專利名稱：不含明膠、人血白蛋白保護(hù)劑的冷凍干燥甲型肝炎減毒活疫苗及制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物制品領(lǐng)域，特別是用于預(yù)防甲型肝炎的不含明膠、不含人血白蛋白保護(hù)劑的冷凍干燥甲型肝炎減毒活疫苗及其制備方法。
背景技術(shù)：
甲型肝炎作為我國(guó)重要的傳染病之一，隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，生活條件的改善，以及近十幾年來(lái)國(guó)內(nèi)自制甲肝疫苗的推廣應(yīng)用，該病的發(fā)病率平均每年已20%明顯下降。然而一些中西部地區(qū)，甲肝發(fā)病率仍居高不下。即使在東部一些發(fā)達(dá)省份，甲肝爆發(fā)亦時(shí)有發(fā)生。隨著國(guó)家對(duì)“民生”問(wèn)題的日益關(guān)注，2007年3月，溫家寶總理在第十屆全國(guó)人民代表大會(huì)第五次會(huì)議上，將甲型肝炎等15種可以通過(guò)接種疫苗有效預(yù)防的傳染病全部納入國(guó)家計(jì)劃免疫，對(duì)疫苗實(shí)行批簽發(fā)管理制度；在國(guó)際市場(chǎng)，甲肝疫苗作為我國(guó)第一個(gè)具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)、通過(guò)國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)論證的生物制品，已出口印度、危地馬拉、菲律賓等國(guó)家， 在很多發(fā)展中國(guó)家甲肝仍未得到控制的大環(huán)境下，我國(guó)的甲肝疫苗出口還面臨著一個(gè)巨大的、可拓展的國(guó)際市場(chǎng)空間，對(duì)疫苗生產(chǎn)的產(chǎn)量和質(zhì)量提出了更高的要求。近年來(lái)，隨著生物技術(shù)的飛速發(fā)展，人們對(duì)凍干制品，凍干保護(hù)劑及其保護(hù)機(jī)理的研究更加深入。開(kāi)發(fā)更優(yōu)越的凍干保護(hù)劑、提高凍干制品的質(zhì)量，仍是現(xiàn)今生物技術(shù)研究的方向。國(guó)家藥典會(huì)病毒類制品專業(yè)委員會(huì)也在2007年7月17日至7月19日北京會(huì)議紀(jì)要中明確要求，“作為穩(wěn)定劑成分的明膠注射到人體后可發(fā)生過(guò)敏反應(yīng)，生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)進(jìn)行取代明膠成分的相關(guān)研究工作，以進(jìn)一步提高制品的安全性”。傳統(tǒng)的凍干保護(hù)劑配方中往往含有明膠或人血白蛋白，但由于國(guó)產(chǎn)明膠內(nèi)毒素含量偏高，而進(jìn)口明膠有攜帶瘋牛病病毒的潛在危險(xiǎn)，人血白蛋白易發(fā)生過(guò)敏反應(yīng)，針對(duì)這一問(wèn)題，需研究一系列明膠的替代
品來(lái)改進(jìn)傳統(tǒng)的配方，目前，尚無(wú)文獻(xiàn)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是研究不含明膠、不含人血白蛋白的凍干甲型肝炎減毒活疫苗的新一代保護(hù)劑，使內(nèi)毒素含量下降，不易發(fā)生過(guò)敏反應(yīng)，并能工業(yè)規(guī)模化生產(chǎn)的冷凍干燥甲型肝炎減毒活疫苗。本發(fā)明經(jīng)過(guò)多年研究，對(duì)各種配方的保護(hù)劑的研究情況，選定不含明膠、不含人血白蛋白的冷凍干燥甲型肝炎減毒活疫苗的保護(hù)劑，簡(jiǎn)稱(16-3)為最佳配方，用于冷凍干燥甲肝疫苗的生產(chǎn)。該保護(hù)劑含有海藻糖、右旋糖酐40、L-半胱氨酸、精氨酸、谷氨酸、甘氨酸、氯化鎂、硫酸鎂、山梨醇、甘露醇、三羥甲基氨基甲烷。將此配方的保護(hù)劑與甲肝疫苗原液混合， 配制成半成品，進(jìn)行分裝、凍干，對(duì)凍干前后疫苗的病毒感染性滴度及凍干后的熱穩(wěn)定性進(jìn)行檢測(cè)，并與原含明膠的生產(chǎn)配方相比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，該保護(hù)劑的保護(hù)作用很好，凍干過(guò)程中疫苗病毒的感染性滴度下降幅度明顯減少，成品的內(nèi)毒素含量則明顯下降(低于0. 25EU/ml )，用此配方生產(chǎn)的凍干疫苗接種人體，結(jié)果表明疫苗的免疫效果和安全性良好。