專利名稱：：凍干甲型肝炎-水痘減毒聯(lián)合疫苗及其生產(chǎn)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明提供一種凍干甲型肝炎一水痘減毒聯(lián)合疫苗，本發(fā)明還提供了上述聯(lián)合疫苗的制備方法，以及所說的聯(lián)合疫苗的保護(hù)劑，屬于疫苗制備
技術(shù)領(lǐng)域：
。
背景技術(shù)：
：預(yù)防性疫苗在全球范圍內(nèi)的應(yīng)用使傳染病得到了有效控制，大大降低了許多常見傳染病的發(fā)病率和死亡率。隨著分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)等相關(guān)學(xué)科的飛速發(fā)展，新疫苗不斷地被研究和開發(fā)。但是，疫苗種類增多必將伴隨一系列問題，兒童接種次數(shù)增加，疫苗管理也較困難。每個兒童在其學(xué)齡前的7年時間中，大約需要去接種疫苗的診療所多達(dá)20余次。這不僅大大增加了兒童接種疫苗的皮肉之苦和增加了產(chǎn)生疫苗副反應(yīng)的機(jī)會、對醫(yī)務(wù)工作者和兒童的家長帶來了不便，而且也相應(yīng)地增加了疫苗的使用和管理方面的困難，容易造成漏種等，直接影響到預(yù)防效果。因此，聯(lián)合免疫的方法不僅被普遍使用，而且越來越受到重視。聯(lián)合疫苗為兒童免疫規(guī)劃的連續(xù)、簡化和擴(kuò)大所必需。自1991年由聯(lián)合國兒童基金會和世界衛(wèi)生組織等國際組織發(fā)起并推廣"兒童疫苗計(jì)劃"(CVI)以來，世界上許多從事疫苗研究與開發(fā)的實(shí)驗(yàn)室和公司都在致力于聯(lián)合疫苗的研制。由于水痘減毒活疫苗是唯一獲準(zhǔn)用于預(yù)防人類皰疹病毒感染的疫苗，且甲型肝炎滅活疫苗與水痘減毒活疫苗存在免疫針次和程序上的沖突，故而進(jìn)行凍干甲型肝炎_水痘減毒聯(lián)合疫苗研究首選采用甲型肝炎減毒活疫苗。目前，獲得批準(zhǔn)上市的甲型肝炎減毒活疫苗只有中國的L一A—1減毒株和H2減毒株，國外的減毒疫苗仍處于研究階段。迄今尚未見使用活的減毒甲型肝炎疫苗病毒生產(chǎn)凍干甲型肝炎一水痘減毒聯(lián)合疫苗的報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供一種凍干甲型肝炎一水痘減毒聯(lián)合疫苗，具有多聯(lián)多價的、耐熱穩(wěn)定的特點(diǎn)。本發(fā)明還提供一種凍干甲型肝炎一水痘減毒聯(lián)合疫苗的制備方法，適用工業(yè)化生產(chǎn)。本發(fā)明公開的凍干甲型肝炎一水痘減毒聯(lián)合疫苗，含有甲型肝炎減毒活病毒、水痘減毒活病毒和保護(hù)劑。其中所說的甲型肝炎減毒活病毒是甲型肝炎減毒活病毒L-A-1疫苗株，病毒滴度不低于6.5LogCCID5。/ml;水痘減毒活病毒是水痘減毒活病毒OKa疫苗株，病毒滴度不低于4000PFU/ml。用于凍干甲型肝炎一水痘減毒聯(lián)合疫苗的保護(hù)劑成分及濃度為海藻糖30—100g/1、右旋糖酐10—60g/1、谷氨酸鈉5—10g/1、抗壞血酸l一3g/1、尿素5—20g/1，甘露醇3—10g/l或山梨醇3—15g/l。還有以下原料L-精氨酸為0—3g/1。本發(fā)明聯(lián)合疫苗的制備方法，包括以下步驟1)分別提供并混合甲型肝炎減毒活疫苗病毒原液和水痘減毒活疫苗病毒原液，得到甲型肝炎減毒活病毒和水痘減毒活病毒的混合液；2)在步驟1)中得到的混合液中加入保護(hù)劑并混勻，得到甲型肝炎一水痘減毒聯(lián)合疫苗混合液；3)冷凍干燥步驟2)中得到的含有保護(hù)劑的聯(lián)合疫苗混合液，得到凍干甲型肝炎一水痘減毒聯(lián)合疫苗。