專利名稱：：葛根素及其衍生物在制藥中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及葛根素及其衍生物的用途，特別涉及在制藥領(lǐng)域中的用途。
背景技術(shù)：
：常用非甾體抗炎類藥物(NSAIDs)在臨床上應(yīng)用非常廣泛，用來治療各種炎性疾病，包括骨關(guān)節(jié)炎，風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，感冒、創(chuàng)傷等引起的發(fā)燒疼痛，心血管、癌癥、肝炎等疾病。該類藥物具有相同的作用機(jī)制，即抑制合成前列腺素所需要的環(huán)氧化酶(COX)。COX可分為結(jié)構(gòu)型COX-l和誘導(dǎo)型COX-2兩種，新近研究表明，可能存在變異型COX-3(COX-l的同分異構(gòu)體){皮治兵，蔣宗濱。COX-2抑制劑臨床研究新進(jìn)展[J].中國疼痛醫(yī)學(xué)雜志，2006，12(5):297.}。COX-l主要存在于胃腸壁、腎臟和血小板中，具有保護(hù)正常生理功能的作用，COX-2主要存在于炎癥組織中。NSAIDs的鎮(zhèn)痛機(jī)制主要是抑制COX-2的活性，而一旦COX-l的正常功能受到抑制，就會(huì)產(chǎn)生胃部不適、潰瘍、穿孔、血凝障礙、一過性腎功能損傷等不良反應(yīng)。因此，一個(gè)理想的抗炎鎮(zhèn)痛藥，應(yīng)選擇性作用于COX-2，而對(duì)COX-l的抑制作用相對(duì)較弱。但是，目前已有的COX-2選擇性抑制劑也具有較大的毒副反應(yīng)，不能滿足臨床需要。近年上市的新型選擇性COX-2抑制劑品種較多，如羅非昔布(萬絡(luò))、塞來昔布(西樂葆)、尼美舒利和美洛昔康等。這些新型COX-2抑制劑大大降低了胃腸道反應(yīng)，越來越受到臨床的青睞，但也增加了發(fā)生新的不良反應(yīng)的危險(xiǎn)性，如長期使用可導(dǎo)致心血管病的風(fēng)險(xiǎn)，常見臨床癥狀有心悸、高血壓、下肢水腫等。選擇性COX-2抑制藥羅非昔布在臨床試驗(yàn)中，羅非昔布25mg，連續(xù)使用18個(gè)月后發(fā)生嚴(yán)重心腦血管事件(包括心肌梗死和腦卒中)的風(fēng)險(xiǎn)顯著增加，心肌梗死和腦卒中的發(fā)病率是3.5%。因此，美國默克制藥公司宣布于2004年10月1日起在全球自愿撤回該藥。塞來昔布具有心血管病的危險(xiǎn)、出血危險(xiǎn)、非致命性心肌梗死和非致命性休克。伐地昔布也有增加心臟手術(shù)后循環(huán)系統(tǒng)危險(xiǎn)的傾向。伐地昔布和塞來昔布是美國上市僅有的兩個(gè)選擇性COX-2抑制藥。NSAIDs的不良反應(yīng)較多，胃腸道反應(yīng)、血液系統(tǒng)反應(yīng)及肝腎毒性較常見。比較隱匿的不良反應(yīng)，如使用復(fù)方對(duì)乙酰氨基酚片(II)(散利痛)引起繼發(fā)性頭痛，使用對(duì)乙酰氨基酚片(力克舒)引起軀體依賴性等，應(yīng)引起臨床關(guān)注。葛根素(Puemrin)是中藥葛根(PuerarialobataL.)的主要有效成分，臨床上用于治療心肌缺血、心絞痛等病癥。由于葛根素在水和有機(jī)溶劑中溶解度小，口服生物利用度差，難于制成理想的制劑。通過結(jié)構(gòu)修飾，制備具有良好溶解性能和高生物利用度葛根素衍生物，丌發(fā)新的葛根素衍生物藥物，是個(gè)很好的課題。葛根素的衍生物通式如下:其中R,，R2，R3分別為H或含14個(gè)碳的?；?。其中2"，3"，4",6"—四乙?；鸶?