專利名稱：：北青龍衣提取物、制備方法及醫(yī)藥用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及以北青龍衣中分離的新化合物青龍衣素A為主的提取物的制備方法，以及在制備抗腫瘤藥物中的用途。
背景技術(shù)：
：癌癥是威脅人類生命的嚴(yán)重疾病，因此，抗癌藥物的研究一直是世界關(guān)注的熱點(diǎn)。中藥抗腫瘤在提高免疫力和降低致突變毒性方面比之化學(xué)藥物具有獨(dú)到之處，因此，從祖國(guó)醫(yī)藥寶庫(kù)中尋找療效確切的抗腫瘤中藥，明確其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，進(jìn)而開(kāi)發(fā)出高效低毒的新藥，成為中醫(yī)藥領(lǐng)域多年研究的焦點(diǎn)。北青龍衣為胡桃科植物核桃楸(力/^朋s#a"G^^/rj'caMAXIM.)的未成熟果實(shí)，盛產(chǎn)于東北城郊各縣，在民間常用作治療各種癌癥和皮膚病以及各種疼痛的止痛藥。2001年北青龍衣被收載于黑龍江省藥材標(biāo)準(zhǔn)而成為一種中藥應(yīng)用于臨床和生產(chǎn)。北青龍衣的粗提物制劑治療胃癌、食管癌等消化道癌癥，有二十多年治療觀察的病例證明(李中原.青龍衣治療食管賁門癌120例臨床觀察.*^"^"#:息，1988，(3):3),其抗腫瘤作用是無(wú)庸置疑的。然而其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究并沒(méi)有深入展開(kāi)，文獻(xiàn)報(bào)道多停留在其粗提物的藥理作用而缺乏其有效成分的抗腫瘤作用研究上(季宇彬，馬宏圖，楊波，汲晨鋒.北青龍衣不同提取部位的抗腫瘤作用研究.^享秀，2004，35(10):1145-1147)，而現(xiàn)有的北青龍衣提取物有效成分不明確，缺乏量化指標(biāo)，導(dǎo)致藥理作用機(jī)制難以進(jìn)一步闡述。發(fā)明人從北青龍衣中分離了一個(gè)新化合物，命名為青龍衣素A(qinglongyitinA)。該化合物對(duì)人HL-60白血病細(xì)胞，人Kato-III胃癌細(xì)胞和人&49肺癌細(xì)胞具有顯著的抑制作用，肝癌細(xì)胞裸鼠移植瘤模型研究也證明了該化合物的抗癌作用。本發(fā)明采用乙醇提取結(jié)合大孔樹(shù)脂及凝膠色譜技術(shù)，制備了北青龍衣抗腫瘤有效成分的提取物，利用該技術(shù)制備的藥物可以使該類化合物的含量高于70%。藥效學(xué)研究結(jié)果表明，以該類化合物為主要組成的提取物具有良好的抗腫瘤作用，其抗癌作用明顯優(yōu)于其它粗提物，可以與藥物賦形劑制成適合于臨床使用的中藥有效部位的抗腫瘤藥物，比目前文獻(xiàn)報(bào)道的粗提物制劑活性作用更強(qiáng)，有效成分更明確，也更加容易控制其質(zhì)量的穩(wěn)定和可靠。
發(fā)明內(nèi)容.本發(fā)明的目的是提供一種具有抗腫瘤活性的一個(gè)新的化合物及其提取物的制備方法。上述的目的通過(guò)以下的技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)北青龍衣提取物，含有通式(I)的化合物含量大于70%,該化合物的結(jié)構(gòu)式為OHHOHOOCOOH(1)。所述的一種北青龍衣提取物的制備，取新鮮的北青龍衣用乙醇浸泡提取，提取液濃縮，濃縮液加水分散，離心后取上清液，上清液通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂，將吸附樹(shù)脂用乙醇洗脫，洗脫液濃縮過(guò)濾后注入葡聚糖凝膠，收集4096乙醇洗脫液，濃縮至干，得干燥物中青龍衣素A含量大于70%。所述的一種北青龍衣提取物的制備，所述的取新鮮的北青龍衣用乙醇浸泡提取，是將新鮮的北青龍衣用810倍量75%95%乙醇浸泡一周，提取三次。