Asn
Val Gin Gly Glu Glu Lys 20
Trp Val Val 10
Leu Phe Ala Leu 15
Leu Val 25
Pro Gly Gly 35
Ser Leu Lys Leu Ser 40
Ser Ser 50
Glu Trp 65
Thr
Lieu
Asp Ser Val
Tyr lie His 55
Ala Gly Leu 70
Lys Gly Arg 85
Trp Tyr* Phe
Val
Ser
Glu Ser Gly Gly Gly 30
Cys Val Gly Ser Gly 45
Arg Gin Ala Pro Gly 60
Leu Gin Gly
Leu Val Gin
Phe Thr Phe
Lys
Ser Thr Thr Pro Thr Tyr 75 80
Gly Leu Tyr Ser
Asp工le 90
Thr Ala
Tyr Leu Gin Met 100
Asn Gly Leu 105
Tyr Tyr Cys 115
Gin Lys 130
Lys Thr 145
Leu
Ala
Gly Lys Arg His Lys Gin 120
Trp Gly Pro Gly Val Glu 135
Pro Ser Val Tyr Pro 150
Ser Arg Glu Asp
Lys Thr Glu Asp 110
Glu工le Val Ala 125
Ala Gin Asn
Thr
Pro
Ala Arg Val Lys
Val Val 140
Val Ser Ser Ala Pro
Leu Ala 155
Pro Cys Gly Arg Asp Val 160
Ser Gly Pro
Asn Val 165
Ala Leu
Glu Pro
Val Thr 180
Val Thr Trp
Gly Cys 170
Asn Ser 185
Leu Ala
Gly Ala
Ser Ser 175
Leu Thr 190
His Thr Phe Pro 195
Ser Met Val Thr 210
Cys Asn Val Asn 225
Ser Val
Leu Gin Pro 200
Ser
Gly Leu Tyr 205
Tyr Phe Pro Ser Gly Val Ser Leu Ser
Val Pro Ala Ser Ser 215
Leu Ser Ser Lys 220
His Pro Ala Thr Thr Thr Lys Val Asp 230 235
Ser
Lys 240
Tyr* Thr Arg ValGly工le His Gin Pro
245
Gin Thr Cys Pro
250
工le
Ala Gly Pro Ser 260
Val
Met lie Ser 27S
Gin Thr
Lys Glu
Val His 305
His Ala Glu
Phe lie Phe 265
Pro Glu Val 280
Val Gin Phe 295
Pro Pro
Thr Cys
Cys Pro Gly 2S5
Lys Pro Lys 270
Val Val 285
Val
Ser
Trp Tyr 300
Val Asp
Thr Ala
Glu Thr 310
Arg Pro
Lays Glu 315
Glu Gin Phe
Cys Glu Val Asp Thr Leu Asp Val Ser Gly Val Glu
Asn Ser Thr 320
Tyr Arg Val Gly Lys
Val Ser 325
Val
Leu Pro工le 330
Gin His Gin Asp Trp Leu lys 335
Glu Phe 340
Lys Cys
工le Thr Arg 355
Thr lie Ser
Lys Val 345
Lys Ala 360
Asn Asn Val Asp Leu Pro Ala Pro 350
lie Gly
Gin Ser 365
Glu Pro Gin
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Pro Ala Glu 370 375
Glu Leu 380
Ser Arg Ser Lys Val
Thr lieu 385
Thr Cys Glu Trp Lys
L<eu Val 390
lie Gly
Phe Tyr 395
Pro Pro
Asp
工le His Val 400
Thr Pro
405
Pro Gin Gin 420
Leu Ala Val 435
Ala Val Met
450
Ser Lys Thr 465
Asp Lys
Gly Asp Ala
Gin Pro Glu 410
Val Asp Gly 425
Arg Trp Asp 440
Pro Glu Asn
Thr Tyr Arg Thr 415
His Glu Ala Leu His Asn 455
Gin Gly Lys 470
Thr Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 430
His Gly Asp Lys Phe Glu Cys 445
His Tyr Thr Gin Lys Ser lie
460
<210> 2 <211> 1505 <212> DNA <213> Sus sp.
<400> 2
atggagtttc ggctgaactg ggtggtcttg tttgctctct tacaaggtgt ccagggtgag 60
gagaagctgg tggagtctgg aggaggcctg gtgcagcctg gggggtctct gaaactctcc 120
tgtgtcggct ctggattcac cttcagtagt acctatattc actgggtccg ccaggctcca 180
gggaagggac tggagtggct ggcaggtctc tacagtagta ctacgccgsic ctactactca 240
gactctgtgaagggccggttcgacatctcc
caaatgaacggcctgaaaaccgaaigacacg
caggaaatcgtagctccagtaaaacagasg
tcctcagcccccaagacggccccatcggtc
tctggccctaiacgtggccttgggctgcctg
atgacctggaactcgggcgccctgaccagt
ccgtcsgggctctactccctcagcagcatg
aagagctacacctgcaatgtca^ccacccg
ggaatacaccagccgcaaacatgtcccata
gtcttcatcttCCCtCC3Macccaaggac
acgtgcgtggtggtggacgtcagcaaggag
gacggrggtagaggtgcacacggccgagacg
taccgtgtggtcagcgtcctgcccatccag
aagtgcaaggtcaacaacgtagacctccca
atagggcagagccgggagccgcsggtgtac
aiggagcaaLagtcacgctaacctgcctggtc
gagtggaagagcaacggacagccggagcca
caggacgtggacgggaccttcttcctgtac
gaccaitggagacaaatttgagtgtgcggtg
cagaagtccatctccaagactcagggtaaa
gggtcccgcgagctcgcctgagccccagcg