以下稱4Ac)在同類物質(zhì)中使用效果最好。結(jié)構(gòu)式如下--KoAcOAc本發(fā)明人曾公丌了葛根素及其衍生物的制備方法和治療心腦血管疾病方面的用途(中國專利申請(qǐng)?zhí)?00410096209.9)。同時(shí)公開了葛根素及其衍生物能明顯降低垂體后葉素引起大鼠心電圖T波的降低，說明其對(duì)心肌具有保護(hù)作用。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供葛根素及其衍生物的新用途，即在制藥中的新應(yīng)用。實(shí)際上，本發(fā)明涉及葛根素及其衍生物作為制備C0X-2選擇性抑制劑的藥中的應(yīng)用。涉及葛根素及其衍生物在作為制備預(yù)防或治療炎癥的藥中的應(yīng)用。本發(fā)明具體地涉及葛根素及其衍生物作為制備預(yù)防或治療骨關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的藥中的應(yīng)用；作為制備預(yù)防或治療肝炎、結(jié)膜炎、心肌炎的藥中的應(yīng)用；作為制備預(yù)防或治療由腫瘤、糖尿病所致繼發(fā)性炎癥的藥中的應(yīng)用；作為制備預(yù)防或治療感冒或創(chuàng)傷所致疼痛病的藥中的應(yīng)用。發(fā)明人經(jīng)過長期的試驗(yàn)研究，葛根素具有抗炎作用。由于葛根素在水和有機(jī)溶劑中溶解度小，口服生物利用度差，難于制成理想的制劑；通過結(jié)構(gòu)修飾，制備具有良好溶解性能和高生物利用度葛根素衍生物，開發(fā)新的葛根素衍生物藥物使用效果顯著。進(jìn)一步研究結(jié)果表明葛根素衍生物對(duì)COX-2具有選擇性抑制作用，具有很好的應(yīng)用前景。葛根素及其衍生物在制備預(yù)防或治療炎癥的藥中的應(yīng)用，所述葛根素及其衍生物可采用含有葛根素及其衍生物的藥物組合物，如葛根提取物，葛根素及其衍生物的環(huán)糊精包合物、磷脂復(fù)合物、脂質(zhì)體等。所選用的藥物組合物可以為任意劑型，一般可選用注射液，注射用粉劑，注射用凍干粉，片劑，雙層片，速崩片，緩控釋片，膠囊劑，口服液，合劑，滴丸劑，軟膠囊，沖劑，顆粒劑，噴霧劑，噴鼻劑，滴眼劑，膏劑，膠布劑，巴布劑等，這些劑型均按常規(guī)方法生產(chǎn)。針對(duì)上述癥狀的葛根素及其衍生物制備的藥劑，根據(jù)不同的劑型選擇口服、注射或者外用，具體用量為每次501000mg，每日12次；優(yōu)選的方案是每次100300mg,每日12次；最優(yōu)選的方案是每次200mg.每日12次。以上均以葛根素及其衍生物的有效量計(jì)。為了更好地理解本發(fā)明的實(shí)質(zhì)，下面將用葛根素和四乙?；鸶氐乃幚碓囼?yàn)及結(jié)果來說明其在制備預(yù)防或治療炎癥方面的制藥領(lǐng)域中的新用途。同樣地，由于葛根素衍生物都具有類似的結(jié)構(gòu)，具有相同的官能團(tuán)，生理活性相同，所以其他葛根素衍生物也能達(dá)到同樣的藥理效果。取葛根素(北京協(xié)和制藥廠，含量99%，批號(hào)20060816)100g于圓底燒瓶中，加2000ml冰醋酸溶解，加入6倍摩爾數(shù)的乙酸酐，室溫下攪拌反應(yīng)6小時(shí)，放置24小時(shí)，減壓回收冰醋酸至500ml，放冷至室溫，倒入5000ml冰水中，攪拌，過濾，殘余物以二氯甲烷溶解，置分液漏斗中，分出二氯甲烷，以無水硫酸鈉脫水，過濾，回收二氯甲烷，得葛根素乙?；a(chǎn)物184g。