專利名稱：在聯(lián)合治療中使用免疫調(diào)節(jié)化合物的方法和組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明提供了包含一種或多種免疫調(diào)節(jié)化合物和丙戊酸、羥基脲或 曲古抑菌素A的組合物，該組合物在用于骨髓重建和骨髓移植的CD34+ 造血干細(xì)胞4本外和體內(nèi)擴(kuò)增中使用以增加胎兒血紅蛋白表達(dá)的方法，和 治療、預(yù)防和/或控制癌癥、腫瘤和血液系統(tǒng)疾病和病癥的方法。
2.
背景技術(shù)：
2.1 IMiDs
已經(jīng)進(jìn)行了大量研究，旨在提供能安全有效地治療與異常TNF-a生成 有關(guān)的疾病的化合物，參見(jiàn)，如Marriott, J.B"等人ExpeW 所o/. 77zer. 1(4): 1-8 (2001); G. W. Muller,等人Jot/ma/ o/Me<i/cZ"a/ CAem^o;, 39(17): 3238-3240(1996);和G.W.Muller,等人，倫wg畫(huà)'c c& MW"W C7;簡(jiǎn)勿 丄欲e^， 8: 2669-2674 (1998)。 一些研究關(guān)注了通過(guò)其有效抑制LPS刺激的 PBMC生成TNF-a的能力所選擇的一組化合物。L.G. Corral等人Ann. Rheum. Dis. 58:(Suppl I) 1107-1113 (1999)。這些化合物，稱作IMiDs (Celgene Corporation)或免疫調(diào)節(jié)藥物，不僅表現(xiàn)出有效抑制TNF-a，還顯 著抑制LPS誘導(dǎo)的單核細(xì)胞ILip和IL12的生成。LPS誘導(dǎo)的IL6也受到免疫調(diào)節(jié)化合物的抑制，雖然是部分抑制，參見(jiàn)同上。這些化合物是LPS 誘導(dǎo)的ILIO的有效刺激劑。
2.2 4-(氨基V2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-異二氫吲哚-l,3-二酮 4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-異二氫吲哚-l,3-二酮是一種具有如 下化學(xué)結(jié)構(gòu)的免疫調(diào)節(jié)化合物
且在G.W. Muller等人的美囯專利No. 5,635,517中有描述，本文納入其全部 內(nèi)容作為參考。
2.3 3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氫-異吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮 3-(4-氨基-l-氧代-l，3-二氫-異吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮是一種具有如下 化學(xué)結(jié)構(gòu)的免疫調(diào)節(jié)化合物
NH2 ,
且在G.W. Muller等人的美國(guó)專利No. 5,635,517中有描述，本文納入其全部 內(nèi)容作為參考。
2.4曲古抑菌素A(TSA)
曲古抑菌素A (TSA)是一種具有如下結(jié)構(gòu)的組蛋白去乙?；敢种?br> 劑
P O、2.5 羥基脲(HU)
鞋基力泉(HU)是一種具有如下結(jié)構(gòu)的核糖核苷酸還原酶
2.6 丙戊酸
丙戊酸是一種具有如下結(jié)構(gòu)的組蛋白去乙酰化酶抑制劑
盡管丙戊酸已經(jīng)證明具有增加造血干細(xì)胞的增殖和自我更新的活 性，還顯示出體外和體內(nèi)的有效抗胂瘤活性(見(jiàn)Kaiser等人，2006 腸顧to/og/ca 91 (2) :248-251; Li等人，2005，艦O "cer 7T er 4(12J: 1912-1922)，但提供造血干細(xì)胞相關(guān)疾病和病癥的安全有效療法仍然需要改 進(jìn)(Bug等人，2005, C朋ceri es. 65(7): 2537-2541)。
因此，現(xiàn)有技術(shù)急需安全有效的CD34+造血干細(xì)胞體外和體內(nèi)的擴(kuò)增 方法。
3.

發(fā)明內(nèi)容
9本發(fā)明的實(shí)施方案是基于發(fā)現(xiàn)免疫調(diào)節(jié)化合物與丙戊酸、羥基脲或曲
古抑菌素A聯(lián)合使用對(duì)CD34+造血干細(xì)胞擴(kuò)增、胎兒血紅蛋白(Hb)表達(dá)以及惡性細(xì)胞凋亡和抗惡性細(xì)胞增殖具有加成和協(xié)同效果。
在一實(shí)施方案中，4-(氨基)-2-(2，6-二氧代(3-哌啶基))-異二氫吲哚-1,3-二酮(本文中也稱作"化合物l")或3-(4-氨基-1-氧代-1,3-二氳-異吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮(本文也稱作"化合物2")與丙戊酸、羥基脲或曲古抑菌素A聯(lián)合使用對(duì)CD34+造血干細(xì)胞擴(kuò)增、胎兒血紅蛋白(Hb)表達(dá)以及惡性細(xì)胞凋亡和抗惡性細(xì)胞增殖具有加成和協(xié)同作用。
因此，本發(fā)明4是供了組合物(如，藥物組合物)，其包括有效量的免疫調(diào)節(jié)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物、水合物、前藥、立體異構(gòu)體或多晶型，和丙戊酸、羥基脲或曲古抑菌素A或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物、水合物、前藥、立體異構(gòu)體或多晶型，包括該組合物在CD34屮造血干細(xì)胞擴(kuò)增、胎兒血紅蛋白(Hb)表達(dá)以及惡性細(xì)胞凋亡和抗惡性細(xì)胞增殖中的4吏用方法，和治療、預(yù)防或控制相關(guān)疾病或病癥的方法。
本發(fā)明還提供了組合物(如，藥物組合物)，其包括有效量的4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-異二氫吲哚-1,3-二酮或3-(4-氨基-1-氧代-1,3-二氬-異p引咮-2-基)-哌啶-2,6-二酮，或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物、水合物、前藥、立體異構(gòu)體或多晶型，和丙戊酸、羥基脲或曲古抑菌素A或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物、水合物、前藥、立體異構(gòu)體或多晶型，包括該組合物在CD34+造血干細(xì)胞擴(kuò)增、胎兒血紅蛋白(Hb)表達(dá)以及惡性細(xì)胞凋亡和抗惡性細(xì)胞增殖中的使用方法，和治療、預(yù)防或控制相關(guān)疾病或病癥的方法。
104.


圖1所示為T(mén)SA(即曲古抑菌素A)和化合物1 (即4-(氨基)-2-(2,6_二氧代(3-哌啶基))-異二氫吲哚-l,3-二酮)對(duì)Namalwa細(xì)胞增殖的協(xié)同和加成作用。
圖2所示為T(mén)SA (即曲古抑菌素A)和化合物1 (即4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-異二氫吲哚-1,3-二酮)對(duì)Namalwa細(xì)胞凋亡的協(xié)同和加成作用。
圖3所示為VPA(即丙戊酸)和化合物1 (即4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-異二氳吲哚-l，3-二酮)對(duì)Namalwa細(xì)胞增殖的協(xié)同和加成作用。
圖4所示為VPA(即丙戊酸)和化合物1 (即4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-異二氫吲哚-l，3-二酮)對(duì)Namalwa細(xì)胞凋亡的協(xié)同和加成作用。
圖5所示為VPA(即丙戊酸)和化合物2(即3-(4-氨基-1-氧代-1,3-二氫-異吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮)對(duì)Namalwa細(xì)胞增殖的協(xié)同和加成作用。表格表示要得到加成或協(xié)同作用所需的化合物2和VPA的濃度。
圖6所示為VPA(即丙戊酸)和化合物2(即3-(4-氨基-1-氧代-1,3-二氫-異吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮)對(duì)Namalwa細(xì)胞凋亡的協(xié)同和加成作用。表格表示要得到加成和協(xié)同作用所需的化合物2和VPA的濃度。
圖7所示為T(mén)SA(即曲古抑菌素A)和化合物l(即4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-異二氫吲哚-l,3-二酮)對(duì)脊髓血源性CD34+擴(kuò)增的協(xié)同和加成作用。圖7顯示了在細(xì)胞培養(yǎng)6天后所得到的CD34+細(xì)胞數(shù)量。表格表示要得到加成或協(xié)同作用所需的化合物1和VPA的濃度。
圖8所示為T(mén)SA(即曲古抑菌素A)和化合物l(即4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-異二氫"引哚-l,3-二酮)對(duì)脊髓血源性CD34+擴(kuò)增的加成或協(xié)
ii同作用。圖8顯示了在細(xì)胞培養(yǎng)6天后所得到的CD34+細(xì)胞百分比。表格表示要得到加成或協(xié)同作用所需的化合物1和TSA的濃度。
圖9所示為T(mén)SA(即曲古抑菌素A)和化合物2(即3-(4-氨基-1-氧代-1,3-二氫-異吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮)對(duì)脊髓血源性CD34+擴(kuò)增的協(xié)同和加成作用。圖9顯示了在細(xì)胞培養(yǎng)6天后所得到的CD34+細(xì)胞數(shù)量。表格表示要得到加成或協(xié)同作用所需的化合物2和TSA的濃度。
圖10所示為T(mén)SA (即曲古抑菌素A)和化合物2(即3-(4-氨基-1-氧代-1,3-二氫-異p引咮-2-基)-哌啶-2，6-二酮)對(duì)脊髓血源性CD34+擴(kuò)增的協(xié)同和加成作用。圖10代表在細(xì)胞培養(yǎng)6天后所得到的CD34+細(xì)胞百分比。表格表示要得到加成或協(xié)同作用所需的化合物2和TSA的濃度。
圖11所示為VPA(即丙戊酸)和化合物l(即4-(氨基)-2-(2，6-二氧代(3陽(yáng)哌啶基))-異二氫吲哚-l,3-二酮)對(duì)脊髓血源性CD34+擴(kuò)增的協(xié)同和加成作用。圖11顯示了在細(xì)胞培養(yǎng)6天后所得到的CD34+細(xì)胞數(shù)量。表格表示要得到加成或協(xié)同作用所需的化合物1和VPA的濃度。
圖12所示為VPA(即丙戊酸)和化合物l(即4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-異二氫吲哚-l,3-二酮)對(duì)脊髓血源性CD34+擴(kuò)增的協(xié)同和加成作用。圖12代表在細(xì)胞培養(yǎng)6天后所得到的CD34+細(xì)胞百分比。表格表示要得到加成或協(xié)同作用所需的化合物1和VPA的濃度。
圖13所示為VPA(即丙戊酸)和化合物2(即3-(4-氨基-1-氧代-1,3-二氫-異吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮)對(duì)脊髓血源性CD34+擴(kuò)增的協(xié)同和加成作用。圖13顯示了在細(xì)胞培養(yǎng)6天后所得到的CD34+細(xì)胞數(shù)量。表格表示要得到加成或協(xié)同作用所需的化合物2和VPA的濃度。圖14所示為VPA(即丙戊酸)和化合物2(即3-(4-氨基-1-氧代-1,3-二氫-異吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮)對(duì)脊髓血源性CD34+擴(kuò)增的協(xié)同和加成作用。圖14代表在細(xì)胞培養(yǎng)6天后所得到的CD34+細(xì)胞百分比。表格表示要得到加成或協(xié)同作用所需的化合物2和VPA濃度。
圖15所示為HU(即羥基脲)和化合物l(即4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-異二氫吲哚-l,3-二酮)或化合物2(即3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氫-異吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮)對(duì)在紅細(xì)胞中分化6天的正常供體CD34+細(xì)胞中胎兒血紅蛋白表達(dá)的協(xié)同作用。
圖16所示為HU(即羥基脲)和化合物l(即4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-異二氫吲咮-l,3-二酮)對(duì)在紅細(xì)胞中分化6天的鐮狀細(xì)胞貧血患者CD34+細(xì)胞中胎兒血紅蛋白表達(dá)的協(xié)同作用。
5.
