專利名稱：：繁縷總核糖苷蛋白體類成份的組合物及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：在本發(fā)明人的公開號(hào)為CN1377680A和CN1498630A兩發(fā)明專利基礎(chǔ)上，本次發(fā)明公開了對(duì)上述兩專利中的組合物化學(xué)成份進(jìn)行深入研究的進(jìn)展和結(jié)果，涉及從植物繁縷或從其它一種繁縷屬植物提取的分子量分布在1,000100,000、一類呈深棕黃色粉末的總核糖苷蛋白體類成份的組合物作為一種更安全、更高效的廣譜抗病毒天然藥物應(yīng)用。二
背景技術(shù)：
：經(jīng)檢索美國(guó)《化學(xué)文摘》(ChemicalAbstracts)從1920年起至2001年第134巻為止，所報(bào)道的繁縷屬植物的化學(xué)成分主要是黃酮及黃酮甙類、皂甙及皂武原類、環(huán)縮氨酸類、阿魏酸及其酯類、綠原酸、新綠原酸、咖啡酸、奎寧酸、抗壞血酸類、草酸及草酸鈣、單?；肴樘穷愔?、生物堿類、吡喃半乳糖-SN-丙三氧基類、菠菜甾醇、豆甾烯醇、谷甾醇類等等。本發(fā)明人曾在公開號(hào)為CN1377680A專利中公開了從繁縷屬植物繁縷或其它一種繁縷屬植物中提取的分子結(jié)構(gòu)中含較多硫元素和鈣元素的總有機(jī)酚酸及其糖苷類化合物以及在CN1498630A號(hào)專利中公開了根據(jù)組合物為在270.1nm和326.6nm處有兩個(gè)最大吸收峰的分子結(jié)構(gòu)中有桂皮酰和苯甲酰結(jié)構(gòu)的黃酮類大極性化合物的組合物作為抗病毒藥物的應(yīng)用，且該組合物與三氯化鐵試液顯茶色反應(yīng)等特點(diǎn)。另有公開號(hào)CN1521193A的專利稱其用熱低級(jí)醇從繁縷屬植物中提取到分子量分布在40002000000并含肽和羧基的灰白色多糖類成份和公開號(hào)為CN1521179A的專利公開了用醇提水醇沉法得到的繁縷中總黃酮抗皰疹病毒和艾滋病毒的應(yīng)用。但至今尚未見從植物繁縷或從其它一種繁縷屬植物提取的分子量分布在1,000100,000、一類呈深棕黃色粉末的總核糖苷蛋白體類成份的組合物作為廣譜抗病毒藥物應(yīng)用的報(bào)道。三
發(fā)明內(nèi)容1、本發(fā)明要解決的技術(shù)問題提供一種從繁縷或其它一種繁縷屬植物提取分離的分子量分布在1，000100,000、一類總核糖苷蛋白體類成份的組合物作為更安全、更高效的廣譜抗病毒藥物應(yīng)用。2、本發(fā)明釆用的技術(shù)方案在本發(fā)明人已經(jīng)公開的CN1377680A及CN1498630A兩份專利基礎(chǔ)上，對(duì)原專利的組合物中抗病毒有效成份進(jìn)行進(jìn)一歩深入研究，探究其分子量分布范圍和化學(xué)組成，得到新的有效成份組合物具有更安全、更高效的廣譜抗病毒藥物作用，從而作為一種更好的抗病毒藥物應(yīng)用。3、現(xiàn)經(jīng)在高效液相色譜儀的凝膠柱上用緩沖液洗脫，用葡聚糖P-82作標(biāo)準(zhǔn)品，通過GPC軟件進(jìn)行分子量分布測(cè)得；從繁縷及其它-種繁縷屬植物中提取分離到的高效廣譜抗病毒組合物是分子量分布在1，000100,000、一類總核糖苷蛋白體類成份的組合物。該總核糖苷蛋白體類成份的化學(xué)結(jié)構(gòu)中的總蛋白中包括有環(huán)亮氨酸異亮氨酸二肽和環(huán)纈氨酸一酪氨酸二肽在內(nèi)的環(huán)肽，總蛋白部份占該組合物的15%25%，總蛋白經(jīng)水解至少可測(cè)得以下19種氨基酸，各氨基酸的含量比例分別為天門冬氨酸12.118%13.18%、谷氨酸13.036%18.425%、絲氨酸4.156%6.19%、組氨酸1.89%1.946%、甘氨酸8.卯9%9.915%、蘇氨酸4.837%7.129%、精氨酸2.92%3.677%、丙氨酸6.05%9.647%、酪氨酸2.596%2.877°/。、胱氨酸0.2%1.89%、纈氨酸5.94%7.577%、蛋氨酸0.2%2.09%、苯丙氨酸2.74%3.738%、異亮氨酸4.28%5.046%、亮氨酸4.70%5.53%、賴氨酸:5.77%7.965%、脯氨酸；4.61%8.60°/。、Y-氨基」'酸:1.25%1.75%及u-氨基-Y-羥基-戊—酸1.04%1.77%;由于供試樣品和測(cè)定條件的不同，有時(shí)有些氨基酸未測(cè)出；該總核糖苷蛋白體類成份中總核苷酸占5%10%，包括尿嘧啶、胸腺嘧啶、胸哲、鳥哲、2-氯-腺苷；該總核糖苷蛋白體類成份結(jié)構(gòu)中的糖至少包括核糖、葡萄糖、半乳糖及阿拉伯糖，經(jīng)苯酚-濃硫酸法測(cè)得總糖在其化學(xué)結(jié)構(gòu)中占15%30%，與苯酚-濃硫酸反應(yīng)呈現(xiàn)糖的棕黃色反應(yīng)并在400nm410nm和480nm490nm出現(xiàn)兩個(gè)最火吸收峰，其中400nm410nm的峰為主峰要比480nm490nm出現(xiàn)的吸收峰高一倍是其鑒別的重要特征；該總核糖苷蛋白體類成份結(jié)構(gòu)中所含硫元素占14%，除胱氨酸、蛋氨酸等所含硫外，硫還形成硫酸酯多糖，或/和巰基或/和硫醚或/和硫醇或/和硫一硫結(jié)構(gòu)；該總核糖苷蛋白體類成份與三氯化鐵試液顯現(xiàn)酚類的一種深綠茶色反應(yīng)，并在220nm235nm處和330nm350nm處出現(xiàn)兩個(gè)最大吸收峰，其中220nm235nm峰是主峰，要比330nm350nm的峰高出一倍是其鑒別的另一個(gè)重要特征；其結(jié)構(gòu)中的酚占5%15%;該總核糖苷蛋白體類成份其化學(xué)結(jié)構(gòu)中非糖的烷烴或/和含氧垸烴部份占25%40%;該總核糖苷蛋白體類成份可經(jīng)稀堿反應(yīng)后在高效液相色譜儀的C-18反相柱室溫條件K層析吋，在保留時(shí)間為2.352.6分鐘和保留吋間為3.63.9分鐘出現(xiàn)2個(gè)特征峰，有時(shí)還會(huì)在這兩個(gè)特征峰之間出現(xiàn)其它峰；當(dāng)流動(dòng)相中有機(jī)溶媒含量變化時(shí)這兩個(gè)特征峰的保留時(shí)間幾乎不發(fā)生變化或變化很小、但該峰的峰高卻隨流動(dòng)相中有機(jī)溶媒含量的增加而增加是其重要鑒別特征；這些峰可供作該總核糖苷蛋白體類成份的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和含量測(cè)定；組合物呈棕色粉末狀，略有苦味，易溶于水呈棕紅色溶液。總核糖苷蛋白體類成份可與繁縷中的總黃酮按55%90%比45%10%組成新的組合物，根據(jù)二者含量和濃度的不同形成棕紅色、深棕紅色或近棕黑色透明溶液，該總核糖苷蛋白體類成份中分子量越大、含量越高，而黃酮含量越低其溶液色澤越趨向近深棕黑色仍至近黑色、其抗病毒作用也越強(qiáng)。4、本發(fā)明所述的組合物，是從下列一種植物中提取，這些植物包括丫繁縷屬植物StellariaL.及牛繁縷屬植物MalachiumFries的以下79種，即繁縷Stellariamedia(L.)Cyr.、雀舌草StellariaalsineGrimm.、褐瓣雀舌草Stellariaalsinevar.phaeuspetalaHand.-Mazz.、安徽繁縷StellariaanhwiensisMigo.、!屯萼繁縷StellariaamblyosepalaSchrenk.、細(xì)畫尖繁纟婁StellariaapiculataWils.、Hl月勤草Stellariaaquatica(L)Scop,、沙生繁縷StellariaarenariaMaxim、阿里山繁縷StellariaarisanensisH:ayata.、薄葉卩可里山繁縷Stellariaarisanensisvar.leptophyllaHayata.、北繁縷StellariaborealisBigel.、短瓣繁縷StellariabrachypetalaBge.、長(zhǎng)瓣繁縷StellariabungeanaFenzl.、東北繁縷Stellariacherleriae(Fisch.)Will.、華繁縷StellariachinensisRegel、臺(tái)灣繁縷StellariacicranthaHayata、厚葉繁縷StdlariacrassifoliaEhrh.、鈹葉繁縷StellariaciispateWall"大衛(wèi)繁縷StellariadavidiiHemsl.、偃臥繁縷StellariadecumbensEdgew.、針狀偃臥繁縷Stellariadecunbensvar,aciculariaEdgew.etHook.f.、西南繁縷Stellariadel.avayiFranch.、石竹卩十繁縷StellariadianthifoliaWilliams、二歧聚傘它繁縷StellariadichasioidesWilliams、只又歧繁縷StdlariadichotomaL.、窄葉雙歧繁縷Stellariadichotomavar.lanceolateBge.、線葉雙歧繁縷Stdlariadichotomavar.stephenianaWilld.、鋪散繁縷StellariadiffusaWHls.、翻白繁縷StellariadiscolorTurcz.、澤繁縷StellariadiversifloraMaxim.、l果i鬼異-花繁縷Stellariadiversifloravar.gymnandraFranch.、凹Mc繁縷StellariadepressaSchnid.、杜氏繁縷StellariaduthieiGandoger、線莖繁縷StellariafilicaulisMak.、線柄繁縷StellariafilipesKomar.