所述的一種北青龍衣提取物的制備，所述的提取液濃縮，濃縮液加水分散，離心，是指合并提取液后減壓濃縮并濃縮至相對(duì)密度1.10-1.14(50°C)，濃縮液加水分散，離心，離心后取上清液，上清液通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂，將吸附樹(shù)脂用乙醇洗脫。所述的一種北青龍衣提取物的制備，所述的加水分散離心后，取上清液，通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂吸附過(guò)濾，是指離心后，取上清液，注入已處理好的DiaionHP-20大孔吸附樹(shù)脂中，藥材與樹(shù)脂的比例為1:201:50,流速10ml/min，分別以35倍柱床體積的水洗、5倍柱床體積的30%乙醇洗，收集30%乙醇洗脫液，洗脫液減壓蒸干得到殘?jiān)?，殘?jiān)蒙倭?096乙醇溶解，濾過(guò)，濾液注入葡聚糖凝膠，收集40%乙醇洗脫液，濃縮至干，得干燥物中青龍衣素A含量大于709L所述的一種北青龍衣提取物的制備，所述的濾液注入葡聚糖凝膠，收集4096乙醇洗脫液是指注入葡聚糖凝膠LH-20柱上，色譜柱直徑2.5cm，柱長(zhǎng)1.5m,上樣量為5g殘?jiān)?每次，流速1.Oml/min，以3倍柱床體積的40%乙醇洗脫。北青龍衣提取物的制備，所述的將葡聚糖凝膠LH-20的40%乙醇洗脫液濃縮至干，干燥物中青龍衣素A含量大于70%。含有通式(I)的化合物的提取物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。這個(gè)技術(shù)方案有以下有益效果1.本發(fā)明提供了一種未報(bào)道過(guò)的具有抗腫瘤作用的化合物，通過(guò)對(duì)癌細(xì)胞抑制試驗(yàn)和藥效學(xué)試驗(yàn)，證明了該化合物具有優(yōu)良的抗癌活性，可與藥物賦形劑制成適合于臨床使用的抗腫瘤藥物。2.從中藥北青龍衣中分離純化了該化合物，純度達(dá)到98%以上。該化合物為從天然植物中提取分離，具有結(jié)構(gòu)新穎、作用獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)，一方面可與藥物賦形劑制成適合于臨床使用的抗腫瘤藥物，另一方面也可作為先導(dǎo)化合物，對(duì)其構(gòu)效關(guān)系進(jìn)行進(jìn)一步研究，合成一系列的抗癌藥物和藥物組合，更可以作為北青龍衣藥材及其制劑質(zhì)量控制的指標(biāo)成分，實(shí)現(xiàn)北青龍衣藥材及其制劑質(zhì)量的穩(wěn)定和可控，突破目前北青龍衣研究開(kāi)發(fā)的瓶頸。3.中藥及其制劑質(zhì)量的穩(wěn)定和可控一直是中藥現(xiàn)代化的瓶頸，該化合物為中藥北青龍衣的有效成分之一，可以作為北青龍衣藥材及其制劑質(zhì)量控制的指標(biāo)，在此基礎(chǔ)上建立以該成分為指標(biāo)的鑒別和含量測(cè)定項(xiàng)目的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，實(shí)現(xiàn)北青龍衣藥材及其制劑質(zhì)量的穩(wěn)定和可控，該化合物將作為中藥對(duì)照品廣泛使用。4.本發(fā)明提供的含有青龍衣素A的提取物物與復(fù)方青龍衣酊比較對(duì)H22生長(zhǎng)有明顯的抑制作用，并可明顯延長(zhǎng)小鼠生存時(shí)間，具有良好的抗腫瘤作用。由此可見(jiàn)，本發(fā)明所提供的北青龍衣有效部位的提取物，具有有效成分含量更高，藥理作用更強(qiáng)的特點(diǎn)，不僅解決了目前北青龍衣藥效物質(zhì)基礎(chǔ)不明確的難題，而且所提供的提取物可與多種醫(yī)用輔料(賦形劑、稀釋劑、香味劑、潤(rùn)滑劑等)配合，制成多種劑型的藥物，如凍干粉針、注射液、片劑、膠囊、顆粒劑以及口服液等，廣泛應(yīng)用于臨床。附圖l為本發(fā)明化合物(I)的力-'HCOSY譜中觀察到的結(jié)構(gòu)圖。附圖2為本發(fā)明化合物(I)的HMBC譜中觀察到的結(jié)構(gòu)圖。