專利名稱：：一種短葉蘇木酚固體脂質(zhì)納米粒的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種藥品及其制備方法，具體涉及一種短葉蘇木酚固體脂質(zhì)納米粒的制備方法。
背景技術(shù)：
：大戟科葉下珠屬(Phyllanthus)植物在全世界有600余種，自1982年印度學(xué)者Thyagarjan等發(fā)現(xiàn)珠子草(PhyllanthusniruriL.)在體外具有殺滅乙肝病毒活性。葉下珠屬植物在我國(guó)有33種，陜西省葉下珠屬植物有兩種，即葉下珠(PhyllanthusurinariaL)和黃珠子草(P.simplexRetz.)，主要分布于陜南，黃珠子草又稱珍珠草、地珍珠等，最早收載于《生草藥性備要》中，具有平肝、清熱、利水、解毒之功效，用于治療腸炎、肝炎、尿路感染、無(wú)名腫痛等。目前人們己經(jīng)從黃珠子草中分離出十幾個(gè)化合物，對(duì)這些化合物進(jìn)行了結(jié)構(gòu)鑒定及抗病毒作用的篩選，結(jié)果顯示，其所含的短葉蘇木酚(brevifolin，BF)有很好的抗病毒效果。短葉蘇木酚屬于沒(méi)食子酸型多酚類成分，有報(bào)道具有抗氧化及保肝作用。固體脂質(zhì)納米粒(Solidlipidnanoparticles,SLN)是近年正在發(fā)展的一種新型毫微粒類給藥系統(tǒng)，以固態(tài)的天然或合成的類脂，如卵磷脂、三酰甘油等為載體，將藥物包裹于類脂核中制成粒徑約為501000nm的固體膠粒給藥體系，是一種極有發(fā)展前景的新型給藥系統(tǒng)的載體。藥物由于被包封于SLN的固體骨架中，其實(shí)現(xiàn)了生理相容性好、可控制藥物釋放及良好的耙向性，既具備聚合物納米粒物理穩(wěn)定性高、藥物泄漏慢的優(yōu)勢(shì)，又兼具了脂質(zhì)體、乳劑的毒性低、能大規(guī)模生產(chǎn)的優(yōu)點(diǎn)。由于在制備過(guò)程中I^T大規(guī)模生產(chǎn)的基礎(chǔ)，使SLN較聚合物納米粒更具有吸引力。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種短葉蘇木酚固體脂質(zhì)納米粒的制備方法。為達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是首先取5060mg的硬脂酸、120130mg的卵磷脂和7080mg的短葉蘇木酚溶解于80120mL的無(wú)水乙醇中形成有機(jī)相溶液；然后將有機(jī)相溶液置于梨形瓶中，在35。C以2000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，形成均勻的有機(jī)相薄膜；再取1020mL的甘油分散于2030mL的蒸餾水中在7080。C的恒溫磁力攪拌的下形成水相，將708(TC的水相溶液加入燒瓶中，攪拌23小時(shí)，使有機(jī)相薄膜中的脂質(zhì)膜全部從瓶壁轉(zhuǎn)移入水相形成乳白色混懸液，超聲處理510分鐘，攪拌至室溫得短葉蘇木酚固體脂質(zhì)納米?；鞈殷w系，過(guò)濾，即得。按照本發(fā)明的制備方法得到的短葉蘇木酚固體脂質(zhì)納米粒不僅能增加短葉蘇木酚的溶解性、穩(wěn)定性，而且更重要的是具有靶向性，從而減少用藥劑量，降低毒副作用，提高生物利用度。圖1是按本發(fā)明制備方法得到的短葉蘇木酚固體脂質(zhì)納米粒電鏡掃描圖(X100000);圖2是本發(fā)明的短葉蘇木酚固體脂質(zhì)納米粒累積釋放度百分率與時(shí)間關(guān)系(n-6)，其中橫坐標(biāo)為累積釋放度，縱坐標(biāo)為時(shí)間。具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。實(shí)施例l，首先取50mg的硬脂酸、130mg的卵磷脂和70mg的短葉蘇木酚溶解于90mL的無(wú)水乙醇中形成有機(jī)相溶液；然后將有機(jī)相溶液置于梨形瓶中，在35'C以2000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，形成均勻的有機(jī)相薄膜；再取18mL的甘油分散于30mL的蒸餾水中在75i:的恒溫磁力攪拌的下形成水相，將75'C的水相溶液加入燒瓶中，攪拌23小時(shí)，使有機(jī)相薄膜中的脂質(zhì)膜全部從瓶壁轉(zhuǎn)移入水相形成乳白色混懸液，超聲處理5IO分鐘，攪拌至室溫得短葉蘇木酚固體脂質(zhì)納米?；鞈殷w系，冷凍干燥即得。