、多花繁縷StellariafloridaFisch.、禾口十繁纟婁StellariagramineaL.、ll柔毛未卩十繁縷Stellariagramineavar.pilosulaMaxim.、變綠未口十繁縷Stellariagramineavar.viridescensMaxim.、江孜繁縷StellariagyantsensisWilliams、霞草繁縷StellariagypsophiloidesFenzl.、湖北繁縷StellariahenryiWilliams、興安繁縷StellariahsinganensisKitagawa、內(nèi)曲繁縷StellariainfractaMaxim.、'薄口十繁縷StellarialeptophyllaHance、東繁縷StellariamaximowixzianaFranch.、繁縷Stellariamedia(L.)Cyr.、d、花繁^^StellariamicranthaHayata、柔繁縷StellariamitansWilliams、我鳥月i繁纟婁StellarianeglectaWeihe、新沼生繁縷Stellarianeo-palustrisKitagawa、八籃繁縷StellariaoctandraFobedim..、纟工lt;繁縷StellariaoxycoccoidesKomar.、f召生繁纟婁StdkriapalustrisL.、展葉繁縷StellariapatentifoliaBQtagawa、柄花繁縷Stellariapedunculai.isBge.、柄時(shí)'繁縷StellariapetiolarisHand-Mazz.、長(zhǎng)毛繁縷StellariapilosaFranch.、假石生繁縷StellariapseudosaxatilisHand.-Mass.、小繁縷Stellariapus川aSchmid.、燧瓣繁縷StellariaradiansL.、網(wǎng)脈繁縷StellariareticulivenaHayata、巖繁縷StellariarupestrisHemsl.、石-生.繁纟婁StellariasaxatilisBuch.-Ham.、抱莖'石生繁縷Stellaria.saxatilisvar.a:mplexicaulisHand.-M:azz.、準(zhǔn).葛爾繁縷StellariasoongoricaRoshev.、蘇氏繁縷StellariasoulieiWilliams、星毛繁縷Stellariastellato-pilosaHayata、園萼繁纟婁StellariastrongylosepalaHand.-Mazz.、J以傘花繁纟婁StellariasubumbellataEdgew.、小鶯毛繁縷StellariatomentellaOhwi、三型繁縷StellariatrimorphaNakai、土耳其斯坦繁縷StellariaturkestanicaSchischk.、濕地繁縷StelariaudaWilliams、傘花繁縷StellariaumbellataTurcz.、纟錄它繁纟婁StellariavirdifloraPaxetO.Hoffm.、巫山繁縷StellariawushanensisWilliams、五臺(tái)繁縷StellariawutaicaHand.-Mazz.、云南繁縷Stellariayunnanensisfranch.j或牛繁縷屬植物牛繁縷Malachiumaquaticum.(L.)Fries等。5、木發(fā)明還提供用水提取醇沉淀再經(jīng)超濾的提取制備組合物的方法及加溫改善樹脂柱上洗脫條件后提高組合物得率的方法，并用較低濃度的低級(jí)醇類洗脫組合物以提高組合物中總核糖苷蛋白體類成份含量、減少艽中黃酮類成份的含量，增強(qiáng)組合物的抗病毒作用，降低毒副作用和刺激性及生產(chǎn)成本。6、組合物具有以下有益效果組合物nl抗病毒包括艾滋病毒、肝炎病毒、包括高致病性禽流感病毒在內(nèi)的流感病毒、副流感病毒、腺病毒等呼吸道病毒及尖銳濕疣病毒、腸病毒、腮腺炎病毒、單純性皰疹病毒、帶狀皰疹病毒和水痘一帶狀皰疹病毒等，并且較本發(fā)明人已經(jīng)公開的CN1377680A及CN1498630A兩份專利中發(fā)明的組合物中具有更高含量的總核糖苷蛋白體類成份并降低黃酮類成份含量，因而組合物具有更強(qiáng)的抗病毒作用及更低的毒副作用或剌激性。具體實(shí)施例方式一)、組合物的制備方法包括下列三種1、其制備方法l，其步驟包括將植物繁縷或其它一種繁縷屬植物的生藥或鮮草折算成干草，粉碎后用水提取得到水溶液經(jīng)沉淀、離心或過濾后通過預(yù)先已處理好的大孔樹脂柱以吸附所述組合物的成份，用水洗凈大孔樹脂柱，再將大孔樹脂柱加溫節(jié)45'C55'C后用同樣溫度的熱蒸餾水洗柱并收集流出的深褐色蒸餾水液，繼用加溫至45°C55°C、濃度在20%35%的低級(jí)醇類或丙酮從樹脂柱上洗脫，收集洗脫得到的棕紅色或暗棕紅色醇液或丙酮液，將此溶液冋收醇或丙酮后與收集的深褐色水液合并，濃縮至比重達(dá)0.80至1.00后靜置12小時(shí)，離心去除雜質(zhì)，經(jīng)6(TC真空干燥或噴霧干燥即得組合物粗品，組合物粗品屮總核糖貸蛋白體類成份與黃酮類成份的比例為55%:45%;如將組合物粗品再用純水溶解成比重0.801.10的溶液后加濃度為95%的乙醇使溶液中醇或丙酮濃皮達(dá)到50%70%，靜置，濾取沉淀物并用3倍體積量的95%乙醇洗滌-次、2倍體積量的丙酮洗滌歡，經(jīng)6(TC真空干燥或加水溶解成比重為1.001.20的溶液再噴霧千燥即得組合物，該組合物中總核糖苷蛋白體類成份與黃酮類成份的比例為90%:10%;其中低級(jí)醇類包括甲醇、乙醇、丙醇和異丙醇。2、權(quán)利要求1所述組合物的制備方法2，其步驟包括將植物繁縷或其它一種繁縷屬植物的鮮草或鮮干草洗凈、粉碎后提取水溶液，將此水溶液經(jīng)沉淀、離心或過濾后得到液體；將此液體經(jīng)陰離子交換劑柱將所述組合物成份吸附在柱上，用2N氯化鈉溶液將所述組合物成份從柱上洗脫下來，再經(jīng)脫鹽處理、濃縮至比重達(dá)0.80至1.00后靜置12小時(shí)，離心去除雜質(zhì)，加濃度為95%的乙醇使溶液屮乙醇濃度達(dá)到50%70%，靜置，濾取沉淀物并用3倍體積量的95%乙醇洗滌12次、2倍體積量的丙酮洗滌12次，經(jīng)60。C真空干燥或加水溶解成比重為1.101.20的溶液再60。C真空干燥或噴霧干燥即得組合物；其中陰離子交換劑柱包括弱陰離子交換樹脂柱和陰離子交換纖維素柱。3、權(quán)利要求1所述組合物的制備方法3，其步驟包括將植物繁縷或其它一種繁縷屬植物的十藥材粉碎后，用510倍體積的水浸提兩次，每次13小時(shí)，合并提取得到的深棕色提取液，減壓濃縮至比重0.70.9,靜置12小時(shí)，濾除沉淀，溶液中加入95%低級(jí)醇類或丙酮使?jié)舛冗_(dá)60%70%,靜置12小時(shí)，濾集析出的沉淀物即得組合物粗品，將此組合物粗品用適量純水溶解后經(jīng)高速離心機(jī)15，000rpm,離心15分鐘，離心后的澄清液先經(jīng)孔徑為0.22iim的陶瓷膜處理設(shè)備精濾處理，再經(jīng)切割分子量為2000以上的超濾膜超濾，將經(jīng)超濾去除部分小分子量雜質(zhì)后的溶液濃縮至比重0.70.9，加入低級(jí)醇或丙酮使?jié)舛冗_(dá)85%進(jìn)行」次醇沉，靜置12小吋后吸出上層清液，將沉淀物經(jīng)減壓抽濾近干，及時(shí)先后加適量無水乙醇和丙酮洗潘，抽濾至千，并立即經(jīng)6(TC真空十燥即得較純的粉末狀組合物；其中低級(jí)醇為甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇。4、組合物作為抗病毒藥物應(yīng)用至少可做成以下劑型1).針劑，可用于治療艾滋病、肝炎、SAS病毒引發(fā)的非典型肺炎、高致病性禽流感病毒H5N,型等引發(fā)的各種病毒性疾病。2).粉針劑，可用于治療艾滋病、肝炎、SAS病毒引發(fā)的非典型肺炎、高致病性禽流感病毒HsN、型等引發(fā)的各種病毒性疾病。3).氣霧劑，用于小兒治療流感、腮腺炎等，并可作為空氣及口腔抗病毒的消毒劑、保健品或抗病毒功能性食品。4).含片或咀嚼片，用于治療腮腺炎等，可作為空氣及U腔抗病毒的消毒劑、保健品或抗病毒功能性食品。5).膠囊劑，口服用于治療艾滋病、肝炎、流感等各種病毒性疾病。6).滴丸、微丸、微囊劑等，用以治療艾滋病、肝炎等慢性病母疾病。7).滴鼻劑或鼻噴劑，用于治療流感等，還可作為鼻腔抗病毒的消毒劑、保健品等，也可通過霧化器霧化吸入給藥，用以治療治療病毒性肺炎，如SAS病毒弓I發(fā)的非典型肺炎、高致病性禽流感病毒H5N型引發(fā)的病毒性疾病等。8).膜劑或涂劑等，用于皰瘆、尖銳濕疣等皮膚病的治療。9).膠漿劑，用于治療皰疹等皮膚病。10).水劑，用于臨床直接涂抹治療皰疹、尖銳濕疣等皮膚病。11).液體口香糖，可作為口腔抗病毒消毒劑、抗病毒保健品或功能性食品。12).口香糖，可作為口腔抗病毒消毒劑、抗病毒保健品或功能性食品等。二)、組合物的實(shí)施例1、用第種方法的實(shí)施例1:取揀凈雜質(zhì)的繁縷干鮮草5kg折算稱千草后加812倍的水提取，離心、過濾，提取得藥液，將此藥液通過id30cmX120cm的市售人孔樹脂柱，控制流速在5ml/min。可見大孔樹脂柱由上而下逐漸變成一種棕紅色或深棕褐色直至柱子吸滿藥物。棄去柱子中流出的液體，并先用自來水洗凈柱中的殘液。用約2倍柱體積的55'C蒸餾水洗滌大孔樹脂柱，棄去最先流出的無色及色澤較淺淡的水液，收集隨后流出的深褐色水液。此時(shí)大孔樹脂柱已被加溫至45°C50°C，繼用55r約為柱體積3倍量的35%乙醇洗脫并收集棕紅色乙醇溶液，本例用量約為300L35y。