專(zhuān)利名稱(chēng)：吡唑并[1,5-a]嘧啶衍生物及其治療用途的制作方法
專(zhuān)利說(shuō)明吡唑并[1，5-A]嘧啶衍生物及其治療用途 本發(fā)明涉及吡唑并嘧啶衍生物、其制備方法、其用途和含有其的藥物組合物。
更具體而言，本發(fā)明提供了式I化合物或其鹽
其中 R1和R2各自獨(dú)立地是H、OH、NH2、NO2、C1-4烷基、C1-4烷氧基、芳基-C1-4烷氧基、NR11SO2R12、NR13COR14、NR15COOR16或NR17CONR18R19；條件是R1和R2中至少一個(gè)不是H； R3是H、鹵素、C1-4烷基或C1-4烷氧基； R4是H、任選被取代的C1-4烷基或任選被NH2、NH(C1-4烷基)或N(C1-4烷基)2取代的C1-4烷氧基； R5a、R5b和R6各自獨(dú)立地是H；OH；ORc，其中Rc是C1-4烷基；或式(a)殘基，
條件是R5a、R5b和R6中至少一個(gè)不是H； R11是H或任選被取代的C1-4烷基； R12是C1-8烷基；C3-8環(huán)烷基；任選被取代的芳基或芳基-C1-4烷基；雜環(huán)基；任選被取代的雜芳基或雜芳基-C1-4烷基； R13是H或任選被取代的C1-4烷基； R14是任選被取代的C1-8烷基；任選被取代的C3-8環(huán)烷基；任選被取代的芳基或芳基-C1-4烷基；或者任選被取代的雜芳基或雜芳基-C1-4烷基； R15是H或C1-4烷基； R16是任選被取代的C1-8烷基；C3-6鏈烯基；C3-6炔基；任選被取代的C3-8環(huán)烷基；任選被取代的芳基或芳基-C1-4烷基；或者任選被取代的雜芳基-C1-4烷基； R17和R18各自獨(dú)立地是H或C1-4烷基； R19是任選被鹵素或氰基取代的C1-8烷基；C3-8環(huán)烷基；芳基或芳基-C1-4烷基，其各自任選被鹵素、鹵代-C1-4烷基、鹵代-C1-4烷氧基和/或雜環(huán)基所環(huán)取代；或者任選被取代的雜芳基或雜環(huán)基； 或者R18和R19與它們結(jié)合的氮原子一起形成任選被取代的雜環(huán)基殘基； n是0或1； X是CR20R21，其中R20和R21各自獨(dú)立地是H或C1-4烷基；O；或N-R22，其中R22是H，任選被取代的C1-4烷基，任選被取代的芳基-C1-4烷基，任選被取代的雜芳基-C1-4烷基，任選被取代的雜環(huán)基，SO2-C1-4烷基，CO-R23-，其中R23是任選被鹵素、雜環(huán)基、雜芳基、氨基和/或COOH取代的C1-4烷基或者R23是任選被取代的芳基、雜芳基或雜環(huán)基，或者CO-CHR24-NR25R26，其中R24是H、任選被OH、NH2、NH(C1-4烷基)、N(C1-4烷基)2、COOH、氨甲?；?、CONH(C1-4烷基)、CON(C1-4烷基)2或任選被取代的芳基或雜芳基所取代的C1-8烷基，R25是H或C1-4烷基，且R26是H、C1-4烷基、C1-4烷氧基-羰基或芳基-C1-4烷氧基羰基，其中芳基可以任選被取代 條件是 i.當(dāng)R5a、R5b或R6中任一個(gè)是其中X是NCH3且n是0的式(a)殘基時(shí)，則R2不是NH-SO2-CH3或NH-SO2-4-氟-苯基，或者R1不是NH-SO2-2，3-二氯-苯基，或者R3或R4不是H； ii.當(dāng)R5a、R5b或R6中任一個(gè)是其中X是NCH3且n是0的式(a)殘基時(shí)，則R2不是NH-CO-CH3，或者R3或R4不是H； iii.當(dāng)R5a、R5b或R6中任一個(gè)是其中X是NH或NCH3且n是0的式(a)殘基時(shí)，則R2不是NH-COOC1-2烷基，或者R3或R4不是H； iv.當(dāng)R5a、R5b或R6中任一個(gè)是其中X是NH或NCH3且n是0的式(a)殘基時(shí)，則R1不是-NH-CO-NH-(3-CF3-4-嗎啉代基-苯基)，或者R2不是NH-CO-NH-(3-CF3-苯基)，或者R3或R4不是H； v.當(dāng)R1和R2中之一是OH且另一個(gè)是H、R4是H并且R5a、R5b或R6中只有一個(gè)是式(a)殘基且其余各自是H時(shí)，則式(a)殘基不是4-甲基-哌嗪基； vi.當(dāng)R1和R2中之一是OH且另一個(gè)是H并且R5a、R5b或R6中只有一個(gè)是4-甲基-哌嗪基且其余各自是H時(shí)，則R4是任選被取代的C1-4烷基；和 vii.當(dāng)R5a、R5b或R6中任一個(gè)是其中X是NH或NCH3且n是0的式(a)殘基且R1是H時(shí)，則R2不是NH2，或者R3或R4不是H。
任何烷基可以是直鏈或支鏈。芳基可以是苯基或萘基，優(yōu)選苯基。芳基-C1-4烷基可以例如是芐基或苯乙基，優(yōu)選芐基。芳基-C1-4烷氧基可以例如是芐氧基。
鹵素可以是F、Cl或Br。鹵代-C1-4烷基或鹵代-C1-4烷氧基可以是被一個(gè)或多個(gè)鹵素取代的C1-4烷基或C1-4烷氧基，例如CF3或OCF3。
雜芳基可以是包含1至3個(gè)選自N、O和S的雜原子的單或二環(huán)芳香族系統(tǒng)，例如呋喃基、噻吩基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、噻唑基、噁唑基、異噁唑基、噁二唑基、三唑基、吡啶基、噠嗪基、嘧啶基、吡嗪基、吲哚基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、苯并咪唑基、苯并噻唑基或吲唑基。
雜環(huán)基是可以通過(guò)C或N連接的5、6或7元非芳香族雜環(huán)。實(shí)例例如有吡咯烷基、嗎啉基、哌嗪基或哌啶基。雜環(huán)基可以在環(huán)C和/或N原子上被取代、例如被C1-4烷基所取代。
當(dāng)R4是取代的C1-4烷基時(shí)，它可以是被鹵素、氰基、C1-4烷氧基、氨基、C1-4烷基氨基或二-(C1-4烷基)-氨基取代并且任選被-NH-間隔的C1-4烷基。優(yōu)選取代基(當(dāng)存在時(shí))與末端碳原子連接。
當(dāng)R11或R13是任選被取代的烷基時(shí)，它可以被例如NH2、C1-4烷基氨基或二-(C1-4烷基)氨基所取代。
當(dāng)R12是取代的芳基、芳基-C1-4烷基、雜芳基或雜芳基-C1-4烷基時(shí)，芳基或雜芳基環(huán)可以被一個(gè)或多個(gè)選自鹵素、CN、C1-4烷基、鹵代-C1-4烷基、C1-4烷氧基、鹵代-C1-4烷氧基、氨基和雜芳基的取代基所取代。優(yōu)選芳基或雜芳基當(dāng)被取代時(shí)具有一個(gè)或兩個(gè)如上所示的取代基。
當(dāng)R14是任選被取代的C1-8烷基或C3-8環(huán)烷基時(shí)，它可以例如被鹵素、氰基或C1-4烷氧基所取代。優(yōu)選對(duì)于烷基而言，取代基與末端碳原子連接。當(dāng)R14是取代的C3-8環(huán)烷基、芳基、芳基-C1-4烷基、雜芳基或雜芳基-C1-4烷基時(shí)，它可以被一個(gè)或多個(gè)選自例如鹵素、C1-4烷基和鹵代-C1-4烷基的取代基所取代。當(dāng)R14是取代的雜芳基或雜芳基-C1-4烷基時(shí)，取代基可以與雜芳基的環(huán)C和/或N原子連接；在后者情況下，它優(yōu)選是C1-4烷基。取代的雜芳基或雜芳基-C1-4烷基可以被單或二取代。
當(dāng)R16是取代的C1-8烷基時(shí)，它可以例如被鹵素、氰基或C1-4烷氧基所取代。優(yōu)選取代基與末端碳原子連接。當(dāng)R16是取代的芳基、芳基-C1-4烷基或雜芳基-C1-4烷基時(shí)，它可以被一個(gè)或多個(gè)例如選自鹵素、鹵代-C1-4烷基和C1-4烷基的取代基所取代。
當(dāng)R19是取代的雜芳基時(shí)，取代基可以與雜芳基的環(huán)C和/或N原子連接，并且可以例如是鹵素、鹵代-C1-4烷基或C1-4烷基。
當(dāng)R22是任選被取代的C1-4烷基時(shí)，它可以被OH或C1-4烷氧基所取代，優(yōu)選在末端C上被OH或C1-4烷氧基所取代。當(dāng)R22是任選被取代的雜環(huán)基時(shí)，它可以在C上或在N原子上被取代、例如被C1-4烷基所取代，例如任選被CH3所N-取代的哌啶基。當(dāng)R22是任選被取代的雜芳基-C1-4烷基時(shí)，它可以是被C1-4烷基如甲基所取代的環(huán)。
當(dāng)R23是被雜環(huán)基所取代的C1-4烷基時(shí)，它可以在末端C原子上被取代，例如-CH2-雜環(huán)基。當(dāng)R23是任選被取代的芳基時(shí)，它可以例如被如下基團(tuán)取代OH，氨基，C1-4烷基-氨基，二-(C1-4烷基)-氨基或被芳氧基-羰基或芳基C1-4烷氧基-羰基所取代的氨基。作為R23的任選被取代的雜芳基可以是任選被C1-4烷基所取代的雜芳基。作為R23的任選被取代的雜環(huán)基可以是任選被芳氧基-羰基或芳基C1-4烷氧基-羰基所取代的具有環(huán)N原子的雜環(huán)基。
當(dāng)R24是取代的C1-4烷基時(shí)，它可以?xún)?yōu)選在末端C原子上例如被單取代。當(dāng)R24是被芳基或雜芳基所取代的C1-4烷基時(shí)，該芳基可以任選被例如OH所取代和該雜芳基可以任選被例如C1-4烷基所取代。
當(dāng)R26是芳基-C1-4烷氧基-羰基時(shí)，芳基可以任選被取代、例如被OH所取代。
優(yōu)選的式I化合物是其中R1或R2、優(yōu)選R1是NHCOOR16的那些，其中R16是C3-8烷基如C4-6烷基或者任選被取代的苯基或苯基-C1-4烷基。
對(duì)于式I化合物而言，獨(dú)立地、共同地或者以任意組合或亞組合優(yōu)選以下含義 (i)R5a、R5b和R6各自獨(dú)立地是H、OH或式(a)殘基，其中所述的式(a)殘基如上文所定義，條件是R5a、R5b和R6中至少一個(gè)不是H； (ii)R5a、R5b和R6各自獨(dú)立地是H或式(a)殘基，其中所述的式(a)殘基如上文所定義，條件是R5a、R5b和R6中至少一個(gè)不是H； (iii)R2是H、OH、C1-4烷基或C1-4烷氧基；優(yōu)選H、OH或C1-4烷氧基； (iv)R1是NR11SO2R12、NR13COR14、NR15COOR16或NR17CONR18R19，其中變量R11至R19具有上文提供的含義； (v)R1優(yōu)選是NHCOOR16，其中R16是C3-8烷基如C4-6烷基或者任選被取代的苯基或苯基-C1-4烷基。
式I化合物可以以游離形式或以鹽形式、例如與如有機(jī)或無(wú)機(jī)酸如三氟乙酸或鹽酸的加成鹽而存在。
當(dāng)式I化合物在分子中具有不對(duì)稱(chēng)中心時(shí)，例如當(dāng)R22是CO-CHR24-NR25R26(其中R24不是H)時(shí)，可得到多種旋光異構(gòu)體。本發(fā)明還囊括了對(duì)映異構(gòu)體、外消旋物、非對(duì)映異構(gòu)體及其混合物。而且，當(dāng)式I化合物包括幾何異構(gòu)體時(shí)，本發(fā)明還包含順式化合物、反式化合物及其混合物。類(lèi)似的考慮相關(guān)地應(yīng)用于顯示出如上提到的不對(duì)稱(chēng)碳原子或不飽和鍵的原料。
本發(fā)明還提供了制備式I化合物的方法，該方法包括 a)使式II化合物與式III化合物反應(yīng)，
其中R5a、R5b和R6如上所定義，
其中R1至R4如上所定義且Rv是例如OH或被取代的氨基如N(CH3)2；或者b)將式I化合物轉(zhuǎn)化為另一種式I化合物； 和以游離或鹽形式回收所得的式I化合物，以及需要時(shí)將游離形式的所得式I化合物轉(zhuǎn)化為所需的鹽形式，或者反之亦然。
方法步驟a)和b)可以按照本領(lǐng)域已知的方法或者如以下在實(shí)施例中公開(kāi)的那樣來(lái)進(jìn)行。
式I化合物轉(zhuǎn)化為另一種式I化合物的實(shí)例可以例如包括 i)為了制備其中R1或R2是氨基的式I化合物，使其中R1或R2是NO2的式I化合物還原，例如通過(guò)氫化使之還原。
ii)為了制備其中R1或R2是NR11SO2R12、NR13COR14、NR15COOR16或NR17CONR18R19的式I化合物，使其中R1或R2是氨基的式I化合物與適當(dāng)?shù)孽；瘎┓磻?yīng)。該反應(yīng)可以按照本領(lǐng)域已知的方法或者例如如在實(shí)施例中公開(kāi)的那樣來(lái)進(jìn)行。
iii)為了制備包含其中R22是CO-R23或CO-CHR24-NR25R26的式(a)殘基的式I化合物，使其中R22是H的式I化合物與適當(dāng)?shù)孽；瘎┓磻?yīng)。該反應(yīng)可以按照本領(lǐng)域已知的方法或者例如如在實(shí)施例中公開(kāi)的那樣來(lái)進(jìn)行。
用作原料的式II化合物可以例如如在以下反應(yīng)流程中公開(kāi)的那樣來(lái)制備
其中R5a、R5b和R6如上所定義。
用作原料的式III化合物可以例如如在以下反應(yīng)流程中公開(kāi)的那樣來(lái)制備
R1至R4如上所定義。
在原料的制備沒(méi)有被特別描述的情況下，化合物是已知的或者可以類(lèi)似于本領(lǐng)域已知的方法或如在下文實(shí)施例中公開(kāi)的那樣來(lái)制備。
以下實(shí)施例不帶任何限制地說(shuō)明了本發(fā)明。
實(shí)施例13-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-6-(4-硝基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺 A)[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-乙腈
在氬氣氣氛下將4-溴苯基乙腈(9.04g，46.1mM)、N-甲基-哌嗪(5.55g，55.4mM)和(2-聯(lián)苯基)二叔丁基膦(2.08g，6.97mM)溶解在1，2-二甲氧基乙烷(77ml)中。加入乙酸鈀(II)(543mg，2.42mM)和磷酸鉀(13.9g，65.6mM)，于90℃將反應(yīng)混合物攪拌23h。冷卻至室溫后，加入水和乙酸乙酯，分層，將水層用乙酸乙酯萃取數(shù)次。將合并的有機(jī)相用鹽水洗滌，通過(guò)Na2SO4干燥。真空除去溶劑，將殘余物通過(guò)色譜法(乙酸乙酯/乙醇/氨＝95∶9.5∶0.5)進(jìn)行純化，得到預(yù)期的褐色粉末狀的產(chǎn)物，M+H+＝216。
B)3-羥基-2-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-丙烯腈
將鈉(597mg，26.0mM)溶解在乙醇(34ml)中，加入[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-乙腈(3.73g，17.3mM)和甲酸乙酯(1.92g，26.0mM)，于75℃將反應(yīng)混合物攪拌1.5h。冷卻至室溫后，加入乙醚，通過(guò)過(guò)濾分離產(chǎn)物，為褐色粉末狀，M+H+＝244。
C)4-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-2H-吡唑-3-基胺
向[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-乙腈(3.65g，13.8mM)在乙酸(53ml)中的溶液中加入肼一水合物(1.72g，34.4mM)。于125℃將反應(yīng)混合物攪拌1.5h，冷卻至室溫，加入水(103ml)和發(fā)煙HCl(10.7ml)，于110℃將該混合物攪拌1h。將反應(yīng)混合物冷卻至0℃，加入濃氨水(80ml)，將產(chǎn)物用CH2Cl2/MeOH＝9∶1萃取數(shù)次。將合并的有機(jī)層通過(guò)Na2SO4干燥，真空除去溶劑，得到褐色粉末狀的產(chǎn)物，M+H+＝258。
D)3-二甲基氨基-2-(4-硝基-苯基)-丙烯腈
將二甲基甲酰胺二甲基縮醛(6.67g，30.8mM)加入到4-硝基苯基乙腈(2.50g，15.4mM)在甲苯(50ml)中的溶液中，于120℃攪拌1.5h。冷卻至室溫后，加入己烷，將反應(yīng)混合物攪拌10min。通過(guò)過(guò)濾收集沉淀物，將其用己烷洗滌，真空干燥，得到綠色結(jié)晶的產(chǎn)物，M+H+＝218。
E)3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-6-(4-硝基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺
于120℃將在乙酸(11.3ml)和1.25M HCl(在乙醇中)(11.3ml)中的4-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-2H-吡唑-3-基胺(1.50g，5.83mM)和3-二甲基氨基-2-(4-硝基-苯基)-丙烯腈(1.27g，5.83mM)攪拌26h。冷卻至室溫后，加入甲醇(40ml)，將反應(yīng)混合物攪拌20min。通過(guò)過(guò)濾收集沉淀物，將其用甲醇洗滌，真空干燥，得到紅色結(jié)晶的產(chǎn)物，M+H+＝430。
通過(guò)按照以上方法但使用適當(dāng)?shù)脑希梢灾频靡韵禄衔? 實(shí)施例2
M+H+＝461 實(shí)施例3
M+H+＝461 實(shí)施例46-(4-氨基-苯基)-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺)
將實(shí)施例1的化合物(1.00g，2.33mM)溶解在甲醇/THF＝3∶2(750ml)中，加入鈀/碳10％(0.28g，10％)，于室溫將反應(yīng)混合物氫化18h。將反應(yīng)混合物通過(guò)硅藻土過(guò)濾，從濾液中真空除去溶劑。將乙醚加入到殘余物中，通過(guò)過(guò)濾分離產(chǎn)物，將其用乙醚洗滌，干燥，得到預(yù)期的褐色結(jié)晶的產(chǎn)物，M+H+＝400。
通過(guò)按照以上實(shí)施例的方法但使用適當(dāng)?shù)脑希梢灾频靡韵禄衔? 實(shí)施例5
M+H+＝431 實(shí)施例6
M+H+＝431 實(shí)施例7
M+H+＝431 實(shí)施例8
M+H+＝417 實(shí)施例9
M+H+＝401 實(shí)施例10(4-{7-氨基-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基}-苯基)-氨基甲酸異丁酯
向?qū)嵤├?的化合物(115mg，0.29mM)在吡啶/CH2Cl2＝1∶1(2ml)中的溶液中加入氯甲酸異丁酯(48mg，0.35mM)，于室溫將該反應(yīng)混合物攪拌1h。再次加入氯甲酸異丁酯(48mg，0.35mM)，于60℃將反應(yīng)混合物攪拌1h，第三次加入氯甲酸異丁酯(48mg，0.35mM)，于60℃將反應(yīng)混合物攪拌30min。冷卻至室溫后，加入乙酸乙酯和飽和NaHCO3溶液，分層。將水相用乙酸乙酯萃取數(shù)次。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，通過(guò)Na2SO4干燥，真空除去溶劑。將產(chǎn)物通過(guò)制備型HPLC(含有0.1％ TFA的H2O，100％，3min；至含有0.1％TFA的H2O/CH3CN，1∶9，在22min內(nèi)；H2O/CH3CN，含有0.1％TFA，1∶9，5min)進(jìn)行純化，得到預(yù)期的黃色結(jié)晶的產(chǎn)物，MH+＝501。
通過(guò)按照以上實(shí)施例的方法但使用適當(dāng)?shù)脑?，可以制得式X1化合物，
其中R、R1和R2具有如下表1中所示的意義。
表1 實(shí)施例1211-(4-{7-氨基-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基}-苯基)-3-(2-氯-苯基)-脲
將6-(4-氨基-苯基)-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺(實(shí)施例4，115mg，0.29mM)在N-甲基-吡咯烷(1.7ml)中的混懸液冷卻至0℃，加入氯甲酸(4-硝基苯基)酯(68mg，0.34mM)。于5℃將該反應(yīng)混合物攪拌3.5h，然后加入2-氯苯胺(89mg，0.70mM)，于120℃將反應(yīng)混合物攪拌3h。冷卻至室溫后，加入乙酸乙酯和飽和NaHCO3溶液，分層。將水相用乙酸乙酯萃取數(shù)次。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，通過(guò)Na2SO4干燥，真空除去溶劑。將產(chǎn)物通過(guò)制備型HPLC(含有0.1％TFA的H2O，100％，3min；至含有0.1％ TFA的H2O/CH3CN，1∶9，在22min內(nèi)；含有0.1％TFA的H2O/CH3CN，1∶9，5min)進(jìn)行純化，得到預(yù)期的黃色結(jié)晶的產(chǎn)物，M+H+＝553，555。
通過(guò)按照以上實(shí)施例的方法但使用適當(dāng)?shù)脑?，可以制得式X2化合物，
其中R和R1具有如下表2中所示的意義。
表2 通過(guò)使用實(shí)施例121的方法但使用適當(dāng)?shù)脑希傻玫绞絏2化合物，
其中R和NR1R2具有如下所示的意義。
實(shí)施例205N-(4-{7-氨基-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基}-苯基)-丁酰胺
于室溫向6-(4-氨基-苯基)-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺(實(shí)施例4，112mg，0.28mM)在吡啶/CH2Cl2(1∶1，2ml)中的混懸液中加入丁酰氯(buturyl chloride)(37mg，0.35mM)，攪拌1h。再次加入丁酰氯(buturyl chloride)(37mg，0.35mM)，于室溫將該反應(yīng)混合物另外攪拌1h。加入乙酸乙酯和飽和NaHCO3溶液，分層。將水相用乙酸乙酯萃取數(shù)次。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，通過(guò)Na2SO4干燥，真空除去溶劑。將產(chǎn)物通過(guò)制備型HPLC(含有0.1％TFA的H2O，100％，3min；至含有0.1％TFA的H2O/CH3CN，1∶9，在22min內(nèi)；含有0.1％TFA的H2O/CH3CN，1∶9，5min)進(jìn)行純化，得到預(yù)期的黃色結(jié)晶的產(chǎn)物，M+H+＝471。
通過(guò)按照以上實(shí)施例的方法但使用適當(dāng)?shù)脑?，可以制得式X3化合物，
其中R、R1和R2具有如下表3中所示的意義。
表3 通用方法N-(3-{7-氨基-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基}-苯基)-磺酰胺的平行合成
向一排玻璃管在每管中加入6-(3-氨基-苯基)-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺(50mg，0.40mmol，1eq.)、吡啶(0.8ml)和17種磺酰氯之一(0.80mmol，2eq.)。將所有管用氬氣沖洗并封閉。于室溫將所得的反應(yīng)混合物攪拌60小時(shí)。然后將在乙醇中的33％甲胺溶液(30.6μl)加入到每管中，于室溫繼續(xù)攪拌1小時(shí)。蒸發(fā)溶劑，將所得的殘余物單獨(dú)重新溶解在甲醇(3ml)、乙腈(0.5ml)和2滴水的含有1％TFA的混合物中。將各溶液?jiǎn)为?dú)通過(guò)0.45μm PTFA膜過(guò)濾，然后將濾液通過(guò)制備型HPLC/MS方法進(jìn)行純化。
實(shí)施例3184-(3-{7-氨基-6-[3-(2-氯-苯磺?；被?-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-基}-苯基)-1-芐基-1-甲基-哌嗪-1-鎓溴化物
向玻璃管中加入N-(3-{7-氨基-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基}-苯基)-2-氯-苯磺酰胺(30mg，0.052mmol，1eq.)、K2CO3(11.4mg，0.082mmol，1.6eq.)和芐基溴(60μl，0.031mmol，0.6eq.)在DMF(0.3ml)中的溶液。于8℃將該反應(yīng)混合物攪拌10分鐘，然后加入芐基溴(50μl，0.026mmol，0.5eq.)在DMF(0.2ml)中的溶液。于8℃繼續(xù)攪拌1.5小時(shí)，然后于室溫?cái)嚢?0分鐘。將反應(yīng)混合物用DMF(2ml)稀釋?zhuān)ㄟ^(guò)0.45μm PTFA膜過(guò)濾，將濾液通過(guò)制備型HPLC/MS方法進(jìn)行純化。將混合的級(jí)分冷凍干燥，得到白色粉末。M+H+664.3. 通過(guò)按照以上實(shí)施例的方法但使用適當(dāng)?shù)脑?，可以制得式X4化合物，
其中R和R1具有如下表4中所示的意義。
表4 實(shí)施例334[4-(7-氨基-3-{3-[4-((S)-2-氨基-3-甲基-丁酰基)-哌嗪-1-基]-苯基}-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基)-苯基]-氨基甲酸異丁酯
將[4-(7-氨基-3-{3-[4-((S)-2-芐氧羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-哌嗪-1-基]-苯基}-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基)-苯基]-氨基甲酸異丁酯(54mg，0.075mMol)溶解在四氫呋喃/甲醇1∶1中。加入4mg鈀/碳(10％)，于室溫在常壓下將該混合物氫化65小時(shí)。將反應(yīng)混合物過(guò)濾，真空除去溶劑，通過(guò)冷凍干燥從叔丁醇中分離出產(chǎn)物(M+H+585.8，白色粉末)。
原料可以如下制得 a)4-(3-氰基甲基-苯基)-哌嗪-1-甲酸芐酯
將(3-溴-苯基)-乙腈(5.1g，25.5mMol)溶解在二甲氧基乙烷(54ml)中。加入哌嗪1-甲酸芐酯(11.4g，51mMol)、磷酸鉀(10.8g，51mMol)、(2-聯(lián)苯基)二叔丁基膦(2.28g，7.6mMol)和乙酸鈀-II(573mg，2.55mMol)后，將該混合物回流20小時(shí)。冷卻至室溫后，將混合物過(guò)濾，將褐色濾液真空蒸發(fā)，得到褐色油狀物。通過(guò)快速色譜法(梯度乙酸乙酯/己烷1∶9至1∶1)分離粗混合物，得到深黃色油狀的純產(chǎn)物(M+H+336.2)。
b)4-[3-(1-氰基-2-氧代-乙基)-苯基]-哌嗪-1-甲酸芐酯
將4-(3-氰基甲基-苯基)-哌嗪-1-甲酸芐酯(5.9g，17.6mMol)溶解在甲苯(59ml)中。加入甲酸乙酯(2.122ml，26.4mMol)和甲醇鈉(1.425g，26.4mMol)后，于38℃將該混合物攪拌3小時(shí)。初始的微黃色混懸液變?yōu)楹稚⒒旌衔镎舭l(fā)至干，將殘余物用甲苯(50ml)處理，真空蒸發(fā)3次。粗產(chǎn)物(M+H+364.2)未經(jīng)純化用于下一步驟。
c)4-[3-(5-氨基-1H-吡唑-4-基)-苯基]-哌嗪-1-甲酸芐酯
將4-[3-(1-氰基-2-氧代-乙基)-苯基]-哌嗪-1-甲酸芐酯(500mg，1.38mMol)溶解在甲苯(3ml)中，用乙酸(0.24ml，4.13mMol)處理。灰褐色混懸液變?yōu)轳勆?。反?yīng)溫度升至30℃。加入肼一水合物(138mg，2.75mMol)(反應(yīng)溫度升至40℃)。將該混合物加熱回流1.5小時(shí)，然后冷卻至室溫。加入飽和碳酸鈉水溶液(20ml)和二氯甲烷(30ml)。分層，將有機(jī)層用水洗滌，通過(guò)硫酸鈉干燥，真空蒸發(fā)。通過(guò)快速色譜法(梯度二氯甲烷/甲醇1∶0至7∶3)分離粗混合物。得到微黃色非晶形固態(tài)的產(chǎn)物(M+H+378.3)。
d)4-{3-[7-氨基-6-(4-異丁氧基羰基氨基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-基]-苯基}-哌嗪-1-甲酸芐酯
將4-[3-(5-氨基-1H-吡唑-4-基)-苯基]-哌嗪-1-甲酸芐酯(1.52g，4.04mMol)、[4-((Z)-1-氰基-2-二甲基氨基-乙烯基)-苯基]-氨基甲酸異丁酯(1.16g，4.04mMol)溶解在乙醇HCl(1.25M，8.4ml)和7.4ml乙酸中。將該混合物加熱回流16小時(shí)，冷卻至室溫，倒入飽和碳酸鈉水溶液(50ml)中，用二氯甲烷萃取。將有機(jī)層通過(guò)硫酸鈉干燥，真空蒸發(fā)。通過(guò)快速色譜法(梯度環(huán)己烷/乙酸乙酯9∶1至1∶1)分離粗混合物。蒸發(fā)相應(yīng)的級(jí)分，得到預(yù)期的黃色非晶形固態(tài)的產(chǎn)物(M+H+620.3)。
e){4-[7-氨基-3-(3-哌嗪-1-基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基]-苯基}-氨基甲酸異丁酯
將4-{3-[7-氨基-6-(4-異丁氧基羰基氨基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-基]-苯基}-哌嗪-1-甲酸芐酯(1.5g，2.4mMol)溶解在甲醇(24ml)中。加入鈀/碳(10％，257mg)后，于室溫在常壓下將該混合物氫化直到所有原料用完。將反應(yīng)混合物過(guò)濾，真空蒸發(fā)，得到微黃色非晶形固態(tài)的產(chǎn)物(M+H+486.2)。
f)[4-(7-氨基-3-{3-[4-((S)-2-芐氧基羰基氨基-3-甲基-丁?；?-哌嗪-1-基]-苯基}-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基)-苯基]-氨基甲酸異丁酯
將{4-[7-氨基-3-(3-哌嗪-1-基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基]-苯基}-氨基甲酸異丁酯(51mg，0.1mMol)、Z-(L)-纈氨酸(33mg，0.13mMol)和N-羥基苯并三唑HOBt(18mg，0.13mMol)、三乙胺(0.019ml，0.13mMol)溶解在4ml四氫呋喃中，冷卻至0℃，然后用N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基-碳二亞胺(0.024ml，0.13mMol)處理。于室溫將該反應(yīng)混合物攪拌20小時(shí)，然后真空蒸發(fā)。將殘余物用飽和碳酸鉀水溶液處理，用乙酸乙酯萃取。將有機(jī)層用水洗滌，通過(guò)硫酸鈉干燥，真空蒸發(fā)。通過(guò)快速色譜法(二氯甲烷/甲醇1∶0，梯度至93∶7)分離粗產(chǎn)物。通過(guò)冷凍干燥從叔丁醇中分離出產(chǎn)物(M+H+719.7，白色粉末)。
實(shí)施例335[4-((Z)-1-氰基-2-二甲基氨基-乙烯基)-苯基]-氨基甲酸異丁酯 a)(4-氰基甲基-苯基)-氨基甲酸異丁酯
將(4-氨基-苯基)-乙腈(1.33g，9.8mMol)溶解在吡啶(21ml)中。加入氯甲酸異丁酯(1.5g，10.8mMol)，于室溫將該混合物攪拌1小時(shí)，然后于60℃攪拌1.5小時(shí)。在減壓下蒸發(fā)反應(yīng)混合物。通過(guò)快速色譜法(梯度乙酸乙酯/己烷1∶9至3∶7)分離粗混合物，得到產(chǎn)物，將其在室溫固化過(guò)夜。將該產(chǎn)物用環(huán)己烷處理，于50℃溫?zé)?0分鐘。過(guò)濾，干燥，得到黃色固態(tài)的產(chǎn)物(M+H+233.1)。
b)[4-((Z)-1-氰基-2-二甲基氨基-乙烯基)-苯基]-氨基甲酸異丁酯
將(4-氰基甲基-苯基)-氨基甲酸異丁酯(1.79g，7.7mMol)溶解在甲苯(16ml)中。加入N，N-二甲基甲酰胺-二甲基縮醛(1.84g，15mMol)后，將該混合物回流2小時(shí)。加入另外的N，N-二甲基甲酰胺-二甲基縮醛(1g)，將反應(yīng)混合物回流過(guò)夜(總反應(yīng)時(shí)間為20小時(shí))。冷卻至室溫，得到褐色混懸液，將其用乙酸乙酯(200ml)稀釋?zhuān)缓笳婵照舭l(fā)，得到褐色固體。通過(guò)快速色譜法(梯度乙酸乙酯/己烷1∶9至1∶1)分離粗混合物，得到橙色固態(tài)的產(chǎn)物(M+H+288.1)。
通過(guò)按照以上實(shí)施例的方法但使用適當(dāng)?shù)脑希梢灾频檬絏5化合物，
其中R和R1具有如下表5中所示的意義。
表5



可以通過(guò)使用如上公開(kāi)的方法并且使用適當(dāng)?shù)脑系玫揭韵禄衔? 實(shí)施例389和390
實(shí)施例391
實(shí)施例392
實(shí)施例393[4-(7-氨基-3-{4-[4-(1-甲基-哌啶-4-基)-哌嗪-1-基]-苯基}-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基)-苯基]-氨基甲酸異丁酯 A){4-[4-(1-甲基-哌啶-4-基)-哌嗪-1-基]-苯基}-乙腈
