專利名稱：：一種芒果苷鹽及其制備方法與用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種芒果苷鹽及其制備方法及用途。
背景技術(shù)：
：芒果苷(mangiferin)是從百合科植物知母等植物中提取的天然多酚類化合物，分子式d諷80u,分子量422。其化學(xué)結(jié)構(gòu)如下該成分亦可從漆樹科植物芒果樹、扁桃樹的葉或果實(shí)、樹皮中，或龍膽科植物東北龍膽、川西獐芽菜，或水龍骨科植物光石韋中提取得到。芒果苷的藥理研究表明其具有多種生物活性，如抗氧化、抗腫瘤、抗菌、抗病毒、降糖、抗炎、利膽、免疫調(diào)節(jié)等，其中抗氧化作用被認(rèn)為是芒果苷最核心的活性，其體內(nèi)外抗氧化作用研究結(jié)果表明芒果苷有確切的抗氧化活性，這歸因于它們清除開始參與脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的自由基的能力。如芒果苷像超氧化物歧化酶一樣，10100prno1就能清除由HX/XO和PMS-NADH系統(tǒng)生產(chǎn)的O2、被稱為0"青道夫李好文，鄧家剛，鄧靜.芒果苷國外研究進(jìn)展.廣西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2003，6(4):62—66。盡管芒果苷有廣泛的藥理作用，但因芒果苷幾乎不溶于水，其生物利用度較低，并在藥物的給藥途徑上受到很大限制，故迄今為止尚沒有發(fā)現(xiàn)以芒果苷為活性成分的藥物上市。經(jīng)檢索，現(xiàn)有期刊沒有芒果苷有機(jī)鹽或無機(jī)鹽的報(bào)道。在現(xiàn)已公開的專利文獻(xiàn)中與芒果苷有關(guān)的專利有芒果苷衍生物及其制備方法，以及作為藥物的用途(200510088313.8)公開了一種將芒果苷上的葡萄糖氧化裂環(huán)后經(jīng)還原氧化后形成的衍生物及制備方法。氧化應(yīng)激(oxidativestress)是指機(jī)體內(nèi)氧自由基的產(chǎn)生與清除失去平衡，或外源性氧化劑的過量攝入導(dǎo)致活性氧在體內(nèi)堆積引起細(xì)胞毒性。作為對(duì)自由基氧化應(yīng)激損傷的防御，人體內(nèi)有一套完整的抗氧化防御系統(tǒng)，隨著年齡的增長，體內(nèi)抗氧化系統(tǒng)機(jī)能逐步降低，而氧自由基卻有增無減，自由基生成與清除的失衡狀態(tài)的發(fā)生幾率就大大增加，由此引發(fā)各種疾病。如動(dòng)脈粥樣硬化、冠狀動(dòng)脈硬化、心肌缺血、心絞痛、心肌梗死、心肌炎、腦梗死、腦缺血、腦水腫、顱腦損傷、高血壓腦出血等心腦血管疾??；帕金森氏病、早老性癡呆、阿爾茨海默氏病等祌經(jīng)系統(tǒng)疾病；胃炎、消化性潰瘍、胃癌、病毒性肝炎、肝硬化、肝壞死、脂肪肝、酒精肝、肝纖維化、中毒性肝臟病變、原發(fā)性肝癌、急性胰腺炎等消化系統(tǒng)疾?。簧虾粑栏腥?、支氣管哮喘、呼吸衰竭、成人呼吸窘迫綜合征、阻塞性肺氣腫、慢性肺源性心臟病、肺水腫等呼吸系統(tǒng)疾病；腎小球腎炎、腎中毒性病變、急性腎功能衰竭、慢性腎功能衰竭和腎移植后排斥反應(yīng)等泌尿系統(tǒng)疾?。痪抻准?xì)胞貧血、再生障礙性貧血、急性白血病、淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤等血液系統(tǒng)疾?。惶悄虿?、肝豆?fàn)詈俗冃?、慢性淋巴?xì)胞性甲狀腺炎、甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等代謝內(nèi)分泌疾??