的乙醇；將收集的棕紅色乙醇溶液經(jīng)減壓濃縮回收乙醇，所得濃縮液與收集到的深褐色水液合并濃縮至比重0.80，約為1010ml左厶，靜置過夜，然后以4000r/min離心5分鐘，棄去沉淀物，h清液經(jīng)0.5tim濾膜過濾于已滅菌的潔凈容器中，量取其中的一半經(jīng)濃縮至比重1.10后，丁6(TC真空干燥得粗品1，并測(cè)得其中總核糖苷蛋白體類成份與黃酮之比為55%:45%;其余一半溶液再在無菌條件下經(jīng)減壓濃縮成比重為1.00的稠膏狀，再靜置12小時(shí)，離心去除雜質(zhì)，加濃度為95%的乙醇使溶液中醇濃度達(dá)到70%,靜置，濾取沉淀物并用3倍體積量的95%乙醇洗滌'次、2倍體積量的丙酮洗滌次，經(jīng)6(TC真空干燥即得粗品2，并測(cè)得其中總核糖苷蛋白體類成份與黃酮之比為卯。/cu10%,計(jì)得50.38g，得率按鮮草計(jì)算為8.91%。，反復(fù)用此法共制得組合物606g，將此粗品2進(jìn)一步用乙醇洗滌除盡黃酮類化合物時(shí)及可得到本發(fā)明的組合物。2、用第二種方法的實(shí)施例2:取繁縷鮮草32kg，用自來水洗凈泥土后粉碎，用水提取藥液；將藥液經(jīng)過沉淀、離心或過濾后即得到液體，將此液體通過id10cmX120cm的市售陰離子交換樹脂柱，吸附所述組合物成份后，用約為柱體積3倍的新鮮蒸餾水或去離子水洗凈弱堿性陰離子交換樹脂柱，棄去從柱中流出的由淺黃色逐漸變淡直至幾乎無色的洗柱液，本例用量約為30L水；然后將樹脂柱加溫至45T:5(TC繼用2倍于柱體積的并加熱到約55'C的濃度為2N的NaCl溶液將吸附在柱上的所述組合物成份迅速洗脫并收集此深棕紅色洗脫液，本例川NaCl溶液量為20L。將此含鹽溶液適當(dāng)濃縮至750ml左右后置于半透膜袋中，先后對(duì)自來水和蒸餾水進(jìn)行透析直至溶液對(duì)AgN03溶液反應(yīng)很弱或無咸味為止；將透析后所得深棕紅色溶液轉(zhuǎn)移至減壓千燥器中減壓千燥至比車O.卯呈粘稠狀，約為400ml，靜置過夜，然后以4000r/min離心5分鐘棄去沉淀物；加濃度為95%乙醇使溶液中乙醇濃度達(dá)到70°/。，靜置，濾取沉淀物并用3倍體積量的95%乙醇洗滌12次、2倍體積量的丙酮洗滌12次，經(jīng)6(TC真空干燥得棕色組合物粉末，有一般的中藥氣味，共得31.14g，得率按鮮草計(jì)算約為0.973%。，用此法共制得精制品512.73g。3、用第三種方法的實(shí)施例3:取植物繁縷鮮干草5kg洗凈、粉碎后，用水15kg、15kg提取兩次，合并所得水溶液，將此水溶液經(jīng)沉淀、離心或過濾后得到液體；將此液體經(jīng)減壓濃縮至比重為0.8左右，加入95%乙醇，使乙醇的濃度達(dá)到75%，溶液即出現(xiàn)大量渾濁，靜置12小時(shí)過夜，吸出上層清液棄去，將下層沉淀物經(jīng)離心或過濾得組合物粗品，將此粗品再用400ml純水溶解后經(jīng)高速離心機(jī)15，000r/min，離心15分鐘，將離心后的澄清液先經(jīng)孔徑為0.22Pm的陶瓷膜處理設(shè)備精濾處理，再經(jīng)切割分子量為2000以上的超濾膜超濾，將經(jīng)超濾去除部分小分子量雜質(zhì)后的溶液濃縮至比重0.85，加入95%乙醇使達(dá)85%濃度進(jìn)行二次醇沉，靜置12小時(shí)左右吸出上層清液，將沉淀物經(jīng)減壓抽濾近干，及時(shí)先后加無水乙醇350ml和丙酮350ml洗滌，抽濾至干，并立即經(jīng)6(TC真空干燥即得較純的棕色粉末狀組合物55.29§，得率為1.1%，用此法共制得465g。表l.給出從大孔樹脂柱上洗脫組合物時(shí)，溫度變化對(duì)得率的影響表1.實(shí)施例1中從柱上洗脫組合物時(shí)溫度變化對(duì)得率的影響編號(hào)溫度藥物色澤得率(鮮草計(jì))備注1約15'C的室溫棕紅色微黃2.19%。230°C深棕紅色2.47%0340。C深棕紅色2.53%。450。C深棕紅色發(fā)暗2.68%。通常采用560°C深棕紅色發(fā)暗2.70%。表2.給從大孔樹脂柱上洗脫組合物時(shí)乙醇濃度變化對(duì)得率的影響表2.實(shí)施例1中從柱上洗脫組合物時(shí)乙醇濃度變化對(duì)得率的影響編號(hào)乙醇濃度％藥物色澤得率(鮮草計(jì))備注120%深棕紅色發(fā)黑2.26%o230%暗深棕紅色2.32%。3400/0棕紅色發(fā)暗2.34%。黃酮漸多450%深棕紅色2.68%。黃酮漸多560%深棕紅色2.71%。黃酮較多670%棕紅色微黃2.77%。黃酮多4、分子量分布測(cè)定將組合物用水溶解，在高效液相色譜儀上進(jìn)樣，用日本產(chǎn)葡聚糖凝膠柱經(jīng)0.1%磷酸鈉緩沖液洗脫，以日本Shodex產(chǎn)葡聚糖STANDARDP-82作標(biāo)準(zhǔn)品，通過GPC軟件進(jìn)行分子量分布測(cè)定得從繁縷中提取分離到的總核糖苷蛋白體類成份其分子量分布在1，000100,000。5、組合物樣品化學(xué)結(jié)構(gòu)中的總蛋白經(jīng)水解后的氨基酸含量測(cè)定:取組合物供試樣品0.2g加6NHC1于12(TC封管水解20個(gè)小時(shí)，中和后定容，取上清液用標(biāo)準(zhǔn)氨基酸為對(duì)照測(cè)得組合物樣品化學(xué)結(jié)構(gòu)屮所含的總蛋白共計(jì)可水解出以下19種氨基酸，根據(jù)供試樣品中總核糖苷蛋白體類成份與總黃酮比例的不同及在不同條件下測(cè)得總氨基酸含量為15%25%，它們的含量分別為犬門冬氨酸12.1腦13.腦、谷氨酸13.036%18.425%、絲氨酸4.156%6.19%、組氨酸1.89%1.946%、甘氨酸8.909%9.915%、蘇氨酸4.837%7.129°/0、精氨酸2.92%3.677%、丙氨酸6,05%9.647%、酪氨酸2.596%2.877%、胱氨酸0.2%1.89%、纈氨酸5,94%7.577%、蛋氨酸0.2%2.09%、苯丙氨酸2.74%3.738%、異亮氨酸4.28%5.046%、亮氨酸4.70%5.53%、賴氨酸5.77%7.965%、脯氨酸4.610/。8.60%、y-氨基J'酸1.25%1.75%及0-氨基-y-羥基-戊二酸1.04%1.77%，由于供試樣品和測(cè)定條件的不同，有時(shí)有些氨基酸未測(cè)出；該總核糖苷蛋白體類成份組合物檢測(cè)出總核苷酸占5%10%，包括尿嘧啶、胸腺嘧啶、胸苷、鳥苷、2-氯-腺苷；此組合物的酸水解液中還檢測(cè)出有核糖、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖?？偤颂擒盏鞍左w類成份結(jié)構(gòu)中所含硫元素占14%，除胱氨酸、蛋氨酸等所含硫外，硫還形成硫酸酯多糖，或/和巰基或/和硫醚或/和硫醇或/和硫-硫結(jié)構(gòu)，其紅外光譜測(cè)試取組合物少量用KBr壓片，在紅外掃描儀上在4000cni"-400cirT1波數(shù)范圍進(jìn)行掃描，其紅外掃描圖譜中可見1236.94cm"的波數(shù)峰，表明有OS03的S=0伸縮振動(dòng)，838.14cm"的波數(shù)峰表明有C-O-S的拉伸振動(dòng)，這是硫酯鍵的特征峰，表明該含硫總糖肽類的酚性成份的化學(xué)結(jié)構(gòu)屮具有硫酸酯結(jié)構(gòu)，，其中O-S是硫醚結(jié)構(gòu)、S-O是巰基結(jié)構(gòu)，紅外掃描圖譜中還可見硫醇或/和硫-硫結(jié)構(gòu)。6、組合物的酚顯色反應(yīng)及含量測(cè)試取少量組合物用純水溶解，滴加2滴2NHCI使呈酸性，滴加1%三氯化鐵試液兩滴即顯現(xiàn)一種酚類的深綠茶色反應(yīng)，經(jīng)H木島津產(chǎn)UV-2401PC紫外-可見光光譜儀掃描，掃描范圍200nm-卯0nm，可見在220nm235nm處和330腿350nm處出現(xiàn)兩個(gè)最大吸收峰，其中220nm235nm峰是主峰，要比330mn350nm的峰高出一倍，并在343.50nm處測(cè)得酚含量為5%15%。7、組合物中總多糖的苯酚-濃硫酸顯色反應(yīng)及測(cè)試取少量組合物用純水lml溶解，滴加2滴新鮮配制的5%苯酚試劑，迅速?zèng)_入5ml濃硫酸即呈現(xiàn)糖的棕黃色，再在沸水屮15min，冷卻后經(jīng)H本島津產(chǎn)UV-2401PC紫外可見光光譜儀掃描，掃描范圍200nm-900nm，可見在400nm410nm禾卩480nm490nm出現(xiàn)兩個(gè)最大吸收峰，其中400nm410nm的峰為主峰要比480nm4卯nm出現(xiàn)的吸收峰高約一倍；經(jīng)用葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品為對(duì)照、在485nm處測(cè)試測(cè)得總糖含量為15%30%。8、組合物所做核磁共振氫譜中可見其化學(xué)結(jié)構(gòu)中非糖的烷烴或/和含氧烷烴部份占25%40%。9、組合物0.5g用水溶解加(Ug碳酸鈉于8(TC反應(yīng)一個(gè)小時(shí)，用乙酸中和至PH屮性后。在高效液相色譜儀的C-18反相柱室溫條件下層析時(shí)，在保留時(shí)間為2.352.6分鐘和保留時(shí)間為3.63.9分鐘出現(xiàn)2個(gè)特征峰，有時(shí)還會(huì)在這兩個(gè)特征峰之間出現(xiàn)其它峰；當(dāng)流動(dòng)相中有機(jī)溶媒含量變化時(shí)這兩個(gè)特征峰的保留時(shí)間幾乎不發(fā)生變化或變化很小、但該峰的峰高卻隨流動(dòng)相中有機(jī)溶媒含量的增加而增加是其重要鑒別特征；這些峰可供作該總核糖苷蛋白體類成份的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和含量測(cè)定。