本發(fā)明由甲肝病毒和冷凍干燥保護(hù)劑組成，保護(hù)劑(16-3)由海藻糖、右旋糖酐 40、L-半胱氨酸、精氨酸、谷氨酸、甘氨酸、氯化鎂、硫酸鎂、山梨醇、甘露醇、三羥甲基氨基甲烷組成。不含明膠、不含人血白蛋白的冷凍干燥甲型肝炎減毒活疫苗的保護(hù)劑簡(jiǎn)稱(16-3 ) 配方組份為海藻糖4-12克％、右旋糖酐40 0. 6-1. 8克％、L-半胱氨酸0. 1-0. 5克％、精氨酸0. 2-0. 8克％、谷氨酸0. 4-1. 0克％、甘氨酸0. 5-2. 0克％、氯化鎂0. 1-0. 5克％、硫酸鎂 0. 1-0. 5克、山梨醇1-4克％、甘露醇1-4克％、三羥甲基氨基甲烷適量。不含明膠、人血白蛋白保護(hù)劑的冷凍干燥甲型肝炎減毒活疫苗的制備方法每 1000毫升加入海藻糖40-120克、右旋糖酐40 6-18克、L-半胱氨酸1_5克、精氨酸2_8 克、谷氨酸4-10克、甘氨酸5-20克、氯化鎂1-5克、硫酸鎂1-5克、山梨醇10-40克、甘露醇 10-40克、三羥甲基氨基甲烷適量。溶解后除菌過(guò)濾，將甲肝疫苗原液按每人份接種病毒量 7. 00-7. 381gCCID50/ml比例混合，配制成半成品，進(jìn)行灌裝，采用冷凍干燥，冷凍干燥箱預(yù)冷-20°C _50°C的溫度3-5小時(shí)，凍干箱擱板溫度-:35°C _50°C，開(kāi)真空、升華，二次凍干箱擱板溫度15°C 30°C，即制成冷凍干燥甲型肝炎減毒活疫苗。具體步驟如下
1.提供甲型肝炎病毒活病毒原液。2.按步驟1所述的疫苗原液中，按1:0. 7-1. 2的體積比加入由海藻糖40-120克、 右旋糖酐40 6-18克、L-半胱氨酸1-5克、精氨酸2-8克、谷氨酸4_10克、甘氨酸5_20克、 氯化鎂1-5克、硫酸鎂1-5克、山梨醇10-40克、甘露醇10-40克、三羥甲基氨基甲烷組成的活疫苗保護(hù)劑并混勻，PH6. 8-7. 4。3.按步驟2所得到疫苗混合物于_20°C _50°C的溫度預(yù)冷3_5小時(shí)，凍干箱擱板溫度_35°C _50°C，開(kāi)真空、升華，二次凍干箱擱板溫度15°C 30°C，即制成冷凍干燥甲型肝炎減毒活疫苗。本發(fā)明對(duì)凍干前后疫苗的病毒感染性滴度及凍干后的熱穩(wěn)定性進(jìn)行檢測(cè)，并與原含明膠的生產(chǎn)配方相比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，該保護(hù)劑的保護(hù)作用很好，凍干過(guò)程中疫苗病毒的感染性滴度下降幅度明顯減少，成品的內(nèi)毒素含量則明顯下降(低于0. 25EU/ml)，用此配方生產(chǎn)的凍干疫苗接種人體，結(jié)果表明疫苗的免疫效果和安全性良好。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1.
1.按每人份裝量0. 6ml，內(nèi)含病毒量7. 00-7. 381gCCID5(1/ml，計(jì)算甲型肝炎病毒活病毒原液的量。2.疫苗原液與保護(hù)劑(16-3)配方按1:0.7-1.2的體積比計(jì)算，稱取海藻糖 40-120克、右旋糖酐40 6-18克、L-半胱氨酸1_5克、精氨酸2_8克、谷氨酸4_10克、甘氨酸5-20克、氯化鎂1-5克、硫酸鎂1-5克、山梨醇10-40克、甘露醇10-40克、三羥甲基氨基甲烷適量。3.將上述海藻糖、右旋糖酐40、L-半胱氨酸、精氨酸、谷氨酸、甘氨酸、氯化鎂、硫酸鎂、山梨醇、甘露醇、三羥甲基氨基甲烷。依次加入1000毫升注射用水中，攪拌混勻后，調(diào)PH6. 8-7. 4，0. Ium 過(guò)濾除菌，4°C備用。4.在以上配制的保護(hù)劑中，按每人份裝量0. 6ml,內(nèi)含病毒量7. 00-7. 381gCCID50/ ml，加入甲型肝炎病毒活病毒原液，攪拌混勻后，一部分加塞壓蓋4°C保存作為疫苗凍干前感染性滴度檢測(cè)用，另一部分疫苗將丁基膠塞加至1/3處，再進(jìn)行冷凍干燥。5.按步驟4所得到疫苗混合物于-20°c -50°c的溫度預(yù)冷3_5小時(shí)，凍干箱擱板溫度-35°C _50°C，開(kāi)真空、升華，二次凍干箱擱板溫度15°C 30°C，即制成冷凍干燥甲型肝炎減毒活疫苗。三個(gè)不同批號(hào)不含明膠、人血白蛋白保護(hù)劑的甲型肝炎減毒活疫苗經(jīng)冷凍干燥后，感染性滴度檢測(cè)證明按本發(fā)明方法冷凍干燥制成的凍干甲型肝炎減毒活疫苗，冷凍干燥后與凍前相比較，疫苗的病毒感染性滴度下降幅度在0. 21 lgCCID50/ml, 16_3配方疫苗的病毒感染性滴度下降幅度明顯低于原含明膠的生產(chǎn)配方，表明16-3配方在凍干過(guò)程中的保護(hù)效果較好。見(jiàn)表1.