實(shí)施例2，首先取52mg的硬脂酸、127mg的卵磷脂和75mg的短葉蘇木酚溶解于120mL的無(wú)水乙醇中形成有機(jī)相溶液；然后將有機(jī)相溶液置于梨形瓶中，在35'C以2000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，形成均勻的有機(jī)相薄膜；再取15mL的甘油分散于26mL的蒸餾水中在72'C的恒溫磁力攪拌的下形成水相，將72'C的水相溶液加入燒瓶中，攪拌23小時(shí)，使有機(jī)相薄膜中的脂質(zhì)膜全部從瓶壁轉(zhuǎn)移入水相形成乳白色混懸液，超聲處理5IO分鐘，攪拌至室溫得短葉蘇木酚固體脂質(zhì)納米?；鞈殷w系，冷凍干燥即得。實(shí)施例3，首先取55mg的硬脂酸、123mg的卵磷脂和80mg的短葉蘇木酚溶解于80mL的無(wú)水乙醇中形成有機(jī)相溶液；然后將有機(jī)相溶液置于梨形瓶中，在35-C以2000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，形成均勻的有機(jī)相薄膜；再取lOmL的甘油分散于24mL的蒸餾水中在8(TC的恒溫磁力攪拌的下形成水相，將80'C的水相溶液加入燒瓶中，攪拌23小時(shí)，使有機(jī)相薄膜中的脂質(zhì)膜全部從瓶壁轉(zhuǎn)移入水相形成乳白色混懸液，超聲處理5IO分鐘，攪拌至室溫得短葉蘇木酚固體脂質(zhì)納米?；鞈殷w系，冷凍干燥即得。實(shí)施例4，首先取58mg的硬脂酸、120mg的卵磷脂和73mg的短葉蘇木酚溶解于lOOmL的無(wú)水乙醇中形成有機(jī)相溶液；然后將有機(jī)相溶液置于梨形瓶中，在35'C以2000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，形成均勻的有機(jī)相薄膜；再取20mL的甘油分散于28mL的蒸餾水中在78"C的恒溫磁力攪拌的下形成水相，將78"C的水相溶液加入燒瓶中，攪拌23小時(shí)，使有機(jī)相薄膜中的脂質(zhì)膜全部從瓶壁轉(zhuǎn)移入水相形成乳白色混懸液，超聲處理5io分鐘，攪拌至室溫得短葉蘇木酚固體脂質(zhì)納米?；鞈殷w系，冷凍干燥即得。實(shí)施例5，首先取60mg的硬脂酸、125mg的卵磷脂和78mg的短葉蘇木酚溶解于llOmL的無(wú)水乙醇中形成有機(jī)相溶液；然后將有機(jī)相溶液置于梨形瓶中，在35-C以2000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，形成均勻的有機(jī)相薄膜；再取13mL的甘油分散于20mL的蒸餾水中在7(TC的恒溫磁力攪拌的下形成水相，將7(TC的水相溶液加入燒瓶中，攪拌23小時(shí)，使有機(jī)相薄膜中的脂質(zhì)膜全部從瓶壁轉(zhuǎn)移入水相形成乳白色混懸液，超聲處理5IO分鐘，攪拌至室溫得短葉蘇木酚固體脂質(zhì)納米粒混懸體系，冷凍干燥即得。一、制備方法篩選1、注入超聲法稱取硬脂酸50mg、卵磷脂120mg、短葉蘇木酚80mg溶解于80mL無(wú)水乙醇中，形成有機(jī)相溶液。量取15mL甘油分散于蒸餾水25mL中形成水相。將水相置于恒溫磁力攪拌器上，溫度為80'C，將有機(jī)相注入水相中，攪拌2小時(shí)，使成乳狀混懸液。超聲處理5分鐘，攪拌至室溫得SLN水分散體。2、本發(fā)明制備方法稱取硬脂酸50mg、卵磷脂120mg、短葉蘇木酚80mg溶解于80ml無(wú)水乙醇中形成有機(jī)相溶液。置于梨形瓶中，減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，形成均勻的有機(jī)相薄膜。量取15mL甘油分散于25mL蒸餾水中形成水相。在恒溫磁力攪拌的條件下，將8(TC的水相溶液加入燒瓶中，攪拌2小時(shí)，使脂質(zhì)膜全部從瓶壁轉(zhuǎn)移入水相，充分溶脹水和形成乳白色混懸液，超聲處理5分鐘，攪拌至室溫得短葉蘇木酚固體脂質(zhì)納米粒混懸體系。4"C保存?zhèn)溆谩?、方法比較結(jié)果分別取注入超聲法和本發(fā)明制備方法得到的短葉蘇木酚固體脂質(zhì)納米粒，對(duì)其有關(guān)性狀進(jìn)行比較，結(jié)果表明，本發(fā)明的制備方法較好(見(jiàn)表1)。