專利名稱:雞新城疫、h9亞型禽流感二聯(lián)滅活疫苗的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明涉及家禽類生物制藥技術(shù)領(lǐng)域,尤其涉及一種雞新城疫、H9亞型禽 流感二聯(lián)滅活疫苗的制備方法。
背景技術(shù):
新城疫俗稱雞瘟,是由雞新城疫病毒引起的一種高度接觸性傳染病,主要 經(jīng)呼吸道和消化道感染,各種年齡的雞均可感染,以雛雞最為嚴重,發(fā)病率和 死亡率可達80%以上;禽流感是由A型流感病毒引起的一種禽類的感染/或疾病
綜合癥。感染后的舍飼禽包括家禽可表現(xiàn)出臨診癥狀、呼吸系統(tǒng)疾病、產(chǎn)蛋量 下降、致死率很高的急性出血性疾病,也可表現(xiàn)為亞臨診癥狀、輕的呼吸系統(tǒng) 感染到無癥狀帶毒等多種流行形式。根據(jù)禽流感致病性的不同,可以將禽流感
分為高致病性禽流感、低致病性禽流感和無致病性禽流感。最近國內(nèi)外由H5N1 血清型引起的禽流感稱高致病性禽流感,發(fā)病率和死亡率都很高,危害巨大。 1998年9月以來,在部分地區(qū)的雞場,雞群先后出現(xiàn)了呼吸道癥狀,普遍腹瀉, 產(chǎn)蛋下降,產(chǎn)軟皮蛋,初步診斷為中等毒力以下H9亞型禽流感。近幾年,H5 亞型禽流感的疫苗廣泛免疫接種,而H9亞型禽流感受到忽視,致使H9亞型禽 流感又呈流行趨勢。
聯(lián)苗是指不同種微生物或其代謝產(chǎn)物組成的疫苗,聯(lián)苗可簡化接種程序, 減少接種動物應(yīng)激反應(yīng)的次數(shù),此外對于產(chǎn)蛋雞,尤其是種雞應(yīng)盡可能避免或減 少在產(chǎn)蛋期間做免疫接種,而雞新城疫、禽流感二聯(lián)滅活疫苗使用劑量與單苗 相當,但其效力與單苗相同,具有使用簡便、接種程序簡單等優(yōu)點,減少疫苗的 免疫次數(shù),避免家禽產(chǎn)生不必要的應(yīng)激,達到事半功倍的效果,聯(lián)苗復(fù)配最關(guān) 鍵的是抗原最佳配比問題。
發(fā)明內(nèi)容
為了解決現(xiàn)有技術(shù)不足,本發(fā)明的目的是提供一種雞新城疫、H9亞型禽流 感二聯(lián)滅活疫苗的制備方法,以預(yù)防目前雞新城疫、禽流感H9亞型引起的發(fā)病率高、死亡率高的問題,使二種抗原間的免疫干擾盡最大可能降低,降低畜禽 死亡率,減少養(yǎng)殖專業(yè)戶的損失,造福人類。
為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的,本發(fā)明采用如下技術(shù)方案
所述雞新城疫、H9亞型禽流感二聯(lián)滅活疫苗的制備方法,其制備步驟為
① 、生產(chǎn)用毒種的制備將NDV La Sota株用滅菌的生理鹽水作10—4稀釋, 將AIVHL株毒種用滅菌的生理鹽水作1(T3稀釋,分別接種9 10日齡SPF雞胚, 孵育,收獲;
② 、制苗用病毒液的制備將NDV La Sota株生產(chǎn)毒種用滅菌的生理鹽水 作10—4稀釋,將AIVHL株生產(chǎn)毒種用滅菌的生理鹽水作10—3稀釋,分別接種9 IO日齡易感雞胚,孵育,收獲。收獲的病毒液分別作2倍濃縮、滅活;
◎、取滅活的濃縮2倍NDV La Sota株病毒液和AIV HL株病毒液等量混合, 取混合后的病毒液97 99份(體積份),加入吐溫-80 1 3份(體積份),混合制 成水相;取白油96份(體積份)、司本-80 4份(體積份)、硬脂酸鋁2份(體積份) 制成油相;