將100g乙酰化葛根素用500ml二氯甲烷溶解，加入等量1%碳酸氫鈉水溶液，充分振搖30分鐘，用TLC檢查(薄層板為硅膠GF254;展開劑為石油醚和乙酸乙酯按體積比l:2配制)，以出現(xiàn)4Ac斑點(diǎn)為主斑點(diǎn)時(shí)停止反應(yīng)，分出二氯甲垸層，用水洗滌，無水硫酸鈉脫水，過濾，回收二氯甲烷，殘余物加入處理好的硅膠柱進(jìn)行分離，分段收集，得到各種產(chǎn)物，分別以丙酮結(jié)晶，得到純品四乙酰葛根素、五乙酰葛根素、六乙酰葛根素各60g、15g、5g備用。將上述得到的四乙酰葛根素制備成注射劑在無菌操作室內(nèi)稱取50g四乙酰葛根素與500g泊洛沙姆，混勻，加無水乙醇5000ml研磨5分鐘，使其充分溶解。再稱取500g聚山梨酯80加5000ml滅菌注射用水微熱溶解。將兩者混和均勻，低溫回收乙醇，加入滅菌注射用水至5000ml。用1%?；钚蕴汲裏嵩儆媒?jīng)滅菌的(p0.22pm(德國SARTORIUS公司生產(chǎn)的Sartobran-p)的過濾器抽濾；分裝，每瓶5ml。將分裝好的樣品置凍干機(jī)中預(yù)凍12小時(shí)，預(yù)凍溫度控制在-5(TC，開啟真空泵并加熱隔板，整個(gè)凍千過程為70小時(shí)，樣品干燥封口，包裝，全檢，入庫，備用。1、葛根素和四乙?；鸶?4Ac)抗炎試驗(yàn)A、材料與方法a、供試品葛根素注射劑(購自北京協(xié)和制藥廠，批號(hào)20070214)和上述四乙酰葛根素(4Ac)注射劑。供試品l(葛根素含量為02g:5ml，實(shí)驗(yàn)前用5n/。葡萄糖液配制成8.0mg/ml的溶液；)供試品2(4Ac:含量為每支50mg，實(shí)驗(yàn)前用5%葡萄糖液配制成4.0mg/ml的溶液；)陽性對(duì)照藥吲哚美辛片，含量為25mg/片，為重慶科瑞制藥有限責(zé)任公司產(chǎn)品，批號(hào)070702，實(shí)驗(yàn)前將其研磨成粉末，用蒸餾水配制成1mg/ml的混懸液。各藥物給藥劑量按人臨床用藥劑量換算，以60kg人為標(biāo)準(zhǔn)，按照體表面積-劑量換算法計(jì)算大鼠給藥等效劑量。供試品1大鼠用量為40.0mg/kg，給藥容積為0.5ml/100g;供試品2大鼠用量為40.0mg/kg，給藥容積為1ml/100g;吲哚美辛大鼠用量為5mg/kg，給藥容積為0.5ml/100g。b、試劑角叉菜膠，由遼寧省藥物研究所提供，臨用前l(fā)天用研缽研細(xì)后，以無菌生理鹽水配制成1%濃度，放置冰箱過夜。c、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SD大鼠46只，SPF級(jí)，雄性，體重160200克，由本院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。動(dòng)物合格證號(hào)SCXK(渝)20070006。d、主要儀器鼠足容積測定儀，UGOBASILES.R丄,BiologicalResearchApparatusItaly。e、統(tǒng)計(jì)分析各組數(shù)據(jù)均以^is表示，組間比較采用t檢驗(yàn)。數(shù)據(jù)處理在excel及spss10.0軟件中進(jìn)行。B、實(shí)驗(yàn)方法將46只大鼠隨機(jī)分為模型組、陽性藥物對(duì)照組(即吲哚美辛組)和受試藥物組(即供試品1組、供試品2組，共2組)，每組10只(模型組16只)。大鼠足腫脹模型的制備大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)后，先預(yù)防給藥4天，第5天給藥后10分鐘注射注射劑，其他藥物口服30分鐘后予以造模7組大鼠均予1%角叉菜膠液右后足跖皮下注射O.lml以致炎。