本發(fā)明的具體實(shí)施例方式實(shí)施例l:北青龍衣提取物，含有通式(I)的化合物含量大于70%，該化合物的結(jié)構(gòu)式為<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>OOH(1)。所述的一種北青龍衣提取物的制備，取新鮮的北青龍衣用乙醇浸泡提取，提取液濃縮，濃縮液加水分散，離心后取上清液，上清液通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂，將吸附樹(shù)脂用乙醇洗脫，洗脫液濃縮過(guò)濾后注入葡聚糖凝膠，收集4096乙醇洗脫液，濃縮至干，得干燥物中青龍衣素A含量大于70%。所述的一種北青龍衣提取物的制備，所述的取新鮮的北青龍衣用乙醇浸泡提取，是將新鮮的北青龍衣用810倍量75%95%乙醇浸泡一周，提取三次。所述的一種北青龍衣提取物的制備，所述的提取液濃縮，濃縮液加水分散，離心，是指合并提取液后減壓濃縮并濃縮至相對(duì)密度1.10-1.14(50。C)，濃縮液加水分散，離心，離心后取上清液，上清液通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂，將吸附樹(shù)脂用乙醇洗脫。所述的一種北青龍衣提取物的制備，所述的加水分散離心后，取上清液，通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂吸附過(guò)濾，是指離心后，取上清液，注入已處理好的DiaionHP-20大孔吸附樹(shù)脂中，藥材與樹(shù)脂的比例為1:201:50，流速10ml/min，分別以35倍柱床體積的水洗、5倍柱床體積的30%乙醇洗，收集30%乙醇洗脫液，洗脫液減壓蒸干得到殘?jiān)瑲堅(jiān)蒙倭?0%乙醇溶解，濾過(guò)，濾液注入葡聚糖凝膠，收集40%乙醇洗脫液，濃縮至干，得干燥物中青龍衣素A含量大于7096。所述的一種北青龍衣提取物的制備，所述的濾液注入葡聚糖凝膠，收集409&乙醇洗脫液是指注入葡聚糖凝膠LH-20柱上，色譜柱直徑2.5cm，柱長(zhǎng)1.5m，上樣量為5g殘?jiān)?每次，流速1.Oml/min，以3倍柱床體積的4096乙醇洗脫。北青龍衣提取物的制備，所述的將葡聚糖凝膠LH-20的40%乙醇洗脫液濃縮至干，干燥物中青龍衣素A含量大于70%。含有通式(I)的化合物的提取物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。實(shí)施例2:化合物(I)的制備材料來(lái)源:北青龍衣為胡桃科植物核桃楸(yi^7ays#a/cfe/w^caMAXIM.)的未成熟果實(shí)，于7月中旬采于黑龍江省五?？h，植物標(biāo)本樣本收藏于黑龍江省藥品檢驗(yàn)所中藥標(biāo)本館。提取和分離將新鮮的北青龍衣用7596乙醇浸泡一周，共提取三次，合并提取液，減壓濃縮，濃縮至相對(duì)密度1.10-1.14(50°C)的濃縮液，濃縮液加10倍量水分散，離心，取上清液，注入已處理好的大孔吸附樹(shù)脂中(濃縮液與樹(shù)脂的比例為1:50)，流速10ml/min，分別以3倍柱床體積的水洗、5倍柱床體積的30%乙醇洗，收集30%乙醇洗脫液，洗脫液減壓蒸干得到殘?jiān)?，殘?jiān)蒙倭考状既芙猓瑸V過(guò)，濾液注入葡聚糖凝膠LH-20柱上(色譜柱直徑2cm，柱長(zhǎng)2m，上樣量為lg殘?jiān)?每次)，以甲醇洗脫，洗脫液在硅膠板上進(jìn)行薄層層析，展開(kāi)劑為氯仿-甲醇(84:16)，合并Rf值為0.3的單一組分，用甲醇重結(jié)晶得該化合物，純度為98%以上。實(shí)施例3:化合物(I)的結(jié)構(gòu)測(cè)定結(jié)構(gòu)測(cè)定用ShimadzuUV-160分光光度計(jì)測(cè)定紫外光譜，用JASCOFT/IR-300E(KBr壓片)分光光度計(jì)測(cè)定紅外光譜，用JASCODIP-370digitalpolarimeter觀!l定旋光度，用'LCQmassanalyzer領(lǐng)U定ESI-MS,用JEOLMstationspectrometer測(cè)定HR-FAB-MS,'H-和13C-NMR譜用JEOLECP-500spectrometer,TMS作內(nèi)標(biāo)?