專利名稱：一種從唐松草中提取唐松草總生物堿和總皂苷的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。具體涉及到 -種唐松草生物提取物的制備方法。
背景技術(shù)：
毛茛科唐松草屬(772"http://"^^1.)植物具有抗癌、抗菌消炎、抗病毒、抗心律 失常、抗瘧、免疫調(diào)節(jié)、降壓、清熱解毒、鎮(zhèn)痛、利尿等作用。唐松草屬植物在 民族民間藥用廣泛，我國(guó)有67種該屬植物在15個(gè)民族藥用，是藏藥、蒙藥等眾 多民族藥用的重要組成部分，主要集中于西南地區(qū)，由于具有獨(dú)特的地理和氣候 環(huán)境，我國(guó)本屬植物一半以上為特有種，且資源豐富。唐松草植物中含有生物堿 類成分和三萜皂苷類成分，為唐松草中主要的藥用活性成分，具有抗癌、抑菌、 降壓等作用，使唐松草在藥品、保健品、化妝品等中廣泛應(yīng)用。目前，對(duì)唐松草的研究?jī)H限于唐松草化合物結(jié)構(gòu)的研究，[張現(xiàn)濤汪豪等， 華東唐松草的化學(xué)成分，中國(guó)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2007， 38 (1): 21-24.]公開(kāi)了一種 層析方法用于提取唐松草化合物，但該方法無(wú)法用于生產(chǎn)；蔡應(yīng)繁等公開(kāi)了了[大 孔吸附樹(shù)脂分離純化唐松草總生物堿的工藝研究，中成藥，2007， 29 (11): 1609-1611.]，這些方法的目的是為了從唐松草中提取生物堿，然而采用上述方法 在提取生物堿的同時(shí)也同時(shí)將皂苷提取出來(lái)，現(xiàn)有技術(shù)的提取方法中沒(méi)有進(jìn)一步 將生物堿類成分和皂苷類成分分離的過(guò)程，所以該方法并不完善，提取純度不高， 浪費(fèi)資源。目前，在公開(kāi)文獻(xiàn)中未見(jiàn)報(bào)道同時(shí)提取并分離制備唐松草總生物堿和 總皂苷的方法。發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是，針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)提取方法中對(duì)唐松草進(jìn)行生物堿提取的同時(shí)也提取皂苷，提取純度不高，浪費(fèi)資源的缺陷，提供一種低成本、 高收率、適合于工業(yè)化生產(chǎn)的唐松草總生物堿和總皂苷的制備方法。將唐松草生 物堿類化合物和皂苷類化合物同時(shí)從唐松草中分離出來(lái)，然后進(jìn)一歩分離提取純 度高、雜質(zhì)含量少的唐松草總生物堿和總皂苷類提取物。 本發(fā)明包括以下歩驟 (1)唐松草中加入極性有機(jī)溶劑，混合均勻，過(guò)濾、減壓回收溶劑、真空濃 縮提取唐松草粗提物；(2)在唐松草粗提物中加入適量水，并攪拌成懸浮液，使 懸浮液比重達(dá)到1.0 1.2; (3)懸浮液通過(guò)吸附樹(shù)脂分離柱進(jìn)行吸附，用有機(jī)溶劑 在室溫至50'C對(duì)吸附樹(shù)脂分離柱進(jìn)行解析，或用水在40 100'C進(jìn)行解析，解析 液用量為2-6倍的樹(shù)脂體積，減壓回收溶劑、真空濃縮獲得純化后的唐松草提取 物；(4)在唐松草提取物中加入使懸浮液比重達(dá)到1.0~1.2的水，攪拌成懸浮液， 將懸浮液通過(guò)陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱，收集通過(guò)陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱的流出液，控制溫 度在40 80。C卜濃縮流出液，獲得總皂苷類提取物；(5)釆用1 10。