表1注入超聲法與本發(fā)明制備方法的結(jié)果比較Table1Comparisonofethyletheraffluxandfilmsupersound制備方法注入超聲法本發(fā)明的制備方法外觀乳白色混懸液乳白色混懸液穩(wěn)定性易聚集、沉降較快不易沉降顯微觀察結(jié)果粒徑大，不均勻粒徑小，均勻~二、載體材料的選擇和分析根據(jù)研究報(bào)道，目前對(duì)固體脂質(zhì)納米粒載體選擇分別采用硬脂酸、單硬脂酸甘油酯、膽固醇等三種類型，其中多采用生理相容的高熔點(diǎn)脂質(zhì)為骨架材料制備固體脂質(zhì)納米粒，固體脂質(zhì)納米粒在室溫下呈固態(tài)，既具備聚合物納米粒物理穩(wěn)定性高，藥物泄漏小的優(yōu)勢(shì)，又兼具了脂質(zhì)體和乳劑的低毒性、能大規(guī)模生產(chǎn)的優(yōu)點(diǎn)。結(jié)合短葉蘇木酚的藥物特性和表面活性劑的HLB值，本發(fā)明初步將制備短葉蘇木酚固體脂質(zhì)納米粒的輔料選定為骨架材料為硬脂酸、單硬脂酸甘油酯、膽固醇，表面活性劑為卵磷脂，輔助表面活性劑為甘油。通過(guò)預(yù)試驗(yàn)分析確定，影響固體脂質(zhì)納米粒形態(tài)、粒度分布及包封率的主要因素為載體用量(A)、主藥短葉蘇木酚用量(B)、乳化劑卵磷脂用量(C)，水相溶劑蒸餾水(D)用量四個(gè)因素，以包封率為考察指標(biāo)，采用L9(34)正交表(見(jiàn)表2)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)來(lái)優(yōu)化制備工藝，對(duì)結(jié)果進(jìn)行直觀和方差分析。表2因素與水平Table2FactorsandLevels水平因素<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>1.膽固醇為載體的處方優(yōu)化結(jié)果見(jiàn)表3。對(duì)表的結(jié)果進(jìn)行直觀分析，包封率的影響因素大小為C〉A(chǔ)>B〉D，最優(yōu)搭配為AAdDi。經(jīng)方差分析(見(jiàn)表4)，C因素的影響有顯著性意義，而A、B、D因素對(duì)包封率無(wú)顯著性影響。考慮到包封率這一指標(biāo)的重要性，故確定最優(yōu)處方為AAdD"即膽固醇55mg、短葉蘇木酚75mg、卵磷脂125mg、蒸餾水100mL。表3膽固醇為載體正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果Table2Orthogonaldesignandresults<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>2.單硬脂酸甘油酯為載體的處方優(yōu)化結(jié)果見(jiàn)表5。表5單硬脂酸甘油酯為載體正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果Table5Orthogonaldesignandresults<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>實(shí)驗(yàn)號(hào)單硬脂酸甘短葉蘇木酚豆磷脂mg蒸餾水mL%<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>對(duì)上表的結(jié)果進(jìn)行直觀分析，包封率的影響因素大小為A>C>B>D，最優(yōu)搭配為A&CA。經(jīng)方差分析(見(jiàn)表6)，A、B、C、D因素對(duì)包封率無(wú)顯著性影響。考慮到包封率這一指標(biāo)的重要性，故確定最優(yōu)處方為A2B2CA，即單硬脂酸甘油酯55mg、短葉蘇木酚75mg、卵磷脂125mg、蒸餾水lOOmL。表6單硬脂酸甘油酯為載體方差分析表Table6VarianceAnalysis<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>3.硬脂酸為載體的處方優(yōu)化結(jié)果見(jiàn)表7。表7硬脂酸為載體正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>對(duì)上表的結(jié)果進(jìn)行直觀分析，包封率的影響因素大小為C〉A(chǔ)〉B〉D，最優(yōu)搭配為A^CAo經(jīng)方差分析(見(jiàn)表8)，A、C因素的影響有顯著性意義，而B(niǎo)、D因素對(duì)包封率無(wú)顯著性影響?？紤]到包封率這一指標(biāo)的重要性，故確定最優(yōu)處方為A^CA,即硬脂酸55mg、卵磷脂125mg、短葉蘇木酚75mg、蒸餾水100mL。