；白內(nèi)障、角膜炎、黃斑變性、視網(wǎng)膜色素變性、玻璃體渾濁、青光眼、視神經(jīng)萎縮等眼科疾?。还饩€性皮膚病、灼傷等皮膚??；新生兒窒息、新生兒缺血缺氧性腦病、新生兒肺炎、支氣管發(fā)宵不良等新生兒疾??；流產(chǎn)、胎膜早破、子宮內(nèi)膜異位癥、妊娠高血壓綜合征、子宮頸癌、子宮內(nèi)膜癌等婦產(chǎn)科疾?。荒[瘤；艾滋病等。因此，研究高效低毒的抗氧化劑已成為藥物研發(fā)的熱點(diǎn)白紹蓓，常紅.天然抗氧化維生素對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)保護(hù)作用的研究進(jìn)展.中國全科醫(yī)學(xué)，2004,7(23):1801;楊旭輝，朱敏恒,吳越.植物源性天然抗氧化成分研究進(jìn)展，農(nóng)墾醫(yī)學(xué),2004，26(4):298;陳會(huì)良,顧有方,王月雷.中草藥化學(xué)成份與抗氧化活性的研究進(jìn)展，中國中醫(yī)藥科技,2006,13(1):63等。
發(fā)明內(nèi)容因此，本發(fā)明的目的是開發(fā)溶解性好，藥理活性更好、生物利用度更高的芒果苷衍生物以作為抗氧化劑來輔助治療或治療與氧化損傷密切相關(guān)的疾病。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的具體技術(shù)方案如下-本發(fā)明提供了一種芒果苷鹽為芒果苷與醫(yī)學(xué)上可接受的堿性氨基酸或有機(jī)胺或無機(jī)堿性物質(zhì)中的一種所成的鹽，包括氨基酸鹽、胺鹽、鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽等，優(yōu)選氨基酸鹽、胺鹽，該芒果苷鹽的結(jié)構(gòu)通式如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>R為堿性氨基酸或有機(jī)胺或無機(jī)堿性金屬離子。上述芒果苷鹽不僅解決了芒果苷的溶解性問題，而且提高了芒果苷的藥理活性與生物利用度。本發(fā)明所述的芒果苷鹽制備方法如下將芒果苷加入溶劑中溶解(簡(jiǎn)稱芒果苷溶液)，將堿性氨基酸或有機(jī)胺或無機(jī)堿性物質(zhì)中加入溶劑溶解(簡(jiǎn)稱堿性溶液)，將堿性溶液加入芒果苷溶液中，攪拌至反應(yīng)完全；向反應(yīng)液中加入適量溶劑做為沉淀劑，使產(chǎn)生大量淡黃色沉淀，過濾，沉淀物減壓干燥，得黃綠色或黃色固體。本發(fā)明所述的芒果苷與堿性氨基酸或有機(jī)胺或無機(jī)堿性物質(zhì)的摩爾配比為1:0.5~4。本發(fā)明所述的堿性氨基酸可以選自精氨酸、賴氨酸，其中精氨酸可以選自L-精氨酸、D-精氨酸、D、L-精氨酸。本發(fā)明所述的有機(jī)胺可以選自葡甲胺、叔丁胺等。本發(fā)明所述的無機(jī)堿性物質(zhì)可以選自堿金屬的氫氧化物、堿土金屬的氫氧化物如氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸氫鈉、碳酸鈉、碳酸氫鉀、碳酸鉀、氫氧化鈣、氫氧化鎂等。上述堿性氨基酸或有機(jī)胺或無機(jī)堿性物質(zhì)中，優(yōu)選L-精氨酸。由于精氨酸是一氧化氮(N0)合成的前體，能夠在一氧化氮合酶的作用下生成N0，而NO是體內(nèi)重要生物活性物質(zhì)，參予體內(nèi)的一系列生理、病理過程。