；衔?I)的理化性質(zhì)化合物(I)為無(wú)定形粉末。IR(KBr)vM:3414，2924,2857，2372，1618，1456，1391，1263，1116,618。UV(MeOH)Lax(logs):209nm(3.52)，263nm(3.92)，344nm(4.41)。[a]D25-21°(c=0.1，Me0H)。NMR(500MHz,CD30D)和13C-NMR(125MHz,CD30D)譜數(shù)據(jù)見(jiàn)表l。ESI-MS(positive)379.1[M+Na];服-FAB-MS(positive)仏379.1002[M+Na](計(jì)算值(:^1607化379.1005)?；衔?I)的iH-NMR譜中顯示有五個(gè)芳香質(zhì)子，在S6.67(1H，dd，/=8.2，1.1)，57.42(1H，dd，/=8.2，7.8),57,29(1H，dd，/=7.8，1.l)為一套ABC偶合系統(tǒng)，S6.53(1H，s)，S7.06(1H，s)為一套對(duì)位氫取代的芳香系統(tǒng)，在高場(chǎng)區(qū)S2.50(1H，dd，/=12.4，4.2)，S2.57(1H，dd，12.4，1.8)為一個(gè)亞甲基和一個(gè)次甲基在S3.15(lH，d，/=4.2，L8)鄰位偶合，其余三個(gè)質(zhì)子分別在S3.31(1H，m)和S2.68(2H，m)鄰位偶合，這些在力」HC0SY譜中得到確證(見(jiàn)附圖l)。13C-NMR譜結(jié)合HMQC譜可知S208.7為羰基碳，在S48.9和S36.7分別為一個(gè)亞甲基和一個(gè)次甲基，S70.9為連有羥基的叔碳。HMBC譜中S2.50(H-3)，S2.57(H-3)的亞甲基與S208.7(C-1)羰基相關(guān)，S3.15(H-2)的次甲基與S70.9(C-4)相關(guān)，可以推斷分子中含有四氫萘酮結(jié)構(gòu)。HMBC譜中S6.67(H-5)與S70.9(C-4)相關(guān)也證明了這一點(diǎn)，且表明四氫萘酮中的苯環(huán)為ABC偶合系統(tǒng)。另外一套芳香系統(tǒng)是連接在S70.9(C-4)上，這在HMBC譜中可以觀察到S7.06(H-5')與S70.9(C-4)的相關(guān)峰。在HMBC譜中S3.31(H-7，)與5116.1(C-2，)相關(guān)，S6.53(H-2，)，與S40.3(C-7，)相關(guān)，表明S40.3(C-7')和S45.6(C-8')連接在另一個(gè)苯環(huán)上。其中S2.68(H-8，)和48.9(C-2)遠(yuǎn)程相關(guān)，S3.31(H-7，)柳208.7(C-1)遠(yuǎn)程相關(guān)，表明C-7'連接在C-2上，這可以通過(guò)S3.31(H-7，)與S36.7(C—3)，S2.50(H—3),S2.57(H-3)與S40.3(C—7，)的遠(yuǎn)程相關(guān)得到確證。從苯環(huán)上的取代基看，四氫萘酮上有兩個(gè)羥基，分別位于C-4和C-8，另一個(gè)苯環(huán)上有兩個(gè)鄰位羥基，分子式中尚有兩個(gè)氧原子，結(jié)合"C-NMR譜(5176.9)數(shù)據(jù)，表明有一個(gè)羧基存在，它只能連接在C-8'上。因此，化合物(I)的'H-腿R和"C-NMR數(shù)據(jù)排布如表l。從HMBC譜(附圖2)中，該化合物的結(jié)構(gòu)得到了確證。表l化合物(I)的iH-NMR和13C-NMR數(shù)據(jù)No.sc1208.723.15dd(4.2，1.8)48.932.50dd(12.4，4.2)36.72.57dd(12.4，1.8)470.956.67dd(8.2，1.1)116.567.42dd(8.2，7.8)138.377.29dd(7.8，1.1)114.08163.89115.310155.71，128.22,6.53s116.13，146.24,145.75,7.06s113.16,135.77,3.31m40.38,2.68(2H，m)45.69,176.9實(shí)施例4:一種上述的化合物在抗腫瘤領(lǐng)域藥品制備中的應(yīng)用。