供試品(1號(hào)40.0mg/kg，2號(hào)40.0mg/kg)，于每天上午10點(diǎn)到11點(diǎn)尾靜脈注射給藥1次；吲哚美辛片5mg/kg于每天上午10點(diǎn)灌胃給予1次，連續(xù)4天，第5天造模前給予1次，造模后4h再給予l次，模型組尾靜脈注射給予相同容積的生理鹽水。觀察大鼠右后足外觀(有無腫脹及腫脹時(shí)間、程度)，肢體活動(dòng)情況等。造模前及造模后lh、2h、4h、6h、8h分別用足容積測定儀測量各組大鼠右后足容積，并按如下公式計(jì)算各時(shí)間點(diǎn)腫脹率。腫脹率(％)=(造模后足容積一造模前足容積)/造模前足容積xlOOn/cC、實(shí)驗(yàn)結(jié)果-a、一般體征各組大鼠在造模后lh內(nèi)，右后足均出現(xiàn)不同程度的腫脹，局部皮溫增高，稍發(fā)紅，大鼠行走遲緩，患側(cè)足爪巻曲，患肢不愿著力負(fù)重，個(gè)別甚至出現(xiàn)跛行，模型組大鼠右后足腫脹程度隨時(shí)間延長逐漸加重，6h左右達(dá)到高峰，8h左右開始減輕。其中吲哚美辛組、4Ac組大鼠局部癥狀較同期模型組明顯減輕(PO.Ol)，葛根素組大鼠局部癥狀較模型組也有所減輕(P<0.05)。b、右后足腫脹率統(tǒng)計(jì)結(jié)果造模后1h(注射給藥后1h，口服給藥后1.5h)，U引噪美辛組大鼠右后足腫脹率較模型組減小(p<0.05)，葛根素、4Ac組大鼠右后足腫脹率與模型組相比有減小趨勢，其中4Ac組具有顯著性(p<0.05)。造模后2h，葛根素、4Ac組和吲哚美辛組大鼠右后足腫脹率較模型組明顯減小(pO.Ol)。造模后4h，4Ac組和吲哚美辛組大鼠右后足腫脹率較模型組明顯減小(pO.Ol)，葛根素組大鼠右后足腫脹率也較模型組有所減小(p<0.05)。造模后6h(第二次給供試品后2h)，4Ac組和吲哚美辛組大鼠右后足腫脹率較模型組明顯減小(pO.Ol)，葛根素組大鼠右后足腫脹率較模型組也有所減小(p<0.05)。結(jié)果見表l。D、結(jié)論本實(shí)驗(yàn)成功復(fù)制了角叉菜膠誘發(fā)的大鼠急性足腫脹模型，并以吲哚美辛為陽性對(duì)照藥，初步研究了葛根素和4Ac兩種供試品對(duì)該模型的防治作用。結(jié)果提示，4Ac40mg/kg對(duì)模型大鼠的足腫脹具有明顯的抑制作用，其作用比葛根素強(qiáng)，與模型組相比，差異顯著，提示葛根素、4Ac具有抗炎作用。表h大鼠右后足腫脹率(x±s，n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>注#:pO.05vs模型組;##:p<0.01VS模型組2、四乙酰基葛根素(4Ac)對(duì)環(huán)氧化酶2(COX-2)活性的選擇性抑制試驗(yàn)前列腺素是炎癥反應(yīng)中最主要的炎癥介質(zhì)之一。環(huán)氧化酶(Cyclooxygenase，COX)是前列腺素生物合成的關(guān)鍵酶，有兩種不同的類型COX-1和COX-2。其中。COX-1是一個(gè)組成酶，與生理性前列腺素合成有關(guān);COX-2則是一個(gè)誘導(dǎo)酶，可以被脂多糖(LPS)等多種因子誘導(dǎo)，與炎癥性前列腺素合成相關(guān)。兩種形式的環(huán)氧化酶的發(fā)現(xiàn)及對(duì)其性質(zhì)的研究.使得選擇性的CQX-2抑制劑成為副作用小的非甾體類抗炎藥(NSAIDs)的重要發(fā)展方向。A材料和方法a、主要試劑COX-1和COX-2純酶制品，美國Cayman公司生產(chǎn)。4Ac純品。消炎痛，美國Cayman公司產(chǎn)品。Tris(base)，Sangon進(jìn)口分裝(Ultrapure)。