專(zhuān)利名稱(chēng)：氮雜環(huán)丁酮衍生物及其使用方法
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發(fā)明領(lǐng)域 本發(fā)明涉及治療或預(yù)防脂質(zhì)代謝障礙、疼痛、糖尿病、血管病癥、脫髓鞘作用或非酒精性脂肪肝疾病的方法，該方法包括施用下式的化合物
(I) 或其藥學(xué)可接受的鹽、溶劑合物、酯、前藥或立體異構(gòu)體，其中 R1和R2定義于本文表1-6中，并且 R3為-苯基、-4-氯苯基、-2-吡啶基或-3-吡啶基。

背景技術(shù)：
慢性疼痛尤其是發(fā)炎及神經(jīng)疼痛的治療，為尚不符合醫(yī)學(xué)需求的領(lǐng)域。神經(jīng)痛是導(dǎo)致涉及痛覺(jué)敏化作用的神經(jīng)元過(guò)度激化的神經(jīng)傷害。T-電流(T-currents)存在于疼痛路徑的神經(jīng)元中。T-型鈣通道阻斷劑在臨床前的神經(jīng)疼痛模型中有效。瞬時(shí)受體電位V1(TRPV1)是一種非特異性的陽(yáng)離子通道，其活化作用會(huì)導(dǎo)致疼痛尤其是發(fā)炎性疼痛，以及痛覺(jué)過(guò)敏(hyperalgesia)，并且在咳嗽和膀胱功能中發(fā)揮作用。
II型糖尿病(亦稱(chēng)為非胰島素依賴(lài)性糖尿病)為進(jìn)行性疾病，其特征為受損的葡萄糖代謝導(dǎo)致血糖量升高。罹患II型糖尿病的患者呈現(xiàn)受損的胰腺β-細(xì)胞功能，導(dǎo)致在對(duì)高血糖信號(hào)的響應(yīng)中胰腺β-細(xì)胞無(wú)法分泌適量胰島素，以及在其標(biāo)靶組織對(duì)胰島素作用具有抗性(胰島素抗性)。
II型糖尿病現(xiàn)有治療法著眼于反轉(zhuǎn)胰島素抗性(reverse insulinresistance)、控制腸內(nèi)葡萄糖吸收、使肝臟葡萄糖產(chǎn)出正?；约案纳痞?細(xì)胞葡萄糖感知和胰島素分泌?；酋ｋ孱?lèi)口服抗高血糖藥可促進(jìn)胰島素從胰腺β-胰島細(xì)胞的分泌，但因其作用與葡萄糖量無(wú)關(guān)，因此具有造成低血糖癥的可能性?？垢哐撬幇ㄍㄟ^(guò)抑制糖質(zhì)生成作用降低肝臟葡萄糖產(chǎn)生的胰島素敏化劑；抑制復(fù)合碳水化合物分解因而延緩葡萄糖吸收并降低飯后葡萄糖和胰島素峰值的α-糖苷酶抑制劑；以及改善胰島素作用并降低胰島素抗性的噻唑烷二酮。隨著時(shí)間的流逝，約一半的II型糖尿病患者喪失其對(duì)此類(lèi)藥物質(zhì)的反應(yīng)。由于目前治療上的缺點(diǎn)，因此高度需要II型糖尿病的新穎療法。
GRP119為主要在胰腺β-胰島細(xì)胞中表達(dá)的結(jié)構(gòu)活性的G-蛋白質(zhì)。通過(guò)激動(dòng)劑使GRP119活化將以與葡萄糖依賴(lài)性方式增加胰島素從胰腺β-胰島細(xì)胞的釋放。因此GRP119的激動(dòng)劑提供了使II型糖尿病患者在對(duì)飯后血液葡萄糖量升高應(yīng)答中使血液葡萄糖量正常化的潛能，但并不預(yù)期刺激飯前或禁食狀態(tài)的胰島素釋放。
尼曼-皮克C1-樣(Niemann Pick C1-like)(NPC1L1)已被確認(rèn)為膽固醇吸收的關(guān)鍵調(diào)節(jié)劑。已確定膽固醇吸收抑制劑依澤替米貝(ezetimibe)可靶向NPC1L1。
已揭示用氮雜環(huán)丁酮衍生物治療脂質(zhì)代謝障礙、糖尿病、血管病癥、脫髓鞘作用和非酒精性脂肪肝疾病。抑制小腸中膽固醇吸收的氮雜環(huán)丁酮衍生物是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的，并且描述于例如US RE 37,721；US5,631,356；US 5,767,115；US 5,846,966；US 5,698,548；US 5,633,246；US 5,656,624；US 5,624,920；US 5,688,787；US 5,756,470；US公開(kāi)號(hào)2002/0137689；WO 02/066464；WO 95/08522和WO96/19450中。前述公開(kāi)各自并入本文供參考?，F(xiàn)有技術(shù)顯示此類(lèi)化合物可通過(guò)單獨(dú)施用此類(lèi)化合物或者與第二化合物如膽固醇生物合成抑制劑一起施用而用于治療例如冠狀動(dòng)脈粥樣硬化疾病。
WO 2005/000217描述治療血脂異常的組合療法，其包括組合施用抗肥胖劑和抗血脂異常劑。WO 2004/110375描述治療糖尿病的組合療法，其包括組合施用抗肥胖劑和抗糖尿病劑。US 2004/0122033描述治療肥胖的組合療法，其包括組合施用食欲抑制劑和/或代謝速率促進(jìn)劑和/或營(yíng)養(yǎng)吸收抑制劑。US 2004/0229844描述治療動(dòng)脈粥狀硬化的組合療法，其包括組合施用煙酸或另一煙酸受體激動(dòng)劑和DP受體拮抗劑。還已知一種通過(guò)施用有效量的治療組合物以治療哺乳動(dòng)物非酒精性脂肪肝疾病的方法，所述治療組合物包括至少一種膽固醇降低劑和/或至少一種H3受體拮抗劑/逆激動(dòng)劑。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明涉及一種治療或預(yù)防脂質(zhì)代謝障礙、疼痛、糖尿病、血管病癥、脫髓鞘作用或非酒精性脂肪肝疾病(各稱(chēng)為″病癥″)的方法，該方法包括施用下式的化合物
(I) 或其藥學(xué)可接受的鹽、溶劑合物、酯、前藥或立體異構(gòu)體，其中 R1和R2定義于本文表1-6中，并且 R3為-苯基、-4-氯苯基、-2-吡啶基或-3-吡啶基。
在一方面，本發(fā)明涉及治療或預(yù)防患者病癥的方法，其包括給患者施用有效量的下式(IA)的化合物
(IA) 或其藥學(xué)可接受的鹽、溶劑合物、酯、前藥或立體異構(gòu)體， 其中R1和R2是如下表1所述使用″X(qián)″表示的 表1
表1(續(xù))
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表1(續(xù))
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其中R1定義于表5中 表5
其中Z代表從R1至其所連接的氮原子間的鍵； R2定義于下表6中 表6
表6(續(xù))
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表6(續(xù))
表6(續(xù))
表6(續(xù))
表6(續(xù))
表6(續(xù))
并且其中Z代表從R2至其所連接的氮原子間的鍵。
在另一方面，本發(fā)明涉及治療或預(yù)防患者病癥的方法，其包括給患者施用有效量的下式(IB)的化合物
(IB) 或其藥學(xué)可接受的鹽、溶劑合物、酯、前藥或立體異構(gòu)體， 其中R1定義于上述表5中，R2定義于上述表6中，并且式(IB)的化合物中的R1和R2的意義是使用下表2中所列的”X”表示的 表2
表2(續(xù))
表2(續(xù))
表2(續(xù))
表2(續(xù))
表2(續(xù))
表2(續(xù))
表2(續(xù))
表2(續(xù))
在另一方面，本發(fā)明涉及治療或預(yù)防患者病癥的方法，其包括給患者施用有效量的下式(IC)的化合物
(IC) 或其藥學(xué)可接受的鹽、溶劑合物、酯、前藥或立體異構(gòu)體， 其中R1定義于上述表5中，R2定義于上述表6中，并且式(IC)的化合物中的R1和R2的意義是使用下表3中所列的”X”表示的 表3
表3(續(xù))
表3(續(xù))
表3(續(xù))
表3(續(xù))
表3(續(xù))
在一方面，本發(fā)明涉及治療或預(yù)防患者病癥的方法，其包括給患者施用有效量的下式(ID)的化合物
(ID) 或其藥學(xué)可接受的鹽、溶劑合物、酯、前藥或立體異構(gòu)體， 其中R1定義于上述表5中，R2定義于上述表6中，并且式(ID)的化合物中的R1和R2的意義是使用下表4中所列的”X”表示的 表4
表4(續(xù))
表4(續(xù))
表4(續(xù))
表4(續(xù))
表4(續(xù))
表4(續(xù))
表4(續(xù))
表4(續(xù))
本發(fā)明所用的化合物是以式(IA)-(ID)描述的，并且是以表1-4中的″X(qián)″定義的。因此，表1-4中定義的化合物具有由R2欄和R1行的交叉形成的方格中的”X”所示的R1和R2的定義；并且屬本發(fā)明的范圍內(nèi)(亦即可用于本發(fā)明的方法中)。表1-4最左欄的數(shù)目代表表6中定義的R2基。表1-4中最上一行的數(shù)目代表表5中定義的R1基。表1-4的空白方格定義不屬于本發(fā)明范圍的化合物。
式(IA)-(ID)的化合物(″氮雜環(huán)丁酮衍生物″)可用于治療或預(yù)防病癥。
本發(fā)明還涉及治療或預(yù)防患者病癥的方法，其包括給患者施用有效量的氮雜環(huán)丁酮衍生物。
本發(fā)明進(jìn)一步涉及一種治療或預(yù)防患者病癥的方法，其包括給患者施用有效量的氮雜環(huán)丁酮衍生物和有效量的另一治療劑。
進(jìn)一步的意圖是，本發(fā)明的組合療法可以提供為一種藥盒，該藥盒在單包裝中包括至少一種在醫(yī)藥組合物中的氮雜環(huán)丁酮衍生物，以及包含至少一種額外治療劑的至少一種分開(kāi)的醫(yī)藥組合物。
發(fā)明詳述 定義和縮寫(xiě) 如上述及該公開(kāi)全文中所用的，下列術(shù)語(yǔ)除非另有說(shuō)明，否則應(yīng)理解具有下列有含義 ″至少一種″在表示氮雜環(huán)丁酮衍生物時(shí)，意指1至4種不同的氮雜環(huán)丁酮衍生物。在一個(gè)實(shí)施方案中，術(shù)語(yǔ)″至少一種″用于指定1種氮雜環(huán)丁酮衍生物。同樣的，當(dāng)″至少一種″與組合中所用的額外藥物連用時(shí)，意指1至4種額外的藥物。在一個(gè)實(shí)施方案中，術(shù)語(yǔ)″至少一種″用于指定1種額外藥物。
″患者″為人類(lèi)或非人類(lèi)哺乳動(dòng)物。在一個(gè)實(shí)施方案中，患者為人類(lèi)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，患者為非人類(lèi)哺乳動(dòng)物，包括(但不限于)猴、狗、狒狒、恒河猴、小鼠、大鼠、馬、貓或兔。在另一個(gè)實(shí)施方案中，患者為寵物動(dòng)物包括(但不限于)狗、貓、兔、馬或雪貂。在一個(gè)實(shí)施方案中，患者為狗。在另一個(gè)實(shí)施方案中，患者為貓。
術(shù)語(yǔ)″取代的″意指指定原子上的一個(gè)或多個(gè)氫被選自所示的基團(tuán)置換，但條件為在既存環(huán)境下不超過(guò)指定原子的正?；瘜W(xué)價(jià)，并且取代產(chǎn)生穩(wěn)定化合物。取代基和/或可變基團(tuán)的組合僅在該組合產(chǎn)生穩(wěn)定化合物下方可行?！宸€(wěn)定化合物″或″穩(wěn)定結(jié)構(gòu)″意指足夠穩(wěn)固，以從反應(yīng)混合物中可分離成可用純度，并且調(diào)配成有效治療劑的化合物。
術(shù)語(yǔ)″任選取代的″意指以特定基團(tuán)、殘基或部分任選取代。
用于化合物的術(shù)語(yǔ)″純化的″、″呈純化的形式″或″呈分離和純化的形式″是指該化合物從合成過(guò)程(例如從反應(yīng)混合物)或天然來(lái)源或其組合中分離后的物理狀態(tài)。因此，用于化合物的術(shù)語(yǔ)″純化的″、″呈純化的形式″或″呈分離和純化的形式″是指該化合物從本文所述或本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的純化過(guò)程或多個(gè)過(guò)程(例如色譜、重結(jié)晶等)獲得后的物理狀態(tài)，其純度足以以本文所述或本領(lǐng)域公知的標(biāo)準(zhǔn)分析技術(shù)表征。
還應(yīng)了解全文、反應(yīng)圖、實(shí)例和表中具有未滿足的化學(xué)價(jià)的任何碳以及雜原子均假設(shè)其具有足夠數(shù)目的氫原子以滿足其化學(xué)價(jià)。
當(dāng)化合物中的官能基稱(chēng)為″保護(hù)的″時(shí)，此意指該基為經(jīng)改質(zhì)的形式，以防止化合物進(jìn)行反應(yīng)時(shí)在保護(hù)的位置處發(fā)生不期望的副反應(yīng)。適宜的保護(hù)基為本領(lǐng)域技術(shù)人員所理解，并且可參考標(biāo)準(zhǔn)參考書(shū)例如T.W.Greene et al.，Protective Groups in organic Synthesis(1991)，Wiley，NewYork。
本文所用的術(shù)語(yǔ)″組合物″將涵蓋包括特定量的特定成分的產(chǎn)物，以及由特定量的特定成分的組合直接或間接形成的任何產(chǎn)物。
氮雜環(huán)丁酮衍生物的前藥和溶劑合物也是本文所考慮的。前藥的討論提供于T.Higuchi and V.Stella，Pro-drugs as Novel Delivery Systems(1987)14 of the A.C.S.Symposium Series，以及Bioreversible Carriers inDrug Design，(1987)Edward B.Roche，ed.，American PharmaceuticalAssociation and Pergamon Press中。術(shù)語(yǔ)″前藥″意指在體內(nèi)轉(zhuǎn)化以獲得氮雜環(huán)丁酮衍生物或其藥學(xué)可接受的鹽、溶劑合物、酯或前藥的化合物(例如藥物前體)。該轉(zhuǎn)化可通過(guò)各種機(jī)制(例如代謝或化學(xué)過(guò)程)發(fā)生，例如通過(guò)在血液中水解。使用前藥的討論提供于T.Higuchi and W.Stella，″Pro-drugs as Novel Delivery Systems，″Vol.14 of the A.C.S.SymposiumSeries，以及Bioreversible Carriers in Drug Design，ed.Edward B.Roche，American Pharmaceutical Association and Pergamon Press，1987。
例如，如果氮雜環(huán)丁酮衍生物或其藥學(xué)可接受的鹽、溶劑合物、酯、前藥或立體異構(gòu)體含有羧酸官能基，則前藥可包括通過(guò)以例如下列的基團(tuán)置換酸基的氫原子形成酯(C1-C8)烷基、(C2-C12)烷酰基氧基甲基、具有4至9個(gè)碳原子的1-(烷?；趸?乙基、具有5至10個(gè)碳原子的1-甲基-1-(烷?；趸?-乙基、具有3至6個(gè)碳原子的烷氧基羰基氧基甲基、具有4至7個(gè)碳原子的1-(烷氧基羰基氧基)乙基、具有5至8個(gè)碳原子的1-甲基-1-(烷氧基羰基氧基)乙基、具有3至9個(gè)碳原子的N-(烷氧基羰基)-氨基甲基、具有4至10個(gè)碳原子的1-(N-(烷氧基羰基)氨基)乙基、3-酞酰基、4-巴豆內(nèi)酯基(crotonolactonyl)、γ-丁內(nèi)酯-4-基、二-N，N-(C1-C2)烷基氨基(C2-C3)烷基(如β-二甲氨基乙基)、胺甲?；?(C1-C2)烷基、N，N-二(C1-C2)烷基胺甲?；?(C1-C2)烷基和哌啶基-或嗎啉基(C2-C3)烷基等。
同樣的，若氮雜環(huán)丁酮衍生物含有醇官能基，則可通過(guò)以例如下列的基團(tuán)置換醇基的氫原子形成前藥(C1-C6)烷酰基氧基甲基、1-((C1-C6)烷?；趸?乙基、1-甲基-1-((C1-C6)烷酰基氧基)乙基、(C1-C6)烷氧基羰基氧基甲基、N-(C1-C6)烷氧基羰基氨基甲基、丁二酰基、(C1-C6)烷酰基、α-氨基(C1-C4)烷基、芳基酰基和α-氨基?；颚?氨基?；?α-氨基?；渲懈鳓?氨基?；?dú)立地選自天然的L-氨基酸、P(O)(OH)2、-P(O)(O(C1-C6)烷基)2或糖基(從碳水化合物的半乙縮醛形式移除羥基所得的殘基)等。
若氮雜環(huán)丁酮衍生物含有胺官能基，則可通過(guò)以例如下列的基團(tuán)置換胺基中的氫原子形成前藥R-羰基、RO-羰基、NRR′-羰基(其中R和R′各自獨(dú)立地為(C1-C10)烷基、(C3-C7)環(huán)烷基、芐基，或R-羰基為天然α-氨基?；?、-C(OH)C(O)OY1(其中Y1為H、(C1-C6)烷基或芐基)、-C(OY2)Y3(其中Y2為(C1-C4)烷基且Y3為(C1-C6)烷基、羧基(C1-C6)烷基、氨基(C1-C4)烷基或單-N-或二-N，N-(C1-C6)烷基氨基烷基)、-C(Y4)Y5(其中Y4為H或甲基且Y5為單-N-或二-N，N-(C1-C6)烷基氨基嗎啉、哌啶-1-基或吡咯烷-1-基)等。
氮雜環(huán)丁酮衍生物可以非溶劑化以及與藥學(xué)可接受的溶劑如水、乙醇等的溶劑化形式存在，并且本發(fā)明欲意包含溶劑化和非溶劑化形式兩者?！迦軇┖衔铩逡庵副景l(fā)明化合物與一個(gè)或多個(gè)溶劑分子的物理締合。該物理締合包含各種程度的離子和共價(jià)結(jié)合，包含氫鍵結(jié)合。在某些例中，當(dāng)例如一個(gè)或多個(gè)溶劑分子并入結(jié)晶固體的晶格中時(shí)溶劑合物將可分離。″溶劑合物″包括溶液-相和可分離溶劑合物兩者。適宜溶劑合物的非限制性實(shí)例包括乙醇合物、甲醇合物等?！逅衔铩鍨槠渲腥軇┓肿訛镠2O的溶劑合物。
一種或多種氮雜環(huán)丁酮衍生物可任選轉(zhuǎn)化成溶劑合物。溶劑合物的制備通常為已知。因此例如M.Caira et al.，J.Pharmaceutical Sci.，93(3)，601-611(2004)描述在乙酸乙酯中以及從水中制備抗真菌氟康唑的溶劑合物。類(lèi)似地，溶劑合物、半溶劑合物、水合物等的制備描述于E.C.vanTonder et al.，AAPS PharmSciTech.，5(1)，article 12(2004)；以及A.L.Bingham et al.，Chem.Commun.，603-604(2001)。典型的、非限制過(guò)程包括含在高于環(huán)境溫度下將本發(fā)明的化合物溶于所需量的所需溶劑(有機(jī)溶劑或水或其混合物)中，并且使溶液在足以形成結(jié)晶的速率下冷卻，接著以標(biāo)準(zhǔn)方法分離。分析技術(shù)例如I.R.光譜顯示在作為溶劑合物(或水合物)的結(jié)晶中存在溶劑(或水)。