故上述芒果苷鹽中，優(yōu)選芒果苷精氨酸鹽。本發(fā)明所述溶劑可以是水、乙醇、甲醇、二甲基亞砜(DMSO)、甘油、丙二醇、二甲基乙酰胺等溶劑中的一種或幾種的混合物。本發(fā)明所述向反應(yīng)液中加入的做為沉淀劑的溶劑可以是無水乙醇、丙酮、異丙醇等溶劑中的一種或幾種的混合物。本發(fā)明提供芒果苷鹽可以與藥學(xué)載體組合，制成藥學(xué)可以接受的各種劑型，包括凍干粉針、粉針劑等注射劑；口服制劑如片劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、顆粒齊IJ、散劑、丸劑、滴丸劑、糖漿劑、口服溶液劑、口服混懸劑等。本發(fā)明還提供芒果苷鹽作為抗氧化劑的用途。所述抗氧化劑可以用于制備以下疾病的輔助治療或治療藥物動(dòng)脈粥樣硬化、冠狀動(dòng)脈硬化、心肌缺血、心絞痛、心肌梗死、心肌炎、腦梗死、腦缺血、腦水腫、顱腦損傷、高血壓腦出血等心腦血管疾病；帕金森氏病、早老性癡呆、阿爾茨海默氏病等神經(jīng)系統(tǒng)疾?。晃秆?、消化性潰瘍、胃癌、病毒性肝炎、肝硬化、肝壞死、脂肪肝、酒精肝、肝纖維化、中毒性肝臟病變、原發(fā)性肝癌、急性胰腺炎等消化系統(tǒng)疾??；上呼吸道感染、支氣管哮喘、呼吸衰竭、成人呼吸窘迫綜合征、阻塞性肺氣腫、慢性肺源性心臟病、肺水腫等呼吸系統(tǒng)疾病；腎小球腎炎、腎中毒性病變、急性腎功能衰竭、慢性腎功能衰竭和腎移植后排斥反應(yīng)等泌尿系統(tǒng)疾??；巨幼細(xì)胞貧血、再生障礙性貧血、急性白血病、淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤等血液系統(tǒng)疾?。惶悄虿?、肝豆?fàn)詈俗冃浴⒙粤馨图?xì)胞性甲狀腺炎、甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼拖等代謝內(nèi)分泌疾??；白內(nèi)障、角膜炎、黃斑變性、視網(wǎng)膜色素變性、玻璃體渾濁、青光眼、視神經(jīng)萎縮等眼科疾??；光線性皮膚病、灼傷等皮膚??；新生兒窒息、新生兒缺血缺氧性腦病、新生兒肺炎、支氣管發(fā)育不良等新生兒疾??；流產(chǎn)、胎膜早破、子宮內(nèi)膜異位癥、妊娠高血壓綜合征、子宮頸癌、子宮內(nèi)膜癌等婦產(chǎn)科疾??；腫瘤；艾滋病等。芒果苷鹽發(fā)揮抗氧化作用的臨床劑量范圍為50-200mg/日/人，給藥途徑可以口服，亦可靜脈給藥。由于該劑量是根據(jù)芒果苷精氨酸鹽輔助治療肝癌的動(dòng)物試驗(yàn)推算而來，故鑒于動(dòng)物與人體之間的差異，疾病之間的差異可以允許臨床實(shí)際用量及給藥途徑有所調(diào)整。另因本發(fā)明獲得的芒果苷鹽水溶性好，可制成注射劑，且生物利用度較高，故作為抗氧化劑皆可采用口服、注射方式給藥。本段對(duì)給藥途徑的論述僅為代表性論述。以下具體實(shí)施方式用以說明本發(fā)明，但并不限于此。具體實(shí)施例方式本發(fā)明所述的芒果苷可以采用市售品(具有相應(yīng)提取設(shè)備的廠家均可以生產(chǎn)，如廣西昌洲天然產(chǎn)物開發(fā)有限公司)，亦可以由知母或芒果葉等植物中提取分離后得到。精氨酸包括L-精氨酸和D-精氨酸均為市售品，氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸氫鈉、碳酸鈉、碳酸氫鉀、碳酸鉀、氫氧化鎂等均采用市售品。制備例h芒果苷的制備取知母飲片100kg置多功能提取罐內(nèi)，加入80%乙醇800升，回流提取1.5小時(shí)，濾出藥液，再加入80%乙醇600升，回流提取1.5小時(shí)，濾出藥液，合并藥液，減壓會(huì)收乙醇至無醇味。