高鐵血紅素，BTBT進(jìn)口分裝。PGE2放免檢測試劑盒，由天津四方化工有限公司生物試劑部提供。己烷和苯酚，國產(chǎn)分析純。b、實(shí)驗(yàn)方法于lmLTris-HCl緩沖液(100mmol/L，pH8.0)含有高鐵血紅素(1pmol/L)和苯酚(2mmol/L)，加入一個(gè)單位(unit)的COX-1或COX-2，并設(shè)空白對(duì)照。加入4Ac、消炎痛等藥物(對(duì)照管加入lOnlTris-HCl緩沖液)，37°C，預(yù)孵育5min。加入花生四烯酸(100pmo1/L)，37°C，孵育2min后置0°C中中止反應(yīng)。用己烷抽提以除去過多的花生四烯酸，3000r/min離心10min，棄有機(jī)相，-40°。保存冰，放免檢測前列腺素E2(PGE2)含量。B結(jié)果消炎痛對(duì)COX-1和COX-2的活性都有明顯的抑制作用，但其作用沒有選擇性，其對(duì)COX-l和COX-2活性的半數(shù)抑制率(IC50)藥物濃度約為43.3pmol/L和56.2|amol/L，如表2所示。而一定濃度的4Ac(150(Himol/L)對(duì)COX-l的活性的作用較弱，且沒有明顯的量效關(guān)系。由于4Ac所用濃度范圍內(nèi)對(duì)COX-l的活性沒有表現(xiàn)出顯著的抑制作用，也無明顯的量效關(guān)系，所以無法給出其IC50，如表2所示。但4Ac對(duì)COX-2活性的抑制作用較強(qiáng)，其對(duì)COX-2活性的半數(shù)抑制率(IC50)藥物濃度約為52.9|amol/L，如表2所示。表2結(jié)果顯示4Ac對(duì)COX-2具有選擇性抑制作用。表2:4Ac對(duì)COX-l和COX-2抑制作用試驗(yàn)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>從以上試驗(yàn)及結(jié)果，可以得出本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于1、本發(fā)明對(duì)葛根素及其衍生物發(fā)掘了新的醫(yī)藥用途，開辟了一個(gè)新的應(yīng)用領(lǐng)域。2、葛根素及其衍生物使用安全無毒副作用，在預(yù)防、治療各種炎癥方面效果顯著。3、本發(fā)明產(chǎn)品原料易得，可以采用常規(guī)方法制備成口服劑，注射劑等各種劑型，使用方便。4、葛根素衍生物對(duì)COX-2具有選擇性抑制作用，具有很好的應(yīng)用前景，克服了已有的COX-2選擇性抑制劑毒副反應(yīng)大，不能滿足臨床需要的缺陷。5、本發(fā)明人曾公開了葛根素及其衍生物的制備方法和治療心腦血管疾病方面的用途(中國專利申請(qǐng)?zhí)?00410096209.9)。同時(shí)公開了葛根素及其衍生物能明顯降低垂體后葉素引起大鼠心電圖T波的降低，說明其對(duì)心肌具有保護(hù)作用，這一作用說明其在于其發(fā)揮抗炎藥效的同時(shí)對(duì)心臟有保護(hù)作用，克服了目前己上市NSAIDs類產(chǎn)品的心臟毒性和胃腸道不良反應(yīng)，在同類藥物中具有強(qiáng)大的優(yōu)勢。具體實(shí)施例方式下面將描述本發(fā)明的幾個(gè)實(shí)施例，但本發(fā)明的內(nèi)容完全不局限于此。實(shí)施例1葛根素衍生物的制備取葛根素(北京協(xié)和制藥廠，含量99%，批號(hào)20060816)100g于圓底燒瓶中，加2000ml冰醋酸溶解，加入6倍摩爾數(shù)的乙酸酐，室溫下攪拌反應(yīng)6小時(shí)，放置24小時(shí)，減壓回收冰醋酸至500ml,放冷至室溫，倒入5000ml冰水中，攪拌，過濾，殘余物以二氯甲烷溶解，置分液漏斗中，分出二氯甲烷，以無水硫酸鈉脫水，過濾，回收二氯甲烷，得葛根素乙?