嵌段可降解聚合物及由其制備的軛合物的制作方法

文檔序號：910054閱讀：268來源：國知局

專利名稱：嵌段可降解聚合物及由其制備的軛合物的制作方法
技術領域：
除了別的以外，本發(fā)明涉及水溶性和非肽聚合物及由其制備的軛
合物，每種都具有線性、分支或多臂構型(configuration)，且由一個或多個可降解的鍵表征。在給藥后，本文所述的軛合物在一個或多個可降解的鍵處降解由此導致更小的物質(species)，所述物質可以比相應的非降解軛合物被更有效地消除。
背景技術：
親水性聚合物、聚(乙二醇)(縮寫為"PEG")與分子和表面的共價連接在如生物技術和藥學的領域中有重要的用途。PEG是具有很多有益的性質的聚合物。例如，PEG在水中和很多有機溶劑中可溶，且是非毒性和非免疫原性的，且當與表面連接時，PEG提供了生物相容的保護性涂層。PEG通常的應用或用途包括(i)共價連接至蛋白質，例如延長血漿半衰期和減少通過腎的清除；(ii)連接至表面，如在動脈替換物(replacement),血液接觸裝置和生物傳感器中；(iii)用作合成生物聚合物的可溶的載體；以及(iv)用作在制備水凝膠中的試劑。
即使不是在上文所述的所有用途也是在很多用途中，首先通過將 PEG羥基末端轉換至能容易地與在期望的靶分子或表面內存在的官能團(如存在于蛋白質的表面上的官能團)反應的官能團來激活PEG是必需的。對于蛋白質，典型的官能團包括與賴氨酸、半胱氨酸、組氨酸、精氨酸、門冬氨酸、谷氨酸、絲氨酸、蘇氨酸和酪氨酸的側鏈締合的官能團、和N-末端氨基官能團和C-末端羧酸官能團。
用作大多數PEG激活反應的起始材料的PEG通常是封端PEG。封端PEG是其中通常位于聚合物的末端的一個或多個羥基被轉換至非活性基團如曱氧基、乙氧基或苯甲氧基的PEG。最常用的是甲氧基PEG(縮寫為mPEG)。通常優(yōu)選封端PEG如mPEG,因為這種封端PEG通常對交聯和聚集更有抵抗性。兩個常用的封端PEG醇、mPEG和單芐基PEG (又稱為bPEG)的結構如下所示
mPEG bPEG 其中n通常范圍在約10至約2， 000。
雖然多數成功，但是聚合物共軛至活性劑經常具有挑戰(zhàn)性。例如，已知的是，與活性劑連接相對長的聚(乙二醇)分子比連接更短的聚(乙二醇)分子通常賦予更高的水溶性。然而，一些具有這種長聚(乙二醇) 部分的軛合物的一個缺點是這種軛合物在體內可能基本上為非活性的可能性。已經假設，這些軛合物基本上為非活性是因為聚(乙二醇)鏈的長度，這有效地使其"纏繞"在整個活性劑的周圍，由此限制接近對于藥理學活性所需要的配體。
部分通過使用與所述活性劑共軛的聚合物的"分支"形式，已經解
決了與具有相對大的聚(乙二醇)部分的相對非活性軛合物相關的難
題。聚(乙二醇)衍生物的分支形式的例子通常是指"mPEG2-N-羥基琥珀
酰亞胺"和"mPEG2-醛"，如下所示
<formula>formula see original document page 18</formula>
其中n表示重復環(huán)氧乙烷單體單元的數目。其他分支聚合物結構包含多元醇核，如甘油低聚物，所述多元醇核具有多個在羥基部位共價連接的聚合物臂。示例性的具有多元醇核的分支聚合物結構在美國
專利第6， 730， 334號中描述。
使用分支結構(如上文在軛合物的合成中的結構)的另一個原因涉及增加藥物在體內的循環(huán)時間的期望。已知更大的聚合物比更小的聚合物具有更長的循環(huán)時間。因此，連接至更高分子量聚合物的藥物具有更長的循環(huán)時間，因此減少必須經常注射的藥物的給藥頻率。
盡管提出了一些與相對大的聚合物尺寸相關的缺點，但是分支聚合物結構與其自身的缺點相關。例如，盡管連接至活性劑的分支聚合
物可以具有令人滿意的藥理學活性，但是分支聚合物仍要經受來自機體不充分的清除。因此，雖然期望通過形成藥物聚合物軛合物來增加藥物的循環(huán)時間，但是有竟爭性的期望是，確保所述軛合物對來自機體的消除保持敏感性。
因此，在具有必需的分子量的線性、分支或多臂聚合物衍生物的領域中，有迫切需要來提供在體內具有期望的循環(huán)時間的軛合物，而且所述輒合物還顯示從機體中的及時清除。本發(fā)明提出了在本領域中
的這種和其他需要。

發(fā)明內容
解聚合物試劑，所述聚合物試劑包含一個或多個聚合物鏈，所述聚合物鏈被一個或多個可降解的鍵分開或分隔成具有適于腎清除的分子量的聚合物鏈段。本發(fā)明的聚合物試劑可以具有大體上線性的結構，盡管也包含分支或多臂結構。本發(fā)明適用于其中期望使用高分子量聚合物的應用，如線性聚合物至少約30, 000 Da和多臂聚合物20, 000 Da 的總聚合物數均分子量。每種結構包括一個或多個在體內能降解的鍵。
在一個方面中，本發(fā)明提供了包含大體上線性的水溶性和非肽聚合物的組合物，所述聚合物具有以下結構
Z- [ (X)廣POLf - (X2) b-L1— (X3) J m_ (r) d-POLY2—Z 式(la)
其中每個相同或不同的POLY1和POLY2是水溶性和非肽聚合物，優(yōu)選具有少于約22， 000 Da、更優(yōu)選少于約15, 000 Da、最優(yōu)選少于約8，000 Da的數均分子量；
每個相同或不同的X1、 X2、 X3和t是間隔基部分；
每個1/是在體內可斷裂的鍵；
每個相同或不同的Z是封端基團或官能團，且可以任選包括間隔基部分(其中至少一個Z是官能團)；
每個相同或不同的a、 b、 c和d是零或l;且
m是在l-10 (優(yōu)選l-5)的范圍內的整數，且表示串聯共價連接的聚合物鏈段POI^的數目；
其中至少一個i;是缺失碳酸酯基團的鍵，并且其中所述組合物不
是水凝膠的形式。
上述聚合物結構可以用于形成與生物活性劑的軛合物，如具有以下結構的輒合物<formula>formula see original document page 20</formula>式(lb)
其中
每個丫1和丫2是"12 -藥物或-z，條件是yi和y2的至少一個是-L2 -
藥物；
L2是在體內任選可斷裂的鍵；藥物是生物活性劑的殘基；且
X1、 X2、 X3、 X4、 P0LY1、 POLY2、 L1、 a、 b、 c、 d和m如先前關于式(Ia)所定義。通常，L2由式(Ia)的聚合物的官能團與生物活性劑的反應而形成。
在另一個方面中，本發(fā)明提供了分支聚合物試劑，如包含具有以下結構的分支聚合物的組合物
<formula>formula see original document page 20</formula> 式(IIa)
其中每個相同或不同的POLY1和POLY2是水溶性和非肽聚合物，優(yōu)選具有少于約15， 000 Da、更優(yōu)選少于約10， 000 Da、最優(yōu)選少于約8，000 Da的數均分子量；
每個相同或不同的X1、 X2、 X3、 X4、 X5、乂6和義7是間隔基部分；
每個1/是在體內可斷裂的鍵；
每個L3是在體內任選可斷裂的鍵；
1>4是不可降解的鍵；
每個相同或不同的Z工是封端基團，且可以任選包括間隔基部分；
Z2是官能團，優(yōu)選適用于與生物活性劑上互補的官能團反應而形成鍵的官能團；
每個相同或不同的a、 b、 c、 d、 e、 f和g是零或l;
m是在l-10 (優(yōu)選l-5)的范圍內的整數，且表示串聯共價連接的聚合物鏈段POLYi的數目；且
o是在l-10 (優(yōu)選l-5)的范圍內的整數，且表示串聯共價連接的聚合物鏈段P0LY2的數目；
其中至少一個1/是缺失碳酸酯基團的鍵，并且其中所述組合物不是水凝膠的形式。
本發(fā)明還提供了式(IIa)的分支聚合物的軛合物，如具有以下結構的軛合物
<formula>formula see original document page 21</formula> 式(IIb)
其中-.
1/是在體內任選可斷裂的鍵；藥物是生物活性劑的殘基；且
每個Z1、 X1、 X2、 X3、 X4、 X5、 X6、 X7、 L1、 L3、 a、 b、 c、 d、 e、 f、 g、 ra和o如先前關于式(Ia)所定義。通常，1/由式(na)的聚合物的官能團與生物活性劑的反應而形成。
在本發(fā)明的又一個方面中，提供了多臂聚合物及由其制備的軛合物。所述多臂聚合物特征在于存在核分子(如多元醇)，多重聚合物臂
從所述核分子延伸。本發(fā)明包括包含具有以下結構的聚合物的組合物 "一(x"V POL丫L(x 一L3—(X3)c
R—A
P 式(IIIa) 其中
A不存在或是-(Xs) h- (L6) j- (X9) i-POLY2-Z3或- (Xs) h- (L7)廣(X9) 「Z3; 每個相同或不同的P0I^和POLY'是水溶性和非肽聚合物，優(yōu)選具
有少于約15， 000 Da、更優(yōu)選少于約10， 000 Da、最優(yōu)選少于約8，000
Da的數均分子量；
每個相同或不同的X1、 X2、 X3、乂8和乂9是間隔基部分；每個相同或不同的L3、 1/和i;是在體內任選可斷裂的鍵；每個相同或不同的Zi是封端基團或官能團(包括多臂活性基團)，
且任選包括所迷官能團或封端基團和聚合物鏈段之間的間隔基部分； Z3是通過間隔基部分任選連接的可電離的官能團；每個相同或不同的a、 b、 c、 h、 i和j是零或l; R是單體或低聚多臂核分子，其從包含至少P+l個用于聚合物連
接的部位的分子得到；且
p是在2-32的范圍內的整數，其中R和L3中的至少一個包含在體
內可斷裂的鍵。
本發(fā)明還提供了上文所述的多臂聚合物的軛合物，如具有以下結構的輒合物
D—(x1)a— POLYHX2>b—L3—(X3>c—R—B
'1，式(IIIb)
其中
B是A、 - (X8) h- (L6)廣(X9) i-POLY2-i;-藥物或-(X" h- (L7)廣(X9) 「L9-藥物；
每個相同或不同的D是Zi或iZ-藥物；
相同或不同的i/和i;是鍵，其中所述鍵在體內任選可斷裂；
藥物是生物活性劑的殘基；每個X1、 X2、 X3、 X8、 X9、 L3、 L6、 L7、 A、 Z1、 a、 b、 c、 h、 i、 j 和p如先前關于式(IIIa)所定義。通常，1/和i;由式(IIIa)的聚合物的官能團(分別為ZJ和Z"與生物活性劑的反應而形成。
發(fā)明詳述
在詳細描述本發(fā)明之前，應理解，本發(fā)明并不限于具體的聚合物、合成技術、活性劑等，同樣，其也可以改變。還應理解，本文所用的術語是僅用來描述具體的實施方案，并不旨在限制。
必須認識到，如在本i兌明書中所用的單數形式"一個"、"一種"和" 該"包括復數對象，除非上下文另外清楚地指出。因此，例如，所提及的"聚合物"包括單個聚合物和兩個或更多個相同或不同的聚合物，所提及的"軛合物"是指一種軛合物和兩種或更多種相同或不同的扼合物，所提及的"賦形劑"包括一種賦形劑和兩種或更多種相同或不同的賦形劑等。
I.定義
在描述和要求保護本發(fā)明時，根據下文所述的定義使用以下術語。本文所用的"PEG"、"聚乙二醇"和"聚(乙二醇)"表示任何水溶性聚 (環(huán)氧乙烷)。通常，在本發(fā)明中所用的PEG將包括以下兩種結構中的一種"-0(CH2CH20)n-"或"-CH2CH20(CH2CH20)n-CH2CH2-"，其中n是3 至3000，且整個PEG的末端基團和結構可以改變。"PEG"表示包含大多數、也就是說大于50%的-CH2CH20-亞基的聚合物。
一種常用的PEG是封端PEG。當PEG被定義為"-0(CH2CH20h-"時，所述封端基團通常是含碳的基團，所述含碳的基團通常由1-20個碳組成且優(yōu)選為烷基(例如甲基、乙基或節(jié)基)(無論其飽和與不飽和的形式)和芳基、雜芳基、環(huán)基、雜環(huán)基，且還包含任何前述的取代形式。當PEG被定義為"-CH2CH20(CH2CH20h-CH2CH廣"時，所述封端基團通常是含碳的基團，所述含碳的基團通常由1-20個碳原子和一個共價鍵合至所述基團的氧原子組成，且用于共價鍵合至PEG的一個末端。在此情況下，所述基團通常是烷氧基(例如曱氧基、乙氧基或千氧基)(關于含碳的基團可以任選飽和與不飽和的)和芳基、雜芳基、環(huán)基、雜環(huán)基，以及任何前述的取代形式。當 PEG 被定義為 "-CH2CH20(CH2CH20)n-CH2CH21，其他("非封端")末端通常是可以經受進一步化學修飾的羥基、胺或活化的基團。此外，所述封端基團還可以是珪烷。
在本發(fā)明中所用的特定的PEG形式包括下文更為詳細描述的具有多種分子量、結構或幾何結構(如分支、線性、多臂及類似結構)的PEG。
所述封端基團還可以有利地包含可檢測的標記物(label)。當聚合物具有包含可檢測的標記物的封端基團時，聚合物和/或所述聚合物偶合的目標部分(例如活性劑)的量或位置可以通過使用適合的檢測器來檢測。這樣的標記物包括但不限于熒光劑、化學發(fā)光劑、用于酶標記的部分、比色劑(例如染料)、金屬離子、放射性部分，及類似物。
用于本文所述的方法的聚合物通常是多分散的(即，聚合物的數均分子量和重均分子量并不相等)。但是，根據本文所述的方法制備的聚合物具有低多分散性值-表示為重均分子量(Mw)對數均分子量(Mn)的比率(Mw/Mn)，所述低多分散性值通常少于約1. 2，優(yōu)選少于約l.l5，更優(yōu)選少于約1.10，更優(yōu)選少于約1.05,更優(yōu)選少于約1.03，及最優(yōu)選少于約1. 025。
本文所用的術語"可電離的官能團"及其變化形式是可以通過在水性或其他極性介質中與另一個可電離物質的官能團相互作用而獲得或丟失質子的官能團?？呻婋x的官能團包括但不限于胺、羧酸、水合醛、酮水合物、酰胺、肼、硫醇、苯酚、肟、二硫代吡啶和乙烯吡咬。
本文所用的術語"羧酸"是具有
<formula>formula see original document page 24</formula>
官能團[也表示為"-COOH"或-C (O)OH]的部分和羧酸衍生物部分，這種衍生物包括，例如受保護的羧酸。因此，除非上下文另外清楚地指出，否則術語羧酸不僅包括酸形式，而且也包括相應的酯和受保護的形式。參考Greene等的"PROTECTIVE GROUPS IN ORGANIC SYNTHESIS (有機合成的保護基)"第三版，John Wiley和Sons, Inc.,New York, 1999。
"活化的羧酸"表示羧酸的官能衍生物，其比母體羧酸更有活性，特別是關于親核?；〈??；罨聂人岚ǖ幌抻谒崦婊?如酸氯化物)、酐、酰胺和酯。
當與特定官能團結合使用時，術語"活性"或"活化的"是指容易與在另一個分子上的親電體或親核體反應的活性官能團。這與那些為了反應需要強催化劑或高度不實際反應條件的基團(即"非活性"或"惰性 "基團)不同。
術語"受保護"或"保護基團"或"保護性基團"是指所存在的在某種反應條件下預防或阻斷分子的特定化學活性官能團反應的部分(即保護基團)。保護基團的變化取決于受保護的化學活性基團的類型和待使用的反應條件與分子中存在的另外的活性或保護基團(如果有)。本領域已知的保護基團可以在上述Greene等的著作中發(fā)現。
本文所用的術語"官能團"或其任何同義詞意欲包含其受保護的形式。
本文所用的術語"間隔基"或"間隔基部分"是指任選用于鏈接互相連接的部分(如水溶性聚合物的末端和官能團)的原子或原子的集合。本發(fā)明的間隔基部分可以是水解穩(wěn)定的，或可以包括生理可水解的或酶可降解的鍵。
"烷基"是指通常長度范圍從約1至20個原子的烴鏈。這種烴鏈優(yōu) 選但不必須是飽和的，且可以是支鏈或直鏈，即使通常優(yōu)選直鏈。示例性的烷基包括乙基、丙基、丁基、戊基、l-甲基丁基、l-乙基丙基、 3-曱基戊基，及類似基團。當烷基可以包括三個或更多個碳原子時，本文所用的"烷基"包括環(huán)烷基。
"低級烷基"是指包含1至6個碳原子的烷基，且可以是直鏈或支鏈的，例如甲基、乙基、正丁基、異丁基、叔丁基。
"環(huán)烷基"是指飽和或不飽和環(huán)狀烴鏈，其包括優(yōu)選由3個至約12 個碳原子、更優(yōu)選3個至約8個碳原子組成的橋接、稠合或螺環(huán)化合物。"無干擾取代基"是當其存在于分子中時通常與其他包含在分子內的官能團不起反應的那些基團。
例如在"取代的烷基"中的術語"取代的"是指被一個或多個無干擾
取代基取代的部分(例如烷基)，所述無干擾取代基例如但不限于C3-C8 環(huán)烷基，例如環(huán)丙基、環(huán)丁基及類似基團；閨素，例如氟、氯、溴和碘；氰基；烷氧基，低級苯基(例如0-2個取代的苯基)；取代的苯基及類似基團。
"取代的芳基"是具有一個或多個作為取代基的無千擾基團的芳基。對于在苯環(huán)上的取代基，所述取代基可以在任何方向(即鄰位、間位或對位)。
"烷氧基"是指-O-R基團，其中R是烷基或取代的烷基，優(yōu)選C-C2。烷基(例如曱氧基、乙氧基、丙氧基、芐氧基等)，更優(yōu)選d-Cs烷基。
"芳基"是指一個或多個芳環(huán)，每個芳環(huán)具有5個或6個核碳原子。芳基包括多個芳基環(huán)，所述芳基環(huán)可以是稠合的(如萘基)或未稠合的 (如二苯基)。芳基環(huán)還可以與一個或多個環(huán)烴、雜芳基或雜環(huán)稠合或未稠合。本文所用的"芳基"包括雜芳基。
"雜芳基"是包含1至4個雜原子的芳基，所述雜原子優(yōu)選N、 0 或S或其組合。雜芳環(huán)還可以與一個或多個環(huán)烴、雜環(huán)、芳基或雜芳環(huán)稠合。
"親電體"是指離子或原子或原子的集合，所述親電體可以是離子的，且具有親電子的中心(即尋找電子的中心)或能與親核體反應。
"親核體"是指離子或原子或原子的集合，所述親核體可以是離子的，且具有親核的中心(即尋找親電子中心的中心)或能與親電體反應。
"在體內可斷裂的"鍵是指當在體內循環(huán)時能被水解過程、酶過程、化學過程或上述過程的組合斷裂的鍵。換句話說，在體內可斷裂的鍵是那些在生理條件(即，在血清或其他體液的存在下于約pH 7至7.5 和約37。C的溫度)下可以斷裂分開的鍵。所述鍵的降解半衰期在生理條件下可以變化，但是通常在約O. 1至約10天的范圍內。"水解可斷裂的"或"可水解的"或"水解可降解的"鍵是在生理條件下與水反應(即，被水解)的相對弱的鍵。鍵在水中水解的趨勢將不僅取決于連接兩個中心原子的鍵的一般類型，而且取決于連接至這些中心原子的取代基。適當的水解不穩(wěn)定的或弱鍵包括但不限于羧酸酯、磷酸酯、酐、縮醛、縮酮、酰氧烷基醚、亞胺、原酸酯和寡核苷酸。
"酶可降解的鍵"表示在生理條件下經受一種或多種酶的降解的鍵。酶降解過程還可以包括水解反應。酶可降解的鍵可以包括某些酰
胺(-C (0) -NH-)和聚氨酯(-0-C (0) -NH-)鍵，尤其當在鄰近其他原子團的排列中時，所述鍵可以提供降解的活化或吸引酶所需要的其他部位。例如，與某些酰胺位置鄰近的聚氨酯是酶可降解的，所述聚氨酯例如 -O-C(O)-NH-CHY-C(0)-NH-Y、其中Y是H、烷基、取代的烷基(例如芳烷基、羥烷基、硫烷基等)或芳基，且r是烷基或取代的烷基。本文所定義的"聚氨酯"鍵包括具有上述結構的鍵。
本文所用的"化學可降解的"鍵是在體內生理條件下通過化學反應
降解的鍵。例如，二硫鍵(-s-s-)可以通過與谷胱甘肽的化學反應在體
內降解。
"水解穩(wěn)定的"或"不可降解的"鍵(linkage)或鍵(bond)是指化學鍵(通常是共價鍵)，其在水中大體上穩(wěn)定，這意味著它在生理條件下在延長的時段內不會經受水解的或酶的斷裂至任何可評價的程度。水解穩(wěn)定的鍵的例子包括但不限于下迷碳碳鍵(例如在脂族鏈中)、醚及類似的鍵。通常來說，水解穩(wěn)定的鍵是顯示在生理條件下每天少于約1-2%的水解速率的鍵。可以在大多數標準化學教科書中發(fā)現代表性的化學鍵的水解速率。
在上下文的聚合物或多元醇中的"多官能"或"多取代的"表示聚合物或多元醇具有2個或更多個包含在該聚合物或多元醇中的官能團，其中所述官能團可以是相同或不同的。本發(fā)明的多官能聚合物或多元醇通常包含許多滿足一種或多種下述范圍的官能團約2-100個官能團、2-50個官能團、2-25個官能團、2-15個官能團，3至10個官能團。因此，聚合物骨架或多元醇中官能團的數目可以是2、 3、 4、 5、6、 7、 8、 9或IO個官能團中的任何一個。
"雙官能"或"雙取代的"聚合物或多元醇是指具有兩個包含在其中的官能團的聚合物或多元醇，所述兩個官能團相同(即同型雙官能 (homodifunctional)) 或不同(即異型雙官能 (heterodifunct ional))。