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明的實(shí)施方案是基于發(fā)現(xiàn)免疫調(diào)節(jié)化合物(如，4-(氨基)-2-(2，6-二氧代(3-哌啶基))-異二氫吲哚-l,3-二酮或3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氳-異吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮)與丙戊酸、羥基脲或曲古抑菌素A聯(lián)合使用對(duì)CD34+造血干細(xì)胞擴(kuò)增、胎兒血紅蛋白表達(dá)以及惡性細(xì)胞凋亡和抗惡性細(xì)胞增殖具有加成和協(xié)同效果。
因此，在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了組合物(如，藥物組合物)，其包括有效量的免疫調(diào)節(jié)化合物和丙戊酸、幾基脲或曲古抑菌素A 。
在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明還提供了組合物(如，藥物組合物)，其包括有效量的4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-異二氫p引咮-l，3-二酮或3-(4-
13氨基-l-氧代-l,3-二氫-異吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮，和丙戊酸、羥基脲或曲古抑菌素A。
在又一實(shí)施方案中，本發(fā)明還4是供了增加CD34+造血干細(xì)胞體外或體內(nèi)擴(kuò)增的方法，其包括使CD34+造血干細(xì)胞在體外或體內(nèi)與有效量的免疫調(diào)節(jié)化合物和丙戊酸、鞋基脲或曲古抑菌素A接觸。
在還一實(shí)施方案中，本發(fā)明還提供了增加CD34+造血干細(xì)胞體外或體內(nèi)擴(kuò)增的方法，其包括使CD34+造血干細(xì)胞在體外或體內(nèi)與有效量的4-(氨基)-2-(2，6-二氧代(3-哌啶基))-異二氫吲哚-l,3-二酮或3-(4-氨基-l-氧代-1,3-二氫-異^引咮-2-基)-派啶-2,6-二酮，和丙戊酸、羥基脲或曲古抑菌素A接觸。
在再一實(shí)施方案中，本發(fā)明還提供了治療、預(yù)防或控制可通過(guò)0034+造血干細(xì)胞在體外或體內(nèi)擴(kuò)增來(lái)治療、預(yù)防或控制的疾病或病癥的方法，其包括給予有此需要的患者有效量的免疫調(diào)節(jié)化合物和丙戊酸、羥基脲或曲古抑菌素A。
在又一 實(shí)施方案中，本發(fā)明還提供了治療、預(yù)防或控制可通過(guò)CD34+造血干細(xì)胞在體外或體內(nèi)擴(kuò)增來(lái)治療、預(yù)防或控制的疾病或病癥的方法，其包括給予有此需要的患者有效量的4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-異二氫吲哚-l，3-二酮或3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氫-異吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮，和丙戊酸、羥基J泉或曲古抑菌素A。
在又一實(shí)施方案中，本發(fā)明還提供了骨髓移植方法，其包括使骨髓與有效量的免疫調(diào)節(jié)化合物和丙戊酸、羥基脲或曲古抑菌素A在體外接觸，然后移植給所需患者。在又一實(shí)施方案中，本發(fā)明還提供了骨髓移植方法，其包括使骨髓
與有效量的4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-異二氫吲哚-l，3-二酮或3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氫-異吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮，和丙戊酸、羥基脲或曲 古抑菌素A在體外接觸，然后移植給所需患者。
在又一實(shí)施方案中，本發(fā)明還提供了骨髓重建方法，其包括給予有 此需要的患者有效量的免疫調(diào)節(jié)化合物和丙戊酸、羥基脲或曲古抑菌素 A。在一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了對(duì)已經(jīng)進(jìn)行或正在進(jìn)行化療和/ 或放療的患者進(jìn)行骨髓重建的方法，其包括給予患者有效量的免疫調(diào)節(jié) 化合物和丙戊酸、羥基I泉或曲古抑菌素A。
在又一實(shí)施方案中，本發(fā)明還提供了骨髓重建方法，其包括給予有 此需要的患者有效量的4-(氨基)-2-(2，6-二氧代(3-哌啶基))-異二氫吲哚-1,3-二酮或3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氫-異吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮和丙戊酸、羥 基脲或曲古抑菌素A。在一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了對(duì)已經(jīng)進(jìn)行 或正在進(jìn)行化療和/或放療的患者進(jìn)行骨髓重建的方法，其包括給予患者 有效量的4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-異二氫吲哚-l,3-二酮或3-(4-氨 基-l-氧代-l,3-二氫-異吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮和丙戊酸、羥基脲或曲古抑 菌素A。
在又一實(shí)施方案中，本發(fā)明還提供了骨髓重建方法，其包括使骨髓 與有效量的免疫調(diào)節(jié)化合物和丙戊酸、羥基脲或曲古抑菌素A接觸。在 一具體實(shí)施方案中，所述的骨髓已接受過(guò)或正在接受化療或放療。
在又一實(shí)施方案中，本發(fā)明還提供了骨髓重建方法，其包括使骨髓 與有效量的4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-異二氫吲哚-l，3-二酮或3-(4-氨基-l-氧代-l，3-二氫-異吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮和丙戊酸、羥基脲或曲古抑菌素A接觸。在一具體實(shí)施方案中，所述的骨髓已接受過(guò)或正在接受
化療或力i:療。
在又一實(shí)施方案中，本發(fā)明還提供了治療、預(yù)防或控制實(shí)體瘤的方 法，所述實(shí)體瘤包括但不限于惡性黑色素瘤、胰腺癌、原發(fā)部位不明的 類癌、腎癌、乳腺癌、腎上腺皮質(zhì)癌、結(jié)腸直腸癌、內(nèi)分泌腫瘤、黑色 素瘤、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、骨肉瘤、視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤、腎母細(xì)胞瘤或非小細(xì)
胞肺癌(NSCLC)，該方法包括給予有此需要的患者有效量的免疫調(diào)節(jié)化 合物和丙戊酸、羥基脲或曲古抑菌素A。
在又一實(shí)施方案中，本發(fā)明還提供了治療、預(yù)防或控制實(shí)體瘤的方 法，所述實(shí)體瘤包括但不限于惡性黑色素瘤、胰腺癌、原發(fā)部位不明的 類癌、腎癌、乳腺癌、腎上腺皮質(zhì)癌、結(jié)腸直腸癌、內(nèi)分泌腫瘤、黑色 素瘤、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、骨肉瘤、視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤、腎母細(xì)胞瘤或非小細(xì) 胞肺癌(NSCLC)，該方法包括給予有此需要的患者有效量的4-(氨 基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-異二氫吲哚-l,3-二酮或3-(4-氨基-1-氧代-1,3-二氫-異吲咮-2-基)-哌啶-2,6-二酮和丙戊酸、羥基脲或曲古抑菌素A。
在又一實(shí)施方案中，本發(fā)明還^^是供了治療、預(yù)防或控制血液系統(tǒng)疾 病或病癥(如，血液系統(tǒng)癌癥或肺瘤)的方法，其包括給予有此需要的患 者有效量的免疫調(diào)節(jié)化合物和丙戊酸、羥基脲或曲古抑菌素A。
在又一實(shí)施方案中，本發(fā)明還^t是供了治療、預(yù)防或控制血液系統(tǒng)疾 病或病癥(如，血液系統(tǒng)癌癥或腫瘤)的方法，其包括給予有此需要的患 者有效量的4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-異二氫吲哚-l，3-二酮或3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氫-異吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮和丙戊酸、羥基脲或曲古 抑菌素A。在又一實(shí)施方案中，本發(fā)明還提供了治療、預(yù)防或控制骨髓增生異 常綜合征、多發(fā)性骨髓瘤、卩血紅蛋白病、白血病、骨髓癌、淋巴瘤、 骨髓增生異常、非何杰金氏淋巴瘤、慢性淋巴細(xì)胞白血病、慢性髓細(xì)胞 性白血病、急性淋巴母細(xì)胞白血病、急性粒細(xì)胞性白血病或急性原始粒 細(xì)胞性白血病的方法，其包括給予有此需要的患者有效量的免疫調(diào)節(jié)化
合物(如，4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-異二氫吲哚-l,3-二酮或3-(4-氨 基-l-氧代-l,3-二氬-異吲咮-2-基)-哌啶-2,6-二酮)，或其藥學(xué)上可接受的鹽、 溶劑化物、水合物、前藥、立體異構(gòu)體或多晶型，和丙戊酸、羥基脲或曲 古抑菌素A或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物、水合物、前藥、立體異構(gòu) 體或多晶型。
在又一實(shí)施方案中，本發(fā)明還提供了增加細(xì)胞中胎兒血紅蛋白表達(dá) 的方法，其包括使表達(dá)胎兒血紅蛋白的細(xì)胞與有效量的免疫調(diào)節(jié)化合物和 丙戊酸、幾基J泉或曲古抑菌素A接觸。
在又一實(shí)施方案中，本發(fā)明還提供了增加細(xì)胞中胎兒血紅蛋白表達(dá) 的方法，其包括使表達(dá)胎兒血紅蛋白的細(xì)胞與有效量的4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-異二氫吲哚-l,3-二酮或3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氫-異吲 哚-2-基)-派啶-2,6-二酮和丙戊酸、羥基脲或曲古抑菌素A接觸。
在又一實(shí)施方案中，本發(fā)明還提供了增加所需患者中胎兒血紅蛋白 表達(dá)的方法，其包括給予有此需要的患者有效量的免疫調(diào)節(jié)化合物和丙戊 酸、羥基脲或曲古抑菌素A。在一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了增加 鐮狀細(xì)胞貧血(SCA)患者中胎兒血紅蛋白表達(dá)的方法，其包括給予SCA 患者有效量的免疫調(diào)節(jié)化合物和丙戊酸、羥基脲或曲古抑菌素A。在又一實(shí)施方案中，本發(fā)明還提供了增加所需患者中胎兒血紅蛋白
表達(dá)的方法，其包括給予有此需要的患者有效量的4-(氨基)-2-(2,6-二氧代 (3畫(huà)哌啶基))陽(yáng)異二氫吲哚畫(huà)l,3隱二酮或3-(4畫(huà)氨基-l-氧代-l,3-二氫-異吲哚陽(yáng)2畫(huà) 基)-哌啶-2,6-二酮和丙戊酸、鞋基脲或曲古抑菌素A。在一具體實(shí)施方案 中，本發(fā)明提供了增加SCA患者中胎兒血紅蛋白表達(dá)的方法，其包括給 予SCA患者有效量的4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-異二氫吲哚-1,3-二酮或3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氫-異吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮和丙戊酸、羥 基脲或曲古抑菌素A。
在又一實(shí)施方案中，本發(fā)明還提供了誘導(dǎo)惡性細(xì)胞凋亡的方法，其 包括使惡性細(xì)胞與有效量的免疫調(diào)節(jié)化合物和丙戊酸、羥基脲或曲古抑菌 素A接觸。 '
在又一實(shí)施方案中，本發(fā)明還提供了誘導(dǎo)惡性細(xì)胞凋亡的方法，其 包括使惡性細(xì)胞與有效量的4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-異二氫吲哚 -1，3-二酮或3-(4-氨基-1-氧代-1，3-二氫-異吲咮-2-基)-哌啶-2,6-二酮和丙戊 酸、羥基脲或曲古抑菌素A接觸。
在又一實(shí)施方案中，本發(fā)明還提供了抑制惡性細(xì)胞增殖的方法，其 包括使惡性細(xì)胞與有效量的免疫調(diào)節(jié)化合物和丙戊酸、羥基脲或曲古抑菌 素A接觸。
在又一實(shí)施方案中，本發(fā)明還提供了抑制惡性細(xì)胞增殖的方法，其 包括使惡性細(xì)胞與有效量的4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-異二氫吲哚 -1,3-二酮或3-(4-氨基-l-氧代-l，3-二氫-異吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮和丙戊
酸、羥基纟泉或曲古抑菌素A接觸。
185.1
本發(fā)明所用的術(shù)語(yǔ)"患者"意指任何動(dòng)物(如牛、馬、綿羊、豬、雞、 火雞、鵪鶉、貓、狗、小鼠、大鼠、兔或豚鼠)，在一實(shí)施方案中，是指 哺乳動(dòng)物，如非靈長(zhǎng)類動(dòng)物或靈長(zhǎng)類動(dòng)物(如猴子或人)，在另一實(shí)施方 案中，是指人。在某些實(shí)施方案中，所述人是指嬰兒、兒童、青少年或 成人。在某一具體實(shí)施方案中，所述患者之前患有血液系統(tǒng)疾病或病癥 或有患這些病的風(fēng)險(xiǎn)。有患病風(fēng)險(xiǎn)的患者包括但不限于那些有血液系統(tǒng) 疾病或病癥遺傳病史的患者，或那些處于血液系統(tǒng)疾病或病癥的患病風(fēng) 險(xiǎn)中的身體健康患者。在一實(shí)施方案中，人患者之前曾接受過(guò)或正在接 受血液系統(tǒng)疾病或病癥的治療。
短語(yǔ)"免疫調(diào)節(jié)化合物和丙戊酸、羥基脲或曲古抑菌素A"包括如下 組合(a)免疫調(diào)節(jié)化合物和丙戊酸；(b)免疫調(diào)節(jié)化合物和羥基脲；和 (c)免疫調(diào)節(jié)化合物和曲古抑菌素A，包括其各自的藥學(xué)上可接受的鹽、 溶劑化物、水合物、前藥、立體異構(gòu)體或多晶型。
短語(yǔ)"4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-異二氫吲哚-l,3-二酮或 3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氫-異吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮和丙戊酸、羥基脲 或曲古抑菌素A"包括如下組合(&)4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-異二氫"l哚-l,3-二酮和丙戊酸；(b)4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-異 二氫吲哚-l,3-二酮和曲古抑菌素A; (c)4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶 基))-異二氫吲哚-l,3-二酮和羥基脲;(d) 3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氫-異吲 咮-2-基)-哌啶-2,6-二酮和丙戊酸；(e)3-(4-氨基-l-氧代-l，3-二氫-異吲咮 -2-基)-哌啶-2,6-二酮和曲古抑菌素A;和(!)3-(4-氨基-1-氧代-1,3-二氫-異吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮和羥基脲，包括其各自的藥學(xué)上可接受的鹽、 溶劑化物、水合物、前藥、立體異構(gòu)體或多晶型。
除非另有說(shuō)明，本發(fā)明所用的術(shù)語(yǔ)"藥學(xué)上可接受的鹽"是指用藥學(xué) 上可接受的酸，包括無(wú)機(jī)酸和有機(jī)酸配制而成的鹽。適合的酸包括無(wú)機(jī) 酸和有機(jī)酸，但不限于乙酸、海藻酸、鄰氨基苯甲酸、苯磺酸、苯甲酸、 樟腦磺酸、檸檬酸、乙烯磺酸、甲酸、富馬酸、糠酸、葡糖酸、谷氨酸、 葡萄糖醛酸、半乳糖酸、縮水甘油酸、氫溴酸、鹽酸、羥乙基碘酸、乳 酸、馬來(lái)酸、蘋(píng)果酸、扁桃酸、甲磺酸、粘酸、硝酸、樸酸、泛酸、苯 乙酸、丙酸、磷酸、水楊酸、石更脂酸、琥珀酸、對(duì)氨基苯磺酸、碌i^酸、 酒石酸、對(duì)甲苯磺酸等。特別適合的酸是鹽酸、氫溴酸、磷酸和硫酸。
除非另有說(shuō)明，本發(fā)明所用的術(shù)語(yǔ)"溶劑化物"是指本發(fā)明提供的化 合物或其鹽，其還包括通過(guò)非共價(jià)分子間力結(jié)合的化學(xué)計(jì)量量的或非化 學(xué)計(jì)量量的溶劑。當(dāng)溶劑是水時(shí)，所述溶劑化物為"水合物"。