10、各種劑型的制備實(shí)施例如下10.1.針劑將實(shí)施例提取分離得到的藥物精制品200g用0.9。/c)氯化鈉注射液2000ml溶解后用離心機(jī)離心5分鐘(4000r/min)，將離心后所得上層清液經(jīng)0.5um濾膜密封過濾于已滅菌的潔凈容器中，經(jīng)灌封機(jī)灌裝于注射劑用安瓿中，視需要分別分裝成lml/支的IOOO支、O.lg/支，2ml/支的450支、0.2g/支，再經(jīng)鉆60照射滅菌即得注射劑。10.2.粉針劑將實(shí)施例提取分離得到的藥物精制品200g用蒸餾水50ml溶解后經(jīng)離心機(jī)離心5分鐘(4000r/min)，將離心后所得上層清液經(jīng)0.5um濾膜密封過濾于己滅菌的潔凈容器中，經(jīng)噴霧干燥機(jī)噴干成藥粉，再經(jīng)灌封機(jī)灌封在安瓿中，再經(jīng)鈷60照射滅菌即可制成2ml的粉針劑，共計(jì)2000支，100mg/支。使用吋用滅菌注射用水溶解后使用。10.3.氣霧劑取4g藥物精制品加入0.9。/。氯化鈉注射液100ml溶解、離心、過濾丁潔凈的10ml裝氣霧劑瓶中，即制成10支氣霧劑，200mg/支。可作為口腔抗病毒的消毒劑。10.4.含片劑取按實(shí)施例1制得的藥物精制品100g與片劑的敷料、香料、矯味劑等.起用壓片機(jī)制成含片2000片50mg/片?？勺鳛榭谇豢共《镜南緞?、保健食品或抗病毒功能性食品。10.5.膠囊劑取按實(shí)施例1制得的藥物真空千燥后研成粉狀的精制品100g在無菌條件下，灌裝成000粒膠囊，100mg/膠囊?？捎糜谥委煾鞣N病毒病，還可作為口腔抗病毒的消毒劑、保健食品或抗病毒功能性食品。10.6.微囊劑取按實(shí)施例l制得的經(jīng)過精制處理的藥物干粉3g使混懸于3.6g液狀石蠟中;再另取阿拉百膠10g加入蒸餾水200ml，待溶解后煮沸半小時(shí)以破壞氧化酶，將溫?zé)岬囊籂钍炞⑷氚⒗倌z液中，于組織搗碎機(jī)中乳化12分鐘，制成水包油乳劑。再取明膠10g加入蒸餾水200ml，置于6(TC水浴上溶解，并與h述阿拉百膠液混合于1000ml燒杯中，維持膠液在45"C5(TC，慢速攪拌。用新鮮配制的5%醋酸溶液5ml加至膠液中，調(diào)節(jié)溶液的PH值至約為4.，產(chǎn)生凝聚作用。成囊后注入蒸餾水750ml，再移至冰浴中冷卻，降溫至5l(TC，使明膠囊膜凍凝。這時(shí)的微囊呈球狀。再加37。/。的甲醛7ml進(jìn)行固化。攪拌15分鐘，使微囊定型。然后用20%的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)囊液至PH8.0左右。于低溫?cái)嚢鑜小時(shí)后，用離心機(jī)濾過，洗滌至中性無甲醛味。再加入囊重3%的硬脂酸鎂作稀釋劑，混合均勻后過16目篩，再5(TC真空干燥，得此藥物的微囊劑，得率72,2%，計(jì)16.6g微囊，180mg/g。另外還可制成微丸、滴丸等。10.7.滴鼻劑將按實(shí)施例l提取分離得到的藥物精制品2g用0.9c/。氯化鈉注射液100ml溶解后用離心機(jī)離心5分鐘(4000r/min)，將離心后所得上層清液經(jīng)0.5"m濾膜密封過濾于已滅菌的潔凈塑料眼藥水瓶中分裝成10支滴鼻劑，200mg/支。10.8.膜劑取按實(shí)施例1制得的藥物精制品30g、氮酮0.3ml加水100ml溶解后離心、經(jīng)0.5um濾膜過濾于潔凈容器內(nèi)，加入PVA(05-88)19.5g適當(dāng)加熱攪拌使其溶解，潔凈條件下在平板玻璃上涂成寬100mm、長(zhǎng)約100mm、厚約O.lmm的藥膜。再將寬約100mm、長(zhǎng)100mm、厚約0.05mm的避光包衣薄膜在藥膜卜.卜兩面各覆一層作為包衣膜，然后封裝成膜劑。其劑量為0.3g/cm2,臨用時(shí)按需要及其劑量剪切使用。10.9.膠漿劑:取白芨膠質(zhì)(中等粉)2g分裝于10個(gè)15ml的十燥玻璃瓶中，各加入甘油2ml作分散齊IJ，振搖分散均勻后，另取氯仿水100ml加入3g藥物精制品攪拌使其溶解，離心后經(jīng)0.5lim濾膜分別過濾于分散均勻的白芨膠質(zhì)玻璃瓶中，猛烈振搖，得藥物膠漿劑，200mg/瓶。10.10.水劑或滴鼻液:取按實(shí)施例1制得的精制處理的藥物干粉10g使溶于250ml水中，即可分裝成25瓶水劑，400mg/瓶。10.11.涂劑本品的干浸膏粉末可制成涂劑。10.12.膜劑取按實(shí)施例1制得的藥物精制品30g、氮酮0.3ml加水100ml溶解后離心、經(jīng)0.22ixm濾膜過濾于潔凈容器內(nèi)，加入PVA(05-88)19.5g適當(dāng)加熱攪拌使其溶解，潔凈條件下在平板玻璃上涂成寬100mm、長(zhǎng)約100mm、厚約O.lmm的藥膜。再將寬約100mm、長(zhǎng)100mm、厚約0.05mm的避光包衣薄膜在藥膜上下兩面各覆一層作為包衣膜，然后封裝成膜劑。其劑量為0.3g/cm2，臨用吋按需要及其劑量剪切使用。10.13、液體口香糖在水劑中加入香料、矯味劑等制成液體口香糖，可作為口腔抗病毒消毒劑、抗病毒保健食品或功能性食品等。10.14.口香糖100g口香糖膠、O.lml薄荷油香料、戊糖lg作為矯味劑等制成口香糖可作為口腔抗病毒消毒劑、抗病毒保健食品或功能性食品等。11、組合物作為藥物應(yīng)用的安全性11.1、小鼠口服給藥的急性毒性實(shí)驗(yàn)組合物為總核糖苷蛋白體類成份與繁縷黃酮類按7:3組成(F同)，觀察一次或數(shù)次給小鼠組合物飽和溶液后，試驗(yàn)動(dòng)物所產(chǎn)生的急性毒性反應(yīng)和死亡情況，為臨床用量提供參考依據(jù)。"丄2、試驗(yàn)材料動(dòng)物健康普通級(jí)昆明種小鼠，體重1822g，雌l隹各半，由安徽省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室提供。合格證皖醫(yī)實(shí)動(dòng)準(zhǔn)字01號(hào)。藥物組合物粉末(同上)；使用前用蒸餾水配成所需濃度。11丄3、試驗(yàn)方法組合物粉末的飽和溶液(400mg/ml):取小白鼠12只，禁食1416小時(shí)，體重19-21克，雌雄各半。視性別和體重將動(dòng)物隨機(jī)分為3組，每組4只，組間劑距比1:0,5。各組動(dòng)物分別以0.4ml/10g體重灌胃給予組合物粉的溶液(400rag/ml、200mg/ml、lOOmg/ml),觀察口服受試藥一周內(nèi)，引起實(shí)驗(yàn)動(dòng)物0%和100%死亡的致死劑量和動(dòng)物所表現(xiàn)的癥狀。結(jié)果3組動(dòng)物服藥后，均未發(fā)現(xiàn)有動(dòng)物發(fā)生中毒癥狀和死亡情況，故采用最大給藥量試驗(yàn)。最人給藥量試驗(yàn)(MTD):組合物粉取小鼠20只，雌雄各半，體重1820g。在24小時(shí)內(nèi)，分別給各鼠連續(xù)灌胃給藥兩次(兩次給藥間隔為6小時(shí))，每次灌胃給予組合物粉飽和溶液(400mg/ml)0.8ml/20g，累計(jì)灌月艮1.6ml，即時(shí)起觀察小鼠中毒和死亡情況，連續(xù)觀察7大。11丄4、試驗(yàn)結(jié)果O).試驗(yàn)小鼠體重變化情況樣品組動(dòng)物給藥后一周內(nèi)，均無出現(xiàn)死亡，動(dòng)物的活動(dòng)、精神狀態(tài)、飲食、排便等均未見異常。試驗(yàn)前與試驗(yàn)結(jié)束時(shí)小鼠體重變化分別見表3.:表3.組合物粉急性毒性試驗(yàn)小鼠體重變化(X±S)<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>(2).組合物粉的最大給藥量計(jì)算小鼠最大耐受量組合物飽和液每毫升含組合物粉400毫克，小鼠平均體重為20g，每次灌胃容積0.8ml，共計(jì)2次。小鼠日服組合物粉最大耐受量=1.6mlx0.4g/ml/0.02kg=32g/kg安全限度以成人平均體重60kg為標(biāo)準(zhǔn)，組合物粉的日用量為lg;小鼠平均體重為20g，日最大用藥量為1.6mlx0.4g/ml，安全限度二0.64g/20g+lg/60000g=1916.17(倍)11丄5、結(jié)論上述數(shù)據(jù)表明組合物口服給藥的動(dòng)物體內(nèi)急性毒性試驗(yàn)未見有明顯毒性等，因此組合物是一種很安全的天然藥物。組合物小鼠口服給藥，最大耐受量為32g/kg，較本發(fā)明人曾在CN1377680A及CN1498630A兩份專利中公開的口服給藥最大耐受量為11.25g/kg更好約3倍，相當(dāng)于臨床給藥日劑量的1916.17倍。實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明組合物在動(dòng)物口服給藥條件下未產(chǎn)生明顯毒性反應(yīng)，實(shí)驗(yàn)觀察期間樣品組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體重自然增長(zhǎng)，活動(dòng)、精神狀態(tài)、飲食以及排便等也未見明顯改變，表明組合物毒性較低，按擬定臨床劑量服用是安全的。12、組合物的一般藥理實(shí)驗(yàn)及其結(jié)果12.1、對(duì)小鼠和大鼠精神神經(jīng)系統(tǒng)的影響和對(duì)小鼠入睡個(gè)數(shù)的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)論(1)組合物滴鼻劑0.67g/kg，0.33g/kg，0.16g/kg三個(gè)劑量組對(duì)小鼠戊巴比妥鈉閾下睡眠劑量無協(xié)同作用，與戊巴比妥鈉組比較無顯著差異(P>0.05)，提示組合物滴鼻劑對(duì)小鼠無催眠作用。