"單官能"或"單取代的"聚合物表示具有一個包含在該聚合物中的官能團的聚合物(例如，基于mPEG的聚合物)。
本文所述的堿性或酸性反應物包括中性、荷電及其任何相應的鹽形式。
術語"患者"是指遭受或易于遭受可以通過施用軛合物來預防或治療的病癥的活有才幾體，且包括人和動物。
"任選"或"任選地"是指隨后描述的情況可以出現或可以不出現，以使該描述包括其中情況出現的例子和情況不出現的例子。
除非另有指示，分子量在本文表示為數均分子量(MJ,其定義為
z柳//
F，其中Ni是具有分子量Mi的聚合物分子的數目(或那些分子的摩爾數)。
術語"藥物"、"生物活性分子"、"生物活性部分"、"活性劑"和" 生物活性劑"中的每一個在本文使用時，表示任何能影響生物有機體的任何機體(physical)或生物化學特性的物質，所述生物有機體包括但不限于病毒、細菌、真菌、植物、動物和人。特別是，如本文所用的生物活性分子包括任何預期用來診斷、治愈、緩解、治療或預防人或其他動物中的疾病、或用于另外促進人或動物的身體或精神正常的物質。生物活性分子的例子包括但不限于肽、蛋白質、酶、小分子藥物、染料、脂質、核苷、寡核苷酸、多核苷酸、核酸、細胞、病毒、脂質體、微粒和膠束。適于在本發(fā)明使用的生物活性劑的類別包括但不限于抗生素、殺菌劑、抗病毒劑、抗炎劑、抗腫瘤劑、心血管劑、抗焦慮劑、激素、生長因子、甾體試劑及類似試劑。
本文所用的"非肽"是指基本上不含肽鍵的聚合物骨架。然而，所述聚合物骨架可以包括較少數目的沿著所述骨架的長度間隔開的肽鍵，例如，每約50個單體單位不超過約1個肽鍵。
術語"軛合物"意指因分子(例如生物活性分子)與活性聚合物分子 (優(yōu)選含有一個或多個活性基團的聚(乙二醇))的共價連接而形成的實體。
II.嵌段可降解的聚合物及由其制備的軛合物
在一個方面中，本發(fā)明提供了聚合物試劑及使用所述聚合物試劑制備的與生物活性劑的軛合物，其特征在于存在一個或多個在體內降解的可斷裂或可降解的鍵。所述可降解的鍵沿著聚合物鏈或在中心核分子內間隔開，以使在體內通過降解鍵釋放的聚合物試劑的每個鏈段具有不會阻礙所述鏈段的腎清除的分子量。由于它們可以用于制備軛合物，因此本發(fā)明的聚合物試劑特別有利，其中期望相對高的聚合物分子量和所述聚合物從機體中大體上完全消除。例如，聚合物試劑(及由其制備的軛合物)的總聚合物數均分子量通常為至少約30, 000 Da，如約30， 000至約150, 000 Da妁分子量(例如，約30， 000 Da、 35,000 Da、 40,000 Da、 45,000 Da、 50,000 Da、 55,000 Da、 60, 000 Da、 65, 000 Da、 70, 000 Da及類似的總分子量)。由可降解的鍵降解而釋放的每個聚合物鏈段的數均分子量優(yōu)選少于或等于約22,000 Da,更優(yōu)選少于或等于約20， 000 Da,甚至更優(yōu)選少于或等于約15， 000 Da，且最優(yōu)選少于或等于約8， 000 Da。在一些實施方案中，聚合物鏈段具有不超過約5， 000 Da或不超過約2， 500 Da的分子量。由可降解的鍵斷裂產生的聚合物鏈段的數目可以從2個至約40個變化，但通常在2 個至約10個(例如2、 3、 4、 5、 6、 7、 8、 9或10個聚合物鏈段)的范圍內。
本發(fā)明的聚合物試劑(及由其制備的軛合物)的結構構型可以變化。所述聚合物試劑可以具有大體上線性的形式。該聚合物還可以具有分支結構，所述結構特征在于一個共軛至活性劑的活性部位和兩個通過連接基團與所述活性部位共價連接的聚合物臂。在分支聚合物形式的又一個實施方案中，本發(fā)明的聚合物試劑可以具有包含兩個或更多個(優(yōu)選三個或更多個)聚合物臂的"多臂"構型，所述聚合物臂從共同的多官能核分子如多元醇或二肽延伸。本發(fā)明的聚合物的優(yōu)選實施方案不是水凝膠的形式，這意味著聚合物試劑(及由其制備的軛合物) 沒有被交聯至與其他為水可溶脹基質的聚合物實質一致的程度。
在聚合物試劑(及由其制備的輒合物)內的可降解的鍵可以變化。
優(yōu)選使用在體內可斷裂的、且在生理條件下(即在7-7.5的pH和約37 。C的溫度下)具有約0. 1至約IO天半衰期的可降解的鍵。鍵的降解速率可以使用氣體滲透色譜法("GPC")通過經釋放的聚合物鏈段的分析檢測來測量。盡管本發(fā)明的聚合物試劑可以包括一個或多個作為可降解的鍵的碳酸酯基團，但是對于聚合物試劑包括至少一個不包含碳酸酯基團的可降解的鍵是優(yōu)選的，且包含沒有任何碳酸酯基團的聚合物試劑。
示例性的可降解的鍵包括但不限于酯鍵；碳酸酯鍵；聚氨酯；酰亞胺；二硫化物；二肽、三肽或四肽；例如由胺與醛反應(參見例如 0uchi等，Polymer Preprints, 38 (1): 582-3 (1997)，其通過引用并入本文)而產生的亞胺鍵；例如通過使醇與磷酸基反應而形成的磷酸酯鍵；通常由酰肼和醛的反應而形成的腙鍵；通常由醛與醇的反應而形成的縮醛鍵；例如由甲酸酯和醇之間的反應而形成的原酸酯鍵；以及例如在聚合物末端的亞磷酰胺基和寡核苷酸的5'羥基形成的寡核苷酸鍵。
酰胺或聚氨酯鍵通常被認為是用于結合PEG至蛋白質(如干擾素) 的穩(wěn)定基團，例如K. R. Reddy， M. W. Modi和S. Pedder， Adv. Drug Delivery Rev. 54 (2002) 571-586。但是，這些穩(wěn)定的基團的一些斷裂可以在體內發(fā)生。例如，在？￡0千擾素(以^80人3丫3@"商標上市) 中，與軛合物締合的高達30%的PEG通過聚氨酯鍵的斷裂而清除(參見 M. W. Modi, J. S. Fulton, D. K. Buckmann， T. L. Wright, D. J. Moore， "Clearance of pegylated (40 kDa) interferon alpha-2a (PEGASYS) is primarily hepatic" (PEG化(40 kDa)干擾素oc-2a (PEGASYS)的清除主要是肝臟性的)，Hepatology， 32 (2000) 371A)。全部清除軛合物的機理相當緩慢，且要花幾天。關于酰胺鍵合(bound),有特殊的例子，其中酰胺鍵(如存在于肽鍵中的酰胺鍵)對酶斷裂敏感。Suzawa等(Bioorg. Med. Chem. 8 (8) 2000， 2175-84)發(fā)現鍵合L-丙氨酸-纈氨酸二肽鍵的聚(乙二醇)在模型酶嗜熱菌蛋白酶的存在下斷裂?？梢栽诒景l(fā)明中使用的肽鍵的其他例子(例如二肽鍵或三肽鍵)可以在美國專利第5， 286，637號和第 6,103,236號；Goff和Carroll (Bioconjugate Chem. 1990， 1， 381-386);和Huang等(Bioconjugate Chem. 1998, 9， 612-617)中發(fā)現。因此，在某些實施方案中，包含在聚合物試劑(及由其形成的軛合物)內的可降解的鍵可以包括酰胺或聚氨酯鍵。
雖然酯比酰胺和聚氨酯對水解斷裂更敏感，但是酯通過酶過程也容易斷裂，因此使酯在體內成為特別不穩(wěn)定的鍵。如果它們在空間阻斷酶靠近的官能團的附近具有基團，則酯對酶斷裂更有抵抗性。因此，包括該類型的空間位阻的酯官能，可能使得酯基團成為用于應用的有吸引力的連接體(linker)，而在所述應用中期望聚合物在幾個小時至幾天內經水解或酶破壞。
通過空間位阻最有助于穩(wěn)定性的基團是位于酯的羰基碳oc位的基團(例如烷基)，如下述兩個含酯的聚合物(其中"P0LY"是水溶性和非肽聚合物)的例子。在選擇對酶斷裂呈現出空間位阻的結構中，優(yōu)選不包括對羰基具有吸電子效應的基團。然而不希望受限于理論，這樣的吸電子基團將易加速酸或堿催化的水解。
在酯的烷基部分(例如依次連接至羰基碳的與氧原子鄰近的部分或原子)中的空間位阻還可以減慢酯的酶斷裂。因此，當期望空間位阻影響酶斷裂的速率時，預期增加相對羰基碳和/或氧原子的a和/或p 位的空間位阻，所述a和/或p位依次與酯基的羰基碳連接。然而，重要的是，增加空間擁擠和電子給予的組合以便通過SJ途徑促進酯的親電子斷裂。進一步，通過取代對于堿催化水解有利的吸電子基團而使得烷基部分不是如此優(yōu)良的離去基團是重要的。平衡可以通過在氧原子的OC和P位(其依次與酯基的羰基碳連接)引入輕微的空間位滯來
實現，如下述結構所示
其中L是間隔基部分或由POLY與含酯部分的反應而生成的鍵，且 POLY是水溶性和非肽聚合物。
因此，優(yōu)選空間位阻基團包括烷基(例如Cl-ClO烷基)或芳基(例如C6-C10芳基)，其位于鄰近羰基碳和/或鄰近與酯的羰基連接的氧原子(即在a或P位)，且最優(yōu)選鄰近羰基碳。
確定任何給定的建議基團是否適于通過用所述建議基團制備聚合物試劑而提供期望的空間位阻是可能的。從建議的聚合物試劑形成軛合物后，所述軛合物隨后被施用至患者或加至適合的模型。在施用至患者(或加至合適的模型)后，軛合物內的每個可降解的鍵的降解速率可以通過例如采集血樣(或從適合的模型中得到的等分試樣或液體)及經由色謙技術鑒別軛合物的降解組份而測定。如果總降解速率落入在期望的范圍內和/或比在相同的條件下測試的對照聚合物試劑得到改進，該建議的基團適于提供期望的空間位阻。
構成本發(fā)明聚合物試劑一部分的水溶性和非肽聚合物(如P0LY1、 P0LY2等等)應是非毒性和生物相容的，這表示該聚合物能與活組織或有機體共存而不會引起傷害。應理解，所述聚合物可以是許多水溶性和非肽聚合物中的任一種。優(yōu)選地，聚(乙二醇)(即PEG)是用于形成本文描述的聚合物試劑的聚合物。其他適合的聚合物的例子包括但不限于如在美國專利第5， 629， 384號(其全部內容通過引用并入本文) 中描述的其他聚(亞烷基二醇)、乙二醇和丙二醇的共聚物、聚(烯醇)、聚(乙烯吡咯烷酮)、聚(羥烷基甲基丙酰胺)、聚(鞋烷基曱基丙烯酸酯)、多(糖)、聚(oc-羥酸)、聚(丙烯酸)、聚(乙烯醇)、聚磷腈、聚
依次連接至酯的羰基^^的氣原子的"a"和"p"位噁唑啉、聚(N-丙烯?；鶈徇?，及其共聚物、三聚物和混合物。不同的聚合物可以并入同一聚合物骨架中。任何水溶性和非肽聚合物的組合被包含在本發(fā)明內。每個聚合物鏈段(例如每個P0I^或P0LY。還可以包括兩個或更多個由可斷裂或穩(wěn)定的鍵連接的聚合物鏈段。
聚合物可以是大體上線性的形式或多臂或分支形式，如在美國專利第5, 932,462號列出的分支PEG分子，所述專利的全部內容通過引用并入本文。一般來說，多臂或分支聚合物具有兩個或更多個從中心支點延伸的聚合物"臂"。例如，示例性的分支PEG聚合物具有以下結構
<formula>formula see original document page 33</formula>
式IV
其中PEG!和PEG2是本文所述的任何形式或幾何結構的PEG聚合物，且兩者可以相同或不同，且1/是水解穩(wěn)定的鍵。示例性的式I 的分支PEG具有以下結構
<formula>formula see original document page 33</formula>
其中polya和polyb是PEG骨架，如甲氧基聚(乙二醇)；R"是非活性部分，如H、甲基或PEG骨架；且P和Q是非活性鍵。在優(yōu)選的實施方案中，所述分支PEG聚合物是甲氧基聚(乙二醇)二取代的賴氨酸。
式IV的分支PEG結構可以連接至第三低聚物或聚合物鏈，如下述所示
<formula>formula see original document page 33</formula>其中PEG3是第三PEG低聚物或聚合物鏈，其與PEGi和PEG2相同或不同。
在另一個實施方案中，用于本發(fā)明的分支PEG具有以下結構
Z-POLY 或 Z-POL丫
其中每個P0LY是水溶性和非肽聚合物或低聚物鏈段(例如PEG鏈
段)，且每個z是封端基團或官能團。
如在下述示例性的聚合物結構所證實，本發(fā)明的聚合物試劑通常包括一種或多種官能團，所述官能團適用于與生物活性劑上的互補官能團反應以便形成所述聚合物試劑和所述活性劑之間的共價鍵(其可以在體內任選可斷裂)。合適的官能團的例子包括羥基、活性酯(例如
N-羥基琥珀酰亞胺酯和l-苯并三唑酯)、活性碳酸酯(例如N-羥基琥珀酰亞胺碳酸酯、1-苯并三唑碳酸酯和對硝基苯基碳酸酯)、縮醛、具有 1至25個碳的碳長度的醛(例如乙醛、丙醛和丁醛)、水合醛、烯基、丙烯酸酯、甲基丙烯酸酯、丙烯酰胺、活性砜、胺、酰肼、硫醇、具有1至約25個碳原子的碳長度(包括羰基碳)的鏈烷酸(例如羧酸、羧甲基、丙酸和丁酸)、酸卣化物、異氰酸酯、異硫氰酸酯、馬來酰亞胺、乙烯砜、二硫代吡咬、乙烯吡咬、碘乙酰胺、環(huán)氧化物、乙二醛、二酮、甲磺酸酯(mesylate )、曱苯磺酸酯和三氟乙基磺酸酯(tresylate)。示例性的官能團在下述的參考文獻中論述N-琥珀酰亞胺碳酸酯(參見例如美國專利第5, 281, 698號、第5, 468, 478號)、胺(參見例如 Buckmann等.Makromol. Chem. 182: 1379 (1981); Zalipsky等.Eur. Polym. J. 19: 1177 (1983))、酰肼(參見例如Andresz等.Makromol. Chem. 179:301 (1978))、丙酸琥珀酰亞胺酯和丁酸琥珀酰亞胺酯(參見例如Olson等.in Poly (ethylene glycol) Chemistry & Biological Applications (聚(乙二醇)在化學和生物學中的應用)，第170-181 頁，Harris和Zalipsky編，ACS, Washington, DC， 1997;還參見美國專利第5， 672， 662號)、琥珀酰亞胺琥珀酸酯(參見例如Abuchowski等.Cancer Biochem. Biophys. 7: 175 (1984)和 Joppich 等， Makromol. Chem. 180: 1 381 (1979))、琥珀酰亞胺酯(參見例如美國專利第4,670,417號)、苯并三唑碳酸酯(參見例如美國專利第 5， 650， 234號)、縮水甘油醚(參見例如Pitha等.Eur. J. Biochem. 94: 11 (1979)， Elling等，Biotech. Appl. Biochem. 13: 354 (1991))、氧代羰基咪唑(參見例如Beauchamp等，Anal. Biochem. 131:25
(1983) ， Tondelli等.J. Controlled Release 1: 251 (1985))、對硝基苯基碳酸酯(參見例如Veronese等，Appl. Biochem. Biotech., 11:141 (1985); 和Sartore等，Appl. Biochem. Biotech. ， 27:45 (1991))、醛(參見例如Harris等.J. Polym. Sci. Chem. Ed. 22: 341
(1984) ，美國專利第5， 824， 784號、美國專利5, 252,714)、馬來酰亞胺(參見例如Goodson等.Bio/Technology 8: 343 (1990)， Romani等. in Chemistry of Peptides and Proteins 2:29 (1984)，和Kogan, Synthetic Comm. 22:2417 (1992)) 、二疏化正吡咬(參見例如Woghiren 等.Bioconj. Chem. 4:314 (1993))、丙烯酰(acrylol)(參見例如 Sawhney等，Mac簡olecules, 26:581 (1993))、乙烯砜(參見例如美國專利第5， 900， 461號)。所有上述的參考文獻通過引用并入本文。
在某些實施方案中，聚合物試劑(及由其形成的軛合物)的封端基團或官能團("Z"部分如Z1、 Z2、 Z3等等)具有多臂的結構。例如，所述 "Z"部分可以是包含2個至約6個官能團(例如2、 3、 4、 5或6個官能團)的多臂活性結構。示例性的多臂基團包括具有以下結構的那些基團<formula>formula see original document page 36</formula>
其中每個相同或不同的Z是任選包括間隔基部分的官能團，且m 是在I至約IO、優(yōu)選1至約4的范圍內的整數。
聚合物試劑(及由其形成的軛合物)可以包括一個或多個間隔基部
分("x"部分如x1、 x2、 x3、 x4、 x5、 x6、 x7、 x8、 r等等)，特別是位于
可降解或穩(wěn)定的鍵的任一側，所述鍵由兩個聚合物物質反應或聚合物與生物活性劑反應而生成。示例性的間隔基部分包括-C (0) - 、 -C(O)-NH-、 -NH-C(O)-NH-、 -0-C(O)-NH-、 -C(S)-、 -CH廣、-CH2-CH2-、 -CH廣CH廣CH廣、-CH廣CH廣CH廣CH廣、-O-CH廣、-CH2-0-、 -O-CH廣CH廣、 -CH2—O-CH廣、—CH廣CH廣O- 、 —0-CH2-CH2-CH2— 、 -CH2—0-CH2-CH2-、 -CH2-CH2-0-CH2- 、 -CH2-CH「CH2-0- 、 -0-CH2-CH2-CH2-C&-、 -CH廣0-CH2-CH2-CH2- 、 -CH2-CH2-0-CH2-CH2- 、 -CH廣CH廣CH廣O-CH廣、 -CHrCH2-CH2-CH2-0- 、 -C (0)-NH-CH廣、-C (0)-NH-CH2-CH2-、 -CH廣C (0) -NH-CH廣、-CH廣CH廣C (0) -NH- 、 -C (0) -NH-CH廣CH廣CH廣、 -CH廣C (0) -NH_CH2-CH2— 、 -CH2-CH2-C (0) -NH-CH廣、
-CH廣CH2-CH2-C (0) -NH- 、 -C (0) -NH-CH廣CH廣CH廣CH廣、
-CH2-C (0) -NH-CH廣CH廣CH廣、 -CH廣CH廣C (0) -NH-CH廣CH廣、 -CH廣CH廣CH2-C (0) -NH-CH廣、 -CH2-CH廣CH廣C (0) -NH-CH2-C&-、-CH廣CH廣CH2-CH2-C (0)-NH- 、 -C(O)-O-CH2- 、 -CH2-C (0)-0-CH2-、 -CH廣CH廣C (0)-O-CH廣、-C (0)-0-CHfCH2- 、 -NH-C (0)-CH2-、 -CH廣NH-C (0) -CH2- 、 -CH廣CH廣NH-C (0) -CH2- 、 -NH-C (0) -CH廣CH廣、 -CH廣NH-C (0) -CH廣CH廣、-CH廣CH廣NH-C (0) -CH2-CH2-、 -C (0) -NH-CH2-、 -C (0)-NH-CH廣CH廣、-0-C (0)-NH-CH廣、-0-C (0)-NH-CH廣CH2-、 -NH-CH廠、-NH-CH廣CH廣、-CH廣NH-CH廣、-CH2-CH2-NH-CHf、 -C (O)-CH廣、 -C (0)-CH廣CH廣、 -CH廣C (0)-CH2- 、 -CH廣CH廣C (0)-CH廣、 -CH廣CH廣C (0) -CH2-CH2- 、 -CH廣CH廣C (0)- 、
-CH2-CH2-CH2-C (0)-匪-CH2-CH廣NH- 、 -CH廣CH廣CH廣C (0) -NH-CH2-CH廣NH-C (0)- 、 -CH2-CH2-CH2-C (0) -NH-CH2-CH2-NH-C (0) -CH2- 、 -CH廣CH廣CH廣C (0) -NH-CH廣CH廣NH-C (0) -CH廣CH廣、 -0-C(0)-NH-[CH2]h-(OCH2CH2)j-、 -NH-C (0)-0-[CH2] h-(OCH2CH2)廣、二價環(huán)烷基、-O-、 -S-、氨基酸、二肽或三肽、-NOO-及任一上述的兩個或更多個的組合，其中f是H或選自由烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、芳基和取代的芳基組成的組的有機基，(h)是零至6，且(j)是零至20。其他具體的間隔基部分具有下述的結構-C (0) -NH- (CH2)卜廣NH-C (0) -、 —NH-C (0) -NH- (CH2) h-NH-C (0) -和-O-C (0) -NH- (CH2) h-NH-C (0)-，其中跟隨每個亞甲基的下標值表示包含在結構中的亞甲基的數目，例如(CH2)w表示所述結構可以包含1、 2、 3、 4、 5或6個亞甲基。除上文所述的間隔基部分或代替其的部分之外，間隔基部分還可以包含含有1個至25個環(huán)氧乙烷單體單元[即 - (CH2CH20) h5]的環(huán)氧乙烷低聚物/聚合物鏈。除了另外的間隔基部分之外，當使用環(huán)氧乙烷低聚物鏈時，該環(huán)氧乙烷低聚物鏈可以在間隔基部分之前或之后出現，且任選在由兩個或更多個原子組成的間隔基部分的任何兩個原子之間。