本發(fā)明所用的"多晶型"是指本發(fā)明所述化合物的具體結(jié)晶排列。多 晶型可通過(guò)使用不同工作條件和/或溶劑來(lái)獲得。具體地，多晶型可通過(guò) 在具體溶劑中重新結(jié)晶本發(fā)明所述的化合物來(lái)制備。
除非另有說(shuō)明，如本發(fā)明所用的術(shù)語(yǔ)"前藥"是指化合物的 一 種衍生 物，它在生物條件下(在體外或體內(nèi))可水解、氧化或以其它方式反應(yīng)而 提供所述化合物。前藥的例子包括但不限于包含可生物水解部分，如可 生物水解酰胺、可生物水解酯、可生物水解氨基甲酸酯、可生物水解碳 酸酯、可生物水解酰^1，以及可生物水解磷酸酯類似物的化合物。前藥
的其它例子包括含有以下基團(tuán)的化合物-NO 、 -N02、 -ONO或-ON02 部分。前藥通常可通過(guò)已》口方法制備，如\ Me&c/wa/ C7^附^/ry
20Z)/scoveo;， 172- 178, 949-982 (Manfred E. Wolff第五版1995)， 以及D^/g" o/iVcxirags (H. Bundgaard編Elselvier, New York 1985)中所述。
除非另有說(shuō)明，本發(fā)明所用的術(shù)語(yǔ)"可生物水解氨基甲酸酯"，"可生 物水解碳酸酯"，"可生物水解酰脲"和"可生物水解磷酸酯"分別是指具有 以下性質(zhì)的化合物的氨基甲酸酯、石炭酸鹽、酰月泉和磷酸鹽，其l)不干 擾該化合物的生物活性，但是在體內(nèi)可賦予該化合物有利屬性，例如吸 收、作用持續(xù)時(shí)間或作用起始；或2)沒(méi)有生物活性，但是在體內(nèi)轉(zhuǎn)化成 生物活性化合物?？缮锼獍被姿狨サ睦影ǖ幌抻诘图?jí)烷基 胺、取代的乙烯二胺、氨基酸、羥基烷基胺、雜環(huán)和雜芳胺和聚醚胺。
除非另有說(shuō)明，本發(fā)明所用的術(shù)語(yǔ)"立體異構(gòu)體"包括本發(fā)明所提供 的所有光學(xué)/立體異構(gòu)體純的和光學(xué)/立體異構(gòu)體富集的化合物。
本發(fā)明提供的化合物可以以對(duì)映體的外消旋混合物或非對(duì)映體混合 物存在。本發(fā)明的實(shí)施方案包括使用這些化合物的立體異構(gòu)體純的形式 和使用那些形式的混合物。例如，在本發(fā)明所述的方法和組合物中使用 含有等量或不等量的化合物的對(duì)映體的混合物。可以不對(duì)稱合成或使用 標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)例如手性柱或手性拆分劑拆分這些異構(gòu)體。參見(jiàn)，如，Jacques, J.等,五"a"/io^2e/^， i acewa/es i eso/who"s (Wiley-Interscience, New York, 1981); Wilen， S. H.等人7Wra/zec/腦33:2725 (1977); Eliel, E. L., 5Vereoc/^/m、^y o/CWrZ)o" C蘭/ ow"A (McGraw-Hill, NY, 1962);和Wilen S. H.， 7b6/es 0// es0/v/Mg々e她awt/Op"ca/i eso/w /om1， 第268頁(yè) (E丄. Eliel編，Univ. of Notre Dame Press, Notre Dame， IN, 1972)。除非另有說(shuō) 明，本發(fā)明所用的術(shù)語(yǔ)"立體異構(gòu)體純的"、"對(duì)映體純的"或"光學(xué)純的"是指化合物包括一種立體異構(gòu)體且基本上不含有該化合物的相反立體異
構(gòu)體或?qū)τ丑w。例如，當(dāng)化合物含有80%、 90%、或95%或更多的一種 立體異構(gòu)體和20%、 10%、或5%或更少的相反立體異構(gòu)體時(shí)，該化合物 是立體異構(gòu)體純的或?qū)τ丑w純的。在某些情況下，當(dāng)本發(fā)明的化合物相 對(duì)于特定的手性中心是約80。/。ee(對(duì)映體過(guò)量)或更大，在一實(shí)施方案中 等于或大于90%ee,在另 一實(shí)施方案中相對(duì)于特定的手性中心為95% ee 時(shí)，則該化合物被認(rèn)為相對(duì)于手性中心是光學(xué)活性的或立體異構(gòu)體/對(duì)映 體純的(即，基本上R-型或基本上S-型)。
除非另有說(shuō)明，本發(fā)明所用的術(shù)語(yǔ)"立體異構(gòu)體富集的"或"光學(xué)富
集的"也包括不是外消旋化合物的混合物，如化合物的立體異構(gòu)體的混合 物(如R/S = 30/70、 35/65、 40/60、 45/55、 55/45、 60/40、 65/35和70/30)。
除非另有說(shuō)明，本發(fā)明所用的術(shù)語(yǔ)"治療"是指當(dāng)患者患具體疾病或 病癥時(shí)減少該疾病或病癥或其癥狀的嚴(yán)重性，或者延遲或減緩該疾病或 病癥或其癥狀的進(jìn)展而發(fā)生的行為。
除非另有說(shuō)明，如本發(fā)明所用的術(shù)語(yǔ)"預(yù)防"是指在患者開(kāi)始患具體 疾病或病癥或其癥狀之前，抑制或降低該疾病或病癥或其癥狀的嚴(yán)重性 而發(fā)生的行為。有血液系統(tǒng)疾病或病癥患病風(fēng)險(xiǎn)的患者是這種預(yù)防性治 療的候選人。
除非另有說(shuō)明，本發(fā)明所用的術(shù)語(yǔ)"控制"包括對(duì)患有具體疾病或病 癥或其癥狀的患者預(yù)防該疾病或病癥的復(fù)發(fā)、和/或延長(zhǎng)該患有該具體疾 病或病癥或其癥狀的患者處于緩解狀態(tài)的時(shí)間。該術(shù)語(yǔ)包括調(diào)節(jié)該疾病 或病癥或其癥狀的閾值、發(fā)展和/或持續(xù)時(shí)間，或者改變患者對(duì)該疾病或 病癥或其癥^1大的反應(yīng)方式。
22除非另有說(shuō)明，本發(fā)明所用的術(shù)語(yǔ)化合物或組合物的"有效量"是指 在疾病的治療、預(yù)防和/或控制中足以提供治療益處或延遲或減輕一種或 多種與該疾病或病癥相關(guān)的癥狀的量。在一實(shí)施方案中，在本發(fā)明的所 述組合物、使用方法和治療、預(yù)防和控制方法中所用的術(shù)語(yǔ)"有效量"是
指免疫調(diào)節(jié)化合物(如，4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-異二氫吲哚 -1,3-二酮或3-(4-氨基-l-氧代-l，3-二氫-異吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮)或其 藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物、水合物、前藥、立體異構(gòu)體或多晶型的 量，和丙戊酸、幾基脲或曲古抑菌素A，或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑 化物、水合物、前藥、立體異構(gòu)體或多晶型的量，這些量當(dāng)互相組合使 用時(shí)可用于本發(fā)明所述的方法或提供患者治療性益處，如疾病或病癥的 治療、預(yù)防和/或控制，或與疾病或病癥相關(guān)的癥狀的延遲或減輕。例如， "有效量的4-(氨基)-2-(2,6- 二氧代(3-哌啶基))-異二氫吲哚-1,3- 二酮或 3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氫-異吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮和丙戊酸、羥基脲 或曲古抑菌素A"包括有效量的每種化合物，當(dāng)這些量如本發(fā)明所述互相 組合使用時(shí)會(huì)在患者中提供治療益處，如疾病或病癥的治療、預(yù)防和/ 或控制，或與疾病或病癥相關(guān)的癥狀的延遲或減輕。
術(shù)語(yǔ)"有效量"包括提供總體療效、減少或避免疾病或病癥或其癥狀 的癥狀或原因、或提供另 一種治療試劑的治療效果的量。
術(shù)語(yǔ)"共給予"和"聯(lián)合"包括沒(méi)有具體時(shí)間限制地同步、同時(shí)或先后 給予兩種治療劑(即，免疫調(diào)節(jié)化合物4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-異二氫吲哚-l,3-二酮或3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氫-異吲哚-2-基)-哌啶 -2,6-二酮或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物、水合物、前藥、立體異構(gòu) 體或多晶型的量，和丙戊酸、羥基脲或曲古抑菌素A,或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物、水合物、前藥、立體異構(gòu)體或多晶型)。在一實(shí)施方 案中，這兩種試劑在細(xì)胞或在患者的體內(nèi)同時(shí)存在或同時(shí)發(fā)揮其生物學(xué) 或治療作用。在另一實(shí)施方案中，這兩種治療劑在同一組合物中或單位 劑型中。在又一實(shí)施方案中，這兩種治療劑在不同的組合物中或單^f立劑 型中。
術(shù)語(yǔ)"白血病"是指造血組織的惡性贅生物。在某些實(shí)施方案中，白 血病包括但不限于髓性白血病、慢性淋巴細(xì)胞白血病、慢性髓細(xì)胞性白 血病、急性淋巴母細(xì)胞白血病、急性粒細(xì)胞性白血病和急性原始粒細(xì)胞 性白血病。該白血病是復(fù)發(fā)的、常規(guī)治療難治的或?qū)ΤＲ?guī)治療耐受的。 術(shù)語(yǔ)"復(fù)發(fā)"是指經(jīng)治療后白血病被緩解的患者骨髓中的白血病細(xì)胞出現(xiàn) 回復(fù)和正常血細(xì)胞出現(xiàn)減少的情形。術(shù)語(yǔ)"難治的或耐受的"是指即使在 深度治療后患者骨髓還是有殘留白血病細(xì)胞的情形。
術(shù)語(yǔ)關(guān)于骨髓的"重建"包括擴(kuò)大正常造血祖細(xì)胞，以重建正常的血 液細(xì)J包群。
術(shù)語(yǔ)"單位劑型"和"單一單位劑型，，包括片劑；咀嚼片；嚢片；膠 囊，如彈性軟明膠膠嚢；袋劑；扁囊劑；錠劑；糖錠劑；分散劑型；粉 劑；溶液；凝膠；適于向患者口服或粘膜給藥的液體劑型，包括懸浮液(例 如，水性或非水性液體懸浮液)、乳劑(例如，水包油乳劑或油包水乳劑)、 溶液和酏劑，以及可重新配制以向患者提供適于口服或靜脈給藥的液體 劑型的無(wú)菌固體(如結(jié)晶或無(wú)定形固體)。該單位劑型并不一定作為單一 劑量予以給藥。
5.2免疫調(diào)節(jié)化合物生物，如美國(guó)專利No.5，929,U7所公開(kāi)的那些；1-氧代-2-(2,6-二氧代-3-氟哌啶-3基)異二氫吲哚和1,3-二氧代-2-(2,6-二氧代-3-氟哌啶-3-基)異二 氫吲哚，如美國(guó)專利No.5,874,448和5,955,476中描述的那些；美國(guó)專利 No.5,798,368所述的四位取代的2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-l-氧代異二氫 吲咮；1-氧代和1,3-二氧代-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異二氫吲哚(如沙利 度胺的4-曱基衍生物)，包括但不限于在美國(guó)專利No.5,635,517、 6,476,052、 6,555,554和6,403,613中所述的那些；美國(guó)專利No.6,380,239 所述的在二氳p引咮環(huán)的4-或5-位被取代的1-氧代和1,3-二氧代異二氫^引 咮(如，4-(4-氨基-l,3-二氧代異二氫吲哚-2-基)-4-氨基甲酰丁酸)；美國(guó)專 利No.6,458,810所述的在2-位被2,6-二氧代-3-羥基哌啶-5-基取代的異二 氫吲哚-l-酮和異二氫吲哚-l,3-二酮(如2-(2,6-二氧代-3-羥基-5-氟哌啶-5-基)-4-氨基異二氫吲哚-l-酮)；美國(guó)專利No.5,698,579和5,877,200所述的 一類非多肽環(huán)酰胺；氨基沙利度胺及其類似物、水解產(chǎn)物、新陳代謝物、 衍生物和前體，以及取代的2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)鄰苯二甲酰亞胺和取 代的2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-l-氧代異吲哚，如美國(guó)專利No.6,281,230 和6,316,471中所述的那些；異"引咮-酰亞胺化合物，如2001年10月5 曰提交的美國(guó)申請(qǐng)No.09/972,487、 2001年12月21日提交的美國(guó)申請(qǐng) No.10/032,286和國(guó)際申請(qǐng)PCT/US01/50401 (國(guó)際公開(kāi)號(hào)WO 02/059106) 中所述的那些。本文中所述的每個(gè)專利和專利申請(qǐng)的全部?jī)?nèi)容納入本文 作為參考。在一個(gè)實(shí)施方案中，免疫調(diào)節(jié)化合物不包括沙利度胺。
免疫調(diào)節(jié)化合物的其它具體實(shí)施方案包括但不限于在苯并環(huán)中用氨 基取代的1-氧代-和1,3-二氧代-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異二氫巧|哚，如美國(guó)專利No.5,635,517所述，其納入本文作為參考。這些化合物具有結(jié) 構(gòu)I:
其中X和Y之一是C二O， X和Y的另一個(gè)是C二O或CH2， R"是氫 或低級(jí)烷基，具體是甲基。具體的免疫調(diào)節(jié)化合物包括但不限于 l-氧代-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氨基異二氫吲哚； l-氧代-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-5-氨基異二氫吲哚； 1 -氧代-2-(2， 6- 二氧代哌啶-3 -基)-6-氨基異二氫吲哚； l-氧代-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-7-氨基異二氫吲哚； 1,3-二氧代-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氨基異二氬吲哚；和 1，3-二氧代-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氨基異二氫吲哚。 其它具體免疫調(diào)節(jié)化合物屬于 一 類取代的2-(2,6-二氧代哌啶-3-基) 鄰苯二甲酰亞胺和取代的2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-l-氧代異吲哚，如美 國(guó)專利No.6,281，230、 6,316,471、 6,335,349和6,476,052和國(guó)際申請(qǐng) PCT/US97/13375(國(guó)際公開(kāi)號(hào)WO98/03502)中所述的那些，這些文獻(xiàn)均納 入本文作為參考。代表化合物具有下式
其中:
X和Y之一是CK)， X和Y的另 一個(gè)是C-O或CH2;(i)R1、 R2、 113和114各自彼此獨(dú)立地是卣素、l至4個(gè)碳原子的烷基 或1至4個(gè)碳原子的烷氧基，或(ii)R1、 R2、 R 和R"之一是-NHR5，其它 的R1、 R2、 R3和R4是氬；
R"是氫或1至8個(gè)碳原子的烷基；
R"是氫、l至8個(gè)碳原子的烷基、苯甲基或鹵素；
前提是，如果X和Y是C=0且(i)R1、 R2、 R3和R4各自是氟或(ii)R1、 R2、 113和114之一是氨基，則W不是氫。
這組的代表化合物具有下式
其中W是氫或甲基。在具體實(shí)施方案中，本發(fā)明提供的所述方法和 組合物包括使用免疫調(diào)節(jié)化合物的光學(xué)純的形式(如光學(xué)純的(R)或(S)對(duì) 映體)。
27其它具體的免疫調(diào)節(jié)化合物屬于美國(guó)申請(qǐng)公開(kāi)No.2003/0096841和 2003/0045552、以及國(guó)際申請(qǐng)PCT/US01/50401 (國(guó)際公開(kāi)WO02/059106)
所述的一類異吲咮-酰亞胺，該文獻(xiàn)均納入本文作為參考。代表化合物具
有式n:
及其藥學(xué)上可接受的鹽、水合物、溶劑化物、包合物、對(duì)映體、非
對(duì)映體、外消旋化合物、和立體異構(gòu)體的混合物，式中 X和Y之一是C二O，另一個(gè)是CH2或C二0;
W是H、 (C廣C8)烷基、(C3-C7)環(huán)烷基、(C2-C8)烯基、(C2-C8)炔基、 苯甲基、芳基、(Co-C4)烷基-(C廣C6)雜環(huán)烷基、(Co-C4)烷基-(C2-C5)雜芳
基、C(O)R3、 C(S)R3、 C(O)OR4、 (C廣Cs)烷基-N(R6)2、 (C廣C8)烷基-OR5、 (C廣C8)烷基隱C(0)OR5、 C(O)NHR3、 C(S)NHR3、 C(0)NR3R3'、 C(S)NR3R3' 或(d-C8)烷基-0(CO)R5;
R2是H、 F、苯甲基、(C廣C8)烷基、CVC8烯基、或CVC8炔基； R3和RS'分別是(C廣C8)烷基、(C3-C )環(huán)烷基、(CVCs)烯基、(C2-C8)
炔基、苯甲基、芳基、(Co-C4)烷基-(C廣C6)雜環(huán)烷基、(Co-C4)烷基-(C2-Cs)
雜芳基、(C。-Q)烷基-N(R6)2、 (C廣Cs)烷基-OR5、 (C廣Cs)烷基-C(O)OR5、 (d-C8)烷基畫(huà)0(CO)R5、或C(0)OR5;
R4是(C廣Cs)烷基、(C2-Q)烯基、(CVC8)炔基、(C廣C4)烷基-OR5、苯
甲基、芳基、(Co-C4)烷基-(C廣C6)雜環(huán)烷基、或(Q)-C4)烷基-(C2-C5)雜芳基；
R5是(CrC8)烷基、(CVC8)烯基、(C2-C8)炔基、苯甲基、芳基、或(<:2-(35)