″有效量″或″治療有效量″意指描述可有效抑制上述疾病且因此產(chǎn)生所需治療、減緩、抑制或預(yù)防性作用的本發(fā)明化合物或組合物的量。
氮雜環(huán)丁酮衍生物可形成鹽類(lèi)，其也屬本發(fā)明范圍。本文中涉及氮雜環(huán)丁酮衍生物應(yīng)理解包含涉及其鹽，除非另有說(shuō)明。本文所用的術(shù)語(yǔ)″鹽(類(lèi))″代表與無(wú)機(jī)和/或有機(jī)酸形成的酸式鹽，以及與無(wú)機(jī)和/或有機(jī)堿形成的堿式鹽。另外，當(dāng)?shù)s環(huán)丁酮衍生物同時(shí)含有堿性部分如(但不限于)吡啶或咪唑、以及酸性部分如(但不限于)羧酸時(shí)，則可形成兩性離子(″內(nèi)鹽″)，并且包含于本文所用的術(shù)語(yǔ)″鹽(類(lèi))″中。優(yōu)選為藥學(xué)可接受的(亦即，無(wú)毒、生理上可接受)鹽，但也可使用其它鹽。氮雜環(huán)丁酮衍生物的鹽可通過(guò)例如使氮雜環(huán)丁酮衍生物與某量的酸或堿如當(dāng)量的量，在介質(zhì)如使鹽沉淀的介質(zhì)中，或在水性介質(zhì)中反應(yīng)，再經(jīng)凍干形成。
酸加成鹽的實(shí)例包括乙酸鹽、抗壞血酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、硫酸氫鹽、硼酸鹽、丁酸鹽、檸檬酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、富馬酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、乳酸鹽、馬來(lái)酸鹽、甲烷磺酸鹽、萘磺酸鹽、硝酸鹽、草酸鹽、磷酸鹽、丙酸鹽、水楊酸鹽、丁二酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、硫代氰酸鹽、甲苯磺酸鹽(亦稱(chēng)為甲苯磺酸鹽(tosylates))等。另外，例如P.Stahl et al.，Camille G.(eds.)Handbook ofPharmaceutical Salts.Properties，Selection and Use.(2002)ZurichWiley-VCH；S.Berge et al.，Journal of Pharmaceutical Sciences(1977)66(1)1-19；P.Gould，International J.of Pharmaceutics(1986)33 201-217；Anderson et al.，The Practice of Medicinal Chemistry(1996)，AcademicPress，New York；以及The Orange Book(Food&Drug Administration，Washington，D.C.在其網(wǎng)站上)討論酸，該酸通常視為適用于從堿性醫(yī)藥化合物形成醫(yī)藥可用的鹽。這些公開(kāi)并入本文中供參考。
示例性的堿式鹽包括銨鹽，堿金屬鹽如鈉、鋰和鉀鹽，堿土金屬鹽如鈣和鎂鹽，與有機(jī)堿(例如，有機(jī)胺)的鹽如二環(huán)己基胺鹽、叔丁基胺，以及與氨基酸如精氨酸、賴(lài)氨酸等的鹽。堿性含氮基團(tuán)可以用例如下列的試劑季銨化低級(jí)烷基鹵化物(例如甲基、乙基和丁基氯化物、溴化物和碘化物)、硫酸二烷基酯(例如硫酸二甲酯、二乙酯和二丁酯)、長(zhǎng)鏈鹵化物(例如癸基、月桂基和硬脂基氯化物、溴化物和碘化物)、芳烷基鹵化物(例如，芐基溴和苯乙基溴)及其它。
所有此類(lèi)酸式鹽和堿式鹽希望為本發(fā)明范圍內(nèi)的藥學(xué)可接受的鹽，并且所有酸式鹽和堿式鹽就本發(fā)明的目的而言均視為等同于相關(guān)化合物的游離形式。
氮雜環(huán)丁酮衍生物的藥學(xué)可接受的酯包含下列群組(1)通過(guò)羥基的酯化獲得的羧酸酯，其中酯基的羧酸部分的非羰基部分選自直鏈或分支烷基(例如，乙酰基、正丙基、叔丁基或正丁基)、烷氧基烷基(例如，甲氧基甲基)、芳烷基(例如，芐基)、芳基氧基烷基(例如，苯氧基甲基)、芳基(例如，任選被例如鹵素、C1-4烷基或C1-4烷氧基或氨基取代的苯基)；(2)磺酸酯如烷基-或芳烷基磺?；?例如，甲烷磺酸基)；(3)氨基酸酯(例如，L-纈氨基或L-異亮氨基)；(4)膦酸酯及(5)單-、二-或三磷酸酯。該磷酸酯可通過(guò)例如C1-20醇或其反應(yīng)性衍生物，或通過(guò)2，3-二(C6-24)酰基甘油進(jìn)一步酯化。
氮雜環(huán)丁酮衍生物及其藥學(xué)可接受的鹽、溶劑合物、酯和前藥可以其互變異構(gòu)體形式(例如酰胺或亞氨基醚)存在。所有這些互變異構(gòu)體形式在本文中均視為本發(fā)明的一部分。
氮雜環(huán)丁酮衍生物可含有不對(duì)稱(chēng)或手性中心，并且因此以不同的立體異構(gòu)體形式存在。氮雜環(huán)丁酮衍生物的所有立體異構(gòu)體形式以及其混合物(包含消旋混合物)將形成本發(fā)明的一部分。另外，本發(fā)明涵蓋所有幾何和位置異構(gòu)體。例如，若氮雜環(huán)丁酮衍生物并入雙鍵或稠合環(huán)，則順式-和反式-形式以及其混合物均涵蓋于本發(fā)明的范圍中。
非對(duì)映異構(gòu)體混合物可通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的方法，例如通過(guò)色譜和/或分級(jí)結(jié)晶，基于其物理化學(xué)差異而分離成其個(gè)別的非對(duì)映異構(gòu)體。對(duì)映異構(gòu)體的分離可通過(guò)使對(duì)映異構(gòu)體混合物與適宜光學(xué)活性化合物(例如手性助劑如手性醇或Mosher′s酰氯)反應(yīng)轉(zhuǎn)化成非對(duì)映異構(gòu)體混合物，使非對(duì)映異構(gòu)體分離并且使個(gè)別非對(duì)映異構(gòu)體轉(zhuǎn)化(例如水解)成對(duì)應(yīng)的純對(duì)映異構(gòu)體。而且，有些氮雜環(huán)丁酮衍生物可為阻轉(zhuǎn)異構(gòu)體(例如取代的聯(lián)芳基)且視為本發(fā)明的一部分。對(duì)映異構(gòu)體也可使用手性HPLC柱分離。
本化合物(包含化合物的鹽、溶劑合物、酯和前藥，以及前藥的鹽、溶劑合物和酯)的所有立體異構(gòu)體(例如，幾何異構(gòu)體、光學(xué)異構(gòu)體等)，例如可能由于各取代基上的不對(duì)稱(chēng)碳而存在，包含對(duì)映異構(gòu)體形式(即使在沒(méi)有不對(duì)稱(chēng)碳下也可能存在)、旋轉(zhuǎn)體形式、阻轉(zhuǎn)異構(gòu)體和非對(duì)映異構(gòu)體形式均欲屬本發(fā)明的范圍，例如位置異構(gòu)體(舉例而言如4-吡啶基和3-吡啶基)也這樣。(例如，若氮雜環(huán)丁酮衍生物并入雙鍵或稠合環(huán)，則順式-和反式-形式二者以及混合物均涵蓋于本發(fā)明的范圍中。而且，例如，化合物的所有酮-烯醇以及亞胺-烯胺形式均包含于本發(fā)明中)。
例如，氮雜環(huán)丁酮衍生物的個(gè)別立體異構(gòu)體基本上不含其它異構(gòu)體，或可為例如欲混合為消旋體或與所有其它立體異構(gòu)體或其它選擇的立體異構(gòu)體混合。若本發(fā)明的氮雜環(huán)丁酮衍生物中存在有一個(gè)或多個(gè)手性中心，則各手性中心可獨(dú)立地具有S或R構(gòu)型，如IUPAC 1974Recommendations所定義。使用的術(shù)語(yǔ)″鹽″、″溶劑合物″、″酯″、″前藥″等將等同于用于氮雜環(huán)丁酮衍生物的對(duì)映異構(gòu)體、立體異構(gòu)體、旋轉(zhuǎn)體、互變異構(gòu)體、位置異構(gòu)體、消旋體或前藥的鹽、溶劑合物、酯和前藥。
本發(fā)明還涵蓋同位素標(biāo)記的氮雜環(huán)丁酮衍生物，其與本文所述相同但事實(shí)上一個(gè)或多個(gè)原子經(jīng)原子量或質(zhì)量數(shù)與自然界常見(jiàn)的原子量或質(zhì)量數(shù)不同的原子代替。可并入本發(fā)明化合物中的同位素實(shí)例包括氫、碳、氮、氧、磷、氟及氯的同位素，分別例如2H、3H、13C、14C、15N、18O、17O、31P、32P、35S、18F和36Cl。
某些同位素標(biāo)記的氮雜環(huán)丁酮衍生物(例如用3H和14C標(biāo)記的那些)可用于化合物和/或底物組織分布分析中。氚化(亦即3H和碳-14(亦即，14C)同位素因其易于制備和可檢測(cè)性而為特別優(yōu)選。另外，以較重同位素如氘(亦即2H)取代可獲得來(lái)自較大代謝穩(wěn)定性(例如，增加體內(nèi)半衰期或降低劑量需求)的某些治療上的優(yōu)點(diǎn)并且因此在某些環(huán)境下為優(yōu)選。同位素標(biāo)記的氮雜環(huán)丁酮衍生物通?？梢勒障挛牡姆磻?yīng)圖和/或?qū)嵤├兴沂绢?lèi)似的程序，通過(guò)以適宜同位素標(biāo)記的試劑取代非同位素標(biāo)示的試劑而制備。
氮雜環(huán)丁酮衍生物及其鹽、溶劑合物、酯和前藥的多晶態(tài)形式均包含于本發(fā)明中。
本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)了解對(duì)于某些氮雜環(huán)丁酮衍生物而言，其一種異構(gòu)體會(huì)呈現(xiàn)出大于其它異構(gòu)體的藥理活性。
本文中使用下列簡(jiǎn)寫(xiě)，并且定義于下BOC(叔丁氧基羰基)；BODIPY(二吡咯甲叉二氟化硼(Dipyrromethene boron difluoride))；BSA(牛血清蛋白)；DCE(二氯乙烷)；DMSO(d6-二甲基亞砜)；二噁烷(1，4-二噁烷)；DMEM(達(dá)爾伯克氏改良伊格爾氏培養(yǎng)基(Dulbecco′s ModifiedEagle Medium))；EDTA(乙二胺四乙酸)；EGTA(乙二醇四乙酸)；Et(乙基)；EtOAc(乙酸乙酯)；EtOH(乙醇)；醚(二乙醚)；FBS(胎牛血清)；HBSS(漢克氏(Hank′s)平衡的鹽溶液)；HEK(人類(lèi)胚胎腎細(xì)胞)；HEPES(4-(2-羥基乙基)-1-哌嗪乙烷磺酸)；HOBt(N-羥基苯并三唑)；IPA(異丙醇)；LCMS(液相色譜質(zhì)譜儀)；LDA(二異丙基酰胺鋰)；LHMDS(六甲基二硅胺烷鋰)；MeCN(乙腈)；MeOH(甲醇)；MEM(最小必須培養(yǎng)基)；MP-TsOH(微孔聚苯乙烯磺酸)；甲磺?；?甲烷磺?；?；SiO2(硅膠)；TFA(三氟乙酸)；THF(四氫呋喃)；TMS(三甲基硅烷基)；甲苯磺?；?對(duì)-甲苯磺?；?；三氟甲磺?；?三氟甲烷磺?；?。
制備氮雜環(huán)丁酮衍生物的方法 下列反應(yīng)

圖1-5中描述了用于制備式(IA)-(ID)的氮雜環(huán)丁酮衍生物的方法。
反應(yīng)圖1說(shuō)明制備式(IA)-(ID)的氮雜環(huán)丁酮衍生物的方法，其中R1和R2如上述式(IA)-(ID)化合物的定義，并且R3為(a)對(duì)式(IA)的化合物而言為苯基；(b)對(duì)式(IB)的化合物而言為4-Cl-苯基；(c)對(duì)式(IC)的化合物而言為-3-吡啶基；并且對(duì)式(ID)的化合物而言為-2-吡啶基。
反應(yīng)圖1
在溶劑如甲苯或異丙醇中，式1的醛化合物可與式2的胺化合物反應(yīng)，獲得式3的亞胺化合物。接著在-78℃下以堿如LDA或LHMDS處理式4的化合物(其中X1為鹵素或烷氧基如OEt)，并且使所得烯醇化物(enolate)與式3的化合物反應(yīng)，獲得式5的螺環(huán)化合物。接著移除式5化合物的N-保護(hù)基(PG)，獲得式6的哌啶化合物。接著使式6的化合物在適宜堿或偶合劑存在下與式7的化合物(其可為羧酸、烷基或芳基鹵，或異氰酸酯)反應(yīng)，獲得以式8表示的本發(fā)明氮雜環(huán)丁酮衍生物。
反應(yīng)圖2說(shuō)明制備式(IA)-(ID)的氮雜環(huán)丁酮衍生物的另一種方法，其中R1和R2如上述式(IA)-(ID)化合物的定義，并且R3為(a)對(duì)式(IA)的化合物而言為苯基；(b)對(duì)式(IB)的化合物而言為4-Cl-苯基；(c)對(duì)式(IC)的化合物而言為-3-吡啶基；并且對(duì)式(ID)的化合物而言為-2-吡啶基。
反應(yīng)圖2
使式1的醛化合物與六甲基二硅烷胺鋰(lithiumhexamethyldisilazide)反應(yīng)，獲得式9的被TMS-保護(hù)的亞胺。接著在-78℃下以堿如LDA或LHMDS處理式10的化合物(其中X1為鹵素或烷氧基如OEt)，并且所得烯醇化物與式9的化合物反應(yīng)，獲得式11的螺環(huán)化合物。接著可使式11的化合物在堿如NaH存在下與式12的化合物(其中X3為良好離去基團(tuán)，如Cl、Br、I、O-三氟甲烷磺?；?、O-甲苯磺?；騉-甲烷磺酰基)反應(yīng)，獲得式5的中間體化合物，該化合物隨后可使用反應(yīng)圖1中所述的方法轉(zhuǎn)化成本發(fā)明的氮雜環(huán)丁酮衍生物(8)。
反應(yīng)圖3說(shuō)明用于制備其中R2基團(tuán)與其所連接的氮原子形成叔脲的式(IA)-(ID)氮雜環(huán)丁酮衍生物的通用方法。
反應(yīng)圖3
使式6的螺環(huán)中間體與式13的異氰酸酯反應(yīng)，獲得式14的氮雜環(huán)丁酮衍生物，其中R2基團(tuán)與其所連接的氮原子形成叔脲，Ra代表表5中所列的脲取代基，并且R1和R3如上述本文的定義。
制備式14的叔脲化合物的通用方法 向式6中間體化合物(0.025mmol)在DCE/MeOH(25∶1 v/v，1mL)中的溶液中添加0.5M的式13異氰酸酯化合物(0.075mmol)的DCE溶液。使反應(yīng)混合物在室溫下攪拌20小時(shí)，隨后添加二氯乙烷(0.5mL)、聚苯乙烯異氰酸酯樹(shù)脂(0.057g，0.087mmol)和聚苯乙烯三胺樹(shù)脂(0.049g，0.207mmol)。使所得反應(yīng)在室溫下攪拌16小時(shí)。過(guò)濾反應(yīng)產(chǎn)物，再以乙腈(0.5mL)洗滌樹(shù)脂。減壓蒸發(fā)有機(jī)溶劑，獲得其中R2基團(tuán)與其所連接的氮原子形成叔脲的式14氮雜環(huán)丁酮衍生物。
反應(yīng)圖4說(shuō)明用于制備其中R2基團(tuán)與其所連接的氮原子形成酰胺的式(IA)-(ID)氮雜環(huán)丁酮衍生物的通用方法。
反應(yīng)圖4
使式6的螺環(huán)中間體與式15的羧酸反應(yīng)，獲得式16的氮雜環(huán)丁酮衍生物，其中R2基團(tuán)與其所連接的氮原子形成酰胺，Rb代表表5中所列的酰胺取代基，并且其中R1和R3如本文上述的定義。
制備式16的酰胺化合物的通用方法 向聚苯乙烯EDC樹(shù)脂(0.106g，0.146mmol)和式6化合物(0.025mmol)在MeCN/THF(3∶1 v/v，1mL)中的混合物中添加1M的式15羧酸(0.038mmol)的DMF溶液。向所得混合物中添加HOBT(0.5M，0.038mmol)在MeCN/THF(3∶1 v/v，0.20mL)中溶液。使反應(yīng)混合物在室溫下攪拌20小時(shí)，隨后添加乙腈(0.5mL)、聚苯乙烯異氰酸酯樹(shù)脂(0.049g，0.075mmol)和聚苯乙烯三胺樹(shù)脂(0.035g，0.148mmol)。使所得混合物在室溫下攪拌64小時(shí)，再且過(guò)濾反應(yīng)產(chǎn)物，并以乙腈(0.5mL)洗滌樹(shù)脂。真空濃縮有機(jī)溶劑，獲得其中R2基團(tuán)與其所結(jié)合的氮原子形成酰胺的式16的氮雜環(huán)丁酮衍生物。
反應(yīng)圖5說(shuō)明用于制備其中R2基團(tuán)通過(guò)-CH2-鍵連接基團(tuán)與氮雜環(huán)丁酮衍生物的哌啶氮原子結(jié)合的式(IA)-(ID)氮雜環(huán)丁酮衍生物的通用方法。
反應(yīng)圖5
使式6的螺環(huán)中間體與式17的醛反應(yīng)，獲得式18的氮雜環(huán)丁酮衍生物，其中R2基團(tuán)是通過(guò)-CH2-鍵連接基團(tuán)與氮雜環(huán)丁酮衍生物的哌啶氮原子結(jié)合，其中Rc代表表5中所列的適宜取代基，并且R1和R3如本文上述的定義。
制備式18的N-烷基化合物的通用方法 向式6化合物(0.025mmol)在DMF/THF(1∶1v/v，1mL)中的溶液中添加醛17(0.075mmol)在DCE中的溶液，接著添加三乙酰氧基硼氫化鈉(3當(dāng)量)。使反應(yīng)混合物在室溫下攪拌約20小時(shí)。向反應(yīng)槽中添加MeOH(0.5mL)，并搖晃10分鐘或直到氣體停止釋放。向反應(yīng)槽中添加MP-TsOH樹(shù)脂(約100mg)，并且使所得混合物搖晃約2小時(shí)。接著過(guò)濾去除溶劑，并依序以DCE(3x)，接著以甲醇(3x)洗滌樹(shù)脂，并且所需產(chǎn)物通過(guò)與含2N氨/甲醇(1.5-2mL，1小時(shí))攪拌而自樹(shù)脂溶洗出，再過(guò)濾。減壓蒸發(fā)有機(jī)溶劑，獲得式18氮雜環(huán)丁酮衍生物，其中R2基團(tuán)通過(guò)-CH2-鍵連接基團(tuán)與氮雜環(huán)丁酮衍生物的哌啶氮原子結(jié)合。
氮雜環(huán)丁酮衍生物的用途 氮雜環(huán)丁酮衍生物可用于治療或預(yù)防患者的病癥。因此，本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案提供一種治療患者病癥的方法，其包括給患者施用有效量的氮雜環(huán)丁酮衍生物。在另一個(gè)實(shí)施方案中，用于治療患者病癥的方法進(jìn)一步包括施用另一種治療劑。
在一個(gè)實(shí)施方案中，該另一種治療劑選自可用于治療疼痛的藥物、抗糖尿病劑、T-型鈣通道阻斷劑、TRPV1的拮抗劑、TRPV1的激動(dòng)劑、GRP119的激動(dòng)劑、NPC1L1的拮抗劑、HMG-CoA還原酶的抑制劑、煙酸受體激動(dòng)劑或膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白質(zhì)的抑制劑或PPAR活化劑。