性的活性劑，如某些蛋白質、肽和小分子藥物。可以與本發(fā)明的聚合物試劑共價連接的相對疏水的活性劑的例子包括但不限于;^香酸、醋葡醛內酯、苊、苊香豆醇(acenocournarol )、醋磺己脲、乙酰汞辛酚、甘草次酸醋酸酯、乙酰洋地黃毒苷、二溴乙烯、二氯乙烯、乙酰水楊酸、土木香內酯、艾氏劑、鋁糖醇鈉、丙烯除蟲菊酯、烯丙雌醇、烯丙基硫醚、阿普唑侖、雙(二乙酰水楊酸)鋁、氨布醋胺、氨氯苯噁喚(aminochlothe謹azin)、氨魯米特、氯戊烷、雄烯二醇、茴三硫 (anethole trithone)、敵菌靈、蒽林、抗霉素A、除癡霉素、偶砷醋酸、積雪草苷、阿司咪唑(asternizole)、奧迪霉素、金硫醋苯胺、8-氮雜鳥嘌呤、偶氮苯、黃芩黃素、秘魯香脂、吐魯香脂、燕麥靈、東菱克栓酶(baxtrobin)、節(jié)達酸、地巴唑、千氟噻溱、苯菌靈、千星青霉素、苯雌酚、苯佐替派、苯甲酰會酮(benzoxiquinone)、節(jié)非他明、芐噻嗪、苯甲酸千酯、肉桂酸芐酯、鉍溴酚、甲羧除草醚(bif enox)、樂殺螨、除蟲菊酯、沒藥醇、比沙可啶、二(氯苯氧基)曱烷、碘式沒食子酸碘鉍、堿式沒食子酸鉍、鞣酸鉍、雙酚A、硫氯酚、龍腦基、溴異戊酰脲、氯化龍腦、異戊酸龍腦酯、水楊酸龍腦酯、溴鼠隆、溴曱胺、溴羥喹啉、丁苯羥酸、布他米酯、正丁巴比妥、丁賽特、丁羥基茴香醚、丁羥甲苯、碘硬脂酸鈣、糖二酸鈣、硬脂酸鈣、卡泊酸、克菌丹、卡馬西平、卡波氯醛、三硫磷、卡波醌、胡蘿卜素、香芽酚、吐根酚堿、腦磷脂、大風子油酸、鵝脫氧膽酸、甲殼質、氯丹、伐草克、殺螨醇、四氯二氰苯、氯烯雌醚、氯普噻噸、氯喹那多、卡波羅孟、西洛他唑、金雞尼丁、檸檬醛、克利貝特、氯法齊明、氯貝特、氯氟苯脲、氯硝酯、氯吡多、氯茚二酮、氯噁唑侖、香豆磷、皮質酮、氯殺鼠靈(cournachlor)、香豆磷、醋酸環(huán)毒硫磷甲酚酯(coumithoate cresyl acetate)、殺鼠嘧啶、克蘆磷脂、福美酮氯、氰美馬-秦、環(huán) 扁杉匕酉旨、環(huán)拉氛酉旨磁麻香(cyclarbamate cymarin)、環(huán)抱審素A、氯氰菊酯、氨苯砜、磷氨氮芥、溴氰菊酯、醋酸脫氧皮質酮 (deoxycorticocosterone acetate)、去羥米松、右嗎拉胺、雙醋佐托、氯亞磷(dialifor)、地百里砜、異氯磷(decapthon)、抑菌靈、雙氯酚、二氯磺胺、三氯殺螨醇、地快樂(dicryl)、雙香豆素、雙烯雌酚、己烯雌酚、二苯米唑、乙酰二氫可待因酮、二氫麥角胺、二氫嗎啡、二氫速甾醇、曱己烯雌酚、地美炔酮、敵噁磷、地芬南、N-(l，2-二苯基乙基)尼克酰胺、3，4-二-[1-甲基6-硝基-3-吲咮基]-lH-吡咯 -2，5-二酮(MNIPD)、地匹乙酯、二磺法胺、二硫二氰蒽醌、去氧苯妥英、腙菌酮、羥磷灰石、克瘟散、布洛芬、苯乙氨茴酸、抑草蓬、麥角異柯寧堿、赤蘚醇四硝酸酯、紅霉素硬脂酸酯、雌三醇、依沙維林、炔孕酮、雙香豆素乙酸乙酯(ethyl biscournacetate)、乙氬去甲奎寧、乙基薄荷烷甲酰胺、丁香酚、尤普羅辛、依沙酰胺、非巴氨酯、非那拉胺、芬苯達唑、非尼戊醇、殺螟松、非諾貝特、芬喹唑、倍硫磷、非普拉宗、非律平(flilpin)、黃綿馬酸、夫洛非寧、氟阿尼酮、氟曱喹、氟考丁酯、氟曱睪酮、三氟乙醚、氟他唑侖、煙曲霉素、5-糠基(furftiryl)-5-異丙基巴比妥酸、夫沙芬凈；格拉非寧、高血糖素、格魯米特、格列噻唑、灰黃霉素、愈創(chuàng)木酚碳酸酯、愈創(chuàng)木酚磷酸酯；哈西奈德、血卟啉、六氯酚、己烷雌酚、?？颂驵?、海索比妥、氫氯噻嗪、氫可酮、異丁普生、艾地苯醌、吲哚美辛、煙酸肌醇酯、碘苯扎酸、碘西他酸、膽影酸、碘美拉酸、碘泊酸鹽、異美汀、異尼辛(isonoxin) 、 2-異戊酰茚滿-1， 3-二酮、交沙霉素、11-酮孕酮、月桂氮卓酮、3-0-月桂酰吡哆醇雙乙酸酯、利多卡因、林旦、亞麻酸、碘塞羅寧、魯斯霉素、代森錳鋅、扁桃酸、異戊酯、馬吲哚、曱苯達唑、美海屈林(raebhydroline)、甲鉍喹、美拉胂醇、美法侖、曱萘醌、戊酸薄荷酯、美芬諾酮、美芬丁胺、美芬妥英、美普卡因、美他諾龍、美雌醇、曱硫芬、曱麥角林、美沙拉妥、美雄醇、甲喹酮、甲基膽蒽、哌甲酯、17-曱睪酮、美替洛爾、苯噠嗎啉、金硫乙酸4丐、萘酞磷、萘哌地爾、萘、乳酸2-萘酯、2-(2-萘氧基)乙醇、水楊酸萘酯、萘普生、尼阿比妥、奈馬克丁、氯硝柳胺、尼克氯酯、尼克嗎啡、硝呋羅喹、硝呋齊特、二胺硝吖啶、硝曱酚汞、諾加霉素、去曱西泮、諾乙雄龍、諾孕烯酮、奧他維林、夾竹桃苷、油酸、奧沙西泮、奧沙唑侖、奧昔拉定、奧昔卡因(oxwthazaine)、羥考酮、羥曱睪酮、雙醋酚丁 (oxyphenistan acetate,)、紫杉醇、副梅花狀青霉酰胺 (paraherq翻ide)、對硫磷、匹莫林、四硝基季戊四醇酉旨、戊基苯酴、奮乃靜、芬卡米特、非尼拉敏、2-苯基-6-氯苯酚、苯乙基巴比妥酸(phenthnethylbarbituric acid)、苯妥英、伏殺石克磷、0-酞磺胺瘞唑、葉綠醌、旅，秦荒酸、派法寧、吡酮洛芬(piketopfen)、哌普唑林、吡扎地爾、丁酸新戊酰氧甲酯、普拉貝脲、普拉諾托、聚普瑞鋅、泊利噻嗪、丙磺舒、黃體酮、普美孕酮、丙泮尼地、克螨特、苯胺靈、普羅喹宗、丙疏異煙胺、乙胺嘧啶、嘧啶磷、樸蟯靈、槲皮素、奎勃龍、喹禾靈(quizalofo-ethyl)、雷復尼特、瑞西那明、羅西維林、皮蠅磷、沙侖(salen)、猩紅、西卡寧、西瑪津、西美曲特、辛伐他汀、索布佐生、蔬草滅、螺內酯、角鯊烯、二氫睪酮、硫糖鋁、磺胺苯、磺胺胍諾、柳氮磺吡咬、亞砜、舒必利、琥布宗、他布比妥、特麥角脲、睪酮、四溴甲酚、粉防己堿、氨硫脲、硫代秋水仙堿、硫辛酸、三硫喹噁啉、甲硫噠嗪、塞侖、N-異戊基氨基甲酸百里酯、噻昔達唑、噻克索酮、生育酚、托西拉酯、托萘酯、三氯生、三氟柳、曲帕拉醇、熊果酸、纈氨霉素、維拉怕米、長春堿、維生素A、維生素D、維生素 E、聯苯丁酸、甲苯漆。秦、扎托洛芬和玉米赤霉烯酮。 A.線性聚合物試劑及由其制備的軛合物
本發(fā)明提供了大體上線性的水溶性和非肽聚合物及由其制備的軛合物，其特別良好地適用于其中期望高分子量聚合物的應用，如其中聚合物的總分子量為至少約30， 000 Da、更優(yōu)選為至少約40, 000 Da、最優(yōu)選為至少約50,000 Da的應用。在這個實施方案中，大分子量聚合物的益處(如增加循環(huán)時間)可以與因存在一個或多個沿著所述聚合物骨架隔開的可斷裂的鍵而改善的聚合物腎清除率組合。
例如，本發(fā)明提供了包含大體上線性的水溶性和非肽聚合物的組合物，所述聚合物具有以下結構
<formula>formula see original document page 40</formula> 式(la)
其中
每個相同或不同的POLY1和POLY纟是線性或分支的水溶性和非肽聚合物，優(yōu)選具有少于約15, 000 Da、更優(yōu)選少于約10， 000 Da、最優(yōu)選少于約8， 000 Da的數均分子量；每個相同或不同的X1、 X2、 X3和X4是間隔基部分；
每個i;是在體內可斷裂的鍵；
每個相同或不同的Z是封端基團或官能團(包括多臂活性基團)，且可以任選包括間隔基部分；
每個相同或不同的a、 b、 c和d是零或l;且
m是在1-10、優(yōu)選1-5 (如1、 2、 4、 5或5)的范圍內的整數，且表示串聯共價連接的聚合物鏈段P0LY1的數目；
其中至少一個1/是缺失碳酸酯基團的鍵，并且其中所述組合物不是水凝膠的形式。
在某些式(Ia)的實施方案中，每個X1、 X2、 X3和r存在時，選自由下述基團組成的組-C (0) - 、 -C (0) -NH- 、 -NH-C (0) -NH- 、 -0-C(0)-NH- 、 -C(S)- 、 -CH2- 、 -CH廣CH廣、-CH2-CH2-CH2-、 —CH「CH2-CH2-CH2-、 —0-CH廣、—CH廣O-、 —0-CH2-CH2—、 -CH2-0—CH2-、 -CH2-CH2-0-、 -O-CH廣CH廣CH廣、-CH2-0-CH2-CH2-、 -CH2-CH2-0-CH2-、 -CH2-CH2-CH2-0- 、 -0-CH2-CH2-CH2-CH2- 、 -CH2-0-CH2-CH2-CH2-、 -CH2-CH2-0-CH2-CH2- 、 -CH2-CH2-CH2-0-CH2- 、 -CH2-CH2-CH2-CH「0-、 -C (0)-NH-CH2- 、 -C (0)-NH-CH2-CH2- 、 -CH2-C (0)-NH-CH廣、 -CH2-CH2-C (0) -NH-、 -C (0) -NH-CH2-CH2-CH2-、 -CH2-C (0) -NH-CH2-CH2-、 -CH2-CH2-C (0) -NH-CH廣、 -CI^-CH2-CH2-C (0) -NH- 、
-C (0) -NH-CH2-CH2-CKH2- 、 -CH廣C (0) -NH-CH2-CH2-CH2- 、 -CH2-CH2-C (0) -NH-CH廣CH2- 、 -CHfCH廣CH廣C (0) -NH-CH2- 、 -CH廣CH2-CH廣C (0) -NH-CH2-CH2- 、 -CH廣CH廣CH廣CH廣C (0) -NH-、 -C(O)-O-CH廣、-CH廣C (0)-O-CH廣、-CH廣CH廣C (0)-O-CH廣、 -C (0)-O-CH廠CH廣、 -NH-C (0)-CH2- 、 -CH廣NH-C (0)-CH2-、 -CH2-CH2-NH-C (0) -CH廣、-NH-C (0) -CH廣CH廣、-CH廣NH-C (0) -CH廣CH廣、 -CH2-CH廣NH-C (0) -CH廣CH廣、-C (0) -NH-CH廣、-C (0) -NH-CH2-CH2-、 -O-C(O)-NH-CH廣、-0-C(0)-NH-CH2-CH2-、 -NH-CH廣、-NH-CH2-CH2-、 -CH2-NH-CH2- 、 -CH廣CH廣NH-CH廣、-C (0) -CH2- 、 -C (0) -CH2-CH2-、 -CH2-C (0)-CH2- 、 -CH2-CH2-C (0)-CH2- 、 -CH廠CH廣C (0)-CH2-CH2-、-CH2-CH2-C (0) - 、 -CH2-CH2-CH2-C (0) -NH-CH2-CH2-NH- 、
-CH廣CH廣CH廣C (0) -NH_CH2-CH2-NH-C (0)- 、 -CH廣CH廣CH廣C (0) -NH-CH廣CH廣NH-C (0) -CH廣、 -CH2-CH2-CH2-C (0) -NH-CH2-CH2-NH-C (0) -CH2-CH2- 、 -C (0) -NH- (CH2) h-NH-C (0) - 、-NH-C (0) -NH- (CH2) h-NH-C (0)-和 -O-C (0) -NH- (CH2) h-NH-C (0) - 、 -O-C (0) -NH- [CH2] h- (OCH2CH2)廣、 -NH-C(0)-0-[CH2]h-(OCH2CH2)j-、二價環(huán)烷基、-0-、 -S-、 -N0O-及其組合，其中r是H或選自由烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、芳基和取代的芳基組成的組的有機基，(h)是零至 6，且(j)是零至20。
在某些式(Ia)的實施方案中，1/選自由酰胺鍵、聚氨酯鍵、二硫鍵、二肽鍵、三肽鍵和四肽鍵組成的組，和/或POLY'和P0LY2都是分支聚(乙二醇)分子，其包含多元醇核和至少兩個從多元醇核延伸的聚合物臂。在進一步的實施方案中，在式(Ia)中的每個聚合物臂可以包括兩個或更多個通過在體內可斷裂的鍵鏈接的聚合物鏈段，所述鍵如酰胺鍵、聚氨酯鍵、二硫鍵、二肽鍵、三肽鍵和四肽鍵。優(yōu)選式(Ia) 中的i;的聚氨酯鍵具有 O-C(O)-NH-CHY-C(O)-NH-Y'-的結構，其中Y 和Y'獨立地選自H、烷基、取代的烷基和芳基。
一個優(yōu)選的式(Ia)的實施方案具有以下結構
<formula>formula see original document page 42</formula>
其中
P0LYa和P0LYb是聚(乙二醇)鏈段； L是鍵；
IZ是在體內可斷裂的鍵(例如酰胺鍵、聚氨酯鍵、二硫鍵、二 .肽鍵和四肽鍵)；且
R是氫、烷基、取代的烷基或羧酸。在任何上文所述的實施方案中，每個a、 b、 c和d可以是零或l，且a、 b、 c和d的值的所有變換被明確地包含在本文中。例如，本發(fā) 明的實施方案包括其中所有a、 b、 c和d都是零或所有都是l、 a是l 和所有其他值是零、b是1和所有其他值是零等的實施方案。
上文聚合物結構可以用于與生物活性劑形成軛合物，如具有以下結構的軛合物
Y1- [ (X1) a-P0LY1- (X2) b-L1- (X3) J m- (X4) d-POLY2-Y2 式(lb)
其中
每個yi和y2是-l2 -藥物或-z，條件是y'和y2的至少一個是-l2 -
藥物；
L2是由聚合物的末端官能團(即Z)與生物活性劑的反應而生成的鍵，其中所述鍵是在體內任選可斷裂的；藥物是生物活性劑的殘基；且
X1、 X2、 X3、 X4、 POLY1、 POLY2、 L1、 a、 b、 c、 d和m如先前關于式(Ia)所定義。通常，L2由式(Ia)的聚合物的官能團與生物活性劑的反應而形成。
上文線性聚合物實施方案可以通過多個具有互補的末端官能團的聚合物鏈段的共價連接而形成，所述末端官能團能反應生成期望的鍵。該軛合物可以通過一個或多個在嵌段可降解聚合物上的官能團與在生物活性劑上的互補官能團反應而形成。
B.分支聚合物試劑及由其制備的軛合物
本發(fā)明還提供了分支水溶性和非肽聚合物，其特征在于兩個嵌段可降解聚合物鏈和一個用于連接生物活性劑的官能團。這種聚合物結構將分支聚合物的官能益處(如可以降低穿透至在生物活性劑(例如蛋白質)上的活性部位的可能性的空間松散性)與改善的腎清除率的附加益處結合。此類型的聚合物可以用作商業(yè)上可得的單官能分支聚合物 (如從Nektar Therapeutics AL of Huntsville， AL獲得的聚合物)
的替代物。
在一個實施方案中，本發(fā)明提供了包含具有以下結構的分支聚合物的組合物:
<formula>formula see original document page 44</formula> 式(IIa)
其中
每個相同或不同的P0I^和P0LY2是線性或分支的水溶性和非肽聚合物，優(yōu)選具有少于約15， 000 Da、更優(yōu)選少于約10， 000 Da、最優(yōu)選少于約8， 000 Da的數均分子量；
每個相同或不同的X1、 X2、 X3、 X4、 X5、 X'和X'是間隔基部分；
每個L'是在體內可斷裂的鍵；
每個L3是在體內任選可斷裂的鍵；
1/是不可降解的鍵(例如CI-C12脂族碳鏈)；
每個相同或不同的21是封端基團或官能團(包括多臂活性基團)，且可以任選包括間隔基部分；
Z2是官能團，優(yōu)選適用于與生物活性劑上互補的官能團反應而形成鍵的官能團；
每個相同或不同的a、 b、 c、 d、 e、 f和g是零或l;且
m是在1-10的范圍內的整數，且表示串聯共價連接的聚合物鏈段 P0I^的數目；
o是在1-10的范圍內的整數，且表示串聯共價連接的聚合物鏈段 P0LY2的數目；
其中至少一個Li是缺失碳酸酯基團的鍵，并且其中所述組合物不是水凝膠的形式。應指出，當POLY(例如P0LY'和P0LY。是線性時，生成"一個"分支結構，其中分支點是L4。當達到一個或多個POLY(例如POLY"都是分支的程度時，多個分支得到實現。
在某些式(IIa)的實施方案中，每個X1、 X2、 X3、 X4、 X5、乂6和X7 存在時，選自由下述基團組成的組-C(0)-、 -C(O)-NH-、 -NH-C (O) -NH-、 -0-C (0) -NH-、 -C (S) -、 -CH廣、-CH廠CH廣、-CH2-CH2-CH2-、 -C^-CH2-CH2-CH2-、 -O-CH廣、-CH廣0-、 -0-CH「CH2-、 -CH2-0-CH2-、-CH廣CH廣0-、 -0-CH2-CH2-CH2-、 -CH廣O-CH廣CH廣、-CH2-CHrO-CH2-、 -CH2-CH2-CH2-0- 、 -0-CH2-C^-CH2-CH2- 、 -CH2-0-CH2-CH2-CH2-、 -CH廣CH廣O-CH廣CH廣、-CH廣CH廣CH2-0-CH2- 、 -CH廣CH廣CH廣CH廣O-、 -C (0)-NH-CH廣、-C (0)-NH-CH廣CH廣、-CH廣C (0)-NH-CH廣、 -CH2-CH2-C (0) -NH-、 -C (0) -NH-CH2-CH2-CH2-、 -CH廣C (0) -NH-CH廣CH廣、 -CH2-CH2-C (0) -NH-CH廣、 -CH廣CH廣CH廣C (0) -NH- 、
-C (0) -NH-CH2-CH2-CH2-CH2- 、 -CH廣C (0) -NH-CH廣CH廣CH廣、 -CH2-CH廣C (0) -NH-CH2-CH2- 、 -CH2-CH2-CH2-C (0) -NH-CH廣、 -CH2-CH2-CH廣C (0) -NH-CH2-CH2- 、 -CH廣CH廣CH廣CH廣C (0) -NH-、 -C(O)-O-CH廣、-CH廣C (0)-O-CH廣、-CH廣CH廣C (0)-0-CH廣、 -C (0)-0-CH「CH2- 、 -NH-C (0)-CH廣、 -CH廣NH-C (0)-CH2-、 -CH2-CH2-NH-C (0) -CH廣、-NH-C (0) -CH廣CH廣、-CH廣NH-C (0) -CH2-CH2-、 -CH2-CH2-NH-C (0) -CH廣CH廣、-C (0) -NH-CH廣、-C (0) -NH-CH2-CH2-、 -O-C(O)-NH-CH廣、-0-C(0)-NH-CH2-CH2-、 -NH-CH2-、 -NH-CH2-CH2-、 -CH廣NH-CH廣、-CH2-CH2-NH-CH「、 -C (0) -CH2- 、 -C (0) -CH2-CH2-、 -CH廣C (0)-CH2- 、 -CH廣CH廣C (0) -CH2- 、 -CH廣CH廣C (0)-CH2-CH2-、 -CH2-CH廣C (0) - 、 -CH2-CH2-CH2-C (0) -NH-CH廣CH廣NH- 、
-CH2-CH2-CH2-C (0) -NH-CH2-CH2-NH-C (0)- 、 -CH2-CH2-CH2-C (0) -NH-CH廣CH廣NH-C (0) -CH2- 、 -CH2-CH2-CH2-C (0) -NH-CH廣CH廣NH-C (0) -CH2-CH2- 、 -C (0) -NH- (CH2) w-NH-C (0) - 、-NH-C (0) -NH- (CH2)卜6-NH-C (0)-和 -O-C (0) -NH- (CH2)NH-C (0) - 、 -0-C (0) -NH- [CH2] h- (OCH2CH2)廣、 -NH-C(O)-O-[CH2]h-(OCH2CH2)j-、二價環(huán)烷基、-O-、 -S-、 -N(RV及其組合，其中R6是H或選自由烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、芳基和取代的芳基組成的組的有機基，(h)是零至 6，且(j)是零至20。
此外，在某些式(IIa)的實施方案中，每個Z工是包含2個至約6 個末端官能團的多臂活性基團，如下文所列出的多臂基團<formula>formula see original document page 46</formula>
其中每個相同或不同的Z是任選包括間隔基部分的官能團，且m 是在1至約10的范圍內的整數。
在某些式(IIa)的實施方案中，每個POI^和POLY'包含聚(乙二醇)，m和o都是2或更大(例如2、 3、 4、 5、 6、 7、 8、 9、或IO)，
且毎個i;和l3在體內可斷裂，如酰胺鍵、聚氨酯鍵、二硫鍵、二肽鍵、