具體步驟如下制備凍干保護(hù)劑，首先按所示濃度將下列成分溶解于37i:注射用水中(lOOOml):谷氨酸鈉65-130g、抗壞血酸13-40g、尿素65-260g、L-精氨酸0-40g、山梨醇40-130g和(或)甘露醇40-195g，并用0.1NHCL調(diào)整PH值至7.0。經(jīng)0.22Mm濾膜過濾除菌后得到保護(hù)組分A。然后稱取海藻糖500.0g溶解于溫度為37。C左右注射用水補(bǔ)至1000ml，經(jīng)0.22to濾膜過濾除菌后得到保護(hù)劑組分B。最后再將300.0g右旋糖酐40溶解于溫度約為37'C注射用水補(bǔ)至1000ml，經(jīng)116。C高壓蒸汽滅菌40分鐘后得到保護(hù)劑組分C?？梢酝ㄟ^簡單的機(jī)械混合方法，制備本發(fā)明的甲型肝炎一水痘減毒聯(lián)合疫苗混合液。按照1:(l2)(V/V)的比例將病毒滴度為大于7.OLogCCID5。/ml的甲型肝炎疫苗原液與病毒滴度為大于6000PFU/ml的水痘疫苗原液混合，然后再加入凍干保護(hù)劑，輕輕混合均勻。使用作為疫苗稀釋液的199綜合培養(yǎng)液稀釋至聯(lián)合疫苗中各組分所需含量或濃度，即得到甲型肝炎一水痘減毒聯(lián)合疫苗混合液。冷凍干燥分裝好的上述混合液，其條件是一3(TC至一55'C低溫條件預(yù)冷凍3至7小時，一3(TC至35。C條件下真空干燥8至16小時。與凍干前相比，凍干后甲型肝炎疫苗病毒滴度雖稍有下降，但下降幅度不大于0.5LogCCIDM/ml，水痘下降不大于0.5LogPFU5Q/ml。按照世界衛(wèi)生組織(WHO)及國家藥品監(jiān)督管理局(SDA)有關(guān)聯(lián)合疫苗及凍干制劑制檢規(guī)程及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求，對本發(fā)明所提供的聯(lián)合疫苗進(jìn)行全面檢定，其結(jié)果各項(xiàng)質(zhì)量指標(biāo)均達(dá)到或超過世界衛(wèi)生組織(WHO)及國家藥品監(jiān)督管理局(SDA)所規(guī)定的制檢規(guī)程要求。其中甲型肝炎病毒滴度為不低于6.5LogCCID5G/ml，水痘病毒滴度為不低于4000FPU/ml。聯(lián)合疫苗中組分間相互干擾作用研究將凍干甲型肝炎疫苗復(fù)溶液體和凍干水痘疫苗復(fù)溶液體混合，感染2BS細(xì)胞，檢測病毒滴度。將同一批次制得的凍干甲型肝炎一水痘減毒聯(lián)合疫苗、凍干甲型肝炎疫苗和凍干水痘疫苗分別感染2BS細(xì)胞，檢測病毒滴度。目的是檢測混合后甲型肝炎和水痘兩種活性病毒在同一個環(huán)境下有無相互促進(jìn)、競爭或抑制等作用。甲型肝炎病毒滴度檢測方法采用了熒光染色法，水痘病毒滴度檢測方法采用了微量細(xì)胞病變法。試驗(yàn)結(jié)果見表1，聯(lián)合疫苗中病毒滴度與單價苗一致。表明聯(lián)合疫苗中活性組分甲型肝炎病毒和水痘病毒無相互促進(jìn)或抑制現(xiàn)象。表l水痘、甲型肝炎原液混合后病毒滴度與其單價疫苗原液病毒滴度的比較<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>凍干甲型肝炎疫苗20070626-27.33凍干水痘疫苗20070626-54.0凍干甲型肝炎一水痘減毒聯(lián)合疫苗20070821-33.756.67凍干甲型肝炎疫苗20070821-26.5凍干水痘疫苗20070821-5_^_凍干甲型肝炎一水痘減毒聯(lián)合疫苗20070920-33.757.0凍干甲型肝炎疫苗20070920-27.0凍干水痘疫苗_20070920-5_^_同步混合感染HAV和VZV的標(biāo)本電鏡檢査顯示，HAV感染29天左右,達(dá)到增殖最高峰。