/。的NaOH水 溶液或有機(jī)溶劑水溶液對(duì)陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱進(jìn)行解析獲得離子交換的解析液，用 鹽酸或硫酸酸化解析液，使其達(dá)到pH二5 7，在40 8(TC溫度條件下對(duì)其進(jìn)行濃 縮，獲得總生物堿類提取物。步驟(1)中所述的極性有機(jī)溶劑包括甲醇、乙醇、 丙醇、異丙醇、正丁醇、丙酮或上述溶劑按一定比例組成的混合溶劑，或由這些 溶劑與酸、堿、鹽配成的酸性或堿性溶劑。可優(yōu)先選用乙醇或丙酮作為極性有機(jī)溶劑。提取過(guò)程中比例投料比為原料溶劑=1 : 1 20;減壓回收溶劑的條件為-0.05~0.09 Mpa、 50~65°C。對(duì)吸附樹(shù)脂分離柱進(jìn)行解析的解析液為乙醇、丙醇、 甲醇、丙酮或40 10(TC的水。對(duì)陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱進(jìn)行解析的有機(jī)溶劑水溶液為 乙醇、丙醇、甲醇、丙酮。本發(fā)明公開(kāi)了一種唐松草中總生物堿和總皂苷的提取分離方法，工藝簡(jiǎn)單、成本低、損失小、產(chǎn)品質(zhì)量高，無(wú)環(huán)境污染。提高了唐松草中有效組分群的提取 效率，避免了有效成分的損失。本發(fā)明使用的樹(shù)脂結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，抗污染能力強(qiáng)，易 于再生，對(duì)唐松草中總生物堿和總皂苷有很高的選擇性。提取的唐松草總生物堿 和總皂苷提取物純度高，提高了唐松草中有效組分群的提取效率，避免了有效成分的損失，節(jié)約資源。使用本方法純化的總生物堿含量>50%，總皂苷的含量>30%。
具體實(shí)施方式
從唐松草中提取總生物堿和總皂苷并進(jìn)行分離的具體步驟如下(1 )用粉碎機(jī)將唐松草全草打成粗粉或切成2-3cm短桿放入容器，加入極性有機(jī)溶劑攪拌均勻成為混合物，投料比可為原料溶劑=1 : 1 20;在室溫(可滿足-10 7(TC溫度)下回流1 10h (小時(shí))提取，或水浸提取；所述的極性有機(jī)溶劑包括甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、正丁醇、丙酮或上述溶劑按一定比例組成 的混合溶劑，或由這些溶劑與酸、堿、鹽配成的酸性或堿性溶劑?？蓛?yōu)先選用乙醇或丙酮作為極性有機(jī)溶劑。對(duì)上述混合物提取1 3次，合并提取液，過(guò)濾提取 液，在-0.05 0.09 Mpa、 50 65"C條件下，對(duì)提取液進(jìn)行減壓回收溶劑、真空濃縮 成唐松草粗提物；(2) 將唐松草粗提物加入適量水，將其攪拌成懸浮液，使懸浮液比重達(dá)到1.0 1.2;(3) 采用吸附樹(shù)脂對(duì)懸浮液進(jìn)行分離，將上述步驟(2)所得的懸浮液通過(guò) 吸附樹(shù)脂分離柱，吸附樹(shù)脂可以是HPDIOO， HPD300， HPD700， DlOl， AB-8， XDA-1， H-20， HZ-841型號(hào)屮的一種或幾種混合樹(shù)脂，懸浮液流速可控制在 3~5ml/min，在室溫(最高溫度可控制在5(TC內(nèi))條件下，用有機(jī)溶劑(包括乙 醇、丙醇、甲醇、丙酮等有機(jī)溶劑)作為解析液對(duì)上述吸附樹(shù)脂進(jìn)行解析，或用40 10(TC水作為溶劑進(jìn)行解析，或采用水與有機(jī)溶劑的混合液解析，流速可控制 在0.2-0.6 ml/min，解析液用量為吸附樹(shù)脂體積的2-6倍；在-0.05~0.09 Mpa、 50 65t:條件下，經(jīng)減壓回收溶劑、真空濃縮純化后得到唐松草提取物。