疼痛 氮雜環(huán)丁酮衍生物可用于治療疼痛。目前慢性疼痛的療法僅對(duì)有應(yīng)答的患者部分緩解，并且對(duì)其他人為非耐受性的或無(wú)效。慢性疼痛可能因組織發(fā)炎、病毒感染(HIV、帶狀皰疹)直接組織受損或創(chuàng)傷所引起，或因化學(xué)療法(例如紫杉醇、長(zhǎng)春新堿)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)受損(例如，中風(fēng)、MS)所引起或由糖尿病所引起。若慢性疼痛伴隨體內(nèi)或內(nèi)臟組織受損，則病征通常包含其特征為自發(fā)性疼痛(通常描述為刺痛、灼熱、類(lèi)電擊或抽搐)、痛覺(jué)過(guò)敏(對(duì)疼痛刺激的過(guò)度反應(yīng))及異常性疼痛(如疼痛的非-有害刺激的感覺(jué))的嚴(yán)重感官失調(diào)。人類(lèi)患者的普遍病征包含冷的痛覺(jué)過(guò)敏、有感異常性疼痛和較不普遍的熱痛覺(jué)過(guò)敏。病征可能單獨(dú)存在或并存，并且經(jīng)常對(duì)于與不同疾病狀態(tài)有關(guān)的病征會(huì)有可察覺(jué)的變化，并且通常介于罹患相同病癥的患者之間。在肉體或內(nèi)臟組織受損/疾病的情況下，這些異常感覺(jué)感受將與支配該受影響區(qū)域的末梢神經(jīng)不當(dāng)活動(dòng)(病理上的過(guò)度刺激現(xiàn)象)有關(guān)。神經(jīng)元過(guò)度刺激現(xiàn)象可能因改變離子通道功能或活性所產(chǎn)生。
慢性疼痛是一種真實(shí)疾病。相信至少部分為感覺(jué)疼痛過(guò)程中心突觸修補(bǔ)的結(jié)果，這是一種稱(chēng)為″中樞敏化″的現(xiàn)象，其包括脊髓背角神經(jīng)元的增加刺激性。維持中樞敏化相信需要在感覺(jué)傳入神經(jīng)中持續(xù)末梢神經(jīng)活性(過(guò)度刺激現(xiàn)象)，并且該活性可能因異位病灶的結(jié)果而產(chǎn)生。在背根神經(jīng)節(jié)(DRG)的感覺(jué)傳入神經(jīng)元中可發(fā)現(xiàn)大的T-型鈣電流。T-型鈣通道由于其作為神經(jīng)元節(jié)律器發(fā)揮功能的已知能力，因此已暗示該T-型鈣通道為建立該異常過(guò)度刺激現(xiàn)象的造成因素。藥理學(xué)和反意寡核苷酸證據(jù)支持了慢性疼痛的DRG T-型鈣通道臨床前模型的關(guān)鍵作用。
T-型鈣通道為電壓-控制(voltage-gated)通道，其可能隨著來(lái)自可激發(fā)細(xì)胞的靜息電位的相對(duì)小的偏極化作用而開(kāi)啟。就T-型鈣電流而言目前有三種不同基因，其對(duì)CaV3.1、CaV3.2和CaV3.3編碼。該個(gè)別亞型具有獨(dú)特的分布方式，并且在疼痛路徑的末梢及中心部分表達(dá)。T-型鈣通道發(fā)現(xiàn)于小和中等大小的DRG神經(jīng)元(CaV3.2)中以及疼痛過(guò)程中涉及的CNS區(qū)域中，包含脊髓背角和腦丘(Talley et al.，J Neurosci，1999，191895-1911)。通過(guò)可使神經(jīng)元作用電位快速陣發(fā)放電的低閾值鈣波峰(low-threshold calcium spikes)而顯示T-型鈣電流在神經(jīng)爆發(fā)性點(diǎn)燃中的作用(Suzuki and Rogwoski，Proc Natl Acad Sci USA，1989，867228-7232；White et al.，Proc Natl Acad Sci USA，1989，866802-6806)。
通過(guò)使用藥理上的阻斷劑或反意寡核苷酸介導(dǎo)的基因敲除而抑制體內(nèi)T-型鈣通道功能與正常和病理疼痛過(guò)程中的T-型通道極度有關(guān)聯(lián)。米貝拉地爾(Mibefradil)和/或乙琥胺對(duì)T-型鈣通道具有選擇性，并且對(duì)于包括下列的數(shù)種臨床前疼痛模型有效急性熱和機(jī)械性疼痛，I和II期福爾馬林模型，大鼠脊髓神經(jīng)結(jié)扎模型，辣椒素-引發(fā)的機(jī)械性痛覺(jué)過(guò)敏，大鼠尾巴抽打、紫杉醇-和長(zhǎng)春新堿-引發(fā)的化學(xué)神經(jīng)療法(Barton et al.，Eur J Pharmacol，2005，52179-8；Dogrul et al.，Pain，2003，105159168；Flatters and Bennett，Pain，2004，109150-161；Todorovic et al.，Brain Res，2002，951336-340)。
對(duì)乙琥胺應(yīng)答的疼痛緩解可能是因?yàn)槠渲袠谢蚰┥宰饔?。然而?duì)米貝拉地爾應(yīng)答的效力可歸因于兩種原因的末稍作用。首先全身性施用米貝拉地爾并不會(huì)進(jìn)入腦部。另外，蛛網(wǎng)膜內(nèi)施用米貝拉地爾則無(wú)效(Dogrul et al.，Pain，2003，105159168)。支持來(lái)自由阻斷末梢T-型通道的效力的進(jìn)一步證據(jù)來(lái)自針對(duì)于反意寡核苷酸有關(guān)抗T-型通道CaV3.2的研究。hCaV3.2特異性寡核苷酸的蜘蛛網(wǎng)膜內(nèi)注射使DRG神經(jīng)元中的T-型鈣電流降低，并且產(chǎn)生抗傷害感受性、抗痛覺(jué)過(guò)敏和抗異常性疼痛作用。這些研究中，寡核苷酸的攝取和反意介導(dǎo)的T-型流的基因敲除發(fā)生于接近注射部位的DRG神經(jīng)元中，但末發(fā)生于脊髓中(Bourinet et al.，EMBOJ，200524315-324)。
本發(fā)明的氮雜環(huán)丁酮衍生物為T(mén)-型鈣通道阻斷劑。因此，本化合物可用于治療或預(yù)防可通過(guò)施用T-型鈣通道阻斷劑而治療或預(yù)防的病癥。此類(lèi)病癥包括(但不限于)治療或預(yù)防神經(jīng)性疼痛。
本發(fā)明的氮雜環(huán)丁酮衍生物為T(mén)RPV1拮抗劑，并且因此可用于治療或預(yù)防可通過(guò)施用TRPV1拮抗劑治療或預(yù)防的病癥。
以TRPV1拮抗劑治療的病癥包括急性疼痛、慢性疼痛、神經(jīng)性疼痛、手術(shù)后疼痛、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎后的疼痛、骨關(guān)節(jié)炎疼痛、背部疼痛、內(nèi)臟疼痛、癌癥疼痛、痛覺(jué)過(guò)敏、神經(jīng)痛、牙痛、頭痛、偏頭痛、叢集性頭痛、混合型血管和非血管征候群、緊張性頭痛、神經(jīng)疾病、腕管征候群、糖尿病神經(jīng)性疾病、HIV-相關(guān)的神經(jīng)性疾病、帶狀皰疹后神經(jīng)痛、纖維肌痛、神經(jīng)炎、坐骨神經(jīng)痛、神經(jīng)受傷、缺血、神經(jīng)退化、中風(fēng)、中風(fēng)后疼痛、多發(fā)性硬化癥、呼吸疾病、氣喘、咳嗽、慢性阻塞性肺部疾病、支氣管收縮、炎性障礙(如一般發(fā)炎、發(fā)炎性眼睛障礙、發(fā)炎性膀胱障礙、發(fā)炎性皮膚障礙、慢性發(fā)炎癥狀)、發(fā)炎性疼痛和相關(guān)的痛覺(jué)過(guò)敏以及異常性疼痛、神經(jīng)性疼痛和相關(guān)的痛覺(jué)過(guò)敏以及異常性疼痛、食道炎、心灼熱、貝特氏異常增生(Barrett′s metaplasia)、吞咽困難、胃食道逆流障礙、胃及十二指腸潰瘍、功能性吞咽困難、刺激性腸躁癥、發(fā)炎性腸疾病、結(jié)腸炎、克隆氏(Crohn′s)癥、骨盆過(guò)敏、骨盆疼痛、月經(jīng)痛、腎絞痛、小便失禁、膀胱炎、灼傷、搔癢、牛皮癬、搔癢癥(pruritis)、嘔吐、灼熱痛、交感神經(jīng)維持性疼痛、去傳入神經(jīng)征候群、上皮神經(jīng)受損或功能不良、呼吸泌尿生殖器、胃腸或血管區(qū)的內(nèi)臟能動(dòng)性失調(diào)、受傷、白斑、腹瀉、因壞死性藥物造成的胃部損傷和毛發(fā)生長(zhǎng)。
在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的氮雜環(huán)丁酮衍生物可用于治療發(fā)炎或神經(jīng)性疼痛。
可用于本發(fā)明的治療發(fā)炎疼痛的方法中的額外藥物包括皮質(zhì)類(lèi)固醇、非甾體抗炎藥、COX-I和COX-II抑制劑、可用于治療發(fā)炎性腸疾病的藥物及可用于治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎用的藥物。在一個(gè)實(shí)施方案中，治療發(fā)炎性疼痛的額外藥物為類(lèi)固醇和非鴉片止痛劑。
神經(jīng)性疼痛用于本文中是指疼痛感覺(jué)的異常狀態(tài)，其中由于伴隨神經(jīng)、神經(jīng)叢或神經(jīng)束膜軟組織受損或退化的功能異常而持續(xù)降低疼痛閾值等，此類(lèi)功能異常是因受傷(例如，傷口、挫傷、神經(jīng)抽出術(shù)受損、手足截肢)、壓傷(腕管征候群、三叉神經(jīng)痛、腫瘤活動(dòng))、感染、癌癥、缺血等引起，或因代謝障礙如糖尿病等引起。神經(jīng)性疼痛包括因中樞或末梢神經(jīng)受損引起的疼痛。還包括因單神經(jīng)性病變或多神經(jīng)性病變引起的疼痛。在一些實(shí)施方案中，神經(jīng)性疼痛是由糖尿病引起。
可使用氮雜環(huán)丁酮衍生物治療或預(yù)防的神經(jīng)性疼痛其它實(shí)例包括(但不限于)異常性疼痛(因非正常原因疼痛的機(jī)械或熱刺激引起的疼痛感)、痛覺(jué)過(guò)敏(對(duì)于正常疼痛的刺激過(guò)度反應(yīng))、感覺(jué)過(guò)敏(對(duì)于接觸刺激過(guò)度反應(yīng))、糖尿病多神經(jīng)性病變、受壓性神經(jīng)性病變、癌癥疼痛、中樞神經(jīng)疼痛、分娩疼痛、心肌梗塞疼痛、中風(fēng)后疼痛、胰臟疼痛、絞痛、肌肉痛、手術(shù)后的疼痛、中風(fēng)后疼痛、與帕金森病相關(guān)的疼痛、與重病監(jiān)護(hù)相關(guān)的疼痛、與牙周病相關(guān)的疼痛(包含牙齦炎和牙周病)、月經(jīng)痛、偏頭痛、持續(xù)性頭痛(例如，叢集性頭痛或慢性緊張頭痛)、持續(xù)性疼痛狀態(tài)(例如，纖維肌肉痛或肌筋膜疼痛)、三叉神經(jīng)痛、帶狀皰疹后神經(jīng)痛、滑膜炎、與AIDS相關(guān)的疼痛、與多發(fā)性硬化相關(guān)的疼痛、與脊髓腫瘤和/或退化相關(guān)的疼痛、燒傷疼痛、牽涉痛(referred pain)、升高的疼痛記憶和涉及對(duì)抗疼痛的神經(jīng)元機(jī)制。發(fā)炎性疼痛可能因軟組織受損引起，包括肌肉組織(肌炎)和內(nèi)臟(結(jié)腸炎和發(fā)炎性腸疾病、胰腺炎、膀胱炎、回腸炎、克隆氏病)、神經(jīng)(神經(jīng)炎、神經(jīng)根病(radiculopathies)、神經(jīng)根神經(jīng)節(jié)炎(radioculogangionitis))、關(guān)節(jié)炎病癥(例如類(lèi)風(fēng)濕疾病和相關(guān)的病癥如僵直性脊椎炎)、關(guān)節(jié)疾病(包含骨關(guān)節(jié)炎)。在特定的實(shí)施方案中，本發(fā)明的氮雜環(huán)丁酮衍生物可用于治療或預(yù)防異常性疼痛或痛覺(jué)過(guò)敏。
可用于本發(fā)明的治療神經(jīng)性疼痛的方法中的其它額外藥物包括非鴉片(亦稱(chēng)為非甾體抗炎藥)止痛劑如乙酰水楊酸、膽堿三水楊酸鎂、對(duì)乙酰氨基酚、布洛芬、非諾洛芬、第服辛(diflusinal)和萘普生；鴉片止痛劑如嗎啡、氫嗎啡酮、美沙酮、左啡諾、芬太尼、羥考酮和羥嗎啡酮；類(lèi)固醇如潑尼松龍、氟替卡松、曲安西龍、倍氯米松、莫米松、必第酰胺(budisamide)、倍他米松、地塞米松、波尼松、氟尼縮松和可的松；COX-1抑制劑如阿司匹林和吡羅昔康；COX-II抑制劑如羅非考昔(rofecoxib)、塞來(lái)考昔(celecoxib)、伐地考昔(valdecoxib)和艾托考昔(etoricoxib)；可用于治療發(fā)炎性腸疾病的藥物如IL-10、類(lèi)固醇和柳氮磺吡啶(azulfidine)；可用于治療類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的藥物如甲氨蝶呤、硫唑嘌呤、環(huán)磷酰胺、類(lèi)固醇和霉酚酸酯(mycophenolate mofetil)；抗偏頭痛藥、抗吐劑、β-腎上腺能阻斷劑；抗痙孿劑；抗憂郁劑；其它Ca2+-通道阻斷劑；鈉通道阻斷劑；抗癌劑；治療或預(yù)防UI的藥物；治療高血壓的藥物；治療或預(yù)防心絞痛的藥物；治療心房纖維顫動(dòng)的藥物；治療失眠的藥物；治療腎臟衰竭的藥物；治療阿耳茲海默癥的藥物；治療或預(yù)防IBS的藥物；治療帕金森病及帕金森氏癥候群的藥物；治療焦慮的藥物；治療癲癇的藥物；治療中風(fēng)的藥物；治療精神病的藥物；治療亨廷頓舞蹈癥的藥物；治療ALS的藥物；治療嘔吐的藥物；治療運(yùn)動(dòng)障礙的藥物；以及治療憂郁的藥物。
在一個(gè)實(shí)施方案中，治療神經(jīng)性病變疼痛的其它藥物為鴉片類(lèi)和非鴉片類(lèi)止痛劑。在另一個(gè)實(shí)施方案中，治療神經(jīng)性病變疼痛的其它藥物選自乙酰水楊酸、膽堿三水楊酸鎂、對(duì)乙酰氨基酚、布洛芬、非諾洛芬、第服辛、萘普生、嗎啡、氫嗎啡酮、美沙酮、左啡諾、芬太尼、羥考酮和羥嗎啡酮。
脂質(zhì)代謝障礙 氮雜環(huán)丁酮衍生物可用于治療脂質(zhì)代謝障礙。本發(fā)明的氮雜環(huán)丁酮衍生物為NPC1L1拮抗劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，氮雜環(huán)丁酮衍生物因此可用于治療脂質(zhì)代謝障礙，尤其是抑制膽固醇吸收。須了解當(dāng)施用氮雜環(huán)丁酮衍生物以抑制患者的膽固醇吸收時(shí)，該抑制作用可為部分抑制或完全抑制。因此，在一個(gè)實(shí)施方案中，患者的膽固醇吸收為部分受抑制。在另一個(gè)實(shí)施方案中，患者的膽固醇吸收為完全受抑制。
治療脂質(zhì)代謝障礙的方法包含治療高血脂癥、高膽固醇血癥、高三酸甘油酯血癥、谷甾醇血癥(sitosterolemia)和動(dòng)脈硬化病征；抑制腸的膽固醇吸收；降低血漿或血清的LDL膽固醇濃度；降低血漿或血清中的膽固醇或膽固醇酯濃度；降低血漿或血清中的C-反應(yīng)性蛋白質(zhì)(CRP)濃度；降低血漿或血清中的三酸甘油酯濃度；降低血漿或血清中去脂脂蛋白B濃度；增加血漿或血清中的高密度脂質(zhì)蛋白(HDL)膽固醇濃度；增加膽固醇的排泄分泌；治療其中適用膽固醇吸收抑制劑的臨床病癥；降低心血管疾病相關(guān)狀況的發(fā)生；降低血漿或組織中至少一種非類(lèi)固醇甾醇或5α-固醇的濃度；治療或預(yù)防血管發(fā)炎；預(yù)防、治療或減輕阿耳茲海默癥的病征；調(diào)節(jié)患者血流和/或腦中至少一種淀粉樣β肽的產(chǎn)生或其量；調(diào)節(jié)患者血流和/或腦中ApoE異型4的量；預(yù)防和/或治療肥胖癥；以及預(yù)防或降低黃色瘤(xanthomas)發(fā)生。
治療脂質(zhì)代謝障礙的本方法中所用額外藥物包括膽固醇吸收抑制劑(例如NPC1L1拮抗劑如依澤替米貝(ezetimibe))；膽固醇生物合成抑制劑；膽固醇酯轉(zhuǎn)化蛋白質(zhì)(CETP)抑制劑，如妥希崔吡(torcetrapib)；膽汁酸螯合劑(sequesterants)；煙酸或其衍生物；煙酸受體激動(dòng)劑，如煙酸(niacin)或煙酸控釋制劑(niaspan)；過(guò)氧化物酶體增生物-活化劑受體(PPAR)激動(dòng)劑或活化劑；?；o酶A膽固醇?；D(zhuǎn)移酶(ACAT)抑制劑；回腸膽汁酸運(yùn)載蛋白(″IBAT″)抑制劑(或回腸鈉共同-相關(guān)膽脂酸運(yùn)載蛋白(″ASBT″)抑制劑)；肥胖癥控制醫(yī)藥；低血糖藥物；抗氧化劑；?；鵆oA膽固醇O-?；D(zhuǎn)移酶(″ACAT″)抑制劑；膽甾酰酯轉(zhuǎn)移蛋白(″CETP″)抑制劑；普羅布考或其衍生物；低密度脂質(zhì)蛋白(″LDL″)受體活化劑；Ω3脂肪酸(″3-PUFA″)；天然水溶性纖維；植物甾醇，植物固醇酯和/或植物固醇酯的脂肪酸酯；以及抗高血壓藥物。
可用于本方法的適宜膽固醇生物合成抑制劑的非限制性實(shí)例包括HMG-CoA還原酶的競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑、角鯊烯合成酶抑制劑、角鯊烯環(huán)氧酶抑制劑及其混合物?？捎糜诒痉椒ǖ倪m宜HMG-CoA還原酶抑制劑的非限制性實(shí)例包括絲他汀類(lèi)藥物(statins)諸如洛伐他汀、普伐他汀、氟伐他汀、辛伐他汀、阿托伐他汀、西立伐他汀、CI-981、resuvastatin、立伐他汀(rivastatin)及匹伐他汀(pitavastatin)、羅蘇伐他汀(rosuvastatin)；HMG-CoA還原酶抑制劑例如L-659，699((E，E)-11-[3′R-(羥基-甲基)-4′-氧代-2′R-氧雜環(huán)丁基]-3，5，7R-三甲基-2，4-十一碳二烯酸)；角鯊烯合成抑制劑例如角鯊他汀1(squalestatin 1)；以及角鯊烯環(huán)氧酶抑制劑例如NB-598((E)-N-乙基-N-(6，6-二甲基-2-庚烯-4-炔基)-3-[(3，3′-聯(lián)噻吩-5-基)甲氧基]苯-甲胺鹽酸鹽)及其它甾醇生物合成抑制劑如DMP-565。在一個(gè)實(shí)施方案中，HMG-CoA還原酶抑制劑包括洛伐他汀、普伐他汀和辛伐他汀。在另一個(gè)實(shí)施方案中，HMG-CoA還原酶抑制劑為辛伐他汀。
膽汁酸螯合劑在腸內(nèi)與膽汁酸結(jié)合，中斷膽汁酸的腸肝循環(huán)并造成類(lèi)固醇的排泄分泌增加。
可用于本方法的適宜膽汁酸螯合劑的非限制性實(shí)例包括考來(lái)烯胺(可結(jié)合膽汁酸的含有季銨陽(yáng)離子的苯乙烯-二乙烯基苯共聚物，如購(gòu)自Bristol-Myers Squibb的

或

考來(lái)烯胺)、考來(lái)替泊(二亞乙基三胺與1-氯-2，3-環(huán)氧丙烷的共聚物，如購(gòu)自Pharmacia的