agagaggacg cccagaacac ggcctatcta 300
gcccgctact actgtggaaa gcgtcacaaa 360
ttgtggggcc caggcgttga agtcgtcgtg 420
taccctctgg ccccctgcgg cagggacacg 480
gcctcaagct acttccccga gccagtgacc 540
ggcgtgcaca ccttcccatc cgtcctgcag 600
gtgaccgtgc cggccagcag cctgtccagc 660
gccaccacca ccaaggtgga caagcgtgtt 720
tgcccaggct gtgaagtggc cgggccctcg 780
accctcatga tctcccagac ccccgaggtc 840
cacgccgagg tccagttctc ctggtacgtg 900
agaccaaagg aggagcagtt caacagcacc 960
caccaggact ggctgaaggg gaaggagttc 1020
gcccccatca cgaggaccat ctccaaggct 1080
accctgcccc cacccgccga ggagctgtcc 1140
attggcttct acccacctga catccatgtt 1200
gagaacacat accgcaccac cccgccccag 1260
agcaaactcg cggtggacaa ggcaagatgg 1320
atgcacgagg ctctgcacaa ccactacacc 1380
tgagccaccc gctgcacccc acgtgctctc 144 0
ctgtgtacat acgtcccggg ccagcatgaa 1500
1505
<210> 3 <211> 476 <212> PRT <213> Sus sp. <400> 3
Met Glu Phe Arg Leu Asn Trp Val Val Leu Phe Ala Leu Leu Gin Gly 5 10 15
Val Gin Gly Glu Glu Lys Leu Val Glu Se:r Gly Gly Gly Leu Val Gin 20 25 30
Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Val Gly Ser Gly Phe Thr Phe 35 40 45Ser Ser 50
Glu Trp 65
Thr Tyr工le
His 55
Leu
Asp Ser Val
Ala Gly 70
Lys Gly 8S
Trp Tyr Arg Phe
Val Arg Gin Ala 60
Leu
Ser Ser Thr* 75
Thr
Asp lie 90
Ser Arg
Thr Ala
Tyr Leu Gin 100
Met Asn Gly Leu Lys Thr 105
Pro Gly Lys Gly Leu
Pro Thr Tyr Tyr Ser 80
Glu Asp Ala Gin Asn 95
Glu Asp Thr Ala Arg 110
Tyr Tyr Cys 115
Gly Lys Val
Pro Asn 120
!Leu
Arg
Gly Asp 125
Leu Gin Val Leu
Ala Gin 130
Val Val 145
Lys Val Ala Arg Thr Leu Pro 135
Trp Gly 140
Pro Gly Val Glu Val
Ser
Ser Ala Pro 150
L>ys Thr
Ala Pro 155
Ser Val
Pro Cys Gly
Arg Asp 165
Val
Ser Gly Pro 170
Asn Val Ala
Tyr Pro Leu Ala 160
Leu Gly Cys Leu 175
Ala Ser
Ser Tyr 180
Phe Pro
Glu Pro Val Thr Val Thr Trp Asn Ser Gly 185 190
Ala Leu Thr 195
Ser Gly Val His Thr Phe Pro 200
Ser Val 205
Leu Gin Pro Ser
Gly Leu 210
Ser Ser 225
Lys Val Cys Pro
Tyr Lys Asp
Ser Leu Ser Ser Met Val 215
Thr Val 220
Pro Ala Ser Ser Leu
Ser
Tyr Thr 230
Lys Arg 245
Val
Cys Gly
Asn
Val Asn 235
His Pro
工le His 250
Gin Pro Gin
Ala Thr Thr Thr 240
Thr Cys Pro lie 255
Gly Cys 260
Glu Val Ala Gly Pro Ser Val Phe工le Phe Pro Pro
265
Lys Pro Lys 275
Asp Thr Leu Met lie Ser Gin 280
285
270
Pro Glu Val Thr Cys
Val Val 290
Tyr Val 305
Val Asp Val Ser Lys Glu His 295
Ala Glu 300
Val
Asp
Gly
Val Glu 310
Val His
Thr Ala 315
Glu Thr:
Glu Gin Phe
Asn Ser1 325
His Gin
Asp Trp Leu 340
Val Asp Leu Pro Ala 355
Thr
Lys
Pro
Tyr Gly
Arg Val 330
Lys Glu 345
Val Ser Val
Gin Phe Ser Trp
Arg Pro Lys Glu 320
Leu Pro lie Gin 335
工le Thr Arg 360
Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn 350
Thr lie Ser Lys Ala lie Gly 365
Gin Ser Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Pro Ala Glu Glu370 375 380
Leu Ser Arg Ser Lys Val Thr Leu Thr Cys Leu Val工le Gly Phe Tyr 385 390 395 400
Pro Pro Asp lie His Val Glu Trp Lys Ser Asn Gly Gin Pro Glu Pro 405 410 415
Glu Asn Thr Tyr Arg Thr Thr Pro Pro Gin Gin Asp Val Asp Gly Thr 420 425 430
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ala Val Asp Lys Ala Arg Trp Asp His 435 440 445
Gly Asp Lys Phe Glu Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His 450 455 460
Tyr Thr Gin Lys Ser lie Ser Lys Thr Gin Gly Lys 465 470 47S
<211> 1523 <212> DNA <213> Sus sp.