(4) 離子交換，在唐松草提取物中加入適量水，將其攪拌成懸浮液，使懸浮 液比重達(dá)到1.0~1.2;將懸浮液通過(guò)陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱(可以是001x7， TS-92, TS-80， D113, DKllO， 724型號(hào)中的一種或幾種混合樹(shù)脂)進(jìn)行離子交換吸附， 可控制流速在0.2-0.6 ml/min，經(jīng)過(guò)離子交換，生物堿類物質(zhì)吸附在樹(shù)脂柱上，皂 苷類化合物隨流出液流出；在40 8(TC溫度條件下對(duì)流出液進(jìn)行濃縮，獲得總皂 苷類提取物；(5) 用1 10。/。的NaOH水溶液或有機(jī)溶劑水溶液(包括乙醇、丙醇、甲醇、 丙酮等有機(jī)溶劑)作為解析液，對(duì)上述步驟(4)的離子交換樹(shù)脂進(jìn)行解析，流 速可控制在0.2-0.6 ml/min，解析液用量為2-6倍的樹(shù)脂體積，獲得含有生物堿類 化合物的解析液；用鹽酸或硫酸酸化到pH=5 7，在40 8(TC溫度條件下對(duì)解析 液進(jìn)行濃縮，獲得總生物堿類提取物。下面通過(guò)具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。 實(shí)施例l稱取唐松草干燥全草粉末lKg，加入10L水?dāng)嚢瑁刂茰囟仍?(TC時(shí)，對(duì)唐 松草粉末進(jìn)行3次提取，每次提取時(shí)間間隔lh，合并提取液，過(guò)濾，濾液在 -0.05 0.09Mpa、 50 65"C條件下，經(jīng)減壓回收溶劑、真空濃縮成唐松草粗提物。 將唐松草粗提物加適量水?dāng)嚢璩蓱腋∫海箲腋∫罕戎剡_(dá)到1.20，采用HPD700 型號(hào)大孔吸附樹(shù)脂對(duì)懸浮液進(jìn)行吸附，富集吸附至飽和，用2倍樹(shù)脂量的水(V/V) 洗去雜質(zhì)，再用5倍樹(shù)脂量(V/V)濃度為50%的甲醇進(jìn)行解析，收集解析液， 控制溫度在50 65'C減壓回收溶劑，殘留物千燥得到唐松草提取物。將唐松草提取物加適量水?dāng)嚢璩蓱腋∫?，使懸浮液比重達(dá)到1.15，采用001x7型號(hào)離子交換 樹(shù)脂，富集吸附至飽和，加入3倍樹(shù)脂量的水(V/V)進(jìn)行水洗，收集含皂苷類 化合物的流出液，再用5倍樹(shù)脂量(V/V)濃度為2X的NaOH-乙醇解析留在樹(shù) 脂柱上的生物堿類物質(zhì)，收集解析液，在65C溫度下減壓回收流出液，得到唐松 草總皂苷提取物；用鹽酸或硫酸酸化到pH二5.6，在5(TC溫度條件下對(duì)解析液進(jìn) 行濃縮，獲得總生物堿類提取物。測(cè)定唐松草總生物堿提取物含量為59%;總皂 苷提取物含量為35%。實(shí)施例2稱取唐松草干燥全草粉末1Kg，加入10L 50%乙醇攪拌，控制溫度在S5。C， 對(duì)唐松草粉末進(jìn)行3次回流提取，每次提取時(shí)間間隔lh，合并提取液，過(guò)濾，濾 液在-0.05~0.09 Mpa、 50 65t:條件下，經(jīng)減壓回收溶劑、真空濃縮成唐松草粗提 物。將唐松草粗提物加適量水?dāng)嚢璩蓱腋∫海箲腋∫罕戎剡_(dá)到1.11，采用AB-8 型號(hào)大孔吸附樹(shù)脂對(duì)懸浮液進(jìn)行吸附，富集吸附至飽和，用2倍樹(shù)脂量的水(V/V) 洗去雜質(zhì)，再用4倍樹(shù)脂量(V/V)濃度為70%的乙醇進(jìn)行解析，收集解析液， 控制溫度在50 65r減壓回收溶劑，殘留物干燥得到唐松草提取物。將唐松草提 取物加適量水?dāng)嚢璩蓱腋∫?