在氬氣氣氛下向(4-溴-苯基)-乙腈(196mg，1mmol)、K3PO4(318mg，1.5mmol)、1-(1-甲基-哌啶-4-基)-哌嗪(220mg，1.2mmol)、(2-聯(lián)苯基)二叔丁基膦(45mg，0.15mmol)在1，2-二甲氧基乙烷(3ml)中的混合物中加入乙酸鈀(II)(22mg，0.1mmol)。于90℃在氬氣下將混合物在密閉瓶中振搖20h。冷卻至室溫后，加入H2O和乙酸乙酯，將混合物通過(guò)硅藻土墊過(guò)濾。分離水層，將其用乙酸乙酯萃取2次。將合并的有機(jī)層用H2O洗滌，通過(guò)Na2SO4干燥。真空除去溶劑，將殘余物通過(guò)制備型HPLC(YMC-Pack Pro C18柱；在20min內(nèi)10-100％CH3CN+0.1％CF3COOH/H2O+0.1％CF3COOH，流速20ml/min)進(jìn)行純化，得到預(yù)期的固態(tài)的產(chǎn)物，[M+H]+＝299.2；tR(HPLC，CC 125/4 Nucleosil 100-5 C18 AB柱；5-100％ CH3CN+0.1％CF3COOH/H2O+0.1％ CF3COOH進(jìn)行8min，流速1.5ml/min)2.63min。
B)2-氰基-2-{4-[4-(1-甲基-哌啶-4-基)-哌嗪-1-基]-苯基}-乙烯醇鈉
于50℃將鈉(345mg，15mmol)溶解在乙醇(25ml)中。冷卻至室溫后，加入{4-[4-(1-甲基-哌啶-4-基)-哌嗪-1-基]-苯基}-乙腈(3.0g，10mmol)和甲酸乙酯(1.2ml，15mmol)，將反應(yīng)混合物于60℃攪拌2h。冷卻至室溫后，加入乙醚，將沉淀物濾出，用乙醚洗滌，真空干燥，得到深褐色固態(tài)的產(chǎn)物。[M-H]-＝325.3；tR(HPLC，CC 125/4 Nucleosil 100-5 C18 AB柱；5-100％ CH3CN+0.1％ CF3COOH/H2O+0.1％ CF3COOH進(jìn)行8min，流速1.5ml/min)2.35min. C)4-{4-[4-(1-甲基-哌啶-4-基)-哌嗪-1-基]-苯基}-2H-吡唑-3-基胺
于125℃將實(shí)施例393B的化合物(2.4g，6.9mmol)、肼一水合物(0.95ml，19.5mmol)和乙酸(30ml)的混合物攪拌2h。冷卻至室溫后，加入H2O(60ml)和濃HCl(6ml)，在回流溫度下將混合物攪拌1h。將混合物冷卻至室溫，用濃NH4OH溶液堿化，用H2O稀釋?zhuān)瑢⑺畬佑肅H2Cl2萃取2次。棄去有機(jī)萃取液，將水層用正丁醇萃取2次。將合并的丁醇層真空蒸發(fā)，將殘余物用甲苯蒸發(fā)，得到深褐色固態(tài)的產(chǎn)物。[M+H]+＝341.3；tR(HPLC，CC 125/4Nucleosil 100-5 C18 AB柱；0-100％ CH3CN+0.1％ CF3COOH/H2O+0.1％ CF3COOH進(jìn)行8min，流速1.5ml/min)2.75min. D)3-{4-[4-(1-甲基-哌啶-4-基)-哌嗪-1-基]-苯基}-6-(4-硝基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺，鹽酸鹽
于85℃將實(shí)施例393C的化合物(272.4mg，0.8mmol)、3-二甲基氨基-2-(4-硝基-苯基)-丙烯腈(173.8mg，0.8mmol)、乙酸(3ml)、乙醇(5ml)和在乙醇中的～1.25M HCl(2.55ml，～3.2mmol)的混合物攪拌18h。冷卻至室溫后，將反應(yīng)混合物過(guò)濾，將殘余物用乙醇和乙醚洗滌，于60℃真空干燥，得到深褐色固態(tài)的產(chǎn)物。[M+H]+＝513.2；tR(HPLC，CC 125/4 Nucleosil 100-5C18 AB柱；5-100％ CH3CN+0.1％ CF3COOH/H2O+0.1％ CF3COOH進(jìn)行8min，流速1.5ml/min)2.95min. E)6-(4-氨基-苯基)-3-{4-[4-(1-甲基-哌啶-4-基)-哌嗪-1-基]-苯基}-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺，鹽酸鹽
于室溫將實(shí)施例393D的化合物(316.9mg，0.58mmol)、DMF(12ml)、H2O(18ml)和Pd/C 10％(100mg)的混合物氫化16h(氫氣壓力～2bar)。將該反應(yīng)混合物通過(guò)硅藻土墊過(guò)濾，將殘余物用DMF和H2O洗滌，將濾液真空蒸發(fā)，得到深灰色固態(tài)的粗產(chǎn)物。對(duì)于分析，將部分粗產(chǎn)物通過(guò)制備型HPLC(YMC-Pack Pro C18柱；在20min內(nèi)0-100％ CH3CN+0.1％CF3COOH/H2O+0.1％ CF3COOH，流速20ml/min)進(jìn)行純化，得到預(yù)期的褐色固態(tài)的產(chǎn)物。[M+H]+＝483.3；tR(HPLC，CC 125/4 Nucleosil 100-5C18 AB柱；5-100％ CH3CN+0.1％ CF3COOH/H2O+0.1％ CF3COOH進(jìn)行8min，流速1.5ml/min)2.17min. F)[4-(7-氨基-3-{4-[4-(1-甲基-哌啶-4-基)-哌嗪-1-基]-苯基}-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基)-苯基]-氨基甲酸異丁酯
向攪拌的實(shí)施例393E的化合物(96.5mg，0.18mmol)、DMF(2ml)和吡啶(3ml)的混合物中加入氯甲酸異丁酯(28.4μl，0.22mmol)。于室溫75min后，加入第二份氯甲酸異丁酯(28.4μl，0.22mmol)，繼續(xù)攪拌16h。將該反應(yīng)混合物真空蒸發(fā)，將殘余物在2N NaOH溶液和乙酸乙酯之間分配。分離乙酸乙酯萃取液，將水層用乙酸乙酯萃取2次。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，通過(guò)Na2SO4干燥，真空除去溶劑。將產(chǎn)物通過(guò)制備型HPLC(YMC-Pack ProC18柱；在20min內(nèi)10-100％ CH3CN+0.1％ CF3COOH/H2O+0.1％CF3COOH，流速20ml/min)進(jìn)行純化。將合并的純級(jí)分用固體K2CO3堿化，真空濃縮，將剩余的水相用CH2Cl2萃取2次。將合并的有機(jī)萃取液通過(guò)Na2SO4干燥，真空蒸發(fā)，得到預(yù)期的駝色固態(tài)的產(chǎn)物，[M+H]+＝583.7；tR(HPLC，CC 125/4 Nucleosil 100-5C18 AB柱；5-100％ CH3CN+0.1％CF3COOH/H2O+0.1％ CF3COOH進(jìn)行8min，流速1.5ml/min)3.51min. 實(shí)施例394[4-(7-氨基-3-{4-[4-(1-甲基-哌啶-4-基)-哌嗪-1-基]-苯基}-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基)-苯基]-氨基甲酸乙酯
以類(lèi)似于以上對(duì)實(shí)施例393F)描述的方法、使用氯甲酸乙酯代替氯甲酸異丁酯制得該化合物。駝色固體。[M+H]+＝555.3；tR(HPLC，CC 125/4Nucleosil 100-5 C18 AB柱；5-100％ CH3CN+0.1％ CF3COOH/H2O+0.1％ CF3COOH進(jìn)行8min，流速1.5ml/min)2.87min. 實(shí)施例395[4-(7-氨基-3-{4-[4-(2-甲氧基-乙基)-哌嗪-1-基]-苯基}-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基)-苯基]-氨基甲酸乙酯 A){4-[4-(2-甲氧基-乙基)-哌嗪-1-基]-苯基}-乙腈
以類(lèi)似于實(shí)施例393A)中描述的方法、使用1-(2-甲氧基-乙基)-哌嗪代替1-(1-甲基-哌啶-4-基)-哌嗪制得該化合物。將粗產(chǎn)物通過(guò)快速色譜法(硅膠；CH2Cl2/CH3OH)進(jìn)行純化，得到預(yù)期的產(chǎn)物。[M+H]+＝260.2；tR(HPLC，CC 125/4 Nucleosil 100-5 C18 AB柱；5-100％ CH3CN+0.1％ CF3COOH/H2O+0.1％ CF3COOH進(jìn)行8min，流速1.5ml/min)3.11min. B)2-氰基-2-{4-[4-(2-甲氧基-乙基)-哌嗪-1-基]-苯基}-乙烯醇鈉
以類(lèi)似于實(shí)施例393B)中描述的方法、使用{4-[4-(2-甲氧基-乙基)-哌嗪-1-基]-苯基}-乙腈代替{4-[4-(1-甲基-哌啶-4-基)-哌嗪-1-基]-苯基}-乙腈制得該化合物。[M-H]-＝286.2；tR(HPLC，CC 125/4 Nucleosil 100-5 C18 AB柱；5-100％ CH3CN+0.1％ CF3COOH/H2O+0.1％ CF3COOH進(jìn)行8min，流速1.5ml/min)3.07min. C)4-{4-[4-(2-甲氧基-乙基)-哌嗪-1-基]-苯基}-2H-吡唑-3-基胺
以類(lèi)似于實(shí)施例393C)中描述的方法、使用2-氰基-2-{4-[4-(2-甲氧基-乙基)-哌嗪-1-基]-苯基}-乙烯醇鈉代替2-氰基-2-{4-[4-(1-甲基-哌啶-4-基)-哌嗪-1-基]-苯基}-乙烯醇鈉制得該化合物。褐色固體。[M+H]+＝302.2；tR(HPLC，CC 125/4 Nucleosil 100-5 C18 AB柱；0-100％ CH3CN+0.1％CF3COOH/H2O+0.1％ CF3COOH進(jìn)行8min，流速1.5ml/min)2.91min. D)3-{4-[4-(2-甲氧基-乙基)-哌嗪-1-基]-苯基}-6-(4-硝基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺
于85℃將4-{4-[4-(2-甲氧基-乙基)-哌嗪-1-基]-苯基}-2H-吡唑-3-基胺(336mg，1.11mmol)、3-二甲基氨基-2-(4-硝基-苯基)-丙烯腈(242mg，1.11mmol)、乙酸(4.2ml)、乙醇(7ml)和在乙醇中的～1.25M HCl(3.55ml，～4.44mmol)的混合物振搖18h。將該反應(yīng)混合物真空蒸發(fā)，將殘余物在飽和K2CO3溶液和乙酸乙酯之間分配。分離水層，將其用乙酸乙酯萃取2次。將合并的有機(jī)萃取液通過(guò)Na2SO4干燥，真空蒸發(fā)，得到深色固態(tài)的粗產(chǎn)物。[M-H]-＝472.3；tR(HPLC，CC 125/4 Nucleosil 100-5 C18 AB柱；5-100％CH3CN+0.1％ CF3COOH/H2O+0.1％ CF3COOH進(jìn)行8min，流速1.5ml/min)3.01min. E)6-(4-氨基-苯基)-3-{4-[4-(2-甲氧基-乙基)-哌嗪-1-基]-苯基}-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺
于室溫將3-{4-[4-(2-甲氧基-乙基)-哌嗪-1-基]-苯基}-6-(4-硝基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺(340mg，0.72mmol)、DMF(10ml)、THF(10ml)和Pd/C 10％(100mg)的混合物氫化14h(氫氣壓力～2bar)。將該反應(yīng)混合物通過(guò)硅藻土墊過(guò)濾，將殘余物用DMF和THF洗滌，將濾液真空蒸發(fā)。將粗殘余物在CH2Cl2和半飽和的K2CO3溶液之間分配，分離水相，將其用CH2Cl2萃取2次。將合并的有機(jī)萃取液用鹽水洗滌，通過(guò)Na2SO4干燥，真空蒸發(fā)，得到預(yù)期的深色固態(tài)的產(chǎn)物。[M+H]+＝444.3；tR(HPLC，CC 125/4Nucleosil 100-5 C18 AB柱；5-100％ CH3CN+0.1％ CF3COOH/H2O+0.1％ CF3COOH進(jìn)行8min，流速1.5ml/min)2.41min. F)[4-(7-氨基-3-{4-[4-(2-甲氧基-乙基)-哌嗪-1-基]-苯基}-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基)-苯基]-氨基甲酸乙酯
向攪拌的6-(4-氨基-苯基)-3-{4-[4-(2-甲氧基-乙基)-哌嗪-1-基]-苯基}-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺(88.7mg，0.2mmol)和吡啶(3ml)的混合物中加入氯甲酸乙酯(21μl，0.22mmol)。于室溫75min后，加入第二份氯甲酸乙酯(21μl，0.22mmol)，繼續(xù)攪拌45min。將該反應(yīng)混合物真空蒸發(fā)，將殘余物在2NNaOH溶液和乙酸乙酯之間分配。分離乙酸乙酯萃取液，將水層用乙酸乙酯萃取2次。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，通過(guò)Na2SO4干燥，真空除去溶劑。將產(chǎn)物通過(guò)制備型HPLC(YMC-Pack Pro C18柱；在20min內(nèi)0-100％CH3CN+0.1％ CF3COOH/H2O+0.1％ CF3COOH，流速20ml/min)進(jìn)行純化。將合并的純級(jí)分用固體K2CO3堿化，真空濃縮，將剩余的水相用CH2Cl2萃取2次。將合并的有機(jī)萃取液通過(guò)Na2SO4干燥，真空蒸發(fā)，得到預(yù)期的駝色固態(tài)的產(chǎn)物。[M+H]+＝516.3；tR(HPLC，CC 125/4 Nucleosil100-5 C18 AB柱；5-100％ CH3CN+0.1％ CF3COOH/H2O+0.1％CF3COOH進(jìn)行8min，流速1.5ml/min)3.17min. 實(shí)施例396[4-(7-氨基-3-{4-[4-(2-甲氧基-乙基)-哌嗪-1-基]-苯基}-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基)-苯基]-氨基甲酸異丁酯
向攪拌的6-(4-氨基-苯基)-3-{4-[4-(2-甲氧基-乙基)-哌嗪-1-基]-苯基}-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺(88.7mg，0.2mmol)和吡啶(3ml)的混合物中加入氯甲酸異丁酯(28.4μl，0.22mmol)。于室溫75min后，將該反應(yīng)混合物真空蒸發(fā)，將殘余物在2N NaOH溶液和乙酸乙酯之間分配。分離乙酸乙酯萃取液，將水層用乙酸乙酯萃取2次。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，通過(guò)Na2SO4干燥，真空除去溶劑。將產(chǎn)物通過(guò)制備型HPLC(YMC-Pack Pro C18柱；在30min內(nèi)10-100％ CH3CN+0.1％ CF3COOH/H2O+0.1％ CF3COOH，流速20ml/min)進(jìn)行純化。將合并的純級(jí)分用固體K2CO3堿化，真空濃縮，將剩余的水相用CH2Cl2萃取2次。將合并的有機(jī)萃取液通過(guò)Na2SO4干燥，真空蒸發(fā)，得到預(yù)期產(chǎn)物，為褐色固體。[M+H]+＝544.8；tR(HPLC，CC125/4 Nucleosil 100-5 C18 AB柱；5-100％ CH3CN+0.1％ CF3COOH/H2O+0.1％ CF3COOH進(jìn)行8min，流速1.5ml/min)3.81min. 實(shí)施例3974-{7-氨基-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基}-苯酚 A)[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-苯基]-乙腈