(2)組合物滴鼻劑0.67g/kg，0.33g/kg，0.16g/kg各劑量組在給藥后不同時(shí)間段對(duì)小鼠的自發(fā)活動(dòng)計(jì)數(shù)，與對(duì)照組比較無顯著性差異(P〉0.05)，提示組合物滴鼻劑對(duì)小鼠的中樞神經(jīng)系統(tǒng)無影響。(3)組合物滴鼻劑0.33g/kg，0.16g/kg，0.08g/kg各劑量組在給藥后不同時(shí)間段大鼠轉(zhuǎn)棒掉落次數(shù)，與對(duì)照組比較無顯著差異(P〉0.05)，提示組合物滴鼻劑對(duì)大鼠的行為沒有影響。綜上所述，組合物滴鼻劑對(duì)大鼠、小鼠的正常行為活動(dòng)沒有影響，與閾下睡眠劑量的戊巴比妥鈉無協(xié)同作用，表明組合物滴鼻劑在受試劑量范圍內(nèi)對(duì)動(dòng)物的精神神經(jīng)系統(tǒng)無明顯影響。12.2、組合物對(duì)麻醉犬心血管及呼吸系統(tǒng)的影響12.3、實(shí)驗(yàn)結(jié)論組合物0.67g/kg，0.33g/kg，0.16g/kg低、中、高劑量組對(duì)受試麻醉犬的血壓無明顯影響，與對(duì)照組比較無顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。二個(gè)劑量組對(duì)受試麻醉犬的心率、心電圖無明顯影響，與對(duì)照組比較無顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。組合物三個(gè)劑量組對(duì)受試麻醉犬的呼吸頻率及幅度無明顯影響，與對(duì)照組比較無顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。13、組合物作為抗病毒藥物應(yīng)用的實(shí)施13.1、組合物具有更好的廣譜抗呼吸道病毒效能13丄1、小鼠口服組合物體內(nèi)抗流感病毒的實(shí)驗(yàn)研究13丄1.K組合物組合物系純中藥提取物，為研究其抗流感病毒的作用，采用流感病毒感染小鼠病毒性肺炎模型，對(duì)口服組合物體內(nèi)抗流感病毒作用進(jìn)行了研究。本發(fā)明人己在CN1377680A及CN1498630A兩份專利中公開了從繁縷屬植物繁縷或其它一種繁縷屬植物中提取的分子結(jié)構(gòu)中含硫元素的總有機(jī)酚酸及其糖昔類或具苯甲酰、桂皮酰結(jié)構(gòu)的酚類即總黃酮及其糖苷類等大極性化合物的組合物作為抗病毒藥物的應(yīng)用，包括細(xì)胞試驗(yàn)證明組合物能對(duì)分屬RNA類的流感病毒、副流感病毒、鼻病毒、?？虏《?、皰疹病毒和屬于DNA類的腺病毒等兩大類呼吸道病毒有較強(qiáng)的抑制作用，特別是對(duì)流感病毒、副流感病毒及腺病毒3具有強(qiáng)大的抑制，因此具有獨(dú)特的廣譜抗病毒性能。其滴鼻劑在小鼠動(dòng)物體內(nèi)抗流感病毒FM,的試驗(yàn)結(jié)果顯示50%小鼠保護(hù)率(ED5。)為0.51mg/kg，體內(nèi)治療指數(shù)高達(dá)4500以上證明組合物具有強(qiáng)大的抗流感病毒作用。組合物口服給藥在小鼠動(dòng)物體內(nèi)抗流感病毒FMt的試驗(yàn)結(jié)果，由亍口服給藥后藥物受消化道及肝臟首過效應(yīng)的影響等，因此其治療指數(shù)低于滴鼻劑給藥的治療指數(shù)是」K常的，并在保持臨床效果的同時(shí)使用更方便。13丄1.2、材料與藥物13丄1.2.1、動(dòng)物昆明種小鼠，體重1822g，雌雄各、h，雌性未孕。13丄1.2.2、藥物受試藥組合物干粉(同上)。試驗(yàn)動(dòng)物各給藥組劑量為128mg/kg、64mg/kg、32mg/kg和16mg/kg(按體表面積計(jì)算)，分別相當(dāng)于人臨床日用量的6倍、3倍、2倍和1倍。陽(yáng)性對(duì)照藥雙黃連口服液，哈藥集團(tuán)三精藥業(yè)有限公司產(chǎn)品，規(guī)格10ml/支，批號(hào)03051841，試驗(yàn)動(dòng)物給藥劑量為9ml/kg(按體表面積計(jì)算)，相當(dāng)于人臨床日使用量的9倍。利巴韋林，四川美達(dá)康藥業(yè)有限公司產(chǎn)品，規(guī)格100mg/片，批號(hào)030212。試驗(yàn)動(dòng)物給藥劑量為106mg/kg(按體表面積計(jì)算)，相當(dāng)于人臨床日使用量的9倍。以上藥物均在使用前以蒸餾水配制成所需濃度。13丄1.2.3、病毒流感病毒甲1型鼠肺適宜株(FM。，引自國(guó)家流感中心，由本所病毒研究室傳代保存毒株。血凝效價(jià)E4:1280。13丄1.3、方法與結(jié)果13丄1.3.1、FMi的增毒與保存取9日齡雞胚尿囊腔接種FMi毒種液，34'C常規(guī)培養(yǎng)，48小時(shí)收集尿囊液。用微量血凝法收集血凝效價(jià)>1:1280的尿囊液，小管分裝，置-70。C冰箱備用。13丄1.3.2流感病毒鼠肺適應(yīng)株毒力的測(cè)定(LD50)取普通級(jí)昆明種小鼠30只，體重1822g，雌雄各半，雌性未孕。視體重和性別將小鼠分層隨機(jī)分為5組，每組6只，其中雌雄各3只。在無水乙醚淺麻醉下，用FMi鼠肺適宜株流感病毒液50ul/只滴鼻感染小鼠，各組小鼠感染病毒的稀釋度分別為l、10"、10'2、10—3、l(T4。小鼠感染病毒后，逐日觀察和記錄各組動(dòng)物死亡數(shù)，連續(xù)觀察14天。根據(jù)各組動(dòng)物死亡總數(shù)，按Reed-Muench法計(jì)算小鼠感染病毒的半數(shù)致死量(LD5())。結(jié)果見表4.動(dòng)物死亡百分率計(jì)算表表4.動(dòng)物死亡百分率計(jì)算表病毒活鼠死鼠累積和死亡比例死亡百分率稀釋度活鼠死鼠感染數(shù)/死亡數(shù)106011"1/11*100%io-13355/862.5%10-242722/922.22%10-3601300/130%10—4601900/190%*分母為感染小鼠總數(shù)(包括死、活鼠)A分子為死亡小鼠數(shù)從表8可見各稀釋度感染小鼠的死亡率分別為100%、62.5%、22.22%、0%和0%。，能使半數(shù)感染小鼠死亡的稀釋度應(yīng)在10"1(^之間并計(jì)算LDso值。200710131467.X說明書第16/25頁(yè)第一步按公式距離比例二>50%死亡百分率-50/>50%死亡百分率_<50%死亡百分率，將表中與LD5o值上(55%)和下(22%)相鄰的數(shù)代入公式，求得距離比例數(shù)=62.5-50/62.5-22.22=0.31第二步將>50%動(dòng)物死亡的病毒稀釋度之對(duì)數(shù)，加上距離比例數(shù)，再乘以稀釋系數(shù)的對(duì)數(shù)，即求得LDs。值。>50%動(dòng)物死亡的病毒稀釋度之對(duì)數(shù)為10"LD50=1+0.31X1(稀釋系數(shù)10的對(duì)數(shù))=1.31根據(jù)計(jì)算結(jié)果，求得小鼠滴鼻吸入感染FM!的LD5o為10《31。13丄1.3.3、組合物對(duì)流感病毒感染所致小鼠病毒性肺炎的治療作用取普通級(jí)昆明種小鼠80只，體重1822g，雌雄各半。按表1所示劑量，視動(dòng)物性別和體重將小鼠分層隨機(jī)分為8組，每組10只，雌雄各半。在無水乙醚淺麻醉下，以5倍LD5o同批雞胚傳代毒種流感病毒液50ul滴鼻吸入感染7組小鼠，正常對(duì)照組滴入等量生理鹽水溶液。各給藥組動(dòng)物于病毒感染的同時(shí)給予灌胃給藥，每日2次，每次0.4ml/20g體重，連續(xù)給藥6天，正常對(duì)照組及病毒對(duì)照組均灌胃給予等容積蒸餾水。自感染病毒之日起，逐日觀察和記錄各實(shí)驗(yàn)組死亡動(dòng)物數(shù)，連續(xù)觀察14天。以14天內(nèi)每組動(dòng)物死亡的總數(shù)按下列公式計(jì)算死亡率(生存率)、死亡保護(hù)率和平均存活時(shí)間。死亡率(生存率)=存活(死亡)數(shù)/實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)X100。/。；死亡保護(hù)率(％)=(對(duì)照組死亡率一實(shí)驗(yàn)組死亡率)X100%;平均生存日=同組內(nèi)每只動(dòng)物生存日數(shù)相加/實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)；延長(zhǎng)生命率(％)=(實(shí)驗(yàn)組平均存活天數(shù)一對(duì)照組平均存活天數(shù))/對(duì)照組平均存活天數(shù)X100。/。。X2、t檢驗(yàn)比較組間差異。結(jié)果見表5、表6:表5.組合物溶液對(duì)流感病毒感染小鼠死亡保護(hù)率的影響組另u劑量mg/kgXd死亡數(shù)/動(dòng)物數(shù)死亡率%死亡保護(hù)率％正常對(duì)照組一0/12一一病毒對(duì)照組—12/12100一雙黃連口服液9mix610/1283.3316.67利巴韋林片106X68/1266.6733.33組合物液12.5X66/1250.0050.0025.0X64/1233.3366.6750.0X63/1225.0075.00100X62/1216.6783.33正常對(duì)照組一0/12一一20<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>與正常組相比"P〈0.01;與病毒組相比*P<0.05,"P<0.01表5與表6結(jié)果顯示病毒對(duì)照組小鼠基本在病毒感染后5天左右全部死亡，而給予不同劑量的組合物溶液后，均可降低感染小鼠的死亡率，使感染動(dòng)物平均生存日明顯延長(zhǎng)(以128mg/kg、64mg/kg劑量組極為顯著)。