，使懸浮液比重達(dá)到1.02，采用TS-80型號(hào)離子交換 樹(shù)脂，富集吸附至飽和，加入3倍樹(shù)脂量的水(V/V)進(jìn)行水洗，收集含皂苷類 化合物的流出液，再用5倍樹(shù)脂量(V/V)濃度為10%的氨-甲醇解析留在樹(shù)脂柱 上的生物堿類物質(zhì)，收集解析液，在58t:溫度下減壓回收流出液，得到唐松草總 皂苷提取物；用鹽酸或硫酸酸化到pH二6.8，在55'C溫度條件下對(duì)解析液進(jìn)行濃 縮，獲得總生物堿類提取物。測(cè)定唐松草總生物堿提取物含量為52%;總皂苷提 取物含量為40%。實(shí)施例3稱取唐松草干燥全草粉末1Kg，加入10L 70%乙醇攪拌，控制溫度在88°C， 對(duì)唐松草粉末進(jìn)行3次回流提取，每次提取時(shí)間間隔lh，合并提取液，過(guò)濾，濾 液在-0.05~0.09 Mpa、 50 65"條件下，經(jīng)減壓回收溶劑、真空濃縮成唐松草粗提 物。將唐松草粗提物加適量水?dāng)嚢璩蓱腋∫?，使懸浮液比重達(dá)到1.09，采用 XDA-1、 AB-8 (1:1)混合型大孔吸附樹(shù)脂對(duì)懸浮液進(jìn)行吸附，富集吸附至飽和， 用2倍樹(shù)脂量的水(V/V)洗去雜質(zhì)，再用5倍樹(shù)脂量(V/V)濃度為50%的乙 醇進(jìn)行解析，收集解析液，控制溫度在50 65"C減壓回收溶劑，殘留物干燥得到 唐松草提取物。將唐松草提取物加適量水?dāng)嚢璩蓱腋∫?，使懸浮液比重達(dá)到1.11， 采用TS-92型號(hào)離子交換樹(shù)脂，富集吸附至飽和，加入3倍樹(shù)脂量的水(V/V) 進(jìn)行水洗，收集含皂苷類化合物的流出液，再用5倍樹(shù)脂量(V/V)濃度為3X的 氨-丙酮解析留在樹(shù)脂柱上的生物堿類物質(zhì)，收集解析液，在56'C溫度下減壓回 收流出液，得到唐松草總皂苷提取物；用鹽酸或硫酸酸化到pH二5.8，在55"C溫 度條件下對(duì)解析液進(jìn)行濃縮，獲得總生物堿類提取物。測(cè)定唐松草總生物堿提取 物含量為62%;總皂苷提取物含量為31%。實(shí)施例4稱取唐松草干燥全草粉末1Kg，加入10L70。/。甲醇攪拌，控制溫度在85t:， 對(duì)唐松草粉末進(jìn)行3次冋流提取，每次提取時(shí)間間隔lh，合并提取液，過(guò)濾，濾 液在-0.05 0.09Mpa、 50 65。C條件下，經(jīng)減壓回收溶劑、真空濃縮成唐松草粗提 物。將唐松草粗提物加適量水?dāng)嚢璩蓱腋∫?，使懸浮液比重達(dá)到1.17，采用HZ-841 型號(hào)大孔吸附樹(shù)脂對(duì)懸浮液進(jìn)行吸附，富集吸附至飽和，用2倍樹(shù)脂量的水(V/V) 洗去雜質(zhì)，再用4倍樹(shù)脂量(V/V)濃度為50%的丙酮進(jìn)行解析，收集解析液， 控制溫度在50-65'C減壓回收溶劑，殘留物干燥得到唐松草提取物。將唐松草提 取物加適量水?dāng)嚢璩蓱腋∫海箲腋∫罕戎剡_(dá)到1.16，采用DK110型號(hào)離子交換樹(shù)脂，富集吸附至飽和，加入3倍樹(shù)脂量的水(V/V)進(jìn)行水洗，收集含皂苷類 化合物的流出液，再用5倍樹(shù)脂量(V/V)濃度為10%的乙胺-甲醇混合溶劑解析留在樹(shù)脂柱上的生物堿類物質(zhì)，收集解析液，在6rc溫度下減壓回收流出液，得到唐松草總皂苷提取物；用鹽酸或硫酸酸化到pH^6.2，在57t;溫度條件下對(duì)解 析液進(jìn)行濃縮，獲得總生物堿類提取物。測(cè)定唐松草總生物堿提取物含量為54 %;總皂苷提取物含量為37%。
權(quán)利要求