抑制人HL-60白血病細(xì)胞，人Kato-III胃癌細(xì)胞和人^49肺癌細(xì)胞的活性實(shí)驗(yàn)細(xì)胞培養(yǎng)人HL-60白血病細(xì)胞，人Kato-III胃癌細(xì)胞和人^49肺癌細(xì)胞培養(yǎng)于RPMI1640培養(yǎng)基，補(bǔ)加1(^FBS、L-glutamine、100U/ml青霉素以及100網(wǎng)/ml鏈霉素。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞計(jì)數(shù)，以3x104個(gè)/ml的濃度接種于96孔板，每孔180^1，在37°C、5%0)2的孵箱中培養(yǎng)24小時(shí)。細(xì)胞毒測(cè)定不同濃度(1-lOOpM)的藥物以EtOH-H20(l:9)為溶劑溶解至201^1,空白組加入20nl的EtOH-H20(l:9)溶液，細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)72小時(shí)，然后采用MTT法進(jìn)行測(cè)定，即培養(yǎng)后的細(xì)胞，加入10piMTT(5mg/ml)磷酸鹽緩沖液，37°C、5%C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4小時(shí)，離心，取上清液150nl棄去，加入175plDMSO，振搖10分鐘后，用酶標(biāo)儀在550nm測(cè)定吸光值。根據(jù)下面的公式計(jì)算，繪圖得IC5。。抑制率(%)=(對(duì)照孔A值-空白孔A值)-(試驗(yàn)孔A值-空白孔A值)X100%對(duì)照孔A值-空白孔A值對(duì)照孔僅加細(xì)胞不加藥物空白孔僅加溶劑不加細(xì)胞和藥物實(shí)驗(yàn)孔加細(xì)胞再加藥物試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。結(jié)果表明，化合物(I)對(duì)三種腫瘤細(xì)胞均有不同程度的抑制作用。表2.化合物(I)抑制三種腫瘤細(xì)胞的IC5。(^iM)值<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>化合物(I)18.0±8.412.8±9.332.5±16.4注每個(gè)數(shù)值為三次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的平均值士標(biāo)準(zhǔn)偏差實(shí)施例5:藥效學(xué)試驗(yàn)試驗(yàn)動(dòng)物昆明種小鼠，體質(zhì)量18g-22g，雌雄兼用。藥物與試劑注射用生理鹽水(空白對(duì)照)，環(huán)磷酰胺(陽(yáng)性對(duì)照)，化合物(I)瘤株:小鼠肝癌H22。試驗(yàn)方法1、對(duì)小鼠瘤重及免疫器官指數(shù)的影響小鼠隨機(jī)分組，雌雄各半。分別為化合物(I)組，環(huán)磷酰胺組，生理鹽水組。各組小鼠于右前腋皮下常規(guī)接種H2應(yīng)細(xì)胞懸液0.2ml(約lX106-2X106個(gè)細(xì)胞)，接種后各組ip給藥，連續(xù)7d。末次給藥后處死小鼠，稱體重，稱瘤塊、胸腺及脾臟質(zhì)量，計(jì)算抑瘤率、胸腺指數(shù)和脾指數(shù)。2、對(duì)1122小鼠生命延長(zhǎng)率的影響小鼠腹腔接種H22瘤細(xì)胞懸液0.2ml,每天觀察并記錄小鼠死亡情況。結(jié)果見(jiàn)下表注與生理鹽水組比較，*P〈0.05;與環(huán)磷酰胺組比較，一<0.05。本發(fā)明提供的化合物(I)對(duì)H22生長(zhǎng)有明顯的抑制作用，并可^^顯延長(zhǎng)小鼠生存時(shí)間，具有良好的抗腫瘤作用。