三肽鍵和四肽鍵。
在某些式(IIa)的實施方案中，P0LY'和P0LY2都是聚(乙二醇)聚合物，！/選自由酰胺鍵、聚氨酯鍵、二硫鍵、二肽鍵、三肽鍵和四肽鍵組成的組，且m和o都為l。優(yōu)選式(IIa)中的i;的聚氨酯鍵具有 0-C(0)-NH-CHY-C(O)-NH-Y'-的結構，其中Y選自H、烷基、取代的烷基和芳基，且Y'是烷基或取代的烷基。
在任何上文所述的實施方案中，每個a、 b、 c、 d、 e、 f和g可以是零或l，且a、 b、 c、 d、 e、 f和g的值的所有變換被明確地包含在本文中。例如，本發(fā)明的實施方案包括其中所有a、 b、 c、 d、 e、 f 和g都是零或所有都是1、 a是1和所有其他值是零、b是1和所有其他值是零等的實施方案。
示例性的根據式(IIa)的分支聚合物如下文所示<formula>formula see original document page 47</formula>其中每個POLY是水溶性和非肽聚合物鏈段，且每個U是聚氨酯鍵。中央的羧酸基表示Z2官能團。應了解，在此實施方案中，每個Z〗是在活性基(在這種情況下是聚氨酯基)的聚合物側上具有任選的間隔基部分的多臂活性基。末端羥基可以被替代或以其他方式進一步修飾來提供其他官能團(例如羧酸、活性酯等)而不偏離本發(fā)明。
在另一個示例性的式(IIa)的實施方案中，m和o都是l， c和d 是l，且乂3和r是環(huán)氧乙烷低聚物鏈(例如，1至約25個單體單元的短PEG鏈)。在此實施方案中，兩個聚合物臂中的每一個包含兩個PEG 鏈段，一個通常大于另一個，較小的由乂3或t來表示。兩個PEG鏈段之間的鍵可以變化，但優(yōu)選的鍵是聚氨酯鍵。
本發(fā)明還提供了式(IIa)的分支聚合物的軛合物，如具有以下結構的輒合物
<formula>formula see original document page 47</formula>
，
^物式(IIb)
其中
L5是由聚合物的末端官能團(即Z。與生物活性劑的反應而生成的鍵，其中所述鍵是任選經水解或酶可斷裂的；藥物是生物活性劑的殘基；且
每個Z1、 X1、 X2、 X3、 X4、 X5、 X6、 X7、 L1、 L3、 a、 b、 c、 d、 e、 f、 g、 m和o如先前關于式(IIa)所定義。通常，L5由式(IIa)的聚合物的官能團與生物活性劑的反應而形成。
C.多臂聚合物試劑及由其制備的軛合物
在本發(fā)明的又一個方面中，提供了多臂聚合物及由其制備的軛合物。所述多臂聚合物特征在于存在核分子(如多元醇、二硫化物、二肽、三肽或四肽)，多個聚合物臂從所述核分子延伸。本發(fā)明包括含有聚合
物的組合物，所述聚合物具有以下結構
:Hx1)a- polyl(x 一l3-(x3、一r—a
JP 式(IIIa) 其中.-
A 不存在或是 -(X8)h-(L6)j-(X9)i-POLY2-Z3 或 —(X8)h-(i;)j-(X9)i-Z3(例如Z3可以包含羧酸基，且h、 j和i可以是0);
每個相同或不同的p0ly1和p0ly2是線性或分支的水溶性和非肽聚合物，優(yōu)選具有少于約15， 000 Da、更優(yōu)選少于約10， 000 Da、最優(yōu)選少于約8， 000 Da的數均分子量；
每個相同或不同的X1、 X2、 X3、乂8和叉9是間隔基部分；
每個相同或不同的l3、 i/和i;是在體內任選可斷裂的鍵(例如，優(yōu)
選L3選自在體內可斷裂的鍵，如酰胺鍵、聚氨酯鍵、二硫鍵、二肽鍵、三肽鍵和四肽鍵)；
每個相同或不同的Zi是封端基團或官能團(包括多臂活性基團)，
且任選包括所述官能團或封端基團和聚合物鏈段之間的間隔基部分； z3是通過間隔基部分任選連接的可電離的官能團；每個相同或不同的a、 b、 c、 h、 i和j是零或l; R是單體或低聚多臂核分子，其從包含至少P+l個用于聚合物連
接的部位的分子(例如多元醇、二硫化物、二肽、三肽、其組合，及類
似分子)得到，且任選包括在體內可降解的鍵(例如酰胺鍵、聚氨酯鍵、
二硫鍵、二肽鍵、三肽鍵和四肽鍵)；且
p是在2-32、優(yōu)選2至約12、更優(yōu)選2至約8(例如2、 3、 4、 5、
6、 7或8)的范圍內的整數。R和L3中的至少一個包含在體內可斷裂的鍵。
所述可電離的官能團Z3用作可以在分子的操作和純化中利用的活性處理基(handle)。示例性的可電離的官能團包括胺和羧酸基。其他合適的官能團的例子包括水合醛、酮水合物、酰胺、肼、酰肼、硫醇、磺酸、酰胺化物、羥胺、苯酚、肟、具有1至約25個碳原子的碳長度(包括羰基碳)的鏈烷酸(例如羧甲基、丙酸和丁酸)、二硫代吡啶、
乙烯吡啶、2-取代-1， 3-噁唑啉、2-取代-1， 3-(4H)-二氫噁嗪、2-取代 -1， 3-喀唑啉和2-取代-1， 3-(4H)-二氫噻溱。
所述核分子R可以是任何單體或低聚物分子(假如有三個或更多個用于連接聚合物鏈段的活性部位)，且通常包括3至約32個之間的活性部位，更優(yōu)選3至約25個之間的活性部位，最優(yōu)選3至約10個之間的活性部位(例如3、 4、 5、 6、 7、 8、 9或10個活性部位)。應了解，在所述核分子上的活性部位的數目可以大于實際上用于與聚合物鏈段連接的部位的數目(例如活性部位的數目可以大于P)。所述活性部位包括用于與官能化的聚合物鏈段反應的末端官能團，且可以包括多于一種類型的官能團。例如，某些二肽或三肽核分子將包含一個或多個羧酸基和一個或多個胺基。如上所述，所述R核分子可以是形成多臂核分子的多肽(例如二肽或三肽)或二硫化物與多元醇的組合，聚合物臂可以與所述多臂核分子在多元醇的羥基的部位和/或多肽或二硫化物的任何游離活性基的部位連接。此類型的核分子在下文反應方案VII中列出。應了解，R核分子并不必須在連接所述聚合物臂之前預先形成。而是，所述核分子可以在已經將聚合物臂與一個組份連接之后產生，所迷組份將形成最終的核分子。例如，如在反應方案VII 中列出，聚合物臂在通過二硫化物或二肽連接體將兩個聚合物修飾的多元醇分子連接在一起之前，可以與多元醇分子連接。
用作核分子的多元醇包括多個可用的羥基。取決于期望的聚合物臂的數目，所述多元醇通常包含3至約25個羥基，優(yōu)選約3至約22 個羥基、最優(yōu)選約5至約12個羥基。盡管羥基之間的間距在多元醇與多元醇之間不同，但是在每個羥基之間通常有l(wèi)至約20個原子(如碳原子)，優(yōu)選1至約5個。具體多元醇的選擇取決于期望的、聚合物臂連接部位所需的羥基的數目。多元醇起始材料的重均分子量通常在約 100至約2,000 Da之間。所述多元醇通常具有分支結構，這意味著在多元醇的烴核結構中的一個或多個碳原子與三個或四個原子共價連接，所述原子選自碳原子和連接醚的氧原子(即，與兩個碳原子連接的氧原子)。
優(yōu)選用作核分子的多元醇包括甘油低聚物或聚合物，如六甘油、季戊四醇及其低聚物或聚合物(例如二季戊四醇、三季戊四醇和四季戊
四醇)；和糖衍生的醇，如山梨醇、阿拉伯糖醇(arabanitol)和甘露醇。同時，很多商業(yè)可得的包含可電離基團的多元醇是適當的起始材料，所述可電離基團如2-氨基-2- (羥曱基)-1， 3-丙二醇(TRIS) 、 2- [二 (2-羥乙基)氨基]-2-(羥甲基)-1， 3-丙二醇、{[2-羥基-l， 1-二 (羥甲基) 乙基]氨基}乙酸(Tricine)、 2-[ (3-{[2-羥基-l， l-二 (羥甲基)乙基] 氨基}丙基)氨基]-2-(羥甲基)-1， 3-丙二醇、2- {[2-羥基-1， 1-二 (羥甲基)乙基]氨基)乙磺酸(TES)、 4-{[2-羥基-1，1-二(羥曱基)乙基]氨基}-1-丁磺酸和2-[二(2-羥乙基)氨基]-2-(羥曱基)-l， 3-丙二醇鹽酸鹽。通常，本發(fā)明所用的聚合物多元醇包括不超過約25個單體單元。下文一起提供二季戊四醇和三季戊四醇的結構和六甘油一種可能的結構。
具有21個可用的羥基的羥丙基-p-環(huán)糊精是另一個示例性的多元醇。又一個示例性的多元醇是從Hyperpolymers GmbH of Freiburg, Germany獲得的高支化聚甘油，其在下文顯示。多元醇可以包括與多元醇核連接的PEG低聚物或聚合物鏈段。所述多元醇起始材料通常是產物混合物的形式，如多元醇低聚物或不同分子量的聚合物的混合物、或不同分子量的乙氧基化多元醇結構的混合物，所述混合物可能進一步包括殘留量的原始的多元醇單體單元(如甘油)。但是，在起始混合物中的至少一種多元醇通常是根據式R (OH) p 具有至少三個可用的羥基的分支多元醇，其中R是分支烴，任選包括一個或多個醚鍵，且P是至少3，通常是3至約25,且優(yōu)選3至約10。
在本發(fā)明的某些實施方案中，特別優(yōu)選具有緊密間隔的羥基的多元醇，其促進作為羥基保護基團的環(huán)縮醛基或環(huán)縮酮基的使用。在多元醇結構內的羥基之間的兩個或三個碳原子的間隔使某些優(yōu)選的雜環(huán) 保護基團能夠形成。例如，使用本領域已知的技術，季戊四醇低聚物或聚合物的羥基之間的緊密間隔使環(huán)縮醛基或環(huán)縮酮基能夠形成。所述環(huán)縮醛基或環(huán)縮酮基可以通過使多元醇與醛試劑(如具有式R'-CH0 的試劑，其中R，是烷基、取代的烷基、芳基或取代的芳基)或酮試劑 (如環(huán)己酮)反應而形成。示例性的醛試劑是苯曱醛。例如，使用季戊四醇低聚物或聚合物核，由與醛試劑反應而生成的結構如下所示。通過以受保護的形式安置大部分的多元醇的羥基，所述多元醇核
可以與包括可電離的官能團23的試劑反應以產生多種由其中存在的z3
基團的數目區(qū)別的產物。通常，所述反應產生單官能化的產物、雙官
能化的產物和殘留的未反應的多元醇。離子交換色i普法系統(tǒng)可以用于根據電荷差異而分離每種產物部分，因而允許期望的單官能產物的純化。用于根據電荷差異而純化PEG聚合物物質的方法在美國專利申請公布第2005/0054816號中列出，所述專利申請的全部內容通過引用并入本文。
在純化方法中利用的離子交換柱可以是任何離子交換柱，所述離子交換柱按常規(guī)用于分離基于電荷的混合物(Ion Exchange Chromatography. Principles and Method. Pharmacia Biotech 1994; "Chromatography: a laboratory handbook of chromatographic and electrophoretic techniques (色語法色鐠法和電泳技術的實驗室手冊) " Hef tman， E (編)，Van Nostrand Rheinhold Co. ， New York ， 1975)。每根柱包括離子交換介質和經過該離子交換介質的流動相或洗脫液。適合在本發(fā)明中4吏用的離子交換柱包括由Applied Biosystems 制備的？01103@離子交換介質和由？&&1"1^"&制備的3￡ 1^1103￡@離子交
換介質。
在某些式(IIIa)的實施方案中，每個X1、義2和乂3存在時，選自由下述基團組成的組 -C (0) - 、 -C (0) -NH- 、 -NH-C (0) -NH- 、 -O-C(O)-NH- 、 -C(S)- 、 -CH廣、-CH2-CH2- 、 -CH廣CH廣CH廣、 -CH廣CH廣CH廣CH2-、 -O-CH廣、-CH2—0-、 -O-CH廣CH廣、-CH2-0-CH2-、 -CH廣CH廣O-、 -0-CH廣CH廣CH2-、 -CH2-0-CHrCH2-、 -CH2-CH2-0-CH2-、-CH廣CH廣CH廣O- 、-0-CH廣CH2-CH廣CH廣、-CH2-0-CH2-C^-CH2-、 -CH2-CHrO-CH2-CH2- 、 -CH「CH2-CH2-0-CH2- 、 -CH2-CH2-CH2-CH2-0-、 -C (0)-NH-CH廣、 -C (0)-NH-CH廣CH廣、-CH2-C (0)-NH-CH廣、 -CH廣CH廣C (0) -NH-、 -C (0) -NH-CH廣CH廣CH廣、-CH廣C (0) -NH-CH廣CH廣、 -CH2-CH2-C (0) -NH-CH廣、 -CH2-CH2-CH2-C (0) -NH- 、
-C (0) -NH-CH廣CH2-CH廣CH廣、 -CH廣C (0) -NH-CH2-CHrCH2- 、 -CH「CH2-C (0) -NH-CH廣CH廣、 -CH「CH2-CH2-C (0) -冊-CH廣、 -CH2-CH2-CH廣C (0) -NH-CH廣CH廣、 -CH2-CHrCH2-CH2-C (0) -NH-、 -C(O)-0-CH廣、-CH廣C (0) -O-CH廣、-C^-CH2-C (0)-0-CH廣、 -C (0)-O-CH廣CH廣、 -NH-C(O)-CH廣、 -CH廣NH-C (0)-CH2-、 -CH廣CH廣NH-C (0) -CH廣、-NH-C (0) -CH廣CH廣、-CH廣NH-C (0) -CH廣CH廣、 -CH2-CH2-冊-C (0) -CH廣CH廣、-C (0) -NH-CH廣、-C (0) -NH-CH廣CH廣、 -O-C(O)-NH-CH廣、-O-C(O)-NH-CH廣CH廣、-NH-CH廣、-NH-CH廣CH廣、 -CH廣NH-CH廣、-CH廣CH廣NH-CH廣、-C (0) -CH廣、-C (0) -CH廣CH廣、 -CH廣C(O)-CH廣、-CH「CH廣C (0)-CH廣、-CH2-CH2-C (0)-CH廣CH廣、 -CH廣CH廣C (0) - 、 -CH廣CH廣CH廣C (0) -NH-CH廣CH廣NH- 、
-CH廣CH2-CH廣C (0) -NH-CH廣CH廣NH-C (0)- 、 -CH廣CH廣CH廣C (0) -NH-CH2-CH2-NH-C (0) -CH廣、 -CH廣CH廣CH廣C (0) -NH-CH廣CH廣NH-C (0) -CH廣CH廣、 -C (0) -NH- (CH2) w-NH-C (0) - 、-NH-C (0) -NH- (CH2) h-NH-C (0)-和 -O-C (0) -NH- (CH2)卜6-NH-C (0) - 、 -O-C (0) -NH- [CH2] h- (OCH2CH2)廣、 -NH-C(O)-O-[CH2]h-(OCH2CH2)j-、二價環(huán)烷基、-O-、 -S-、-綠6)-及其組合，其中R6是H或選自由烷基、取代的烷基、蜂基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、芳基和取代的芳基組成的組的有機基，(h)是零至 6,且(j)是零至20。
在某些式(IIIa)的實施方案中，每個POI^是聚(乙二醇)聚合物，且R是二硫化物連接體、二肽、三肽或四肽，其表示R部分將包括至少一個二硫鍵(來自二疏化物連接體)或酰胺鍵(例如肽殘基之間的鍵)。優(yōu)選R基包括含有至少一個賴氨酸殘基的那些基團。適合的二疏化物連接體包括各種含有-S-S-鍵且鏈長度共有4-25個原子的連接體，且優(yōu)選具有4-8個可用于連接聚合物鏈段的官能團的二硫化物分子。
在某些式(IIIa)的實施方案中，每個P0I^和P0I^是分支聚(乙二醇)聚合物。
式(IIIa)的聚合物試劑可以包括從具有以下結構的二硫化物分子得到的R部分
在某些式(IIIa)的實施方案中，每個POLY1包含兩個或更多個通過在體內可斷裂的鍵(例如，酰胺鍵、聚氨酯鍵、二硫鍵、二肽鍵、三肽鍵和四肽鍵)連接的聚(乙二醇)鏈段，A是 -(X8)h-(L6)j-(X9)「POLY2-Z3, P0LY2是聚(乙二醇)聚合物，且R從多元
醇得到。
在式(IIIa)的又一實施方案中，每個POLY1包含聚(乙二醇)聚合物，A不存在，且R包含至少一個肽殘基。R部分可以進一步包含二硫鍵。在某些實施方案中，R包含至少兩個通過酰胺鍵連接至連接體的賴氨酸殘基，所述連接體選自由脂族碳鏈、包含二硫鍵的脂族碳鏈和聚(乙二醇)低聚物(例如含有1-25個單體單元的低聚物)組成的組。
在式(IIIa)的又一實施方案中，每個P0LY1包含聚(乙二醇)聚合物，A不存在，且R包含含有至少一個二石危鍵和至少兩個酰胺鍵的非肽部分。"非肽"是指所述R分子不包括肽殘基(即，酰胺和二硫鍵不是肽分子的一部分)。如此，因R核分子包含酰胺鍵，故R核分子可以用來模擬肽分子的結構，但其實質技術上不是肽。
本發(fā)明的多臂聚合物的兩個例子包括含有實質上非肽的部分的核分子，但所述核分子包括在聚氨酯鍵的特定鄰近處的酰胺鍵，如下所示。如在這些示例性的結構中所示出的，所述核分子的中心部分包括在聚氨酯鍵的特定鄰近處的酰胺鍵。如下所示的核分子的外側分支部分可以從肽分子(如賴氨酸殘基)得到。下述的Polyl和Poly2可以具有如在式(IIIa)中對于POLY1所迷的相同的定義。在這些示例性的結構中的L和L:可以表示間隔基部分，如在式(IIIa)中的X2。 n的值取決于PEG鏈段的期望的分子量，但通常范圍為1-25。這種核分子可以通過使二胺連接體(如H2N-(CH2)4—仰2或H2N-(OCH2CH2)n-NH2)與兩個賴氨酸殘基反應來制備。然后所述賴氨酸殘基的可用的官能團可以與聚合物試劑反應以形成最后的聚合物分子。
在任何上文所述的實施方案中，每個a、 b、 c、 h、 i和j可以是零或1，且a、 b、 c、 h、 i和j的值的所有變換被明確地包含在本文中。例如，本發(fā)明的實施方案包括其中所有a、 b、 c、 h、 i和j都是零或所有都是1、 a是1和所有其他值是零、b是1和所有其他值是零等的實施方案。
優(yōu)選作為L3鍵使用的或可以形成式(IIIa)的R核部分的一部份的聚氨酯鍵具有-0-C(O)-NH-CHY-C(O)-NH-Y'-結構，其中Y和Y'獨立地選自H、烷基、取代的烷基和芳基。
一個示例性的本發(fā)明的多臂聚合物試劑具有以下結構其相應于式(IIIa)的聚合物試劑，其中p是2且每個P01^是多臂聚合物。該末端羥基可以被其他官能團替代而不偏離本發(fā)明。
另一個本發(fā)明的多臂聚合物試劑如下示例。所示的多臂試劑具有雙賴氨酸核和三個聚合物臂。分子中的肽鍵通過一些本領域普通技術人員已知的酶(如哺乳動物枯草溶菌素樣絲氨酸內切蛋白酶PC2，參見 Eskeland等(1996) /. //^e^. 98 (1): 148-156)易于斷裂，
因而使其在某些體內條件下不穩(wěn)定。在下述反應方案I中，mPEG-BTC 與二肽反應來形成具有活性羧酸單元的聚合物，所迷活性羧酸單元可以通過離子交換色譜法用于純化聚合物。
J3H<formula>formula see original document page 57</formula> 反應方案I
其中分支或多臂聚合物替代上文利用的線性聚合物的類似的例子如下述反應方案II中列出。另一方面，可降解的二肽鍵的斷裂產生兩個片段，所述片段約為原始軛合物的一半大小，這取決于活性物(藥物) 組分的大小。反應方案II
使用類似于上文所述的那些方法的方法，二硫化物連接體可以用于代替二肽連接體。二硫鍵在某些酶的存在下不穩(wěn)定，因此提供可以
有助于藥物和/或聚合物清除的可降解的鍵。這樣分子的合成方法在下述反應方案III中所示。酸基團允許離子交換色譜法且可以被活化
每個R基團是烷基(如曱基)或取代的烷基(如,基)，且為潛在可去除的( 如被氫解的芐基)以允許與可釋放的藥物分子共軛的活化
可被某些酶斷裂的半胱氨酸部分的二疏鍵
<formula>formula see original document page 59</formula>反應方案III
本發(fā)明還提供了上文所述的多臂聚合物的軛合物，如具有以下結
構的輒合物
<formula>formula see original document page 59</formula>
式(nib)
其中
B是A、 - (X8) h- (L6) f (X9) 「POLY2—i;-藥物或-(X8) 「 (L7)廣(X9) 「L9-藥物；
每個相同或不同的0是《1或1>8-藥物；相同或不同的1/和L9是在體內任選可斷裂的鍵藥物是生物活性劑的殘基；
每個X1、 X2、 X3、 X8、 X9、 L3、 L6、 L7、 A、 Z1、 a、 b、 c、 h、 i、 j 和P如先前關于式(IIIa)所定義。通常，l/和i;由式(IIIa)的聚合物的官能團(分別為Z'和Z。與生物活性劑的反應而形成。
示例性的本發(fā)明的軛合物在下文顯示，所述軛合物由多肽活性劑與示例性的包含可降解的酰胺鍵的聚合物試劑的反應而生成。所述聚