雜芳基；
R"每次出現(xiàn)獨(dú)立地為H、 (C廣C8)烷基、(C2-C8)烯基、(C2-Cs)炔基、 苯甲基、芳基、(C2-Cs)雜芳基、或(CVC8)烷基-C(0)0-R5或R"基團(tuán)聯(lián)合 形成雜環(huán)烷基；
n是0或1;和
*代表手性碳中心。
在式II的具體化合物中，當(dāng)n是0時(shí)，則R1是(C3-C7)環(huán)烷基、(C2-Cs) 烯基、(C2-Cs)炔基、苯甲基、芳基、(QrC4)烷基-(C廣C6)雜環(huán)烷基、(C0-C4) 烷基-(CVC5)雜芳基、C(O)R3、 C(O)OR4、 (C廣C8)烷基-N(R6)2、 (C廣C8)烷 基畫(huà)OR5、 (C廣C8)烷基-C(0)OR5、 C(S)NHR3、或(C廣C8)烷基陽(yáng)0(CO)R5;
R2是H或(d-Cs)烷基；和
RS是(C廣Q)烷基、(C3-C7)環(huán)烷基、(C2-Cs)烯基、(CVC8)炔基、苯甲 基、芳基、(Co-C4)烷基-(C廣C6)雜環(huán)烷基、(Co-C4)烷基-(C2-C5)雜芳基、
(Cs-C8)烷基-N(R6)2、 (Co匿C8)烷基畫(huà)NH-C(0)0隱R5、 (C廣C8)烷基-OR5、 (CrQ) 烷基-C(O)OR5、 (C廣C8)烷基-0(CO)R5、或C(0)OR、且其它變體具有同 樣的定義。
在式II的其它具體化合物中，RS是H或(d-C4)烷基。 在式II的其它具體化合物中，！^是(C廣C8)烷基或苯甲基。 在式II的其它具體化合物中，R1是H、 (C廣Cs)烷基、苯甲基、 CH2OCH3、 CH2CH2OCH3、或
29在式II的化合物的另 一實(shí)施方案中
R'是
式中Q是O或S;各個(gè)R7分別是H、 (d-C8)烷基、((33-<:7)環(huán)烷基、
(C2-C8)烯基、(CVC8)炔基、苯甲基、芳基、卣素、(Co-C4)烷基-(C廣C6) 雜環(huán)烷基、(Co-C4)烷基-(C2-C5)雜芳基、(C()-C8)烷基-N(R6)2、 (C廣C8)烷基
-OR5、 (C廣C8)烷基-C(0)OR5、 (C廣C8)烷基-0(CO)R5、或C(0)OR5或相鄰 R7 —起形成雙環(huán)烷基或芳基環(huán)。
在式II的其它具體化合物中，R^是C(0)R3。
在式II的其它具體化合物中，R3是(CVC4)烷基-(CVC5)雜芳基、(C廣Q) 烷基、芳基或(Q)-C4)烷基-OR5。
在式II的其它具體化合物中，雜芳基是吡啶基、呋喃基或噻吩基。 在式II的其它具體化合物中，R/是C(0)OR4。
在式II的其它具體化合物中，C(O)NHC(O)的H被(C廣C4)烷基、芳 基或苯甲基取代。
這類化合物的其它例子包括但不限于[2-(2,6- 二氧代-哌啶-3-基)-l,3-二氧代-2,3-二氫-lH-異吲哚-4-基甲基]-酰胺；(2-(2,6-二氧代-哌啶 -3-基)-1,3-二氧代-2,3-二氫-111-異吲哚-4-基甲基]-氨基甲酸叔丁酯；4-(氨 基曱基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶))-異二氫吲哚-l,3-二酮；^(2-(2,6-二氧代-哌啶-3-基)-l,3-二氧代-2,3-二氫-lH-異吲哚-4-基甲基)-乙酰胺；^{(2-(2，6-二氧代(3-哌啶基)-1,3-二氧代異二氫吲哚-4-基)甲基}環(huán)丙基-甲酰胺；2-氯-N-((2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-l,3-二氧代異二氫吲哚-4-基) 甲基}乙酰胺；N-(2-(2,6-二氧代(3-哌啶))-l,3-二氧代異二氫吲哚-4-基)-3-吡啶基甲酰胺；3-{1-氧代-4-(苯甲基氨基)異二氫吲哚-2-基}哌啶-2，6-二 酮；2-(2,6-二氧代(3-哌啶基》-4-(苯甲基氨基)異二氫吲哚-l,3-二酮;N-{(2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-1,3-二氧代異二氫吲哚-4-基)甲基}丙酰胺； N-((2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-l,3-二氧代異二氫吲哚-4-基)甲基)-3-吡啶 基甲酰胺；N-《(2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-l，3-二氧代異二氫吲哚-4-基)甲 基}庚酰胺；N-((2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-l,3-二氧代異二氫吲哚-4-基) 甲基}-2-呋喃基甲酰胺；(N-(2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-l,3-二氧代異二氫 吲哚-4-基)氨基甲酰}乙酸甲酯；N-(2-(2，6-二氧代(3-哌啶基))-l,3-二氧代 異二氫W咮-4-基)戊酰胺；N-(2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-l,3-二氧代異二氫 "引咮-4-基)-2-噻吩基甲酰胺；N-U2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-l,3-二氧代異 二氫吲哚-4-基]甲基}( 丁基氨基)甲酰胺；N-{[2-(2,6- 二氧代(3 -哌啶 基))-1，3-二氧代異二氫吲哚-4-基]甲基}(辛基氨基)甲酰胺；和^{[2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-1,3-二氧代異二氫吲哚-4-基]甲基}(苯甲基氨基)甲酰 胺。
其它具體免疫調(diào)節(jié)化合物屬于美國(guó)專利申請(qǐng)公開(kāi)No.2002/0045643、 國(guó)際申請(qǐng)公開(kāi)WO98/54170和美國(guó)專利No.6,395,754中所述的一類異吲 哚-酰亞胺，這些文獻(xiàn)均納入本文作為參考。代表化合物具有式III:
<formula>formula see original document page 31</formula>及其藥學(xué)上可接受的鹽、水合物、溶劑化物、包合物、對(duì)映體、非 對(duì)映體、外消旋化合物和立體異構(gòu)體混合物，式中
X和Y之一是C二O，另一個(gè)是CH2或C二0; R是H或CH2OCOR';
(i)R1、 R2、 RS或R"各自分別是卣素、1至4個(gè)碳原子的烷基或1至 4個(gè)碳原子的烷氧基，或(ii)R1、 R2、 RS或R"之一是硝基或-NHR5,其它 R1、 R2、 113或114是氫；
RS是氫或1至8個(gè)碳原子的烷基；
R"是氫、l至8個(gè)碳原子的烷基、苯并、氯或氟；
R'是R7-CHR1()-N(R8R9);
R〒是間亞苯基或?qū)啽交?(CnH2n)-，其中n的值為0至4;
118和119各自分別是氫或1至8個(gè)碳原子的烷基，或R8和R9—起為 四亞甲基、亞戊基、六亞甲基或-CH2CH2X!CH2CH2-,式中X,是-O-、 -S-、 或-NH-;
R"是氫，1至8個(gè)碳原子的烷基或苯基；和
*代表手性碳中心。
其它代表化合物具有下式<formula>formula see original document page 32</formula>
式中
X和Y之一是C=0， X和Y的另 一個(gè)是C=0或CH2;
(i)R1、 R2、 R^或I^各自分別是卣素、1至4個(gè)碳原子的烷基或1至4個(gè)碳原子的烷氧基，或(ii)R1、 R2、 W或R4之一是-NHR5，其它R1、
R2、 113或114是氫；
Rs是氫或1至8個(gè)碳原子的烷基；W是氫、l至8個(gè)碳原子的烷基、苯并、氯或氟；R7是間亞苯基或?qū)啽交?(C。H2n)-，其中n的值為0至4;RS和R9各自分別是氫或l至8個(gè)碳原子的烷基，或RS和R"—起為
四亞甲基、亞戊基、六亞甲基或-CH2CH2X!CH2CH2-,式中X,是-O-、 -S陽(yáng)、
或-NH畫(huà)；
R"是氫、1至8個(gè)碳原子的烷基或苯基。其它代表化合物具有下式
式中
X和Y之一是C=0， X和Y的另 一個(gè)是C=0或CH2;
(i)R1、 R2、 RS或I^各自分別是鹵素、1至4個(gè)碳原子的烷基或1至4個(gè)碳原子的烷氧基；或(ii)R1、 R2、 R3或R4之一是硝基或受保護(hù)的氨基，其它R1、 R2、 113或114是氬；和
W是氫、l至8個(gè)碳原子的烷基、苯并、氯或氟。
其它代表化合物具有下式
33式中
X和Y之一是C=0, X和Y的另 一個(gè)是C=0或CH2;
(i)R1、 R2、 R 或I^各自分別是鹵素、1至4個(gè)碳原子的烷基或1至4個(gè)碳原子的烷氧基；或(ii)R1、 R2、 R3或W之一是-NHR5，其它R1、R2、 113或114是氳；
R5是氫或1至8個(gè)碳原子的烷基、或CO-R7-CH(R1G)NR8R9，其中R7、 R8、 R9和R"各自如本文所定義；和
W是1至8個(gè)碳原子的烷基、苯并、氯或氟。
所述化合物的具體例子具有下式
式中
X和Y之一是C=0， X和Y的另 一個(gè)是C=0或CH2;
R"是氫、l至8個(gè)碳原子的烷基、苯甲基、氯或氟。
R"是間亞苯基、對(duì)亞苯基或-(CnH2n)-，其中n的值為0至4;
RS和R9各自分別是氫或1至8個(gè)碳原子的烷基，或RS和R"—起為四亞甲基、亞戊基、六亞甲基或-CH2CH2X'CH2CH2-，式中Xi是-0-、 -S-、或隱麗-;和R"是氫、1至8個(gè)碳原子的烷基或苯基。
具體免疫調(diào)節(jié)化合物是4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-異二氫吲哚 -1，3-二酮和3-(4-氨基-1-氧代-1,3-二氫-異吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮。
4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-異二氫吲哚-l,3-二酮具有如下化學(xué)
并在G.W. Muller等人的美國(guó)專利No.5,635,517中有描述，在此將其全 部?jī)?nèi)容納入本文作為參考。4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-異二氫吲哚 -1,3 - 二酮可使用商業(yè)上可獲得的原料通過(guò)常規(guī)的有機(jī)合成方法制備。例 如但不限于如美國(guó)專利No.5,635,517所述制備4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-異二氫吲哚-l,3-二酮。
3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氫-異吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮是一種具有如下 化學(xué)結(jié)構(gòu)的免疫調(diào)節(jié)化合物
并在G.W. Muller等人的美國(guó)專利No.5，635，517中有描述，在此將其全 部?jī)?nèi)容納入本文作為參考。3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氫-異吲哚-2-基)-哌啶 -2,6-二酮可使用商業(yè)上可獲得的原料通過(guò)常規(guī)的有機(jī)合成方法制備。例 如但不限于如美國(guó)專利No.5,635,517所述制備3-(4-氨基-1-氧代-1,3-二氪-
結(jié)構(gòu):
P O,
35異吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮。
在另 一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的具體免疫調(diào)節(jié)化合物包括3-(4-氨基 -1 -氧代-1,3- 二氫-異吲咮-2-基)-哌啶-2,6- 二酮的多晶型形式，例如公開(kāi)在 2003年9月4日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)60/499,723和2004年9月3日提 交的相應(yīng)美國(guó)非臨時(shí)申請(qǐng)中的形式A、 B、 C、 D、 E、 F、 G和H，在此 通過(guò)引用的方式將該兩專利申請(qǐng)并入本文。例如，3-(4-氨基-1-氧代-1，3-二氫-異吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮的形式A是非溶劑化的結(jié)晶物，其可以 從非水性溶劑體系中得到。形式A的X-射線粉末衍射圖在約8、 14.5、 16、 17.5、 20.5、 24和26度20處包含明顯峰，其差示掃描量熱法最大熔 融溫度約270。C。形式A弱吸濕或不吸濕，是3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氫 -異p引哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮的至今熱力學(xué)最穩(wěn)定的無(wú)水多晶型。
3-(4-氨基-l陽(yáng)氧代-l,3-二氫-異吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮的形式B是
半水合結(jié)晶物，其可以從各種溶劑體系中得到，包括但不限于己烷、甲 苯和水。形式B的X-射線粉末衍射圖在約16、 18、 22和27度26處包 含明顯峰，DSC曲線在約146和268。C出現(xiàn)吸熱，通過(guò)熱臺(tái)顯微實(shí)驗(yàn)證 實(shí)是脫水和熔融。互變研究表明，形式B在水性溶劑體系中轉(zhuǎn)化成形式 E,在丙酮和其它無(wú)水體系中轉(zhuǎn)化成其它形式。
3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氫-異吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮的形式C是 半溶劑化結(jié)晶物，其可以從溶劑例如但不限于丙酮中得到。形式C的 X-射線粉末衍射圖在約15.5和25度20處包含明顯峰，其差示掃描量熱 法最大熔融溫度約269°C。形式C在低于約85%RH下不吸濕，但是在 高相對(duì)濕度下可以轉(zhuǎn)化成形式B。
3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氫-異吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮的形式D是結(jié)晶的溶劑化多晶型物，其從乙腈和水的混合物中制備。形式D的X-
射線粉末衍射圖在約27和28度20處包含明顯峰，其差示掃描量熱法最 大熔融溫度約270。C。形式D弱吸濕或不吸濕，但是當(dāng)在高相對(duì)濕度下 壓力下， 一般會(huì)轉(zhuǎn)化成形式B。
3 -(4-氨基-1 -氧代-1,3 - 二氫-異吲哚-2-基)-哌啶-2,6- 二酮的形式E是 二水合的結(jié)晶物，其可通過(guò)使3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氫-異吲哚-2-基)-派咬-2,6-二酮在水中形成漿料，并在約9: l的丙酮水的溶劑體系中緩 慢蒸發(fā)3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氬-異吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮來(lái)獲得。形 式E其X-射線粉末衍射圖在約20、 24.5和29度26處包含明顯峰，其差 示掃描量熱法最大熔融溫度約269° C 。形式E在丙酮溶劑體系中可以轉(zhuǎn) 化成形式C,在THF溶劑體系中可以轉(zhuǎn)化成形式G。在水性溶劑體系中， 形式E是最穩(wěn)定的形式。形式E的反溶解實(shí)驗(yàn)表明，當(dāng)在約125。C加熱 約5分鐘時(shí)，形式E轉(zhuǎn)化成形式B。在175°C加熱約5分鐘時(shí)，形式B 轉(zhuǎn)化成形式F。
3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氫-異吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮的形式F是 非溶劑化的結(jié)晶物，其可通過(guò)使形式E脫水得到。形式F的X-射線粉末 衍射圖在約19、 19.5和25度20處包含明顯峰，其差示掃描量熱法最大 熔融溫度約269°C。
3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氫-異吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮的形式G是 非溶劑化的結(jié)晶物，其可以從形式B和E在溶劑例如但不限于四氫呋喃 (THF)中的漿料中得到。形式G的X-射線粉末衍射圖在約21、 23和24.5 度20處包含明顯峰，其差示掃描量熱法最大熔融溫度約267°C。
3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氫-異吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮的形式H是部分水合(約0.25摩爾)的結(jié)晶物，其可通過(guò)使形式E暴露在0%相對(duì)濕 度中得到。形式H的X-射線粉末衍射圖在約15、 26和31度26處包含 明顯峰，其差示掃描量熱法最大熔融溫度約269°C。
氧代-3-氟哌啶-3-基)異二氫吲哚和1,3-二氧代-2-(2，6-二氧代-3-氟哌啶-3-基)異二氫p引咮，如在美國(guó)專利No.5,874,448和5,955,476中描述的那些， 這兩個(gè)專利通過(guò)引用并入本文。代表性的化合物具有下式<formula>formula see original document page 38</formula>