片劑)、克雷斯靈(colesevelam)鹽酸鹽[如購(gòu)自Sankyo的

Tablets(與表氯醇交聯(lián)且以1-溴癸烷及(6-溴己基)-三甲基銨溴化物)烷化之聚(烯丙基胺鹽酸鹽)]、水溶性衍生物如3，3-ioene、N-(環(huán)烷基)烷基胺和聚胺葡糖、不溶性季銨化聚苯乙烯、皂苷(saponins)及其混合物。適宜的無(wú)機(jī)膽固醇螯合劑包括水楊酸鉍加蒙脫石、氫氧化鋁及碳酸鈣抗酸藥。
PPAR的活化劑或激動(dòng)劑作用為過(guò)氧化物酶體增生物-活化受體的激動(dòng)劑。已經(jīng)確認(rèn)三種PPAR亞型，并且它們稱(chēng)為過(guò)氧化物酶體增生物-活化受體α(PPARα)、過(guò)氧化物酶體增生物-活化受體γ(PPARγ)及過(guò)氧化物酶體增生物-活化受體δ(PPARδ)。應(yīng)了解PPARδ在文獻(xiàn)中亦稱(chēng)為PPARβ及稱(chēng)為NUC1，并且此類(lèi)名稱(chēng)各代表相同的受體。本文所用的術(shù)語(yǔ)″PPAR活化劑″是指任何PPAR受體亞型的活化劑。
PPARα調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝。PPARα是通過(guò)貝特類(lèi)(fibrates)及多種中鏈及長(zhǎng)鏈脂肪酸活化且其涉及刺激脂肪酸之β-氧化。PPARγ受體亞型涉及使脂肪細(xì)胞分化過(guò)程活化且不涉及刺激肝臟中過(guò)氧化物酶體增生。PPARδ已被確認(rèn)可用于增加人類(lèi)高密度脂質(zhì)蛋白(HDL)量。參見(jiàn)例如WO97/28149。
PPARα活化劑化合物尤其可用于降低三酸甘油酯，適度降低LDL量及增加HDL量。PPARα活化劑的可用實(shí)例包括貝特類(lèi)。
可用于本方法的適宜芳氧芳酸衍生物(″貝特類(lèi)″)的非限制性實(shí)例包括氯貝丁酯；吉非貝齊；環(huán)丙貝特；苯扎貝特；克利貝特；比尼貝特；利非貝羅；非諾貝特及其混合物。此類(lèi)化合物可以各種形式使用，包括(但不限于)酸形式、鹽形式、消旋體、對(duì)映異構(gòu)體、兩性離子及互變異構(gòu)體。
可用于本方法的其它PPARα活化劑的非限制性實(shí)例包括美國(guó)專(zhuān)利號(hào)6,028,109(并入本文供參考)中所述的適宜氟苯基化合物；WO00/75103(并入本文供參考)中公開(kāi)的某些取代的苯基丙酸化合物；WO98/43081(并入本文供參考)中公開(kāi)的PPARα活化劑化合物。
可用于本方法中的適宜PPARγ活化劑的其它實(shí)例包括格列酮類(lèi)(glitazones)或噻唑烷二酮類(lèi)，如曲格列酮、羅格列酮及吡格列酮。其它可用的噻唑烷二酮類(lèi)包括WO 98/05331(并入本文供參考)中公開(kāi)的環(huán)格列酮、恩格列酮、達(dá)格列酮及BRL 49653；WO 00/76488(并入本文供參考)中公開(kāi)的PPARγ活化劑化合物；美國(guó)專(zhuān)利號(hào)5,994,554(并入本文供參考)中公開(kāi)的PPARγ活化劑化合物；美國(guó)專(zhuān)利號(hào)5,859,051(并入本文供參考)中公開(kāi)的乙?；宇?lèi)；WO 99/20275(并入本文供參考)中公開(kāi)的喹啉苯基化合物；WO 99/38845(并入本文供參考)中公開(kāi)的芳基化合物；WO00/63161(并入本文供參考)中公開(kāi)的1，4-二取代苯基化合物；WO01/00579(并入本文供參考)中公開(kāi)的芳基化合物；WO 01/12612及WO01/12187(并入本文供參考)中公開(kāi)的苯甲酸化合物；以及WO97/31907(并入本文供參考)中公開(kāi)的取代的4-羥基-苯基烷醇酸化合物。
PPARδ化合物尤其可用于降低三酸甘油酯量或升高HDL量?？捎糜诒痉椒ǖ腜PARδ活化劑的非限制性實(shí)例包括適宜的噻唑及噁唑衍生物，諸如WO 01/00603(并入本文供參考)中公開(kāi)的C.A.S.登記號(hào)317318-32-4；WO 97/28149(并入本文供參考)中公開(kāi)的氟、氯或硫代苯氧基苯基乙酸；美國(guó)專(zhuān)利號(hào)5,093,365(并入本文供參考)中公開(kāi)的非-β-可氧化脂肪酸類(lèi)似物；以及WO 99/04815(并入本文供參考)中公開(kāi)的PPARδ化合物。
再者，具有使PPARα、PPARγ和PPARδ的各種組合活化的多功能性化合物也可用于本方法。非限制性實(shí)例包括美國(guó)專(zhuān)利號(hào)6,248,781、WO00/23416、WO 00/23415、WO 00/23425、WO 00/23445、WO 00/23451和WO 00/63153(所有均并入本文供參考)中公開(kāi)的取代的芳基化合物，其被描述為有用的PPARα和/或PPARγ活化劑化合物。有用的PPARα和/或PPARγ活化劑化合物的其它非限制性實(shí)例包括WO 97/25042(并入本文供參考)中公開(kāi)的活化劑化合物；WO 00/63190(并入本文供參考)中公開(kāi)的活化劑化合物；WO 01/21181(并入本文供參考)中公開(kāi)的活化劑化合物；WO 01/16120(并入本文供參考)中公開(kāi)的聯(lián)芳基-噁(噻)唑化合物；WO 00/63196及WO 00/63209(并入本文供參考)中公開(kāi)的化合物；美國(guó)專(zhuān)利號(hào)6,008,237(并入本文供參考)中公開(kāi)的取代的5-芳基-2，4-噻唑烷二酮化合物；WO 00/78312及WO 00/78313G(并入本文供參考)中公開(kāi)的芳基噻唑烷二酮及芳基噁唑烷二酮化合物；WO 98/05331(并入本文供參考)中公開(kāi)的GW2331或(2-(4-[二氟苯基]-1-庚基脲基)乙基)苯氧基)-2-甲基丁酸化合物；美國(guó)專(zhuān)利號(hào)6,166,049(并入本文供參考)中公開(kāi)的芳基化合物；WO 01/17994(并入本文供參考)中公開(kāi)的噁唑化合物；以及WO01/25225及WO 01/25226(并入本文供參考)中公開(kāi)的二硫雜環(huán)戊烷化合物。
可用于本方法的其它有用PPAR活化劑化合物包括WO 01/14349、WO 01/14350及WO/01/04351(并入本文供參考)中公開(kāi)的取代的芐基噻唑烷-2，4-二酮化合物；WO 00/50392(并入本文供參考)中公開(kāi)的巰基羧酸化合物；WO 00/53563(并入本文供參考)中公開(kāi)的殼二孢呋喃酮(ascofuranone)化合物；WO 99/46232(并入本文供參考)中公開(kāi)的羧酸化合物；WO 99/12534(并入本文供參考)中公開(kāi)的化合物；WO 99/15520(并入本文供參考)中公開(kāi)的苯化合物；WO 01/21578(并入本文供參考)中公開(kāi)的鄰-甲氧基苯甲酰胺化合物；以及WO 01/40192(并入本文供參考)中公開(kāi)的PPAR活化劑化合物。
本方法中所用的普羅布考衍生物包括美國(guó)專(zhuān)利號(hào)6,121,319及6,147,250中公開(kāi)的AGI-1067及其它，其可作為膽固醇降低劑以降低LDL及HDL量。
IBAT抑制劑可抑制膽汁酸輸送，以降低LDL膽固醇量。可用于本方法的適宜IBAT抑制劑的非限制性實(shí)例包括苯并噻庚因諸如包括PCT專(zhuān)利申請(qǐng)?zhí)朩O 00/38727(并入本文供參考)中公開(kāi)的2，3，4，5-四氫-1-苯并噻庚因1，1-二氧化物結(jié)構(gòu)的治療化合物。
本文所用的″煙酸受體激動(dòng)劑″意指包括可作為煙酸受體的激動(dòng)劑用的任何化合物。可用于本方法的煙酸受體激動(dòng)劑包括具有吡啶-3-甲酸酯結(jié)構(gòu)或吡嗪-2-甲酸酯結(jié)構(gòu)的那些，使用時(shí)可包括酸形式、鹽、酯、兩性離子及互變異構(gòu)體。可用于本方法的煙酸受體激動(dòng)劑實(shí)例包括煙酸戊四醇酯(niceritrol)、尼可呋喃糖(nicofuranose)及阿昔莫司(acipimox)。煙酸及NAR激動(dòng)劑可抑制VLDL及其代謝物L(fēng)DL在肝臟中的生成，并且增加HDL和apo A-1水平。適宜煙酸產(chǎn)品實(shí)例為購(gòu)自Kos Pharmaceuticals，Inc.(Cranbury，NJ)的

(煙酸緩釋片)。
治療脂質(zhì)代謝障礙的本方法可進(jìn)一步包括施用一種或多種作為脂質(zhì)降低劑的ACAT抑制劑。ACAT抑制劑可降低LDL及VLDL水平。ACAT是一種負(fù)責(zé)使過(guò)量細(xì)胞內(nèi)膽固醇酯化的酶，并且可降低VLDL(為膽固醇酯化產(chǎn)物)合成以及含apo B-100的脂質(zhì)蛋白質(zhì)過(guò)度產(chǎn)生。
可用于本方法的有用ACAT抑制劑的非限制性實(shí)例包括阿伐麥布(avasimibe)、HL-004、來(lái)西貝特(lecimibide)及CL-277082(N-(2，4-二氟苯基)-N-[[4-(2，2-二甲基丙基)苯基]-甲基]-N-庚基脲)。參見(jiàn)P.Chang et al.，“Current，New and Future Treatments in Dyslipidaemia andAtherosclerosis”，Drugs 2000 Jul；60(1)；55-93，該文獻(xiàn)并入本文供參考。
治療脂質(zhì)代謝障礙的本方法可進(jìn)一步包括與一種或多種氮雜環(huán)丁酮衍生物共同施用或組合施用一種或多種膽甾酰酯轉(zhuǎn)移蛋白(″CEPT″)抑制劑。CEPT負(fù)責(zé)使帶有HDL的膽甾酰酯以及VLDL中的三酸甘油酯交換或轉(zhuǎn)移。
可用于本方法的適宜CEPT抑制劑的非限制性實(shí)例公開(kāi)于PCT專(zhuān)利申請(qǐng)?zhí)朩O 00/38721及美國(guó)專(zhuān)利號(hào)6,147,090，其并入本文供參考。胰腺膽甾酰酯水解酶(pCEH)抑制劑如WAY-121898也可與上述芳氧芳酸衍生物和甾醇吸收抑制劑共同施用或組合施用。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，治療脂質(zhì)代謝障礙的本方法可進(jìn)一步包括施用一種或多種作為脂質(zhì)降低劑的低密度脂質(zhì)蛋白(LDL)受體活化劑?？捎糜诒痉椒ㄖ械倪m宜LDL-受體活化劑的非限制性實(shí)例包括HOE-402，一種直接刺激LDL受體活性的咪唑啶基-嘧啶衍生物。參見(jiàn)M.Huettinger etal.，”Hypolipidemic activity of HOE-402 is Mediated by Stimulation of theLDL Receptor Pathway″，Arterioscler.Thromb.1993；131005-12。
在一個(gè)實(shí)施方案中，治療脂質(zhì)代謝障礙的本方法可進(jìn)一步包括施用含有Ω3脂肪酸(3-PUFA)的魚(yú)油，其可作為脂質(zhì)降低劑降低VLDL和三酸甘油酯水平。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，治療脂質(zhì)代謝障礙的本方法可進(jìn)一步包括施用可降低膽固醇量的天然水溶性纖維，如歐車(chē)前(psyllium)、瓊膠、燕麥和果膠。
在又另一個(gè)實(shí)施方案中，治療脂質(zhì)代謝障礙的本方法可進(jìn)一步包括施用植物甾醇、植物固醇酯和/或植物固醇酯的脂肪酸酯，如

人造奶油中所用的谷甾醇酯，其可降低膽固醇水平。
脫髓鞘作用 此氮雜環(huán)丁酮衍生物可用于治療脫髓鞘作用。中樞神經(jīng)系統(tǒng)(腦部和脊髓)中的脫髓鞘作用發(fā)生在許多原發(fā)性脫髓鞘疾病中，如多發(fā)性硬化、急性播散性腦脊髓炎、腎上腺腦白質(zhì)退化癥、腎上腺髓鞘神經(jīng)病變、賴(lài)柏氏(Leber′s)遺傳性視神經(jīng)萎縮以及HTLV-有關(guān)和脊髓病變。
糖尿病 氮雜環(huán)丁酮衍生物可用于治療糖尿病。糖尿病(通稱(chēng)為糖尿病癥)是指由多種肇病因素所衍生的，并且特征為高水平的血漿葡萄糖(稱(chēng)為高血糖癥)的疾病過(guò)程。動(dòng)脈粥狀硬化的過(guò)早發(fā)展以及心血管和末梢血管疾病的比率增加為糖尿病患者的特征。糖尿病有兩種主要形式I型糖尿病(亦稱(chēng)為胰島素相關(guān)糖尿病或IDDM)及II型糖尿病(亦稱(chēng)為非胰島素相關(guān)糖尿病或NIDDM)。在一個(gè)實(shí)施方案中，此氮雜環(huán)丁酮衍生物可用于治療II型糖尿病。
I型糖尿病為絕對(duì)性胰島素缺乏(調(diào)節(jié)葡萄糖利用的荷爾蒙)的結(jié)果。此胰島素缺乏的特征一般為胰腺中的β細(xì)胞破壞，其通常會(huì)造成絕對(duì)性胰島素缺乏。I型糖尿病有二種形式免疫介導(dǎo)的糖尿病，其是由胰腺β細(xì)胞的細(xì)胞介導(dǎo)的自我免疫破壞所造成；以及特發(fā)性糖尿病，其是指病因未明的疾病形式。
II型糖尿病的特征為因相對(duì)(而非絕對(duì))胰島素缺乏所造成的胰島素抗性。II型糖尿病范圍可以是因相對(duì)胰島素缺乏造成的主要胰島素抗性至因某些胰島素抗性造成的主要胰島素缺乏的范圍。胰島素抗性為胰島素在廣范圍的濃度下發(fā)揮其生物作用的能力下降。胰島素抗性的個(gè)體中，身體會(huì)分泌異常高的胰島素量以補(bǔ)充該缺乏。當(dāng)存在不充分胰島素量以補(bǔ)償胰島素抗性并且充分控制葡萄糖時(shí)，會(huì)發(fā)展為葡萄糖耐受性受損的狀態(tài)。胰島素分泌可能在一段時(shí)間內(nèi)進(jìn)一步下降。
II型糖尿病可能是由于在主要胰島素敏感組織如肌肉、肝臟及脂肪組織中胰島素對(duì)葡萄糖和脂質(zhì)代謝的刺激調(diào)節(jié)作用的抗性。對(duì)胰島素反應(yīng)的該抗性造成肌肉中葡萄糖攝取、氧化及儲(chǔ)存的胰島素活化不足，以及脂肪組織中脂質(zhì)分解和肝臟中葡萄糖產(chǎn)生及分泌的不當(dāng)胰島素抑制。II型糖尿病中，在肥胖和某些非-肥胖患者中的游離脂肪酸量通常會(huì)升高，并且脂質(zhì)氧化增加。
本發(fā)明的氮雜環(huán)丁酮衍生物為GPR119激動(dòng)劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，氮雜環(huán)丁酮衍生物因此可用于治療糖尿病。尤其是，II型糖尿病可通過(guò)單獨(dú)或與一種或多種額外治療糖尿病的藥物組合施用氮雜環(huán)丁酮衍生物來(lái)治療。
可用于治療II型糖尿病的本方法中的其它藥物實(shí)例包括磺酰脲類(lèi)、胰島素敏化劑(如PPAR激動(dòng)劑、DPPIV抑制劑、PTP-1B抑制劑以及葡萄糖激酶活化劑)、α-糖苷酶抑制劑、胰島素分泌促進(jìn)劑、使肝臟葡萄糖產(chǎn)量降低的化合物和胰島素。
磺酰脲類(lèi)藥物的非限制性實(shí)例包括格列吡嗪、甲苯磺丁脲、格列本脲、格列美脲、氯磺丙脲、醋酸己脲、格列胺脲、格列齊特、格列本脲(glibenclamide)及妥拉磺脲。胰島素敏化劑包括上文詳述的PPAR-γ激動(dòng)劑，優(yōu)選為曲格列酮、羅格列酮、吡格列酮及恩格列酮(englitazone)；雙胍類(lèi)如二甲雙胍及苯乙雙胍；DPPIV抑制劑如希塔利伯汀(sitagliptin)、沙加利伯汀(saxagliptin)、第納利伯汀(denagliptin)及維達(dá)利伯汀(vildagliptin)；PTP-1B抑制劑；以及葡萄糖激酶活化劑?？捎糜谥委烮I型糖尿病的α-糖苷酶抑制劑包括米格列醇、阿卡波糖及伏格列波糖。肝臟葡萄糖產(chǎn)量降低藥物包括格華止(Glucophage)及格華止XR(Glucophage XR)。胰島素分泌促進(jìn)劑包括磺酰脲類(lèi)及非磺酰脲類(lèi)藥物如GLP-1、exendin、GIP、分泌素、格列吡嗪、氯磺丙脲、那格列奈、氯茴苯酸(meglitinide)、格列本脲(glibenclamide)、瑞格列奈及格列美脲。胰島素包含胰島素的所有制劑，包括長(zhǎng)效型和短效型胰島素。
本發(fā)明的氮雜環(huán)丁酮衍生物可與治療肥胖的抗肥胖劑組合施用?？捎糜诒痉椒ǖ目狗逝謩?shí)例包括CB1拮抗劑或逆激動(dòng)劑如利莫那班(rimonabant)、神經(jīng)肽Y拮抗劑、MCR4激動(dòng)劑、MCH受體拮抗劑、組織胺H3受體拮抗劑或逆激動(dòng)劑、脂瘦素(leptin)、食欲抑制劑如西布曲明及脂酶抑制劑如賽尼可。
就糖尿病的治療而言，本發(fā)明化合物也可與抗高血壓藥物組合施用，例如β-阻斷劑及鈣通道阻斷劑(例如，地爾硫卓、維拉帕米、硝苯地平、氨氯地平(amlopidine)及mybefradil)、ACE抑制劑(例如，卡托普利、賴(lài)諾普利、依那普利、螺普利、ceranopril、zefenopril、福辛普利、cilazopril及喹那普利)、AT-1受體拮抗劑(例如，氯沙坦、厄貝沙坦及纈沙坦)、血管緊張肽原酶抑制劑及內(nèi)皮素受體拮抗劑(例如，sitaxsentan)。
某些氯茴苯酸(meglitinide)藥物通過(guò)刺激胰島素自胰腺釋放而降低血液葡萄糖水平。此作用與使胰臟胰島中的β細(xì)胞功能化有關(guān)。胰島素釋放是葡萄糖依賴(lài)性的，并且在低葡萄糖濃度下會(huì)減低。氯茴苯酸藥物通過(guò)在可表征位置結(jié)合而關(guān)閉β細(xì)胞膜中的ATP-相關(guān)的鉀通道。此鉀通道的封閉使β細(xì)胞去偏極化，其導(dǎo)致鈣通道開(kāi)啟。所產(chǎn)生的鈣流增加引發(fā)胰島素分泌?？捎糜诒痉椒ǖ倪m宜氯茴苯酸藥物包括瑞格列奈及那格列奈。
已經(jīng)存在的使身體對(duì)胰島素敏化的適宜抗糖尿病藥物的非限制性實(shí)例包括某些雙胍類(lèi)及某些格列酮類(lèi)(glitazones)或噻唑烷二酮。某些適宜的雙胍類(lèi)通過(guò)降低肝臟葡萄糖產(chǎn)生、降低小腸的葡萄糖吸收并改善胰島素敏感性(增加末梢葡萄糖攝取和利用)而使血糖下降。適宜雙胍類(lèi)的非限制性實(shí)例為二甲雙胍。二甲雙胍的非限制性實(shí)例包括二甲雙胍鹽酸鹽(N，N-二甲基亞酰氨基二甲酰亞胺酸二酰胺鹽酸鹽，如購(gòu)自Bristol-Myers Squibb的

