專利名稱：：東紫蘇類黃酮的制備方法及應用的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及藥品
技術領域：
，具體地說是以東紫蘇為原料制備類黃酮的方法及其在心腦血管疾病方面的應用。
背景技術：
：唇形科香薷屬(^As力o7"&)植物在我國約30種，其中云南就有20多種，資源十分豐富，多數(shù)品種均可入藥，為傳統(tǒng)常用中藥。東紫蘇為香薷屬植物^/s力o7tw'ato力'77/eriVan't.的全草，又名涼茶、山茶、香茶、寶珠茶，味甘苦微幸，性平，能"發(fā)散解表，理氣和胃，治外感風寒，消化不良"，滇南各地少數(shù)民族作為日常茶飲廣泛應用。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種能保留其活性物質(zhì)的東紫蘇類黃酮的制備方法，以及其在治療心腦血管疾病藥物中的應用。東紫蘇中含圣草素7-0-e-D-葡萄吡喃糖苷，木犀草素7-0-e-D-葡萄吡喃糖苷，山奈酚3-0-蘆丁糖苷，蘆丁等類黃酮及2,6-二甲基-8-羥基-2，6-辛二烯酸-8-0-e-D-葡萄吡喃糖苷多種活性成分，是強烈的抗脂質(zhì)過氧化劑和高血脂、高膽固醇平衡劑，能有效增強血管通透性和調(diào)節(jié)血液流變學指標，是天然的心腦血管疾病防治藥物。針對本品現(xiàn)有應用狀態(tài)，把東紫蘇深加工，提取濃縮、精制其心腦血管疾病的有效成分——類黃酮，應用于食品、保健品及藥品，具有巨大的商業(yè)經(jīng)濟前景。本發(fā)明的目的通過以下技術方案予以實現(xiàn)東紫蘇類黃酮制備方法，包括以下步驟(1)取東紫蘇凈制、粉碎，用含水乙醇提取13次，物料比為1:51:25;(2)提取液合并，過濾，濃縮成1.051.20(50°C)浸膏；(3)取該浸膏加入35倍量水，攪拌混懸，用堿調(diào)p^910，過濾，用乙酸乙酯萃取3次，所得水層溶液再用酸調(diào)pH43，乙酸乙酯萃取3次，濃縮乙酸乙酯溶液，得總酚成分。(4)總酚成分用乙醇回流溶解，趁熱過濾，放置結(jié)晶，得類黃酮。取類黃酮，加入相關輔料，制成藥品，包括口服液、酊劑、片齊J、膠囊、沖劑(顆粒劑)及注射劑等。本發(fā)明中的東紫蘇類黃酮及其制劑可用于心腦血管疾病防治。東紫蘇類黃酮功能活性試驗如下1、試驗材料1.1、供試樣品SC-1(東紫蘇類黃酮)為淡黃色粉劑，樣品水溶性差，體外試驗用DMS0助溶，口服樣品用0.5%羧甲基纖維素助懸，飲用水稀釋至一定容積，小鼠按0.2ml/10g體重ig，大鼠按lml/100g體重ig。1.2、其他藥品試劑血脂康膠囊由北京北大維信生物科技有限公司生產(chǎn)，批號20050626阿司匹林由山東新華制藥公司提供，二磷酸腺苷(adenosinediphosphate,ADP)、血小板活化因子(plateletactivatingfacter，PAF)及花生四烯酸(arachidonicacid，M)系sigma公司產(chǎn)品，血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)及高密度脂量白一膽固醇(HDL-C)測定試劑盒購自北京中生北控生物科技股份有限公司。燈盞花素片為云南植物藥業(yè)有限公司產(chǎn)品，批號20040402。1.3、主要儀器設備LBY-NJ2型血液凝聚儀由北京普制生精密儀器研究中心生產(chǎn)，日本島津公司生產(chǎn)CL-770型臨床分光光度儀，北京賽科希德SA-6000型錐板粘度計等。1.4、實驗動物SD大鼠、ICR小鼠為SPF級，家兔為普通級，實驗動物生產(chǎn)許可證號SCXK(滇)2005-0008，由昆明醫(yī)學院實驗動物中心提供。