<400> 4 atggagtttcggctgaactgggtggtcttgtttgctctcttacaaggtgtccagggtgag60
gagaagctggtggsgtctggaggaggcctggtgcagcctggggggtctctgaaactctcc120
tgtgtcggctctggattcaccttcagtagtacctatattcactgggtccgccaggctcca180
gggaagggactggagtggctggcaggtctctacagtagtactacgccgacctactactca240
gactctgtgaagggccggttcgacatctccagagaggacgcccagaacacggcctatcta300
caaatgaacggcctg汪aasccgaiagscacggcccgctactactgtggsaaggtaccaaac360
ctgcgtggtgacctgcaggtacttgctcagaaagttgctcgtactctgccatggggccca420
ggcgttga^gtcgtcgtgtcctcagcccccaagacggrccccatcggtctaccctctggcc480
ccctgcggcagggacacgtctggccctaacgtggccttgggctgcctggcctcaagctac540
ttccccgagccagtgaccatgacctggaa_ctcgggcgccctgaccagtggcgtgcacacc600
ttcccatccgtcctgcagccgtcagggctctactccctcagcagcatggtgaccgtgccg
gccagcagcctgtccagcaatgcaatgtcaaccacccggcC5LCC3CC3CC720
aaggtggacaagcgtgttggccgcaaacatgtcccatstgcccaggctgt780
gaagtggccgggccctcggtcttcatcttccctcca^33cccaaggacaccctcatgatc840
tcccagacccccgsggtcacgtgcgtggtggtggacgtcagcaaggagcacgccgaggtc900
cagttctcctggt3cgtggscggggtagaggtgcacacggccgagacgagaccaaaggag960
gaigcagttca acagcaccta ccgtgtggtc ctgaagggga aggagttcaa gtgcaaggtc aggaccatct ccaaggctat agggcsgagc cccgccgagg agctgtccag gagcaaagtc ccacctgaca tccatgttga gtggaagagc cgcaccaccc cgccccagca ggacgtggac gtggacaagg caagatggga ccatggagac ctgcacaacc actacaccca gaagtccatc tgcaccccac gtgctctcgg gtcccgcgag gtcccgggcc agcatgaaat aaa
agcgtcctgc ccatccagca ccaggactgg 1020
aacaacg仁ag acctcccagc ccccatcacg 1080
cgggagccgc aggtgtacac cctgccccca 1140
acgctaacct gcctggtcat tggcttctac 1200
aacggacagc cggagccaga gaacacatac 1260
gggaccttct tcctgtacag caaactcgcg 1320
aaatttgagt gtgcggtgat gcacgaggct 1380
tccaagactc agggtaaatg agccacccgc 1440
ctcgcctgag ccccagcgct gtgtacatac 1500
1523
<210> 5 <211> 1089 <212> DNA <213> Sus sp.
<400> 5
gtaccaaacc tgcgtggtga cctgcaggta cgtcacaaac aggaaatcgt agctccagta tcggtctacc ctctggcccc ctgcggcagg tgcctggcct caagctactt ccccgagcca accagtggcg tgcacacctt cccatccgtc aigcaitggtga ccgtgccggc cagcagcctg cacccggcca ccaccaccaa ggtggacaag cccatatgcc caggctgtga agtggccggg aaggacaccc tcatgaitctc ccagaccccc aaggagcacg ccgaggtcca gttctcctgg gagacgagac caaaggagga gcagttcaac atccagcacc aggactggct gaaggggaag ctcccagccc ccatcacgag gaccatctcc gtgtacaccc tgcccccacc cgccgaggag ctggtcattg gcttctaccc atcctgacatc gagccagaga acacataccg caccaccccg ctgtacagca aactcgcggt ggacaaggca
cttgctcaga aagttgctcg tactctgcca 60
aaacagaagt tggcccccaa gacggcccca 120
gacgtgtctg gccctaacgt ggccttgggc 180
gtgaccgtga cctggaactc gggcgccctg 240
ctgcagccgt cagggctcta ctccctcagc 3 00
tccagcaaga gctacacctg caatgtcaac 360
cgtgttggaa tacaccagcc gcaaacatgt 420
ccctcggtct tcatcttccc tccaaaaccc 48 0
gaggtcacgt gcgtggtggt ggacgtcagc 54 0
tacgtggacg gggtagaggt gcacacggcc 600
agcacctacc gtgtggtcag cgtcctgccc 660
gagttcaagt gcaaggtcaa caacgtagac 720
aaggctat3g ggcaigagccg ggagccgcag 780
ctgtccagga gcaaagtcac gctaacctgc 840
catgttgagt ggaagagcaa cggacagccg 900
ccccagcagg acgtggacgg gaccttcttc 960
agatgggacc atggagacaa atttgagtgt 1020
gcggtgatgc acgaggctct gcacaaccac tacacccaga agtccatctc caagactcag 1080 ggtaaa仁ga 1089
<210> 6 <211> 3S2 <212> PRT <213> Sus sp.
<400> 6
Val Pro Asn Leu Arg Gly 5
Arg Thr Leu Pro Arg His 20
Asp Leu Gin 10
Val
Leu Ala Gin Lys Val Ala 15
Lys Gin 25
Glu工le
Lys Leu Ala Pro Lys Thr Ala Pro Ser Val 35 40
Gly Arg 50
Ser Tyr 65
Asp Val Ser Gly Pro Asn Val Ala 55 60
Phe
Thr Ser Gly Tyr Ser
Pro Glu 70
Val His 85
Pro Val Thr
Val Thr 75
Val Ala 30
Tyr Pro 45
Leu Gly Trp Asn
Thr Phe
Pro Ser 90
Val Leu Gin
Pro Val Lys Gin Leu Ala Pro Cys Cys Leu Ala Ser
Ser Gly Ala Leu 80
Pro Ser Gly lieu 95
Leu Ser Ser 100
Met Val Thr Val Pro 105
Ala Ser Ser Leu Ser Ser 110
lays Ser* Tyr 115
Asp Lys 130
Gly Cys 145
Lys Asp Val Asp
Arg
Thr
Thr Cys Val Gly
Asn
Val Asn 120
His Pro
Ala Thr 125
lie
135
His Gin Pro
Gin Thr 140
Cys
Val Ala Gly 150
Pro Ser
Val Phe 155
lie Phe
Leu Met 165
lie
Ser Gin Thr 170
Pro Glu Val
Val Ser 180
Lys Glu
Asp Gly Val 195
Phe Asn Ser 210
Asp Trp Leu 225
Leu Pro Ala
Glu Val His
His Ala 185
Thr Ala 200
Glu Val Gin
Phe 190
Glu Thr
Arg Pro
205
Thr Tyr Arg Val Val Ser 215
Val Leu Pro 220
Lys Gly L ys Glu Phe 230
Lys Cys Lys Val 235
Pro工le Thr Arg Thr lie Ser Lys Ala 245 250
Thr Thr Lys Val
Pro lie Cys Pro
Pro Pro Lys Pro 160
Thr Cys Val Val 175
Ser Trp Tyr Val Lys Glu Glu Gin 工le Gin His Gin
Asn Asn Val Asp 240
lie Gly Gin Ser 255Arg Glu Pro Gin 260
Val
Tyr Thr Leu 265
Pro
Pro Pro Ala Glu Glu Leu Ser 270
Arg Ser Lys 275
Val Thr
Asp工le 290
Thr Tyi 305
His Val Glu
Leu Tyr Ser Lys Phe
Leu Thr 280
Trp Lys 295
Arg Thr
Glu
Lys Leu Ala Val 325
Cys Ala Val Met
Cys Leu
Ser Asn
Val工le Gly 285
Gly Gin Pro 300
Thr Pro Pro 310
Gin Gin Asp Val Asp 315
Asp Lys Ala Arg Trp 330
His Glu Ala Leu His
Phe Tyr Pro Pro
Glu Pro Glu Asn
Gly Thr Phe Phe 320
Asp His Gly Asp 335
Asn His Tyr Thr
340 345 350
Gin Lys Ser工le Ser Lys Thr Gin Gly Lys 355 360
<400> 7
<210: <211: <212: <213-
217 PRT
Sus sp.