、將水相與油相混合,混合之比為1:1.5 2.5, 一起混合乳化,分裝, 貼簽,裝箱、入庫。
所述對病毒液進行濃縮是指采用纖維膜超濾濃縮法,該方法可提高免疫抗 原在疫苗終產(chǎn)品的濃度達2倍以上,纖維膜超濾濃縮裝置,設(shè)有二級孔徑不同 的纖維濾柱, 一級濾柱的纖維可濾除部分細菌和雜質(zhì),二級超濾株的中空纖維 可截留病毒粒子。
所述滅活是對NDV La sota和AIVHL株采用0. 05 0. 15%甲醛溶液,在35 38"C進行12 17小時滅活。
本發(fā)明所采用的NDV La Sota株、AIV HL株毒種均購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。
由于采用了上述的技術(shù)方案,本發(fā)明具有如下積極效果① 、其濃縮工藝可提高免疫抗原在疫苗終產(chǎn)品的濃度,本發(fā)明經(jīng)過長期實驗 采用纖維膜超濾濃縮法,可是使效價達大幅提高。
② 、本發(fā)明中NDVLa sota和AIVHL株采用0. 05 0. 15%甲醛溶液,在35 38'C滅活12 17小時,可徹底滅活病毒,并不影響其免疫原性。
③ 、本發(fā)明采用的佐劑是白油、吐溫-80、司盤-80等。實驗證明含油相和水 相乳化劑的疫苗比僅含油相的疫苗免疫效果好,可使抗原充分混合均勻,不易 分層,在37"C條件下更穩(wěn)定,黏度也低。
具體實施例方式
實施例1:
雞新城疫、H9亞型禽流感二聯(lián)滅活疫苗的制備方法,其制備步驟為 ①、生產(chǎn)用毒種的制備將NDV La Sota株用滅菌的生理鹽水作10—4稀釋, 將AIV HL株毒種用滅菌的生理鹽水作10—3稀釋,分別接種9 10日齡SPF雞胚, 孵育,收獲;②、制苗用病毒液的制備將NDV La Sota株生產(chǎn)毒種用滅菌的 生理鹽水作10—4稀釋,將AIV HL株生產(chǎn)毒種用滅菌的生理鹽水作10—3稀釋,分 別接種9 10日齡易感雞胚,孵育,收獲,對收獲的病毒液分別采用纖維膜超濾 濃縮法,作2倍濃縮,對NDV La sota和AIVHL株采用0. 05%甲醛溶液,在35 。C進行17小時滅活;③、取滅活的濃縮2倍NDV La Sota株病毒液和AIV HL 株病毒液等量混合,取混合后的病毒液97(體積份)份,加入吐溫-80 3份(體 積份),混合制成水相;取白油96份(體積份)、司本-804份(體積份)、硬脂酸 鋁2份(體積份)制成油相;④、將水相與油相混合,混合之比為1:1.5, 一起混 合乳化,分裝,貼簽,裝箱、入庫。 實施例2:
雞新城疫、H9亞型禽流感二聯(lián)滅活疫苗的制備方法,其制備步驟為 、生產(chǎn)用毒種的制備將NDV La Sota株用滅菌的生理鹽水作10—4稀釋, 將AIV HL株毒種用滅菌的生理鹽水作10—3稀釋,分別接種9 10日齡SPF雞胚, 孵育,收獲;②、制苗用病毒液的制備將NDV La Sota株生產(chǎn)毒種用滅菌的生理鹽水作10—4稀釋,將AIV HL株生產(chǎn)毒種用滅菌的生理鹽水作10—3稀釋,分 別接種9 10日齡易感雞胚,孵育,收獲,對收獲的病毒液分別采用纖維膜超濾 濃縮法,作2倍濃縮,對NDVLasota和AIVHL株采用O. 1%甲醛溶液,在37°。 進行16小時滅活;③、取滅活的濃縮2倍NDV La Sota株病毒液和AIV HL株 病毒液等量混合,取混合后的病毒液98(體積份)份,加入吐溫-80 2份(體積份), 混合制成水相;取白油96份(體積份)、司本-80 4份(體積份)、硬脂酸鋁2份(體 積份)制成油相;④、將水相與油相混合,混合之比為1:2.0, 一起混合乳化, 分裝,貼簽,裝箱、入庫。 實施例3:
雞新城疫、H9亞型禽流感二聯(lián)滅活疫苗的制備方法,其制備步驟為 ①、生產(chǎn)用毒種的制備將NDV La Sota株用滅菌的生理鹽水作10—4稀釋, 將AIVHL株毒種用滅菌的生理鹽水作10—3稀釋,分別接種9 10日齡SPF雞胚, 孵育,收獲;②、制苗用病毒液的制備將NDV La Sota株生產(chǎn)毒種用滅菌的 生理鹽水作10—4稀釋,將AIV HL株生產(chǎn)毒種用滅菌的生理鹽水作10—3稀釋,分 別接種9 10日齡易感雞胚,孵育,收獲,對收獲的病毒液分別采用纖維膜超濾 濃縮法,作2倍濃縮,對NDV La sota和AIVHL株采用0. 15%甲醛溶液,在38 。C進行14小時滅活;③、取滅活的濃縮2倍NDV La Sota株病毒液和AIV HL 株病毒液等量混合,取混合后的病毒液99(體積份)份,加入吐溫-80 1份(體積 份),混合制成水相;取白油96份(體積份)、司本-80 4份(體積份)、硬脂酸鋁 2份(體積份)制成油相;@、將水相與油相混合,混合之比為1:2.5, 一起混合 乳化,分裝,貼簽,裝箱、入庫。
權(quán)利要求
1、雞新城疫、H9亞型禽流感二聯(lián)滅活疫苗的制備方法,其特征是,其制備步驟為①、生產(chǎn)用毒種的制備將NDV La Sota株用滅菌的生理鹽水作10-4稀釋,將AIV HL株毒種用滅菌的生理鹽水作10-3稀釋,分別接種9~10日齡SPF雞胚,孵育,收獲;②、制苗用病毒液的制備將NDV La Sota株生產(chǎn)毒種作用滅菌的生理鹽水作10-4稀釋,將AIV HL株生產(chǎn)毒種作用滅菌的生理鹽水作10-3稀釋,分別接種9~10日齡易感雞胚,孵育,收獲;收獲的病毒液分別作2倍濃縮、滅活;③、取滅活的濃縮2倍NDV La Sota株病毒液和AIV HL株病毒液等量混合,取混合后的病毒液97~99(體積份)份,加入吐溫-80 1~3份(體積份),混合制成水相;取白油96份(體積份)、司本-804份(體積份)、硬脂酸鋁2份(體積份)制成油相;④、將水相與油相混合,混合之比為1∶1.5~2.5,一起混合乳化,分裝,貼簽,裝箱、入庫。
2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的雞新城疫、H9亞型禽流感二聯(lián)滅活疫苗的制備方 法,其特征在于所述滅活是對NDV La sota和AIVHL株采用0. 05 0. 15%甲 醛溶液,在35 38"C進行12 17小時滅活。
全文摘要
雞新城疫、H9亞型禽流感二聯(lián)滅活疫苗的制備方法,其特征是,其制備步驟為①生產(chǎn)用毒種的制備②制苗用病毒液的制備③取滅活的濃縮2倍NDV La Sota株病毒液和AIV HL株病毒液等量混合,取混合后的病毒液97~99(體積份)份,加入吐溫-80 1~3份(體積份),混合制成水相;取白油96份(體積份)、司本-80 4份(體積份)、硬脂酸鋁2份(體積份)制成油相;④將水相與油相混合,混合之比為1∶1.5~2.5,一起混合乳化即制成。該方法制成的禽流感二聯(lián)滅活疫苗能有效解決預(yù)防目前雞新城疫、禽流感H9亞型引起的發(fā)病,并且效果好等優(yōu)點。
文檔編號A61K39/295GK101607084SQ20081005004
公開日2009年12月23日 申請日期2008年6月18日 優(yōu)先權(quán)日2008年6月18日
發(fā)明者喬榮岑, 習(xí)向鋒, 孫進忠, 榮駿弓, 閔亞杰 申請人:洛陽普萊柯生物工程有限公司