表8方差分析表Table4-38VarianceAnalysis<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>4.載體的選擇確定每種載體的最佳配方后，按照此配方分別制備短葉蘇木酚固體脂質(zhì)納米粒，以包封率以及7天后包封率下降程度(穩(wěn)定性)為考察指標(biāo)，選擇最佳載體，數(shù)據(jù)見(jiàn)表9。表9包封率及7天后包封率數(shù)據(jù)表<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>綜合比較包封率、穩(wěn)定性、正交實(shí)驗(yàn)顯著性的因素，確定最佳載體為硬脂酸，最佳配方為硬脂酸55mg、卵磷脂125mg、短葉蘇木酚75mg、蒸餾水100mL。三、質(zhì)量分析1.形態(tài)觀察取優(yōu)化條件下制得的短葉蘇木酚固體脂質(zhì)納米粒，取適量滴加在銅網(wǎng)上，用2%磷鎢酸負(fù)染，自然揮干，使粒子在銅網(wǎng)上沉積，透射電鏡觀察形態(tài)并照相，短葉蘇木酚固體脂質(zhì)納米粒大小均勻，呈球形或類球形(見(jiàn)圖1)，粒徑在40150nm之間。2.體外釋藥分析參見(jiàn)圖2，以磷酸鹽緩沖液(pH6.8)為溶出介質(zhì)，采用動(dòng)態(tài)透析法溶出測(cè)定進(jìn)行體外釋藥特性研究。精密稱取2ml短葉蘇木酚固體脂質(zhì)納米粒，分別放入處理過(guò)的透析袋中，透析袋兩端用線扎緊至不滲漏，精密量取溶出介質(zhì)各50mL，分別放入100mL燒杯中，平行操作；將裝藥透析袋移入裝有溶出介質(zhì)的燒杯中，保持漏槽狀態(tài)，密封杯口；將燒杯置于恒溫震蕩器內(nèi)，設(shè)置溫度為37。C，水平震蕩頻率為140次/min于0.5，1，2，4，6，8，10，12，24和36h取樣，分別將燒杯內(nèi)的溶出介質(zhì)全部取出，再加入50mL新的同種介質(zhì)繼續(xù)恒溫震蕩，考察體外釋放規(guī)律，將取出的溶出介質(zhì)經(jīng)0.45um的微孔濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液進(jìn)高效液相色譜柱，按測(cè)定含藥量色譜條件測(cè)定制劑在不同溶出介質(zhì)中的累積釋放度(Q)百分率，體外釋放曲線見(jiàn)圖2，短葉蘇木酚固體脂質(zhì)納米粒中藥物的釋放表現(xiàn)為雙相模式，釋放后6h內(nèi)存在突釋現(xiàn)象，接著釋放逐漸變慢，然后趨于平緩。權(quán)利要求1.一種短葉蘇木酚固體脂質(zhì)納米粒的制備方法，其特征在于1)首先取50～60mg的硬脂酸、120～130mg的卵磷脂和70～80mg的短葉蘇木酚溶解于80～120mL的無(wú)水乙醇中形成有機(jī)相溶液；2)然后將有機(jī)相溶液置于梨形瓶中，在35℃以2000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，形成均勻的有機(jī)相薄膜；3)再取10～20mL的甘油分散于20～30mL的蒸餾水中在70～80℃的恒溫磁力攪拌的下形成水相，將70～80℃的水相溶液加入燒瓶中，攪拌2～3小時(shí)，使有機(jī)相薄膜中的脂質(zhì)膜全部從瓶壁轉(zhuǎn)移入水相形成乳白色混懸液，超聲處理5～10分鐘，攪拌至室溫得短葉蘇木酚固體脂質(zhì)納米?；鞈殷w系，冷凍干燥即得。全文摘要一種短葉蘇木酚固體脂質(zhì)納米粒的制備方法，首先取硬脂酸、卵磷脂和短葉蘇木酚溶解無(wú)水乙醇中形成有機(jī)相溶液；然后將有機(jī)相溶液置于梨形瓶中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，形成均勻的有機(jī)相薄膜；再取甘油分散于蒸餾水中在恒溫磁力的攪拌下形成水相，將水相溶液加入燒瓶中，攪拌使有機(jī)相薄膜中的脂質(zhì)膜全部從瓶壁轉(zhuǎn)移入水相形成乳白色混懸液，超聲處理，攪拌至室溫得短葉蘇木酚固體脂質(zhì)納米粒混懸體系，冷凍干燥即得。按照本發(fā)明的制備方法得到的短葉蘇木酚固體脂質(zhì)納米粒不僅能增加短葉蘇木酚的溶解性、穩(wěn)定性，而且更重要的是具有靶向性，從而減少用藥劑量，降低毒副作用，提高生物利用度。文檔編號(hào)A61P31/12GK101278897SQ20081001804公開(kāi)日2008年10月8日申請(qǐng)日期2008年4月25日優(yōu)先權(quán)日2008年4月25日發(fā)明者曾愛(ài)國(guó),李維鳳,牛曉峰,賀浪沖申請(qǐng)人:西安交通大學(xué)