Asp Ser Gin Thr Val lie Gin Lys Pro 5 10
Gly Thr Val Thr Leu Thr Cys Ala 20 25
工le Asn Tyr Pro Ser Trp Phe Gin 35 40
Thr Val lie Tyr Asn Thr Asn Asn 50 55
Ala工le Ser Phe Ser Leu Gly 15
Phe Ser Ser Gly Ser Leu Thr Gly 30
Arg Thr Pro Gly Gin Pro Pro Gin 45
Arg Pro Thr Gly Val Pro工le Arg
60
Phe Ser Gly Ala工le Ser Gly Asn Lys Ala Ala Leu Thr 工le Thr Gly 65 70 75 80
Ala Gin Ala Lys Asp Glu Ala Asp Tyr Phe Cys Ala Leu Tyr Lys Ser 85 90 95
Ser Ala Gin工le Thr Phe Gly Gly Gly Thr His Leu Thr Val Leu Gly 100 105 110
Gin Pro Lys Ala Ala Pro Thr Val Asn Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu 115 120 125
Glu Leu Gly Thr Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu工le Ser Asp Phe 130 135 140
Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Thr Trp Lys Ala Gly Gly Thr Thr Val 145 150 155 160
Thr Gin Gly Val Glu Thr 165
Tyr Ala Ala Ser Ser Tyx 180
Ser Ser Gly Phe Thr Cys 195
Lys Thr Val Thr Pro Ser
210 215
Thr Lys Pro 170
Leu Ala Leu 185
Gin Val Thr 200
Glu Cys Ala
Ser Lys Gin Ser Asn Asn Lys 175
Ser Ala Ser Asp Trp Lys Ser 190
His Glu Gly Thr工le Val Glu 205
<210> 8 <211> 21S <212> PRT <213> Sus sp.
<400> 8
Asp Ser Gin Thr Val lie 5
Gly Thr Val Thr Leu Thr 20
Gin Glu Pro Ala Met 10
Ser Val Ser Pro Gly 15
Cys Ala 25
Phe Thr Ser
Ser Asn His 35
Leu Val 50
Phe Ser 65
lie
Gly
Ala Gin Ala
Pro Gly Trp
Tyr Arg Thr 55
Ala lie Ser
70
Asn Asp Glu 85
Tyr 40
Gin
Asn Asn
Gly Asn
Gin Thr Pro 45
Arg Pro Thr 60
Lys Ala Ala
75
Ala
Asp Tyr 90
Asn Thr
Tyx Phe 100
Phe Gly Gly Gly Thr 105
Phe Cys Arg Leu
Gly 30
Gly Gly Leu Thr
Ser Val Thr Thr Gin Pro Pro Arg Val Pro Ser Arg
Ser lie Thr Gly 80
Lieu 95
Thr Val 110
Trp Lys Asp Leu Gly Gin
Pro Lys Ala 115
Ala Pro Met
Val Asn 120
Leu
Phe Pro Pro 125
Ser Ser Glu Glu
Leu Gly 130
Pro Gly 145
Thr Asn
Ala Val
Lys Ala 135
Thr Leu Val
Cys Leu 140
Thr Val Thr Trp 150
Lys Ala 155
工le Ser Asp Phe Tyr Gly Gly Thr
Gin Gly Val
Glu Thr 165
Ala Ala
Ser Ser Tyr 180
Ser Gly Phe Thr Cys 195
Thr Lys Pro Ser Lys 170
Leu Ala Leu Ser Ala 185
Gin Val Thr His Glu 200
Gin Ser
Ser
Asp 190
Asn 175
Trp
Gly Thr工le 205
Thr Val Thr 160
Asn Lys Tyr Lys Ser Ser Val Glu Lys
Thr Val Thr Pro Ser Glu Cys Ala
210 215
<210> 9 <211> 216 <212> PRT <213> Sus sp. <400> 9
Asp Ser Gin Thr Val工le 5
Gly Thr Val Thr Val Thr 20
Gin Glu Pro 10
Ala Met
Ser Val 15
Ser Pro Gly
Cys Ala 25
Phe Ser Ser
Gly 30
Ser Val Thr Ser
Ser Asp Tyr 35
Pro Ser Trp Phe Gin Gin 40
Thr Pro 45
Gin
Thr Val 50
Ser Gly 65
工le
Ala
Gin Ala Glu
Tyr Arg Thr 55
Met Ser Gly 70
Asp Glu Ala 85
Arg Tyr
Gin Val 100
Phe Gly
Asn Asn Asp Gly
Lys Lys
Pro
Pro Asp 60
Ala Ser
75
Gly Trp Leu Thr工le
Val
Pro Pro Arg Pro Gly Leu
Thr Gly Ala 80
Tyr Phe 90
Cys Ala Leu
Glu Glu Lys Ser 95
Gly 105
Thar His Leu
Thr Val Leu Gly Gin 110
Pro Lys Ala 115
Ala Pro Thr
Val Asn 120
Phe Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu 125
Leu Gly 130
Pro Gly 145
Thr Asn
Ala Val
Lys Ala 135
Thr Val 150
Thr Leu Val
Cys Leu 140
Thr Trp
Lys Ala 155
Gin Gly Val
Glu Thr Thr 165
Ala Ala
Ser Arg Tyr Leu 180
Ser Gly Phe Thr Cys Gin 195
Thr Val Thr Pro Ser Glu 210 215
Lys Pro Ser Lys 170
Ala Leu Ser Ala 185
Val Thr His Glu 200
Gly
Gin
Ser
工le Ser Asp Phe Tyr
Gly Thr Thr Val Thr 160
Ser Asn Asn Arg Tyr 175
Asp Trp Lys Phe Ser 190
Gly Thr工le Val Glu Lys 205
Cys Ala
:210> 10 :211> 216 :212> PRT :213> Sus sp. :400> 10Asp Ser Gin Thr Val lie
Gly Thr Val Ala Leu 20
Thr
Gin Glu Pro Ala Met Ser Val Ser Pro Gly
10 15
Cys Ala Phe Ser Ser Gly Ser Val Thr Thr
25 30
Ser Asn Tyr Pro Ser Trp Phe Gin Thr 3S 40