其中，Y是氧或H2，和
R1、 R2、 113和114各自獨(dú)立地是氫、卣素、l-4個(gè)碳原子的烷基、1-4 個(gè)碳原子的烷氧基、或氨基。
本發(fā)明的其它具體免疫調(diào)節(jié)化合物包括但不限于美國(guó)專利No. 5,798,368所述的四取代2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-l-氧代異二氫吲哚，該 專利通過(guò)引用納入本文。代表化合物具有下式<formula>formula see original document page 38</formula>
其中，R1、 R2、 113和114各自獨(dú)立地為卣素、l-4個(gè)碳原子的烷基或 1-4個(gè)碳原子的烷氧基。
其它具體免疫調(diào)節(jié)化合物包括但不限于美國(guó)專利No.6,403，613所述
l-氧代-2-(2，6-二的1-氧代和1,3-二氧代-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異二氫吲哚，該專利通 過(guò)引用納入本文。代表化合物具有下式
其中
Y是氧或H2，
Ri和R"中的一個(gè)為卣素、烷基、烷氧基、烷氨基、二烷基氨基、氰 基或氨基甲酰基，W和I^中另一個(gè)獨(dú)立地為氫、鹵素、烷基、烷氧基、 烷氨基、二烷基氨基、氰基或氨基甲?；?br> W是氫、烷基或苯甲基。
該化合物的具體例子具有下式
其中，R^和R"中的一個(gè)為卣素、l-4個(gè)碳原子的烷基、1-4個(gè)碳原 子的烷氧基、二烷基氨基(其中每個(gè)烷基含有1-4個(gè)碳原子)、氰基或氨基 甲?；?，
R^和W中另一個(gè)獨(dú)立地為氫、卣素、l-4個(gè)碳原子的烷基、1-4個(gè) 碳原子的烷氧基、烷氨基(其中所述烷基含有1-4個(gè)碳原子)、二烷基氨基 (其中每個(gè)烷基含有1-4個(gè)碳原子)、氰基或氨基甲?；?br> R 是氫、1-4個(gè)碳原子的烷基或苯甲基。具體的例子包括但不限于 l-氧代-2(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-甲基異二氫吲哚。其它代表性的化合物具有下式:
其中，RJ和R"中的一個(gè)為卣素、l-4個(gè)碳原子的烷基、1-4個(gè)碳原 子的烷氧基、二烷基氨基(其中每個(gè)烷基含有1-4個(gè)碳原子)、氰基或氨基 甲酰基，
W和R2中另 一個(gè)獨(dú)立地為氫、卣素、l-4個(gè)碳原子的烷基、1-4個(gè) 碳原子的烷氧基、烷氨基(其中所述烷基含有1-4個(gè)碳原子)、二烷基氨基 (其中每個(gè)烷基含有1-4個(gè)碳原子)、氰基或氨基甲?；?br> W是氫、1-4個(gè)碳原子的烷基或苯甲基。
本發(fā)明的其它具體免疫調(diào)節(jié)化合物包括但不限于美國(guó)專利 No.6，380,239和2004年7月28日提交的共同未決美國(guó)申請(qǐng)No. 10/900,270 所述的在二氫"引哚環(huán)的4-位或5-位被取代的1-氧代和1,3-二氧代異二氫 p引哚，該專利在此通過(guò)引用并入本文。代表性的化合物具有下式
其中，表示為<:*的^_原子構(gòu)成了手性中心(當(dāng)n不是0且R1與R2 不相同時(shí))；Xi和xz之一是氨基、硝基、1-6個(gè)碳原子的烷基或NH-Z， 而X1或X2中另 一個(gè)是氫；R1和R2各自獨(dú)立地為羥基或NH-Z; R3是氫、 l-6個(gè)碳原子的烷基、卣素或卣代烷基；Z是氫、芳基、l-6個(gè)碳原子的 烷基、甲酰基或1-6個(gè)碳原子的?；?；且n的值為0、 l或2;條件是，
9 如果乂1是氨基且11是1或2,則Ri和R"都不是羥基；以及其鹽。 其它代表性的化合物具有下式
^^^^^^^ 曾
其中，當(dāng)n不是0且W與R"不相同時(shí)，表示為(:*的碳原子構(gòu)成手 性中心；Xi和XS之一是氨基、硝基、1-6個(gè)碳原子的烷基或NH-Z，而 乂]或乂2中另一個(gè)是氫；R/和W各自獨(dú)立地為羥基或NH-Z; R3是1-6 個(gè)碳原子的烷基、鹵素或氫；Z是氫、芳基或1-6個(gè)碳原子的烷基或酰 基；且n的值為0、 1或2。
具體例子包括但不限于分別具有如下結(jié)構(gòu)的2-(4-氨基-1 -氧代-1,3-二氫-異吲咪-2-基)-4-氨基甲?；?丁酸和4-(4-氨基-1 -氧代-1,3- 二氫-異吲 哚_2-基)-4-氨基甲酰基-丁酸，和其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物、前藥、 和立體異構(gòu)體
代表性的其它化合物具有下式:其中，表示為C^的^5炭原子構(gòu)成了手性中心(當(dāng)n不是0且R1與R2 不相同時(shí))；Xi和xs之一是氨基、硝基、1-6個(gè)碳原子的烷基或NH-Z， X'或X、々另一個(gè)是氫；R^和W各自獨(dú)立地是羥基或NH-Z; R3是1-6 個(gè)碳原子的烷基、卣素或氫；Z是氫、芳基、或l-6個(gè)碳原子的烷基或 酰基；并且n的值為0、 l或2;以及其鹽。
具體例子包括但不限于具有分別如下結(jié)構(gòu)的4-氨基甲?；?-4-{4-[(呋喃-2-基-甲基)-氨基]-1,3-二氧代-1,3-二氫-異吲哚-2-基}-丁酸, 4-氨基甲酰基-2-{4-[(呋喃-2-基-甲基)-氨基]-1,3-二氧代-1,3-二氫-異吲哚 -2-基}-丁酸，2-{4-[(呋喃-2-基-甲基)-氨基]-1,3-二氧代-1,3-二氫-異吲哚 -2-基}-4-苯基氨基甲?；?丁酸，和2-{4-[(呋喃-2-基-甲基)-氨基]-1,3-二 氧代-1，3-二氫-異吲哚-2-基}-戊二酸，和其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物、 前藥、和立體異構(gòu)體
該化合物的其它具體例子具有下式:其中，X^口X"之一是硝基或NH-Z,而X'或X"中的另一個(gè)是氬； R1和R2各自獨(dú)立地為幾基或NH-Z; W是1-6個(gè)碳原子的烷基、鹵素或氬；
Z是氫、苯基、1-6個(gè)碳原子的酰基或1-6個(gè)碳原子的烷基；和 n的值為0、 1或2;
條件是，如果Xi和X"之一是硝基且n是1或2，則R'和I^不是羥 基；和
如果-COI^和-(CH2)nCOR1不相同，則表示為C^的碳原子構(gòu)成手性 中心。其它代表性的化合物具有下式
其中，^和XZ之一是1-6個(gè)碳原子的烷基； R1和R2各自獨(dú)立地為鞋基或NH-Z; R 是1-6個(gè)碳原子的烷基、卣素或氫；
Z是氫、苯基、1-6個(gè)碳原子的?；?-6個(gè)碳原子的烷基；和 n的值為0、 1或2;和
如果-COI^和-(CH2)nCOR1不相同，則表示為C"々碳原子構(gòu)成手性 中心。
其它具體免疫調(diào)節(jié)化合物包括但不限于美國(guó)專利No.6,458,810描述 的2-位用2,6-二氧代-3-羥基哌啶-5-基取代的異二氫吲咮-1-酮和異二氫 p引咮-l,3-二酮，該專利通過(guò)引用納入本文。代表性的化合物具有下式
女1 o
> " 貧其中
用*表示的碳原子構(gòu)成手性中心；
X是-C(0)-或-CH2-;
R1是1-8個(gè)碳原子的烷基或-NHR3;
R"是氫、1-8個(gè)碳原子的烷基或卣素；和
R3是氫；
l-8個(gè)碳原子的烷基，未取代或被1-8個(gè)碳原子的烷氧基、卣素、氨 基或1_4個(gè)碳原子的烷氨基取代； 3-18個(gè)碳原子的環(huán)烷基；
苯基，未取代或被1-8個(gè)碳原子的烷基、l-8個(gè)碳原子的烷氧基、鹵 素、氨基或1-4個(gè)碳原子的烷氨基取代；
苯甲基，未取代或被1-8個(gè)碳原子的烷基、l-8個(gè)碳原子的烷氧基、 卣素、氨基或1-4個(gè)碳原子的烷氨基取代，或-COR4,其中
R4是氫，
l-8個(gè)碳原子的烷基，未取代或被1-8個(gè)碳原子的烷氧基、卣素、氨 基或1_4個(gè)碳原子的烷氨基取代， 3-18個(gè)碳原子的環(huán)烷基，
苯基，未取代或被1-8個(gè)碳原子的烷基、l-8個(gè)碳原子的烷氧基、卣 素、氨基或1-4個(gè)碳原子的烷氨基取代,或
苯甲基，未取代或被1-8個(gè)碳原子的烷基、l-8個(gè)碳原子的烷氧基、卣素、氨基或1-4個(gè)碳原子的烷氨基取代。
免疫調(diào)節(jié)化合物可通過(guò)商業(yè)購(gòu)得或按照本說(shuō)明書(shū)所公開(kāi)的專利或?qū)?利申請(qǐng)中所描述的方法來(lái)制備。此外，可以不對(duì)稱合成或用已知的拆分 劑或手性柱以及其它標(biāo)準(zhǔn)有機(jī)化學(xué)合成技術(shù)拆分光學(xué)純的化合物。
各種免疫調(diào)節(jié)化合物含有 一 個(gè)或多個(gè)手性中心，可以以對(duì)映體的外 消旋混合物或非對(duì)映體混合物存在。本發(fā)明包括使用這種化合物的立體 異構(gòu)體純的形式以及使用那些形式的混合物。例如，可以在本發(fā)明的方 法和組合物中使用含有等量或不等量具體免疫調(diào)節(jié)化合物的對(duì)映體的混 合物。可以用不對(duì)稱合成或使用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)例如手性柱或手性拆分劑拆分
這些異4勾體。例A口參見(jiàn)Jacques, J.等人，五waw〃附oers, i ace附a&s i eso/w"(ms (Wiley-Interscience, New York, 1981); Wilen， S.H.等人, r"ra/7eA0M 33: 2725 (1977); Eliel， E丄.,5Vem3c/zew/W^y o/ Cflr6o" C謂; 畫(huà)^ (McGraw-Hill, NY， 1962);和Wilen, S.H.， ！Tato 々e她朋(i Pp"ca/i eso/w//<ms ， 268頁(yè)(E丄.Eliel編，Univ. of Notre Dame Press, Notre Dame， IN， 1972)。
需要注意的是，如果所示結(jié)構(gòu)和該結(jié)構(gòu)的名稱之間有差異，應(yīng)以所 示結(jié)構(gòu)為準(zhǔn)。此外，如果沒(méi)有用例如粗線或虛線指出結(jié)構(gòu)或結(jié)構(gòu)部分的 立體化學(xué)，則應(yīng)當(dāng)理解為該結(jié)構(gòu)或結(jié)構(gòu)部分包括其所有立體異構(gòu)體。
5.3曲古抑菌素A,羥基^^和丙戊酸
曲古抑菌素A(TSA)是一種具有如下結(jié)構(gòu)的組蛋白脫乙?；敢种?br> 劑曲古抑菌素A可用商業(yè)上可獲得的原料通過(guò)常規(guī)的有機(jī)合成來(lái)制
備。曲古抑菌素A也可從商業(yè)途徑獲得(如，Sigma-Aldrich, CAS RN: 58880-19-6)。
羥基脲(HU)是 一 種具有如下結(jié)構(gòu)的核苷酸還原酶
羥基脲可用商業(yè)上可獲得的原料通過(guò)常規(guī)的有機(jī)合成來(lái)制備。羥基 脲也可從商業(yè)途徑獲得(如Sigma-Aldrich， CAS RN: 127-07-1)。 丙戊酸是一種具有如下結(jié)構(gòu)的組蛋白脫乙?；敢种苿?br> 丙戊酸可用商業(yè)上可獲得的原料通過(guò)常規(guī)的有機(jī)合成來(lái)制備。丙戊 酸也可從商業(yè)途徑獲得(如，Sigma-Aldrich, CAS RN: 99-66-1 ，或其鈉鹽， CAS RN: 1069-66-5)。
5.4應(yīng)用和治療方法
在一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了增加CD34+造血千細(xì)胞體外或體內(nèi) 擴(kuò)增的方法，該方法包括使CD34+造血干細(xì)胞在體外或體內(nèi)與有效量的免疫調(diào)節(jié)化合物(如，4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-異二氫吲哚-1,3-二酮或3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氫-異吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮)或其藥學(xué) 上可接受的鹽、溶劑化物、水合物、前藥、立體異構(gòu)體或多晶型，和丙 戊酸、羥基脲或曲古抑菌素A或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物、水合 物、前藥、立體異構(gòu)體或多晶型接觸。在某些實(shí)施方案中，相對(duì)于未接 觸本發(fā)明所述組合的細(xì)胞，CD34+造血干細(xì)胞擴(kuò)增在體外或體內(nèi)大約增 加25%、 50%、 100%、 200%、 300%、 400%、 500%或1000%。
在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了治療、預(yù)防或控制可通過(guò)〔034+ 造血干細(xì)胞在體外或體內(nèi)擴(kuò)增治療、預(yù)防或控制的疾病或病癥或其癥狀 的方法，該方法包括給予有此需要的患者有效量的免疫調(diào)節(jié)化合物(如， 4-(氨基)-2-(2，6-二氧代(3-哌啶基))-異二氫吲哚-l,3-二酮或3-(4-氨基-1-氧代-l,3-二氫-異^哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮)或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑 化物、水合物、前藥、立體異構(gòu)體或多晶型，和丙戊酸、羥基脲或曲古 抑菌素A或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物、水合物、前藥、立體異構(gòu) 體或多晶型。
在一具體實(shí)施方案中，所述可通過(guò)CD34+造血干細(xì)胞擴(kuò)增治療、預(yù) 防或控制的疾病或病癥是血液系統(tǒng)疾病或病癥，如骨髓增生異常綜合征、 多發(fā)性骨髓瘤、(3血紅蛋白病、白血病、骨髓癌、淋巴瘤、骨髓增生性 疾病、非何杰金氏淋巴瘤、慢性淋巴細(xì)胞白血病、慢性髓細(xì)胞性白血病、 急性淋巴母細(xì)胞白血病、急性粒細(xì)胞性白血病或急性原始粒細(xì)胞性白血 病。
在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了治療、預(yù)防或控制血液系統(tǒng)疾病 或病癥(如血液系統(tǒng)癌癥)的方法，該方法包括給予有此需要的患者有效
47量的免疫調(diào)節(jié)化合物(如，4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-異二氫吲哚 -1,3-二酮或3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氫-異吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮)或其 藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物、水合物、前藥、立體異構(gòu)體或多晶型， 和丙戊酸、羥基脲或曲古抑菌素A或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物、 水合物、前藥、立體異構(gòu)體或多晶型。
在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了治療、預(yù)防或控制白血病的方法， 該方法包括給予有此需要的患者有效量的免疫調(diào)節(jié)化合物(如，4-(氨 基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-異二氫吲哚-l,3-二酮或3-(4-氨基-1-氧代-1,3-二氫-異吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮)或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物、水合 物、前藥、立體異構(gòu)體或多晶型，和丙戊酸、羥基脲或曲古抑菌素A或其 藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物、水合物、前藥、立體異構(gòu)體或多晶型。
在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了治療、預(yù)防或控制套細(xì)胞淋巴瘤 的方法，該方法包括給予有此需要的患者有效量的免疫調(diào)節(jié)化合物(如， 4-(氨基)-2-(2，6-二氧代(3-哌啶基))-異二氫吲哚-l，3-二酮或3-(4-氨基-l-氧代 -1,3-二氫-異吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮)或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物、 水合物、前藥、立體異構(gòu)體或多晶型，和丙戊酸、羥基脲或曲古抑菌素A 或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物、水合物、前藥、立體異構(gòu)體或多晶型。
在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了骨髓移植的方法，該方法包括在 體外使骨髓與有效量的免疫調(diào)節(jié)化合物(如，4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶 基))-異二氫吲哚-l,3-二酮或3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氫-異吲哚-2-基)-哌啶 -2,6-二酮)或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物、水合物、前藥、立體異構(gòu)體 或多晶型，和丙戊酸、羥基脲或曲古抑菌素A或其藥學(xué)上可接受的鹽、 溶劑化物、水合物、前藥、立體異構(gòu)體或多晶型接觸，然后移植給所需患者。