片劑)；含格列本脲的二甲雙胍鹽酸鹽，如購(gòu)自Bristol-Myers Squibb的GLUCOVANCETM片劑)；丁福明。
減緩或阻斷淀粉及某些糖類(lèi)分解并且適用于本發(fā)明組合物的抗糖尿病藥物的非限制性實(shí)例包括α-糖苷酶抑制劑以及增加胰島素產(chǎn)生的某些肽。α-糖苷酶抑制劑通過(guò)延緩攝入的碳水化合物消化而協(xié)助身體降低血糖，因此使飯后血糖濃度上升較少。適宜的α-糖苷酶抑制劑的非限制性實(shí)例包括阿卡波糖、米格列醇、卡格列波糖；如WO 01/47528(并入本文供參考)中所公開(kāi)的某些多元胺；伏格列波糖。增加胰島素產(chǎn)生的適宜肽的非限制性實(shí)例包括amlintide(得自Amylin的CAS登記號(hào)122384-88-7；普蘭林肽(pramlintide)、exendin、如WO 00/07617(并入本文供參考)中所述的具有糖原樣肽-1(GLP-1)激動(dòng)活性的某些化合物。
其它抗糖尿病藥物的非限制性實(shí)例包括可口服施用的胰島素。適宜的可口服施用的胰島素或含胰島素的組合物的非限制性實(shí)例包括得自AutoImmune的AL-401，以及如美國(guó)專(zhuān)利號(hào)4,579,730；4,849,405；4,963,526；5,642,868；5,763,396；5,824,638；5,843,866；6,153,632；6,191,105；及國(guó)際專(zhuān)利公開(kāi)號(hào)WO 85/05029(各文獻(xiàn)并入本文供參考)公開(kāi)的某些組合物。
血管病癥 氮雜環(huán)丁酮衍生物可用于治療血管病癥。血管病癥包括動(dòng)脈粥狀硬化、高血脂癥(包含但不限于谷甾醇血癥)、高血壓、血管發(fā)炎、心絞痛、心律不齊及中風(fēng)，以及個(gè)體如停經(jīng)后女性及需要荷爾蒙替代治療的女性中的血管病癥。稱(chēng)為″血液改質(zhì)劑″的藥物可與用于治療血管病癥的氮雜環(huán)丁酮衍生物組合。本文所用的″血液改質(zhì)劑″代表可改變每給定體積血液的血小板數(shù)目、抑制血小板功能的此類(lèi)藥物，包括(但不限于)血小板粘附劑、凝集性或因子釋放，或降低具有異常高某些血液性惡性疾病患者的血小板數(shù)至約正常水平的水平，該正常水平可反向地抗血塊形成并降低血液粘度。本發(fā)明可用的血液改質(zhì)劑包括(但不限于)抗凝結(jié)劑、抗血栓劑、纖維蛋白原受體拮抗劑、血小板抑制劑、血小板凝集抑制劑、與脂質(zhì)蛋白有關(guān)的凝集抑制劑、血液流變劑、因子VIIa抑制劑、因子X(jué)a抑制劑、及其組合，并且意指不包括HMG CoA還原酶抑制劑。就治療個(gè)體如停經(jīng)后的女性及需要荷爾蒙替換治療的女性的血管病癥而言，氮雜環(huán)丁酮衍生物可與荷爾蒙替換療法組合施用，包括施用雄激素、雌激素、孕激素或其藥學(xué)可接受的鹽及衍生物。
″抗凝集劑″為通過(guò)反向地影響血塊形成中必須因素的產(chǎn)生、沉積、斷裂和/或活化而抑制凝集路徑的藥物?？捎玫目鼓瘎┌?但不限于)阿加曲班；比伐盧定(bivalirudin)；達(dá)肝素鈉(dalteparin sodium)(肝素)；地西盧定(desirudin)；雙香豆素(dicumarol)；阿樸酸鈉(lyapolate sodium)；萘莫司他甲磺酸鹽(nafamostate mesylate)；二甲烷磺酸鹽；亭扎肝素鈉(tinzaparin sodium)；華法林鈉。
″抗血栓″藥物是避免形成血栓的藥物。血栓是一種血液因子的凝集物，主要為血小板及纖維蛋白與細(xì)胞元素的捕獲，經(jīng)常引起其形成點(diǎn)的血管阻塞。抗血栓藥物的適宜實(shí)例包括(但不限于)阿那格雷鹽酸鹽(anagrelide hydrochloride)；上述的亭扎肝素鈉(tinzaparin sodium)；西洛他唑(cilostazol)；達(dá)肝素鈉(dalteparin sodium)(如上述)；達(dá)那肝素鈉(danaparoid sodium)；阿昔單抗(Abciximab)為嵌合人類(lèi)-鼠類(lèi)單克隆抗體7E3的Fab片段，結(jié)合至人類(lèi)血小板的葡糖蛋白(GP)IIb/IIIa((α)IIb(β)3)受體，并抑制血小板凝集。阿昔單抗還與血小板及血管壁內(nèi)皮及平滑肌細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的玻璃粘連蛋白((α)v(β)3)受體結(jié)合；如上述的比伐盧定(bivalirudin)；如上述的西洛他唑(cilostazol)；依非加群硫酸鹽(efegatransulfate)；達(dá)唑氧苯鹽酸鹽(dazoxiben hydrochloride)；達(dá)那肝素鈉(danaparoid sodium)(一種低分子量類(lèi)肝素(heparinoid)，為硫酸乙酰肝素(約84％)、硫酸皮膚素(約12％)及硫酸軟骨素(約4％)的混合物，其是由豬之小腸粘膜液衍生)；洛曲非班鹽酸鹽(lotrafiban hydrochloride)；伊非曲班鈉(ifetroban sodium)；拉米非班；氟瑞托芬；依諾肝素鈉(enoxaparinsodium)；奈沙加群(napsagatran)、羅昔非班乙酸鹽(roxifiban acetate)；西拉非班(sibrafiban)；阿左莫單抗(zolimomab aritox)；三苯格雷(trifenagrel)。
″纖維蛋白原受體拮抗劑″為抑制血小板凝集的一般途徑的藥物。適宜的纖維蛋白原受體拮抗劑包括(但不限于)上述的托羅昔非班乙酸鹽(toroxifiban acetate)；上述的洛曲非班鹽酸鹽(lotrafiban hydrochloride)；上述的西拉非班(sibrafiban)；單克隆抗體7E3(嵌合人類(lèi)-鼠類(lèi)單克隆抗體7E3的Fab片段，結(jié)合至人類(lèi)血小板的葡糖蛋白(GP)IIb/IIIa((α)IIb(β)3)受體，并抑制血小板凝集)；奧波非班(orbofiban)；珍米洛非班(xemilofiban)；夫雷非班(fradafiban)；替羅非班(tirofiban)。
″血小板抑制劑″為損害熟成的血小板執(zhí)行其正常生理角色(亦即其正常功能)的能力的藥物。血小板一般涉及多種生理過(guò)程諸如例如粘附至細(xì)胞及非細(xì)胞體、例如對(duì)形成血塊目的的凝集，以及釋放因子如成長(zhǎng)因子(例如血小板衍生的成長(zhǎng)因子(PDGF))和血小板粒狀成份。適宜的血小板抑制劑包括(但不限于)硫酸氫氯吡格雷(clopidogrel bisulfate)、吲哚美辛；mefenamate；噻氯吡啶鹽酸鹽(Ticlopidine hydrochloride)；依前列醇鈉(epoprostenol sodium)；阿司匹林；苯甲酸；依前列醇(epoprostenol)；萘普生；buprofen；屈噁昔康(droxicam)；雙氯芬酸；磺吡酮；吡羅昔康；雙嘧達(dá)莫；來(lái)昔帕泛(lexipafant)；阿帕泛?jiǎn)徇?apafant Morpholine)。
本文所用的″血小板凝集抑制劑″代表降低或遏止血小板與本身或與其它細(xì)胞及非細(xì)胞成份物理性締合的能力，因而阻止血小板形成血栓的能力的那些化合物。適宜的血小板凝集抑制劑包括(但不限于)貝前列素；阿卡地新；貝拉普羅鈉(beraprost sodium)；西前列烯鈣(ciprostenecalcium)；伊他格雷；利法利嗪；氧格雷酯。
本文所用的術(shù)語(yǔ)″血液流變劑″描述通過(guò)降低血液粘度而改善其流動(dòng)性的那些化合物。本發(fā)明適宜的血液流變劑為己酮可可堿。
己酮可可堿及其代謝物(可用于本發(fā)明中)通過(guò)降低血液粘度而改善其流動(dòng)性。對(duì)于具有慢性末梢動(dòng)脈疾病的患者，這會(huì)增加血流以影響微循環(huán)，并且提高組織的充氧作用。己酮可可堿的精確作用模式及導(dǎo)致臨床改善的事件結(jié)果仍須被定義。施用己酮可可堿已顯示可產(chǎn)生劑量相關(guān)的血液流變作用、降低血液粘度和改善紅血球彈性。血液流變重要性的白血球性質(zhì)已在動(dòng)物及體外人類(lèi)研究中獲得改良。己酮可可堿已顯示會(huì)增加白血球變形性，并抑制嗜中性白血球粘附和活化作用。組織含氧量已顯示可通過(guò)使患有末梢動(dòng)脈疾病的患者治療給予己酮可可堿而獲得明顯改善。
脂質(zhì)蛋白質(zhì)相關(guān)的凝集抑制劑(LACI)是一種可用作本發(fā)明的血液改質(zhì)劑的分子量為38,000Kd的血清糖蛋白。其亦稱(chēng)為組織因子抑制劑，因?yàn)樗悄に?組織因子)引發(fā)的凝集作用的天然抑制劑(美國(guó)專(zhuān)利號(hào)5,110,730及5,106,833描述的組織因子，并且并入本文供參考)。LACI是一種蛋白酶抑制劑，并且具有3個(gè)Kunitz區(qū)域，其中二個(gè)已知分別與因子VII及Xa相互作用，但第三個(gè)區(qū)域的功能則未知。LACI的許多結(jié)構(gòu)特性可被推知，因?yàn)槠渑c其它已被充分研究的蛋白酶具有同原性。LACI并非酶，因此可能以化學(xué)劑量的方式抑制蛋白酶標(biāo)靶，即，LACI的一個(gè)區(qū)域可抑制一種蛋白酶分子(見(jiàn)美國(guó)專(zhuān)利號(hào)6,063,74，并入本文供參考)。
本文所用的術(shù)語(yǔ)″因子VIIa抑制劑″是抑制活化因子VIIa使之不作用于形成纖維蛋白塊的那些藥物。適宜的因子VIIa抑制劑包括(但不限于)美國(guó)專(zhuān)利號(hào)6,180,625中所述的4H-3，1-苯并噁嗪-4-酮類(lèi)、4H-3，1-苯并噁嗪-4-硫酮類(lèi)、喹唑啉-4-硫酮類(lèi)、苯并噻嗪-4-酮類(lèi)；美國(guó)專(zhuān)利號(hào)5,639,739中所述的咪唑基-硼酸-衍生的肽類(lèi)似物；美國(guó)專(zhuān)利號(hào)6,180,625中所述的TFPI-衍生的肽。
其它適宜的因子VIIa抑制劑包括(但不限于)萘-2-磺酸{1-[3-(氨基亞氨基甲基)-芐基]-2-氧代-吡咯烷-3-(S)-基}酰胺三氟乙酸鹽、二苯并呋喃-2-磺酸{1-[3-(氨基甲基)-芐基]-5-氧代-吡咯烷-3-基}-酰胺、甲苯-4-磺酸{1-[3-(氨基亞氨基甲基)-芐基]-2-氧代-吡咯烷-3-(S)-基}-酰胺三氟乙酸鹽、3，4-二氫-1H-異喹啉-2-磺酸{1-[3-(氨基亞氨基甲基)-芐基]-2-氧代-吡咯啉-3-(S)-基}-酰胺三氟乙酸鹽或其組合。
本文所用的術(shù)語(yǔ)″因子X(jué)a抑制劑″是抑制活化因子X(jué)使之不作用于形成纖維蛋白塊的那些藥物。本發(fā)明中所用作為因子X(jué)a抑制劑的適宜藥物包括(但不限于)如美國(guó)專(zhuān)利號(hào)6,191,159中所述的二取代的吡唑啉類(lèi)、二取代的三唑啉類(lèi)；脂質(zhì)蛋白相關(guān)的凝集抑制劑(LACI)(如上述)；后述的低分子量肝素；后述的類(lèi)肝素；如美國(guó)專(zhuān)利號(hào)6,207,697中所述的苯并咪唑啉類(lèi)、苯并噁唑啉酮類(lèi)、苯并哌嗪酮類(lèi)、茚滿酮類(lèi)；如J.Med.Chem.371200-1207(1994)中所述的二堿式(脒基芳基)丙酸衍生物；如美國(guó)專(zhuān)利號(hào)5,612,378中所述的雙-芳基磺?；被S酰胺衍生物，如美國(guó)專(zhuān)利號(hào)6,057,342中所述的脒基苯基-吡咯啶類(lèi)、脒基苯基-吡咯啉類(lèi)、脒基苯基-異噁唑烷；如美國(guó)專(zhuān)利號(hào)6,043,257中所述的脒基吲哚類(lèi)、脒基唑類(lèi)；后述的肽性因子X(jué)a抑制劑；如美國(guó)專(zhuān)利號(hào)6,080,767中所述的取代的n-[(氨基亞氨基甲基)苯基]丙基酰胺類(lèi)、取代的n-[(氨基甲基)苯基]丙基酰胺類(lèi)；或其組合。
肽性因子X(jué)a抑制劑諸如吸血蟲(chóng)-衍生的119-氨基酸蛋白質(zhì)抗斯達(dá)汀(antistasin)及軟蜱衍生的蛋白質(zhì)TAP(蜱抗凝集劑肽)加速血塊溶解，并且當(dāng)作為血栓溶解的助劑提供時(shí)，可避免再凝聚(Mellott et al.，CirculationResearch 701152-1160(1992)；Sitko et al.，Circulation 85805-815(1992))。1995年1月31日頒發(fā)的美國(guó)專(zhuān)利號(hào)5,385,885公開(kāi)了蜱抗凝集劑肽及抗斯達(dá)汀兩者的平滑肌細(xì)胞增生抑制活性。肽歐克汀(ecotin)是另一種選擇性、可逆、緊密結(jié)合的因子X(jué)a的抑制劑，其顯示出蛋白質(zhì)抗凝集活性(Seymour et al.，Biochemistry 333949-3959(1994)；PCT專(zhuān)利公開(kāi)號(hào)WO 94/20535，09/14/1994)。硬蜱科(Ixodidae)、阿加新(argasin)及鉤蟲(chóng)素(ancylostomatin)是從吸血?jiǎng)游锓蛛x的其它代表性肽性因子X(jué)a抑制劑(Markwardt，Thrombosis and Hemostasis 72477-479(1994)。
本發(fā)明中可用的肽性因子X(jué)a抑制劑的那些非限制性實(shí)例以其CAS登記號(hào)列于后文。這些包括蛋白酶抑制劑；抗斯達(dá)??；CAS登記號(hào)110119-38-5；蜱抗凝集劑肽；(蛋白酶抑制劑，TAP)CAS登記號(hào)129737-17-3；歐克??；(蛋白酶抑制劑，歐克汀)CAS登記號(hào)87928-05；阿加新(argasin)；CAS登記號(hào)53092-89-0；鉤蟲(chóng)素；CAS登記號(hào)11011-09-9；硬蜱科(Ixodidae)(如Markwardt中所述，1994)。
本文所用的術(shù)語(yǔ)″低分子量肝素″是指由相比于標(biāo)準(zhǔn)肝素而言可降低出血發(fā)生的肝素所衍生的藥物。肝素是其MW范圍在2000-10000間的葡萄胺聚糖。其可由豬小腸粘膜液產(chǎn)生，并且除了那屈肝素(nadroparan)以外，均為鈉鹽。本發(fā)明的適宜類(lèi)肝素包括(但不限于)依諾肝素(enoxaparin)、nardroparin、dalteparin、certroparin、parnaparin、瑞維肝素(reviparin)、tinzaparin及其組合。
本文所用的術(shù)語(yǔ)″類(lèi)肝素″是指與標(biāo)準(zhǔn)肝素相比時(shí)，可降低出血發(fā)生的肝素改質(zhì)形式。本發(fā)明適宜的類(lèi)肝素包括(但不限于)達(dá)那肝素(Danaparoid)CAS登記號(hào)308068-55-5(例如，Orgaran Injection Organon)。
可用的雌激素和雌激素組合的實(shí)例包括equilenin (a)包括下列合成雌激素物質(zhì)的混合物雌酮硫酸鈉、馬烯雌酮硫酸鈉、17α-二氫馬烯雌酮硫酸鈉、17α-雌二醇硫酸鈉、17β-二氫馬烯雌酮硫酸鈉、17α-二氫馬萘雌酮硫酸鈉、17β-二氫馬萘雌酮硫酸鈉、馬萘雌酮硫酸鈉和17β-雌二醇硫酸鈉。
(b)乙炔雌二醇； (c)酯化雌激素組合如雌酮硫酸鈉和馬烯雌酮硫酸鈉的組合； (d)雌酮硫酸酯哌嗪(estropipate)；以及 (e)共軛的雌激素(17α-二氫馬烯雌酮、17α-雌二醇和17β-二氫馬烯雌酮)；購(gòu)自Wyeth-Ayerst Pharmaceuticals，Philadelphia，PA，商標(biāo)為PREMARIN。
孕激素和雌激素也可以各種劑量施用，通常約0.05至約2.0mg孕激素以及約0.001mg至約2mg的雌激素。在一個(gè)實(shí)施方案中，該劑量為約0.1mg至約1mg的孕激素以及約0.01mg至約0.5mg的雌激素。在劑量上和服用方案上可改變的孕激素和雌激素組合的實(shí)例包括 (a)雌二醇與炔諾酮(norethindrone)的組合，購(gòu)自Pharmacia&Upjohn，Peapack，NJ，商標(biāo)為ACTIVELLA； (b)左炔諾孕酮(levonorgestrel)和乙炔雌二醛的組合；購(gòu)自例如Wyeth-Ayerst，商標(biāo)為ALESSE； (c)二乙酸乙炔諾二醇(ethynodiol diacetate)和乙炔雌二醇的組合；購(gòu)自G.D.Searle&Co.，Chicago，IL，商標(biāo)為DEMULEN； (d)脫氧孕烯(desogestrel)和乙炔雌二醇的組合；購(gòu)自O(shè)rganon，商標(biāo)為DESOGEN及MIRCETTE； (e)炔諾酮(norethindrone)和乙炔雌二醇的組合；購(gòu)自Parke-Davis，Morris Plains，NJ，商標(biāo)為ESTROSTEP及Femhrt； (f)甲炔諾酮(norgestrel)和乙炔雌二醇的組合；購(gòu)自Wyeth-Ayerst，商標(biāo)為OVRAL和LO/OVRAL； (g)炔諾酮、乙炔雌二醇和美雌醇(mestranol)的組合；購(gòu)自Watson，商標(biāo)為BREVICON和NORINYL； (h)17β-雌二醇和微米化炔諾酮的組合，購(gòu)自O(shè)rtho-McNeil，商標(biāo)為ORTHO-PREFEST； (i)諾孕酯(norgestimate)和乙炔雌二醇的組合；購(gòu)自O(shè)rtho-McNeil，商標(biāo)為ORTHO CYCLEN和ORTHO TRI-CYCLEN；以及 (j)共軛雌激素(雌酮硫酸鈉和馬烯雌酮硫酸鈉)和醋酸甲羥孕酮的組合，購(gòu)自Wyeth-Ayerst，商標(biāo)為PREMPHASE和PREMPRO。
大體而言，若施用微米化黃體酮，則孕激素的劑量可在約0.05mg至約10mg或至多約200mg間改變。孕激素的實(shí)例包括炔諾酮；甲炔諾酮；微米化黃體酮和醋酸甲羥孕酮。
適宜的雌激素受體調(diào)節(jié)劑或抗雌激素的非限制性實(shí)例包括雷洛昔芬鹽酸鹽、他莫昔芬檸檬酸鹽及托瑞米芬檸檬酸鹽。