Leu 工le 50
Ser Gly 65
Trp Arg Thr Asn Asn Arg Pro 55
Pro Gly 45
Thr Gly 60
Ala
Gin Ala Asn
工le Ser 70
Asp Glu 85
Ala Asn
Val lie Phe 100
Gly Asn Lys Asp Gly
Ala Ala Leu 75
Gin
Val
Thr
Pro Pro Arg Gin Pro Gly Arg Phe
工le Thr Gly Ala 80
Ala
Gly
Tyr Phe 90
Cys Thr Leu
Cys 95
Gly 105
Thr H丄s Leu
Thr Val 110
Ijys Sear Thr Leu Gly Gin
Pro Lys Ala 115
Ala Pro Thr Val Asn Leu 120
Phe Pro Pro 125
Ser Ser Glu Glu
Leu Gly 130
Pro Gly 145
Thr Asn Lys Ala Thr Leu Val 135
Cys Leu 140
Ala
Gin Gly Val
Val Thr Val 150
Glu Thr Thr 165
Thr Trp Lys
Lys Ala 155
工le Ser Asp Phe Tyr Gly Gly Thr
Ala Ala
Ser Arg Tyr Leu 180
Ala
Pro Ser Lys 170
Leu Ser Ala 185
Gin Ser
Asn 175
Ser Gly Phe Thr Cys Gin 195
Thr Val Thr Pro Ser Glu 210 215
Val Thr His Glu 200
Cys Ala
Ser Asp Trp 190
Gly Thr工le 205
Thr Val Thr 160
Asn Arg Tyr Lys Phe Ser Val Glu Lys
<210〉 11 <211> 80S <212> DNA <213> Sus sp.
<400> 11
gtgccaaggt tgcatgcctg caggtcgact ctaaagaggc cccttcccaa aattgtcccc ctcctccctg tcggctcagg ggtggattct ttttctcttg gagggaccgt cacactcacc attaactacc ctagctggtt ccagcggaca
agtacggggg gggggggggg gggcaggagg 60
accatggcct gaacggtgct tctgatcgrgg 12 0
caaactgtga tccaaaaacc ggcaatctct 180
tgtgccttta gctctgggtc actcactggt 240
ccaggccagc ctcctcaaac tgttatctac 300accgcccgactggggtccccattcgcttctctggagccatctctgggaac360
aaagccgccctcaccatcacgggggcccaggctaaggacgaggccgactacttctgtgct420
ctgtataaaagtagcgctcagattacgttcggcggtgggacccatctgaccgtcctcggt480
cagcccaaggccgctccc3Cggtcaacctcttcccgccctcctctgaggagctcggcacc540
aacaaggccaccctggtgtgtctaataagtgacttctacccgggcgccgtgacggtgacc600
tggaaggcsggcggcaccaccgtcacccagggcgtggagaccsccaeigccctcgaaacag"0
agtscgcggcC3gcagct3cctggccctg仁ccgccagtgactgga33tct720
tccagcggc仁tcacctgccaggtcacccacgaggggaccattgtggagaagacagtgacg780
ccctccgagtgcgcctaggg3tCCC805
<210> 12 <211> 751 <212> DNA <213> Sus sp. <400> 12
gggggggggctgaggaggccgcgtcccaagattgtccccaccatggcctgaacggtgctt60
ctg3tcgggctcctcgctgtcggctcaggggtggattctcaa^ctgtgatccaggagccg120
gcgatgtcagtgtctcctggagggaccgtcacactcacctgtgcctttac3tctgggtca180
gtcactactagtaaccaccccggctggtacceigcagscaiccaggccagcctccccgsctg240
gtgatttacaggacaa^caaccgcccgactggggtccccagtcgcttctctggsgccaitc300
tctgggaacaaagccgccctcagcatcacgctaatgacgaggccgactat360
ttctgtactctgtggaaagataacacsit3ttttttcggcggtgggacccg仁ctgaccgtc420
ctcggtcagcccaaggccgctcccatggtcaatctcttcccgccctcctctgaggagctc480
ggcaccaacaaggccaccctggtgtgtctaataagtgacttctacccgggcgccgtgacg540
gtgacctggaaggcaggcggcaccaccgtcacccagggcgtggagaccaccaagccctcg600
acaacaagtacgcggccagceigctacctggccctgtccgccagtgactgg660
aa^tcttcca^gcggcttcacctgccaggtc3cccacgaiggggscc3ttgtggagaagaca720
gtgacgccctccgagtgcgcctsgggstccc751
<210> 13 <211> 657 <212> DNA <213> US sp. <400> 13
gtggattctc agactgtgat ccaggagccg gcgatgtcag tgtctcctgg agggaccgtc 60acag仁cacct gtgcctttag ctctgggtca gtcactagta gtgactaccc aagctggttc 120
cagcagacac caggccagcc tcctcgaact gtcatctaca gaacaaacaa gccgcccgac 180
tgggtcccag gtctctctgg agccatgtct gggaacaaag cgtccctcac catcacgggg 240
gcccaggctg aggacgaggc tgactacttc tgtgctctgg aggaaaagtc acggtatcag 3 00
gttttcggcg gtgggaccca tttgaccgtc ctcggtcagc ccaaggccgc tcccacggtc 360
aacttcttcc cgccctcctc tgaggagctc ggcaccaaca aggccaccct ggtgtgtcta 42 0
ataagtgact tctacccggg cgccgtgacg gtgacctgga aggcaggcgg caccsiccgtc 480
acccagggcg tggagaccac caagccctcg aaacagagca aicaacaggta cgcggccagc 540
aggtacctgg ccctgtccgc cagtgactgg aaattctcca gcggcttcac ctgccaggtc 600
acccacgagg ggaccattgt ggagaagaca gtgacgccct ccgagtgcgc ctaggga 657
<210> 14 <211> 687 <212> DNA <213> Sus sp.