合物試劑共軛至藥物分子。當PEG單元的分子量是相對高時，則可降解的酰胺連接體的重要性變得明確。如果每個PEG鏈段的分子量是 20， 000道爾頓，那么所述聚合物具有略微超過60， 000道爾頓的分子量。如果添加具有8， 000道爾頓的分子量的多肽而制備軛合物(下文所述，通過硫醇基與聚合物的馬來酰亞胺共軛)，則聚合物的最終分子量立刻超過68，000道爾頓。該大小的分子的清除非常困難，且通常不會被施用。然而，經由本文所述的一個實施方案，證明本發(fā)明的優(yōu)點是可能的。
例如，下文所示的軛合物(從如本文所述的聚合物試劑制備)可以在二肽的中心的肽鍵處(如下述虛線所示)斷裂，從而具有約40，000 道爾頓和28， 000道爾頓的分子量的輒合物的片段生成。因此，該藥物的清除率由于可降解的鍵的存在而提高。
另一個示例性的產生本發(fā)明多臂軛合物的反應方案如下文反應方
案IV所示。如圖所示，具有可用的酰胺基的藥物分子與以核分子中的
不穩(wěn)定二硫鍵為特征的多臂聚合物試劑反應。<formula>formula see original document page 61</formula>
其中R通常是相對惰性的封端基團，如烷基或取代的烷基(如芐基)。
反應方案IV
下述的反應方案(指定的反應方案V)提供了方法的其他的實施例，在所述方法中本發(fā)明可以提供可降解的共軛結構。將包含受保護的酯基團的活性聚合物基團加至核聚合物分子的一個臂。此后，將可降解的連接體(在二肽連接體的情況下)加至多臂核的三個聚合物臂。然后，酯水解釋放由色鐠法純化的羧酸基團。隨后，進行處理，通過添加可以與藥物分子連接的官能團(例如NHS酯)而允許所有四個臂的活化，所述四個臂還可以根據需要被進一步官能化。反應方案v
當同時給定實際用于藥物遞送的最后的總分子量時，各種聚合物鏈段的分子量可以是可變的以進行實際分子的構建。因此，較小的核
分子的PEG連接體(即在反應方案V中以n表示)通常是短連接體。相比較，主鏈PEG連接體(即在反應方案V中以m表示)通常是大的聚合物鏈。
與在上述聚合物試劑的每個末端處的藥物分子反應后，生成的軛合物可以以下述通用結構來表示
^POL^——h—POLY2—1_2一POLY3一L3-L4—藥物
j"POLY,——L5一P。LY3一L3一U一藥物、乂 /3
其中POLY, - P0LY3是如上文所述的水溶性和非肽聚合物，L、 L2 和L3是穩(wěn)定的連接體，優(yōu)選L4是可以釋放藥物分子的可降解的連接體，且Ls是經水解或酶可降解的鍵，其允許將所述軛合物分子斷裂成更小的聚合物鏈段。因此，根據如下述反應方案VI所示的斷裂反應，整個方法最終形成下述的用于清除的剩余組分。新基團G,、 &和G3是由可降解連接體斷裂而生成的新的末端基團。
<formula>formula see original document page 63</formula>反應方案VI
上述反應的全部結果是提供在藥物遞送后斷裂成組分的多臂聚合物，所述組分包括多臂核和若干個較小的大體上線性的聚合物單元。因此該方法避免可以抵抗腎清除的高度球形多臂聚合物的清除。
在另一個示例性的多臂聚合物的實施方案中，用于藥物遞送的四臂試劑在下文反應方案vn中描述。該合成具有若干個點，其中中間體可以使用離子交換色鐠法來純化。在第一步驟中，商業(yè)上可得的以酯基團為特征的分支多元醇與二琥珀酰亞胺碳酸酯反應以使羥基轉化
成琥珀酰亞胺碳酸酯基團。在任選的第二步驟中，相對小的PEG連接
體(可以是商業(yè)上可得的單保護的二胺)與核分子反應以形成具有兩個乙二醇低聚物/聚合物間隔基的核，所述間隔基與末端受保護的胺基連
接(參見下文的反應方案V I I(a))。<formula>formula see original document page 64</formula>
反應方案VII(a) B0C保護基的脫保護和與單保護的PEG-BTC的反應導致在PEG臂和分支碳原子之間具有聚氨酯鍵的分支PEG結構的形成(參見下文反應方案VII(b))。聚合物衍生物可以在連接PEG-BTC分子之前或之后，通過離子交換色i普法來純化。應了解，在V I I(b)中的分支PEG結構被式IIa的分支聚合物結構所包含。乙二醇單體ml和m2的數目可以變化。但是，來自單保護的二胺分子的乙二醇鏈通常具有約2至約80 之間的單體單元(即ml在約2至約80之間)，更優(yōu)選約40至約80單體單元。
在下文VII(b)中連接的笫二聚合物鏈通常更長，如包含約100至約450之間的單體單元(即m2是約100至約450)、更優(yōu)選約150至約 250單體單元的聚合物鏈。<formula>formula see original document page 65</formula> 反應方案vn(b)
酸向N-羥基琥珀酰亞胺活性酯的轉化和活性酯與氨烷基二硫化物的偶合產生具有四臂結構的二硫化物，如下文反應方案VII (c)中所示。可以在包含所述二硫化物的連接體的任何碳上的R基可以變化，但是示例性的R基包括羧酸和低級烷基，如甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基及類似基團。并且，出于增強的純化的目的，羧酸基團還可以通過間隔基基團從連接體中去除，所述間隔基有助于從連接體的核使酸基團留出間隔，以允許更好地結合至色語柱。在沒有還原二硫鍵下，氫解節(jié)基而使羥基的形成發(fā)生。反應方案VII(c) VII (c)的產物的末端羥基與二琥珀酰亞胺碳酸酯的活化在聚合物鏈的四個末端處形成活性的琥珀酰亞胺酯。羥基還可以被轉化成其他本領域已知的官能團。因此，活化的多臂聚合物可以在每個聚合物鏈的末端處與藥物分子共輒。期望所生成的軛合物隨時間經受酶的二硫化物斷裂而允許兩個分子的清除，每個基本上是具有兩個PEG鏈的分支PEG分子。示例性的藥物軛合物結構如下所示。H
藥物——S"
藥物-
如果需要更高的最后軛合物的分子量，那么它可能必需地提供除上文結構的二硫鍵之外的聚合物斷裂的部位。例如，如果在上述的第一反應序列中利用分子量3， 400道爾頓的PEG二胺，那么產物二胺(B0C 還受保護)具有約6，800道爾頓的分子量。如果使用具有IO，OOO道爾頓的分子量的PEG-BTC片段，制成作為藥物輒合物的與上文所示相同的最終結構，那么最終的聚合物具有超過53， 600道爾頓的分子量。
可以有益地提供這樣具有其他降解點的高分支結構，以允許在合理的時間范圍內使分子清除。這通過在每個臂的兩個PEG鏈段的連接點中添加第二酶可斷裂的鏈段來實現。在與二胺連接體反應前，使用與PEG-BTC組分預先連接的二肽連接體在下述反應方案VIII中對此進行示例。在合成的最后步驟后，獲得試劑。最終的聚合物降解的五個點以虛線顯示。因此，如果所有的酶過程在清除之前發(fā)生，那么不大于約7， 000道爾頓的聚合物鏈段將清除。下文列出的R2和R3基團可以是，例如羧基烷基、垸基等。<formula>formula see original document page 68</formula>反應方案VIII
作為選擇，二硫化物可以包含用于純化的酸基團。例如，可以使用二肽、胱氨酸，其將提供兩個用于在隨后階段純化聚合物的羧酸基。然后酸基團可以任選被活化以形成六臂聚合物。
同時，可以使用任選具有游離的羧酸基的二肽、三肽或四肽，來
代替在反應方案VII和VIII的多臂結構中主連接體的二硫化物。例如，
示例性的二肽連接體可以包括谷氨酸殘基和另一個氨基酸(例如下文所示的丙氨酸)，這被胺基(例如，添加以形成具有下文所示的丙氨酸的游離胺基的酰胺的四亞乙基二胺)進一步封端。示例性的二肽(與四
亞乙基二胺偶合的Glu-Ala)在下文所示。
&=保護基團或最終藥物分子， R2 = R3 ^獨立地在L-肽單元上的取代基O O
II H II Hl"b hb H2 hfe
H2N-CH~C-N——CH~C——N~C——C~C——C-Nh^
I I
Ob Me
I
Ob
I
I
OH
本文所參考的所有論文、書籍、專利、專利出版物及其他出版物，其全部內容通過引用并入本文。
in.實驗性
應理解，雖然已經結合某些優(yōu)選的具體實施方案描述了本發(fā)明，但前述的描述和隨后的實施例旨在解釋，而不是限制本發(fā)明的范圍。在本發(fā)明的范圍內的其他方面，優(yōu)點和修改對本發(fā)明所屬領域的技術人員是顯而易見的。例如，在某些應用中，可以期望利用根據上式的任一的聚合物試劑，其中所有的鍵是穩(wěn)定的而不是可降解的。
在附加的實施例中，除非另有指出，所指的所有PEG試劑是商業(yè) 上可用的，例如從Nektar Therapeutics, Huntsville, AL獲得。所有^NMR數據通過由Bruker制造的300或400 MHz NMR波譜儀而產生。使用Agilent 1100 HPLC system (Agilent)、凝膠滲透或離子交換柱、作為流動相的含水磷酸鹽緩沖液和折射率(RI)檢測器，進行高效液相色譜法(HPLC)。
具體實施例方式
實施例1:具有三個帶二硫鍵的臂的4臂-PEG (20 KDa)-單-丁 A.季戊四醇乙氣基化-單-PEG(5 KDa)-丁酸曱酯HO(CH2CH20)n
,(OCH2CH2)nOH ^^(OCH2Chb〉nOH
其中n獨立地是等于0至8
(OCH2CH。nOt
DSC
(OCH OH
HO(CH2CH20—
,(OCH，CH力nOH
(OCH2CH2>nOCO-N
0
(OCH2CH2、nOH /
,<OCH2CH2)，OH
乂i
9 p
季戊四醇乙氧基化物(3/4 E0/0H) (25 g， 0.370 OH當量)在甲苯(IOO ml)中的溶液在減壓下通過蒸餾出甲苯而共沸干燥。經干燥的季戊四醇乙氧基化物溶解于無水乙腈(IOO ml)中，并加入無水吡啶 (4. 2 ml)和二琥珀酰亞胺碳酸酯(9. 5 g， 0.037摩爾)，在氬氣氛下于室溫攪拌混合物過夜。然后，加入PEG(5 KDa)-oc-胺-co-丁酸甲酯(20 g， 0. 0040摩爾)和三乙胺(1. 5 ml),且在氬氣氛下于室溫將反應混合物攪拌過夜。在減壓下蒸餾出溶劑。將粗產物溶解于二氯曱烷(20ml) 中，然后在室溫下加入異丙醇(700 mi)。過濾沉淀的產物，在真空下干燥，得到19 g白色固體。
NMR (d6-DMS0) : 1.71 ppm (q，墜-CH廣C00-) 2.24 ppm (t， -CH廣C00-)， 3.25 ppm (s， -C-CH2-0-) ， 3.51 ppm (s， PEG骨架)。
GPC分析顯示產物包含95. 7 %具有—5 KDa分子量的想要的產物和4. 3 %具有—10 KDa分子量的二聚物。
B.季戊四醇乙氧基化-單-PEG(5 KDa)-丁酸曱酯三琥珀酰亞胺碳
將季戊四醇乙氧基化-單-PEG(5 KDa)-丁酸曱酯(5, 0 g， 0.0030 -OH當量)溶解于無水曱苯(100ml)中。在減壓下蒸餾出甲苯。將干燥的產物溶解于無水乙腈(25 ml)中，并將無水吡啶(O. 34 ml)和二琥珀酰亞胺碳酸酯(O. 85 g， 0. 0033摩爾)加至溶液中。在氬氣氛下于室溫攪拌混合物過夜。NMR分析顯示所有羥基轉化為琥珀酰亞胺碳酸酯且該混合物還包含殘留的二琥珀酰亞胺碳酸酯(0. 000317摩爾)。加入水 (0.005 ml),并在氬氣氛下于室溫攪拌混合物過夜。連續(xù)的NMR分析顯示產物仍被100%取代，但是殘留的二琥珀酰亞胺碳酸酯全部水解。所生成的溶液直接用于合成的下一步驟。
麗R (CDC1》1.88 ppm (q，巡-CH廣C00-，每摩爾產物1當量)， 2.37 ppm (t， -CH廣COO-，每摩爾產物1當量)，2.69 ppm (s，游離 N-羥基琥珀酰亞胺峰)，2.82 ppm (s， -0-(C=0) O-NHS，每摩爾產物三當量)，3. 33ppm (s， -C-CH廣O-)， 3. 63 ppm (bm， -C-CH廠0-， -OC仏和PEG骨架)，3.77 ppm (m，-墜(:1120-琥珀酰亞胺碳酸酯，每摩爾產物三當量)，4.44 ppm (m， -CH^^O-琥珀酰亞胺碳酸酯，每摩爾產物<formula>formula see original document page 72</formula>
將三乙胺(2.8 ml， 0.0200摩爾)加至胱胺二鹽酸鹽(2. 3 g， 0. 0100摩爾)在無水乙腈(50 ml)中的懸浮液，且在氬氣氛下于室溫將混合物攪拌30分鐘。然后在20分鐘內加入溶解于無水乙腈(50 ml) 的H0-PEG(5KDa)-琥珀酰亞胺碳酸酯(5. 0 g， 0.0010摩爾)，且在氬氣氛下于室溫攪拌混合物過夜。在減壓下蒸餾出溶劑，并將粗產物溶解于二氯曱烷中，在0-5。C下用異丙醇沉淀兩次。收獲4. 7 g。
NMR (d廣DMSO): 2. 70 ppm (t， -墜-S-) ， 3. 01 ppm (t，-迅-NlU ， 3.11 ppm (t， -CH廣NH (C=0) -0-) ， 3.51 ppm (s， PEG骨架)，4.04 ppm (m， -CH2-0 (C=0)-) ， 4.57 ppm(-OH)， 7.11 ppm (t， -(OO)-NH-)。
D.具有三個帶二硫鍵的臂的4臂-PEG(20KDa)-單-丁酸<formula>formula see original document page 73</formula>
HO-PEG(5KDa)-胱胺(3. 8 g， 0. 00076摩爾)在甲苯(50 ml)中的溶液在減壓下通過蒸餾出甲苯而共沸干燥。經干燥的產物溶解于無水乙腈(50 ml)中，并加入三乙胺(O. 30 ml)。然后加入包含1. 2 g固體化合物(0. 00072琥珀酰亞胺碳酸酯當量)的季戊四醇乙氧基化-單 -PEG(5 KDa)-丁酸甲酯三琥珀酰亞胺碳酸酯的溶液，并在氬氣氛下于室溫攪拌混合物過夜。在減壓下蒸餾出溶劑。使產物溶解于100ml去離子水，并通過加入5% NaOH水溶液將溶液的pH調節(jié)至12. 1。在pH 12. 0 +/- 0. 1下攪拌溶液2小時。然后加入NaCl (10 g)，并用5% H3P04 調節(jié)pH至3. 0。用二氯曱烷(40、 20和15ml)萃取產物。用無水MgS(h 干燥萃取液，并在減壓下蒸餾出溶劑，得到4. 6 g白色固體產物。
HPLC分析顯示，產物純度為66. 8 °/ ，并被高分子量雜質(8. 2 wt %) 和低分子量雜質(25. 0 wt %)污染。
^^用DEAE Sepharose FF介質通過離子交換色i普法來純化產物，得到2.1 g 100%純度的4臂-PEG(2G KDa)-單-丁酸。凝膠滲透色i普法顯示產物的分子量為18, 626 Da。
實施例2:基于三賴氨酸的4臂-PEGA.基于三賴氨酸的4臂-芐氧基-PEG(2Q KDa)-酸
o
NH^OPEG(5K)-OBn O
KH^OPEG(5K)-OBn
O il
LYS"CNH-LYS"(iNH-LYS-COH
O 2
O
NH&OPEG(5K>OBn O
NHCOPEG(5K)OBn
將三賴氨酸(l. 0 g, 0. 00151摩爾)溶解于100 ml 0. 1 M 緩沖液，并用0. 1 M NaOH將pH調節(jié)至8. 5。將BnO-PEG(5KDa)-BTC (Nektar Therapeutics, 40. 0 g， 0. 00800摩爾)在30分4中內加至所得的溶液中，并通過加入0. 1 M NaOH使pH保持在8. 5。將所得的溶液攪拌3小時后，加入NaCl (10 g)，并用10%磷酸調節(jié)pH至3. 0。用二氯曱烷萃取產物，MgS04干燥萃取液。然后在減壓下蒸餾出溶劑。在真空下干燥濕產物，收獲39. 5 g為白色固體的產物。HPLC分析顯示產物四-N-PEG化三賴氨酸(MW約20KDa)純度為86.4%,并被高分子量副產物(3. 1 wt %)和低分子量(10. 5 wt %)副產物污染。
使用DEAE Sepharose FF介質通過離子交換色譜法純化產物，得到22.8 g 100%純度的基于三賴氨酸的4臂-芐氧基-PEG(20 KDa)酸。 MALDI分析顯示產物的分子量(Mn)為20， 661 Da。
NMR (d6-DMSO): 1.35 ppm (bm， -CH-(述)3-CH廣NH-，賴氨酸， 18H), 2.92 ppm (q， -CH廣匪-，賴氨酸，6H), 3.51 ppm (s，聚合物骨架)，3.95 ppm (m， -^i-COOH,賴氨酸，1H)， 4.02 ppm (m， -OCH廣區(qū)-O-(C=0) NH-， 8H)， 4. 49 ppm (s, -CH廣，千基，8H) ， 7.32 ppm (m，千基的芳族質子，20H)。
B.基于三賴氨酸的4臂-芐氧基-PEG(20 KDa)-酸乙酯<formula>formula see original document page 75</formula>
NH^:0"PEG(5K)-OBn 將N-羥基琥珀酰亞胺(O. 144 g， 0. 00125摩爾)和N,N'-二環(huán)己基碳二亞胺(0.270 g， 0. 00131摩爾)加至基于三賴氨酸的4臂-爺氧基 -PEG(20 KDa)-酸(22.8 g， 0.00114摩爾)在無水二氯甲烷(228 ml) 中的溶液，并在氬氣氛下于室溫攪拌混合物過夜。然后加入無水乙醇 (30 ml)、 l-羥基苯并三唑(O. 500 g)和4-二甲氨基吡啶(2. 5 g)，并在氬氣氛下于室溫攪拌混合物過夜。在減壓下蒸餾出溶劑。使產物溶解于35 ml 二氯甲烷，并用600 ml異丙醇沉淀，干燥后得到20. 6 g 白色固體。
腿(d6-DMS0): 1.29 ppra (t， CH3-，乙基，3H) ， 1.35 ppm (bm，
-CH-(^) 3-CH廠NH-，賴氨酸，18H), 2.92 ppra (q， -CH廣NH-，賴氨
酸，6H)， 3.51 ppm (s，聚合物骨架)，3.98 ppm (m，C00Et，賴
氨酸，1H)， 4.02 ppm (m， -OCH廠迅-O-(C=0) NH-， 8H), 4.49 ppm (s，
-CH2-，芐基，8H)， 7.32 ppra (m，芐基的芳族質子，20H)。
C.基于三賴氨酸的4臂-羥基-PEG(20 KDa)-酸乙酯
<formula>formula see original document page 75</formula>將在炭上的氫氧化鈀(l. 5 g， 20% Pd， — 50%水)加至基于三賴氨酸的4臂-芐氧基-PEG(20 KDa)-酸乙酯(20. 0 g)在乙醇(200 ml)中的溶液，并在45 psi氫氣下將混合物氫化過夜。過濾混合物，并在減壓下蒸餾出溶劑，得到19. 5 g白色固體產物。
NMR (d6-DMS0): 1.29 ppm (t， CH3-，乙基，3H) ， 1.35 ppm (bm， -CH-(墜)3-CH2-NH-，賴氨酸，18H)， 2.92 ppm (q， -CH廣NH-，賴氨酸，6H), 3.51 ppm (s，聚合物骨架)，3.98 ppm (m， -^[-COOEt,賴氨酸，1H)， 4.02 ppm (m， -OCH廣0-(C=0) NH-， 8H) ， 4.57 ppm (t, -0H， 4H)。
D.基于三賴氨酸的4臂-琥珀酰亞胺碳酸酯-PEG(2Q KDa)-酸乙酯
<formula>formula see original document page 76</formula>將基于三賴氨酸的4臂-羥基-PEG(20 KDa)-酸乙酯(19. 5 g， 0. 0039 0H當量)在無水乙腈(200 ml)中的溶液在減壓下通過蒸餾出乙腈而共沸干燥。經千燥的產物溶解于無水乙腈(200 ml)中，并加入無水吡啶(O. 56 ml)和二琥珀酰亞胺碳酸酯(1.44 g， 0.056摩爾)，在氬氣氛下于室溫攪拌混合物過夜。然后過濾混合物，在減壓下蒸餾溶劑。將粗產物溶解于二氯甲烷(20 ml)中，然后在室溫下加入異丙醇(600 ml)。過濾出沉淀的產物，在真空下干燥，得到18.4 g白色固體。
NMR (d6-DMS0): NMR (d6-DMS0): 1. 29 ppm (t， CH廣，乙基，3H)， 1.35 ppm (bm， -CH-(區(qū))廠CH廣NH-，賴氨酸，18H)， 2.84 ppm (s， -CH2CH2-琥珀酰亞胺，16H)， 2.92 ppm (q， -CH廣NH-，賴氨酸，6H)， 3.51 ppm (s，聚合物骨架)，3.98 ppm (m， -C00Et，賴氨酸，1H)， 4.02ppm(m，-0CH2-CH廣O-(C=0) NH-,8H) ，4.46ppm (m，-0CH2-墜-0- (C=0) NHS， 8H)。