感染VZV2天后,細(xì)胞內(nèi)可見到少量無包膜的VZV,增殖高峰期出現(xiàn)在8天。混合感染HAV、VZV與單獨(dú)感染HAV和VZV的電鏡檢測結(jié)果無明顯差異。結(jié)果見圖l。聯(lián)合疫苗穩(wěn)定性試驗(yàn)三批聯(lián)合疫苗及其單價疫苗組分別放置37°C3天、7天、9天、13天或7天、9天，取出3-5支樣品混合，以37"放置前的疫苗樣品作為實(shí)驗(yàn)對照組，滴定甲型肝炎和水痘，方法為上述的熒光染色法和微量細(xì)胞病變法。37'C放置3天后的甲型肝炎病毒滴度下降不高于0.5Lg。水痘減毒活病毒37。C放置7天后滴度下降不高于1.0Lg。結(jié)果見表2、表3，符合規(guī)定要求。表2凍干甲型肝炎一水痘減毒聯(lián)合疫苗甲型肝炎病毒穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果_Lot03791320070920-37.06.676.676.56.5表3凍干甲型肝炎一水痘減毒聯(lián)合疫苗水痘病毒穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果Lot07920070821-33.753.502.7520070920-33.753.503.0聯(lián)合疫苗的免疫原性試驗(yàn)雌性BALB/c純系鼠，45周齡。分凍干甲型肝炎一水痘減毒聯(lián)合疫苗組、甲型肝炎疫苗對照組、水痘疫苗對照組。每組液體經(jīng)腹腔免疫，每只小鼠免疫劑量為0.5ml。免后2周、3周、4周、5周采血，測抗體。抗體檢測結(jié)果表明，聯(lián)合疫苗組甲型肝炎抗體產(chǎn)生高峰時間與單價甲型肝炎疫苗組一致，而水痘抗體產(chǎn)生高峰時間，聯(lián)合疫苗組較單價水痘疫苗組延后，但聯(lián)合疫苗組抗體產(chǎn)生水平與單價疫苗組相當(dāng)。結(jié)果見表4和圖2、圖3。表4聯(lián)合疫苗免疫后抗體陽轉(zhuǎn)結(jié)果疫苗名稱甲型肝炎抗體陽轉(zhuǎn)率水痘抗體陽轉(zhuǎn)率2周3周4周5周2周3周4周5周聯(lián)合疫苗5/55/55/55/55/55/55/55/5單價甲型肝炎疫苗4/55/55/55/5單價水痘疫苗4/55/55/55/5聯(lián)合疫苗的安全性試驗(yàn)免疫豚鼠和BALB/c純系小鼠，設(shè)常規(guī)劑量組和3倍劑量組，腹腔免疫。免后觀察存活和健康情況，一周后稱量體重，解剖作病理檢查。實(shí)驗(yàn)結(jié)果，豚鼠和小鼠免后無不良反應(yīng)，全部存活，體重增加，解剖無病理改變。本發(fā)明聯(lián)合疫苗的積極效果在于具有與其單價疫苗同樣良好的安全性與免疫原性，可有效地預(yù)防甲型肝炎和水痘，不會因兩種病毒的混合造成彼此干擾，亦不會導(dǎo)致任何免疫反應(yīng)抑制作用或其他的不良反應(yīng)。本發(fā)明的凍干保護(hù)劑能夠完全保證液態(tài)聯(lián)合疫苗制品，在冷凍干燥過程中，以及凍干后的運(yùn)輸、儲存和使用過程中，聯(lián)合疫苗病毒滴度沒有明顯下降。與凍干前相比，凍干后甲型肝炎疫苗病毒滴度和水痘疫苗病毒滴度雖稍有下降，但下降幅度不大于0.5LogCCID5Q/ml。降低了聯(lián)合疫苗的生產(chǎn)成本和市場價格，能以最簡單的接種途徑，一次接種后就能產(chǎn)生免疫，并且無毒副反應(yīng)，提高疫苗接種效率，減少多次注射所帶來的不良反應(yīng)，從而有利于推廣和普遍使用。