<400> 14
cctggactcc tctctcctgt tcgggtggat tcagtgtctc ctggagggac cgtcgcactc accagtaact accccagctg gttccagaag tggagaacaa acaaccgccc gactggggtc aacaaagccg ccctcaccat cacgggggcc actc亡gtgta aaagtactgc taatgtaatt ggtcagccca aggccgctcc cacggtcaac accaacaagg ccaccctggt gtgtctaata acctggaaag caggcggcac caccgtcacc cagagcaaca acaggtacgc ggccagcagg ttctccagcg gcttcacctg ccaggtcacc acgccctccg agtgcgccta gggacac
tctcagactg tgatccagga gccggcgatg 60
acctgtgcct ttagctctgg gtcagtcact 120
acaccaggcc agcctccccg acagctgatc 180
cccggtcgct tctctggagc catctctggg 240
caggctaatg acgaggccga ctacttttgt: 3 00
ttcggcggtg ggacccatct gaccgtcctc 360
ctcttcccgc cctcctctga ggagctcggc 420
agtgacttct acccgggcgc cgtgacggtg 480
cagggcgtgg agacaaccaa gccctcgaaa 540
tacctggccc tgtccgccag tgactggaaa 600
cacgagggga ccattgtgga gaagacagtg 660
687
<210> 15
<211> 28
<212> DNA
<213〉 Sus sp.
<400> 15
gacgctcgag tcatcattta ccctgagt 28
<210> 16 <211> 28 <212> DNA <213> Sus sp. <400> 16
agctaagctt gcccccaaga cggcccca 28
<210> 17 <211> 19 <212> DNA <213> Sus sp. <400> 17
atgccatatg gtaccaaac 19
<210> 18 <211> 19 <212> DNA <213> Sus sp. <400> 18
atgcaagctt caacttctg 19
<210> 19 <211> 14 <212> PRT <213> Sus sp. <400> 19
Arg His Lys Gin Glu工le Val Ala Pro Val Lys Gin Lys Leu 5 10
<210> 20 <211> 42 <212> DNA <213> Sus sp.
<400> 20
cgtcacaaac aggaaatcgt agctccagta aaacagaagt tg 42
<210> 21
<211> 60
<212> DNA
<213> Sus sp.
<400> 21gtaccaaacc tgcgtggtga cctgcaggta cttgctcaga aagttgctcg tactctgcca 60
<210> 22
<211> 102
<212> DNA
<213> Sus sp.
<400> 22
gtaccaaacc tgcgtggtga cctgcaggta cttgctcaga aagttgctcg tactctgcca 60 cgtcatcaaac aggaaatcgt agctccagta aaacagaagt tg 10權(quán)利要求
1.豬口蹄疫疫苗，其中所述疫苗可引發(fā)抗FMD的免疫系統(tǒng)應(yīng)答，所述疫苗具有FMDV表位之cDNA構(gòu)建體或其蛋白質(zhì)對(duì)應(yīng)物。
2. 權(quán)利要求l所述的疫苗，其中所述疫苗包括蛋白質(zhì)并具有將得 自FMDV的肽表位移植到IgG抗體CDR環(huán)的構(gòu)建體。
3. 權(quán)利要求2所述的疫苗，其中所述疫苗是抗原化抗體疫苗，所 述抗原化抗體疫苗利用豬IgG蛋白作為FMDV表位的載體。
4. 權(quán)利要求3所述的疫苗，其中所述疫苗利用IgG蛋白作為 FMDV表位的載體，所述FMDV表位被插入到IgG重鏈和輕鏈的CDR2 和CDR3區(qū)域內(nèi)。
5. 權(quán)利要求3所述的疫苗，其中所述疫苗利用與IgG重鏈恒定區(qū) 相連接的串聯(lián)重復(fù)的FMDV表位。
6. 權(quán)利要求1所述的疫苗，其中所述疫苗是裸露的DNA疫苗， 所述裸露的DNA疫苗利用IgG cDNA基因作為FMDV表位的載體。
7. 權(quán)利要求6所述的疫苗，其中所述疫苗將FMDV表位DNA序 列移植到豬IgG重鏈和輕鏈cDNA的CDR2和CDR3區(qū)域內(nèi)。
8. 權(quán)利要求6所述的疫苗，其中所述疫苗利用與IgG重鏈恒定區(qū) cDNA相連接的FMDV表位DNA序列。
9. 權(quán)利要求4所述的疫苗，其中IgG的輕鏈包括容納FMDV表位 的CDR2和CDR3區(qū)域。
10.權(quán)利要求9所述的疫苗，其中FMDV表位攜有FMDV或其毒 株衍生物的免疫原性。
11.權(quán)利要求4所述的疫苗，其中所述IgG輕鏈可具有下列4種 氨基酸序列中的一種PIGL1序列<sequence>see original document page 3</sequence>PIGL2序列<sequence>see original document page 3</sequence>PIGL4序列<sequence>see original document page 3</sequence>