取適量藥液，加入預(yù)處理的D101大孔樹脂吸附，去離子水洗至清；再用30%乙醇洗脫，收集洗脫液，將洗脫液濃縮，減壓干燥，即得，經(jīng)高效液相色譜法檢測(cè)，芒果苷純度為95.4%。實(shí)施例l:芒果苷精氨酸鹽的制備稱取芒果苷42.2g(0.1mol)加入80g二甲基亞砜中溶解，稱取L-精氨酸17.4g(0.1mol)加入20g無水乙醇中溶解，將精氨酸溶液攪拌狀態(tài)下緩慢加入芒果苷溶液中，攪拌至反應(yīng)完全，向反應(yīng)液中加入適量無水乙醇，使產(chǎn)生大量淡黃色沉淀，過濾，沉淀物減壓干燥，得黃綠色或黃色固體56.2g，收率94.3%。化合物鑒定MSm/z:595[M-H]+，421[MG-H]+，387，369，351，173[Arg-H]+。13CNMR(DMSO-d6)(Sppm):162.3(C-l)，107.8(C-2),168.3(C-3),93.8(C-4),156.0(C-4a),150.9(C-4b),102.8(C-5)，154.2(C-6),143.8(C-7),108.2(C-8)，lll8(C-8a),101,5(C-8b).179.2(C=O),81.6(C-r),73.0(C-2，),70.8(C-3'),70.5(C-4，),78.1(C-5，)，61.6(C-6，)，175.5(ArgC-l,)，55.7(ArgC-2，)，29.9(ArgC-3，)，25.9(ArgC-4，)，41.9(ArgC-5')，158.9(ArgC-6')。根據(jù)以上波譜數(shù)據(jù)，對(duì)照相關(guān)文獻(xiàn)洪永福，韓公羽.中藥知母有效成分的研究[J].第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，1984;5(增刊)80進(jìn)行結(jié)構(gòu)解析，推斷芒果苷精氨酸鹽是由芒果苷C3位羥基與L-精氨酸分子中C2'氨基以離子鍵結(jié)合形成的。實(shí)施例2:芒果苷精氨酸鹽的制備稱取芒果苷42.2g(0.1mol)加入60%乙醇適量溶解，稱取L-精氨酸52.2g(0.3mol)加入適量80%乙醇中溶解，將精氨酸溶液攪拌狀態(tài)下緩慢加入芒果苷溶液中，攪拌至反應(yīng)完全，向反應(yīng)液中加入適量丙酮，使產(chǎn)生大量淡黃色沉淀，過濾，沉淀物減壓干燥，得黃綠色或黃色固體75.8g，收率80.3%。實(shí)施例3:芒果苷精氨酸鹽的制備稱取芒果苷42.2g(0.1mol)加入40%乙醇適量溶解，稱取L-精氨酸69.6g(0.4mol)加入蒸餾水中溶解，將精氨酸溶液攪拌狀態(tài)下緩慢加入芒果苷溶液中，攪拌至反應(yīng)完全，向反應(yīng)液中加入適量丙酮，使產(chǎn)生大量淡黃色沉淀，過濾，沉淀物減壓干燥，得黃綠色或黃色固體96.2g,收率86.1%。實(shí)施例4:芒果苷賴氨酸鹽的制備稱取芒果苷42.2g(0.1mol)加入甲醇適量溶解，稱取L-賴氨酸29.2g(0.2mo1)加入30g二甲基亞砜中溶解，將L-賴氨酸溶液攪拌狀態(tài)下緩慢加入芒果苷溶液中，攪拌至反應(yīng)完全，向反應(yīng)液中加入適量無水乙醇，使產(chǎn)生大量淡黃色沉淀，過濾，沉淀物減壓干燥，得黃綠色或黃色固體66.7g，收率93.4%。