實施例3:具有一個二硫鍵的4臂PEG(2 0K)-單-丁酸
A. PEG(5 KDa)-a-琥珀酰亞胺碳酸酯-co-丁酸曱酯
將PEG(5 KDa)-a-羥基-co-丁酸曱酯(58. 8 g， 0.0.0118摩爾) 在曱苯(500 ml)的溶液在減壓下通過蒸餾出曱苯而共沸干燥。經干燥的產物溶解于無水乙腈(300 ml)中，并加入無水吡啶(l. 52 ml)和二琥珀酰亞胺碳酸酯(3.92 g， 0.0153摩爾)，且在氬氣氛下于室溫攪拌混合物過夜。在減壓下蒸餾出溶劑。將粗產物溶解于二氯甲烷(IOO ml) 中，然后在室溫下加入異丙醇(1500 ml)。過濾出沉淀的產物，在真空下干燥，得到57.0 g白色固體。
NMR (CDCU: 1.82 ppm (q，區(qū)-CH廣C00-， 2H)， 2.34 ppm (t， -CH2 -COO-， 2H)， 2. 77ppm (s， -C仏CH廣，琥珀酰亞胺基，4H) ， 3.58 ppm (s， PEG骨架)，4.40 ppm (m， -CH2-(C=0)-， 2H)。純度—100%。
B. PEG(5 KDa)-a-(e-Boc-賴氨酸)-co-丁酸曱酯
Boc-LYS-NH2+ SC—PEG(5K》0 (CH2)3 ^OCH-、 COOH
O 'i
Boc-LYS"NH-(C=0)0-PEG(5K)-0-(CH2)3-C-OCH3 COOH
在攪拌下將三乙胺(0. 35 ml)加至e -Boc-賴氨酸(0. 296 g， 0. 0012摩爾)在無水乙腈(50 ml)的分散液中，然后在10分鐘后加入 PEG(5 KDa)-oc-琥珀酰亞胺碳酸酯-co-丁酸甲酯(5. 0 g， 0.0010摩爾)，在氬氣氛下于室溫將反應混合物攪拌過夜。過濾混合物，并在減壓下蒸餾出溶劑。在真空下干燥濕產物，得到4. 8 g白色固體。
NMR (d6-DMSO): 1.35-1.50 ppm (bm， -CH-(區(qū))廠CH廣NH-，賴氨酸，6H)， 1.37 ppm (s， -C(CH3)3， 9H) ， 1.75 ppm (q， ^-CH廣COO-， 2H)， 2.34 ppm (t， -CH2 -COO-， 2H) ， 2.87 ppm (q， -CH廣NH，賴氨酸，2H)， 3.51 ppm (s， PEG骨架)，3.58 ppm (s， CH30-， 3H) ， 4.04 ppm (m,-^-(C=0) NH-， 2H) ， 6. 75 ppm (t， -CH2膽-，1H)， 7.27ppm(d， -CH巡-，1H)。 HPLC分析顯示產物含有92. 1%想要的結構。 C. PEG(5 KDa)-oc-(s-Boc-賴氨酸-胱胺)-co-丁酸曱酯
Uoi;-LYS-NH-(C《〉-0-PEG(5K)-0-(CH2hC-a:Hj COOH
胱胺
13oe-LYS匿NH《0〉一OPEG(沐khch2vc:隱00^ Ah-CH2CH2"S^CH2CH2NH2
將N-羥基琥珀酰亞胺(O. 113 g， 0. 00098摩爾)、1-羥基苯并三唑 (0.025 g， 0.00018摩爾)和N，N'-二環(huán)己基碳二亞胺(0. 213 g， 0.00103摩爾)加至PEG(5 KDa)-oc-(s-Boc-賴氨酸)-co-丁酸甲酯 (4.69 g， 0. 00094摩爾)在無水二氯甲烷(50 ml)的溶液中，并在氬氣氛下于室溫將反應混合物攪拌過夜。過濾混合物，并在減壓下蒸餾出溶劑。將殘渣溶解于無水乙腈(50ml)中，并在攪拌下將溶液緩慢加至胱胺二鹽酸鹽(4.6g， 0. 02摩爾)和三乙胺(5. 6 ml， 0.04摩爾)在無水乙腈(100 ml)中的懸浮液。在氬氣氛下于室溫攪拌混合物過夜。然后過濾溶液，并在減壓下蒸餾出溶劑。將含有粗產物的殘渣溶解于二氯曱烷，用異丙醇沉淀。干燥后收獲3. 79 g。
NMR (d廠DMSO): 1. 35-1. 50 ppm (bm， -CH-(區(qū))3-CH2-NH-，賴氨酸，6H)， 1.37 ppm (s， -C (CH3) 3， 9H) ， 1.75 ppm (q， ■-CHrCOO-, 2H)， 2. 34 ppm (t， -CH2-COO-， 2H) ， 2.78 ppm (t， S,CH萬.2H)， 2.87 ppm (bm， -CH廣NH，賴氨酸，2H和-^S-CH2CH2NH2， 2H) ， (t, S-CH2^pH2， 2H)， 3.51 ppm (s， PEG骨架)，3. 58 ppm (s， CH30-， 3H)， 3. 85ppm (m， -CH-，賴氨酸，1H)， 4. 04 ppra (m，-區(qū)-(C=0) NH-， 2H)， 6.75ppm (t， -CH巡(C-O)-，賴氨酸，1H)， 7. 27 ppm (d, -C哩(C-O)-賴氨酸，1H)， 8.08 ppm (t， -CH2NH (C=0)-，胱胺，1H)。D. PEG(5 KDa)-oc-(賴氨酸-胱胺-賴氨酸)-co-丁酸甲酯<formula>formula see original document page 79</formula>
Boc-LYS匿NH-(00)-OPEG(5K)-0-(Cf W C誦OCH ， NH"CH2CH2"S^S"CH2CH2NH2
二-Boc-LYS-NHS
Boc-LYS-MHC=0)-0-I'EG(5K)-0-(CH2K 6-OCH;
脫保護
o
lrLYS-NH—(C=O)-0 -PEG(5K)"0《CH2)〔C-OCH-:(
NH"CH2CH2"S"ShCH2CH2NI+(C=0)"LYS^NH2
NH2
將三乙胺(O. 21 ml)和N， N-二-Boc-賴氨酸羥基琥珀酰亞胺(O. 437 g， 0. Q0098摩爾)加至PEG(5 KDa) - ct - ( s-Boc-賴氨酸-胱胺)-co-丁酸甲酯(3. 79 g， 0. 00076摩爾)在無水二氯甲烷(50 ml)的溶液中，并
在氬氣氛下于室溫攪拌混合物過夜。在減壓下蒸餾出溶劑。將殘渣溶解于二氯曱烷，并用異丙醇沉淀產物，在真空下干燥。將產物(PEG(5 KDa) - oc - ( e -Boc-賴氨酸-胱胺-二-Boc-賴氨酸)-co -丁酸曱酯)溶解于二氯甲烷和三氟乙酸(40ml) (1: l)的混合物中，并在室溫下攪拌1. 5 小時。在減壓下蒸餾溶劑，且通過用異丙醇沉淀純化產物，得到3.75 g白色固體。
NMR (d廣DMS0): 1.20-1.50 ppm (bm， -CH-(述)3-CH2-NH-，賴氨酸，12H)， 1.75 ppm (q，墜-CH2-C00-， 2H), 2.34 ppm (t， -CH廣C00-，2H)， 2.77 ppm (bm， S-^M^NH-賴氨酸，8H) ， 3,51 ppm (s， PEG骨架)，3.58 ppm (s， CH30-， 3H) ， 3.85 ppm (m， -CH-，賴氨酸，1H)， 4.04 ppm (m，-迅-(C-O)NH-， 2H)， 7.27 ppm(d， -CH巡(C-0)-，賴氨酸，1H)， 8.08 ppm (t， -CH2NH (C=0)-，胱胺，2H)。沒有檢測到 Boc基。
E.具有一個二硫鍵的4臂PEG(20K)-單-丁酸
NHrI.YS-NH-((X)K) -PEG(5K>0-(CH::VC-OCH;
Jw、 + SC-PE(i(5KM)H
Ivfl+CH2CH2"S"S-CH2CH2NI+(C^3)-LYS"NH;2
NH2
PEG(5KK>H PEG(5K)—OH
I I
LYS-CNHCH，CH、^SCH，CH，NH(！1-LYS
i …—— I
將三乙胺(O. 37 ml)和PEG(5 KDa)-ot-羥基-co-琥珀酰亞胺碳酸酯(Nektar Therapeutics, 6.6 g， 0.00132摩爾)加至PEG (5 KDa)-ot-(e-Boc-賴氨酸-胱胺)-co-丁酸曱酯(2. 0 g， 0. 00040摩爾)在無水二氯曱烷(80 ml)中的溶液，并在氬氣氛下于室溫攪拌混合物過夜。在減壓下蒸餾出溶劑。將殘渣溶解于去離子水(200 ml)中，并用0. 1M NaOH調節(jié)溶液的pH至12。攪拌溶液2小時，并通過周期性加入0. 1 M NaOH使pH保持在12. 0-12. 2。然后加入NaCl (20 g)，并用5% H3P04 調節(jié)pH至3. 0。用二氯甲烷萃取產物。用無水MgS04千燥萃取液，并在減壓下蒸餾出溶劑。在真空下干燥濕產物，得到8. 2 g白色固體。
4吏用DEAE Sepharose FF介質通過離子交換色諳法來純化產物，得到5.1 g 100%純度的4臂-PEG(20 KDa)-單-丁酸。凝膠滲透色i普法顯示產物的分子量為17, 493 Da。NMR (d6-DMS0): 1.20-1.50 ppm (bm， -CH-(逃)3-CH2-NH-，賴氨酸，12H)， 1.72 ppm (q， ^-CH廣C00-， 2H) 2.44 ppm (t， -CH廣COO-， 2H)， 2.77 ppm (bm， S-^l^NH-賴氨酸，8H)， 3.51 ppm (s， PEG骨架)，4. 04 ppm (m， -(C=0) NH-， 8H) ， 4. 56 ppm (t， -OH， 3H) ， 7.16 ppm (t， -CH2|^(C=0)-，賴氨酸，2H)， 7.27ppm(d， -CH膽(C-O)-，賴氨酸，2H)， 8.03 ppm (t， -CH2NH (C=0)-,胱胺，2H)。
實施例4.具有一個二硫鍵的4臂PEG(20K)
A. HO-PEG2(10K)-丁酸N-羥基琥珀酰亞胺酯<formula>formula see original document page 81</formula>
本文所用的Bn0-PEG(5K)表示具有5， 000道爾頓的分子量的節(jié)氧基-PEG。
芐氧基-PEG2(10 KDa)-丁酸甲酯
將化合物9-02 (該活性前體的制備在我們的專利申請US 2005/0009988中描述；0.675 g， 0.00284當量)加至BnO-PEG(5K)-胺(15. 0g， 0. 00300摩爾)(Nektar Therapeutics, Huntsville, AU 、乙腈(75 ml)和三乙胺(l. Oml)的混合物。在氬氣氛下于室溫攪拌混合物12小時。然后，在減壓下蒸餾出溶劑。
用示意圖，該反應如下述表示
<formula>formula see original document page 81</formula>
-化合物嫌-^ L，JoCH，
芐氧基-PEG2(10 KDa)-丁酸
將在此獲得的化合物(稱為BnO-PEG2(10K)-丁酸曱酯)溶解于150ml蒸餾水中，并用5% NaOH溶液調節(jié)溶液的pH至12.2。在范圍為 12. 0-12. 2的pH下攪拌溶液1. 5小時。然后，加入NaCl (10 g),并用5% H3P0,溶液調節(jié)pH至2. 5。用CH2Ch處理來萃取產物。干燥萃取液(MgS04)，并在減壓下蒸餾出溶劑，得到14.5 g固體產物。離子交換色譜法Bn0-PEG2(10K)-丁酸89. 7%， BnO-PEG(5K)胺—6%。通過在美國專利第5, 932,462號中描述的離子交換色譜法純化產物，得到 100%純度的產物。
NMR (d廣DMSO): 1.72 ppm (q，區(qū)-CH廣C00-， 2H), 2.24 ppm (t, -CH廣C00-， 2H)， 3.24 ppm (q, -CH2NH (C=0)-， 4H) ， 3.51 ppm (s， PEG 骨架)，3.99 ppm (m，-區(qū)-(C=0) NH-， 4H) ， 4.49 ppm (s， -CH2-，節(jié) 基，4H)， 7.19 ppm (t， - CH2M(C=0)-， 2H)， 7.32 ppm (m，節(jié)基的芳族質子，IOH)。
BnO-PEG2(10 KDa) -丁酸N-羥基琥珀酰亞胺酯
<formula>formula see original document page 82</formula>
將BnO-PEG2(10 KDa)-丁酸(7. 7g， 0.000770摩爾)(如上所述制備)溶解于無水二氯甲烷(IOO ml)中，并加入N-羥基琥珀酰亞胺 (0.096g， 0.000834摩爾)和N，『-二環(huán)己基碳二亞胺(0. 180 g， 0.000872摩爾)。在氬氣氛下于室溫攪拌混合物過夜。然后，在減壓下蒸餾出部分溶劑，并在室溫下用異丙醇沉淀產物，在真空下干燥，得到6. 6g白色粉末。
NMR (d廣DMSO): 1.81 ppm (q，迅-CH廣COO-， 2H) ， 2.70 ppm (t， -CH廣COO-， 2H)， 2.81 ppm (s， -CH2CH「，琥珀酰亞胺，4H) ， 3. 24 ppm (q， - CH2NH(C=0)-， 4H) ， 3.51 ppm (s， PEG骨架)，3.99 ppm (m， -(C=0) NH-， 4H)， 4.49 ppm (s， -CH廣，千基，4H) ， 7.22 ppm (t， -CH2M(C=0)-， 2H)， 7.32 ppm (m,節(jié)基的芳族質子，10H)。
HO-PEG2(10 KDa)-丁酸N-羥基琥珀酰亞胺酯將Bn0-PEG2 (10 KDa) -丁酸N-羥基琥珀酰亞胺酯(6. 6g， 0. 000660 摩爾)溶解于無水曱醇(130ml)中，并加入在活性炭上的Pd(OH)2 (0. 5g 20% Pd; 56%癸烷)。在45 psi氫氣下于室溫將混合物氫化過夜。然后，在減壓下蒸餾出溶劑，并在真空下千燥產物，得到6. 0g白色固體。
NMR (d廣DMSO): 1.81 ppm (q，墜-CH廣(COO-， 2H) ， 2.70 ppm (t， -CH廣COO-， 2H)， 2.81 ppm (s， -CH2CH2-，琥珀酰亞胺，4H) ， 3. 24 ppm (q， - CH2NH(C=0)-， 4H) ， 3.51 ppm (s， PEG骨架)，3.99 ppm (m， -(C-O)NH-， 4H)， 4.57 ppm (t， -OH， 2H) ， 7.22 ppm (t， -C曙OX))-， 2H)。
B.不具有酸基團且具有一個二硫鍵的4臂PEG(20K)
<formula>formula see original document page 83</formula>
將H0-PEG2(10 KDa)-丁酸N-羥基琥珀酰亞胺酯(5. 6g， 0.00056 摩爾)在無水乙腈(60 ml)中的溶液加至胱胺二鹽酸鹽(0. 056g， 0.00025摩爾)、三乙胺(0.2 ml)和無水乙腈(30 ml)的混合物中，并在氬氣氛下于室溫攪拌混合物過夜。過濾混合物，并在減壓下蒸餾出溶劑。在真空下干燥濕產物，得到5.2g白色固體。使產物溶解于去離子水中，并使過量的HO-PEG2(10KDa)-丁酸N-羥基琥珀酰亞胺酯水解成H0-PEG2(10 KDa)-丁酸。然后4吏用DEAE Sepharose FF介質通過離子交換色譜法去除H0-PEG2(10 KDa)-丁酸，得到4.7 g純的具有一個二硫鍵的4臂-PEG(2G KDa)。
NMR (d廣DMSO): 1.72 ppm (q，墜-CH廣(C=0) NH-， 4H) ， 2.44 ppm (t， -CH2-(CO) NH-， 4H), 2.77 ppm (bm， +CH2CH2NH-， 8H) ， 3. 24 ppm (q， -CH2NH (C=0)-， 8H) ， 3.51 ppm (s， PEG骨架)，3.99 ppm (m， -區(qū)-(C=0) NH-， 8H)， 4.56 ppm (t， -OH， 4H)， 7.22 ppm (t， -CH2M(C=0)-， 4H)， 8.03 ppm (t， -CH2NH(C=0)-，胱胺，2H)。實施例5.由基于賴氨酸的PEG2和1， 4-二氨基丁烷制備4臂-PEG
o o
o o II t,
LYS-CNHCH，CH，CH，CH，NHC-LYS
,O I O
NHfe>PEG(5K)-OH ,froPEG(5K)掘
A.基于賴氨酸的芐氧基-PEG2 (10 KDa)-酸
O
BnOPEG(5K)-
O
LYS-fc。H
BnOPEG(5K;hO&vfH
將賴氨酸單鹽酸鹽(O. 80 g， 0. 00438摩爾)溶解于200 ml 0. 1 M 硼酸鹽緩沖液中，并用0. 1 M NaOH調節(jié)pH至8. 5。在30分鐘內將 BnO-PEG(5KDa)-BTC (Nektar Therapeutics, 50. 0 g， 0.01000摩爾) 加至所得的溶液，并通過加入0. 1 M NaOH使pH保持在8. 5。攪拌所得的溶液3小時后，加入NaCl (20 g)，并用10%磷酸調節(jié)pH至3. 0。用二氯曱烷萃取產物，并用MgS04干燥萃取液。然后在減壓下蒸餾出溶劑。在真空下干燥濕產物，收獲47.5 g為白色固體的產物。HPLC 分析顯示產物二-N-PEG化賴氨酸(MW約10KDa)純度為83.3%，且被高分子量副產物(2. 1 wt。/。)和低分子量副產物(14. 6 wt。/。)污染。使用 DEAE Sepharose FF介質通過離子交換色鐠法純化產物，得到34.8 g 100。/。純度的基于賴氨酸的節(jié)氧基-PEG2(10 KDa)-酸。
NMR (d6-DMS0): 1. 35 ppm (bm， -CH-, -CH廣NH-，賴氨酸，6H)， 2.92 ppm (q，-墜-NH-，賴氨酸，2H) ， 3.51 ppm (s，聚合物骨架)， 3.95 ppm(m，-■-COOH,賴氨酸，1H)，4.02 ppm (m， -OCH廣墜-0-(C=0) NH-， 4H) 4. 49 ppm (s， -CH2-，千基，4H)， 6. 75 ppm (t， -CH2NH(C=0)-，賴氨酸，1H)， 7.32 ppm (m，節(jié)基的芳族質子，IOH)。
B. 基于賴氨酸的芐氧基-PEG2(10 KDa)-酸N-羥基琥珀酰亞胺酯
<formula>formula see original document page 85</formula>
將基于賴氨酸的芐氧基-PEG2(10 KDa)-酸(30. Q g， 0.00300摩爾)(如上所述制備)溶解于無水二氯曱烷(500 ml)中，并加入N-羥基琥珀酰亞胺(O. 363 g， 0.00315摩爾)和N， N'- 二環(huán)己基碳二亞胺 (0. 681g， 0. 00330摩爾)。在氬氣氛下于室溫攪拌混合物過夜。然后，在減壓下蒸餾出部分溶劑，并在室溫下用異丙醇沉淀產物，在真空下干燥，得到27. 1 g白色粉末。
NMR (d6-DMSO): 1. 35 ppm (bm， -CH-(■)廣CH廣NH-，賴氨酸，6H)， 2.81 ppm (s， -CH2CH2-，琥珀酰亞胺，4H) ， 2.92 ppm (q，-迅-匪-，賴氨酸，2H)， 3.51 ppm (s，聚合物骨架)，4.02 ppm (m， -OCH廠墜-O-(C=0) NH-， 4H)， 4. 36 ppm (m，--C00-，賴氨酸，1H)， 4.49 ppm (s， -CH2-，節(jié)基，4H) ， 6.75 ppm (t， -CH2|^(C=0)-，賴氨酸，1H)， 7.32 ppm (m，節(jié)基的芳族質子，10H)。
C. 基于賴氨酸的H0-PEG2(10 KDa)-酸N-羥基琥珀酰亞胺酯
<formula>formula see original document page 85</formula>
將基于賴氨酸的芐氧基-PEG2(10 KDa)-酸N-羥基琥珀酰亞胺酯 (27.0 g， 0.00270摩爾)溶解于無水甲醇(500 ml)中，并加入在活性炭上的Pd(0H)2 (2.7g， 20% Pd; 56%癸烷)。在45 psi氫氣下于室溫將混合物氫化過夜。然后在減壓下蒸餾出溶劑，并在真空下干燥產物，得到24. 6 g白色固體。腿(d廣DMSO): 1. 35 ppm (bm， -CH-(迅)廣CH廣NH-，賴氨酸，6H)， 2.81 ppm (s， -CH2CHf，琥珀酰亞胺，4H) ， 2.92 ppm (q，-迅-NH-，賴氨酸，2H)， 3.51 ppm (s，聚合物骨架)，3.95 ppm (m， -^-COOH，賴氨酸，1H)， 4.02 ppm (m， -OCH廣墜-O-(C=0) NH-， 4H) ， 4.36 ppm (m，--C00-，賴氨酸，1H)， 4.57 ppm (t， -OH， 2H) ， 6.75 ppm (t， -CH2]^(C=0)-，賴氨酸，1H)， 7.21 ppm (d， -CHM(OO)-，賴氨酸， 1H)。