非酒精性脂肪肝疾病 氮雜環(huán)丁酮衍生物可用于治療非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)。NAFLD描述的是從單純脂肪肝(脂肪變性)到進(jìn)行性纖維化和肝臟衰竭的非酒精性脂肪肝炎(NASH)的廣譜肝臟疾病。具有或不具有高血脂跡象的高血糖癥通常會(huì)伴隨有NAFLD。該疾病在無(wú)法消耗明顯量酒精的患者中呈現(xiàn)酒精引發(fā)的肝臟疾病的組織特性。NAFLD的所有階段通常在肝臟細(xì)胞中累積脂肪。Farrell和Larter在Hepatology，243S99-S112(2006)中以NAFLD譜中的肝臟脂肪變性和肝硬化間的″關(guān)鍵性事物(lynchpin)″描述NASH。還參見(jiàn)Palekar et al.，Liver Int.，26(2)151-6(2006)。在NASH中，脂肪累積伴隨不同程度的發(fā)炎和纖維化。伴隨NAFLD最常發(fā)生的癥狀為肥胖癥、II型糖尿病和代謝并發(fā)癥。
美國(guó)專(zhuān)利公開(kāi)號(hào)2004/29805描述了通過(guò)施用使受體拮抗葡萄糖依賴(lài)性促胰島素多肽的藥物而預(yù)防或治療NAFLD。NASH的治療包括飲食和運(yùn)動(dòng)和/或施用普羅布考、氯非貝(clofribrate)、吉非貝齊、甜菜堿、維生素E和/或C、二甲雙胍、toglitaxone、羅格列酮(rosiglitazone)或plogitazone及維生素E。M.Charlton，Clinical Gastroenterology and Hepatology，2(12)，1048-56(2004)；P.Portincaso et al.Clinical Biochemistry，38，203-17(2005)。美國(guó)專(zhuān)利公開(kāi)號(hào)2004/105870A1描述NASH的治療，包括施用包含食用卵磷脂補(bǔ)充品、維生素B或抗氧化劑的制劑。美國(guó)專(zhuān)利公開(kāi)號(hào)2005/0032823A1和2004/0102466A1描述嘧啶衍生物，其為選擇性COX-2抑制劑，如可用于治療NASH。治療脂肪肝疾病的其它化合物描述于美國(guó)專(zhuān)利公開(kāi)號(hào)2005/0004115A1。通過(guò)對(duì)哺乳類(lèi)施用有效量的包括至少一種氮雜環(huán)丁酮衍生物或HMG-CoA還原酶抑制劑和/或至少一種H3受體拮抗劑/逆激動(dòng)劑的治療組合而預(yù)防或減輕該哺乳類(lèi)的肝硬化及肝細(xì)胞癌的發(fā)展。
2005年12月20日申請(qǐng)的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)?0/752710和2006年3月29日申請(qǐng)的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)?0/77048揭示單獨(dú)使用膽固醇吸收劑或與治療NAFLD或NASH的H3受體拮抗劑/逆激動(dòng)劑組合使用。
治療NAFLD的本方法包含組合療法，包括施用氮雜環(huán)丁酮衍生物和至少一種H3受體拮抗劑/逆激動(dòng)劑。H3受體拮抗劑/逆激動(dòng)劑為本領(lǐng)域所公知。H3受體位置見(jiàn)于交感神經(jīng)上，在該處其調(diào)節(jié)交感神經(jīng)傳送，并且在交感神經(jīng)系統(tǒng)控制下使終端器官的反應(yīng)衰減。尤其是，通過(guò)組織胺的H3受體活化將衰減腎上腺素的流出至阻力和容量血管(resistance andcapacitance vessels)，造成血管擴(kuò)張。已知H3受體拮抗劑/逆激動(dòng)劑可治療患者如哺乳動(dòng)物的下列疾病過(guò)敏、過(guò)敏引起的呼吸道(例如上呼吸道)反應(yīng)、充血(例如鼻充血)、高血壓、心血管疾病、GI道的疾病、胃腸道的過(guò)度和過(guò)低蠕動(dòng)性以及胃酸分泌、肥胖癥、睡眠失調(diào)(例如，嗜睡、欲睡(somnolence)和發(fā)作性睡病(narcolepsy))、中樞神經(jīng)系統(tǒng)紊亂、注意力不集中的過(guò)度反應(yīng)疾病(ADHD)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)的過(guò)低和過(guò)度活化(例如焦躁和憂郁)、和/或其它CNS疾病(如阿耳茲海默癥、精神分裂癥和偏頭痛)。此類(lèi)化合物尤其可用于治療過(guò)敏癥、過(guò)敏引起的呼吸道反應(yīng)和/或充血。
可用于本發(fā)明的組合療法中的H3受體拮抗劑/逆激動(dòng)劑包括(但不限于)咪唑類(lèi)，如國(guó)際專(zhuān)利公開(kāi)號(hào)WO 95/14007和WO 99/24405中所述；美國(guó)專(zhuān)利號(hào)6,720,328中所述的非-咪唑類(lèi)H3受體拮抗劑；美國(guó)專(zhuān)利公開(kāi)號(hào)US 2004/0019099中所述的吲哚衍生物；美國(guó)專(zhuān)利公開(kāi)號(hào)US2004/0048843A1和美國(guó)專(zhuān)利公開(kāi)號(hào)US 2004/0097483A1中所述的苯并咪唑衍生物；以及美國(guó)專(zhuān)利號(hào)6,849,621中所述的哌啶衍生物。上述有關(guān)H3拮抗劑/逆激動(dòng)劑的專(zhuān)利和申請(qǐng)案并入本文供參考。
組合物和施用 本發(fā)明提供一種包含有效量的氮雜環(huán)丁酮衍生物和藥學(xué)可接受的載體的醫(yī)藥組合物。就由使用在本發(fā)明方法中所述的化合物制備醫(yī)藥組合物而言，惰性藥學(xué)可接受的載體可為固體或液體。固體制劑包括粉劑、片劑、可分散細(xì)粒劑、膠囊、藥片和栓劑。粉劑和片劑可包含約5至約70％的活性成份。適宜的固態(tài)載劑為本領(lǐng)域已知，例如碳酸鎂、硬脂酸鎂、滑石、糖、乳糖。片劑、粉劑、藥片及膠囊可以適宜口服施用的固體劑型使用。
就制備栓劑而言，先使低熔點(diǎn)蠟如脂肪酸甘油酯或可可亞奶油熔化，并且以例如攪拌使活性成份均勻分散于其中。接著將熔融的均勻混合物倒入適宜尺寸的模具中，使之冷卻并因此而固化。
液體制劑包括溶液、懸浮液和乳劑。可提及的實(shí)例為非經(jīng)腸胃注射的水或水-丙二醇溶液。
液體制劑也可包含鼻內(nèi)施用的溶液。
適用于吸入的氣溶膠制劑包括溶液和粉末態(tài)固體，其可與藥學(xué)可接受的載體如惰性壓縮氣體并用。
還包括的是在使用前即刻轉(zhuǎn)化成口服或非經(jīng)腸胃施用的液體制劑的固體制劑。該液體形式包含溶液、懸浮液和乳劑。
本發(fā)明的氮雜環(huán)丁酮衍生物也可經(jīng)皮輸送。經(jīng)皮組合物可為乳膏、洗劑、氣溶膠和/或乳劑的形式使用，并且可包含于用于該目的的本領(lǐng)域已知的基質(zhì)經(jīng)皮貼片或儲(chǔ)液囊中。
在一個(gè)實(shí)施方案中，氮雜環(huán)丁酮衍生物是經(jīng)口施用。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，氮雜環(huán)丁酮衍生物是經(jīng)靜脈內(nèi)施用。
在一個(gè)實(shí)施方案中，包括一種或多種氮雜環(huán)丁酮衍生物的醫(yī)藥制劑是呈單位劑型。在此劑型中，制劑被細(xì)分成含適量活性成份例如有效達(dá)到所需目的的量的單位劑量。
單位劑量制劑中的氮雜環(huán)丁酮衍生物量可在約0.1mg至約1000mg間改變或調(diào)整。在一個(gè)實(shí)施方案中，依據(jù)特定用途而定，該量為約1mg至約300mg。
所用的實(shí)際劑量可依據(jù)患者的需要和欲治療病癥的嚴(yán)重性而定。對(duì)特定狀況決定適宜劑量是在本領(lǐng)域的技能范圍內(nèi)。通常，治療開(kāi)始使用低于化合物最佳劑量的較小劑量。隨后，以小增量增加劑量直到該狀況下達(dá)到最佳效力為止。為方便起見(jiàn)，總?cè)談┝靠煞殖蓴?shù)份，并且如果需要，可以在全天分?jǐn)?shù)次施用。
氮雜環(huán)丁酮衍生物施用的量和頻度將依據(jù)參與的臨床醫(yī)師考慮，如年齡、病癥和患者大小以及欲治療病征的嚴(yán)重性等因素判斷。就口服施用而言，氮雜環(huán)丁酮衍生物的典型建議劑量方案為約10mg/天至約2000mg/天。在一個(gè)實(shí)施方案中，劑量為約10mg/天至約1000mg/天，分成二或四等分的劑量以使上述疾病或病癥獲得減輕。
治療或預(yù)防病癥的本發(fā)明組合療法中所用其它藥物的劑量和劑量方案可由參與的臨床醫(yī)師參考包裝說(shuō)明中經(jīng)認(rèn)可的劑量和劑量方案，考慮患者的年齡、性別和病癥以及疾病嚴(yán)重性而決定。組合施用時(shí)，則治療上述疾病或病癥用的氮雜環(huán)丁酮衍生物及其它藥物可同時(shí)或連續(xù)施用。當(dāng)組合成分優(yōu)選以不同施用時(shí)間給予時(shí)，例如一種成分每天施用一次，另一種則每六小時(shí)一次，或者當(dāng)優(yōu)選的醫(yī)藥組合物并不相同時(shí)，例如其中一種優(yōu)選為片劑而一種為膠囊時(shí)尤其有用。因此用包括分開(kāi)劑型的藥盒較為有利。
可用于本方法中的其它治療劑的非限制劑量范圍列于下。然而，確切劑量是由參與的臨床醫(yī)師決定，并且取決于例如施用化合物的效力、患者的年齡、體重、病癥和反應(yīng)等因素。
通常，膽固醇生物合成抑制劑的總?cè)談┝靠稍诿刻旒s0.1至約160mg之間。在一個(gè)實(shí)施方案中，該劑量為約0.2至約80mg/天，以單次劑量或分2-3次劑量施用。
通常，過(guò)氧化物酶體增生劑-活化的受體活化劑的總?cè)談┝靠稍诿刻旒s50至約3000mg之間。在一個(gè)實(shí)施方案中，日劑量為每天約50至約2000mg，以單次劑量或分2-4次劑量施用。
通常，IBAT抑制劑的總?cè)談┝靠稍诩s0.01至約1000mg/天之間。在一個(gè)實(shí)施方案中，該劑量為約0.1至約50mg/天，以單次劑量或2-4次劑量施用。
通常，煙酸的總?cè)談┝靠稍诩s500至約10,000mg/天之間。在一個(gè)實(shí)施方案中，該劑量為約1000至約8000mg/天。在一個(gè)實(shí)施方案中，該劑量為約3000至約6000mg/天，以單次劑量或分開(kāi)劑量施用。通常，NAR激動(dòng)劑的總?cè)談┝靠稍诩s1至約100mg/天之間。
通常，ACAT抑制劑的總?cè)談┝靠稍诩s0.1至約1000mg/天之間，以單次劑量或2-4次劑量施用。
通常，CETP抑制劑的總?cè)談┝靠稍诩s0.01至約1000mg/天之間，并且較好約0.5至約20mg/kg/天，以單次劑量或分成2或多次劑量施用。
通常，普羅布考或其衍生物的總?cè)談┝靠稍诩s10至約2000mg/天之間。在一個(gè)實(shí)施方案中，劑量為約500至約1500mg/天，以單次劑量或分2-4次劑量施用。
通常，LDL受體活化劑的總?cè)談┝靠稍诩s1至約1000mg/天之間，以單次劑量或分2-4次劑量施用。
通常，魚(yú)油或Ω3脂肪酸的總?cè)談┝靠稍诿刻旒s1至約30g之間，以單次劑量或分2-4次劑量施用。
通常，天然水溶性纖維的總?cè)談┝靠稍诿刻旒s0.1至約10g之間，以單次劑量或分2-4次劑量施用。
通常，植物固醇、植物固甾醇和/或植物固甾醇的脂肪酸酯的總?cè)談┝靠稍诿刻旒s0.5至約20g之間，以單次劑量或分2-4次劑量施用。
通常，抗糖尿病劑的總?cè)談┝靠稍诿刻旒s1至約3000mg之間。在一個(gè)實(shí)施方案中，總?cè)談┝繛槊刻旒s50至約2000mg，以單次劑量或分2-4次劑量施用。
通常，血液改質(zhì)劑或醫(yī)藥的總?cè)談┝靠稍诩s1至3,000mg/天之間，優(yōu)選為約1至約1,000mg/天，并且更好為約1至200mg/天，單次或分成2-4次劑量施用。治療可以治療有效量的血液改質(zhì)劑施用，以治療特定病癥，例如日劑量較好在每天約1至約1000mg之間，并且更好為每天約5至約200mg，以單次劑量或分成2-4次劑量施用。然而，確切的劑量是由參與的臨床醫(yī)師決定，并且取決于如施用化合物的效力、患者的年齡、體重、病癥和反應(yīng)等因素。
與氮雜環(huán)丁酮衍生物組合使用的雄激素和雌激素的劑量可改變，并且通常在約1mg至約4mg雄激素和約1mg至約3mg雌激素之間。實(shí)例包括(但不限于)雄激素與雌激素的組合諸如酯化的雌激素(雌酮硫酸鈉和馬烯雌酮硫酸鈉)與甲基睪酮的組合。
雌激素和雌激素組合的劑量可在約0.01mg至至多8mg間改變。在一個(gè)實(shí)施方案中，劑量為約0.3mg至約3.0mg。
實(shí)施例 通用方法 所有溶劑及試劑均以收到時(shí)狀態(tài)使用。質(zhì)子NMR光譜是使用VarianXL-400(400MHz)設(shè)備獲得并且以自Me4Si低磁場(chǎng)的百萬(wàn)分之一(ppm)記錄。LCMS分析是使用裝置有島津SCL-10A LC柱的Applied BiosystemsAPI-100質(zhì)譜分光儀進(jìn)行Altech鉑C18，3μm，33mm×7mm ID；梯度流動(dòng)0分鐘，10％CH3CN；5分鐘，95％CH3CN；7分鐘，95％CH3CN；7.5分鐘，10％CH3CN；9分鐘，停止?？焖僦V是使用SelectoScientiic快速硅膠，32-63目進(jìn)行。分析型和制備型TLC是使用Analtech硅膠GF板進(jìn)行的。手性HPLC是使用裝置有Chiralpak OD柱(ChiralTechnologies)的Varian PrepStar系統(tǒng)進(jìn)行的。
實(shí)施例1 中間體化合物IA-1的制備 可用于制備式(IA)氮雜環(huán)丁酮衍生物的中間體的化合物IA-1的合成描述于下
IA-1 使LiHMDS(2.8mol)在THF(1.0升)中的第一溶液冷卻至-30℃，并且在攪拌下通過(guò)滴加將苯甲醛(300g，2.8mol)添加至所得混合物中。在另一瓶中，使LDA的第二溶液(2.8mol，在THF中)冷卻至-78℃，并且滴加BOC-乙基異哌啶酸酯(687g，2.8mol)在THF(500mL)中的溶液。接著將第一溶液在攪拌下滴加至第二溶液中，其速率是使整個(gè)添加過(guò)程中的反應(yīng)溫度保持在0℃以下。接著使所得反應(yīng)在0℃下攪拌約3小時(shí)，隨后使用水(1升)小心地使反應(yīng)猝滅。用乙酸乙酯(5升)萃取所得溶液，并移到分液漏斗中。收集有機(jī)層，使用硫酸鎂干燥，真空濃縮，獲得粗制產(chǎn)物，使之從1.5升己烷∶乙酸乙酯(2∶1)中重結(jié)晶，獲得化合物IA-1的固體(67％)。1HNMR(300MHz，DMSO)δ7.4(d，2H)，7.3(br，3H)，4.6(s，1H)，3.5(br，2H)，3.2(br，1H)，3.0(br，1H)，1.9(br，2H)，1.3(s，9H)，1.2(br，1H)，1.0(br，1H)。
實(shí)施例2 中間體化合物IB-1的制備 可用于制備式(IB)氮雜環(huán)丁酮衍生物的中間體的化合物IB-1的合成描述于下
IB-1 使用實(shí)施例1中描述的方法，并且以4-氯苯甲醛取代苯甲醛，制備化合物IB-1。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.4(d，2H)，7.2(t，3H)，4.5(s，1H)，3.8(br，1H)，3.6(t，1H)，3.3(br，2H)，2.1(br，1H)，1.9(br，1H)，1.4(s，9H)，1.2(br，1H)。
實(shí)施例3 中間體化合物IC-1的制備 可用于制備式(IC)氮雜環(huán)丁酮衍生物的中間體的化合物IC-1的合成描述于下
IC-1 使用實(shí)施例1中描述的方法，并且以吡啶-3-甲醛取代苯甲醛，制備化合物IC-1。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.2(d，2H)，7.3(d，1H)，7.0(m，1H)，4.2(s，1H)，3.3(br，1H)，3.2(t，1H)，3.1(br，1H)，3.0(br，1H)，1.9(d，1H)，1.6(t，1H)，1.1(s，10H)，0.8(m，1H)。
實(shí)施例4 中間體化合物ID-1的制備 可用于制備式(ID)氮雜環(huán)丁酮衍生物的中間體的化合物ID-1的合成描述于下
ID-1 使用實(shí)施例1中描述的方法，并且以吡啶-2-甲醛取代苯甲醛，制備化合物ID-1。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.7(d，1H)，7.8(t，1H)，7.4(d，1H)，7.2(m，1H)，6.2(s，1H)，4.5(s，1H)，3.8(br，1H)，3.6(m，1H)，3.2(br，2H)，2.1(br，1H)，1.9(m，1H)，1.5(m，1H)，1.4(s，9H)，1.1(m，1H)。
實(shí)施例5 化合物IA-2的制備
IA-2 向化合物IA-1(94mmol，如實(shí)施例1制備)在二噁烷(200mL)中的攪拌溶液中添加溴苯(24g，104mmol)、N，N-二甲基乙二胺(1.1mL，9.4mmol)、CuI(3.6g，18mmol)和碳酸鉀(26g，188mmol)。使所得反應(yīng)加熱至回流，并使之在回流下攪拌約15小時(shí)。接著使反應(yīng)混合物冷卻至室溫，過(guò)濾。濾液用乙酸乙酯(1升)稀釋?zhuān)名}水洗滌，用MgSO4干燥，過(guò)濾，真空濃縮，獲得粗制產(chǎn)物，用乙酸乙酯洗滌，獲得化合物IA-2(92％)。
實(shí)施例6 化合物IA-3的制備
IA-3 在室溫下向化合物IA-2(58mmol，如實(shí)施例5制備)在DCM(125mL)中的溶液中以滴加方式添加三氟乙酸(23mL，290mmol)。使反應(yīng)攪拌5小時(shí)，真空濃縮，獲得粗制殘留物。該粗制殘留物用二乙醚研碎，獲得固體，用乙醚洗滌，獲得化合物IA-3的三氟乙酸鹽(90％)。1H NMR(300MHz，DMSO)δ7.3(m，7H)，7.1(d，2H)，7.0(t，1H)，5.2(s，1H)，3.2(br，2H)，3.0(m，1H)，2.6(br，1H)，2.2(m，2H)，1.6(br，1H)，1.2(m，1H)。