實(shí)施例6:動(dòng)物抑瘤生命延劑量w"，，胸腺指數(shù)脾指數(shù)組別^S只數(shù)率，^^長(zhǎng)率(mg/kg)(n)(%)(g/g)(g/g)化合,n5.15002076.120.0024±0.0006*0.0045±0.0016*30.32*物(I)磷T4.00002084.340.0021±0.0004*0.0038±0.0008*38.12*理200.0052±0.00180.0081±0.0074環(huán)胺生水酰鹽13北青龍衣提取物的制備將新鮮的北青龍衣用8倍量759&乙醇浸泡一周，提取三次；合并提取液，減壓濃縮，濃縮至相對(duì)密度1.10-1.14(50。C);濃縮液加水分散，離心，取上清液，注入已處理好的DiaionHP-20大孔吸附樹(shù)脂中(藥材與樹(shù)脂的比例為l:50)，流速10ml/min，分別以3倍柱床體積的水洗、5倍柱床體積的30%乙醇洗，收集30%乙醇洗脫液;洗脫液減壓蒸干得到殘?jiān)?，殘?jiān)蒙倭?0%乙醇溶解，濾過(guò)，濾液注入葡聚糖凝膠LH-20柱上(色譜柱直徑2.5cm,柱長(zhǎng)1.5m,上樣量為5g殘?jiān)?每次)，以3倍柱床體積的40%乙醇洗脫；洗脫液濃縮至干，干燥物中青龍衣素A含量大于70%。實(shí)施例7:北青龍衣提取物的制備將新鮮的北青龍衣用10倍量8096乙醇浸泡一周，提取三次；合并提取液，減壓濃縮，濃縮至相對(duì)密度1.10-1.14(50。C);濃縮液加水分散，離心，取上清液，注入已處理好的DiaionHP-20大孔吸附樹(shù)脂中(藥材與樹(shù)脂的比例為1:30)，流速10ml/min，分別以5倍柱床體積的水洗、5倍柱床體積的30%乙醇洗，收集30%乙醇洗脫液；洗脫液減壓蒸干得到殘?jiān)瑲堅(jiān)蒙倭?0%乙醇溶解，濾過(guò)，濾液注入葡聚糖凝膠LH-20柱上(色譜柱直徑2.5cm，柱長(zhǎng)1.5m，上樣量為5g殘?jiān)?每次)，流速1.Oml/min，以3倍柱床體積的40%乙醇洗脫；洗脫液濃縮至干，干燥物中青龍衣素A含量大于709L實(shí)施例8:北青龍衣提取物的制備將新鮮的北青龍衣用10倍量9596乙醇浸泡一周，提取三次；合并提取液，減壓濃縮，濃縮至相對(duì)密度1.10-1.14(50。C);濃縮液加水分散，離心，取上清液，注入已處理好的DiaionHP-20大孔吸附樹(shù)脂中(藥材與樹(shù)脂的比例為1:20)，流速10ml/min，分別以5倍柱床體積的水洗、5倍柱床體積的30%乙醇洗，收集30%乙醇洗脫液；洗脫液減壓蒸干得到殘?jiān)?，殘?jiān)蒙倭?0%乙醇溶解，濾過(guò)，濾液注入葡聚糖凝膠LH-20柱上(色譜柱直徑2.5cm，柱長(zhǎng)1.5m，上樣量為5g殘?jiān)?每次)，流速1.Oml/min，以3倍柱床體積的40%乙醇洗脫；洗脫液濃縮至干，干燥物中青龍衣素A含量大于70鬼。實(shí)施例9:北青龍衣提取物的藥效學(xué)試驗(yàn)試驗(yàn)動(dòng)物昆明種小鼠，體質(zhì)量18g-22g，雌雄兼用。藥物與試劑注射用生理鹽水(空白對(duì)照)，北青龍衣提取物(青龍衣素A含量大于70O，市售復(fù)方青龍衣酊。瘤株小鼠肝癌H22。試驗(yàn)方法1對(duì)小鼠瘤重及免疫器官指數(shù)的影響小鼠隨機(jī)分組，雌雄各半。分別為北青龍衣提取物組，復(fù)方青龍衣酊組，生理鹽水組。各組小鼠于右前腋皮下常規(guī)接種H22瘤細(xì)胞懸液0.2ml(約lX106-2X106個(gè)細(xì)胞)，接種后各組ip給藥，連續(xù)7d。末次給藥后處死小鼠，稱體重，稱瘤塊、胸腺及脾臟質(zhì)量，計(jì)算抑瘤率、胸腺指數(shù)和脾指數(shù)。2對(duì)H22小鼠生命延長(zhǎng)率的影響小鼠腹腔接種H22瘤細(xì)胞懸液0.2ml，每天觀察并記錄小鼠死亡情況。