在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供骨髓重建的方法，該方法包括給予
有此需要的患者有效量的免疫調(diào)節(jié)化合物(如，4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-異二氫吲哚-l,3-二酮或3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氪-異吲哚-2-基)-哌 咬-2,6-二酮)或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物、水合物、前藥、立體異構(gòu) 體或多晶型，和丙戊酸、羥基脲或曲古抑菌素A或其藥學(xué)上可接受的鹽、 溶劑化物、水合物、前藥、立體異構(gòu)體或多晶型。
在一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了已進(jìn)行或正在進(jìn)行化療和/或放
療的患者的骨髓重建的方法，該方法包括給予有此需要的患者有效量的 免疫調(diào)節(jié)化合物(如，4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-異二氫吲哚-l,3-二 酮或3-(4-氨基-l-氧代-l，3-二氫-異吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮)或其藥學(xué)上可 接受的鹽、溶劑化物、水合物、前藥、立體異構(gòu)體或多晶型，和丙戊酸、 羥基脲或曲古抑菌素A或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物、水合物、前 藥、立體異構(gòu)體或多晶型。
在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了骨髓重建方法，該方法包括使骨 髓與有效量的免疫調(diào)節(jié)化合物(如，4-(氨基)-2-(2，6-二氧代(3-哌啶基))-異二 氫吲哚-l，3-二酮或3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氫-異吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮)，
或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物、水合物、前藥、立體異構(gòu)體或多晶型， 和丙戊酸、羥基脲或曲古抑菌素A或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物、 水合物、前藥、立體異構(gòu)體或多晶型接觸。
在一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了已進(jìn)行過(guò)或正在進(jìn)行化療或放 療的患者的骨髓重建的方法，該方法包括使骨髓與有效量的免疫調(diào)節(jié)化 合物(如，4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-異二氫吲哚-l,3-二酮或3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氫-異^咮-2-基)-哌啶-2,6-二酮)或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶
劑化物、水合物、前藥、立體異構(gòu)體或多晶型，和丙戊酸、羥基脲或曲古
抑菌素A或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物、水合物、前藥、立體異構(gòu)體 或多晶型接觸。
與CD34+造血干細(xì)胞相關(guān)的具體疾病包括但不限于血液系統(tǒng)癌癥。 在一實(shí)施方案中，血液系統(tǒng)癌癥是多發(fā)性骨髓瘤、(3血紅蛋白病、白血 病、骨髓癌、淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤、慢性淋巴細(xì)胞白血病、慢性 髓細(xì)胞性白血病、急性淋巴母細(xì)胞白血病、急性粒細(xì)胞性白血病或急性 原始粒細(xì)胞性白血病。
CD34+造血干細(xì)胞的具體應(yīng)用包括但不限于骨髓重建和骨髓移植。 因此，在一實(shí)施方案中，本發(fā)明4是供了治療、預(yù)防或控制血液系統(tǒng)疾病 或病癥的方法(如，血液系統(tǒng)癌癥)，該方法包括給予有此需要的患者有 效量的CD34+造血干細(xì)胞，該造血干細(xì)胞已經(jīng)與或正與有效量的免疫調(diào) 節(jié)化合物(如，4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-異二氫吲哚-l,3-二酮或 3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氫-異吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮)或其藥學(xué)上可接受 的鹽、溶劑化物、水合物、前藥、立體異構(gòu)體或多晶型，和丙戊酸、羥基 脲或曲古抑菌素A或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物、水合物、前藥、 立體異構(gòu)體或多晶型接觸。
本發(fā)明所述的可用免疫調(diào)節(jié)化合物(如，4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶 基))-異二氫吲哚-l,3-二酮或3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氦-異吲哚-2-基)-哌啶 -2,6-二酮)和丙戊酸、羥基J象或曲古抑菌素A聯(lián)合治療、預(yù)防和/或控制的 具體疾病或病癥包括但不限于骨髓增生異常綜合征、多發(fā)性骨髓瘤、P 血紅蛋白病、白血病、骨髓癌、淋巴瘤、骨髓增生性疾病、非何杰金氏
50淋巴瘤、慢性淋巴細(xì)胞白血病、慢性髓細(xì)胞性白血病、急性淋巴母細(xì)胞 白血病、急性粒細(xì)胞性白血病或急性原始粒細(xì)胞性白血病。
在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了治療、預(yù)防或控制骨髓增生異常 綜合征、多發(fā)性骨髓瘤、P血紅蛋白病、白血病、骨髓癌、淋巴瘤、骨 髓增生性疾病、非何杰金氏淋巴瘤、慢性淋巴細(xì)胞白血病、慢性髓細(xì)胞 性白血病、急性淋巴母細(xì)胞白血病、急性粒細(xì)胞性白血病或急性原始粒 細(xì)胞性白血病的方法，該方法包括給予有此需要的患者有效量的免疫調(diào)
節(jié)化合物(如，4-(氨基)-2-(2,6- 二氧代(3-哌啶基))-異二氫吲哚-1,3-二酮或 3-(4-氨基-l-氧代-l，3-二氫-異吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮)，或其藥學(xué)上可接受 的鹽、溶劑化物、水合物、前藥、立體異構(gòu)體或多晶型，和丙戊酸、羥基 脲或曲古抑菌素A或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物、水合物、前藥、 立體異構(gòu)體或多晶型接觸。
在另 一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了增加細(xì)胞內(nèi)胎兒血紅蛋白表達(dá)的 方法，該方法包括使表達(dá)胎兒血紅蛋白的細(xì)胞與有效量的免疫調(diào)節(jié)化合 物(如，4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-異二氫吲哚-l,3-二酮或3-(4-氨基 -1-氧代-1,3-二氫-異丐1咮-2-基)-哌啶-2,6-二酮)或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑 化物、水合物、前藥、立體異構(gòu)體或多晶型，和丙戊酸、羥基脲或曲古抑 菌素A或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物、水合物、前藥、立體異構(gòu)體或 多晶型接觸。
在另 一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了在由此需要的患者中增加胎兒血 紅蛋白表達(dá)的方法，該方法包括給予有此需要的患者有效量的免疫調(diào)節(jié) 化合物(如，4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-異二氫吲哚-l,3-二酮或3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氬-異吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮)或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物、水合物、前藥、立體異構(gòu)體或多晶型，和丙戊酸、羥基脲或曲 古抑菌素A或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物、水合物、前藥、立體異構(gòu) 體或多晶型。
在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了誘導(dǎo)惡性細(xì)胞凋亡的方法，該方
法包括使惡性細(xì)胞與有效量的免疫調(diào)節(jié)化合物(如，4-(氨基)-2-(2，6-二氧代 (3-哌啶基))-異二氫吲哚-l,3-二酮或3-(4-氨基-1-氧代-1,3-二氫-異吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮)或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物、水合物、前藥、立 體異構(gòu)體或多晶型，和丙戊酸、羥基脲或曲古抑菌素A或其藥學(xué)上可接
受的鹽、溶劑化物、水合物、前藥、立體異構(gòu)體或多晶型接觸。
在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了抑制惡性細(xì)胞增殖的方法，該方 法包括使惡性細(xì)胞與有效量的免疫調(diào)節(jié)化合物(如，4-(氨基)-2-(2,6-二氧代 (3-哌啶基))-異二氫"引咮-l,3-二酮或3-(4-氨基-1-氧代-1,3-二氫-異吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮)或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物、水合物、前藥、立 體異構(gòu)體或多晶型，和丙戊酸、羥基脲或曲古抑菌素A或其藥學(xué)上可接
受的鹽、溶劑化物、水合物、前藥、立體異構(gòu)體或多晶型接觸。
在一實(shí)施方案中，本發(fā)明所公開(kāi)的方法包括使用免疫調(diào)節(jié)化合物 (如，4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-異二氫吲哚-l,3-二酮或3-(4-氨基-1-氧代-l,3-二氫-異p引咮-2-基)-哌啶-2,6-二酮)的基本上純的(S)對(duì)映體或基本 上純的(R)對(duì)映體。
在本發(fā)明所述的任何用途或方法中的免疫調(diào)節(jié)化合物(如，4-(氨 基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-異二氫吲哚-l,3-二酮或3-(4-氨基-1-氧代-1,3-二氫-異吲咮-2-基)-哌啶-2，6-二酮)或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物、水合 物、前藥、立體異構(gòu)體或多晶型，和丙戊酸、羥基脲或曲古抑菌素A或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物、水合物、前藥、立體異構(gòu)體或多晶型可同 時(shí)、同步或依次給藥。
5.4.1周期性治療
在某些實(shí)施方案中，周期性地給予患者免疫調(diào)節(jié)化合物(如，4-(氨 基)-2-(2，6-二氧代(3-哌啶基))-異二氫吲哚-l，3-二酮或3-(4-氨基-1-氧代'-1,3-二氫-異巧l咮-2-基)-哌啶-2，6-二酮)和丙戊酸、羥基脲或曲古抑菌素A。周 期性治療包括給予一段時(shí)間的第 一試劑，接著休息(不治療)一段時(shí)間， 并重復(fù)該給藥順序。周期性治療可降低對(duì)一種或多種治療形成的耐受性， 避免或減輕該治療的副作用，和/或提高該治療的效果。
因此，在一具體實(shí)施方案中，將免疫調(diào)節(jié)化合物(如，4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-異二氫吲哚-l，3-二酮或3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氪-異吲 咮-2-基)-哌啶-2,6-二酮)與丙戊酸、羥基脲或曲古抑菌素A持續(xù)地每天聯(lián) 合使用，起始劑量為0.1至5mg/日，以1至10mg/日的劑量遞增(每周) 至最大劑量50mg/日，只要患者對(duì)治療耐受。在另一實(shí)施方案中，在一 個(gè)四或六周周期中，將免疫調(diào)節(jié)化合物(如，4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶 基))-異二氫吲哚-l,3-二酮或3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氫-異吲哚-2-基)-哌啶 -2,6-二酮)與丙戊酸、羥基脲或曲古抑菌素A以大約1、 5、 10或25mg/ 日的量，或以大約10mg/日的量聯(lián)合使用三至四周，然后休息一或兩周。
在一實(shí)施方案中，將免疫調(diào)節(jié)化合物(如，4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-異二氫吲哚-l,3-二酮或3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氳-異吲哚-2-基)-哌 啶-2,6-二酮)和丙戊酸、羥基l泉或曲古抑菌素A經(jīng)口服給藥，在四至六周 的周期中，在給予丙戊酸、羥基"泉或曲古抑菌素A 30或60分鐘之前給
53予免疫調(diào)節(jié)化合物(如，4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-異二氫吲哚-1,3-二酮或3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氬-異吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮)。在另一實(shí) 施方案中，所述聯(lián)合在每個(gè)周期中通過(guò)靜脈輸注大約90分鐘給予。在一 具體實(shí)施方案中， 一個(gè)周期包括給予大約1至25mg/日的免疫調(diào)節(jié)化合 物(如，4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-異二氫吲哚-l,3-二酮或3-(4-氨基 -1-氧代-1,3-二氫-異"引咮-2-基)-派啶-2，6-二酮)，和大約1至2000mg/m2/EI 、 大約10至1000 mg/m2/日、大約10至500 mg/m2/g或大約50至200 mg/n^/日的丙戊酸、羥基脲或曲古抑菌素A,持續(xù)三至四周，然后休息 一至兩周。一般來(lái)說(shuō)，給予患者聯(lián)合治療的周期數(shù)大約是1至24個(gè)周期， 更典型地是大約2至16個(gè)周期，更典型地是大約3至4個(gè)周期。
5.5藥物組合物和劑型
藥物組合物可用于制備單獨(dú)的單 一 單位劑型。本發(fā)明提供的藥物組 合物和劑型包含有效量的免疫調(diào)節(jié)化合物(如，4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-異二氫吲哚-l,3-二酮或3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氫-異吲哚-2-基)-哌 啶-2,6-二酮)或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物、水合物、前藥、立體異構(gòu) 體或多晶型，和有效量的丙戊酸、幾基脲或曲古抑菌素A或其藥學(xué)上可 接受的鹽、溶劑化物、水合物、前藥、立體異構(gòu)體或多晶型。本發(fā)明提供 的藥物組合物和劑型還包含一種或多種賦形劑、載體或稀釋劑。本發(fā)明 提供的藥物組合物和劑型還包含CD34+造血干細(xì)胞或骨髓。
本發(fā)明的單一單位劑型適于通過(guò)口服、粘膜(例如鼻、舌下、陰道、 頰或直腸)、或腸胃外(例如皮下、靜脈內(nèi)、彈丸注射、肌內(nèi)內(nèi)或動(dòng)脈內(nèi))、 局部(如滴眼劑或其它眼科制劑)、透皮或經(jīng)皮向患者給藥。劑型的實(shí)例
54包括但不限于片劑(如，咀嚼片)；嚢片；膠嚢，如彈性軟明膠膠嚢； 扁嚢劑；錠劑；糖錠劑；分散劑型；栓劑；粉劑；氣霧劑(例如鼻噴霧劑 或吸入劑)；凝膠劑；適于向患者口服或粘膜給藥的液體劑型，包括懸浮 液(例如，水性或非水性液體懸浮液、油包水乳劑或水包油乳劑)、溶液 和酏劑；適于向患者腸胃外給藥的液體劑型；滴眼劑或其它適于局部給 藥的眼科制劑；以及可重新配制以向患者提供適于腸胃外給藥的液體劑 型的無(wú)菌固體(如結(jié)晶或無(wú)定形固體)。