2、方法與結(jié)果2.1、統(tǒng)計學方法實驗結(jié)果用X土S表示，組間差異用t檢驗，P〈0.05表示組間差異有顯著性。2.2、對血小板聚集功能的影響2.2.1、富血小板血漿(platelet-richplasma,PRP)和貧血小板血槳(platelet-poorplasma,PPP)的制備。自清醒家兔頸動脈取血收集于塑料離心管中，用3.8%枸櫞酸鈉抗凝(血與抗凝劑體積之比為9:1)，lOOOrpm離心lOmin得PRP，吸出PRP后剩余血液再以3000rpm離心lOmin得PPP，PPP用于調(diào)零或調(diào)整PRP中血小板的數(shù)目，試驗中血小板數(shù)控制在5X10"/L2.2.2、血小板聚集性測定按Born's比濁法測定樣品不同濃度對ADP，PAF和AA誘導的血小板聚集的影響，即將樣品與PRP共同溫育10min，再加入不同誘導劑(終濃度分別為ADP3Mmol/L，PAF7.2nmol/L，AA0.35mmol/L)，測定5min內(nèi)血小板最大聚集率(％)。結(jié)果見表l。_表1SC-1體外對ADP、PAF或AA誘導血小板聚集功能的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>結(jié)果表明，SC-1有顯著抑制ADP誘導的血小板聚集作用，該作用呈一定的濃度相關性；對PAF、AA誘導的血小板聚集，只在較高濃度有抑制作用(80mg/L)。2.2.3對小鼠斷頭后張口喘氣時間的影響選用ICR小鼠50只，雌雄各半，體重1822g，按體重隨機分為5組，即空白對照組，陽性對照組(燈盞花素片100mg、kg-1、d-"及SC-1低、中、高劑量組和WF-l低、中、高劑量組(分別按50、100、200mg、kg-'、cT給藥)，樣品用飲用水稀釋至一定容積，按0.2ml/10g體重ig，每天一次，空白對照組ig等體積飲用水。連續(xù)給藥(或水)6天。末次給藥后lh進行斷頭張口喘息時間測定。結(jié)果顯示，除燈盞花素片組(100mg/kg)有顯著延長小鼠斷頭后張口喘氣時間外，其他各組喘氣時間與空白對照組比均無顯著差異(表2)。表2SC-1對小鼠斷頭張口喘氣時間的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>2.2.4對出血時間的影響選用ICR小鼠50只，雌雄各半，體重1822g，按體重隨機分成5組，分組及給藥量同前，陽性對照改用阿司匹林(30mg/kg)，連續(xù)給藥5天，末次給藥后lh用斷尾法進行出血時間測定，將小鼠尾尖8mm處剪斷，從出血開始(濾紙上出現(xiàn)血跡)計時，每半分鐘用濾紙吸去血滴一次，直到出血自然停止(濾紙上無血跡)，所計時間即為出血時間。結(jié)果顯示，SC-1有一定延長出血時間傾向，但與空白對照組比無顯著差異(P〉0.05)，見表3_表3SC-1、WF-l對小鼠尾尖出血時間的影響_<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>n=10S±S與空白對照組比》<0.01，^<0.052.2.5對凝血時間的影響一毛細玻璃管法選用ICR小鼠50只，雌雄各半，體重2024g,按體重隨機分為5組，分組及給藥量與觀察對出血時間影響相同。按分組連續(xù)給藥5天，末次給藥后lh用毛細玻管法進行凝血時間測定。取內(nèi)徑lmm、長10cm毛細玻管自小鼠一側(cè)眼球內(nèi)眥插入球后靜脈叢，深的45mm，至血液流入毛細玻管內(nèi)開始計時，血液注滿后將毛細玻管取出平放于桌上，每隔30秒折斷二端毛細管約0.5cm，至血凝絲出現(xiàn)為止，所歷時間即為凝血時間。