圖l、2BS細(xì)胞內(nèi)典型HAV和VZV病毒形態(tài)(X80000):長箭頭為HAV，短箭頭為VZV。圖2、免后不同時間聯(lián)合疫苗組與單價甲肝疫苗組各組甲肝抗體水平趨勢圖；圖3聯(lián)合疫苗組與單價水痘疫苗組不同時間水痘抗體水平比較。具體實(shí)施方式實(shí)施例1-凍干甲型肝炎一水痘減毒聯(lián)合疫苗的制備將1.2L甲型肝炎疫苗病毒的原液(L-A-1毒株，病毒滴度為8.0LogCCID5。/ml)與2.4L水痘疫苗病毒的原液(6000PFU)混合，然后加入如下制備的保護(hù)劑原液保護(hù)劑組分A550ml、保護(hù)劑組分B600ml和保護(hù)劑組分C450ml。然后，再向如此得到的混合液中加入適當(dāng)量作為病毒疫苗基質(zhì)液的199綜合液，使液態(tài)聯(lián)合疫苗的總體積達(dá)到7200ml，使其中甲型肝炎疫苗病毒滴度不小于6.5LogCCID5()/ml，水痘疫苗病毒滴度不小于4000PFU/ml。如此稀釋的結(jié)果也導(dǎo)致疫苗液中所加保護(hù)劑各組分的濃度(w/v)分別達(dá)到海藻糖42g/1、右旋糖酐18.75g/1、谷氨酸鈉7.64g/1、抗壞血酸1.53g/1、尿素6.lg/l、山梨醇6.lg/l、甘露醇6.lg/l。為了制備凍干保護(hù)劑原液，可以首先按所示濃度將下列成分溶解于注射用水(1000ml)中谷氨酸鈉100.0g、抗壞血酸20.0g、尿素80.0g、山梨醇80.0g和甘露醇80.0g，并用0.1NHCL調(diào)整PH值至7.0。經(jīng)0.22Mm濾膜過濾除菌后得到保護(hù)組分A。然后稱取海藻糖500.Og溶解于溫度為37°C左右注射用水補(bǔ)至1000ml，經(jīng)0.22Mm濾膜過濾除菌后得到保護(hù)劑組分B。最后再將300.Og右旋糖酐40溶解于溫度約為37。C注射用水補(bǔ)至1000ml，經(jīng)116'C高壓蒸汽滅菌40分鐘后得到保護(hù)劑組分C。按照每西林瓶(或安瓿)lml的體積分裝上述聯(lián)合疫苗液，然后將西林瓶(或安瓿)置于密閉的真空冷凍干燥器(FS150-SS20C型，HullCo.，USA)內(nèi)，按下述條件冷凍干燥一3(TC至一55'C低溫條件預(yù)冷凍3至7小時，一3(TC至35"C條件下真空干燥8至16小時，從而得到所需的冷凍干燥的甲型肝炎一水痘減毒聯(lián)合疫苗(20070626)。實(shí)施例2:凍干甲型肝炎一水痘減毒聯(lián)合疫苗的制備將1.2L甲型肝炎疫苗病毒的原液(L-A-1毒株，病毒滴度為8.0LogCCID5Q/ml)與2.4L水痘疫苗病毒的原液(6000PFU/ml)混合，然后加入如下制備的保護(hù)劑原液保護(hù)劑組分A550ml、保護(hù)劑組分B900ml和保護(hù)劑組分C900ml。然后，再向如此得到的混合液中加入適當(dāng)量作為病毒疫苗基質(zhì)液的199綜合液，使液態(tài)聯(lián)合疫苗的總體積達(dá)到7200ml，使其中甲型肝炎疫苗病毒滴度不小于6.5L0gCCID5。/ml，水痘疫苗病毒滴度不小于4000PFU/ml。如此稀釋的結(jié)果也導(dǎo)致疫苗液中所加保護(hù)劑各組分的濃度(w/v)分別達(dá)到海藻糖62.5g/l、右旋糖酐37.5g/l、谷氨酸鈉7.64g/l、抗壞血酸1.53g/1、尿素6.lg/l、山梨醇6.lg/l、L-精氨酸為1.53g/l。