劑型的所述組成、形狀和類型一般根據(jù)其應(yīng)用而變化。例如，與用 于相同疾病的慢性治療的劑型相比，用于疾病急性治療的劑型可含有更 多量的一種或多種活性成分。類似地，與用于治療相同疾病的口服劑型 相比，腸胃外劑型可含有更少量的一種或多種活性成分。本發(fā)明的特定 劑型從一種改變?yōu)榱?一種的這些和其它方法對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是 顯而易見(jiàn)的。參見(jiàn)例如i em/wgto" ^P/wrmacewdca/ tSc/e"c^s1 ， 第18片反， Mack Publishing, Easton PA (1990)。
典型的藥物組合物和劑型含有 一 種或多種賦形劑。合適的賦形劑是 藥學(xué)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員所熟知的，合適的賦形劑的非限制性例子在本 說(shuō)明書(shū)中有提供。具體賦形劑是否適于摻入藥物組合物或劑型，這取決 于本領(lǐng)域眾所周知的多種因素，包括但不限于將該劑型給予患者的方式。 例如，口服劑型(如片劑)可含有不適合用于腸胃外劑型的賦形劑。具體 賦形劑的適用性可取決于劑型中的特定活性成分。例如， 一 些賦形劑(如 乳糖)，或當(dāng)暴露于水時(shí)可加速一些活性成分的分解。含有伯胺或仲胺的 活性成分對(duì)這種加速分解特別敏感。因此，本發(fā)明包括含有極少(若有的 話)乳糖其它單糖或二糖的藥物組合物和劑型。在本發(fā)明中，所使用的術(shù)語(yǔ)"無(wú)乳糖"表示乳糖的含量(若有的話)不足以在實(shí)質(zhì)上加快活性成分的 降解速度。
本發(fā)明的無(wú)乳糖組合物可含有本領(lǐng)域熟知的賦形劑，這些賦形劑列在，
例如，(f^房秀^》(USP)25-NF20(2002)中。通常，無(wú)乳糖組合物含有藥學(xué) 上可相容的且藥學(xué)上可接受量的活性成分、粘合劑/填料和潤(rùn)滑劑。優(yōu)選無(wú) 乳糖劑型含有活性成分、微晶纖維素、預(yù)膠凝淀粉和硬脂酸鎂。
本發(fā)明還包括含有活性成分的無(wú)水藥物組合物和劑型，因?yàn)樗赡?會(huì)促進(jìn)某些化合物的降解。因?yàn)樗畷?huì)促進(jìn)某些化合物的降解。例如，為 了測(cè)定制劑隨時(shí)間變化的性質(zhì)，如保存期或穩(wěn)定性，加入水(例如5%) 作為 一 種模擬長(zhǎng)期儲(chǔ)存的方式在制藥領(lǐng)域是被廣泛接受的。參見(jiàn)例如， Jens T.Carstensen,《秀參《J. ^ JY/口實(shí)戲'》Sto^7"乂.尸〃.wc/》/es &/Vacf/ce」，第二版，Marcel Dekker, NY, NY， 1995,第379-80頁(yè)。 實(shí)際上，水和熱將加速一些化合物的分解。因此，水對(duì)于制劑的作用非 常顯著，因?yàn)樗趾?或濕氣在制劑的制造、處理、包裝、儲(chǔ)存、裝運(yùn)和 使用過(guò)程中經(jīng)常遇到。
本發(fā)明的無(wú)水的藥物組合物和劑型可用無(wú)水或水分含量低的成分并 在低濕度條件下制造。如果預(yù)計(jì)在生產(chǎn)、包裝和/或儲(chǔ)存期間會(huì)與水分和 /或濕氣發(fā)生實(shí)質(zhì)性接觸，那么包含乳糖和至少一種含有伯胺或仲胺的活 性成分的藥物組合物和劑型是無(wú)水的。
無(wú)水藥物組合物應(yīng)以保持其無(wú)水特性的方式制備和儲(chǔ)存。因此，無(wú) 水組合物優(yōu)選用已知可防止暴露于水的材料來(lái)包裝，因此可將它們裝在 合適的制劑盒中。合適的包裝的例子包括但不限于密封的薄膜、塑料、 單位劑量容器(如藥瓶)、水泡包裝和窄條包裝。本發(fā)明還包括含有一種或多種可降低活性成分分解速度的化合物的 藥物組合物和劑型。這種化合物在本文稱為"穩(wěn)定劑"，其包括但不限于 抗氧化劑(如抗壞血酸)、pH緩沖劑或鹽緩沖劑。如同賦形劑的量和類型 一樣，劑型中特定活性成分的類型和量可根據(jù)各種因素而改變，這些因 素包括但不限于向患者的給藥途徑。然而，本發(fā)明提供的典型劑型包含
大約0.10至150mg的免疫調(diào)節(jié)化合物(如，4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶 基))-異二氫吲哚-l,3-二酮或3-(4-氨基-l-氧代-l，3-二氫-異吲哚-2-基)-哌啶 -2,6-二酮)，或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物、水合物、立體異構(gòu)體、前 藥或多晶型。典型劑型包含大約O.l、 1、 2、 5、 7.5、 10、 12.5、 15、 17.5、 20、 25、 50、 100、 150或200 mg免疫調(diào)節(jié)化合物(如，4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-異二氫吲哚-l,3-二酮或3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氫-異吲 哚-2-基)-派啶-2,6-二酮)或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物、水合物、立體 異構(gòu)體、前藥或多晶型。在一具體實(shí)施方案中，劑型包含大約l、 2、 5、 10、 25或50mg免疫調(diào)節(jié)化合物(如，4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-異二氫吲哚-l,3-二酮或3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氫-異吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二 酮)或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物、水合物、立體異構(gòu)體、前藥或多晶 型。典型劑型包含大約1至1000mg、大約5至500mg、大約10至350mg 或大約50至200mg的丙戊酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物、水合物、 立體異構(gòu)體、前藥或多晶型。典型劑型包含大約1至5000mg、大約5至 1000mg、大約10至500mg或大約50至200mg的曲古抑菌素A或其藥學(xué) 上可接受的鹽、溶劑化物、水合物、立體異構(gòu)體、前藥或多晶型。典型劑 型包含大約1至5000mg、大約5至2500mg、大約10至2000mg、大約50 至1000mg、大約50至500mg或大約50至250mg羥基脲或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物、水合物、立體異構(gòu)體、前藥或多晶型。當(dāng)然，試劑的 具體量取決于所使用的具體試劑和所治療、預(yù)防或控制的疾病或病癥類型。
5.5.1 口服劑型
適合口服給藥的本發(fā)明的藥物組合物可制成分散劑型，例如但不限 于片劑(例如咀嚼片)、嚢片、膠嚢和液體(例如風(fēng)味糖漿)。這種劑型含有 預(yù)定量的活性成分，并可用本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員所熟知的制藥方法來(lái)
制備。通?？蓞⒁?jiàn)《#辨銀秀參/#夢(mèng)》，第18版，Mack Publishing, Easton PA(1990)。
本發(fā)明的典型的口服劑型是按照常規(guī)藥物化合技術(shù)通過(guò)將活性成分 與至少一種賦形劑充分混合而制得的。根據(jù)給藥所需的制劑形式，賦形 劑可呈多種不同的形式。例如，適用于口服液體或氣霧劑劑型的賦形劑 包括但不限于水、二醇、油、醇、風(fēng)味劑、防腐劑和著色劑。適用于固 體口服劑型(例如粉劑、片劑、膠囊和膠囊片)的賦形劑的實(shí)例包括但不 限于淀粉、糖、微晶纖維素、稀釋劑、成粒劑、潤(rùn)滑劑、粘合劑和崩解 劑。
如果需要，可通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)的水或非水化技術(shù)將片劑包衣。這種劑型可 通過(guò)任何制藥方法制得。藥物組合物和劑型一般這樣制得將活性成分 與液體載體、良好分散的固體載體或二者均勻充分混合，然后如果需要 的話將產(chǎn)物制成所需的形狀。
例如，片劑可通過(guò)壓縮或壓模來(lái)制得。壓縮片可通過(guò)在合適的機(jī)器 中壓縮自由流動(dòng)形式，例如粉末或顆粒形式的活性成分來(lái)制得，任選地 與賦形劑混合。壓模片可通過(guò)在合適的機(jī)器中壓模粉末狀化合物的混合物來(lái)制備，該粉末狀化合物用惰性液體稀釋劑潤(rùn)濕。
可用于本發(fā)明的口服劑型的賦形劑的實(shí)例包括但不限于粘合劑、填 充劑、崩解劑和潤(rùn)滑劑。適用于藥物組合物和劑型的粘合劑包括但不限 于玉米淀粉、馬鈴薯淀粉或其它淀粉，明膠，天然與合成樹(shù)膠例如阿拉 伯膠、藻酸鈉、藻酸、其它藻酸鹽，黃蓍膠粉末、瓜爾膠，纖維素及其 衍生物(例如乙基纖維素、醋酸纖維素、羧甲基纖維素鈣、羧甲基纖維素 鈉)、聚乙烯吡咯烷酮、甲基纖維素、預(yù)凝膠化淀粉、羥基丙基甲基纖維
素(例如2208、 2906、 2910號(hào))、微晶纖維素及其混合物。
微晶纖維素的適當(dāng)形式包括但不限于以AVICEL-PH-101、 AVICEL-PH隱103、 AVICELRC匿581、 AVICEL-PH-105銷售的材料(得自 FMC Corporation, American Viscose Division, Avicel Sales, Marcus Hook, PA)及其混合物。 一種具體的祐合劑是以AVICELRC-581銷售的微晶纖 維素與羧甲基纖維素鈉的混合物。合適的無(wú)水或低水分含量的賦形劑或 添加劑包括AVICEL-PH-103 和Starch 1500 LM。
適用于本發(fā)明藥物組合物和劑型的填充劑的實(shí)例包括但不限于滑石 粉、碳酸鈣(例如顆粒或粉末)、微晶纖維素、纖維素粉末、葡萄糖結(jié)合 劑(dextrates)、高嶺土、甘露醇、硅酸、山梨醇、淀粉、預(yù)凝膠化淀粉及 其混合物。本發(fā)明藥物組合物中粘合劑或填充劑以占藥物組合物或劑型 重量的約50%到約99%的量存在。
在本發(fā)明組合物中使用崩解劑以提供在暴露于水環(huán)境時(shí)發(fā)生崩解的 片劑。含有太多崩解劑的片劑在儲(chǔ)存時(shí)可能會(huì)崩解，而含有太少崩解劑 的片劑可能不會(huì)以所需速度崩解或者在所需條件下不崩解。因此，應(yīng)當(dāng) 使用既不太多也不太少的決定性地改變活性成分的釋放的足量崩解劑以形成本發(fā)明的固體口服劑型。所用崩解劑的量隨著制劑的類型而改變， 并且易于由本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)決定。典型的藥物組合物包含約0.5%到約
15%重量的崩解劑，優(yōu)選約1%到約5%重量的崩解劑。
可用于本發(fā)明藥的物組合物和劑型的崩解劑包括但不限于瓊脂、海 藻酸、碳酸釣、微晶纖維素、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、交聯(lián)聚維酮、聚克 立林鉀、羥乙酸淀粉鈉、馬鈴薯或甘薯淀粉、其它淀粉、預(yù)凝膠化淀粉、 粘土、其它藻酸鹽、其它纖維素、樹(shù)膠及其混合物。
可用于本發(fā)明的藥物組合物和劑型的潤(rùn)滑劑包括但不限于硬脂酸 鈣、石更脂酸鎂、礦物油、輕礦物油、甘油、山梨醇、甘露醇、聚乙二醇、 其它二醇、硬脂酸、十二烷基疏酸鈉、滑石粉、氫化植物油(例如花生油、 棉籽油、向日葵油、芝麻油、#:欖油、玉米油和豆油)、；更脂酸鋅、油酸 乙酯、月桂酸乙酯、瓊脂及其混合物。其它的潤(rùn)滑劑包括例如syloid硅 膠(AEROSIL200,由W. R. Grace Co. of Baltimore, MD生產(chǎn))、合成二氧 化硅的凝固氣霧膠(由Degussa Co. of Piano, TX銷售)、CAB-O-SIL (Cabot Co. ofBoston， MA銷售的燒結(jié)二氧化硅產(chǎn)品)及其混合物。如果完全使 用，潤(rùn)滑劑通常以小于其所摻入的藥物組合物或劑型重量的約1%的量 使用。
5.5.2緩釋劑型
本發(fā)明活性成分可以通過(guò)控釋裝置或本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的遞送裝 置給藥。實(shí)例包括但不限于在以下專利中描述的那些美國(guó)專利號(hào) 3,845,770、 3,916,899、 3,536,809、 3,598,123、 4,008,719、 5,674,533、 5,059,595、 5,591,767、 5,120,548、 5,073,543、 5,639,476、 5,354,556和
605,733,566,其分別通過(guò)引用并入本文。通過(guò)使用例如羥丙基甲基纖維素、 其它聚合物基質(zhì)、凝膠、可滲透性膜、等滲系統(tǒng)、多層包衣、微顆粒、 脂質(zhì)體、微球或其組合來(lái)產(chǎn)生不同比例的理想釋放效果，這種劑型可用 來(lái)緩釋或控釋一種或多種活性成分。合適的控釋制劑包括本文所述的那 些，其是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的，且易于選擇以與本發(fā)明的活性成分一 起使用。因此，本發(fā)明包括適于控釋并適于口服給藥的單一單位劑型， 包括但不限于片劑、膠嚢、凝膠膠嚢和囊片。
5.5.3胃腸外劑型
腸胃外劑型可通過(guò)各種途徑，包括但不限于皮下、靜脈內(nèi)(包括彈丸 注射)、肌內(nèi)內(nèi)和動(dòng)脈內(nèi)途徑來(lái)對(duì)患者給藥。由于其給藥一般繞過(guò)了患者 對(duì)污染物的天然防御，所以腸胃外劑型優(yōu)選是無(wú)菌的，或者能夠在對(duì)患 者給藥之前滅菌。腸胃外劑型的實(shí)例包括但不限于注射溶液、可溶解或 懸浮在藥學(xué)上可接受的載體中以用于注射的干燥產(chǎn)品、注射懸浮液和乳 劑。
可用于提供本發(fā)明的腸胃外劑型的合適的載體是本領(lǐng)域技術(shù)人員公 知的。實(shí)例包括但不限于USP注射用水；水性載體，例如但不限于氯 化鈉注射液、林4各注射液、葡萄糖注射液、葡萄糖和氯化鈉注射液和乳 酸化林格注射液；可與水混溶的載體，例如但不限于乙醇、聚乙二醇和 聚丙二醇；以及非水性載體，例如但不限于玉米油、棉籽油、花生油、 芝麻油、油酸乙酯、肉豆蔻酸異丙酯和苯甲酸千酯。
還可以將能夠提高本文所公開(kāi)的一種或多種活性成分的溶解度的化 合物摻入到本發(fā)明的腸胃外劑型中。例如，可使用環(huán)狀糊精及其衍生物來(lái)提高本發(fā)明所述活性試劑的溶解度。參見(jiàn)例如美國(guó)專利No.5,134,127，
其通過(guò)引用并入本文。
5.6藥品盒
在一些實(shí)施方案中，免疫調(diào)節(jié)化合物(如，4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-異二氫吲哚-l，3-二酮或3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氮-異吲哚-2-基)-哌 咬-2,6-二酮)，和丙戊酸、羥基脲或曲古抑菌素A并不在同一時(shí)間或通過(guò) 相同的給藥途徑給予患者。因此，本發(fā)明提供了試劑盒，其在由醫(yī)務(wù)人 員使用時(shí)，可簡(jiǎn)化向患者給予適量的活性試劑的給藥過(guò)程。
本發(fā)明提供的典型試劑盒包括容器，該容器包括免疫調(diào)節(jié)化合物 (如，4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-異二氫吲哚-l，3-二酮或3-(4-氨基-1-氧代-l,3-二氪-異W咮-2-基)-哌啶-2，6-二酮)或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化 物、水合物、立體異構(gòu)體、前藥或多晶型，和丙戊酸、幾基脲或曲古抑菌 素A或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物、水合物、立體異構(gòu)體、前藥或多 晶型的劑型。
本發(fā)明的試劑盒還可以包含用于施用所述活性成分的裝置。這種裝 置的實(shí)例包括但不限于注射器、無(wú)針注射點(diǎn)滴塑料袋、貼片和吸入器。
本發(fā)明提供的試劑盒還可包含用于移植的CD34+造血干細(xì)胞或骨髓 和用于給予一或多種活性成分的藥學(xué)上可接受的運(yùn)載體。例如，如果活 性成分是固體形式，且必須重新配制成以進(jìn)行腸胃外給藥，那么該試劑 盒可以包括含有適當(dāng)運(yùn)載體的密封容器，該活性成分可溶解在該運(yùn)載體 中而形成適于腸胃外給藥的不含顆粒的無(wú)菌溶液。藥學(xué)上可接受的載體 的實(shí)例包括但不限于USP注射用水；含水載體，例如但不限于氯化鈉
62注射液、林格注射液、葡萄糖注射液、葡萄糖和氯化鈉注射液和乳酸化 林格注射液；可與水混溶的運(yùn)載體，例如但不限于乙醇、聚乙二醇和聚 丙二醇；以及非水性運(yùn)載體，例如但不限于玉米油、棉籽油、花生油、 芝麻油、油酸乙酯、肉豆蔻酸異丙酯和苯甲酸千酯。
6.實(shí)施例
本發(fā)明提供的一些實(shí)施方案通過(guò)如下非限定性實(shí)施方案進(jìn)行說(shuō)明。
6.1實(shí)驗(yàn)步驟 6.1.1材料
Namalwa CSN.70細(xì)胞購(gòu)自DSMZ (Brauschweig, Germany)。 骨骨逸和 臍帶血CD34+細(xì)胞分別購(gòu)自Cambrex (Walkersville, MD)和AllCells (Emeryville, CA)。鐮狀細(xì)胞貧血(SCA)患者的骨髓CD34+細(xì)胞由 Christopher Morris (Loma Linda University Medical Center, CA)提供。