實(shí)施例5:芒果苷葡甲胺鹽的制備稱取芒果苷42.2g(0.1mo1)加入適量二甲基亞砜中溶解，葡甲胺19.5g(0.1mo1),加入30ml乙醇中溶解，將葡甲胺溶液攪拌狀態(tài)下緩慢加入芒果苷溶液中，攪拌至反應(yīng)完全，向反應(yīng)液中加入適量無水乙醇，使產(chǎn)生大量淡黃色沉淀，過濾，沉淀物減壓干燥，得淡黃色固體56.1g，收率90.9%。實(shí)施例6:芒果苷鎂鹽的制備稱取芒果苷42.2g(0.1mol)加入適量二甲基亞砜中溶解，稱取氫氧化鎂3.15g(0.05mol)加入適量甘油中溶解，將氫氧化鎂溶液攪拌狀態(tài)下緩慢加入芒果苷溶液中，攪拌至反應(yīng)完全，向反應(yīng)液中加入適量無水乙醇，使產(chǎn)生大量淡黃色沉淀，過濾，沉淀物減壓干燥，得黃綠色或黃色固體41.5g，收率91.6%。實(shí)施例7:芒果苷鈉鹽的制備稱取芒果苷42.2g(0.1mo1)加入適量二甲基亞砜中溶解，稱取氫氧化鈉4.0g(0.1mol)加入30ml乙醇中溶解，將氫氧化鈉乙醇溶液攪拌狀態(tài)下緩慢加入芒果苷溶液中，攪拌至反應(yīng)完全，向反應(yīng)液中加入適量丙酮，使產(chǎn)生大量淡黃色沉淀，過濾，沉淀物減壓干燥，得淡黃色固體41.2g，收率89.2yo。MSm/z:595[M-H]+，421[MG-H]+，387，369，351，23[Na]+。13CNMR(DMSO-d6)(5ppm):162,3(C-l),107.8(C-2),169.2(C-3),94.2(C-4),156.0(C-4a),150.9(C-4b),102.8(C-5),154.2(C-6)，143.8(C-7),108.2(C-8)，lll.8(C-8a),101.5(C-8b).179.2(C=O)，81.6(C-r),73.0(C-2'),70.8(C-3，),70.5(C-4，)，78.1(C-5，)，61.6(C-6，)。根據(jù)以上波譜數(shù)據(jù)，對(duì)照相關(guān)文獻(xiàn)洪永福，韓公羽.中藥知母有效成分的研究[J].第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，1984;5(增刊)80進(jìn)行結(jié)構(gòu)解析，推斷芒果苷鈉鹽是由芒果苷C3位羥基與鈉離子以離子鍵結(jié)合形成的。實(shí)施例8:芒果苷鉀鹽的制備稱取芒果苷42.2g(0.lmol)加入40%乙醇適量溶解，稱取碳酸氫鉀5.6g(0.1mol)加入100ml乙醇中溶解，將碳酸氫鉀乙醇溶液攪拌狀態(tài)下緩慢加入芒果苷溶液中，攪拌至反應(yīng)完全，向反應(yīng)液中加入適量丙酮，使產(chǎn)生大量淡黃色沉淀，過濾，沉淀物減壓干燥，得淡黃色固體51.2g,收率86.8%。實(shí)施例9:芒果苷精氨酸鹽凍干粉針的制備稱取40g甘露醇，置于適當(dāng)容器內(nèi)，加入200ml注射用水，加針用炭0.2g(0.1%w/v)，加熱至80。C，攪拌30min,0.22pm微孔濾膜過濾，濾液備用。稱取20g芒果苷精氨酸鹽，加注射用水至1000ml，加入硫代硫酸鈉1.0g，攪拌使芒果苷精氨酸鹽完全溶解?；旌厦⒐站彼猁}溶液及甘露醇溶液，補(bǔ)加注射用水至2000ml，檢測(cè)含量及pH值后，用0.22pm微孔濾膜過濾，分裝，裝量為每支含芒果苷精氨酸鹽20mg，冷凍干燥。真空壓塞，軋蓋，貼簽，包裝即得。實(shí)施例10:芒果苷精氨酸片劑的制備稱取實(shí)施例l方法制備的芒果苷精氨酸鹽200g,過80目篩，加入微晶纖維素300g、淀粉600g作為稀釋劑組成制劑配方，混勻，加入粘合劑制軟材，用24目篩制粒，干燥后整粒，加入適量潤滑劑，壓片，制成10000片，包衣，即得，含藥量為20mg/片。