表4SC-1對小鼠凝血時間的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>;n=10jc土S與空白對照組比、<0.01,、<0.05結(jié)果表明，SC-1有延長小鼠凝血時間作用。2.2.6對ADP誘發(fā)小鼠肺微循環(huán)血栓形成的影響ICR小鼠50只，雌雄各半，體重1820g，按體重隨機分為5組，分組及給藥量同前，連續(xù)灌胃給藥5天,末次給藥后lh按文獻方法于小鼠尾靜脈iv400mg/kg的ADP生理鹽水溶液(0.lml/10g體重)，注畢，觀察并記錄15min內(nèi)動物死亡數(shù)，計算死亡抑制率。#翻申動物總數(shù)-死亡數(shù)死亡抑制率(％)=-一滿M^-動物總數(shù)結(jié)果表明100和200mg/kg體重SC-1有顯著降低靜脈注射ADP所導致的肺微血管栓塞動物死亡數(shù)，該作用呈劑量依賴趨勢(表5)表5<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>與空白對照組比aP<0.01，bP<0.052.2.7對小鼠實驗性高脂血癥血脂水平的影響雄性ICR小鼠50只，體重1822g，按體重隨機分為5組，全部動物飼以含高脂肪，高膽固醇飼料，自由進食，飲水不限。高脂飼料配方為(W:W):膽固醇2%，蛋黃10%,豬油7%，丙基硫氧嘧啶0.1%，膽酸鈉0.3%，基礎飼料80.6%，在進食高脂飼料的同時，各給藥組按分組灌胃給予不同劑量的藥物，空白對照組給相同體積飲用水。5天后摘眼球取禁食12h空腹血，用酶法按試劑盒說明書操作程序，測血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)和高密度脂蛋白一膽固醇(HDL—C)，結(jié)果見表6。結(jié)果表明，SC-1灌胃給藥有降低實驗性高脂血癥小鼠血清TC和TG作用，該作用呈劑量相關性，200mg/kg體重降低TC和TG作用十分顯著，與模型組比PO.Ol，隨著TC下降，HDL-C也有一定降低，但HDL-C/TC比值略有升高，說明樣品對脂蛋白分布無有害影響。表6SC-1對小鼠實驗性高脂血癥的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>W=10X±SaP<0.01與高脂對照組比較2.2.8對血漿粘度的影響雄性SD大鼠40只，體重200240g，按體重隨機分為4組，分組及給藥量同前，高脂飼料喂養(yǎng)，飼料配方不變，連續(xù)給藥7天，禁食12h后由股動脈取血，1%肝素抗凝，分離血漿(3000rpm，10min)，用北京賽科希德SA-6000型錐板粘度計進行血漿粘度測定。結(jié)果顯示，SC-1無明顯影響大鼠血漿粘度作用(表7)表7SC-1、WF-1對大鼠血漿粘度的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>小結(jié)初步實驗結(jié)果顯示，SC-1有較好的抑制ADP誘導的家兔血小板聚集作用，終濃度分別為20mg/L(SC-l)即可顯著抑制ADP誘導的血小板聚集^<0.01=，此外，SC-1在較高濃度(80mg/L)有抑制M誘導的血小板聚集作用。體內(nèi)灌胃給藥，SC-1可顯著延長小鼠的凝血時間，對出血時間無明顯影響；SC-1100-200mg/kg可明顯降低ADP致小鼠肺微血管栓塞的死亡數(shù)；200mg/kg顯著降低實驗性高脂血癥小鼠血清TC、TG水平，對大鼠血漿粘度無明顯影響。以上結(jié)果提示，SC-1具有改變血液流變學，防治心腦血管疾病作用。具體實施方式下面結(jié)合實施例，對本發(fā)明作進一步的詳細說明，但不是對本發(fā)明的限定。