1. 一種從唐松草中提取唐松草總生物堿和總皂苷的方法，其特征在于，包括下述步驟(1)唐松草中加入極性有機(jī)溶劑，混合均勻，過(guò)濾、減壓回收溶劑、真空濃縮提取唐松草粗提物；(2)在唐松草粗提物中加入使懸浮液比重達(dá)到1.0～1.2的水，并攪拌成粗提物懸浮液；(3)粗提物懸浮液通過(guò)吸附樹(shù)脂分離柱進(jìn)行吸附，用解析液對(duì)吸附樹(shù)脂分離柱進(jìn)行解析，減壓回收溶劑、真空濃縮獲得純化后的唐松草提取物；(4)在唐松草提取物中加入使懸浮液比重達(dá)到1.0～1.2的水，攪拌成提取物懸浮液，該懸浮液通過(guò)陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱，收集流出液，控制溫度在40～80℃范圍內(nèi)濃縮流出液，獲得總皂苷；(5)采用1～10％的NaOH水溶液或有機(jī)溶劑對(duì)陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱進(jìn)行解析獲得離子交換的解析液；用鹽酸或硫酸酸化上述解析液到pH＝5～7，在40～80℃溫度范圍內(nèi)對(duì)其進(jìn)行濃縮，獲得總生物堿類提取物。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的極性有機(jī)溶劑包括甲 醇、乙醇、丙醇、異丙醇、正丁醇、丙酮或上述溶劑按一定比例組成的混合溶 劑，或由上述溶劑與酸、堿、鹽配成的酸性或堿性溶劑。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(1)中混合過(guò)程中投 料比例為原料溶劑二l : 1 20;減壓回收溶劑的條件為-0.05 0.09 Mpa、 50 65°C。
4、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(3)中對(duì)吸附樹(shù) 脂分離柱進(jìn)行解析的解析液為乙醇、丙醇、甲醇、丙酮或40 10(TC的水，解析 液用量的體積為2-6倍的樹(shù)脂體積。
5、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的吸附樹(shù)脂是HPDIOO，HPD300, HPD700， DlOl， AB-8， XDA-1， H-20， HZ-841型號(hào)中的一種或幾種 型號(hào)的混合樹(shù)脂。
6、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱是 001x7， TS-92， TS-80， D113， DKllO， 724型號(hào)中的一種或幾種型號(hào)的混合樹(shù) 脂。
7、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(5)中對(duì)陽(yáng)離子 交換樹(shù)脂分離柱進(jìn)行解析的有機(jī)溶劑為乙醇、丙醇、甲醇、丙酮。
全文摘要
本發(fā)明請(qǐng)求保護(hù)一種從唐松草中提取唐松草總生物堿和總皂苷的方法，涉及生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。公開(kāi)了同時(shí)制備唐松草中總生物堿和總皂苷提取物的方法。本發(fā)明使用吸附樹(shù)脂對(duì)唐松草中總生物堿和總皂苷進(jìn)行吸附，有機(jī)溶劑或其水溶液對(duì)吸附樹(shù)脂進(jìn)行解吸；再用離子交換樹(shù)脂選擇性的從唐松草提取物中吸附生物堿類，流出液中獲得皂苷類。本發(fā)明提高了唐松草中有效組分群的提取效率，避免了有效成分的損失，節(jié)約資源。使用本方法純化的總生物堿提取物含量＞50％，總皂苷提取物的含量＞30％。
文檔編號(hào)A61P35/00GK101278989SQ200810069688
公開(kāi)日2008年10月8日 申請(qǐng)日期2008年5月16日 優(yōu)先權(quán)日2008年5月16日
發(fā)明者正 潘, 蔡應(yīng)繁, 高運(yùn)玲 申請(qǐng)人:重慶郵電大學(xué)