為了制備凍干保護(hù)劑原液，可以首先按所示濃度將下列成分溶解于注射用水(1000ml)中谷氨酸鈉100.0g、抗壞血酸20.0g、尿素80.0g、山梨醇80.0g和L-精氨酸20.0g，并用0.1NHCL調(diào)整PH值至7.0。經(jīng)0.22Mm濾膜過濾除菌后得到保護(hù)組分A。然后稱取海藻糖500.Og溶解于溫度為37"C左右注射用水補(bǔ)至lOOOml，經(jīng)O.22Mm濾膜過濾除菌后得到保護(hù)劑組分B。最后再將300.Og右旋糖酐40溶解于溫度約為37。C注射用水補(bǔ)至1000ml，經(jīng)116。C高壓蒸汽滅菌40分鐘后得到保護(hù)劑組分C。按照每西林瓶(或安瓿)1ml的體積分裝上述聯(lián)合疫苗液，然后將西林瓶(或安瓿)置于密閉的真空冷凍干燥器(FS150-SS20C型，HullCo.,USA)內(nèi)，按下述條件冷凍干燥一3(TC至一55。C低溫條件預(yù)冷凍3至7小時，一3(TC至35。C條件下真空干燥8至16小時，從而得到所需的冷凍干燥的甲型肝炎一水痘減毒聯(lián)合疫苗(20070821)。實(shí)施例3:凍干甲型肝炎一水痘減毒聯(lián)合疫苗的制備將2.4L甲型肝炎疫苗病毒的原液(L-A-1毒株，病毒滴度為8.0LogCCID5。/ml)與2.4L水痘疫苗病毒的原液(6000PFU/ml)混合，然后加入如下制備的保護(hù)劑原液保護(hù)劑組分A550ml、保護(hù)劑組分B900ml和保護(hù)劑組分C900ml。然后，再向如此得到的混合液中加入適當(dāng)量作為病毒疫苗基質(zhì)液的199綜合液，使液態(tài)聯(lián)合疫苗的總體積達(dá)到7200ml，使其中甲型肝炎疫苗病毒滴度不小于6.5LogCCID5()/ml，水痘疫苗病毒滴度不小于4000PFU/ml。如此稀釋的結(jié)果也導(dǎo)致疫苗液中所加保護(hù)劑各組分的濃度(w/v)分別達(dá)到海藻糖62.5g/l、右旋糖酐37.5g/l、谷氨酸鈉7.64g/l、抗壞血酸1.53g/1、尿素6.lg/l、甘露醇6.lg/l、L-精氨酸為1.53g/l。為了制備凍干保護(hù)劑原液，可以首先按所示濃度將下列成分溶解于注射用水(1000ml)中谷氨酸鈉100.0g、抗壞血酸20.0g、尿素80.0g、甘露醇80.0g和L-精氨酸20.0g，并用0.INHCL調(diào)整PH值至7.0。經(jīng)0.22Mm濾膜過濾除菌后得到保護(hù)組分A。然后稱取海藻糖500.Og溶解于溫度為37"C左右注射用水補(bǔ)至1000ml，經(jīng)0.22陶濾膜過濾除菌后得到保護(hù)劑組分B。最后再將300.Og右旋糖酐40溶解于溫度約為37"C注射用水補(bǔ)至1000ml，經(jīng)116"C高壓蒸汽滅菌40分鐘后得到保護(hù)劑組分C。按照每西林瓶(或安瓿)1ml的體積分裝上述聯(lián)合疫苗液，然后將西林瓶(或安瓿)置于密閉的真空冷凍干燥器(FS150-SS20C型，HullCo.,USA)內(nèi)，按下述條件冷凍千燥一3(TC至一55'C低溫條件預(yù)冷凍3至7小時，一3(TC至35"條件下真空干燥8至16小時，從而得到所需的冷凍干燥的甲型肝炎一水痘減毒聯(lián)合疫苗(20070920)。實(shí)施例4:按照世界衛(wèi)生組織(WHO)及國家藥品監(jiān)督管理局(SDA)有關(guān)聯(lián)合疫苗及凍干制劑制檢規(guī)程及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求，對本發(fā)明所提供的聯(lián)合疫苗進(jìn)行全面檢定，其結(jié)果各項(xiàng)質(zhì)量指標(biāo)均達(dá)到或超過世界衛(wèi)生組織(WHO)及國家藥品監(jiān)督管理局(SDA)所規(guī)定的制檢規(guī)程要求。