12.權(quán)利要求7所述的疫苗，其中IgG輕鏈可具有下列之一的基因密碼<formula>see original document page 4</formula>721 GTGACGCCCT CCGAGTGCGC CTAGGGATCC CD. PIGL3序列 座位 'PPL2 657 bp堿基數(shù) 139 A 211 C188 G119 T來(lái)源1GTGGATTCTCAGACTGTGATCCAGGAGCCGGCGATGTCAG TGTC"TCCTGG AGGGACCGTC61ACAGTCACCTGTGCCTTTAGCTCTGGGTCA GTCACTAGTA GTGACTACCC AAGCTGGTTC121CAGCAGACACCAGGCCAGCCTCCTCGAACTGTCATCTACA GAACAAACAA GCCGCCCGAC181TGGGTCCCAGGTCTCTCTGGAGCCATGTCTGGGAACAAAG CGTCCCTCAC CATCACGGGG241GCCCAGGCTGAGGACGAGGCTGACTACTTCTGTGCTCTGG AGGAAAAGTC ACGGTATCAG301GTTTTCGGCG GTGGGACCCA TTTGACCGTCCTCGGTCAGC CCAAGGCCGC TCCCACGGTC361AACTTCTTCC CGCCCTCCTCTGAGGAGCTCGGCACCAACA AGGCCACCCT GGTGTGTCTA421ATAAGTGACTTCTACCCGGG CGCCGTGACGGTGACCTGGA AGGCAGGCGG CACCACCGTC481ACCCAGGGCG TGGAGACCACCAAGCCCTCG AAACAGAGCA ACAACAGGTA CGCGGCCAGC541AGGTACCTGGCCCTGTCCGCCAGTGACTGGAAATTCTCCA GCGGCTTCAC CTGCCAGGTC601ACCCACGAGGGGACCATTGTGGAGAAGACA GTGACGCCCT CCGAiSTGCGC CTAGGGAD. PK L4序列座位 PPL4 687 bp DNA堿基數(shù) 144 A 230 C 186 G127 T來(lái)源1CCTGGACTCCTCTCTCCTGTTCGGGTGGATTCTCAdACTG TGATCCAGGA GCCGGCGATG 61TCAGTGTCTC CTGGAGGGACCGTCGCACTCACCTGTGCCT TTAGCTCTGG GTCAGTCACT121ACCAGTAACT ACCC;CAGCTGGTTCCAGAAGACACCAGGCC AGCCTCCCCG ACAGCTGATC181TGGAGAACAA ACAACCGCCCGACTGGGGTCCCCGGTCGCT TCTCTGGAGC CATCTCTGGG241AACAAAGCCGCCCTCACCATCACGGGGGCCCAGGCTAATG ACGAGGCCGA CTACTTTTGT301ACTCTGTGTA AAAGTACTGCTAATGTAATTTTCGGCGGTG GGACCCATCT GACCGTCCTC361GGTCAGCCCA AGGCCGCTCCCACGGTCAACCTCTTCCCGC . CCTCCTCTGA GGAGCTCGGC421ACCAACAAGGCCACCCTGGTGTGTCTAATA AGTGACTTCT ACCCGGGCGC CGTGACGGTG481ACCTGGAAAGCAGGCGGCACCACCGTCACC CAGGGCGTGG AGACAACCAA GCCCTCGAAA541CAGAGCAACA ACAGGTACGCGGCCAGCAGG TACCTGGCCC TGTCCGCCAG TGACTGGAAA601TTCTCCAGCGGCTTCACCTGCCAGGTCACC CACGAGGGGA CCATTGTGGA GAAGACAGTG661 ACGCCCTCCG AGTGCGCCTA GGGACAC
13. 權(quán)利要求3所述的疫苗，其中FMDV表位具有下列氨基酸序列RHKQEIVAPVKQKL 。
14. 權(quán)利要求6所述的疫苗，其中FMDV表位具有下列cDNA序列CGTCACAAACAGGAAATCGTAGCTCCAGTAAAACAGAAGTTG
15. 權(quán)利要求5所述的疫苗，其中所述IgG重鏈具有下列cDNA 序列，其中黑體序列是FMDV序列1ATGGAGTTTC GGCTGAACTG TACAAGGTGT CCAGGGTGAG61 GAGAAGCTGG TGGAGTCTGG GGGGGTCTCT GAAACTCTCC121TGTGTCGGCT CTGGATTCAC ACTGGGTCCG CCAGGCTCCA181 GGGAAGGGAC TGGAGTGGCT CTACGCCGAC CTACTACTCA241 GACTCTGTGA AGGGCCGGTT CCCAGAACAC GGCCTATCTA301 CAAATGAACG GCCTGAAAAC ACTGTGGAAA GCGTCACAAA361 CAGGAAATCG TAGCTCCAGT CAGGCGTTGA AGTCGTCGTG421 TCCTCAGCCC CCAAGACGGC CCCCCTGCGG CAGGGACACG481 TCTGGCCCTA ACGTGGCCTT ACTTCCCCGA GCCAGTGACC541 ATGACCTGGA ACTCGGGCGC CCTTCCCATC CGTCCTGCAG601 CCGTCAGGGC TCTACTCCCT CGGCCAGCAG CCTGTCCAGC661 AAGAGCTACA CCTGCAATGT CCAAGGTGGA CAAGCGTGTT721 GGAATACACC AGCCGCAAAC ATGTCCCATA TGCCCAGGCT GTGAAGTGGC CGGGCCCTCG.781 GTCTTCATCT TCCCTCCAAA