D.由基于賴氨酸的PEG2和1， 4-二氨基丁烷制備4臂-PEG 將基于賴氨酸的H0-PEG2(1G KDa)-酸N-羥基琥珀酰亞胺酯(20. 0 g， 0. 00200摩爾)在無水乙腈(200 ml)中的溶液加至1,4-二氨基丁烷 (0. 08 3g， 0. 00188當量)和三乙胺(O. 3 ml)在無水乙腈(50 ml)中的溶液，并在氬氣氛下于室溫攪拌混合物過夜。在減壓下蒸餾出溶劑。在真空下干燥濕產物，得到18.8 g白色固體。使產物溶解于去離子水中，并使過量的基于賴氨酸的HO-PEG2(10KDa)-酸N-羥基琥珀酰亞胺酯水解成基于賴氨酸的H0-PEG2(10 KDa)-酸。然后使用DEAE Sepharose FF介質通過離子交換色謙法去除H0-PEG2(10 KDa)-酸，得到15.7 g純的4臂-PEG (20 KDa)。
NMR (d6-DMSO): 1.35-1.50 ppm (bm， -CH-(區(qū))「CH廣NH-，賴氨酸，12H,和-NH-CH廣(迅)廣CH廣NH-， 4H) ， 2. 92 ppm (q， -^-NH-，賴氨酸，4H)， 3.51 ppm (s,聚合物骨架)，3.95 ppm (m， -^-(C-0)NH-, 賴氨酸，2H)， 4.02 ppm (m， -OCH廣迅-O-(C-O) NH-， 8H)， 4.57 ppm (t， -OH, 4H)， 6.75 ppm (t， - CH2|iI(C=0)-，賴氨酸，2H) ， 7.21 ppm (d， -CH迎(C-O)-，賴氨酸，2H)， 7.60ppm (t， -CH2M(C=0)-， 1，4-二氨基丁烷，2H)。
實施例6.基于Lys-Gly-Lys的4臂-PEG (20 KDa)
A.基于Lys-Gly-Lys的3臂-芐氧基-PEG(15 KDa)-酸<formula>formula see original document page 87</formula>
Q NH^X>PEG(5K)-OBn NH￡cM)EG(5K)-OBn
將Lys-Gly-Lys 二鹽酸鹽(1. 0 g， 0. 00227摩爾)溶解于100 ml 0. 1 M硼酸鹽緩沖液中，并用0. 1 M NaOH調節(jié)pH至8. 5。在30分鐘內將BnO-PEG(5KDa)-BTC (Nektar Therapeutics, 38.0 g， 0.00760 摩爾)加至所得的溶液中，并通過加入O. 1 M NaOH使pH保持在8. 5。攪拌所得的溶液3小時后，加入NaCl (10 g),并用10%磷酸調節(jié)pH 至3. 0。用二氯曱烷萃取產物，并用MgS04干燥萃取液。然后在減壓下蒸餾出溶劑。在真空下干燥濕產物，收獲35. 5 g為白色固體的產物。 HPLC分析顯示產物3臂-節(jié)氧基-PEG(15 KDa)-酸(MW約15 KDa)純度為91. 1%，且被高分子量副產物(2. 4 wt %)和低分子量副產物(6. 5 wt %)污染。
使用DEAE Sepharose FF介質通過離子交換色i瞽法來純化產物，得到27.1 g 100%純度的基于Lys-Gly-Lys的3臂-芐氧基-PEG(15 KDa)-酸。
脂R (d6-DMSO): 1. 35 ppm (bm， -CH-(■) 3-CH2-NH-，賴氨酸，12H) 2.92 ppm (q， -CH廣NH-，賴氨酸，4H) ， 3.51 ppm (s，聚合物骨架)， 3.95 ppm (m， -■-COOH, 賴氨酸，1H)， 4.02 ppm (m， -OCHf^-0-(C=0) NH-， 6H)， 4.49 ppm (s， -CH廣，節(jié)基，6H) ， 7.32 ppm (m,節(jié)基的芳族質子，15H)。
B.基于Lys-Gly-Lys的4臂-節(jié)氧基-PEG (20 KDa)-酸NHS酯
<formula>formula see original document page 87</formula>
LYS-CNH-GLY層CNH-LYS"CON
2 NHCOPEG(5K)-OBn 湖CO"PRG(5K)-OBn將N-羥基琥珀酰亞胺(O. 202 g， 0. 00175摩爾)和N，N'-二環(huán)己基碳二亞胺(0.379 g， Q. 00184摩爾)加至基于Lys-Gly-Lys的3臂-千氧基-PEG(15 KDa)-酸(25. 0 g， 0. 00167摩爾)在無水二氯曱烷(250 ml) 中的溶液，并在氬氣氛下于室溫攪拌混合物過夜。在減壓下蒸餾出溶劑。將產物溶解于40ml 二氯曱烷中，并用600 ml異丙醇沉淀，干燥后得到22.6 g白色固體。
NMR (d6-DMSO): 1. 35 ppm (bm， -CH-(區(qū))廣CH廣NH-，賴氨酸，12H)， 2.81 ppm (s， -CH2C&-，琥珀酰亞胺，4H) ， 2.92 ppm (q，-墜-NH-，賴氨酸，4H)， 3.51 ppm (s，聚合物骨架)，4.02 ppm (m， -OCH廣區(qū)-O-(C=0) NH-， 6H)， 4. 36 ppm (m， -^-COO-,賴氨酸，IH)， 4.49 ppm (s, -CH廣，爺基，6H), 7.32 ppm (m，千基的芳族質子， 15H)。
C.基于Lys-Gly-Lys的4臂-節(jié)氧基-PEG (20 KDa)
o
NH&)-PEG(5K)-OBn I O n O
LYS-CNH-GLY-CMH-LYS-CN—H-PEG(5K)-OBn I $
Q NH&>PEG(5K)-OBn
麗toPEG(5K)-OBn
將三乙胺(0. 37 ml)加至基于Lys-Gly-Lys的4臂-節(jié)氧基-PEG (20 KDa)-酸NHS酯(20. 0 g， 0. 00133摩爾)在無水二氯曱烷(200 ml)中的溶液，然后力口入BnO-PEG(5K)-胺(Nektar Therapeutics, 7.5 g， 0. 00150摩爾)，并在氬氣氛下于室溫攪拌混合物過夜。在減壓下蒸餾出溶劑，得到27. 5g白色固體產物。使產物溶解于去離子水，并使用 DEAE Sepharose介質通過離子交換色鐠法來去除過量的BnO-PEG(5K)-胺，得到21. 7 g純的基于Lys-Gly-Lys的4臂-爺氧基-PEG (20 KDa)。
NMR (d6-DMS0): 1. 35 ppm (bm， -CH-, 「CH廣NH-，賴氨酸，12H)， 2.92 ppm (bm， ,-NH-，賴氨酸和墜-NH-， PEG, 6H) ， 3.51 ppm (s，聚合物骨架)，3.95 ppm (m， -^-(C=0) NH-，賴氨酸，IH)， 4.02 ppm (m， -OCH廣區(qū)-O-(C=0) NH-， 6H) ， 4.49 ppm (s， -CH廣，千基，8H)， 7.32 ppm (m，節(jié)基的芳族質子，20H)。D.基于Lys-Gly-Lys的4臂-羥基-PEG (20 KDa)
<formula>formula see original document page 89</formula>
將基于Lys-Gly-Lys的4臂-芐氧基-PEG (20 KDa) (20. 0 g， 0.00100摩爾)溶解于無水甲醇(200 ml)中，并加入在活性炭上的 Pd(0H)2 (1.0 g， 20% Pd; 56°/。癸烷)。在45 psi氫氣下于室溫將混合物氫化過夜。然后在減壓下蒸餾出溶劑，并在真空下干燥產物，得到18. 2g白色固體。
NMR (d6-DMS0): 1. 35 ppm (bm， -CH-(墜)3-CH2-NH-，賴氨酸，12H) 2.92 ppm (bm，-墜-NH-，賴氨酸和,-NH-， PEG， 6H) ， 3.51 ppm (s, 聚合物骨架)，3.95 ppm (m， (C=0) NH-，賴氨酸，1H)， 4.02 ppm
(m， -0CH2-區(qū)-0-(C:0)NH-， 6H) ， 4.57 ppm (t， -0H， 4H)。
權利要求
1. 一種聚合物試劑，其具有根據下式之一的結構Z-[(X1)a-POLY1-(X2)b-L1-(X3)c]m-(X4)d-POLY2-Z 式(Ia) 式(IIa)；和式(IIIa)其中每個相同或不同的POLY1和POLY2是水溶性和非肽聚合物；每個相同或不同的X1、X2、X3、X4、X5、X6、X7、X8和X9是間隔基部分；A不存在或選自-(X8)h-(L6)j-(X9)i-POLY2-Z3和-(X8)h-(L7)j-(X9)i-Z3；每個L1是在體內可斷裂的鍵；每個相同或不同的L3、L6和L7是在體內任選可斷裂的鍵；L4是不可降解的鍵；每個相同或不同的Z是封端基團或官能團，且任選包括間隔基部分，條件是至少一個Z是官能團；每個相同或不同的Z1是封端基團；Z2是官能團；Z3是通過間隔基部分任選連接的可電離的官能團；每個相同或不同的Z4是封端基團或官能團；每個相同或不同的a、b、c、d、e、f、g、h、i和j是零或1；m是在1-10的范圍內的整數，且表示串聯共價連接的聚合物鏈段POLY1的數目；o是在1-10的范圍內的整數，且表示串聯共價連接的聚合物鏈段POLY2的數目；R是單體或低聚多臂核分子，其從包含至少p+1個可用于聚合物連接的部位的分子得到，且其中式(IIIa)中的至少一個L3和R包括在體內可斷裂的鍵；且p是在2-32的范圍內的整數，其中所述聚合物試劑不是水凝膠的形式，且至少一個L1是缺失碳酸酯基團的鍵。
2. 根據權利要求1所述的聚合物試劑，其中每個P0I^和P0I^具有少于或等于約20， 000 Da的數均分子量。
3. 根據權利要求1所述的聚合物試劑，其中每個P0I^和P0LY2具有少于或等于約10， 000 Da的數均分子量。
4. 根據權利要求1所述的聚合物試劑，其中每個P0I^和P0LY卩具有少于或等于約8， 000 Da的數均分子量。
5. 根據權利要求1所述的聚合物試劑，其中每個相同或不同的m 和o是在l-5的范圍內。
6. 根據權利要求1所述的聚合物試劑，其中每個P0I^和P0I^選自由聚(亞烷基二醇)、聚(烯醇)、聚(乙烯吡咯烷酮)、聚(羥烷基曱基丙酰胺)、聚(羥烷基曱基丙烯酸酯)、多(糖)、聚(oc-羥酸)、聚(丙烯酸)、聚(乙烯醇)、聚磷腈、聚噁唑啉、聚(N-丙烯?；鶈徇?及其共聚物、三聚物或混合物組成的組。
7. 根據權利要求1所述的聚合物試劑，其中P0I^和P01^是聚(乙二醇)。
8. 根據權利要求1所述的聚合物試劑，其中每個X1、 X2、 X3、 X4、 X5、X6、X7、X> X'存在時，選自由下述基團組成的組:-C (0)-、-C (O)-NH-、 -NH-C(O)-NH-、 -O-C(O)-NH-、 -C(S)-、 -CH廣、-CH2-CH2-、 -CH廣CH廣CH廣、 -CHfCH2-CH2-CH2-、 -O-CH廣、-CH廣O-、 -0-CH2-CH2-、 -CH2-0-CH2-、 -CH廣CH廠0-、 -0-CH2-CH2-CH2-、 -CH2-0_CH2-CH2-、 -CH2-CH2-0-CH2-、 -CH2-CH2-CH2-0- 、 -0-CH2-CH2-CH2-CH2- 、 -CH2-0-CH2-CH「CH2-、 -CH2-CH2-0-CH2-CH2- 、 -CH2-CH2-CH2-0-CH2- 、 -CH2-CH2-CH2-CH2-0-、 —C (0) -NH-CH廣、 -C (0) -NH-CH廣CH廣、 -CH廣C (0) -NH-CH2-、<formula>formula see original document page 4</formula>二價環(huán)烷基、-0-、 -S-、 -N(R6)-及其組合，其中R6是H或選自由烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、芳基和取代的芳基組成的組的有機基，(h)是零至6，且(j)是零至20。
9. 根據權利要求1所述的聚合物試劑，其中I^選自由酰胺鍵、聚氨酯鍵、二硫鍵、二肽鍵、三肽鍵和四肽鍵組成的組。
10. 根據權利要求1所述的聚合物試劑，其中所述試劑具有以下結構<formula>formula see original document page 4</formula> 式(la) 其中POLY1和POLY2都是分支聚(乙二醇)分子，所述聚(乙二醇)分子包含多元醇核和至少兩個從所述多元醇核延伸的聚合物臂；匸是二硫鍵； M是1;且每個X1、 X2、 X3和^存在時，選自由下述基團組成的組<formula>formula see original document page 5</formula>-NH-C(0)-0-[CH2]h_(OCH2CH2)j-、二價環(huán)烷基、-O-、 -S-、鋪6)-及其組合，其中r是H或選自由烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、芳基和取代的芳基組成的組的有機基，(h)是零至6，且(j)是零至20。
11. 根據權利要求10所述的聚合物試劑，其中每個聚合物臂包含兩個由在體內可斷裂的鍵連接的聚合物鏈段。
12. 根據權利要求11所述的聚合物試劑，其中連接所述聚合物鏈段P0LY'和P0I^的所述鍵選自由酰胺鍵、聚氨酯鍵、二硫鍵、二肽鍵、三肽鍵和四肽鍵組成的組。
13. 根據權利要求11所述的聚合物試劑，其具有以下結構<formula>formula see original document page 6</formula>其中POLYa和POLYb是聚(乙二醇)鏈段； L是鍵；I/是在體內可斷裂的鍵；且R是氫、烷基、取代的烷基或羧酸。
14.根據權利要求13所述的聚合物試劑其中1/選自由酰胺鍵,聚氨酯鍵、二疏鍵、二肽鍵、三肽鍵和四肽鍵組成的組。
15.根據權利要求1所述的聚合物試劑，其具有以下結構<formula>formula see original document page 6</formula> 式(IIa)其中P0LY'和P0I^都是聚(乙二醇)聚合物；i;選自由酰胺鍵、聚氨酯鍵、二硫鍵、二肽鍵、三肽鍵和四肽鍵組成的組；m和o都是1;且每個X1、 X2、 X3、 X4、 X5、 X6和X'存在時，選自由下述基團組成的組 -C(0)-、 -C(O)-NH-、 -NH-C(O)-NH-、 -0-C(0)-NH-、 -C(S)-、 -CH廣、 _CH2-CH2-、 -CH「CH2-CH2-、 -CH廣CH2—CH2—CH2-、 -O-CH廣、—CH廣0—、-0-CH2-CH2- 、 -CH廣O-CH廣、-CH廣CH廣O--CH2-0-CH「CH2- 、 -CH2-CH2-0-CH2-、-CH2-0-CH2-CHrCH2-、 -CH2-CH2-CH2-CH2-0-一CH「C (0)-NH-CH廣、-0 -CH2-CH2-、 -CH2-CH2-CH2-0-CH2--C (0)-NH-CH2-CH2-、 -C (0) -NH-CH2-CH2-CH2--CH「CH2-C (0) -NH-CH廣 -C (0) -NH-CH2-CH2-CH廣CH廣 -CH廣CH廣C (0) -NH-CH2-CH2--CH廣CH廣CH2-C (0) -NH-CH廣CH廣、 -C (0) -O-CH廣、 -CH廣C (0) -0-CH2-、-0—CH2-CH「CH2-、 -CH2-CH2-CH2-0-、 -CH「CH2-0-CH2-CH2-、、-C (0) -NH-CH廣、 -CH2-CH2-C(O)-NH-、-CH廠C (0) -NH-CH2-CH2- 、-CH2-CH廣CH廣C (0) -NH- 、-CH廣C (0) -NH-CH2-CH2-CH2- 、-CH2-CH2-CH2-C (0) -NH-CH2- 、 -CH2-CH2—CH2—CH2-C (0) -NH—、 -CH廣CH廣C (0) -0-CH2-、-C (0) -0-CH2-CH2- 、 -NH-C (0)-CH廣、 -CH廣NH-C (0)-CH2-、 -CH廣CH廣NH-C (0) -CH廣、-NH-C (0) -CH廣CH廣、-CH廣NH-C (0) -CH2-CH2-、 -CH廣CH廣NH-C (0)-CH2-CH2- 、 -C (0)-NH-CH2— 、 —C (0)-NH-CH2-CH2-、 -0-C (0)-NH-CH廣、-0-C (0)-NH-CH廣CH廣、-NH-CH廣、-NH-CH廣CH廣、 -CH廣NH-CH廣、-CHfCH2-NH-CH2- 、 -C(0)-CH2- 、 -C (0) -CH2-CH2-、 -CH廣C(0)-CH廣、-CH廣CH廣C (0)-CH廣、-CH廣CH廣C (0)-CH2-CH2-、 -CH2-CH2-C (0) -、 -CH廣CH廣CH廣C (0) -NH-CH廣CH廣NH- 、-CH廣CH廣CH廣C (0) -NH-CH2-CH2-NH-C (0)- 、 -CH2-CH2-CH2-C (0) -NH-CH2-CH2-NH-C (0) -CH2- 、 -CH廣CHf CH廣C (0) -NH-CH廣CH廣NH-C (0) -CH廣CH廣、 -C (0) -NH- (CH2) h-NH-C (0) - 、 -NH-C (0) -NH- (CH2)卜廣NH-C (0)- 和 -0-C (0)-NH-(CH2) w-NH-C (0) - 、 -O-C (0) -NH-[CH2] h-(OCH2CH2)廣、 -NH-C(0)-0-[CH2]h-(OCH2CH2)j-、二價環(huán)烷基、-O-、 -S-、 -N(R6)-及其組合，其中W是H或選自由烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、芳基和取代的芳基組成的組的有機基，(h)是零至6，且(j)是零至20。
16. 根據權利要求15所述的聚合物試劑，其中每個Zi是包含兩個至約六個末端官能團的多臂活性基團。
17. 根據權利要求16所述的聚合物試劑，其中每個Zi選自由以下組成的組<formula>formula see original document page 8</formula>其中每個相同或不同的Z是任選包括間隔基部分的官能團，且m是在1至約10的范圍內的整數。