抗CD34-PE購(gòu)自BD pharmingen。丙戊酸、曲古抑菌素A和羥基脲 來(lái)自Sigma。
6丄2細(xì)胞培養(yǎng)和處理
在補(bǔ)充了 10 %胎牛血清、青霉素(100 u/ml)和鏈霉素(100嗎/ml)的 RPMI-1640培養(yǎng)基(Invitrogen， Carlsbad)中培養(yǎng)Namalwa。 CD34+細(xì)胞在 無(wú)血清條件下在補(bǔ)充了 20 %血清取代BIT (StemCell Techologies, Vancouver, BC)和SCF (100ng/ml)、 Flt3-L (100ng/ml)和IL-3 (20ng/ml) (Biosource International, Camarillo, CA)的Iscove's DMEM (Invitrogen, Carlsbad, CA)中擴(kuò)增。Namalwa細(xì)胞和CD34+細(xì)胞分別培養(yǎng)3天和6天。 在培養(yǎng)的這3天或6天中將0.P/。DMSO、化合物1或化合物2、丙戊酸(VPA)或曲古抑菌素A (TSA)以所指示的濃度加入。
BM-CD34+細(xì)胞在補(bǔ)充了 BIT 95000和生長(zhǎng)因子的Iscove's MDM(StemCelltechnologies)中培養(yǎng)。在第一個(gè)6天中，CD34+細(xì)胞用SCF (100ng/ml)、 Flt3-L (100ng/ml)和IL-3 (20ng/ml)擴(kuò)增，然后通過(guò)用SCF (50 ng/ml)和EPO (2U或4U/ml)培養(yǎng)6天分化成紅細(xì)胞系。為了研究免疫調(diào) 節(jié)化合物的效果，CD34+祖細(xì)胞在含有或不含化合物1、化合物2或羥 基脲(HU)的培養(yǎng)中分化6天。
6.1.3細(xì)胞增殖和凋亡分析
Namalwa和CD34+細(xì)胞分別以4000個(gè)和2000個(gè)細(xì)胞/孔接種到96 孔板中，并用化合物處理。在指示的時(shí)間之后，用FACS陣列通過(guò)流式 細(xì)胞測(cè)量術(shù)進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)和表型分析。根據(jù)制造商的實(shí)驗(yàn)步驟，分別用 碘化丙啶染色(BD pharmingen, Chicago, IL)和CD34 (PE-結(jié)合的)(BD pharmingen)抗體監(jiān)測(cè)凋亡細(xì)胞和CD34+細(xì)胞百分比。
6.1.4用BrDu混合進(jìn)4亍Namalwa細(xì)胞增殖測(cè)定
Namalwa細(xì)胞以10,000個(gè)細(xì)胞/孔接種到96孔板中，并用指示濃度 的TSA和化合物1處理3天。TSA和化合物1對(duì)細(xì)胞增殖的效果用BrDu 混合試劑盒(Roche, Germany)測(cè)量。
6.1.5胎兒血紅蛋白免疫熒光染色
細(xì)胞培養(yǎng)6天后，用磷酸鹽緩沖液(PBS)洗滌，用2%多聚甲醛固定， cytopermeafix(BD-pharmingen)透化，HbF-PE (BD Pharmingen, San Diego, CA)染色，最后用流式細(xì)胞計(jì)(F ACS Aria, BD pharmingen)分析。
6.2結(jié)果用Namalwa細(xì)月包(人Burkitt淋巴瘤)，發(fā)現(xiàn)10 nM的TSA在誘導(dǎo)細(xì) 胞增殖抑制中對(duì)化合物1有協(xié)同作用(圖1 )。
用Namalwa細(xì)胞(人Burkitt淋巴瘤)，發(fā)現(xiàn)10 nM的TSA在誘導(dǎo)凋 亡中對(duì)化合物l有協(xié)同作用(圖2)。
用Namalwa細(xì)胞(人Burkitt淋巴瘤)，發(fā)現(xiàn)VPA在誘導(dǎo)細(xì)胞增殖抑 制中對(duì)化合物1有加成和協(xié)同作用(圖3)。
用Namalwa細(xì)胞(人Burkitt淋巴瘤)，發(fā)現(xiàn)VPA在誘導(dǎo)凋亡中對(duì)化 合物1有加成和協(xié)同作用(圖4)。
用Namalwa細(xì)胞(人Burkitt淋巴瘤)，發(fā)現(xiàn)VPA在誘導(dǎo)細(xì)胞增殖抑 制中對(duì)化合物2有加成和協(xié)同作用(圖5)。
用Namalwa細(xì)胞(人Burkitt淋巴瘤)，發(fā)現(xiàn)VPA在誘導(dǎo)凋亡中對(duì)化 合物2有加成和協(xié)同作用(圖6)。
在CD34+細(xì)胞擴(kuò)增中研究化合物1和TSA聯(lián)合的作用。如圖7和8 所示，在培養(yǎng)6天后，化合物1單獨(dú)以劑量依賴的方式增加CD34+細(xì)胞 數(shù)和百分比。在生長(zhǎng)雞尾酒試劑中加入10 nM的TSA顯著提高化合物1 對(duì)CD34+擴(kuò)增的效果。如圖7和8的表格所示，VPA加入化合物1中， 在某些條件下，也觀察到有協(xié)同作用。
在CD34+細(xì)胞擴(kuò)增中研究化合物2和TSA的聯(lián)合作用。如圖9和 10所示，在培養(yǎng)6天后，化合物2單獨(dú)以劑量依賴的方式增加CD34+ 細(xì)胞數(shù)和百分比。在生長(zhǎng)雞尾酒試劑中加入l至10 nM的TSA顯著提 高化合物2對(duì)CD34+擴(kuò)增的效果。如圖9和10的表格所示，VPA加入 化合物1中，在某些條件下，也觀察到有協(xié)同作用。
在CD34+細(xì)胞擴(kuò)增中研究化合物1和VPA聯(lián)合的作用。如圖11和12所示，在培養(yǎng)6天后，化合物1單獨(dú)以劑量依賴的方式增加CD34+ 細(xì)胞數(shù)和百分比。在生長(zhǎng)雞尾酒試劑中加入O.l、 0.3和1 mM的VPA顯 著提高化合物1對(duì)CD34+擴(kuò)增的作用。如圖11和12的表格所示，VPA 加入化合物l中，在某些條件下，也觀察到有協(xié)同作用。
在CD34+細(xì)胞擴(kuò)增中研究化合物2和VPA聯(lián)合的作用。如圖13和 14所示，在培養(yǎng)6天后，化合物2單獨(dú)以劑量依賴的方式增加CD34+ 細(xì)胞數(shù)和百分比。在生長(zhǎng)雞尾酒試劑中加入0.1和0.3 mM的VPA顯箸 提高化合物2對(duì)CD34+擴(kuò)增的作用。如圖13和14的表格所示，VPA 加入化合物2中，在某些條件下，也觀察到有協(xié)同作用。
在從健康捐贈(zèng)者獲得的分化成紅細(xì)胞的CD34+造血干細(xì)胞的胎兒血 紅蛋白表達(dá)中研究化合物1和化合物2和鞋基脲聯(lián)合的作用。如圖15 所示，在培養(yǎng)6天后，化合物1和化合物2單獨(dú)以劑量依賴的方式增加 HbF表達(dá)細(xì)胞百分比。在生長(zhǎng)雞尾酒試劑中加入10iiM的HU顯著提高 化合物1和化合物2對(duì)HbF表達(dá)的協(xié)同作用。
在從鐮狀細(xì)胞貧血患者(SCA)獲得的分化成紅細(xì)胞的CD34+細(xì)胞的 胎兒血紅蛋白表達(dá)中研究化合物1和羥基脲(HU)聯(lián)合的作用。如圖16 所示，在培養(yǎng)6天后，化合物1單獨(dú)以劑量依賴的方式增加HbF表達(dá)細(xì) 胞百分比。在生長(zhǎng)雞尾酒試劑中加入10pM的HU顯著提高化合物1對(duì) HbF表達(dá)的協(xié)同作用。
本文所引用的所有參考資料都通過(guò)引用全部并入本文。盡管所述公 開(kāi)是通過(guò)具體實(shí)施方案來(lái)描述的，但在不偏離本發(fā)明的精神和所付權(quán)利 要求所揭示的范圍下可進(jìn)行各種變型和修改，這些變型和修改對(duì)本領(lǐng)域 的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)顯而易見(jiàn)。本發(fā)明提供的實(shí)施方案僅僅意在舉例說(shuō)明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員 使用不超出常規(guī)的實(shí)驗(yàn)?zāi)軌蛎靼拙唧w化合物、材料和步驟的大量等同物。
所有這些等同物均祐:認(rèn)為在所附權(quán)利要求所限定的范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.組合物，其包含有效量的免疫調(diào)節(jié)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，和有效量的丙戊酸、羥基脲或曲古抑菌素A或其藥學(xué)上可接受的鹽。
2. 如權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于，其包含有效量的4-(氨基)-2-(2，6-二氧代(3-哌啶基)-異二氫巧l哚-l,3-二酮或3-(4-氨基-l-氧代-1,3-二氫異吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮或其藥學(xué)上可接受的鹽，以及有效量的丙戊酸、幾基脲或曲古抑菌素A或其藥學(xué)上可接受的鹽。
3. 如權(quán)利要求2所述的組合物，其包含有效量的4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基)-異二氫吲咮-l，3-二酮或其藥學(xué)上可接受的鹽，以及有效量的丙戊酸或其藥學(xué)上可接受的鹽。
4. 如權(quán)利要求2所述的組合物，其包含有效量的4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基)-異二氫吲咮-l,3-二酮或其藥學(xué)上可接受的鹽，以及有效量的曲古抑菌素A或其藥學(xué)上可接受的鹽。
5. 如權(quán)利要求2所述的組合物，其包含有效量的4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基)-異二氫吲咮-l,3-二酮或其藥學(xué)上可接受的鹽，以及有效量的羥基脲或其藥學(xué)上可接受的鹽。
6. 如權(quán)利要求2所述的組合物，其包含有效量的3-(4-氨基-l-氧代-1,3-二氫-異吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮或其藥學(xué)上可接受的鹽，以及有效量的丙戊酸或其藥學(xué)上可接受的鹽。
7. 如權(quán)利要求2所述的組合物，其包含有效量的3-(4-氨基-l-氧代-1,3-二氫異吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮或其藥學(xué)上可接受的鹽，以及有效量的曲古抑菌素A或其藥學(xué)上可接受的鹽。
8. 如權(quán)利要求2所述的組合物，其包含有效量的3-(4-氨基-l-氧代-1，3-二氫異吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮或其藥學(xué)上可接受的鹽，以及有效量的羥基脲或其藥學(xué)上可接受的鹽。
9. 如權(quán)利要求1或2所述的組合物，其還包藥學(xué)上可接受的載體。
10. 包含如權(quán)利要求l或2所述的組合物的單位劑型。
11. 如權(quán)利要求2所述的組合物，其包含4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基)-異二氫吲哚-l,3-二酮或3-(4-氨基-1-氧代-1,3-二氫異吲哚-2-基)-派啶-2,6-二酮的基本上純的(S)對(duì)映體。
12. 增加CD34+造血干細(xì)胞擴(kuò)增的方法，其包含使CD34+造血干細(xì)胞與有效量的4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基)-異二氫吲哚-l,3-二酮或3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氫異吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮或其藥學(xué)上可接受的鹽，以及有效量的丙戊酸、羥基脲或曲古抑菌素A或其藥學(xué)上可接受 的鹽接觸。
13. 如權(quán)利要求12所述的方法，其中所述CD34+造血干細(xì)胞在體外接觸。
14. 如權(quán)利要求12所述的方法，其中所述CD34+造血干細(xì)胞在體內(nèi)接觸。
15. 治療、預(yù)防或控制血液系統(tǒng)疾病或病癥的方法，其包括給予有 此需要的患者有效量的4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基)-異二氫吲哚 -1,3-二酮或3-(4-氨基-1-氧代-1，3-二氫異吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮或其藥學(xué)上可接受的鹽，以及有效量的丙戊酸、羥基脲或曲古抑菌素A或其藥 學(xué)上可接受的鹽。
16. 如權(quán)利要求15所述的方法，其中所述的血液系統(tǒng)疾病或病癥是 血液系統(tǒng)癌癥。
17. 如權(quán)利要求16所述的方法，其中所述血液系統(tǒng)癌癥是多發(fā)性骨 髓瘤、卩血紅蛋白病、白血病、骨髓癌、淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤、 慢性淋巴細(xì)胞白血病、慢性髓細(xì)胞性白血病、急性淋巴母細(xì)胞白血病、 急性粒細(xì)胞性白血病或急性原始粒細(xì)胞性白血病。
18. 如;f又利要求15所述的方法，其中所述血液系統(tǒng)疾病或病癥是骨髓增生異常綜合征或骨髓增生性疾病。
19. 骨髓移植方法，其包括使骨髓與有效量的4-(氨基)-2-(2,6-二氧 代(3-哌啶基)-異二氫吲哚-l,3-二酮或3-(4-氨基-l-氧代-l，3-二氫異吲哚 -2-基)-哌啶-2,6-二酮或其藥學(xué)上可接受的鹽，以及有效量的丙戊酸、羥 基脲或曲古抑菌素A或其藥學(xué)上可接受的鹽在體外接觸，然后移植到所 需患者體內(nèi)。
20. 骨髓重建方法，其包括給予有此需要的患者有效量的4-(氨 基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基)-異二氫吲哚-l,3-二酮或3-(4-氨基-l-氧代 -1,3-二氫異吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮或其藥學(xué)上可接受的鹽，以及有效 量的丙戊酸、鞋基脲或曲古抑菌素A或其藥學(xué)上可接受的鹽。
21. 如權(quán)利要求20所述的方法，其中所述患者已進(jìn)行過(guò)或正在進(jìn)行 化學(xué)療法或放射療法。
22. 治療、預(yù)防或控制實(shí)體瘤的方法，其包括給予有此需要的患者 有效量的4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基)-異二氫吲哚-l,3-二酮或3-(4-氨基-l-氧代-l,3-二氫異吲哚-2-基)-哌啶-2,6-二酮或其藥學(xué)上可接受的 鹽，以及有效量的丙戊酸、鞋基脲或曲古抑菌素A或其藥學(xué)上可接受的鹽。
23. 治療、預(yù)防或控制多發(fā)性骨髓瘤、卩血紅蛋白病、白血病、骨髓 癌、淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤、慢性淋巴細(xì)胞白血病、慢性髓細(xì)胞性 白血病、急性淋巴母細(xì)胞白血病、急性粒細(xì)胞性白血病或急性原始粒細(xì) 胞性白血病的方法，其包括給予有此需要的患者有效量的4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基)-異二氫吲哚-l,3-二酮或3-(4-氨基-l-氧代 -1,3-二氫異吲咮-2-基)-哌啶-2,6-二酮或其藥學(xué)上可接受的鹽，以及有效 量的丙戊酸、鞋基脲或曲古抑菌素A或其藥學(xué)上可接受的鹽。
24. 治療、預(yù)防或控制骨髓增生異常綜合征或骨髓增生性疾病的方 法，其包括給予有此需要的患者有效量的4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶 基)-異二氫吲哚-1,3-二酮或3-(4-氨基-1-氧代-l,3-二氫異吲哚-2-基)-哌啶 -2,6-二酮或其藥學(xué)上可接受的鹽，以及有效量的丙戊酸、羥基脲或曲古 抑菌素A或其藥學(xué)上可接受的鹽。
25. 增加細(xì)胞中胎兒血紅蛋白表達(dá)的方法，其包括使表達(dá)胎兒血紅 蛋白的細(xì)胞與有效量的4-(氨基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基)-異二氫吲哚 -1，3-二酮或3-(4-氨基-1-氧代-1,3-二氫異^咪-2-基)-哌啶-2,6-二酮或其藥學(xué)上可接受的鹽，以及有效量的丙戊酸、羥基脲或曲古抑菌素A或其藥 學(xué)上可接受的鹽相接觸。
26. 如權(quán)利要求25所述的方法，其中所述細(xì)胞為鐮狀細(xì)胞貧血細(xì)胞。
27. 如權(quán)利要求25所述的方法，其中所述細(xì)胞為正常細(xì)胞。
全文摘要
本發(fā)明提供了包含一種或多種免疫調(diào)節(jié)化合物和丙戊酸、羥基脲或曲古抑菌素A的組合物，及其在用于骨髓重建和骨髓移植的CD34+造血干細(xì)胞體外和體內(nèi)擴(kuò)增中使用以增加胎兒血紅蛋白表達(dá)的方法，和治療、預(yù)防和/或控制癌癥、腫瘤和血液系統(tǒng)疾病和病癥的方法。
文檔編號(hào)A61K31/165GK101495111SQ200780027722
公開(kāi)日2009年7月29日 申請(qǐng)日期2007年5月24日 優(yōu)先權(quán)日2006年5月26日
發(fā)明者凱樂(lè)·陳, 勞拉·克拉爾, 勞瑞·穆塔-德帕塞維爾, 多米尼克·維希里, 海倫·布拉迪 申請(qǐng)人:細(xì)胞基因公司