ACCCAAGGAC ACCCTCATGA TCTCCCAGAC CCCCGAGGTC841 ACGTGCGTGG TGGTGGACGT CAGCAAGGAG CACGCCGAGG TCCAGTTCTC CTGGTACGTG901 GACGGGGTAG AGGTGCACAC GGCCGAGACG AGACCAAAGG AGGAGCAGTT CAACAGCACC961 TACCGTGTGG TCAGCGTCCT GCCCATCCAG CACCAGGACT GGCTGAAGGG GAAGGAGTTC1021 AAGTGCAAGG TCAACAACGT AGACCTCCCA GCCCCCATCA CGAGGACCAT CTCCAAGGCT1081 ATAGGGCAGA GCCGGGAGCC GCAGGTGTAC ACCCTGCCCC CACCCGCCGA GGAGCTGTCC1141 AGGAGCAAAG TCACGCTAAC CTGCCTGGTC ATTGGCTTCT ACCCACCTGA CATCCATGTT1201 GAGTGGAAGA GCAACGGACA GCCGGAGCCA GAGAACACAT ACCGCACCAC CCCGCCCCAG1261 CAGGACGTGG ACGGGACCTT CTTCCTGTAC AGCAAACTCG CGGTGGACAA GGCAAGATGG1321 GACCATGGAG ACAAATTTGA GTGTGCGGTG ATGCACGAGG CTCTGCACAA CCACTACACC1381 CAGAAGTCCA TCTCCAAGAC TCAGGGTAAA TGAGCCACCC GCTGCACCCC ACGTGCTCTC1441 GGGTCCCGCG AGCTCGCCTG AGCCCCAGCG CTGTGTACAT ACGTCCCGGG CCAGCATGAA1501ATAAA 。
16.權(quán)利要求5所述的疫苗，其中所述重鏈具有下列氨基酸序列， 其中黑體序列是FMDV表位區(qū)域MEFRLNWWL FALLQGVQGE EKLVESGGGL VQPGGSLKLS CVGSGFTFSS TYIHWVRQAP GKGLEWLAGL YSSTTPTYYS DSVKGRFDIS REDAQNTAYL QMNGUCTEDTARYYCGKRHKQEIVAPVKQK LWGPGVEVVV SSAPKTAPSVYP LAPCGRDVSG PNVALGCLAS SYFPEPVTVT WNSGALTSGV HTFPSVLQPSGLYSLSSMVT VPASSLSSKS YTCNVNHPAT TTKVDKRVGI HQPQTCPICP GCEVAGPSVF IFPPKPKDTL MISQTPEVTC WVDVSKEHA EVQFSWYVDG VEVHTAETRP KEEQFNSTYRWSVLPIQHQ DWLKGKEFKC KVNNVDLPAP ITRTISKAIG QSREPQVYTL PPPAEELSRSKVTLTCLVIG FYPPDIHVEW KSNGQPEPENSISKTQGK
17.權(quán)利要求1、 2或6所述的疫苗，其中所述疫苗是使用移植 制備的。
18.豬口蹄疫疫苗，其中所述疫苗可引發(fā)抗FMD的免疫系統(tǒng)應(yīng)答， 所述疫苗具有FMDV表位之cDNA構(gòu)建體或其蛋白質(zhì)對(duì)應(yīng)物，所述蛋 白質(zhì)形式的疫苗是通過(guò)將FMDV表位移植到豬IgG的CDR2和CDR3 區(qū)域中制備的。
19. 權(quán)利要求l、 17或18所述的疫苗，其中所述疫苗是DNA形 式的疫苗，該疫苗是通過(guò)將FMDV肽表位的cDNA插入到豬IgG基因 的CDR區(qū)域內(nèi)以構(gòu)建DNA質(zhì)粒，然后克隆質(zhì)粒以表達(dá)而產(chǎn)生的。
20. 豬口蹄疫疫苗，其中所述疫苗可引發(fā)抗FMD的免疫系統(tǒng)應(yīng)答， 所述疫苗具有FMDV表位之cDNA構(gòu)建體或其蛋白質(zhì)對(duì)應(yīng)物，所述疫 苗為蛋白質(zhì)形式的疫苗，可通過(guò)注射到豬肌肉組織中給藥。
21. 權(quán)利要求18、 19或20所述的疫苗，其中所述疫苗是DNA形 式的疫苗，可通過(guò)注射到豬表皮中給藥。
22. 制備豬口蹄疫疫苗的方法，所述方法包括將得自FMDV的表 位移植到豬抗體CDR環(huán)的步驟，其中所述FMDV肽表位是通過(guò)PCR 由FMDV的VP1基因克隆得到的。
23. 權(quán)利要求22所述的制備疫苗的方法，其中所述PCR法是重疊 PCR法，使用該方法將FMDV肽表位插入到豬免疫球蛋白重鏈和輕鏈 基因的CDR區(qū)域內(nèi)，其中重鏈和輕鏈基因是克隆至哺乳動(dòng)物或昆蟲(chóng)細(xì) 胞表達(dá)載體以供表達(dá)的抗原化抗體基因。
全文摘要
提供了治療豬口蹄疫的疫苗，此疫苗是將得自FMDV的肽表位移植到豬抗體CDR環(huán)而產(chǎn)生的抗原化抗體疫苗?？赏ㄟ^(guò)PCR由FMDV的VP1基因克隆FMDV肽表位。使用重疊的PCR法將FMDV肽表位插入到豬免疫球蛋白重鏈和輕鏈基因的CDR區(qū)域內(nèi)，將所得的抗原化抗體基因克隆至哺乳動(dòng)物表達(dá)載體。將質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至CHO或骨髓瘤細(xì)胞，選擇穩(wěn)定的轉(zhuǎn)染子細(xì)胞系以大量產(chǎn)生所需的蛋白質(zhì)疫苗。
文檔編號(hào)A61K39/00GK101342368SQ200810090580
公開(kāi)日2009年1月14日 申請(qǐng)日期1999年9月30日 優(yōu)先權(quán)日1999年4月15日
發(fā)明者雍 謝 申請(qǐng)人:香港科技大學(xué)