其作用在一定范圍內(nèi)，可隨著劑量的加大而增強(qiáng)。與病毒對(duì)照組相比，有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。組合物溶液64mg/kg、128mg/kg劑量組降低感染小鼠的死亡率和延長(zhǎng)其平均生存時(shí)間作用與利巴韋林片相近，明顯優(yōu)于雙黃連口服液組。13.U.3.4、組合物對(duì)流感病毒感染致小鼠病毒性肺炎模型肺病變影響取健康普通級(jí)昆明種小鼠80只，體重1822g，雌雄各半。按表ll所示劑量，視動(dòng)物性別和體重將小鼠分存隨機(jī)分為8組，每組10只，雌雄各半。在無水乙醚淺麻醉卜—，以5倍LD5()同批雞胚傳代毒種流感病毒液50ul滴鼻吸入感染7組小鼠，止:常對(duì)照組滴鼻吸入等量生理鹽水。各給藥組動(dòng)物在病毒感染的同時(shí)分別給予灌胃給藥，每天2次，給藥容積每次0.4ml/20g體重，連續(xù)給藥4天，正常對(duì)照組和病毒對(duì)照組均灌胃給予等容積生理鹽水。感染動(dòng)物隔離喂養(yǎng)，自由攝食，飲水。于末次給藥后1小時(shí)，將動(dòng)物稱體重后固定，剪開胸部皮膚，切斷左腋下動(dòng)脈放血處死動(dòng)物。解剖打開小鼠胸腔，取出全肺，剔除氣管和肺門等淋巴組織后，用濾紙吸干肺臟表面液體，置天平稱重，按肺重除以體重逐個(gè)計(jì)算肺指數(shù)和各組肺指數(shù)抑制率。用t檢驗(yàn)比較組間差異性。留取肺組織標(biāo)本，進(jìn)行組織形態(tài)學(xué)觀察和攝片。結(jié)果見表7.。表7.組合物溶液對(duì)流感病毒感染小鼠致病毒性肺炎肺指數(shù)影響組別劑量動(dòng)物mg/kgXd數(shù)只肺指數(shù)g簡(jiǎn)g肺指數(shù)抑制率％P值正常對(duì)照組100.93±0.13病毒對(duì)照組101.60士0，26"P<0.01組合物溶液16X4101.2歸.20*19.89P<0.0532X4101.22+0.23*23.25P<0.0164X410U6士0.14^25.83P<0.01128X4101.08±0.19**30.25P<0.01雙黃連u服液9mlX4101.32±0.21*17.5P<0.05利巴韋林片106X4101.19士0.10"25.63P<0.01"與止:常組比較；^與病毒組比較由表7結(jié)果可見與正常組相比，病毒對(duì)照組小鼠的肺指數(shù)明顯增加，統(tǒng)計(jì)學(xué)意義極顯著。給予不同劑量的組合物溶液后，感染動(dòng)物肺濕重指數(shù)均明顯低于病毒對(duì)照組(P<0.010.05)，其治療效果可隨著藥物劑量的增加，肺指數(shù)值也相應(yīng)的減少，呈現(xiàn)較好的相關(guān)關(guān)系。組合物溶液128mg/kg、64mg、32mg/kg劑量組動(dòng)物治療效果優(yōu)于利巴韋林片，顯著優(yōu)于雙黃連口服液組。13丄2、口服給藥使用于流感病人的臨床實(shí)際效果取L32g的組合物用1號(hào)膠囊填裝成膠囊劑6粒，每次口服一粒，每天3次，可在1天半內(nèi)治愈一例流感病人，最快的只需半天即可治愈。二年來臨床自用治療病毒流感有100多例次，無論是在流感病程的第幾天，一旦使用丫組合物即可在12兩天左右控制臨床癥狀進(jìn)而達(dá)到治愈流感的目的，并可正常工作和學(xué)習(xí)了；包括服藥后十多分鐘至三十分鐘內(nèi)即可完全消除頭痛，繼而通鼻、消除清鼻涕、眼淚及渾身痛等癥狀，在24小吋至36小吋內(nèi)退燒。越是發(fā)病早期使用效果越好，最快的病例曾在發(fā)病當(dāng)晚(頭疼、渾身痛、39.5°C、流眼淚、鼻涕等)臨睡前用一次藥，僅1粒，第二天早上即正常工作學(xué)習(xí)丫。組合物預(yù)防及治療病毒流感可達(dá)高效甚至特效藥程度。13.2、U服和靜脈注射給藥的動(dòng)物體內(nèi)試驗(yàn)及其結(jié)果還表明組合物可明顯降低動(dòng)物體內(nèi)乙肝病毒DNA，對(duì)肝炎病毒也有明顯抑制效果-13.2.1、藥物組合物棕黃色藥粉用生理鹽水配制。陽(yáng)性對(duì)照藥物拉米夫定由葛蘭素康威制藥公司產(chǎn)品，批號(hào)B008923用生理鹽水配制。13.2.2、肝炎病毒鴨乙肝病毒DNA(DHBV-DNA)強(qiáng)陽(yáng)性血清，-70°(:保存。13.2.3、動(dòng)物1日齡北京鴨，購(gòu)自北京前進(jìn)種鴨動(dòng)物飼養(yǎng)場(chǎng)。13.2.4、試劑:。"P-dCTP購(gòu)自北京福瑞生物技術(shù)工程公司，缺口翻譯藥盒購(gòu)自，洛麥格公司(PromegaCo.);SephadexG-50，F(xiàn)icollPVP購(gòu)自瑞典Pharmacia公司；SDS兩德Merck公司產(chǎn)品；魚精DNA、牛血清白蛋白為中國(guó)科學(xué)院生物物理所產(chǎn)；硝酸纖維素膜0.45pmAmersham產(chǎn)。13.2.5.1、實(shí)驗(yàn)方法鴨乙型肝炎病毒感染法1口齡北京鴨經(jīng)腿脛靜脈注射上海麻鴨DHBV-DNA陽(yáng)性鴨血清，每只0.2ml，在感染后7大取血，分離血清，-70°(:保存待檢。13.2.5.2、藥物治療試驗(yàn)DHBV感染雛鴨7天后隨機(jī)分組進(jìn)行藥物治療試驗(yàn)，每組6只，給藥組分2個(gè)劑量組，口服給藥分別為250mg/kg和500mg/kg，腹腔注射給藥組分別為25mg/kg和50mg/kg組，1天2次，給藥10天。設(shè)病毒對(duì)照組(DHBV)，以生理鹽水代替藥物。陽(yáng)性藥用拉米夫定，LJ服給藥50mg/kg，1天2次，給藥10天。在感染后第7大即用藥前(TO)，用藥第5大(T5),用藥第10大(T10)和停藥后第3天(P3)，自鴨腿脛靜脈取血，分離血清，于-7(TC保存待檢。13.2.5.3、檢測(cè)方法取上述待檢鴨血清，每批同時(shí)點(diǎn)膜，測(cè)定鴨血清中DHBV-DNA水平的動(dòng)態(tài)，按缺口翻譯藥盒說明書方法，用32P標(biāo)記DHBV-DNA探針，并作鴨血清斑點(diǎn)雜交，放射自顯影膜片斑點(diǎn)，在酶標(biāo)檢測(cè)儀測(cè)定OD值(濾光片為490nm)，計(jì)算血清DHBV-DNA密度，以雜交斑點(diǎn)OD值作為標(biāo)本DHBV-DNA水平值。13.2.5.4、藥效計(jì)算13.2.5.4.1、計(jì)算每組鴨不同時(shí)間血清DNAOD值的平均值(X士SD)，并將每組鴨用藥后不同時(shí)間(T5、T10)和停藥后第3天(P3)血清DHBV-DNA水平與同組給藥前(TO)OD值比較，采用配對(duì)t檢驗(yàn)，計(jì)tl、Pl值。分析差異的顯著性，判斷藥物對(duì)病毒感染的抑制效果。13.2.5.4.2、計(jì)算每組鴨用藥后不同時(shí)間(T5、T10)和停藥后第3天(P3)血清DHBV-DNA抑制率，并作圖，比較各組鴨血清DHBV-DNA抑制率的動(dòng)態(tài)。給藥前(TO)OD值一給藥后(T5、TIO、P3)OD值DNA抑制。/。^-X100%給藥前(TO)OD值13.2.2.4.3、將給藥治療組不同時(shí)間DHBV-DNA抑制率分別與病毒對(duì)照組相同時(shí)間DHBV-DNA抑制率比較，采用成組t檢驗(yàn)，作統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)算t2、P2值，分析差異的顯著性，判斷藥效。13.2.2.5、結(jié)果13.2.2.5.1、1日齡北京鴉感染DHBV后，血清DHBV-DNA動(dòng)態(tài)DHBV-DNA感染鴨口服生理鹽水后DHBV-DNA斑點(diǎn)雜交結(jié)果見表1。實(shí)驗(yàn)感染鴨36只血清DHBV-DNA全部陽(yáng)性。病毒對(duì)照組6只雛鴨感染后第7天血清DHBV-DNA全部陽(yáng)性，實(shí)驗(yàn)全程21天內(nèi)血清DHBV-DNA水平感染后基本平穩(wěn)。13.2.2.5.2、陽(yáng)性藥拉米夫定對(duì)DHBV-DNA的影響DHBV感染鴨口服陽(yáng)性對(duì)照藥拉米夫定50mg/kg，1天2次，給藥10天。結(jié)果見表1、表2。配對(duì)分析，給藥第10天(T0)與給藥前(TO)的OD值比較，下降有非常顯著性(PO.01),給藥后對(duì)血清DHBV-DNA抑制率與病毒對(duì)照組，成組分析給藥第10天(T10)有非常顯著性差異(P<0.01)。停藥后3天(P3)無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，有反跳現(xiàn)象。13.2.2.5.3、組合物在DHBV感染鴨體內(nèi)對(duì)鴨血清DHBV-DNA的影響的實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)分口服給藥和腹腔注射給藥兩種，分別選用兩個(gè)劑量組，口服給藥分別為100mg/kg，200mg/kg，1天兩次，給藥10天(BidX10);腹腔注射給藥為15mg/kg，30mg/kg，1天2次，給藥10天(BidX10)觀察藥物對(duì)鴨的毒性和鴨血清乙肝病毒DNA(DHBV-DNA)d的影響。