于室溫將N-甲基-哌嗪(6.6ml，59.4mmol)、K2CO3(14.87g，107.6mmol)在二甲基乙酰胺(100ml)中的混懸液攪拌10min。加入(4-溴甲基-苯基)-乙腈(11.3g，53.8mmol)后，繼續(xù)攪拌12h。將該混合物真空蒸發(fā)，將殘余物在H2O和乙酸乙酯之間分配。將有機(jī)層通過(guò)Na2SO4干燥，真空除去溶劑，得到橙色油狀的產(chǎn)物。[M+H]+＝230.1；tR(HPLC，CC 125/4 Nucleosil 100-5 C18AB柱；5-100％ CH3CN+0.1％ CF3COOH/H2O+0.1％ CF3COOH進(jìn)行8min，流速1.5ml/min)1.73min. B)2-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-苯基]-3-氧代-丙腈
以類(lèi)似于實(shí)施例170B)中描述的方法、使用[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-苯基]-乙腈代替{4-[4-(1-甲基-哌啶-4-基)-哌嗪-1-基]-苯基}-乙腈制得該化合物。反應(yīng)完成后，將該混合物真空蒸發(fā)。將殘余物用H2O處理，加入乙酸將pH調(diào)至～4。將水層用CH2Cl2洗滌，真空蒸發(fā)，得到黃色固態(tài)的產(chǎn)物。[M+H]+＝258.1；tR(HPLC，CC 125/4 Nucleosil 100-5 C18 AB柱；5-100％CH3CN+0.1％ CF3COOH/H2O+0.1％ CF3COOH進(jìn)行8min，流速1.5ml/min)2.38min. C)4-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-苯基]-2H-吡唑-3-基胺
于100℃將2-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-苯基]-3-氧代-丙腈(8.1g，31.4mmol)、肼一水合物(3.82ml，78.6mmol)和乙酸(76ml)的混合物攪拌3.5h。冷卻至室溫后，加入水(165ml)和發(fā)煙HCl(16.5ml)，于110℃將該混合物攪拌0.5h。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，加入濃氨水堿化。將水層用CH2Cl2萃取3次。將合并的有機(jī)層通過(guò)Na2SO4干燥，真空除去溶劑，得到橙色油狀的產(chǎn)物，其在室溫下結(jié)晶。[M+H]+＝272.1. D)3-羥基-2-(4-羥基-苯基)-丙烯腈
R＝H，Na 于50℃將鈉(690mg，30.0mmol)溶解在乙醇(17ml)中。冷卻至室溫后，加入(4-羥基-苯基)-乙腈(2.66g，20mmol)和甲酸乙酯(2.41ml，30mmol)，于70℃將該反應(yīng)混合物攪拌2h。冷卻至室溫后，將沉淀物濾出。將濾液蒸發(fā)，得到綠色的產(chǎn)物的鈉鹽。(HPLC，CC 125/4 Nucleosil 100-5 C18 AB柱；5-100％ CH3CN+0.1％ CF3COOH/H2O+0.1％ CF3COOH進(jìn)行8min，流速1.5ml/min)3.64min.將過(guò)濾的沉淀物溶解在H2O中，加入乙酸將pH調(diào)至～4，將水相用乙酸乙酯萃取2次。將合并的有機(jī)萃取液通過(guò)Na2SO4干燥，真空蒸發(fā)，得到褐色油狀的產(chǎn)物。[M-H]-＝160.0. E)4-{7-氨基-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基}-苯酚
在回流下將4-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-苯基]-2H-吡唑-3-基胺(120mg，0.44mmol)、3-羥基-2-(4-羥基-苯基)-丙烯腈鈉鹽(90mg，0.44mmol)、乙酸(2ml)、乙醇(4ml)和在乙醇中的～1.25M HCl(1.76ml，～2.2mmol)的混合物攪拌16h。冷卻至室溫后，將沉淀物濾出，用乙醇洗滌，真空干燥，得到產(chǎn)物的HCl鹽。[M+H]+＝415.2；tR(HPLC，CC 125/4 Nucleosil 100-5 C18 AB柱；5-100％ CH3CN+0.1％ CF3COOH/H2O+0.1％ CF3COOH進(jìn)行8min，流速1.5ml/min)2.99min.將濾液蒸發(fā)，將殘余物在飽和K2CO3溶液和CH2Cl2之間分配。將有機(jī)層通過(guò)Na2SO4干燥，蒸發(fā)，將殘余物通過(guò)制備型HPLC(YMC-Pack Pro C18柱；在20min內(nèi)10-100％ CH3CN+0.1％CF3COOH/H2O+0.1％ CF3COOH，流速20ml/min)進(jìn)行純化。將合并的純級(jí)分用固體K2CO3堿化，真空濃縮，將剩余的水相用CH2Cl2萃取2次。將合并的有機(jī)萃取液通過(guò)Na2SO4干燥，真空蒸發(fā)，得到預(yù)期的駝色固態(tài)的產(chǎn)物。[M+H]+＝415.2；tR(HPLC，CC 125/4 Nucleosil 100-5 C18 AB柱；5-100％ CH3CN+0.1％ CF3COOH/H2O+0.1％ CF3COOH進(jìn)行8min，流速1.5ml/min)2.92min. 實(shí)施例398[4-(7-氨基-3-{4-[4-(2-羥基-乙基)-哌嗪-1-基]-苯基}-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基)-苯基]-氨基甲酸乙酯 A)2-(4-{4-[7-氨基-6-(4-硝基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-基]-苯基}-哌嗪-1-基)-乙醇，鹽酸鹽
以類(lèi)似于實(shí)施例393D)中描述的方法、使用2-{4-[4-(5-氨基-1H-吡唑-4-基)-苯基]-哌嗪-1-基}-乙醇代替4-{4-[4-(1-甲基-哌啶-4-基)-哌嗪-1-基]-苯基}-2H-吡唑-3-基胺制得該化合物。呈綠色的固體。[M+H]+＝460.3；tR(HPLC，CC 125/4 Nucleosil 100-5 C18 AB柱；5-100％ CH3CN+0.1％CF3COOH/H2O+0.1％ CF3COOH進(jìn)行8min，流速1.5ml/min)3.37min. B)2-(4-{4-[7-氨基-6-(4-氨基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-基]-苯基}-哌嗪-1-基)-乙醇，鹽酸鹽
以類(lèi)似于實(shí)施例393E)中描述的方法、使用2-(4-{4-[7-氨基-6-(4-硝基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-基]-苯基}-哌嗪-1-基)-乙醇鹽酸鹽代替3-{4-[4-(1-甲基-哌啶-4-基)-哌嗪-1-基]-苯基}-6-(4-硝基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺鹽酸鹽制得該化合物。將粗產(chǎn)物用熱甲醇處理，過(guò)濾，將殘余物用甲醇和CH2Cl2洗滌，真空干燥，得到預(yù)期的深駝色固態(tài)的產(chǎn)物。[M+H]+＝430.2；tR(HPLC，CC 125/4 Nucleosil 100-5 C18 AB柱；5-100％ CH3CN+0.1％ CF3COOH/H2O+0.1％ CF3COOH進(jìn)行8min，流速1.5ml/min)2.46min. C)[4-(7-氨基-3-{4-[4-(2-羥基-乙基)-哌嗪-1-基]-苯基}-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基)-苯基]-氨基甲酸乙酯
以類(lèi)似于實(shí)施例393F)中描述的方法、但是使用2-(4-{4-[7-氨基-6-(4-氨基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-基]-苯基}-哌嗪-1-基)-乙醇鹽酸鹽和氯甲酸乙酯制得該化合物。將產(chǎn)物通過(guò)制備型HPLC(YMC-Pack Pro C18柱；在20min內(nèi)0-100％ CH3CN+0.1％ CF3COOH/H2O+0.1％ CF3COOH，流速20ml/min)進(jìn)行純化。將合并的純級(jí)分用固體K2CO3堿化，真空濃縮，將剩余的水相用CH2Cl2萃取2次。將合并的有機(jī)萃取液通過(guò)Na2SO4干燥，真空蒸發(fā)，得到預(yù)期的駝色固態(tài)的產(chǎn)物。[M+H]+＝502.3；tR(HPLC，CC125/4 Nucleosil 100-5 C18 AB柱；5-100％ CH3CN+0.1％ CF3COOH/H2O+0.1％ CF3COOH進(jìn)行8min，流速1.5ml/min)3.20min. 實(shí)施例399(4-{7-氨基-5-甲基-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基}-苯基)-氨基甲酸異丁酯 A)2-(4-硝基-苯基)-3-氧代-丁腈
向攪拌的(4-硝基-苯基)-乙腈(2.2g，13.6mmol)在吡啶(17ml)中的溶液中一次性加入乙酰氯(1.22ml，17.2mmol)。于室溫將該混合物攪拌20h，然后蒸發(fā)。向殘余物中加入H2O，加入2N HCl將pH調(diào)至～4，將水層用CH2Cl2萃取3次。將合并的有機(jī)萃取液用H2O洗滌，通過(guò)Na2SO4干燥，真空蒸發(fā)，得到產(chǎn)物，為深褐色殘余物。[M-H]-＝203.1；tR(HPLC，CC 125/4 Nucleosil100-5 C18 AB柱；5-100％ CH3CN+0.1％ CF3COOH/H2O+0.1％CF3COOH進(jìn)行8min，流速1.5ml/min)4.67min. B)5-甲基-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-6-(4-硝基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺，鹽酸鹽
以類(lèi)似于實(shí)施例393D)中描述的方法、但是使用4-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-2H-吡唑-3-基胺和2-(4-硝基-苯基)-3-氧代-丁腈制得該化合物。反應(yīng)時(shí)間120h。深駝色固體。[M+H]+＝444.6；tR(HPLC，CC 125/4 Nucleosil100-5 C18 AB柱；5-100％ CH3CN+0.1％ CF3COOH/H2O+0.1％CF3COOH進(jìn)行8min，流速1.5ml/min)2.96min. C)6-(4-氨基-苯基)-5-甲基-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺，鹽酸鹽
以類(lèi)似于實(shí)施例393E)中描述的方法、但是使用5-甲基-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-6-(4-硝基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺鹽酸鹽制得該化合物。將粗產(chǎn)物用甲醇和CH2Cl2處理，過(guò)濾，將殘余物用甲醇和CH2Cl2洗滌，真空干燥，得到預(yù)期的駝色固態(tài)的產(chǎn)物。[M+H]+＝414.6；tR(HPLC，CC 125/4 Nucleosil 100-5 C18 AB柱；5-100％ CH3CN+0.1％ CF3COOH/H2O+0.1％ CF3COOH進(jìn)行8min，流速1.5ml/min)2.13min. D)(4-{7-氨基-5-甲基-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基}-苯基)-氨基甲酸異丁酯
以類(lèi)似于實(shí)施例393F)中描述的方法、但是使用6-(4-氨基-苯基)-5-甲基-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺鹽酸鹽制得該化合物。將粗產(chǎn)物用甲醇處理，將固體濾出，用甲醇和乙醚洗滌，真空干燥，得到預(yù)期的駝色固態(tài)的產(chǎn)物。[M+H]+＝514.6；tR(HPLC，CC 125/4Nucleosil 100-5 C18 AB柱；5-100％ CH3CN+0.1％ CF3COOH/H2O+0.1％ CF3COOH進(jìn)行8min，流速1.5ml/min)3.45min. 實(shí)施例400(4-{7-氨基-5-甲基-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基}-苯基)-氨基甲酸異丁酯，三氟乙酸鹽 A)5-甲基-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-6-(4-硝基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺，鹽酸鹽
以類(lèi)似于實(shí)施例393D)中描述的方法、但是使用4-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-2H-吡唑-3-基胺和2-(4-硝基-苯基)-3-氧代-丁腈制得該化合物。反應(yīng)時(shí)間140h。深駝色固體。[M+H]+＝444.6；tR(HPLC，CC 125/4 Nucleosil100-5 C18 AB柱；5-100％ CH3CN+0.1％ CF3COOH/H2O+0.1％CF3COOH進(jìn)行8min，流速1.5ml/min)3.11min. B)6-(4-氨基-苯基)-5-甲基-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺，鹽酸鹽
以類(lèi)似于實(shí)施例393E)中描述的方法、但是使用5-甲基-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-6-(4-硝基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺鹽酸鹽制得該化合物。將粗產(chǎn)物用甲醇和CH2Cl2處理，過(guò)濾，將殘余物用甲醇和CH2Cl2洗滌，真空干燥，得到預(yù)期的駝色固態(tài)的產(chǎn)物。[M+H]+＝414.6；tR(HPLC，CC 125/4 Nucleosil 100-5 C18 AB柱；5-100％ CH3CN+0.1％ CF3COOH/H2O+0.1％ CF3COOH進(jìn)行8min，流速1.5ml/min)2.21min. C)(4-{7-氨基-5-甲基-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基}-苯基)-氨基甲酸異丁酯，三氟乙酸鹽
以類(lèi)似于實(shí)施例393F)中描述的方法、但是使用6-(4-氨基-苯基)-5-甲基-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺鹽酸鹽制得該化合物。HPLC純化后蒸發(fā)純級(jí)分，得到微駝色固體。[M+H]+＝514.7；tR(HPLC，CC 125/4 Nucleosil 100-5 C18 AB柱；5-100％ CH3CN+0.1％CF3COOH/H2O+0.1％ CF3COOH進(jìn)行8min，流速1.5ml/min)3.56min. 實(shí)施例4014-{7-氨基-5-甲氧基甲基-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基}-苯酚 A)2-(4-芐氧基-苯基)-4-甲氧基-3-氧代-丁腈
于50℃將鈉(517mg，22.5mmol)溶解在乙醇(12.5ml)中。冷卻至室溫后，加入(4-芐氧基-苯基)-乙腈(3.34g，15mmol)，然后加入甲氧基-乙酸甲酯(1.49ml，15mmol)。于80℃在封閉瓶中將該混合物振搖20h。冷卻后，加入2N HCl將pH調(diào)至～4。將混合物蒸發(fā)，將殘余物用H2O處理，將水層用乙酸乙酯萃取2次。將合并的有機(jī)萃取液通過(guò)Na2SO4干燥，真空蒸發(fā)，得到深駝色固態(tài)的產(chǎn)物。tR(HPLC，CC 125/4 Nucleosil 100-5 C18 AB柱；5-100％CH3CN+0.1％ CF3COOH/H2O+0.1％ CF3COOH進(jìn)行8min，流速1.5ml/min)6.05min. B)6-(4-芐氧基-苯基)-5-甲氧基甲基-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺
于80℃將4-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-2H-吡唑-3-基胺(1.69g，6.57mmol)、2-(4-芐氧基-苯基)-4-甲氧基-3-氧代-丁腈(1.94g，6.57mmol)、乙酸(18ml)、乙醇(36ml)和在乙醇中的～1.25M HCl(21ml，～26.3mmol)的混合物振搖20h。將混合物真空蒸發(fā)，將殘余物在飽和K2CO3溶液和乙酸乙酯之間分配。分離水層，將其用乙酸乙酯萃取2次。將合并的萃取液用鹽水洗滌，通過(guò)Na2SO4干燥，蒸發(fā)。將甲醇加入到殘余物中，將由此形成的固體濾出，真空干燥，得到深褐色固態(tài)的產(chǎn)物。[M+H]+＝535.3；tR(HPLC，CC 125/4Nucleosil 100-5 C18 AB柱；5-100％ CH3CN+0.1％ CF3COOH/H2O+0.1％ CF3COOH進(jìn)行8min，流速1.5ml/min)4.63min. C)4-{7-氨基-5-甲氧基甲基-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基}-苯酚
于室溫將6-(4-芐氧基-苯基)-5-甲氧基甲基-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺(150mg，0.28mmol)、THF(3ml)、二噁烷(2ml)和Pd/C 10％(20mg)的混合物氫化16h(氫氣壓力～2bar)。將該反應(yīng)混合物通過(guò)硅藻土墊過(guò)濾，將殘余物用THF洗滌，將濾液真空蒸發(fā)。將粗殘余物通過(guò)快速色譜法(SiO2，CH2Cl2/CH3OH)進(jìn)行純化，得到預(yù)期的黃色固態(tài)的產(chǎn)物。[M+H]+＝445.3；tR(HPLC，CC 125/4 Nucleosil 100-5 C18 AB柱；5-100％ CH3CN+0.1％ CF3COOH/H2O+0.1％ CF3COOH進(jìn)行8min，流速1.5ml/min)2.97min. 實(shí)施例4024-(7-氨基-3-{4-[4-(2-甲氧基-乙基)-哌嗪-1-基]-苯基}-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基)-苯酚 A)6-(4-芐氧基-苯基)-3-{4-[4-(2-甲氧基-乙基)-哌嗪-1-基]-苯基}-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺
以類(lèi)似于實(shí)施例395D)中描述的方法、但是使用2-(4-芐氧基-苯基)-3-氧代-丙腈制得該化合物。[M+H]+＝535.3；tR(HPLC，CC 125/4 Nucleosil100-5 C18 AB柱；5-100％ CH3CN+0.1％ CF3COOH/H2O+0.1％CF3COOH進(jìn)行8min，流速1.5ml/min)4.38min. B)4-(7-氨基-3-{4-[4-(2-甲氧基-乙基)-哌嗪-1-基]-苯基}-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基)-苯酚
于室溫將6-(4-芐氧基-苯基)-3-{4-[4-(2-甲氧基-乙基)-哌嗪-1-基]-苯基}-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺(66.4mg，0.124mmol)在CF3COOH(3ml)中的混合物攪拌1h，真空蒸發(fā)，將殘余物用甲苯蒸發(fā)1次。將產(chǎn)物通過(guò)制備型HPLC(YMC-Pack Pro C18柱；在20min內(nèi)10-100％CH3CN+0.1％ CF3COOH/H2O+0.1％ CF3COOH，流速20ml/min)進(jìn)行純化。將合并的純級(jí)分用固體K2CO3堿化，真空濃縮，將剩余的水相用CH2Cl2萃取3次。將合并的有機(jī)萃取液通過(guò)Na2SO4干燥，真空蒸發(fā)，得到預(yù)期的黃色固態(tài)的產(chǎn)物。[M-H]-＝443.3；tR(HPLC，CC 125/4 Nucleosil 100-5 C18 AB柱；5-100％ CH3CN+0.1％ CF3COOH/H2O+0.1％ CF3COOH進(jìn)行8min，流速1.5ml/min)2.71min. 實(shí)施例4032-(4-{4-[7-氨基-6-(4-芐氧基-苯基)-吡唑并[1，5a]嘧啶-3-基]-苯基}-哌嗪-1-基)-乙醇，鹽酸鹽 A)2-(4-芐氧基-苯基)-3-氧代-丙腈
以類(lèi)似于實(shí)施例401A)中描述的方法制得該化合物。駝色固體。[M+H]+＝252.1；tR(HPLC，CC 125/4 Nucleosil 100-5 C18 AB柱；5-100％ CH3CN+0.1％ CF3COOH/H2O+0.1％ CF3COOH進(jìn)行8min，流速1.5ml/min)6.09min B)2-(4-{4-[7-氨基-6-(4-芐氧基-苯基)-吡唑并[1，5a]嘧啶-3-基]-苯基}-哌嗪-1-基)-乙醇，鹽酸鹽
以類(lèi)似于實(shí)施例393D)中描述的方法、但是使用2-{4-[4-(5-氨基-1H-吡唑-4-基)-苯基]-哌嗪-1-基}-乙醇和2-(4-芐氧基-苯基)-3-氧代-丙腈制得該化合物。[M+H]+＝521.3；tR(HPLC，CC 125/4 Nucleosil 100-5 C18 AB柱；5-100％ CH3CN+0.1％ CF3COOH/H2O+0.1％ CF3COOH進(jìn)行8min，流速1.5ml/min)4.64min 實(shí)施例404{7-氨基-6-(4-羥基-苯基)-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-基}-乙腈 A)4-{7-氨基-5-溴甲基-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基}-苯酚，氫溴酸鹽
于110℃在密閉瓶中將6-(4-芐氧基-苯基)-5-甲氧基甲基-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺(1.65g，3.1mmol)、氫溴酸(33％)(1.75ml)在乙酸(5ml)中的混合物振搖16h。冷卻至5℃后，將沉淀物濾出，用乙醚洗滌，真空干燥，得到駝色固態(tài)的產(chǎn)物。[M+H]+＝493.1/495.1；tR(HPLC，CC 125/4 Nucleosil 100-5 C18 AB柱；5-100％ CH3CN+0.1％CF3COOH/H2O+0.1％ CF3COOH進(jìn)行8min，流速1.5ml/min)3.65min. B){7-氨基-6-(4-羥基-苯基)-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-基}-乙腈
于100℃將4-{7-氨基-5-溴甲基-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基}-苯酚氫溴酸鹽(1.31g，2.3mmol)、KCN(650mg，10mmol)在DMA(10ml)和H2O(8ml)中的混合物攪拌5h。真空蒸發(fā)后，將殘余物用H2O處理，將沉淀物濾出，用乙醇和乙醚洗滌，真空干燥。將粗產(chǎn)物通過(guò)制備型HPLC(YMC-Pack Pro C18柱；在20min內(nèi)10-100％ CH3CN+0.1％ CF3COOH/H2O+0.1％ CF3COOH，流速20ml/min)進(jìn)行純化。將純級(jí)分用4N NaOH堿化，用乙酸乙酯萃取。將有機(jī)萃取液通過(guò)Na2SO4干燥，真空蒸發(fā)，得到預(yù)期產(chǎn)物，為褐色固體。[M+H]+＝440.2；tR(HPLC，CC125/4 Nucleosil 100-5 C18 AB柱；5-100％ CH3CN+0.1％ CF3COOH/H2O+0.1％ CF3COOH進(jìn)行8min，流速1.5ml/min)3.76min. 實(shí)施例4054-{7-氨基-5-[(2-二甲基氨基-乙基氨基)-甲基]-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基}-苯酚
于100℃(微波)將4-{7-氨基-5-溴甲基-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基}-苯酚氫溴酸鹽(78mg，0.136mmol)、2-二甲基氨基-乙胺(104μl，0.95mmol)、N-乙基-二異丙胺(62μl，0.36mmol)在二甲基乙酰胺(1.3ml)中的混合物加熱15min。將該混合物真空蒸發(fā)，將殘余物通過(guò)制備型HPLC(YMC-Pack Pro C18柱；在20min內(nèi)10-100％ CH3CN+0.1％CF3COOH/H2O+0.1％ CF3COOH，流速20ml/min)進(jìn)行純化。合并純級(jí)分，將其用固體K2CO3堿化，真空濃縮，將水層用CH2Cl2萃取2次。將有機(jī)萃取液通過(guò)Na2SO4干燥，真空蒸發(fā)，得到預(yù)期產(chǎn)物，為褐色固體。[M+H]+＝501.3；tR(HPLC，CC 125/4 Nucleosil 100-5 C18 AB柱；5-100％CH3CN+0.1％ CF3COOH/H2O+0.1％ CF3COOH進(jìn)行8min，流速1.5ml/min)2.91min. 實(shí)施例4066-(4-氨基-苯基)-3-(4-哌嗪-1-基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺
在常壓下于室溫在N-甲基吡咯烷酮中、在400mg鈀/炭的存在下將500mg 4-{4-[7-氨基-6-(4-硝基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-基]-苯基}-哌嗪-1-甲酸芐酯氫化。將該混合物過(guò)濾，真空蒸發(fā)。將粗混合物進(jìn)行快速色譜法(40g硅膠60，溶劑系統(tǒng)二氯甲烷/甲醇梯度)，得到產(chǎn)物。微黃色固體，(M+H)+＝386.4。
原料4-{4-[7-氨基-6-(4-硝基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-基]-苯基}-哌嗪-1-甲酸芐酯可以如下制得 將65g 4-[4-(5-氨基-1H-吡唑-4-基)-苯基]-哌嗪-1-甲酸芐酯和42.5g(Z)-3-二甲基氨基-2-(4-硝基-苯基)-丙烯腈加入到344ml乙醇和298ml乙酸中。將該混合物加熱回流5小時(shí)，冷卻至室溫。將混合物用30％NaOH水溶液和飽和Na2CO3水溶液處理以中和介質(zhì)和然后得到微堿性pH。將混合物過(guò)濾，用水、乙醚、乙酸乙酯洗滌，由此除去藍(lán)色雜質(zhì)。通過(guò)色譜法(12gRedisept柱，梯度二氯甲烷-乙酸乙酯)分離100mg粗產(chǎn)物。除預(yù)期的產(chǎn)物外，還形成了相應(yīng)的氨基甲酸乙酯(在下一步驟中它可以通過(guò)色譜法被分離或通過(guò)酸性水解被裂解)。預(yù)期的產(chǎn)物(M+H)+＝549.2。氨基甲酸乙酯(M+H)+＝488。
實(shí)施例407[4-(7-氨基-3-{4-[4-((S)-2-氨基-3-甲基-丁酰基)-哌嗪-1-基]-苯基}-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基)-苯基]-氨基甲酸異丁酯
在常壓下于室溫在6mg 10％鈀/炭的存在下將在四氫呋喃中的44mg[4-(7-氨基-3-{4-[4-((S)-2-芐氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基)-哌嗪-1-基]-苯基}-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基)-苯基]-氨基甲酸異丁酯氫化。將該混合物過(guò)濾，抽真空。將殘余物從叔丁醇中冷凍干燥。(M+H)+＝585.5 原料可以如下制得 a)4-(4-氰基甲基-苯基)-哌嗪-1-甲酸芐酯 將10.2g 4-溴-苯基乙腈溶解在107ml二甲氧基乙烷中，用1-芐氧羰基-哌嗪處理。加入磷酸鉀(22.7g)、(2-聯(lián)苯基)二叔丁基膦(4.6g)和乙酸鈀(II)。在氬氣氣氛下將該混合物加熱回流20h。冷卻后，將混合物過(guò)濾，將褐色濾液真空蒸發(fā)。通過(guò)色譜法(400g硅膠60，洗脫劑環(huán)己烷/乙酸乙酯梯度)分離粗產(chǎn)物。將含有產(chǎn)物的級(jí)分真空蒸發(fā)，得到褐色油狀物。(M+H)+＝336. b)4-[4-(1-氰基-2-氧代-乙基)-苯基]-哌嗪-1-甲酸芐酯 將11.7g 4-(4-氰基甲基-苯基)-哌嗪-1-甲酸芐酯溶解在73ml甲苯中。加入4.2ml甲酸乙酯和2.83g NaOMe(粉末)，于38℃將該混合物攪拌4h。真空蒸發(fā)后，將混合物用甲醇處理3次，蒸發(fā)，得到褐色固體。粗產(chǎn)物未經(jīng)純化用于下一步驟。(M+H)+＝364. c)4-[4-(5-氨基-1H-吡唑-4-基)-苯基]-哌嗪-1-甲酸芐酯 向14.8g 4-[4-(1-氰基-2-氧代-乙基)-苯基]-哌嗪-1-甲酸芐酯在86ml甲苯中的混懸液中加入7ml乙酸和4.1ml肼一水合物。將該混合物加熱回流3小時(shí)，得到深褐色反應(yīng)混合物。冷卻后，加入50ml飽和碳酸鈉水溶液和50ml水。將混合物冷卻至5℃，過(guò)濾。將固態(tài)駝色殘余物用水洗滌，于50℃真空干燥。從雙相濾液中分離出甲苯相，真空蒸發(fā)，通過(guò)快速色譜法(120g硅膠，二氯甲烷/甲醇梯度)分離產(chǎn)生黃色固體，從而得到另外的物質(zhì)。(M+H)+＝378. d)4-{4-[7-氨基-6-(4-異丁氧基羰基氨基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-基]-苯基}-哌嗪-1-甲酸芐酯 將2.51g 4-[4-(5-氨基-1H-吡唑-4-基)-苯基]-哌嗪-1-甲酸芐酯和1.91g[4-((Z)-1-氰基-2-二甲基氨基-乙烯基)-苯基]-氨基甲酸異丁酯溶解在19ml乙酸和13.9ml 1.25M HCl溶液(在乙醇中)中。于90℃將該混合物攪拌4.5小時(shí)。將混合物倒入180ml飽和碳酸鈉水溶液中，用二氯甲烷萃取3次。用硫酸鈉干燥后，將溶液真空蒸發(fā)，得到駝色固體。將粗產(chǎn)物通過(guò)快速色譜法(120g硅膠，洗脫劑環(huán)己烷/乙酸乙酯梯度)進(jìn)行純化。(M+H)+＝620. e){4-[7-氨基-3-(4-哌嗪-1-基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基]-苯基}-氨基甲酸異丁酯 在常壓下于室溫在460mg鈀/炭的存在下將2.7g 4-{4-[7-氨基-6-(4-異丁氧基羰基氨基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-基]-苯基}-哌嗪-1-甲酸芐酯在甲醇-四氫呋喃(1∶1)中氫化。將該混合物過(guò)濾，真空蒸發(fā)，得到粗產(chǎn)物，將其未經(jīng)純化用于下一步驟。(M+H)+＝486. f)[4-(7-氨基-3-{4-[4-((S)-2-芐氧基羰基氨基-3-甲基-丁?；?-哌嗪-1-基]-苯基}-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基)-苯基]-氨基甲酸異丁酯 將41mg{4-[7-氨基-3-(4-哌嗪-1-基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基]-苯基}-氨基甲酸異丁酯、27mg Cbz-L-纈氨酸、15mg羥基苯并三唑和16微升三乙胺在3ml四氫呋喃中的混合物冷卻至0℃，用20mg N-(二甲基氨基丙基)-N’-乙基-碳二亞胺處理。于室溫?cái)嚢柽^(guò)夜后，將混合物倒入20ml飽和碳酸鈉水溶液中，用乙酸乙酯萃取。將有機(jī)層干燥，真空蒸發(fā)，通過(guò)快速色譜法(4g硅膠，洗脫劑二氯甲烷/甲醇梯度)進(jìn)行純化。(M+H)+＝719.8，非晶形固體。
鄰甲基衍生物 類(lèi)似于實(shí)施例1，通過(guò)從按照以下流程制備的(Z)-3-二甲基氨基-2-(2-甲基-4-硝基-苯基)-丙烯腈開(kāi)始制得鄰甲基化的化合物(R3＝Me)
實(shí)施例
其中R和R1具有如下表X6中所示的意義。