其中甲型肝炎病毒滴度為不低于6.5LogCCID5。/ml，水痘病毒滴度為不低于4000FPU/ml。按實(shí)施例1-3生產(chǎn)的凍干甲型肝炎一水痘減毒聯(lián)合疫苗的各項(xiàng)檢定結(jié)果如下表5所示。表5、二批聯(lián)合疫苗各項(xiàng)檢定結(jié)果項(xiàng)目200706262007082120070920鑒別試驗(yàn)符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定和無菌檢杏符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定甲型肝炎病毒滴度7.06.677.0LogCCID50/ml水痘病毒滴度3.633.753.75LogPFU50/ml異常毒性試驗(yàn)符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定牛血清A蛋A殘留呈32ng/劑20ng/劑24ng/劑PH值7.17.27.2水分1.92%1.42%1.260/0權(quán)利要求1.一種凍干甲型肝炎-水痘減毒聯(lián)合疫苗，含有甲型肝炎減毒活病毒、水痘減毒活病毒和保護(hù)劑。2、根據(jù)權(quán)利要求1的聯(lián)合疫苗，其中所說的甲型肝炎減毒活病毒是甲型肝炎減毒活病毒L-A-1疫苗株；水痘減毒活病毒是水痘減毒活病毒OKa疫苗株。3、根據(jù)權(quán)利要求1的聯(lián)合疫苗，特征在于所說的甲型肝炎減毒活病毒滴度不低于6.5LogCCID5。/ml;水痘減毒活病毒滴度不低于4000PFU/ml。4、根據(jù)權(quán)利要求1的聯(lián)合疫苗，其特征在于保護(hù)劑的成分及濃度為海藻糖30—100g/1、右旋糖酐10—60g/l、谷氨酸鈉5—10g/l、抗壞血酸l一3g/1、尿素5—20g/1，甘露醇3—10g/l或山梨醇3—15g/l。5、權(quán)利要求4所述的聯(lián)合疫苗，其特征在于還有以下原料L-精氨酸為0—3g/1。6、權(quán)利要求1所述聯(lián)合疫苗的制備方法，包括以下步驟1)分別提供并混合甲型肝炎減毒活疫苗病毒原液和水痘減毒活疫苗病毒原液，得到甲型肝炎減毒活病毒和水痘減毒活病毒的混合液；2)在步驟1)中得到的混合液中加入保護(hù)劑并混勻，得到甲型肝炎一水痘聯(lián)合疫苗混合液；3)冷凍干燥步驟2)中得到的含有保護(hù)劑的聯(lián)合疫苗混合液，得到凍干甲型肝炎一水痘減毒聯(lián)合疫苗。7、根據(jù)權(quán)利要求6的方法，其中步驟3)所說的冷凍干燥步驟包括將所說的甲型肝炎一水痘聯(lián)合疫苗混合液于一3(TC至一55"C低溫條件預(yù)冷凍3至7小時，然后于一3(TC至35"C條件下真空干燥8至16小時。全文摘要本發(fā)明提供一種凍干甲型肝炎-水痘減毒聯(lián)合疫苗及其生產(chǎn)方法，聯(lián)合疫苗具有與其單價疫苗同樣良好的安全性和免疫原性，可有效地預(yù)防甲型肝炎和水痘。一次免疫接種即可有效地預(yù)防兩種疾病，可以降低疫苗成本、提高疫苗接種效率、減少多次注射所帶來的不良反應(yīng)，可以減少疫苗接種次數(shù)而達(dá)到預(yù)防多種疾病的目的。文檔編號A61K39/245GK101259269SQ20081005062公開日2008年9月10日申請日期2008年4月23日優(yōu)先權(quán)日2008年4月23日發(fā)明者煒付,劉令九,劉景曄,屈翠波,莉李,李淑焱,李育紅,本梁,瑋王,王文忠,暉蔡,趙曉琳申請人:長春生物制品研究所