13.2.2.5.3.1、口服給藥實(shí)驗(yàn)表明，組合物大劑量組口服給藥200mg/kg，1天兩次，無毒性，按配對(duì)統(tǒng)計(jì)，200mg/kg組給藥后第5天、第10大，治療組鴨血清DHBV-DNA有非常顯著下降(PO.Ol)。按成組統(tǒng)計(jì)與各自對(duì)照組比較，給藥后第5天，10天和停藥后3天，治療組鴨血清DHBV-DNA均有非常顯著F降(PO.Ol，O.Ol)，其治療指數(shù)為486，并且本品未見停藥后的反跳現(xiàn)象。13.2.2.5.3.2、腹腔注射給藥，大劑量組30mg/kg組，1天兩次給藥10天，按配對(duì)統(tǒng)計(jì)給藥后第5天，治療組鴨血清DHBV-DNA即有非常顯著下降(PO.01)。成組統(tǒng)計(jì)與各自對(duì)照組比較有非常顯著下降(PO.01,0.01)。15mg/kg組，按配對(duì)統(tǒng)計(jì)，停藥后3犬，治療組鴨血清DHBV-DNA有顯著卜'降(PO.01)。按成組統(tǒng)計(jì)與各自對(duì)照組比較，給藥后第5天和停藥后3天，治療組鴨血清DHBV-DNA有顯著下降(PO.01),其治療指數(shù)為1288，未見停藥后的反跳現(xiàn)象?？诜o藥和腹腔注射給藥均未見反跳現(xiàn)象是本品較陽(yáng)性對(duì)照藥拉米夫定等的更好、更重要的優(yōu)點(diǎn)。13.3、組合物的有益效果還可由以卜'2個(gè)報(bào)告和臨床應(yīng)用結(jié)果給出13.3.1、報(bào)告l.細(xì)胞試驗(yàn)證明組合物能有效抑制艾滋病毒-l(HIV-1)結(jié)果體外試驗(yàn)表明組合物具有抗艾滋病毒(HIV-1)的作用，結(jié)果如下.-藥物濃度(mg/ml)0.200.1.00.050.025抑制率(％)98.58%64.3400%23.90%12.11%經(jīng)統(tǒng)計(jì)計(jì)算IC5fl=0.113mg/ml陽(yáng)性對(duì)照藥AZT濃度在lg/ml時(shí)，抑制率為100%。13.3丄2、細(xì)胞徵性試驗(yàn)結(jié)果如下藥物濃度(mg/ml)52.51.250.625細(xì)胞死亡率(％)7240.0414.88013.3丄3、經(jīng)統(tǒng)計(jì)計(jì)算TC5(T3,235mg/ml，故安全指數(shù)(TC5/IC5())為29.09。13丄2、報(bào)告2.細(xì)胞試驗(yàn)證明組合物能有效抑制禽流感H5N1型病毒的結(jié)果13.3.2.1、藥物"組合物"為繁縷提取物。13.3.2.2、病毒禽流感H5N1型13.3.2.3、細(xì)胞人胚肺細(xì)胞13.3.2.4、結(jié)果組合物對(duì)細(xì)胞無毒界限選擇的結(jié)果見表8.:表8.組合物對(duì)細(xì)胞無毒界限選擇(藥物濃度mg/ml)時(shí)間小^\濃度(mg/ml)，每一濃度3支管10mg/ml5mg/ml2,5mg/ml1mg/ml0.5mg/ml24±/3±/3±/3畫/3-/348++/3++/3+/3-/3-/372+++/3+++/3++/3-/3-/396+++/3+++/3+++/3+/3±/3結(jié)果組合物以lmg/ml為無毒濃度13.3.2.5、細(xì)胞試驗(yàn)中組合物對(duì)禽流感H5N1型病毒的抑毒效果見表9.:表9.組合物對(duì)禽流感病毒的抑毒效果時(shí)間hi^^濃度病毒對(duì)照1mg/ml0.5mg/ml0,25mg/ml0.125mg/ml0.0625mg/ml24-/3-/3-/3-/3誦/3++/348畫/3-/3-/3-/3±/3+++/372-/3-/3±/3±/3+/3+++/396-/3-/3±/3+/3++/3+++/3其方法為病毒以100TCID5。為感染量，先感染細(xì)胞單層，3小時(shí)后加藥。13.3.2.6、結(jié)論"組合物"以lmg/ml濃度于體外細(xì)胞培養(yǎng)上有強(qiáng)烈抑制禽流感H5N1型病毒的作用。13.3.3、自用組合物口服給藥臨床治療流感的實(shí)際療效13.3.3.1、方法將組合物制成每片含組合物50mg的"含片"，每小時(shí)含化l片，每天給藥10次，兩天共給藥lg。13.3.3.2、結(jié)果應(yīng)用組合物的"含片"治療11例流感病人的結(jié)果見表10.:表IO.臨床自用給組合物"含片"50mg/次治療ll例流感病人的實(shí)例姓名性別年齡時(shí)間臨床癥狀結(jié)果唐xX男2503.1.10頭及渾身痛,流清鼻涕，39.5°C36小時(shí)后上班高xX女3503.1,25頭及渾身痛,流清鼻涕，39.5°C36小時(shí)后上班林XX女2903.3.17鼻塞流清涕39.8'C,血相不高次日上學(xué)許xX男4804.1.10頭及渾身痛，流清鼻涕，39.5°C次日上班<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>13.3.3.3、結(jié)論組合物臨床給以"含片"治療ll例流感病人，均可在兩天內(nèi)治愈，在最快的僅僅只需要半天即可退燒并消除流感癥狀，從而可以上學(xué)或上班，組合物至少可縮短病毒流感療程5天以上，因此，具有非常好的預(yù)防及治療流感的功能，其療效顯著優(yōu)于英、美的Zanamivir和Oseltamivir等流感病毒神經(jīng)氨酸酶抑制劑，可達(dá)特效藥程度。13.3.4、組合物臨床自用治療單純皰疹和帶狀皰疹的實(shí)際療效13.3.4.1、方法患單純皰疹和帶狀皰疹病人用組合物涂劑不斷涂抹于患處；13.3.4.2、結(jié)果見表ll.:表ll.臨床自用0.5g/25ml的膠漿劑或涂劑治療10例單純皰疹和帶狀皰疹的實(shí)例<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>13.3.4.2、結(jié)論從表16.可見臨床使用組合物治療單純皰疹和帶狀皰疹的病人，其用藥量在0.2g0.5g之間、并可在1至3天內(nèi)止痛、消皰、結(jié)痂從而達(dá)到痊愈，達(dá)到很滿意的療效。其中藥物的濃度及皰疹面積大小與療效有密切關(guān)系。13.3.5、組合物臨床治療小兒腮腺炎的實(shí)施結(jié)果13.3.5.1、方法取組合物制成每片含組合物50mg的"含片"，每小時(shí)含化l片，每天給藥3次，兩天共給藥0.3g。13.3.5.2、臨床自用治療小兒腮腺炎的實(shí)施結(jié)果見表12.:表12.臨床自用給含片50mg/片治療10例腮腺炎兒童的實(shí)例<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>13.3.5.3、結(jié)論組合物臨床治療小兒腮腺炎的實(shí)施結(jié)果可以看出腮腺炎病兒臨床使用組合物的含片50mgX3片/天后、僅僅只需2天左右即可痊愈，可獲特效藥的療效。13.3.6、組合物臨床治療病毒性性病尖銳濕疣的實(shí)際療效13.3.6.1、方法組合物臨床治療病毒性性病尖銳濕疣時(shí)，采用口服和外用相結(jié)合的方法，即臨床給予0.25g/cm2的膜劑并給予含量為O.lg的片劑口服進(jìn)行治療，取得更好的效果。13.3.6.2、療效見表13.:表13.臨床自用給予膜劑和片劑治療7例尖銳濕疣病人的實(shí)例<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>13.3.6.3、結(jié)論組合物臨床應(yīng)用治療病毒性性病"尖銳濕疣"同樣取得令人更為滿意的效果。13.3.7、組合物作為"消毒劑"應(yīng)用于預(yù)防流感、腮腺炎等的實(shí)例。13.3.7.1、方法使用組合物的"消毒劑"如氣霧劑噴霧在口腔中噴霧、滴鼻在鼻腔中滴鼻、口服口香糖或液體口香糖等。13.3.7.2、結(jié)果組合物"消毒劑"預(yù)防流感和腮腺炎效果見表14.:表14.組合物"消毒劑"自用于預(yù)防流感、腮腺炎等的實(shí)例姓名性別年齡時(shí)間生活環(huán)境使用結(jié)果居xX女2703.1.13家中數(shù)人患流感用滴鼻消毒劑后未發(fā)病吳xx男1003.1.22學(xué)校腮腺炎流行用液體口香糖后未感染曾XX女1103.2.15學(xué)校腮腺炎流行用氣霧消毒劑后未發(fā)病郝x女803.11.09學(xué)校腮腺炎流行用滴鼻消毒劑后未發(fā)病桑x男2103.12.24辦公室流感流行用口香糖后未感染方x男4704.01.17單位流感流行用滴鼻消毒劑后未發(fā)病顧XX女904.04.06弟妹均患腮腺炎用氣霧消毒劑后未發(fā)病教女5504,02.21家中數(shù)人患流感用氣霧消毒劑后未發(fā)病龐x男6304.02.27家中數(shù)人患流感用氣霧消毒劑后未發(fā)病蔡XX女1404.11.23班上同學(xué)流感流行用滴鼻消毒劑后未發(fā)病楚XX女2904.12,26朋友間流感流行用氣霧消毒劑后未發(fā)病13.3.7.3、結(jié)論用組合物制成的氣霧劑、滴鼻液、口香糖、液體口香糖等應(yīng)用為預(yù)防呼吸道病毒的"消毒劑"取得令人更滿意的效果。