實(shí)施例7 化合物IB-2的制備
IB-2 使化合物IB-1(160mmol，如實(shí)施例2制備)在DMF(200mL)中的攪拌溶液冷卻至0℃，并向此冷卻溶液中添加NaH(9.07g，207mmol)，接著添加2-溴丙烷(19.4mL，207mmol)。接著使反應(yīng)溫度上升至50℃，并使反應(yīng)在該溫度下攪拌5小時(shí)。接著使反應(yīng)混合物冷卻至室溫，使用冰水將反應(yīng)猝滅，并且使用乙酸乙酯萃取所得混合物。收集有機(jī)層，用鹽水洗滌，用MgSO4干燥，過(guò)濾，真空濃縮，獲得粗制殘留物，使之從己烷∶乙酸乙酯(2∶1)中重結(jié)晶，獲得化合物IB-2的固體(60％)。
實(shí)施例8 化合物IB-3的制備
IB-3 使用實(shí)施例6中所述的方法，以化合物IB-2取代IA-2，制備化合物IB-3的三氟乙酸鹽(90％)。1H NMR(DMSO)δ8.6(br，1H)，8.4(br，1H)，7.5(m，4H)，4.7(s，1H)，3.5(m，1H)，3.3(br，2H)，2.9(br，1H)，2.7(br，1H)，2.1(br，2H)，1.6(br，1H)，1.3(d，3H)，1.2(m，1H)，1.0(d，3H)。
使用上述實(shí)施例1-8所述相同的方法，并且依據(jù)所需的R1和R2基而選擇適宜試劑，制備下表7中所述的中間體化合物。須注意，當(dāng)R1為芳基或雜芳基時(shí)，優(yōu)選的合成方法為上述實(shí)施例5中所述的方法，并且當(dāng)R1為烷基或取代的烷基時(shí)，優(yōu)選的合成方法為上述實(shí)施例7中所述的方法。
表7





表7中所式的化合物可依據(jù)實(shí)施例6中所述的方法，用TFA處理，移除BOC保護(hù)基，并且獲得如上述反應(yīng)圖1、3、4和5中所述式6的各種中間體化合物。
實(shí)施例9 氮雜環(huán)丁酮衍生物對(duì)離子通道的功能性效果評(píng)估 電壓控制的離子通道的功能性評(píng)估可用于測(cè)定氮雜環(huán)丁酮衍生物的強(qiáng)效性和/或單一濃度效力。可使用二種不同方法以測(cè)量離子電流IonWorks HT(Molecular Devices，Sunnyvale，CA)，這是一種使用96-孔化合物盤(pán)的中等通量電壓夾篩選平臺(tái)；以及針對(duì)更低通量、更高真實(shí)度測(cè)定法的常規(guī)全細(xì)胞片夾。
細(xì)胞株 HEK細(xì)胞被暫時(shí)轉(zhuǎn)染，然后選擇所關(guān)心的不同通道蛋白質(zhì)的穩(wěn)定異源表達(dá)。鈣通道細(xì)胞株表達(dá)休止鉀電流(人類(lèi)Kir2.1)和形成電壓控制的鈣通道的α-亞單位的孔。在Cav2.1細(xì)胞的情況下，輔助亞單位β2a亦被表達(dá)。用以產(chǎn)生數(shù)據(jù)的鈣通道細(xì)胞株將會(huì)表達(dá)人類(lèi)Cav3.2、大鼠Cav3.2或人類(lèi)Cav2.1。該人類(lèi)心臟鈉通道hNav1.5在CHO細(xì)胞中穩(wěn)定表達(dá)。
細(xì)胞株可在37℃下在95％空氣/5％CO2平衡的孵育箱中生長(zhǎng)。CHO細(xì)胞株可在Ham′s F-12培養(yǎng)基中生長(zhǎng)。HEK細(xì)胞可在DMEM中生長(zhǎng)。所有培養(yǎng)基補(bǔ)充有10％熱-滅活的胎牛血清、青霉素、鏈霉素和適當(dāng)選擇的抗生素(zeocin、慶大霉素(geneticin)和/或潮霉素)。當(dāng)80％融合或更少時(shí)，該細(xì)胞被傳代。
對(duì)hCav3.2的IonWork篩選 用于使用此設(shè)備的細(xì)胞外緩沖液含有下列(mM)(NaCl 125、HEPES10、KCl 5.4、CaCl2 1.8、MgCl2 1.8、0.2 BaCl2 pH 7.35)。該IonWork使用兩性霉素以達(dá)到接近細(xì)胞內(nèi)部的電流。該內(nèi)部溶液含有(mM濃度)130K-葡糖酸酯、20KCl、5HEPES-KOH(pH 7.25)、2CaCl2、1MgCl2。若存在兩性霉素則其以5mg添加于65mL中(在650微升DMSO中)。所有用于此實(shí)驗(yàn)的內(nèi)部和外部溶液含有1％DMSO。細(xì)胞確實(shí)從T-75瓶中胰蛋白酶化，并且以2×105個(gè)細(xì)胞/mL的密度再懸浮于細(xì)胞外緩沖液中。
實(shí)驗(yàn)在室溫下進(jìn)行。進(jìn)行電壓協(xié)議之前，轉(zhuǎn)膜電位保持在-100mV達(dá)5秒。在此期間，在步進(jìn)至-110mV(200毫秒)期間測(cè)量滲漏電流。T-型鈣電流以250毫秒步進(jìn)至-20mV而活化。此去偏極化步驟以1秒的脈沖間間隔1秒總計(jì)重復(fù)10個(gè)脈沖。若未符合下列可接受標(biāo)準(zhǔn)則排除該數(shù)據(jù)對(duì)化合物前(pre-compound)掃描的總電阻＞65MΩ，化合物前的電流＞250pA，化合物后的總電阻＞50MΩ。
T-型電流測(cè)量為頂點(diǎn)內(nèi)向電流減去250毫秒步進(jìn)至-20mV結(jié)束時(shí)的電流。建立記錄過(guò)程后，化合物前的測(cè)量電流擴(kuò)增?；衔镆院?％DMSO的3X溶液添加。與化合物孵育10分鐘后，再度測(cè)量電流?；衔锾砑雍蟮碾娏鲾U(kuò)增除以10脈沖的化合物前的電流，以確定化合物添加后電流維持分率。對(duì)各化合物而言，以1/2對(duì)數(shù)連續(xù)稀釋測(cè)量8-點(diǎn)濃度-效果關(guān)系。這些數(shù)據(jù)接著轉(zhuǎn)移至GraphPad Prism(v 4)，并使用非線性回歸分析以評(píng)估各試驗(yàn)化合物的IC50。
使用該方法，獲得下列數(shù)據(jù)用于說(shuō)明示例性的氮雜環(huán)丁酮衍生物

常規(guī)全細(xì)胞膜片夾片 在適宜生長(zhǎng)的培養(yǎng)基中將細(xì)胞鋪于9mm直徑圓形蓋玻片上，并在使用前放置在37℃孵育箱中。使用常規(guī)方法在室溫下進(jìn)行全細(xì)胞膜片夾片研究。使用PCLAMP軟件(v8或9)與可兼容A/D D/A板連用，可使用Pentium III個(gè)人計(jì)算機(jī)與Multiclamp 700或AxoPatch 1D增幅器以產(chǎn)生電壓夾片協(xié)議、獲取數(shù)據(jù)和測(cè)量電流。
研究時(shí)，將附有細(xì)胞的一片蓋玻片移至倒置顯微鏡的臺(tái)上的記錄腔室內(nèi)，并建立膜片夾片的全細(xì)胞離心。該記錄腔室通過(guò)重力以約3mL/分鐘的流速灌注細(xì)胞外溶液。當(dāng)填充移液管溶液時(shí)，貼片電極應(yīng)具有2-3MΩ的電阻。所用的細(xì)胞外溶液為HEPES-緩沖的鹽水(NaCl(149mM))、HEPES-NaOH(10mM，pH 7.4)、葡萄糖(10mM)、CsCl(5mM)、MgCl2(2mM)、CaCl2(5mM)。移液管溶液含有CsCl(115mM)、HEPES-CsOH(10mM，pH 7.3)、MgATP(4mM)、EGTA(10mM)；用蔗糖滲透至310mM。所有溶液含有0.1％ DMSO。
所有協(xié)議中固定電位為-100mV。脈沖內(nèi)間隔為15秒。以200毫秒試驗(yàn)脈沖至-35mV檢測(cè)hCav3.2或rCav3.2電流的時(shí)間歷程。Cav3.2電流測(cè)定為電壓步進(jìn)至-35mV后10-30毫秒的峰值電流。使用P/N 4漏減。增幅器低通濾設(shè)定為10kHz，并在10kHz對(duì)數(shù)據(jù)取樣。數(shù)據(jù)以具有280Hz的-3dB截?cái)嗟母咚?Gaussian)濾波器離線濾波。對(duì)hCaV2.1電流的電壓協(xié)議應(yīng)僅對(duì)去極化試驗(yàn)電位的電壓不同。對(duì)hCaV2.1而言，電流以200毫秒步進(jìn)至0mV而活化。自漏減軌跡測(cè)量hCaV2.1電流作為步進(jìn)至0mV后190至200毫秒間的平均電流。對(duì)于鈉電流的電壓協(xié)議包括150毫秒過(guò)度極化脈沖至-140mV至使通道利用性最佳化，接著20毫秒試驗(yàn)脈沖至-20mV。自漏減軌跡測(cè)量鈉電流作為峰值瞬間內(nèi)向電流。
達(dá)到穩(wěn)定態(tài)效果后測(cè)量所有藥物效果。通過(guò)將各細(xì)胞僅暴露至單一濃度試驗(yàn)物而推演出濃度-效果關(guān)系。就非線性回歸分析而言，對(duì)各細(xì)胞的該化合物后電流增幅經(jīng)標(biāo)化(normalized)至化合物前的電流。若給定電流在10μM或以下的濃度被抑制至＞50％，則對(duì)多數(shù)濃度的化合物以及對(duì)應(yīng)的載體以及時(shí)間控制細(xì)胞的數(shù)據(jù)進(jìn)入非線性回歸分析的GraphPadPrism(v4)，以確定IC50。
實(shí)施例10 TRPV1篩選分析 材料 1)細(xì)胞株HEK293-TetOFF-TRPV1 2)培養(yǎng)基MEM(Invitrogen) 3)10％Tet-FBS(Clontech#8630-1) 4)兩性霉素B洗劑(Fungizone)(Gibco#15290-018(100X)) 5)青霉素/鏈霉素(Penn/Strep)(Gibco#15140-122(100X)) 6)慶大霉素(Geneticin)(Gibco#10131-027(100X)) 7)潮霉素(Hygromycin)(Clontech#8057-1) 8)多西環(huán)素(Doxycycline)(Clontech#8634-1) 9)胰蛋白酶/EDTA(Gibco#25200-056) 10)100mm細(xì)胞培養(yǎng)盤(pán)(Falcon#3003) 11)96-孔聚-D-賴(lài)氨酸盤(pán)(Fisher#08-774-256) 12)漢克氏(Hank′s)平衡的鹽溶液(HBSS)(GIBCO#14025-092) 13)HEPES緩沖液(GIBCO#15630-080) 14)30％BSA(Research Organics#1334A) 15)丙磺舒(Sigma P-8761) 16)Fluo-4，AM(50μg)(Molecular Probes F-23917) 17)普郎尼克F-12720％(Molecular Probes P-3000) 18)卡沙齊平(capsazepine)(Sigma C-191) 19)辣椒堿(capsaicin)(Sigma M-2028) 20)化合物盤(pán)(NUNC#442587) 21)黑色移液管尖96-孔FLIPR(Robbins Scientific 1043-24-0) 22)購(gòu)自Fisher的其它試劑甲醇、DMSO、NaOH 試劑制備 1)細(xì)胞HEK293-TetOFF-TRPV11 生長(zhǎng)培養(yǎng)基MEM 10％Tet-FBS 兩性霉素B洗劑(Fungizone) 青霉素/鏈霉素(Penn/Strep) 慶大霉素(Geneticin) 新鮮添加于培養(yǎng)物中潮霉素25μg/mL最終 及多西環(huán)素2.5μg/mL最終(來(lái)自在PBS中的1000X貯備液中) -細(xì)胞必須每2-3天饋入和/或分裂(以多西環(huán)素維持轉(zhuǎn)錄阻抑)。
-必須分裂不超過(guò)1∶5(50-75％融合)以維持成長(zhǎng)和存活力。
-在正規(guī)組織培養(yǎng)盤(pán)上生長(zhǎng)(例如，F(xiàn)alcon 3003-100mm)。
-經(jīng)胰蛋白酶/EDTA分裂細(xì)胞在室溫下以胰蛋白酶培養(yǎng)不超過(guò)5分鐘(HEK293細(xì)胞若過(guò)度胰蛋白酶化則有團(tuán)塊化的傾向)。
-分析前兩天，以40,000個(gè)細(xì)胞/孔的濃度以體積200微升在不含多西環(huán)素的細(xì)胞培養(yǎng)基中，使細(xì)胞分裂于96-孔盤(pán)中。
2)新鮮制備FLIPR緩沖液 500mL漢克氏平衡的鹽溶液(HBSS) 10mL的1M HEPES緩沖液pH 7.2 16.6mL的30％BSA 添加5mL如以下制備的丙磺舒溶液使710mg丙磺舒(Sigma P-8761)溶于5mL的1N NaOH中，添加5mL的上述緩沖液使最終體積為10mL(其5mL會(huì)回到FLIPR緩沖液中) 3)染料制備 在22微升DMSO中使Fluo-4，AM(50μg)重組。
添加22微升普朗尼克F-127 20％。
使42微升染料混合物與11mL的FLIPR緩沖液/96-孔盤(pán)合并。
4)競(jìng)爭(zhēng)性拮抗劑制備 卡沙齊平(5mg)含于1.3mL的MeOH中＝10mM溶液(IC50約500nM)。
5)激動(dòng)劑制備 在MeOH中制備含0.1M辣椒堿的貯備溶液(50mg+1.6mL MeOH)。在-80℃下儲(chǔ)存50微升的等份溶液。
就分析而言 a)將0.8微升貯備液添加于1mL的MeOH中而稀釋(最終＝80μM)。
b)將50微升經(jīng)稀釋的貯備液添加于20mL的FLIPR緩沖液中(最終＝0.2μM)。
c)以150微升/孔將激動(dòng)劑溶液添加于96-孔盤(pán)中。
d)細(xì)胞上的最終激動(dòng)劑濃度為50nM(約EC80)。
6)化合物盤(pán)制備 a)化合物盤(pán)以150微升/孔充填有FLIPR緩沖液。
b)將3微升化合物混合物(1mg/mL)添加于各孔中(代表3X溶液，并且最終DMSO＝0.67％)。
分析程序 1)自96-孔盤(pán)中成長(zhǎng)的細(xì)胞移去培養(yǎng)基。
2)將100μL含F(xiàn)luo-4的FLIPR緩沖液移液到各孔中。
3)使盤(pán)在37℃下在5％CO2孵育器中孵育30-60分鐘。
4)接著以100微升FLIPR緩沖液洗滌盤(pán)三次。
5)在各孔中留下100微升FLIPR緩沖液，再在37℃下培養(yǎng)該盤(pán)至少20分鐘。
6)使用激光在0.300W下以0.4秒的曝露時(shí)間最初測(cè)定經(jīng)染料標(biāo)記的盤(pán)的信號(hào)。將激光向上調(diào)整使平均信號(hào)≥10,000/孔，并且變異性小于10％。
7)化合物添加條件如下 FLIPR設(shè)定(雙重順序參數(shù)) 順序1 第一次間隔1秒/60計(jì)數(shù) 第二次間隔6秒/50計(jì)數(shù) 流體添加＝50微升 移液管高度＝110微升 分液速度＝30微升/秒 順序2 第二次間隔1秒/60計(jì)數(shù) 第二次間隔6秒/40計(jì)數(shù) 流體添加＝50微升 移液管高度＝140微升 分液速度＝50微升/秒 數(shù)據(jù)分析 1)對(duì)于各孔，來(lái)自二次添加的數(shù)據(jù)記錄為Max-Min。
使用該方法，獲得下列數(shù)據(jù)用于說(shuō)明示例性的氮雜環(huán)丁酮衍生物

NT＝未測(cè)試 實(shí)施例11 氮雜環(huán)丁酮衍生物對(duì)疼痛的效果 氮雜環(huán)丁酮衍生物對(duì)于治療或預(yù)防疼痛的作用可使用各種動(dòng)物模型分析，包括(但不限于)以下所述的那些 福爾馬林試驗(yàn)將小鼠柔和的綁住，并使用27號(hào)針的微針筒在小鼠右后腳爪腳底表面皮下注射30微升福爾馬林溶液(1.5％，在鹽水中)。注射福爾馬林后，立即將小鼠放回塑料玻璃觀察室(30×20×20cm)中，并觀察動(dòng)物對(duì)福爾馬林注射的感受傷害反應(yīng)歷時(shí)60分鐘。整個(gè)觀察期間每5分鐘記錄并量化經(jīng)注射的腳爪的舔食和退縮持續(xù)時(shí)間。立即開(kāi)始早期(第一期)的記錄，并且持續(xù)5分鐘。后期(第二期)在注射福爾馬林后約10-15分鐘開(kāi)始。
坐骨神經(jīng)的L5和L6脊神經(jīng)結(jié)扎(神經(jīng)性疼痛模型)以Kim和Chung(1992)先前所述的方法為準(zhǔn)，通過(guò)使右坐骨神經(jīng)的L5和L6脊神經(jīng)結(jié)扎產(chǎn)生末梢神經(jīng)性病痛。簡(jiǎn)言之，以水合氯醛(400mg/kg，i.p.)將大鼠麻醉，以俯臥的姿勢(shì)放置，并在L4-S2水平處使右椎旁肌肉與棘突分離。L5橫突以小的咬骨鉗小心移開(kāi)，以確認(rèn)L4-L5脊神經(jīng)。分離右L5和L6脊神經(jīng)，并以7/0絲線捆緊。確認(rèn)完全止血并縫合傷口。
坐骨神經(jīng)的慢性收縮損傷(CCI)(神經(jīng)性疼痛模型)依據(jù)Bennett&Xie(1987)所述的方法進(jìn)行手術(shù)。以水合氯醛(400mg/kg，i.p.)將大鼠麻醉，并使共通坐骨神經(jīng)在中大腿骨水平處暴露出。在鄰近處，在距離三叉神經(jīng)約1cm處，將間隔1mm的四條松綁的捆線(4/0絲線)捆緊神經(jīng)周?chē)?。使該捆綁延長(zhǎng)(但不防止)通過(guò)表面上神經(jīng)血管的循環(huán)。對(duì)第二群動(dòng)物進(jìn)行相同程序，但捆綁配置(虛擬手術(shù))除外。
角叉菜聚糖(Carrageenan)(發(fā)炎疼痛模型)對(duì)每一動(dòng)物右后爪足底(25GA針筒)注射0.1mL角叉菜聚糖的量。在角叉菜聚糖或藥物施用之前測(cè)定前試驗(yàn)(pre-test)。依后處理(POST-TREATMENT)協(xié)議，大鼠在角叉菜聚糖處理后3小時(shí)進(jìn)行試驗(yàn)，以建立痛覺(jué)過(guò)敏的存在，接著在藥物施用后的不同時(shí)間進(jìn)行試驗(yàn)。依前處理(PRE-TREATMENT)協(xié)議，在藥物施用后一小時(shí)，以角叉菜聚糖處理大鼠，并在3小時(shí)后開(kāi)始測(cè)試。
弗氏佐劑引發(fā)的關(guān)節(jié)炎模型(發(fā)炎疼痛模型)使動(dòng)物接受100mL的在液狀石蠟與乳化劑(二縮甘露糖單油酸酯)(弗氏完全佐劑)的混合物中的500mg劑量經(jīng)熱殺死并干燥的結(jié)核分歧桿菌(Mycobacteriumtuberculosis)(H37Ra，Difco實(shí)驗(yàn)室，Detroit，MI，USA)的單次足底注射。對(duì)照組動(dòng)物注射以0.1mL礦物油(弗氏不完全佐劑)。