表1. 16-3配方與原含明膠的生產(chǎn)配方的比較
權(quán)利要求
1.一種不含明膠、不含人血白蛋白保護(hù)劑的冷凍干燥甲型肝炎減毒活疫苗，由甲肝病毒和冷凍干燥保護(hù)劑組成，其特征在于疫苗保護(hù)劑由海藻糖、右旋糖酐40、L-半胱氨酸、精氨酸、谷氨酸、甘氨酸、氯化鎂、硫酸鎂、山梨醇、甘露醇、三羥甲基氨基甲烷組成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的不含明膠、不含人血白蛋白保護(hù)劑的冷凍干燥甲型肝炎減毒活疫苗，其特征在于它的配方組份為每1000毫升加入海藻糖40-120克、右旋糖酐40 6-18克、L-半胱氨酸1-5克、精氨酸2-8克、谷氨酸4_10克、甘氨酸5_20克、氯化鎂1_5克、 硫酸鎂1-5克、山梨醇10-40克、甘露醇10-40克、三羥甲基氨基甲烷適量。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的不含明膠、不含人血白蛋白保護(hù)劑的冷凍干燥甲型肝炎減毒活疫苗，其特征在于保護(hù)劑不含明膠。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的不含明膠、不含人血白蛋白保護(hù)劑的冷凍干燥甲型肝炎減毒活疫苗，其特征在于保護(hù)劑不含人血白蛋白。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的不含明膠、不含人血白蛋白保護(hù)劑的冷凍干燥甲型肝炎減毒活疫苗的制備方法，其特征在于1000毫升加入海藻糖40-120克、右旋糖酐40 6-18克、 L-半胱氨酸1-5克、精氨酸2-8克、谷氨酸4-10克、甘氨酸5-20克、氯化鎂1_5克、硫酸鎂 1-5克、山梨醇10-40克、甘露醇10-40克、三羥甲基氨基甲烷適量，溶解后除菌過(guò)濾，再將甲肝病毒按每人份接種病毒量7. 00-7. 38 IgCCID5ciAil比例加入到上述甲型肝炎減毒活疫苗冷凍干燥保護(hù)劑中，采用真空低溫冷凍干燥法，冷凍干燥箱預(yù)冷_20°C _50°C的溫度3-5 小時(shí)，凍干箱擱板溫度-35 °C _50°C，開(kāi)真空、升華，二次凍干箱擱板溫度15°C 30°C，即制成冷凍干燥甲型肝炎減毒活疫苗。
全文摘要
本發(fā)明屬于生物制品領(lǐng)域,特別是用于預(yù)防甲型肝炎的不含明膠、不含人血白蛋白的冷凍干燥甲型肝炎減毒活疫苗保護(hù)劑及其制備方法。該保護(hù)劑含有海藻糖、右旋糖酐40、L-半胱氨酸、精氨酸、谷氨酸、甘氨酸、氯化鎂、硫酸鎂、山梨醇、甘露醇、三羥甲基氨基甲烷。將此配方的保護(hù)劑與甲肝疫苗原液混合，配制成半成品，進(jìn)行分裝、凍干，對(duì)凍干前后疫苗的病毒感染性滴度及凍干后的熱穩(wěn)定性進(jìn)行檢測(cè)，并與原含明膠的生產(chǎn)配方相比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，該保護(hù)劑的保護(hù)作用很好，凍干過(guò)程中疫苗病毒感染性滴度的下降幅度明顯減少，成品的內(nèi)毒素含量則明顯下降(低于0.25EU/ml)，用此配方生產(chǎn)的凍干疫苗接種人體，結(jié)果表明疫苗的免疫效果和安全性良好。
文檔編號(hào)A61P31/14GK102228687SQ20111017259
公開(kāi)日2011年11月2日 申請(qǐng)日期2011年6月24日 優(yōu)先權(quán)日2011年6月24日
發(fā)明者吳海光, 唐彩華, 莊昉成, 張鋒, 忻亞娟, 朱蓮, 毛子安, 毛江森, 沈立軍, 錢(qián)汶, 陳軍, 陳卓, 陳念良, 陳悅青, 黃衛(wèi)新 申請(qǐng)人:浙江普康生物技術(shù)股份有限公司