表X6 實(shí)施例414(4-{7-氨基-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基}-3-甲基-苯基)-氨基甲酸異丁酯
將在5ml N-甲基吡咯烷酮中的80mg 6-(4-氨基-2-甲基-苯基)-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺用50.6微升甲酸氯異丁酯處理。于室溫?cái)嚢?小時(shí)后，加入乙酸乙酯，將該混合物用碳酸氫鈉水溶液萃取。將有機(jī)相通過(guò)硫酸鈉干燥，真空蒸發(fā)，得到黃色油狀物。通過(guò)色譜法(12g Redisep，洗脫劑二氯甲烷/甲醇梯度)進(jìn)行純化，得到預(yù)期的白色粉狀的產(chǎn)物。(M+H)+＝514.4 原料可以如下制得 a)(Z)-3-二甲基氨基-2-(2-甲基-4-硝基-苯基)-丙烯腈 將4.2g(2-甲基-4-硝基-苯基)-乙腈溶解在30ml二甲苯中，用6.35ml N，N-二甲基甲酰胺-二甲基縮醛處理。于120℃將該混合物加熱3.5小時(shí)，冷卻，用己烷稀釋?zhuān)^(guò)濾。將固體物質(zhì)用己烷洗滌，除去溶劑后，通過(guò)色譜法(120gRediSep，洗脫劑環(huán)己烷/二氯甲烷)進(jìn)行純化，得到黃色粉末。(M+H)+＝232.2 b)6-(2-甲基-4-硝基-苯基)-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺 于130℃將在14ml 1.25M HCl(在乙醇中)和14ml乙酸中的1.4g(Z)-3-二甲基氨基-2-(2-甲基-4-硝基-苯基)-丙烯腈和1.56g 4-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-2H-吡唑-3-基胺加熱過(guò)夜。冷卻后，加入甲醇，于室溫將該混合物攪拌20分鐘，然后過(guò)濾，得到黃色固體。產(chǎn)物未經(jīng)進(jìn)一步純化用于下一步驟。(M+H)+＝444.6 c)6-(4-氨基-2-甲基-苯基)-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺 在常壓下于室溫在400mg 10％鈀/炭的存在下將1.87g 6-(2-甲基-4-硝基-苯基)-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺在200ml甲醇/四氫呋喃(1∶1)中氫化。將該混合物過(guò)濾，用甲醇洗滌，真空干燥。黃色粉末未經(jīng)純化用于下一步驟。(M+H)+＝414.6 以類(lèi)似的方法、通過(guò)使用4-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-2H-吡唑-3-基胺制備在4-位上具有N-甲基-哌嗪部分的實(shí)施例，由此提供了各自的硝基和氨基中間體 6-(4-氨基-2-甲基-苯基)-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺，(M+H)+＝414.5 它獲自 6-(2-甲基-4-硝基-苯基)-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺，(M+H)+＝444.1 具有兩個(gè)甲基-哌嗪基團(tuán)的實(shí)施例
表X7
類(lèi)似于實(shí)施例1通過(guò)將實(shí)施例415?；频脤?shí)施例416和417。
實(shí)施例415可以如下制得 6-(4-氨基-苯基)-3-[3，5-雙-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺 將315mg 3-[3，5-雙-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-6-(4-硝基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺溶解在50ml甲醇/二甲基甲酰胺(1∶1)中。加入600mg Pd/炭后，于室溫在常壓下將該混合物氫化過(guò)夜，然后通過(guò)過(guò)濾除去催化劑。真空除去溶劑，得到褐色固態(tài)的產(chǎn)物。(M+H)+＝498.5 原料3-[3，5-雙-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-6-(4-硝基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺可以如下制得 a)(3，5-二氯-苯基)-乙腈 將在51ml二氯甲烷-水(2∶1)中的2.0g 1，3-二氯-5-氯甲基-苯用3.4g四丁基氰化銨和1.9g碘化鈉處理。于室溫將該混合物攪拌過(guò)夜，分離兩層，將有機(jī)層用二氯甲烷洗滌，干燥，真空蒸發(fā)。將粗產(chǎn)物通過(guò)快速色譜法(80g硅膠redisept柱，環(huán)己烷-乙酸乙酯梯度)進(jìn)行純化，得到黃色油狀物。1H-NMR(DMSO-d6)4.1ppm(s，芐型質(zhì)子)及其他。
b)[3，5-雙-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-乙腈 將在27ml二甲氧基乙烷中的1.0g(3，5-二氯-苯基)-乙腈用2.15g N-甲基哌嗪、4.56g磷酸鉀、0.96g(2-聯(lián)苯基)二叔丁基膦和0.24g乙酸鈀(II)處理。于84℃將該混合物攪拌18小時(shí)。將冷卻的混合物過(guò)濾，真空蒸發(fā)深褐色濾液。將粗產(chǎn)物通過(guò)快速色譜法(80g硅膠redisept柱，二氯甲烷/甲醇梯度)進(jìn)行純化，得到褐色粘性的油狀物。(M+H)+＝314.3 c)2-[3，5-雙-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-3-氧代-丙腈 將在18ml甲苯中的1.65g[3，5-雙-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-乙腈用0.64g甲酸乙酯和0.43g甲醇鈉(粉末)處理。于38℃將該混合物攪拌3小時(shí)，蒸發(fā)至干。產(chǎn)物未經(jīng)純化用于下一步驟。(M+H)+＝342.4 d)4-[3，5-雙-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-2H-吡唑-3-基胺 將在57ml甲苯中的1.96g 2-[3，5-雙-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-3-氧代-丙腈用1.88ml乙酸處理，然后用1.15g肼一水合物處理。將該混合物加熱回流3小時(shí)，得到黃色溶液。冷卻后，將褐色殘余物用100ml 1M氫氧化鈉溶液和100ml二氯甲烷處理。分離水相，將其用二氯甲烷再次萃取，將合并的有機(jī)萃取液干燥，真空蒸發(fā)。將粗混合物通過(guò)快速色譜法(120g硅膠redisept柱，含有1％濃氨水的二氯甲烷/甲醇梯度)進(jìn)行純化。得到駝色非晶形固態(tài)的產(chǎn)物。(M+H)+＝356.5 e)3-[3，5-雙-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-6-(4-硝基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺 將在2.81ml 1.25M鹽酸(在乙醇中)和2.5ml乙酸中的0.5g 4-[3，5-雙-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-2H-吡唑-3-基胺、0.34g(Z)-3-二甲基氨基-2-(4-硝基-苯基)-丙烯腈加熱回流20小時(shí)。冷卻后，將該混合物用過(guò)量1M氫氧化鈉溶液處理，萃取到二氯甲烷/甲醇(9∶1)中，將有機(jī)層干燥，真空蒸發(fā)。將粗產(chǎn)物通過(guò)快速色譜法(30g硅膠，含有1％濃氨水的二氯甲烷/甲醇梯度)進(jìn)行純化。(M+H)+＝528.5 實(shí)施例418 {4-[7-氨基-3-(3-哌嗪-1-基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基]-苯基}-氨基甲酸丁酯 a)4-(3-氰基甲基-苯基)-哌嗪-1-甲酸芐酯
在氬氣氣氛下將13.0g 3-溴-苯基乙腈、28.9g 1-芐氧羰基-哌嗪、27.6g磷酸鉀、5.8g(2-聯(lián)苯基)二叔丁基膦和1.5g乙酸鈀(II)在144ml二甲氧基乙烷中加熱回流20小時(shí)。將該混合物冷卻至室溫，過(guò)濾，將深褐色濾液真空蒸發(fā)。將粗產(chǎn)物通過(guò)快速色譜法(1000g硅膠，環(huán)己烷/乙酸乙酯)進(jìn)行純化。
(M+H)+＝336.4 b)4-[3-(1-氰基-2-氧代-乙基)-苯基]-哌嗪-1-甲酸芐酯
將在8ml甲苯中的800mg 4-(3-氰基甲基-苯基)-哌嗪-1-甲酸芐酯用288mg甲酸乙酯和193mg甲醇鈉(粉末)處理。于38℃將該混合物攪拌3小時(shí)。將稠厚的褐色混懸液用甲苯稀釋以能夠繼續(xù)攪拌。另一小時(shí)后，將混合物真空蒸發(fā)。粗產(chǎn)物未經(jīng)純化用于下一步驟。(M+H)+＝364 c)4-[3-(5-氨基-1H-吡唑-4-基)-苯基]-哌嗪-1-甲酸芐酯
將18.8g 4-[3-(1-氰基-2-氧代-乙基)-苯基]-哌嗪-1-甲酸芐酯加入到83ml甲苯和8.5ml乙酸中。加入5.18g肼一水合物后，將該混合物加熱回流3小時(shí)。將黃色反應(yīng)溶液冷卻，用飽和碳酸鈉水溶液、水和乙酸乙酯處理。分離有機(jī)層，將其用碳酸氫鈉水溶液洗滌，干燥，真空蒸發(fā)。將粗產(chǎn)物通過(guò)快速色譜法(450g硅膠，二氯甲烷/甲醇95∶5)進(jìn)行純化，得到黃色非晶形固體。(M+H)+＝378.6 d)4-{3-[7-氨基-6-(4-硝基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-基]-苯基}-哌嗪-1-甲酸芐酯
將1.0g 4-[3-(5-氨基-1H-吡唑-4-基)-苯基]-哌嗪-1-甲酸芐酯溶解在4.6ml乙酸中，然后用576mg(Z)-3-二甲基氨基-2-(4-硝基-苯基)-丙烯腈和5.3ml在乙醇中的1.25M HCl溶液處理。將該混合物加熱回流5.5小時(shí)。將反應(yīng)溶液冷卻至室溫，倒入50ml飽和碳酸鈉水溶液中。用乙酸乙酯萃取后，將有機(jī)層干燥，過(guò)濾(用乙酸乙酯洗滌殘余物)，真空蒸發(fā)。粗產(chǎn)物未經(jīng)純化用于下一步驟。(M+H)+＝551.0 e)4-{3-[7-氨基-6-(4-氨基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-基]-苯基}-哌嗪-1-甲酸芐酯
將74.3g 4-{3-[7-氨基-6-(4-硝基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-基]-苯基}-哌嗪-1-甲酸芐酯混懸在800ml四氫呋喃中，用160.2g氯化錫(II)水合物處理。將該混合物加熱回流1小時(shí)，冷卻，真空濃縮，用乙酸乙酯稀釋?zhuān)?N氫氧化鈉水溶液處理直到達(dá)到堿性pH(約為9)。將混合物劇烈攪拌，用乙酸乙酯處理。分離兩相，將有機(jī)相用水洗滌，將合并的有機(jī)相用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，真空蒸發(fā)，由此得到黃色泡沫狀物。(M+H)+＝520.4 f)4-{3-[7-氨基-6-(4-丁氧基羰基氨基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-基]-苯基}-哌嗪-1-甲酸芐酯
將在N-甲基-吡咯烷酮(14ml)中的4-{3-[7-氨基-6-(4-氨基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-基]-苯基}-哌嗪-1-甲酸芐酯(1.00g，1.93mM)冷卻至5℃，加入氯甲酸丁酯(315mg，2.31mM)。于5℃將該反應(yīng)混合物攪拌22h。溫?zé)嶂潦覝睾?，加入乙酸乙酯和飽和NaHCO3溶液，分層。將水相用乙酸乙酯萃取數(shù)次。將合并的有機(jī)層通過(guò)Na2SO4干燥，真空除去溶劑。粗產(chǎn)物未經(jīng)進(jìn)一步純化用于下一步驟。MH+＝621. g){4-[7-氨基-3-(3-哌嗪-1-基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基]-苯基}-氨基甲酸丁酯
將4-{3-[7-氨基-6-(4-丁氧基羰基氨基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-基]-苯基}-哌嗪-1-甲酸芐酯(905mg，1.46mM)溶解在DMF(233ml)中，加入鈀/碳10％(255mg，10％)，于室溫將該反應(yīng)混合物氫化23h。將反應(yīng)混合物通過(guò)硅藻土過(guò)濾，從濾液中真空除去溶劑。將殘余物通過(guò)色譜法(乙酸乙酯/乙醇/氨＝90∶9∶1)進(jìn)行純化，得到預(yù)期的無(wú)色結(jié)晶的產(chǎn)物，MH+＝487。
通過(guò)按照以上實(shí)施例的方法但使用適當(dāng)?shù)脑?，可以制得式X9化合物，
其中R具有如下表X9中所示的意義。
表X9 實(shí)施例422 (4-{7-氨基-3-[3-(4-乙基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基}-苯基)-氨基甲酸丁酯
將{4-[7-氨基-3-(3-哌嗪-1-基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基]-苯基}-氨基甲酸丁酯(100mg，0.21mM)和溴乙烷(27mg，0.25mM)溶解在DMF(2ml)中，加入3滴三乙胺。于30℃將該反應(yīng)混合物攪拌20h。加入5滴水，將反應(yīng)混合物通過(guò)制備型HPLC(含有0.1％ TFA的H2O/CH3CN，9.5∶0.5，2.5min；至含有0.1％ TFA的H2O/CH3CN，3∶7，持續(xù)45min)進(jìn)行純化，得到預(yù)期的駝色結(jié)晶的產(chǎn)物，MH+＝515。
通過(guò)按照以上實(shí)施例的方法但使用適當(dāng)?shù)脑?，可以制得式X10化合物，
其中R和R1具有如下表X10中所示的意義。
表X10 生物學(xué)/藥理學(xué) 式I化合物及其可藥用鹽當(dāng)在體外試驗(yàn)中進(jìn)行試驗(yàn)時(shí)顯示出有價(jià)值的藥理性質(zhì)，因此，它們可用作藥物。
具體而言，本發(fā)明的化合物顯示出Lck(淋巴細(xì)胞特異性蛋白酪氨酸激酶)抑制活性，例如如按照以下試驗(yàn)方法所證明的那樣。
1.生物化學(xué)Lck激酶試驗(yàn) 使用了Src家族的Lck、c-Src和Hck激酶的酶試驗(yàn)。均相激酶試驗(yàn)基于時(shí)間分辨熒光共振能量轉(zhuǎn)移(TR-FRET)技術(shù)，更具體而言，它使用了LANCE技術(shù)。使用了His-標(biāo)記的激酶野生型結(jié)構(gòu)。含有酪氨酸的生物素化肽用作底物。使用銪標(biāo)記的抗磷酸酪氨酸抗體(Eu-PT66)作為能量供體以及使用鏈霉抗生物素-別藻藍(lán)蛋白結(jié)合物(SA-APC)作為能量受體來(lái)對(duì)該肽通過(guò)激酶的磷酸化進(jìn)行定量。試驗(yàn)以384孔模式建立。