結(jié)果見(jiàn)下表組別提取物復(fù)方青龍衣酊生理鹽水劑量(mg/kg)8.250012.000動(dòng)物只數(shù)(n)202020抑瘤率(%)74.2264.34胸腺指數(shù)(g/g)0.0026±0.0005*0.0021±0.0004*0.0052±0.0018脾指數(shù)(g/g)0.0066±0.0015*0.0038±0.0008*0.0081±0.0074生命P長(zhǎng)率%64.41-53.18注與生理鹽水組比較，*P〈0.05;與復(fù)方青龍衣酊組比較，一〈0.05'1權(quán)利要求1.一種北青龍衣提取物，其特征是含有通式(I)的化合物含量大于70％，該化合物的結(jié)構(gòu)式為2.一種權(quán)利要求1所述的一種北青龍衣提取物的制備，其特征是取新鮮的北青龍衣用乙醇浸泡提取，提取液濃縮，濃縮液加水分散，離心后取上清液，上清液通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂，將吸附樹(shù)脂用乙醇洗脫，洗脫液濃縮過(guò)濾后注入葡聚糖凝膠，收集40%乙醇洗脫液，濃縮至干，得干燥物中青龍衣素A含量大于70%。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種北青龍衣提取物的制備，其特征是所述的取新鮮的北青龍衣用乙醇浸泡提取，是將新鮮的北青龍衣用810倍量75%95%乙醇浸泡一周，提取三次。4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的一種北青龍衣提取物的制備，其特征是所述的提取液濃縮，濃縮液加水分散，離心，是指合并提取液后減壓濃縮并濃縮至相對(duì)密度1.10-1.14(50°C),濃縮液加水分散，離心，離心后取上清液，上清液通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂，將吸附樹(shù)脂用乙醇洗脫。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種北青龍衣提取物的制備，其特征是所述的加水分散離心后，取上清液，通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂吸附過(guò)濾，是指離心后，取上清液，注入已處理好的DiaionHP-20大孔吸附樹(shù)脂中，藥材與樹(shù)脂的比例為l:201:50，流速10ml/min，分別以35倍柱床體積的水洗、5倍柱床體積的30%乙醇洗，收集30%乙醇洗脫液，洗脫液減壓蒸干得到殘?jiān)?，殘?jiān)蒙倭?0%乙醇溶解，濾過(guò)，濾液注入葡聚糖凝膠，收集40%乙醇洗脫液，濃縮至干，得干燥物中青龍衣素A含量大于70%。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種北青龍衣提取物的制備，其特征是所述的濾液注入葡聚糖凝膠，收集40%乙醇洗脫液是指注入葡聚糖凝膠LH-20柱上，色譜柱直徑2.5cm，柱長(zhǎng)1.5m，上樣量為5g殘?jiān)?每次，流速1.0ml/min，以3倍柱床體積的40%乙醇洗脫。7.根據(jù)權(quán)利要求2或3或4或5或6所述的一種北青龍衣提取物的制備，其特征是所述的將葡聚糖凝膠LH-20的40%乙醇洗脫液濃縮至干，干燥物中青龍衣素A含量大于70%。8.一種含有通式(I)的化合物的提取物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。全文摘要北青龍衣提取物、制備方法及醫(yī)藥用途?，F(xiàn)有的北青龍衣提取物有效成分不明確，缺乏量化指標(biāo)，導(dǎo)致藥理作用機(jī)制難以闡述。本發(fā)明采用乙醇提取結(jié)合大孔樹(shù)脂及凝膠色譜技術(shù)，制備了北青龍衣抗腫瘤有效成分的提取物。北青龍衣提取物，含有通式(I)的化合物含量大于70％，該化合物的結(jié)構(gòu)式如上。本發(fā)明應(yīng)用于醫(yī)藥領(lǐng)域。文檔編號(hào)A61K36/52GK101468061SQ20071014496公開(kāi)日2009年7月1日申請(qǐng)日期2007年12月28日優(yōu)先權(quán)日2007年12月28日發(fā)明者劉麗娟,巍李申請(qǐng)人:黑龍江大學(xué)