實施例l:取東紫蘇10公斤，凈制，粉碎，用75%含水乙醇100公斤回流提取3次，每次2小時，提取液合并，過濾，濃縮至密度1.10(50°C)，得浸膏2.02公斤，加水6公斤，用NaOH液調(diào)pH40，過濾，用乙酸乙酯萃取3次，所得水層溶液再用鹽酸調(diào)pH43，用乙酸乙酯萃取3次，濃縮該乙酸乙酯溶液，得總酚成分?？偡映煞钟靡掖蓟亓魅芙?，趁熱過濾，放置結(jié)晶，得類黃酮268g。實施例2:取東紫蘇l公斤，凈制，粉碎，用50%含水乙醇5公斤回流提取3次，每次2小時，提取液合并，過濾，濃縮至密度1.05(5(TC)，得浸膏0.17公斤，加水1公斤，用堿液調(diào)pH=9，過濾，用乙酸乙酯萃取3次，所得水層溶液再用鹽酸調(diào)pH=2，用乙酸乙酯萃取3次，濃縮該乙酸乙酯溶液，得總酚成分?？偡映煞钟靡掖蓟亓魅芙?，趁熱過濾，放置結(jié)晶，得類黃酮18.8g。實施例3:取東紫蘇5公斤，凈制，粉碎，用30%含水乙醇125公斤回流提取3小時，提取液過濾，濃縮至密度1.20(50°C)，得浸膏0.92公斤，加水8公斤，用堿液調(diào)PH=9，過濾，用乙酸乙酯萃取3次，所得水層溶液再用鹽酸調(diào)pHz3用乙酸乙酯萃取3次，濃縮該乙酸乙酯溶液，得總酚成分?？偡映煞钟靡掖蓟亓魅芙猓脽徇^濾，放置結(jié)晶，得類黃酮112.4g。應用實施例l:取實施例13中的類黃酮制成制劑取類黃酮100g，加入蔗糖150g，制粒，填裝成膠囊1000粒(每粒含類黃酮100mg);每曰服用23次，每次13粒，用于防治心腦缺血、血脂及膽固醇過高、預防血栓栓塞等。應用實施例2:取類黃酮100g，加入水500ml,加入NaOH液不斷攪拌，至完全溶解，再用鹽酸調(diào)pH=7.5，加水至1000ml，混勻，過濾，罐封成口服液1000支(每支含類黃酮100mg);每日服用23次，每次13支，用于防治心腦缺血、血脂及膽固醇過高、預防血栓栓塞等。權利要求1.一種東紫蘇類黃酮的制備方法，其特征在于按以下步驟進行(1)取東紫蘇，凈制，粉碎，用含水醇提取1～3次，物料比為1∶5～1∶25；(2)提取液合并，過濾，濃縮成1.05～1.20·50℃浸膏；(3)取該浸膏加入3～10倍量水，攪拌混懸，用堿調(diào)pH＝9～10，過濾，用乙酸乙酯萃取3次，所得水層溶液再用酸調(diào)pH＝1～3，乙酸乙酯萃取3次，濃縮乙酸乙酯溶液，得總酚成分；(4)總酚成分用乙醇回流溶解，趁熱過濾，放置結(jié)晶，得類黃酮。2、權利要求1所述的東紫蘇類黃酮的制備方法所得到的類黃酮的應用，其特征在于用于防治心腦血管性疾病，血脂及膽固醇過高、血栓栓塞。3、根據(jù)權利要求2所述的東紫蘇類黃酮的制備方法所得到的類黃酮的應用，其特征在于加入藥物制劑允許加入的助劑，制成包括口服液、酊劑、片劑、膠囊、顆粒劑及注射劑在內(nèi)的藥品。全文摘要本發(fā)明是一種東紫蘇類黃酮的制備方法及應用。制備方法是取東紫蘇，凈制，粉碎，用含水醇提取1～3次，物料比為1∶5～1∶25；提取液合并，過濾，濃縮成1.05～1.20·50℃浸膏；取該浸膏加入3～10倍量水，攪拌混懸，用堿調(diào)pH＝9～10，過濾，用乙酸乙酯萃取3次，所得水層溶液再用酸調(diào)pH＝1～3，乙酸乙酯萃取3次，濃縮乙酸乙酯溶液，得總酚成分；總酚成分用乙醇回流溶解，趁熱過濾，放置結(jié)晶，得類黃酮。加入藥物制劑允許加入的助劑，制成包括口服液、酊劑、片劑、膠囊、顆粒劑及注射劑在內(nèi)的藥品，用于防治心腦血管性疾病，血脂及膽固醇過高、血栓栓塞等疾病。文檔編號A61P7/00GK101278970SQ20081005843公開日2008年10月8日申請日期2008年5月23日優(yōu)先權日2008年5月23日發(fā)明者曹建新申請人:昆明理工大學