；a(chǎn)物184g。將100g乙?；鸶赜?00ml二氯甲烷溶解，加入等量1%碳酸氫鈉水溶液，充分振搖30分鐘，用TLC檢査(薄層板為硅膠GF254;展開劑為石油醚和乙酸乙酯按體積比l:2配比配制)，以出現(xiàn)4Ac斑點(diǎn)為主斑點(diǎn)時(shí)停止反應(yīng)，分出二氯甲烷層，用水洗滌，無水硫酸鈉脫水，過濾，回收二氯甲烷，殘余物加入處理好的硅膠柱進(jìn)行分離，分段收集，得到各種產(chǎn)物，分別以丙酮結(jié)晶，得到純品四乙酰葛根素、五乙酰葛根素、六乙酰葛根素各60g、15g、5g。實(shí)施例2葛根素衍生物注射劑制備方法四乙酰葛根素50g泊洛沙姆500g聚山梨酯80500g注射用水加至5000ml制成1000支其中泊洛沙姆為分散體的載體及支架劑，聚山梨酯80為增溶劑。制備工藝(1)配液在無菌操作室內(nèi)稱取50g四乙酰葛根素與500g泊洛沙姆，混勻，加無水乙醇5000ml研磨5分鐘，使其充分溶解。再稱取500g聚山梨酯80加5000ml滅菌注射用水微熱溶解。將兩者混和均勻，低溫回收乙醇，加入滅菌注射用水至5000ml。(2)過濾、中間體檢驗(yàn)及分裝用1%?；钚蕴汲裏嵩?，再用經(jīng)滅菌的(p0.22pm(德國SARTORIUS公司生產(chǎn)的Sartobran-p)的過濾器抽濾；取樣測pH值及含量。分裝，每瓶5ml。(3)將分裝好的樣品置凍干機(jī)中預(yù)凍12小時(shí)，預(yù)凍溫度控制在-5(TC，開啟真空泵并加熱隔板，整個(gè)凍干過程約70小時(shí)，樣品干燥封口，包裝，全檢，入庫，即得。權(quán)利要求1、葛根素及其衍生物在制備COX-2選擇性抑制劑的藥中的應(yīng)用。2、葛根素及其衍生物在制備預(yù)防或治療炎癥的藥中的應(yīng)用。3、葛根素及其衍生物在制備預(yù)防或治療骨關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的藥中的應(yīng)用。4、葛根素及其衍生物在制備預(yù)防或治療肝炎的藥中的應(yīng)用。5、葛根素及其衍生物在制備預(yù)防或治療結(jié)膜炎的藥中的應(yīng)用。6、葛根素及其衍生物在制備預(yù)防或治療心肌炎的藥中的應(yīng)用。7、葛根素及其衍生物在制備預(yù)防或治療由腫瘤、糖尿病所致繼發(fā)性炎癥的藥中的應(yīng)用。8、葛根素及其衍生物在制備預(yù)防或治療感冒或創(chuàng)傷所致疼痛病藥中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明涉及葛根素及其衍生物在制藥領(lǐng)域中的新用途。該產(chǎn)品對(duì)COX-2具有選擇性抑制作用，使用安全無毒副作用，在預(yù)防、治療各種炎癥方面效果顯著。用于預(yù)防或治療骨關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎、肝炎、結(jié)膜炎、心肌炎、由腫瘤、糖尿病所致繼發(fā)性炎癥、感冒或創(chuàng)傷所致疼痛病等疑難病癥。文檔編號(hào)A61K31/7042GK101301303SQ200810069880公開日2008年11月12日申請(qǐng)日期2008年6月25日優(yōu)先權(quán)日2008年6月25日發(fā)明者毅張,徐嘉紅,李恒華,楊大堅(jiān),鐘國躍,黃小平申請(qǐng)人:重慶市中藥研究院