更具體而言，將受試化合物溶解在純DMSO中，得到終濃度為10mM。為了產(chǎn)生濃度依賴(lài)性響應(yīng)曲線(xiàn)，用90％ DMSO/10％ H2O、使用PlateMate2×2(MATRIX)將化合物稀釋到384孔聚丙烯板中，最高濃度為40μM。將這些稀釋物于4℃儲(chǔ)存(密封)，它們可以使用最多一周。在試驗(yàn)臨開(kāi)始前制備在稀釋緩沖液中的最終1∶5稀釋物。使用跨越3至4個(gè)對(duì)數(shù)單位的至少8種不同濃度的受試化合物進(jìn)行IC50值的測(cè)定。將5μL這些預(yù)稀釋物轉(zhuǎn)移到用于以20μL總體積進(jìn)行的激酶試驗(yàn)的384孔黑色光學(xué)板(Optiplate)中。在試驗(yàn)中這產(chǎn)生的終濃度為4.5％DMSO。將以下試劑依次加入到384孔黑色光學(xué)板(珀金埃爾默(PerkinElmer))的各孔中使用Platemate將在稀釋緩沖液(18％DMSO)中的5μL化合物置于孔中。然后在振蕩器上使用Multidrop 384 mix加入2×210μL 2×反應(yīng)混合物(如分別對(duì)Lck、c-Src和Hck所規(guī)定的那樣)。然后在振蕩器上使用多通道移液管混合器加入在酶稀釋緩沖液中的5μL酶(對(duì)于Lck、c-Src或Hck而言為80ng/mL)。于室溫孵育120min，然后在振蕩器上使用Multidrop 384 mix加入10μL終止緩沖液以終止反應(yīng)。通過(guò)使用Multidrop 384加入45μL檢測(cè)混合物進(jìn)行試驗(yàn)，于室溫在暗處孵育至少60min。使用EnVision 2102 Multilabel讀數(shù)器或者作為后備使用華萊士(Wallac)公司Victor2 1420 Multilabel計(jì)數(shù)器(激發(fā)波長(zhǎng)320nm，發(fā)射波長(zhǎng)615nm和665nm)對(duì)板進(jìn)行測(cè)定。在TR-FRET試驗(yàn)中產(chǎn)生的原始數(shù)據(jù)為i)對(duì)應(yīng)于FRET信號(hào)的在665nm(APC)處的熒光強(qiáng)度，和ii)對(duì)應(yīng)于Eu3+信號(hào)的在615nm處的熒光強(qiáng)度。如果發(fā)生Eu3+熒光猝滅，則將觀(guān)察到615nm(Eu3+)信號(hào)和665nm(APC)信號(hào)的減少。如果需要的話(huà)，可以通過(guò)以下計(jì)算QCV(猝滅校正值)來(lái)校正該猝滅QCV＝RFU(665nm)×1000/[RFU(665nm)+RFU(615nm)]。使用Excel fit

軟件或Graphpad Prism

分析數(shù)據(jù)。
對(duì)于所有三種激酶，已經(jīng)測(cè)定了ATP(三磷腺苷)的Km值對(duì)于Lck為4.6±2.2μM，對(duì)于c-Src為2.3±0.9μM，對(duì)于Hck為0.9±0.2μM。證明了反應(yīng)對(duì)于相關(guān)時(shí)間和就相關(guān)酶濃度而言的線(xiàn)性。由具有至少8種不同化合物濃度的完全濃度-響應(yīng)曲線(xiàn)測(cè)定產(chǎn)生50％抑制激酶反應(yīng)的受試化合物濃度(IC50值)。在該試驗(yàn)中，式I化合物具有的IC50值在0.01nM至1μM的范圍內(nèi)。在Lck試驗(yàn)中，實(shí)施例10、28、65、77、126、127和172的化合物顯示出的IC50值分別為10、16、25、25、15、18和34nM。
2.細(xì)胞Lck試驗(yàn) 在Jurkat E6-1 T細(xì)胞中評(píng)價(jià)了受試化合物對(duì)T-細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)蛋白ZAP70的Lck依賴(lài)性磷酸化的作用。使用H2O2來(lái)刺激Jurkat T細(xì)胞中信號(hào)傳導(dǎo)蛋白的磷酸化。為了測(cè)定H2O2刺激的Lck依賴(lài)的程度，在Jurkat E6-1和不表達(dá)功能性L(fǎng)ck激酶的突變體J.CAM1.6中評(píng)價(jià)了H2O2對(duì)ZAP70和LAT磷酸化的作用。在用0.035％ H2O2激活后，J.CAM1.6細(xì)胞沒(méi)有顯示出可檢測(cè)到的ZAP70 Y493的磷酸化，也沒(méi)有顯示出ZAP70底物L(fēng)AT，如通過(guò)蛋白質(zhì)印跡所評(píng)價(jià)的那樣。用0.035％ H2O2刺激Jurkat E6-1 T細(xì)胞引起ZAP70 Y493的顯著細(xì)胞內(nèi)磷酸化，這可通過(guò)流式細(xì)胞儀、使用抗ZAP70pY493抗體來(lái)定量。
更具體而言，將Jurkat E6-1在含有10％ FBS以及10ml/l NAA-、青霉素/鏈霉素和Hepes溶液的RPMI 1640中培養(yǎng)。當(dāng)細(xì)胞數(shù)目達(dá)到約1×106個(gè)細(xì)胞/ml(通過(guò)CASI測(cè)定細(xì)胞計(jì)數(shù))時(shí)，將200ml細(xì)胞通過(guò)離心(1300rpm，5min)沉淀并重新混懸在含有0.2％ FBS和0.035％ Hepes的200ml RPMI 1640(37℃)中，孵育過(guò)夜(16-19hrs)。將細(xì)胞離心(1300rpm，5min)，將沉淀物重新混懸在RPMI 1640/0.2％ FBS(RT)中以調(diào)至4×106個(gè)細(xì)胞/ml(CASI計(jì)數(shù))。將100μl該細(xì)胞懸液/孔加入到96深孔PP板中。將化合物溶解在DMSO中或以10mM DMSO溶液得到。在聚丙烯微量滴定板中制備在DMSO中的系列預(yù)稀釋物(1∶4)。將5μl化合物DMSO溶液或作為溶劑對(duì)照的DMSO加入到含有10％ FBS和10mM Hepes的1000μl RPMI 1640中。選擇10％ FBS以加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)化合物的可能的蛋白結(jié)合。將25μl化合物/RPMI 1640溶液的等分試樣加入到含有細(xì)胞的各孔中。在濕化的培養(yǎng)箱中于37℃將細(xì)胞與化合物孵育1h。使用7種不同的濃度來(lái)測(cè)定IC50值。將來(lái)自30％儲(chǔ)備液的H2O2(210μl)加入到含有0.2％ FBS和10mM Hepes的30ml RPMI 1640中。在激活細(xì)胞前簡(jiǎn)單制備該激活溶液。每孔加入25μl該溶液(終濃度為0.035％(11.4mM))以激活Jurkat細(xì)胞。將板立即渦旋并在37℃水浴中孵育5min。加入溫?zé)岬?0％ w/v低聚甲醛(PF，37℃，37μl/孔)以終止細(xì)胞激活(PF的終濃度為2％)。于37℃將細(xì)胞固定10min，離心(1800rpm，5min)。通過(guò)抽吸移去上層液。將板在冰上冷卻1-2min，然后使用1ml/孔冰冷的90％甲醇(用蒸餾水稀釋)將細(xì)胞進(jìn)行透化處理。將樣品于-20℃儲(chǔ)存16小時(shí)。第二天，每孔加入500μl PBS/2％FBS。然后將板離心(1800rpm，5min)。將樣品用1.5mlPBS/1％ FBS洗滌2×以使細(xì)胞重新水合。然后于室溫將經(jīng)透化處理的細(xì)胞用在50μl PBS/2％ FBS中的0.2μl兔抗磷酸ZAP70 Y493特異性抗體染色40min，然后用1500μl PBS/1％FBS進(jìn)行一個(gè)洗滌步驟(1900rpm，5min)。每個(gè)樣品使用1μl二級(jí)抗兔IgG FITC(BD)抗體在50μl PBS/2％FBS中檢測(cè)所結(jié)合的抗ZAP70 pY493抗體。于室溫將板孵育30-35min，然后用1.6ml PBS2％ FBS進(jìn)行洗滌步驟(1800rpm，5min)。將細(xì)胞沉淀物重新混懸在150μlPBS/1％ FBS中，轉(zhuǎn)移到350μl 96孔板中以進(jìn)行流式細(xì)胞檢測(cè)分析。使用裝配有自動(dòng)采樣(HTS)裝置的FACS Calibur分析樣品。通常，每個(gè)樣品測(cè)定10000個(gè)門(mén)控Jurkat細(xì)胞(gated Jurkat cells)。獲得光散射信號(hào)(FSC/SSC)以及FITC熒光。
由具有涵蓋3至4個(gè)對(duì)數(shù)單位的至少7種不同化合物濃度的完全濃度-響應(yīng)曲線(xiàn)測(cè)得產(chǎn)生50％抑制細(xì)胞內(nèi)Lck激酶反應(yīng)的受試化合物濃度(IC50值)。在該試驗(yàn)中，本發(fā)明的化合物具有的IC50值在0.1nM至1μM的范圍內(nèi)。實(shí)施例11、19和173的化合物顯示出的IC50值分別為8、59和27nM。
2.同種混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR) 本發(fā)明的化合物顯示出T細(xì)胞抑制活性。更具體而言，本發(fā)明的化合物阻止T細(xì)胞在例如水性溶液中的激活和/或增殖，例如如按照以下試驗(yàn)方法所證明的那樣。雙向MLR按照標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行(J.Immunol.Methods，1973，2，279和Meo T.等人，Immunological Methods，紐約，學(xué)術(shù)出版社，1979，227-39)。簡(jiǎn)言之，將來(lái)自CBA和BALB/c小鼠的脾細(xì)胞(在平底組織培養(yǎng)微量滴定板中每孔具有來(lái)自各品系的1.6×105個(gè)細(xì)胞，總共3.2×105個(gè))在RPMI培養(yǎng)基中培養(yǎng)，所述培養(yǎng)基含有10％FCS、100U/ml青霉素、100μg/ml鏈霉素(吉博考(Gibco)BRL，巴塞爾，瑞士)、50μM 2-巰基-乙醇(福魯卡公司(Fluka)，Buchs，瑞士)和系列稀釋的化合物。每種受試化合物進(jìn)行7步三倍稀釋步驟，一式兩份。孵育4天后，加入1μCi 3H-胸苷。另外進(jìn)行5小時(shí)孵育期后收集細(xì)胞，按照標(biāo)準(zhǔn)方法測(cè)定所摻入的3H-胸苷。MLR的背景值(低對(duì)照)是單獨(dú)的BALB/c細(xì)胞的增殖。從所有數(shù)值中減去低對(duì)照。采取沒(méi)有任何樣品的高對(duì)照作為100％增殖。計(jì)算樣品的抑制百分?jǐn)?shù)，測(cè)定50％抑制所需的濃度(IC50值)。在該試驗(yàn)中，本發(fā)明的化合物具有的IC50值在0.01nM至1μM的范圍內(nèi)。實(shí)施例30和44的化合物顯示出的IC50值分別為0.3和0.19μM。
3.體內(nèi)模型小鼠SEB/IL-2 將受試化合物施用于BALB/c小鼠，然后、例如1h后，每只小鼠靜脈內(nèi)施用3μg SEB以引起血液IL-2水平升高。施用SEB后2小時(shí)，對(duì)小鼠取血，使用標(biāo)準(zhǔn)方法測(cè)定血清中IL-2的水平。在對(duì)照條件(僅載體)下所測(cè)定的IL-2濃度主要在2000至8000pg/ml的范圍內(nèi)。在該試驗(yàn)中，當(dāng)口服施用、例如以50至120mg/kg的劑量口服施用時(shí)，式I化合物可抑制IL-2分泌；例如，實(shí)施例10的化合物以例如100mg/kg口服時(shí)可抑制IL-2的分泌達(dá)59％。
因此，式I化合物可用于預(yù)防或治療其中Lck起作用的紊亂或疾病，例如由免疫細(xì)胞、例如包括T淋巴細(xì)胞、NK細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的疾病或紊亂，例如器官或組織同種異體或異種移植物的急性或慢性排斥、動(dòng)脈粥樣硬化、由血管損傷如血管成形術(shù)引起的血管閉塞、再狹窄、纖維變性(尤其是肺纖維變性，還有其它類(lèi)型的纖維變性如腎纖維變性)、血管生成、高血壓、心力衰竭、慢性阻塞性肺病、CNS疾病如阿爾茨海默病或肌萎縮性側(cè)索硬化癥、癌癥、感染性疾病如AIDS、敗血癥性休克或成人呼吸窘迫綜合征、缺血/再灌注損傷如心肌梗塞、中風(fēng)、腸缺血、腎衰竭或出血性休克或外傷性休克。
式I化合物還可用于治療和/或預(yù)防急性或慢性炎性疾病或紊亂或自身免疫疾病如結(jié)節(jié)病、纖維化肺、特發(fā)性間質(zhì)性肺炎、阻塞性氣道疾病、包括諸如以下的疾病哮喘、內(nèi)源性哮喘、外源性哮喘、粉塵性哮喘、特別是慢性或綿延難治的哮喘(例如遲發(fā)型哮喘和氣道高反應(yīng)性)、支氣管炎、包括支氣管哮喘、小兒哮喘、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、全身性紅斑狼瘡、腎病綜合征狼瘡、橋本甲狀腺炎、多發(fā)性硬化癥、重癥肌無(wú)力、I型糖尿病及與其有關(guān)的并發(fā)癥、II型成年發(fā)作型糖尿病、眼色素層炎、腎病綜合征、類(lèi)固醇依賴(lài)性和類(lèi)固醇抵抗性腎病、掌跖膿皰病、變應(yīng)性腦脊髓炎、腎小球腎炎、銀屑病、銀屑病性關(guān)節(jié)炎、異位性濕疹(異位性皮炎)、過(guò)敏性接觸性皮炎、刺激性接觸性皮炎和其它濕疹性皮炎、脂溢性皮炎、扁平苔癬、天皰瘡、大皰性類(lèi)天皰瘡、大皰性表皮松解、蕁麻疹、血管性水腫、血管炎、紅斑、皮膚嗜酸粒細(xì)胞增多、痤瘡、斑禿、嗜酸性筋膜炎(eosinophilic fasciitis)、動(dòng)脈粥樣硬化、結(jié)膜炎、角結(jié)膜炎、角膜炎、春季結(jié)膜炎、與貝赫切特病有關(guān)的眼色素層炎、皰疹性角膜炎、圓錐形角膜、舍格倫綜合征、角膜上皮營(yíng)養(yǎng)不良、角膜白斑、眼天皰瘡、莫倫潰瘍、鞏膜炎、格雷夫斯眼病、嚴(yán)重的眼內(nèi)炎癥、粘膜或血管炎癥如白細(xì)胞三烯B4介導(dǎo)的疾病、胃潰瘍、由缺血性疾病和血栓形成引起的血管損傷、缺血性腸病、炎性腸病(例如節(jié)段性回腸炎或潰瘍性結(jié)腸炎)、壞死性小腸結(jié)腸炎、腎臟疾病、包括間質(zhì)性腎炎、古德帕斯丘綜合征、溶血性尿毒癥綜合征和糖尿病性腎病，選自如下的神經(jīng)病多發(fā)性肌炎、吉-巴綜合征、梅尼埃病和神經(jīng)根病，膠原病，包括硬皮病、韋格納肉芽腫和舍格倫綜合征，慢性自身免疫性肝病，包括自身免疫性肝炎、原發(fā)性膽汁性肝硬化和硬化性膽管炎)、部分肝切除、急性肝壞死(例如由毒素、病毒性肝炎、休克或缺氧引起的壞死)、肝硬變、暴發(fā)型肝炎、膿皰性銀屑病、貝赫切特病、慢性活動(dòng)性肝炎、埃文斯綜合征、花粉癥、特發(fā)性甲狀旁腺功能減退、艾迪生病、自身免疫性萎縮性胃炎、類(lèi)狼瘡性肝炎、腎小管間質(zhì)性腎炎、膜性腎炎或風(fēng)濕熱。式I化合物可用于治療腫瘤，例如其中Src激酶、特別是Lck在細(xì)胞增殖/分化中起作用的腫瘤，例如T-原始淋巴細(xì)胞白血病、乳腺癌、生殖泌尿系癌癥、肺癌、胃腸癌、表皮樣癌、黑素瘤、卵巢癌、胰癌、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、頭和/或頸部癌癥或膀胱癌，或者在更廣泛的意義上還有腎癌、腦癌或胃癌；特別是(i)乳房腫瘤；表皮樣腫瘤，例如表皮樣頭和/或頸部腫瘤或口腔腫瘤；肺腫瘤，例如小細(xì)胞或非小細(xì)胞肺腫瘤；胃腸腫瘤，例如結(jié)腸直腸腫瘤；或生殖泌尿系腫瘤，例如前列腺腫瘤(尤其是激素抵抗性前列腺腫瘤)；或者(ii)對(duì)用其它化學(xué)療法治療有抵抗的增殖性疾?。换蛘?iii)由于多藥耐藥而對(duì)用其它化學(xué)療法治療有抵抗的腫瘤。它們還可用于治療血液和淋巴系統(tǒng)腫瘤(例如霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、AIDS相關(guān)性淋巴瘤、惡性免疫增殖性疾病、多發(fā)性骨髓瘤和惡性漿細(xì)胞瘤、淋巴性白血病、急性或慢性髓性白血病、急性或慢性淋巴細(xì)胞白血病、單核細(xì)胞性白血病、其它指定細(xì)胞類(lèi)型的白血病、未指定細(xì)胞類(lèi)型的白血病、淋巴、造血組織和相關(guān)組織的其它和未指定的惡性腫瘤、例如彌漫性大細(xì)胞淋巴瘤、T細(xì)胞淋巴瘤或皮膚T細(xì)胞淋巴瘤)。骨髓癌包括例如急性或慢性髓性白血病。
當(dāng)提到腫瘤、腫瘤疾病、癌或癌癥時(shí)，供選地或另外地還表示原器官或組織和/或任何其它位置中的轉(zhuǎn)移，無(wú)論腫瘤和/或轉(zhuǎn)移的位置在何處。
對(duì)于以上用途，所需劑量當(dāng)然將根據(jù)施用方式、所治療的具體病癥和預(yù)期作用而改變。通常，以約0.2至2.5mg/kg體重的日劑量全身施用被指示可以獲得令人滿(mǎn)意的結(jié)果。在較大型哺乳動(dòng)物、例如人中的指示日劑量為約2mg至約2g，方便地例如以每日至多4次的分開(kāi)劑量或以延遲形式施用。適于口服施用的單位劑量形式包含約0.5mg至1g活性成分。
本發(fā)明的化合物可以通過(guò)任意常規(guī)途徑來(lái)施用，特別是經(jīng)胃腸道外、例如以可注射溶液或混懸液的形式施用，經(jīng)腸內(nèi)、例如口服、如以片劑或膠囊劑的形式施用，經(jīng)局部、例如以洗劑、凝膠劑、軟膏劑或乳膏劑的形式或者以經(jīng)鼻或栓劑形式施用。局部施用是例如施用于皮膚。局部施用的其它形式是施用于眼。包含本發(fā)明的化合物以及至少一種可藥用載體或稀釋劑的藥物組合物可以以常規(guī)方式、通過(guò)與可藥用載體或稀釋劑混合來(lái)制備。