權(quán)利要求1、一種廣譜抗病毒組合物，其特征是從植物繁縷或從其它一種繁縷屬植物提取的一種分子量分布在1,000～100,000、呈深棕黃色粉末的總核糖苷蛋白體類成份的組合物，并具有以下組成及理化性質(zhì)(1)該總核糖苷蛋白體類成份的組合物所含總蛋白中包括有環(huán)亮氨酸-異亮氨酸二肽和環(huán)纈氨酸一酪氨酸二肽在內(nèi)的環(huán)肽，總蛋白部份占該組合物的15％～25％，總肽經(jīng)水解測(cè)得以下19種氨基酸，各氨基酸的含量比例分別為天門冬氨酸12.118％～13.18％、谷氨酸13.036％～18.425％、絲氨酸4.156％～6.19％、組氨酸1.89％～1.946％、甘氨酸8.909％～9.915％、蘇氨酸4.837％～7.129％、精氨酸2.92％～3.677％、丙氨酸6.05％～9.647％、酪氨酸2.596％～2.877％、胱氨酸0.2％～1.89％、纈氨酸5.94％～7.577％、蛋氨酸0.2％～2.09％、苯丙氨酸2.74％～3.738％、異亮氨酸4.28％～5.046％、亮氨酸4.70％～5.53％、賴氨酸5.77％～7.965％、脯氨酸4.61％～8.60％、γ-氨基丁酸1.25％～1.75％及α-氨基-γ-羥基-戊二酸1.04％～1.77％；(2)該核糖苷蛋白體類成份結(jié)構(gòu)中的糖至少包括核糖、葡萄糖、半乳糖及阿拉伯糖，經(jīng)苯酚-濃硫酸法測(cè)得總糖在其化學(xué)結(jié)構(gòu)中占15％～30％，與苯酚-濃硫酸反應(yīng)呈現(xiàn)糖的棕黃色反應(yīng)并在400nm～410nm和480nm～490nm出現(xiàn)兩個(gè)最大吸收峰，其中400nm～410nm的峰為主峰要比480nm～490nm出現(xiàn)的吸收峰高一倍是其鑒別的重要特征；(3)該總核糖苷蛋白體類成份組合物的總核苷酸占5％～10％，包括尿嘧啶、胸腺嘧啶、胸苷、鳥苷、2-氯-腺苷；(4)該核糖苷蛋白體類成份其化學(xué)結(jié)構(gòu)中非糖的烷烴或/和含氧烷烴部份占25％～40％；(5)該含硫總糖肽類的酚性成份其化學(xué)結(jié)構(gòu)中所含硫元素占1～4％，除胱氨酸、蛋氨酸等所含硫外，硫還形成硫酸酯多糖，或/和巰基或/和硫醚或/和硫醇或/和硫-硫結(jié)構(gòu)；(6)該核糖苷蛋白體類成份與三氯化鐵試液顯現(xiàn)酚類的一種深綠茶色反應(yīng)，并在220nm～235nm處和330nm～350nm處出現(xiàn)兩個(gè)最大吸收峰，其中220nm～235nm峰是主峰，要比330nm～350nm的峰高出一倍是其鑒別的另一個(gè)重要特征；其結(jié)構(gòu)中的酚占5％～15％；(7)該核糖苷蛋白體類成份可經(jīng)稀堿反應(yīng)在高效液相色譜儀的C-18反相柱室溫條件下層析時(shí)，在保留時(shí)間為2.35～2.6分鐘和保留時(shí)間為3.6～3.9分鐘出現(xiàn)2個(gè)特征峰，有時(shí)還會(huì)在這兩個(gè)特征峰之間出現(xiàn)其它峰；當(dāng)流動(dòng)相中有機(jī)溶媒含量變化時(shí)這兩個(gè)特征峰的保留時(shí)間幾乎不發(fā)生變化或變化很小、但該峰的峰高卻隨流動(dòng)相中有機(jī)溶媒含量的增加而增加是其重要鑒別特征；這些峰可供作該核糖苷蛋白體類成份的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和含量測(cè)定。(8)性狀該核糖苷蛋白體類成份組合物呈棕色粉末狀，略有苦味，易溶于水呈棕紅色溶液。2、權(quán)利要求1所述的一種廣譜抗病毒組合物，其特征是可從植物繁縷或從以下78種繁縷屬植物中提取雀舌草、褐瓣雀舌草、安徽繁縷、鈍萼繁縷、細(xì)尖繁縷、鵝腸草、沙生繁縷、阿里山繁縷、薄葉阿里山繁縷、北繁縷、短瓣繁縷、長(zhǎng)瓣繁縷、東北繁縷、華繁縷、臺(tái)灣繁縷、厚葉繁縷、皺葉繁縷、大衛(wèi)繁縷、偃臥繁縷、針狀偃臥繁縷、西南繁縷、石竹葉繁縷、二歧聚傘花繁縷、雙歧繁縷、窄葉雙歧繁縷、線葉雙歧繁縷、鋪散繁縷、翻白繁縷、澤繁縷、裸慈異花繁縷、凹脈繁縷、杜氏繁縷、線莖繁縷、線柄繁縷、多花繁縷、禾葉繁縷、疏柔毛禾葉繁縷、變綠禾葉繁縷、江孜繁縷、霞草繁縷、湖北繁縷、興安繁縷、內(nèi)曲繁縷、薄葉繁縷、東繁縷、小花繁縷、柔繁縷、鵝腸繁縷、新沼生繁縷、八蕊繁縷、紅莓繁縷、沼生繁縷、展葉繁縷、柄花繁縷、柄葉繁縷、長(zhǎng)毛繁縷、假石生繁縷、小繁縷、燧瓣繁縷、網(wǎng)脈繁縷、巖繁縷、石生繁縷、抱莖石生繁縷、準(zhǔn)葛爾繁縷、蘇氏繁縷、星毛繁縷、園萼繁縷、擬傘花繁縷、小茸毛繁縷、三型繁縷、土耳其斯坦繁縷、濕地繁縷、傘花繁縷、綠花繁縷、巫山繁縷、五臺(tái)繁縷、云南繁縷或牛繁縷屬植物牛繁縷。3、權(quán)利要求1所述組合物的制備方法1，其步驟包括將植物繁縷或其它一種繁縷屬植物的生藥或鮮草折算成干草，粉碎后用水提取得到水溶液經(jīng)沉淀、離心或過濾后通過預(yù)先已處理好的大孔樹脂柱以吸附所述組合物的成份，用水洗凈大孔樹脂柱，再將大孔樹脂柱加溫至45"C55'C后用同樣溫度的熱蒸餾水洗柱并收集流出的深褐色蒸餾水液，繼用加溫至45°C55°C、濃度在20%35%的低級(jí)醇類或丙酮從樹脂柱上洗脫，收集洗脫得到的棕紅色或暗棕紅色醇液或丙酮液，將此溶液回收醇或丙酮后與收集的深褐色水液合并，濃縮至比重達(dá)0.80至1.00后靜置12小時(shí)，離心去除雜質(zhì)，加濃度為95%的乙醇使溶液中醇或丙酮濃度達(dá)到50%70%，靜置，濾取沉淀物并用3倍體積量的95%乙醇洗滌一次、2倍體積量的丙酮洗滌一次經(jīng)50°C6°C真空干燥或加水溶解成比重為1.001.20的溶液再噴霧干燥即得組合物；低級(jí)醇類包括甲醇、乙醇、丙醇和異丙醇。4、權(quán)利要求1所述組合物的制備方法2，其步驟包括將植物繁縷或其它一種繁縷屬植物的鮮草或鮮干草洗凈、粉碎后提取水溶液，將此水溶液經(jīng)沉淀、離心或過濾后得到液體；將此液體經(jīng)陰離子交換劑柱將所述組合物成份吸附在柱上，用2N氯化鈉溶液將所述組合物成份從柱上洗脫下來，再經(jīng)脫鹽處理、濃縮至比重達(dá)0.80至1.00后靜置12小時(shí)，離心去除雜質(zhì)，加濃度為95%的乙醇使溶液中乙醇濃度達(dá)到50%70%，靜置，濾取沉淀物并用3倍體積量的95%乙醇洗滌12次、2倍體積量的丙酮洗滌12次，經(jīng)50。C60。C真空干燥或加水溶解成比重為1.101.20的溶液再噴霧干燥即得組合物；其中陰離子交換劑柱包括弱陰離子交換樹脂柱和陰離子交換纖維素柱。5、權(quán)利要求1所述組合物的制備方法3，其步驟包括將植物繁縷或其它一種繁縷屬植物的干藥材粉碎后，用510倍體積的水浸提兩次，每次13小時(shí)，合并提取得到的深棕色提取液，減壓濃縮至比重0.70.9,靜置12小時(shí)，濾除沉淀，溶液中加入95%低級(jí)醇類或丙酮使?jié)舛冗_(dá)60%70%，靜置12小時(shí)，濾集析出的沉淀物即得組合物粗品，將此組合物粗品用適量純水溶解后經(jīng)高速離心機(jī)15,000rpm，離心15分鐘，離心后的澄清液先經(jīng)孔徑為0.22um的陶瓷膜處理設(shè)備精濾處理，再經(jīng)切割分子量為2000以上的超濾膜超濾，將經(jīng)超濾去除部分小分子量雜質(zhì)后的溶液濃縮至比重0.70.9，加入低級(jí)醇或丙酮使?jié)舛冗_(dá)85%進(jìn)行二次醇沉，靜置12小時(shí)后吸出上層清液，將沉淀物經(jīng)減壓抽濾近干，及時(shí)先后加適量無水乙醇和丙酮洗滌，抽濾至干，并立即經(jīng)60。C真空干燥即得較純的粉末狀組合物；其中低級(jí)醇為甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇。6、該深棕黃色的總核糖苷蛋白體類成份可與繁縷總黃酮按55%90%比45%10%組成新的組合物。7、權(quán)利要求1所述組合物可制成的藥品劑型如下針劑、粉針劑、氣霧劑、含片或咀嚼片、膠囊、滴丸、微丸、微囊、滴鼻劑或鼻噴劑、膜劑或涂劑、膠漿劑、水劑及口香糖等。8、權(quán)利要求1所述組合物在制備治療艾滋病病毒藥物中的應(yīng)用。9、權(quán)利要求1所述組合物在制備治療流感病毒，包括禽流感病毒的藥物中的應(yīng)用。10、權(quán)利要求1所述組合物在制備治療皰疹病毒藥物中的應(yīng)用。11、權(quán)利要求1所述組合物在制備治療肝炎病毒藥物中的應(yīng)用。12、權(quán)利要求1所述組合物在制備治療腮腺炎病毒藥物中的應(yīng)用。13、權(quán)利要求1所述組合物在制備治療尖銳濕疣病藥物中的應(yīng)用。14、權(quán)利要求1所述組合物在制備抗病毒的消毒劑中的應(yīng)用。15、權(quán)利要求1所述組合物在制備抗病毒的保健品中的應(yīng)用。全文摘要目前全世界都缺乏臨床高效、安全的廣譜抗病毒藥物。我們從植物繁縷或從其它一種繁縷屬植物中用兩種樹脂吸附的方法及一種水醇提取并經(jīng)超濾方法提取制備的一種分子量分布在1,000～100,000、呈深棕色粉末的總核糖苷蛋白體類成份的組合物作為一種更安全、更高效的廣譜抗病毒天然藥物應(yīng)用。該總核糖苷蛋白體類成份化學(xué)結(jié)構(gòu)中總蛋白部份占15％～25％并由包括天門冬氨酸、谷氨酸、絲氨酸、組氨酸、胱氨酸、蛋氨酸、異亮氨酸等17種氨基酸各按其比例構(gòu)成；糖部分包括核糖、葡萄糖、半乳糖及阿拉伯糖，總核苷酸占5％～10％，包括尿嘧啶、胸腺嘧啶、胸苷、鳥苷、2-氯-腺苷。組合物可作為治療艾滋病毒、肝炎病毒、包括高致病性禽流感病毒在內(nèi)的流感病毒、副流感病毒、腺病毒等呼吸道病毒及尖銳濕疣病毒、腸病毒、腮腺炎病毒、單純性皰疹病毒、帶狀皰疹病毒和水痘—帶狀皰疹病毒等病毒病的藥物應(yīng)用且未見毒性，并可制成10多種藥物劑型及保健品等，生產(chǎn)過程中對(duì)環(huán)境不會(huì)產(chǎn)生污染。文檔編號(hào)A61P31/12GK101385762SQ20071013146公開日2009年3月18日申請(qǐng)日期2007年9月10日優(yōu)先權(quán)日2007年9月10日發(fā)明者毅曾,朱耕新,李澤琳,錢裕盛申請(qǐng)人:朱耕新