觸覺(jué)異常性疼痛(tactile allodynia)的測(cè)量(行為試驗(yàn))行為試驗(yàn)是通過(guò)在光量循環(huán)期間隱蔽觀察而進(jìn)行的，以避免生理時(shí)鐘節(jié)律混亂。觸覺(jué)敏感度是使用一系列校正過(guò)的Semmes-Weinstein(Stoelting，IL)von Frey細(xì)絲評(píng)估，其彎曲力在0.25至1.5g之間。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，將大鼠放在裝置金屬網(wǎng)地板的透明塑料盒中，并使之習(xí)慣該環(huán)境。將von Frey細(xì)絲垂直施加于同側(cè)后腳爪之中間足底表面，并通過(guò)依次增加和減少刺激強(qiáng)度(細(xì)絲表現(xiàn)的″增加-減少(up-down)″規(guī)程)而測(cè)定機(jī)械異常性疼痛。以Dixon非參數(shù)試驗(yàn)(Chaplan et al.1994)分析數(shù)據(jù)。刺激后舔腳爪或劇烈搖擺視為類(lèi)似疼痛反應(yīng)。
熱痛覺(jué)過(guò)敏(行為試驗(yàn))對(duì)輻射熱的熱痛覺(jué)過(guò)敏是通過(guò)測(cè)量縮回的潛伏時(shí)間作為熱感受傷害指數(shù)而評(píng)估的(Hargreaves et al.，1998)。選擇腳爪試驗(yàn)(Basile，Comerio，Italy)是因?yàn)槠鋵?duì)痛覺(jué)過(guò)敏的敏感度。簡(jiǎn)言之，該試驗(yàn)是由置于玻璃板下方的可移動(dòng)紅外線源組成，大鼠放置于該玻璃上。以三個(gè)單個(gè)透明塑料盒同時(shí)測(cè)試三只大鼠。將紅外線源直接放在后腳爪之腳底表面下方，腳爪縮回潛伏時(shí)間(PWL)定義為大鼠將其后腳爪從熱源移開(kāi)花費(fèi)的時(shí)間。對(duì)每只大鼠的二后腳爪取三次PWL，并且各腳爪的平均值代表大鼠的熱疼痛閾值。調(diào)整輻射熱源獲得10-12秒的基線潛伏時(shí)間。設(shè)備關(guān)閉固定為21秒以防止組織受傷。
重量荷載(行為試驗(yàn))使用雙足平衡測(cè)痛儀測(cè)定后腳爪重量分布。將大鼠放置在配置成有角度的塑料玻璃室中，使得每一后腳爪停在分別的施力板上。重量荷載試驗(yàn)代表關(guān)節(jié)炎大鼠在未施加任何應(yīng)力或刺激下的病理病癥的直接指標(biāo)，因此此試驗(yàn)測(cè)量動(dòng)物的自發(fā)性疼痛行為。
實(shí)施例12 NPC1L1結(jié)合分析 將表達(dá)人類(lèi)NPC1L1的HEK-293細(xì)胞鋪在384-孔黑色/透明盤(pán)(BDBiosciences，Bedford MA)中，供次日的結(jié)合實(shí)驗(yàn)用。吸取細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基(DMEM、10％胎牛血清、1mg/mL慶大霉素、100單位/mL青霉素)。向各孔中添加含有250nM BODIPY-標(biāo)記的葡糖醛酸化依澤替米貝(ezetimibe)的細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基(20mL)。接著向這些孔中加入含有所示濃度化合物的細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基(20mL)。使用未標(biāo)記的葡糖醛酸化依澤替米貝(100mM)以測(cè)定非特異結(jié)合。使結(jié)合反應(yīng)在37℃下進(jìn)行4小時(shí)。接著，吸取細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基并以PBS洗滌細(xì)胞一次。使用FlexStation盤(pán)讀取機(jī)(Molecular Devices，Sunnyvale CA)對(duì)與細(xì)胞結(jié)合的剩余熒光劑標(biāo)記的葡糖醛酸化依澤替米貝定量，以測(cè)量熒光強(qiáng)度。使用Prism and Activity Base軟件，自競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合曲線(各點(diǎn)的n＝4)測(cè)定Ki值。
使用此方法，對(duì)本發(fā)明所示的氮雜環(huán)丁酮衍生物獲得下列數(shù)據(jù)

NT＝未測(cè)試 實(shí)施例13 GPR119篩選分析 試劑制備 刺激緩沖液100mL HBSS (GIBCO#14025-092) +100mg BSA(MP Biomedicals faction V，#103703)＝0.1％ +500微升1M HEPES(Cellgro#25-060-Cl)＝5mM +75微升RO-20(Sigma B8279；在DMSO中的20mM貯備液，以等份儲(chǔ)存在-20℃下)＝15μM(每天新制) B84(N-[4-(甲基磺?；?苯基]-5-硝基-6-[4-(苯基硫基)-1-哌啶基]-4-嘧啶胺，參見(jiàn)WO 2004/065380)制備在DMSO中的試驗(yàn)化合物的10mM貯備溶液，分成等份后儲(chǔ)存于-20℃下。就總計(jì)而言-在DMSO中稀釋1∶33.3，接著在刺激緩沖液中稀釋1∶50＝6μM，在2％DMSO中(＝3μMB84和1％DMSO，最終)。就劑量反應(yīng)曲線而言-3微升貯備液+7微升DMSO+490微升刺激緩沖液＝60μM，在2％DMSO中(＝30μM B84和1％DMSO，最終)。(每天新制)。
細(xì)胞株 人類(lèi)結(jié)腸3以人類(lèi)-SP9215(GPR119)/pcDNA3.1穩(wěn)定轉(zhuǎn)染HEK 293細(xì)胞，并且還對(duì)pCRELuc(Stratagene)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。將細(xì)胞維持在含10％FBS(Invitrogen#02-4006Dk，lot#1272302，熱滅活)、1×MEM、1×青霉素/鏈霉素、0.1mg/mL潮霉素B和0.5mg/mL G418的DMEM中。細(xì)胞每周兩次分裂1∶8。
cAMP藥盒LANCETM cAMP 384藥盒，Perkin Elmer#AD0263。
化合物稀釋 1.在含化合物之安瓿中添加DMSO，獲得1mg/mL溶液。
2.在刺激緩沖液稀釋化合物至60μM。使用epMotion自動(dòng)設(shè)備在含2％DMSO的刺激緩沖液中進(jìn)行1/2對(duì)數(shù)稀釋。10點(diǎn)劑量反應(yīng)曲線1nM至30μM。
3.化合物重復(fù)四次操作，對(duì)組別1和1a各2次分別稀釋。
分析程序 1.分析前當(dāng)天下午，以O(shè)ptimem.(Gibco#11058-021)更換人類(lèi)結(jié)腸3細(xì)胞的瓶中培養(yǎng)基。注意細(xì)胞應(yīng)在培養(yǎng)物中6-8天。
2.次日早晨，使用HBSS將細(xì)胞輕移出瓶外(在室溫下)。
3.使細(xì)胞成粒狀(1300rpm，7分鐘，室溫)，并以2.5×10e6/mL(＝5-8,000個(gè)細(xì)胞/6微升)再懸浮于刺激緩沖液中。向細(xì)胞懸浮液中直接添加1∶100稀釋的Alexa Fluor 647-抗cAMP抗體(以藥盒提供)。
4.在白色384-孔盤(pán)(Matrix)中添加6微升2×B84、化合物或刺激緩沖液用于nsb。它們均含有2％DMSO(＝1％DMSO，最終)。
5.添加6微升細(xì)胞懸浮液于此類(lèi)孔中，在室溫下孵育30分鐘。
6.就標(biāo)準(zhǔn)(std)曲線而言，依據(jù)藥盒指示，添加6微升的cAMP標(biāo)準(zhǔn)溶液，其稀釋于刺激緩沖液+2％DMSO中(1000-3nM)。向標(biāo)準(zhǔn)孔中添加6微升的在刺激緩沖液中的1∶100抗cAMP。
7.依據(jù)藥盒指示制備檢測(cè)混合物，并在室溫下孵育15分鐘。
8.在所有孔中添加12微升檢測(cè)混合物。通過(guò)輕敲溫和混合，并在室溫下孵育2-3小時(shí)。
9.依據(jù)協(xié)議″Lance/Delphia cAMP″在Envision上讀取。
10.從標(biāo)準(zhǔn)曲線通過(guò)外推法確定各樣品的值(nM)。對(duì)各化合物確定對(duì)照％、倍數(shù)(Fold)以及EC50(對(duì)照組＝3μM B84)，對(duì)組別1和1a加以平均。
使用該方法，獲得下列數(shù)據(jù)用于說(shuō)明示例性的氮雜環(huán)丁酮衍生物
實(shí)施例14 氮雜環(huán)丁酮衍生物對(duì)膽固醇吸收抑制作用的體內(nèi)影響 通過(guò)口服管飼法對(duì)雄鼠施用0.25mL玉米油或含有試驗(yàn)化合物的玉米油；施用后30分鐘，對(duì)各大鼠施用0.25mL玉米油和2μCi 14C-膽固醇、1.0mg冷卻膽固醇。2小時(shí)后，以100mg/kg IP以硫巴比妥(Inactin)使大鼠麻醉，并從腹部大動(dòng)脈收集10mL血液樣本。接著移除小腸，分成三段，各段以15mL冷卻鹽水洗滌并收集洗液。接著移除肝臟，秤重，再移除三個(gè)約350mg等份。向各小腸切片中添加5mL的1N NaOH，向各肝臟份數(shù)中添加1mL以在40℃溶解過(guò)夜。以0.25mL 4N HCl中和2×1mL份的SI消化物和肝臟消化物，計(jì)數(shù)。計(jì)數(shù)2×1mL份的血漿和小腸洗液。
實(shí)施例15 脫髓鞘作用的假設(shè)性體內(nèi)評(píng)估 可對(duì)已被誘發(fā)成發(fā)展出實(shí)驗(yàn)性自動(dòng)免疫腦脊髓炎(″EAE″)的嚙齒類(lèi)(人類(lèi)多發(fā)性硬化及脫髓鞘疾病之模型)施用氮雜環(huán)丁酮化合物?？捎玫膰X類(lèi)包括以髓鞘寡突膠質(zhì)細(xì)胞蛋白質(zhì)(MOG)35-55肽免疫化的C57BL/6小鼠(得自Jackson實(shí)驗(yàn)室或Charles River實(shí)驗(yàn)室)、以蛋白脂質(zhì)蛋白質(zhì)(PLP)肽免疫化的SJL/J小鼠(亦得自Jackson實(shí)驗(yàn)室或Charles River實(shí)驗(yàn)室)、或以天竺鼠脊髓同源物或髓磷脂堿性蛋白(MBP)免疫化的Lewis、BN或DA大鼠(得自Charles River實(shí)驗(yàn)室或Harlan實(shí)驗(yàn)室)。所有免疫作用通過(guò)使引發(fā)肽在弗氏不完全佐劑或弗氏完全佐劑中乳化而進(jìn)行，施用或不施用百日咳毒素(如Current Protocols in Immunology，Unit 15，JohnWiley&Sons，Inc.NY，或Tran et al.，Eur.J.Immunol.301410，2002，或H.Butzkeuven et al.，Nat.Med.8613，2002所述)。
可用于此試驗(yàn)的其它嚙齒類(lèi)包括抗-MBPT細(xì)胞受體轉(zhuǎn)基因小鼠(如Grewal et al.，Immunity 14291，2001所述)，其自然發(fā)展出EAE疾病；以MBP-特異性、PLP-特異性或MOG-特異性的T細(xì)胞株過(guò)繼性轉(zhuǎn)移的嚙齒類(lèi)(如Current Protocols in Immunology，Unit 15，John Wiley&Sons，Inc.NY所述)；或可通過(guò)腦內(nèi)接種Theiler′s小鼠腦脊髓癌病毒(如Pope et al.，J.Immunol.1564050，1994所述)或通過(guò)腹膜內(nèi)注射Silmliki Forest病毒(如Soilu-Hanninen et al.，J.Virol.686291，1994所述)而誘發(fā)發(fā)展出明顯脫髓鞘疾病的SJL/J或C57BL/6小鼠。
本發(fā)明不受實(shí)施例中所述具體實(shí)施方案限制其范圍，此類(lèi)實(shí)施例是用于說(shuō)明本發(fā)明少數(shù)方面，并且功能等同物的其它任何實(shí)施方案均在本發(fā)明范圍內(nèi)。事實(shí)上，除了本文所顯示和所述的那些外外，本發(fā)明的各種改質(zhì)對(duì)熟知相關(guān)領(lǐng)域的人員是顯而易見(jiàn)的，并且將落入所附權(quán)利要求的范圍內(nèi)。
已引述數(shù)個(gè)參考文獻(xiàn)，此類(lèi)文獻(xiàn)的整體公開(kāi)以其全部?jī)?nèi)容并入本文供參考。
權(quán)利要求
1.一種治療患者的脂質(zhì)代謝障礙、疼痛、糖尿病、血管病癥、脫髓鞘作用或非酒精性脂肪肝疾病的方法，其包括給該患者施用有效量的下式化合物或其藥學(xué)可接受的鹽、溶劑合物、酯、前藥或立體異構(gòu)體
其中R1和R2是使用下表中所列的”X”表示的
(續(xù))
R1定義如下
其中Z代表R1與其所連接的氮原子間之鍵；
R2定義如下
并且其中Z代表R2與其所連接的氮原子間的鍵。
2.一種治療患者的脂質(zhì)代謝障礙、疼痛、糖尿病、血管病癥、脫髓鞘作用或非酒精性脂肪肝疾病的方法，其包括給該患者施用有效量的下式化合物或其藥學(xué)可接受的鹽、溶劑合物、酯、前藥或立體異構(gòu)體
其中R1和R2是使用下表中所列的”X”表示的
并且其中R1和R2如權(quán)利要求1的定義。
3.一種治療患者的脂質(zhì)代謝障礙、疼痛、糖尿病、血管病癥、脫髓鞘作用或非酒精性脂肪肝疾病的方法，其包括給該患者施用有效量的下式化合物或其藥學(xué)可接受的鹽、溶劑合物、酯、前藥或立體異構(gòu)體
其中R1和R2是使用下表中所列的”X”表示的
并且其中R1和R2如權(quán)利要求1的定義。
4.一種治療患者的脂質(zhì)代謝障礙、疼痛、糖尿病、血管病癥、脫髓鞘作用或非酒精性脂肪肝疾病的方法，其包括給該患者施用有效量的下式化合物或其藥學(xué)可接受的鹽、溶劑合物、酯、前藥或立體異構(gòu)體
其中R1和R2是使用下表中所列的”X”表示的
并且其中R1和R2如權(quán)利要求1的定義。
5.權(quán)利要求1的方法，其中該治療是用于脂質(zhì)代謝障礙。
6.權(quán)利要求2的方法，其中該治療是用于脂質(zhì)代謝障礙。
7.權(quán)利要求3的方法，其中該治療是用于脂質(zhì)代謝障礙。
8.權(quán)利要求4的方法，其中該治療是用于脂質(zhì)代謝障礙。
9.權(quán)利要求1的方法，其中該治療是用于疼痛。
10.權(quán)利要求2的方法，其中該治療是用于疼痛。
11.權(quán)利要求3的方法，其中該治療是用于疼痛。
12.權(quán)利要求4的方法，其中該治療是用于疼痛。
13.權(quán)利要求1的方法，其中該治療是用于糖尿病。
14.權(quán)利要求2的方法，其中該治療是用于糖尿病。
15.權(quán)利要求3的方法，其中該治療是用于糖尿病。
16.權(quán)利要求4的方法，其中該治療是用于糖尿病。
17.權(quán)利要求5的方法，其中該脂質(zhì)代謝障礙為高膽固醇血癥。
18.權(quán)利要求6的方法，其中該脂質(zhì)代謝障礙為高膽固醇血癥。
19.權(quán)利要求7的方法，其中該脂質(zhì)代謝障礙為高膽固醇血癥。
20.權(quán)利要求8的方法，其中該脂質(zhì)代謝障礙為高膽固醇血癥。
21.權(quán)利要求1的方法，進(jìn)一步包括施用選自下列的另一治療劑可用于治療疼痛的藥物、抗糖尿病劑、T-型鈣通道阻斷劑、TRPV1的拮抗劑、TRPV1的激動(dòng)劑、GPR119的激動(dòng)劑、NPC1L1的拮抗劑、HMG-CoA還原酶的抑制劑、煙酸受體激動(dòng)劑或膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白質(zhì)的抑制劑或PPAR活化劑。
22.權(quán)利要求2的方法，進(jìn)一步包括施用選自下列的另一治療劑可用于治療疼痛的藥物、抗糖尿病劑、T-型鈣通道阻斷劑、TRPV1的拮抗劑、TRPV1的激動(dòng)劑、GPR119的激動(dòng)劑、NPC1L1的拮抗劑、HMG-CoA還原酶的抑制劑、煙酸受體激動(dòng)劑或膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白質(zhì)的抑制劑或PPAR活化劑。
23.權(quán)利要求3的方法，進(jìn)一步包括施用選自下列的另一治療劑可用于治療疼痛的藥物、抗糖尿病劑、T-型鈣通道阻斷劑、TRPV1的拮抗劑、TRPV1的激動(dòng)劑、GPR119的激動(dòng)劑、NPC1L1的拮抗劑、HMG-CoA還原酶的抑制劑、煙酸受體激動(dòng)劑或膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白質(zhì)的抑制劑或PPAR活化劑。
24.權(quán)利要求4的方法，進(jìn)一步包括施用選自下列的另一治療劑可用于治療疼痛的藥物、抗糖尿病劑、T-型鈣通道阻斷劑、TRPV1的拮抗劑、TRPV1的激動(dòng)劑、GPR119的激動(dòng)劑、NPC1L1的拮抗劑、HMG-CoA還原酶的抑制劑、煙酸受體激動(dòng)劑或膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白質(zhì)的抑制劑或PPAR活化劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及治療或預(yù)防脂質(zhì)代謝障礙、疼痛、糖尿病、血管病癥、脫髓鞘作用或非酒精性脂肪肝疾病的方法，該方法包括施用式(I)的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽、溶劑合物、酯、前藥或立體異構(gòu)體，其中R1和R2定義于本文表1-6中，并且R3為-苯基、-4-氯苯基、-2-吡啶基或-3-吡啶基。
文檔編號(hào)A61K31/4427GK101528227SQ200780039185
公開(kāi)日2009年9月9日 申請(qǐng)日期2007年9月13日 優(yōu)先權(quán)日2006年9月15日
發(fā)明者R·G·亞斯蘭安, 詹亭月, J·M·哈里斯, B·A·麥基崔克, B·R·紐斯塔特, A·帕拉尼, T·普利斯萊, E·M·史密斯, A·W·史丹佛, H·M·斐卡洛, 彤 蕭 申請(qǐng)人:先靈公司