式I化合物可以以游離形式或以可藥用鹽形式、例如上文所示的那些鹽形式施用。這類(lèi)鹽可以以常規(guī)方式制備，并且顯示出與游離化合物相同級(jí)別的活性。
根據(jù)上文，本發(fā)明還提供了 (1)式I化合物或其可藥用鹽，用作藥物； (2)式I化合物或其可藥用鹽，用作Lck抑制劑，例如用于上文提出的特定適應(yīng)癥的任一種； (3)藥物組合物，例如用于上文提出的適應(yīng)癥的任一種，包含式I化合物或其可藥用鹽以及用于此的一種或多種可藥用稀釋劑或載體； (4)在需要其的受治療者中治療上文提出的特定適應(yīng)癥的任一種的方法，該方法包括給該受治療者施用有效量的式I化合物或其可藥用鹽； (5)式I化合物或其可藥用鹽在制備用于治療或預(yù)防其中Lck激活起作用或有牽連的疾病或病癥的藥物中的用途；例如如上討論的那樣。
式I化合物可以作為單獨(dú)的活性成分施用，或者例如作為其它藥物的佐劑與其它藥物聯(lián)合施用、例如在免疫抑制或免疫調(diào)節(jié)方案中，或者與其它抗炎劑聯(lián)合施用、例如用于治療或預(yù)防同種異體或異種移植物急性或慢性排斥或者炎性或自身免疫性紊亂，與化學(xué)治療劑或抗感染劑、例如抗病毒劑如抗逆轉(zhuǎn)錄病毒劑或抗生素聯(lián)合施用。例如，式I化合物可以與以下藥物組合使用鈣神經(jīng)素抑制劑，例如環(huán)孢素A、ISA 247或FK 506；mTOR抑制劑，例如雷帕霉素、40-O-(2-羥基乙基)-雷帕霉素、CCI779、ABT578、biolimus-7、biolimus-9、TAFA-93、AP23573、AP23464或AP23841；具有免疫抑制性質(zhì)的子囊霉素，例如ABT-281、ASM981等；皮質(zhì)類(lèi)固醇；組織蛋白酶S抑制劑；環(huán)磷酰胺；硫唑嘌呤；甲氨蝶呤；來(lái)氟米特；咪唑立賓；麥考酚酸；麥考酚酸嗎乙酯；脫氧精胍菌素或其免疫抑制同系物、類(lèi)似物或衍生物；PKC抑制劑，例如如在WO 02/38561或WO 03/82859中公開(kāi)的那些，例如實(shí)施例56或70的化合物；JAK3激酶抑制劑，例如N-芐基-3，4-二羥基-亞芐基-氰基乙酰胺α-氰基-(3，4-二羥基)-]N-芐基肉桂酰胺(Tyrphostin AG 490)、靈菌紅素25-C(PNU156804)、[4-(4′-羥基苯基)-氨基-6，7-二甲氧基喹唑啉](WHI-P131)、[4-(3′-溴-4′-羥基-苯基)-氨基-6，7-二甲氧基喹唑啉](WHI-P154)、[4-(3′，5′-二溴-4′-羥基苯基)-氨基-6，7-二甲氧基喹唑啉]WHI-P97、KRX-211，3-{(3R，4R)-4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基}-3-氧代-丙腈，為游離形式或可藥用鹽形式，例如單枸櫞酸鹽(還稱(chēng)為CP-690，550)，或如在WO 04/052359或WO 05/066156中公開(kāi)的化合物；S1P受體激動(dòng)劑或調(diào)節(jié)劑，例如任選被磷酸化的FTY720或其類(lèi)似物，如任選被磷酸化的2-氨基-2-[4-(3-芐基氧基苯硫基)-2-氯苯基]乙基-1，3-丙二醇或1-{4-[1-(4-環(huán)己基-3-三氟甲基-芐基氧基亞氨基)-乙基]-2-乙基-芐基}-氮雜環(huán)丁烷-3-甲酸或其可藥用鹽；白細(xì)胞受體的單克隆抗體，例如MHC、CD2、CD3、CD4、CD7、CD8、CD11a/CD18、CD25、CD27、CD28、CD40、CD45、CD58、CD80、CD86、CD137、ICOS、CD150(SLAM)、OX40、4-1BB或其配體、例如CD154或其拮抗劑；其它免疫調(diào)節(jié)化合物，例如具有至少一部分CTLA4或其突變體的胞外域的重組結(jié)合分子，例如與非-CTLA4蛋白序列結(jié)合的CTLA4或其突變體的至少細(xì)胞外部分，例如CTLA4Ig(例如所指定的ATCC 68629)或其突變體，例如LEA29Y；粘著分子抑制劑，例如LFA-1拮抗劑、ICAM-1或-3拮抗劑、VCAM-4拮抗劑或VLA-4拮抗劑，如那他珠單抗

或者抗趨化因子抗體或抗趨化因子受體抗體或低分子量趨化因子受體拮抗劑，例如抗MCP-1抗體。
式I化合物還可以與其它抗增殖劑組合使用。這類(lèi)抗增殖劑包括但不限于 (i)芳香酶抑制劑，例如類(lèi)固醇、尤其是依西美坦和福美坦以及特別是非類(lèi)固醇、尤其是氨魯米特、伏氯唑、法倔唑、阿那曲唑和特別尤其是來(lái)曲唑； (ii)抗雌激素劑，例如他莫昔芬、氟維司群、雷洛昔芬和鹽酸雷洛昔芬； (iii)拓?fù)洚悩?gòu)酶I抑制劑，例如托泊替康、伊立替康、9-硝基喜樹(shù)堿和大分子喜樹(shù)堿結(jié)合物PNU-166148(WO99/17804中的化合物A1)； (iv)拓?fù)洚悩?gòu)酶II抑制劑，例如蒽環(huán)類(lèi)的多柔比星(包括脂質(zhì)體制劑，例如CAELYXTM)、表柔比星、伊達(dá)比星和奈莫柔比星(nemorubicin)，蒽醌類(lèi)的米托蒽醌和洛索蒽醌，以及鬼臼毒素類(lèi)(podophillotoxines)依托泊苷和替尼泊苷； (v)微管活性劑，例如紫杉烷類(lèi)的紫杉醇和多西他賽，長(zhǎng)春花生物堿類(lèi)如長(zhǎng)春花堿、尤其是硫酸長(zhǎng)春花堿、長(zhǎng)春花新堿、尤其是硫酸長(zhǎng)春花新堿和長(zhǎng)春瑞濱、discodermolide和埃坡霉素類(lèi)、例如埃坡霉素B和D； (vi)烷化劑，例如環(huán)磷酰胺、異環(huán)磷酰胺和美法侖； (vii)組蛋白脫乙酰酶抑制劑； (viii)法尼基轉(zhuǎn)移酶抑制劑； (ix)COX-2抑制劑，例如塞來(lái)考昔

羅非考昔

和魯米考昔(lumiracoxib)(COX189)； (x)MMP抑制劑； (xi)mTOR抑制劑； (xii)抗腫瘤抗代謝物，例如5-氟尿嘧啶、替加氟(tegafur)、卡培他濱、克拉屈濱、阿糖胞苷、磷酸氟達(dá)拉濱、氟尿苷、吉西他濱、6-巰基嘌呤、羥基脲、甲氨蝶呤、依達(dá)曲沙和這類(lèi)化合物的鹽，以及還有ZD 1694(RALTITREXEDTM)、LY231514(ALIMTATM)、LY264618(LOMOTREXOLTM)和OGT719； (xiii)鉑化合物，例如卡鉑、順鉑和奧沙利鉑； (xiv)降低蛋白激酶活性的化合物和另外的抗血管生成化合物，例如(i)降低血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)(b)、表皮生長(zhǎng)因子(EGF)、c-Src、蛋白激酶C、血小板衍生生長(zhǎng)因子(PDGF)、Bcr-Abl酪氨酸激酶、c-kit、Flt-3和胰島素樣生長(zhǎng)因子I受體(IGF-IR)及細(xì)胞周期蛋白依賴(lài)性激酶(CDK)的活性的化合物；(ii)伊馬替尼、米哚妥林、IressaTM(ZD1839)、CGP 75166、維他拉賓(vatalanib)、ZD6474、GW2016、CHIR-200131、CEP-7055/CEP-5214、CP-547632和KRN-633；(iii)沙利度胺(THALOMID)、塞來(lái)考昔(Celebrex)、SU5416和ZD6126； (xv)戈那瑞林激動(dòng)劑，例如阿巴瑞克、戈舍瑞林和醋酸戈舍瑞林； (xvi)抗雄激素劑，例如比卡魯胺(CASODEXTM)； (xvii)bengamides(比格麥德)； (xviii)二膦酸類(lèi)，例如依替膦酸、氯膦酸、替魯膦酸、帕米膦酸、阿侖膦酸、伊班膦酸、利塞膦酸和唑來(lái)膦酸； (xix)抗增殖抗體，例如曲妥單抗(HerceptinTM)、曲妥單抗-DM1、埃羅替尼(erlotinib)(TarcevaTM)、貝伐單抗(AvastinTM)、利妥昔單抗

PRO64553(抗-CD40)和2C4抗體； (xx)替莫唑胺
通過(guò)代碼、通用名或商品名確定的活性劑的結(jié)構(gòu)可以從標(biāo)準(zhǔn)匯編“默克索引”的現(xiàn)行版本或從數(shù)據(jù)庫(kù)、例如Patents International(例如IMS WorldPublications)中獲得。
根據(jù)上文，本發(fā)明在另外的方面提供了 (6)如上定義的方法，該方法包括共同施用、例如同時(shí)或依次施用治療有效量的a)式I化合物或其可藥用鹽和b)第二種藥物物質(zhì)，所述的第二種藥物物質(zhì)例如用于上文提出的特定適應(yīng)癥中的任一種。
(7)組合產(chǎn)品，包含治療有效量的Lck抑制劑、例如式I化合物或其可藥用鹽和第二種藥物物質(zhì)，所述的第二種藥物物質(zhì)例如是如上所公開(kāi)的那些。
當(dāng)Lck抑制劑如式I化合物與其它免疫抑制劑/免疫調(diào)節(jié)劑、抗炎劑或抗腫瘤劑、例如如上所公開(kāi)的那些聯(lián)合施用時(shí)，共同施用的藥物或物質(zhì)的劑量當(dāng)然將根據(jù)所采用的共用藥物或物質(zhì)的類(lèi)型或者所使用的具體藥物或物質(zhì)或者所治療的病癥等而改變。
權(quán)利要求
1.式I化合物或其鹽
其中
R1和R2各自獨(dú)立地是H、OH、NH2、NO2、C1-4烷基、C1-4烷氧基、芳基-C1-4烷氧基、NR11SO2R12、NR13COR14、NR15COOR16或NR17CONR18R19；條件是R1和R2中至少一個(gè)不是H；
R3是H、鹵素、C1-4烷基或C1-4烷氧基；
R4是H、任選被取代的C1-4烷基或任選被NH2、NH(C1-4烷基)或N(C1-4烷基)2取代的C1-4烷氧基；
R5a、R5b和R6各自獨(dú)立地是H；OH；ORc，其中Rc是C1-4烷基；或式(a)殘基，
條件是R5a、R5b和R6中至少一個(gè)不是H；
R11是H或任選被取代的C1-4烷基；
R12是C1-8烷基；C3-8環(huán)烷基；任選被取代的芳基或芳基-C1-4烷基；雜環(huán)基；任選被取代的雜芳基或雜芳基-C1-4烷基；
R13是H或任選被取代的C1-4烷基；
R14是任選被取代的C1-8烷基；任選被取代的C3-8環(huán)烷基；任選被取代的芳基或芳基-C1-4烷基；或者任選被取代的雜芳基或雜芳基-C1-4烷基；
R15是H或C1-4烷基；
R16是任選被取代的C1-8烷基；C3-6鏈烯基；C3-6炔基；任選被取代的C3-8環(huán)烷基；任選被取代的芳基或芳基-C1-4烷基；或者任選被取代的雜芳基-C1-4烷基；
R17和R18各自獨(dú)立地是H或C1-4烷基；
R19是任選被鹵素或氰基取代的C1-8烷基；C3-8環(huán)烷基；芳基或芳基-C1-4烷基，其各自任選被鹵素、鹵代-C1-4烷基、鹵代-C1-4烷氧基和/或雜環(huán)基所環(huán)取代；或者任選被取代的雜芳基或雜環(huán)基；
或者R18和R19與它們結(jié)合的氮原子一起形成任選被取代的雜環(huán)基殘基；
n是0或1；
X是CR20R21，其中R20和R21各自獨(dú)立地是H或C1-4烷基；O；或N-R22，其中R22是H，任選被取代的C1-4烷基，任選被取代的芳基-C1-4烷基，任選被取代的雜芳基-C1-4烷基，任選被取代的雜環(huán)基，SO2-C1-4烷基，CO-R23-，其中R23是任選被鹵素、雜環(huán)基、雜芳基、氨基和/或COOH取代的C1-4烷基或者R23是任選被取代的芳基、雜芳基或雜環(huán)基，或者CO-CHR24-NR25R26，其中R24是H、任選被OH、NH2、NH(C1-4烷基)、N(C1-4烷基)2、COOH、氨甲?；?、CONH(C1-4烷基)、CON(C1-4烷基)2或任選被取代的芳基或雜芳基所取代的C1-8烷基，R25是H或C1-4烷基，且R26是H、C1-4烷基、C1-4烷氧基-羰基或芳基-C1-4烷氧基羰基，其中芳基可以任選被取代，
條件是
i.當(dāng)R5a、R5b或R6中任一個(gè)是其中X是NCH3且n是0的式(a)殘基時(shí)，則R2不是NH-SO2-CH3或NH-SO2-4-氟-苯基，或者R1不是NH-SO2-2，3-二氯-苯基，或者R3或R4不是H；
ii.當(dāng)R5a、R5b或R6中任一個(gè)是其中X是NCH3且n是0的式(a)殘基時(shí)，則R2不是NH-CO-CH3，或者R3或R4不是H；
iii.當(dāng)R5a、R5b或R6中任一個(gè)是其中X是NH或NCH3且n是0的式(a)殘基時(shí)，則R2不是NH-COOC1-2烷基，或者R3或R4不是H；
iv.當(dāng)R5a、R5b或R6中任一個(gè)是其中X是NH或NCH3且n是0的式(a)殘基時(shí)，則R1不是-NH-CO-NH-(3-CF3-4-嗎啉代基-苯基)，或者R2不是NH-CO-NH-(3-CF3-苯基)，或者R3或R4不是H；
v.當(dāng)R1和R2中之一是OH且另一個(gè)是H、R4是H并且R5a、R5b或R6中只有一個(gè)是式(a)殘基且其余各自是H時(shí)，則式(a)殘基不是4-甲基-哌嗪基；
vi.當(dāng)R1和R2中之一是OH且另一個(gè)是H并且R5a、R5b或R6中只有一個(gè)是4-甲基-哌嗪基且其余各自是H時(shí)，則R4是任選被取代的C1-4烷基；和
vii.當(dāng)R5a、R5b或R6中任一個(gè)是其中X是NH或NCH3且n是0的式(a)殘基且R1是H時(shí)，則R2不是NH2，或者R3或R4不是H。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中R5a、R5b和R6各自獨(dú)立地是H、OH或式(a)殘基，條件是R5a、R5b和R6中至少一個(gè)不是H，其中所述的式(a)殘基如權(quán)利要求1中所定義。
3.權(quán)利要求1的化合物，其中R5a、R5b和R6各自獨(dú)立地是H或式(a)殘基，其中所述的式(a)殘基如權(quán)利要求1中所定義，條件是R5a、R5b和R6中至少一個(gè)不是H。
4.權(quán)利要求1的化合物，其中R1是NR11SO2R12、NR13COR14、NR15COOR16或NR17CONR18R19，其中變量R11至R19如權(quán)利要求1中所定義。
5.權(quán)利要求1的化合物，其中R1是NR11SO2R12、NR13COR14、NR15COOR16或NR17CONR18R19，其中變量R11至R19具有權(quán)利要求1中所提供的含義，并且其中R5a、R5b和R6各自獨(dú)立地是H或式(a)殘基，其中所述的式(a)殘基如權(quán)利要求1中所定義，條件是R5a、R5b和R6中至少一個(gè)不是H。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)的化合物，其中R2是H、OH、C1-4烷基或C1-4烷氧基；更優(yōu)選是H、OH或C1-4烷氧基。
7.制備根據(jù)權(quán)利要求1的式I化合物的方法，該方法包括
a)使式II化合物與式III化合物反應(yīng)，
其中R5a、R5b和R6如上所定義，
其中R1至R4如上所定義且Rv是OH或取代的氨基；或者
b)將式I化合物轉(zhuǎn)化為另一種式I化合物；
和以游離或鹽形式回收所得的式I化合物，以及需要時(shí)將游離形式的所得式I化合物轉(zhuǎn)化為所需的鹽形式，或者反之亦然。
8.用作藥物的根據(jù)權(quán)利要求1的式I化合物或其可藥用鹽。
9.藥物組合物，包含根據(jù)權(quán)利要求1的式I化合物或其可藥用鹽以及用于此的一種或多種可藥用稀釋劑或載體。
10.根據(jù)權(quán)利要求1的式I化合物或其可藥用鹽，用于制備治療或預(yù)防其中Lck激活起作用或有牽連的疾病或病癥的藥物。
11.組合產(chǎn)品，包含治療有效量的根據(jù)權(quán)利要求1的式I化合物或其可藥用鹽和第二種藥物物質(zhì)。
12.基本上如上文所定義或描述的式I化合物、其制備、其作為藥物的用途和含有其的藥物組合物。
全文摘要
公開(kāi)了具有令人感興趣的藥學(xué)性質(zhì)的吡唑并嘧啶衍生物。
文檔編號(hào)A61P25/00GK101516888SQ200780036091
公開(kāi)日2009年8月26日 申請(qǐng)日期2007年9月26日 優(yōu)先權(quán)日2006年9月28日
發(fā)明者P·比爾邁耶, W·布賴(lài)滕施泰因, P·菲雷, B·皮拉德, A·馮馬特, T·佐勒 申請(qǐng)人:諾瓦提斯公司