18.根據權利要求1所述的聚合物試劑，其具有以下結構<formula>formula see original document page 8</formula>其中poly'和poi^都是聚(乙二醇)聚合物；每個i;和i;在體內可斷裂；m和o都是2或更大；且每個x1、 x2、 x3、 x4、 x5、 x'和X7存在時，選自由下述基團組成的組 -c(0)-、 -c(o)-nh-、 -nh-c(o)-nh-、 -0-c(0)-nh-、 -c(s)-、 -ch廣、-CH廣CH廠、-CH2-CH2-CH2-、 -C^-CH2-CH2-CH2-、 -O-CH廣、-CH廣0-、 -O-CHfCH廣、-CH廠O-CH- 、 -CH廠CH廣O- 、 -0-CH2-CH「CH2-、 -C^-0-CH2-CH2- 、 -CH廣CH廣0-CH2-、 -0-CH2-CH2-C^-CH2- 、 -CH2-0-CH2-CH2-CH2-、 -CH2-CH2-CH2-0-CH2- 、 -CH廣CH2-CH廣CH廣0--C (0) -NH-CH2-CH2- 、 -CH廣C (0)-NH-CH廣、 -C (0) -NH-CH廣CH廣CH廣、 -CH廣CH廠C (0) -NH-CH廣、-C (0) -NH-CH2-CH2-C&-CH2-、 -CH廣CH廣C (0) -NH-CH廣CH廣、 -CH廣CH廣CH廣C (0) -NH-CH廣CH廣、 -C (0) -O-CH廣、 -CH廣C (0) -O-CH廣-CH2-CH2-CH廣O--CHfCH2-0-CHfCH2-、-C (0) -NH-CH廣 -CH廣CH廣C (0) -NH--CH廣C (0) -NH-CH廣CH廣 -CH廣CH2-CH2-C (0) -NH--CH廣C (0) -NH-CH廣CH2-CH廣 -CH廣CH廣CH廣C (0) -NH-CH廣 -CH廣CH廣CH廣CH廣C (0) -NH-、 -CH2-CH2-C(0)-0-CH廣-C (0)-0_CH2-CH2- 、-NH-C(O)-CH廠、 -CH廣NH-C (0) -CH廣、-CH2-CH2-NH-C (0) -CH廣、-NH-C (0) -CH廣CH廣、-CH廣NH-C (0) -CH2-CH2-、 -CH廣CH廣NH-C (0) -CH廣CH廣、-C (0) -NH-CH2- 、 -C (0) -匪-CH2-CH廣、 -O-C (0)-NH-CH2-、 -O-C (0)-NH-CH2-CH2-、 -NH-CH廣、-NH-CH廠CH廣、 -CH2-NH-CH2- 、 -CH2-CHfNH-CH2- 、 -C(O)-CH廣、-C (0)-CH2-CH2-、 -CH2-C (0)-CH2- 、 -CH廣CHfC (0)-CH2- 、 -CH2-CH2-C (0) -CH2-CH廣、 -CH廣CH2-C (0) -、 -CH廣CH廣CH2-C (0) -NH-CH2-CH2-NH- 、-CH2-CH2-CH2-C (0) -NH-CH廣CH2-NH-C (0)- 、 -CH「CH2_CH2-C (0) -NH-CH廣CH廣NH-C (0) -CH2- 、 -CH2-CH2-CH2-C (0) -NH-CH2-CH2-NH-C (0) -CH廣CH廣、 -C (0) -NH- (CH2) h-NH-C (0) - 、 -NH-C (0) -NH- (CH2)卜6-NH-C (0)- 和 -O-C (0) -NH- (CH2) w-NH-C (0) - 、-O-C (0) -NH- [CH2] h- (OCH2CH2)廣、 -NH-C(O)-0-[CH2]h-(OCH2CH2)j-、二價環(huán)烷基、-O-、 -S-、 -N(R"-及其組合，其中！^是H或選自由烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、芳基和取代的芳基組成的組的有機基，(h)是零至6，且(j)是零至20。
19.根據權利要求18所述的聚合物試劑，其中每個i;和L3選自由酰胺鍵、聚氨酯鍵、二硫鍵、二肽鍵、三肽鍵和四肽鍵組成的組,
20.根據權利要求1所述的聚合物試劑，其具有以下結構R—A式(IIIa) 其中每個POLY1是聚(乙二醇)聚合物；R是二硫化物連接體、二肽、三肽或四肽；且每個X1、乂2和乂3存在時，選自由下述基團組成的組-C(O)-. -C(0)-NH-、 -NH-C(O)-NH-、 -0-C(0)-NH-、 -C(S)-、 -CH廣、-CH2-CH2--CH2-CH2-CH2-、 -CH2-CH2-CH2-CH2-、 -O-CH廣、-CH廣O-、 -0—CH廣CH廣. -CH廣0-CH廣、-CH廣CH廣O- 、 -O-CH廣CH廣CH廣、-CH廣O-CH2-CH廣 -CH「CH2-0-CH2- 、 -CH「CH2-CH2-0- 、 -0-CH2-CH「CH2-C&-' -CH2-0-CH2-CH2-CH2- 、 -CH2-CH2-0-CH2-CH2- 、 -CH2-CH2-CH2-0-CH2-. -Cm-CH2-C&-CH2-0- 、 -C (0)-NH-CH2- 、 -C (0)-NH-CH2-CH2-, -CH廣C (0) -NH-CH廣、-CH2-CH2-C (0) -NH- 、 -C (0) -NH-CH2-CH2-CH2-,-CH廣C (0) -NH-CH2-CH2--CH廣CH2-CH廣C (0) -NH--CH廣C (0) -NH-CH2-CH廣CH廣 -CH2-CH2-CH廣C (0) -NH-CH廣 -CH2-CH2-CH2-CH2-C (0) -NH--CH廣CH廣C (0) -0-CH2-、、 -CH2-CH2-C (0) -NH-CH2-、 -C (0) -NH-CH廣CH廠CH廣CH2-、-CH2-CH2-C (0) -NH-CH2-CH2-、 -CH2-CH2-CH2-C (0) -NH-CH廣CH廣、-C(O)-O-CH廣、-CH廣C (0)-O-CH廣 -C (0) -0-CH2-CH2- 、 -NH-C (0) -CH2--CH廣NH-C (0) -CH2- 、 -CH廣CH廠NH-C (0) -CH2- 、 -NH-C (0) -CH2-CH2--CH廣NH-C (0) -CH2-CH2-、 -CH2-CH2-NH-C (0) -CH廣CH廣、-C (0) -NH-CH廣, -C(O)-NH-CH2-CH2-、 -0-C (0)-NH-CH廣、-0-C (0) -NH-CH2-CH廣、-NH-CH2--NH-CH2-CH2- 、 -CH廣NH-CH廣、-CH2-CH2-NH-CH2- 、 -C(0)-CH2-, -C (0)-CH2-CH2-、 -CH廣C(O)-CH廣、 -CH廣CH廣C (0)-CH廣 -CH廣CH廣C (0) -CH廣CH廣、 -CH廣CH廣C (0)- '-CH廣CH廣CH廣C (0) -NH-CH2-CH2-NH--CH廣CH廣CH廣C (0) -NH-CH2-CH2-NH-C (0)- ,-CH廣CH2-CH2-C (0) -NH-CH2-CH2-NH-C (0) -CH2- 、 -CH2-CH2-CH2-C (0) -NH-CH廣CH廣NH-C (0) -CH2-CH2- 、 -C (0) -NH- (CH2) h-NH-C (0) - 、 -NH-C (0) -NH- (CH2) h-NH-C (0)- 和 -0-C (0)-NH-(CH2)卜6-NH-C (0) - 、-O-C (0) -NH-[CH2] h-(OCH2CH2)廣、 -NH-C(O)-O-[CH2]h-(OCH2CH2)j-、二價環(huán)烷基、+、 -S-、 -N(R6)-及其組合，其中！^是H或選自由烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、芳基和取代的芳基組成的組的有機基，(h)是零至6，且(j)是零至20。
21. 根據權利要求20所述的聚合物試劑，其中A是羧酸。
22. 根據權利要求20所述的聚合物試劑，其中R包含至少一個賴氨酸殘基。
23. 根據權利要求20所述的聚合物試劑，其中每個POLY1和POLY2是分支聚(乙二醇)聚合物。
24. 根據權利要求20所述的聚合物試劑，其中l(wèi)/是在體內可斷裂
25. 根據權利要求24所述的聚合物試劑，其中I^選自由酰胺鍵、聚氨酯鍵、二硫鍵、二肽鍵和三肽鍵組成的組。
26. 根據權利要求20所述的聚合物試劑，其中R從具有以下結構的二硫化物分子得到
27.根據權利要求1所述的聚合物試劑，其具有以下結構<formula>formula see original document page 11</formula> 式(IIIa) 其中每個P0LY1包含兩個由在體內可斷裂的鍵連接的聚(乙二醇)鏈段; A是-(X8) h- (L6) j- (X9) i-POLY2-Z3;P0I^是聚(乙二醇)聚合物； R來源于多元醇；且每個X1、 X2和乂3存在時，選自由下述基團組成的組-C(O)-、 -C(O)-NH-、 -NH-C(O)-NH-、 -O-C(O)-NH-、 -C(S)-、 -CH廣、-CH2-CH2-、 -CH2-CH2-CH2-、 -CH2-CH2-CH2-CH2-、 -0-CH2-、 -CH廣O-、 -0-CH2-CH2--CH2-0-CH2- 、 -CH2-CH2-0- 、 -0-CH「CH2-CH2- 、 -CH廣0-CH2-CH2--CH廣CH2-0-CH2- 、 -CH2-CH2-CH2-0-、 -O-CH廠CH廣CH廣CH廣 —CH「0-CH2—CH2—CH2- 、 -CH廣CH廣O-CH廠CH廣、-CH2—CH2-CH2—0—CH2--CH廣CH廣CH廣CH廣0- 、 -C (0) -NH-CH廣、 -C (0) -NH-CHfCH廣 -CH廣C (0) -NH-CH2- 、 -CH廣CH廣C (0) -NH- 、 -C (0) -NH-CH2-CH「CH2--CH廣C (0) -NH-CH廣CH2_ -CH廣CH廣CH廣C (0) -NH--CH2-C (0) -NH-CH2-CH2-CH廣 -C^-CH2-CH2-C (0) -NH-CH廣 _CH2-CH2-CH2-CH2-C (0) -NH--CH廣CH廣C (0) -0-CH2-、、 -CH2-CH2-C (0) -NH-CH廠、 -C (0) -NH-CH廣CH廣CH廣CH廣、-CH廣CH廣C (0) -NH-CH廣CH廣、 -CH2-CH2-CH2-C (0) -NH-CH2-CH2-、-C(O)-O-CH廣、-CH廣C (0)-0-CH2--C (0) -O-CH廠CH廣、-NH-C (0) -CH2--CH廣NH-C (0) -CH2- 、 -CH2-CH2-NH-C (0) -CH廣、-NH-C (0) -CH2-CH2--CH2-NH-C (0) -CH2-CH2- 、 -CH2-CH2-NH-C (0) -CH2-CH2- 、 -C (0) -NH-CH2--C (0)-NH-CH廣CH2-、 -0-C (O)-NH-CH廠、-O-C (0) -NH-CH廣CH廣、-NH-CH2-、 —NH-CH「CH廣、—CH2-NH-CH2- 、 -CH2-CH2-NH_CH2- 、 -C(O)-CH2--C (0) -CH2-CH2-、 -CH廣C (0) -CH2-、 -CH廠CH廣C (0) -CH廣 -CH廣CH廣C (0) -CH2-CH2_ 、 -CH廣CH廣C (0) --CH廣CH廣CH廣C (0) -NH-CH廣CH廣NH--CH2-CH2-CH2-C (0) -NH-CH廣CH廣NH-C (0) --CH廣CH2-CH2-C (0) -NH-CH廣CH廣NH-C (0) -CH廣 -CH廣CH廣CH2-C (0) -NH-CH廣CH廣NH-C (0) -CH廣CH廣 -C (0) -NH- (CH2)NH-C (0) - 、 -NH-C (0) -NH- (CH2) h-NH-C (0)- 和 -0-C (0)-NH-(CH2) h-NH-C (0) - 、-O-C (0)-NH-[CH2] h-(OCH2CH2)廣、 -NH-C(O)-O-[CH2]h-(OCH2CH2)f、二價環(huán)烷基、-O-、一S-、 -N(R6)-及其組合，其中R6是H或選自由烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、芳基和取代的芳基組成的組的有機基，(h)是零至6，且(j)是零至20。
28. 根據權利要求27所述的聚合物試劑，其中所述兩個聚(乙二醇) 鏈段之間的所述可斷裂的鍵選自由酰胺鍵、聚氨酯鍵、二硫鍵、二肽鍵、三肽鍵和四肽鍵組成的組。
29. 根據權利要求1所述的聚合物試劑，其具有以下結構 zMx、一 polyHx2)「l3-(x3)cr一a式(IIIa)其中每個POI^包含聚(乙二醇)聚合物； A不存在；R包含至少一個肽殘基；且每個X1、乂2和乂3存在時，選自由下述基團組成的組-C(O)-、 -C(O)-NH-、 -NH-C(O)-NH-、 -0-C(0)-NH-、 -C(S)-、 -CH2-、 -CH廣CH廣、 —CH廣CH廣CH廣、—CH廣CH2-CH廣CH廣、-O-CH-、一CH廣0-、 -O-CH廣CH-、 -CH廣O-CH廣、-CH2-CH2-0- 、 -0-CH2-CH2-CH「、 -CH廣O-CH廣CH廣、 -CH2-CH2-0-CH2- 、 -CH2-CH2-CH2-0- 、 -0-C^-CHrCH2-CH2-、 -CH2-0-CH2-CH2-CH2- 、 -CH2-CH「0-CH2-CH「、 -CH2-CH「CH2-0-CH2-、 -CH2-CH廠CH廣CH廣0- 、 -C(O)-NH-CH廣、 -C (0)-NH-CH「CH2-、 -CH2-C (0) -NH-CH廣、-CH2-CH2-C (0) -NH- 、 -C (0) -NH-CH2-CH2-C&-、-CH廣C (0) -NH-CH廣CH廣 -CH2-CH2-CH2-C (0) -NH--CH2-C (0) -NH-CH2 --CH廣CH廣CH2-C (0) -NH-CH廣 -CH2-CH2-CH2-CH2-C (0) -NH--CH2-CH2-C(0)-0-CH2-、、 -CH廣CH廣C (0) -NH-CH2-、 -C (0) -NH-CH「CH2-CHrCH2-、-CH2-CH2-C (0) -NH-CHfCH2-、 -CH廠CH廣CH廣C (0) -NH-CH廣CH廣、-G(0)—0-GH2— 、—GH廣G (0) —0—GH2— -C (0) -O-CH廣CH廣、-NH-C (0) -CH2--CH廣NH-C (0) -CH2- 、 -CH2-CH2-NH-C (0) -CH2- 、 -NH-C (0) -CH廣CH廣、 -CH廣NH-C (0) -CH2-CH廣、-CH2-CH2-NH-C (0) -CH廣CH廣、-C (0) -NH-CH廣、-C (0) -NH-CH2-CH廣、-0-C (O)-NH-CH廣、-0-C (0)-NH-CH廣CH廠、-NH-CH2-、 -NH-CH2-CH2- 、 -CH2-NH-CH2- 、 -CH2-CH「NH-CH2- 、 -C(O)-CH廣、 -C (0) -CH2-CH2-、 -CH2-C (0)-CH2-、 -CH2-CH2-C (0)-CH2-、 -CH2-CH2-C (0)-CH2-CH2- 、 -C&-CH2-C (0)- 、-CH2-CH2-CH2-C (0) -NH-CH2-CH2-NH- 、 -CH2-CH2-CH2-C (0) -NH-CH2-CH廣NH-C (0)- 、 -CH2-CH2-CH2-C (0) -匪-CH2-CH廣NH-C (0) -CH2- 、 -CH2-CH2-CH2-C (0) -NH-CH廣CH廣NH-C (0) -CH2-CH2- 、 -C (0) -NH- (CH2) h-NH-C (0) - 、 -NH-C (0) -NH- (CH2) h-NH-C (0)- 和 -O-C (0) -NH-(CH2)卜6-NH-C (0) - 、-0-C (0) -NH-[CH2] h-(OCH2CH2)廣、 -NH-C(O)-O-[CH2]h-(OCH2CH2)r、二價環(huán)烷基、-0-、 -S-、 -N (R6)-及其組合，其中R6是H或選自由烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、芳基和取代的芳基組成的組的有機基，(h)是零至6，且(j)是零至20。
30. 根據權利要求29所述的聚合物試劑，其中R進一步包括二硫鍵。
31. 根據權利要求29所述的聚合物試劑，其中R包含至少兩個通過酰胺鍵與連接體連接的賴氨酸殘基，所述連接體選自由脂族碳鏈、包含二硫鍵的脂族碳鏈和聚(乙二醇)低聚物組成的組。
32. 根據權利要求1所述的聚合物試劑，其具有以下結構<formula>formula see original document page 14</formula>式(IIIa)其中每個POLY1包含聚(乙二醇)聚合物； A不存在；R是包含至少一個二石克鍵和至少兩個酰胺鍵的非肽部分；且每個X1、 X'和X3存在時，選自由下述基團組成的組-C(O)-、 -C(O)-NH-、 -NH-C(0)-NH-、 -O-C(O)-NH-、 -C(S)-、 -CH2-、 -CH廣CH廠、 -CH2-CH廣CH廣、-CH2-CH廣CH廣CH2-、 -O-CH廣、-CH廣0-、 -O-CH廣CH廣、-CH2-0-CH2- 、 -CH2-CH2-0- 、 -0_CH2-CH2-CH2- 、 -CH2-0_CH「CH2-、 -CHrCH2-0-CH2- 、 -CH2-CH2-CH2-0- 、 -O-CH廣CH廣CH廣CH廣、 -CH2-0—CH2—CH2-CH2- 、 —CH2-CH2-0-CH2-CH2— 、 -CH2-CH2—CH2—0-CH2—、 -CH2-CH2-CH2-CH2-0- 、 -C (0)-NH-CH廣、 -C (0) -NH-CH廣CH廣、 -CH廣C (0) -NH-CH廣、-CH2-CH2-C (0) -NH- 、 -C (0) -NH-CH2-CH2-C&-、 -CH廣C (0) -NH-CH廣CH廣、 -CH廣CH廣C (0) -NH-CH廣、-CH廣CH廣CH廣C (0) -NH-、 -C (0) -NH-CI^-CH2-CH2-CH2- 、-CH2-C (0) -NH-CH廣CH廣CH廣、 -CH廣CH廣C (0) -NH-CH2-CH2- 、 -CH2-CH2-CH2-C (0) -NH-CH廣、 -CH2-CH2-CH2-C (0) -NH-CH廣CH廣、 -CH2-CH2-CH2-CH2-C(0)-NH- 、 -C(O)-O-CH廣、-CH2-C (0)-0_CH2-、 -CH2-CH2-C (0) -O-CH廣、 -C (0)-O-CH廣CH廣、-NH-C (0) -CH廣、 -CH廣NH-C (0)-CH廣、-CH廣CH廣NH-C (0) -CH2- 、 -NH-C (0)-CH2-CH廣、 -CH廣NH-C (0) -CH廣CH廣、-CH廣CH廣NH-C (0) -CH2-CH2- 、 -C (0) -NH-CH廣、 -C(O)-NH-CH廣CH廣、-O-C (O)-NH-CH廣、-O-C (0)-NH-CH2-CH2-、 -NH-CH廣、 -NH-CH廣CH廣、-CH廣NH-CH廣、-CH廣CH廣NH-CH廣、-C(O)-CH廣、 -C (0)-CH廣CH廣、 -CH廣C (0)-CH廣、 -CH2-CH2-C (0)-CH廣、 -CH廣CH廣C (0)-CH廣CH廣、 -CH廣CH廣C (0)- 、-CH2-CH2-CH2-C (0) -NH-CH廣CH廣NH- 、 -CH2-CH2-CH2-C (0) -NH-CH廣CH廣NH-C (0)- 、 -CH廣CH2-CH廣C (0) -NH-CH廣CH廣NH-C (0) -CH廣、 -CH2-CH2-CH2-C (0) -NH-CH廣CH廣NH-C (0) -CH2-CH2- 、 -C (0) -NH- (CH2)!—6-NH-C (0) — 、 -NH-C (0) —NH— (CH2)卜6-NH-C (0)- 和 -0-C(0)-NH-(CH2)h-NH-C(0)- 、-O-C (0)-NH-[CH2] h-(OCH2CH2)廣、 -NH-C(0)-0-[CH2]h-(OCH2CH2)廣、二價環(huán)烷基、-O-、 -S-、 -N(R6)-及其組合，其中R6是H或選自由烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、芳基和取代的芳基組成的組的有機基，(h)是零至6，且(j)是零至20。
33.根據權利要求1所述的聚合物試劑，其中1/是具有 -0-C(0)-NH-CHY-C(0)-NH-Y'-結構的聚氨酯鍵，其中Y選自H、烷基、取代的烷基和芳基，且Y'是烷基或取代的烷基。
34. 根據權利要求1所述的聚合物試劑，其中1^是具有 -0-C(0)-NH-CHY-C(0)-NH-Y'-結構的聚氨酯鍵，其中Y選自H、烷基、取代的烷基和芳基，且r是烷基或取代的烷基。
35. 根據權利要求1所述的聚合物試劑，其中R包含具有 -0-C(0)-NH-CHY-C(0)-NH-Y'-結構的聚氨酯鍵，其中Y選自H、烷基、取代的烷基和芳基，且r是烷基或取代的烷基。
36. —種軛合物，其包括生物活性劑與根據權利要求1所述的聚合物試劑的反應產物。
全文摘要
本發(fā)明提供了適用于與生物活性劑反應而形成軛合物的嵌段可降解聚合物試劑，所述聚合物試劑包含一個或多個聚合物鏈，所述聚合物鏈被一個或多個可降解的鍵分開或分隔成具有適于腎清除的分子量的聚合物鏈段。所述聚合物試劑可以具有大體上線性的結構、分支結構或多臂結構。每種結構包括一個或多個在體內能降解的鍵。
文檔編號A61K47/48GK101420984SQ200780013486
公開日2009年4月29日申請日期2007年2月21日優(yōu)先權日2006年2月21日
發(fā)明者A·科茲洛夫斯基, S·P·麥克馬努斯申請人:尼克塔治療亞拉巴馬公司

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