實(shí)施例12:芒果苷葡甲胺鹽膠囊的制備稱取按實(shí)施例5方法制備的芒果苷葡甲胺鹽400g，過80目篩，加入羧甲基纖維素300g、預(yù)膠化淀粉300g作為稀釋劑組成制劑配方，混勻，加入粘合劑制軟材，用24目篩制粒，干燥后整粒，裝膠囊，制成10000粒，包衣，即得，含藥量為40mg/粒。實(shí)施例13:芒果苷鈉鹽顆粒的制備稱取按實(shí)施例7方法制備的芒果苷鈉鹽100g，過80目篩，加入羧甲基纖維素300g、預(yù)膠化淀粉100g、蔗糖500g，混勻，加入粘合劑制軟材，用24目篩制粒，干燥后整粒，制成1000g,即得，含藥量為100mg/g。試驗(yàn)例l各芒果苷鹽溶解度的測(cè)定分別精密稱取研成細(xì)粉芒果苷5mg和芒果苷精氨酸鹽100mg，置于25ri2'C50ml蒸餾水中，每隔5分鐘強(qiáng)力振搖30秒鐘；觀察30分鐘內(nèi)的溶解情況。芒果苷仍有可見溶質(zhì)顆粒，其水溶解度小于0.1mg/ml，屬水幾乎不溶物質(zhì)；芒果苷精氨酸鹽則完全溶解。另精密稱取研成細(xì)粉芒果苷精氨酸鹽250mg，置于25'C士2'C50ml蒸餾水中，每隔5分鐘強(qiáng)力振搖30秒鐘觀察30分鐘內(nèi)的溶解情況，芒果苷精氨酸鹽有少量可見溶質(zhì)顆粒。因此芒果苷精氨酸鹽水溶解度大于2mg/ml，屬水微溶物質(zhì)。精密稱取研成細(xì)粉芒果苷鈉鹽100mg，置于25'Ci2'C50ml蒸餾水中，每隔5分鐘強(qiáng)力振搖30秒鐘；觀察30分鐘內(nèi)的溶解情況。芒果苷鈉鹽則完全溶解。另精密稱取研成細(xì)粉芒果苷鈉鹽150mg，置于25'Ci2。C50ml蒸餾水中，每隔5分鐘強(qiáng)力振搖30秒鐘；觀察30分鐘內(nèi)的溶解情況，芒果苷鈉鹽有少量可見溶質(zhì)顆粒。因此芒果苷鈉鹽水溶解度大于lmg/ml，屬水微溶物質(zhì)。精密稱取研成細(xì)粉的芒果苷葡甲胺鹽100mg，置于25'C土2X:50ml蒸餾水中，每隔5分鐘強(qiáng)力振搖30秒鐘；觀察30分鐘內(nèi)的溶解情況。芒果苷葡甲胺鹽完全溶解。另精密稱取研成細(xì)粉芒果苷葡甲胺鹽200mg，置于25'C士2'C50ml蒸餾水中，每隔5分鐘強(qiáng)力振搖30秒鐘；觀察30分鐘內(nèi)的溶解情況，芒果苷葡甲胺鹽有少量可見溶質(zhì)顆粒。因此芒果苷葡甲胺鹽水溶解度大于lmg/ml，屬水微溶物質(zhì)。'試驗(yàn)例2芒果苷精氨酸鹽與芒果苷口服生物利用度比較。1.藥液配制稱取芒果苷適量，加1%羧甲基纖維素鈉溶液混懸，制成20mg/mL混懸液，為樣A;稱取芒果苷精氨酸鹽適量，加1%羧甲基纖維素鈉溶液，配成濃度為20mg/mL溶液，為樣B;稱取芒果苷鈉鹽適量，加1。/。羧甲基纖維素鈉溶液，配成濃度為20mg/mL溶液，為樣C;稱取芒果苷葡甲胺鹽適量，力n1%羧甲基纖維素鈉溶液，配成濃度為20mg/mL溶液，為樣D。2.灌胃給藥方案大鼠禁食16h,自由飲水，分別灌胃給藥樣A、樣B、樣C、樣D，劑量分別為100mg/kg。分別于給藥前5min和給藥后15min、30min、45min、60min、90min、120min、180min、240min、300min、、360min、480min取血，分離血清。3.樣品處理血漿樣品的處理精密吸取血漿便樣品0.2mL，精密加入冷藏的10%三氯乙酸40pL,渦旋3min,12000r/min離心10min,吸取上清液約120pL置于尖底進(jìn)樣瓶中,HPLC自動(dòng)進(jìn)樣。4樣品的測(cè)定4.1儀器1100系列高效液相色譜儀(美國Agilent公司);包括G1312A二元泵,G1313A自動(dòng)進(jìn)樣器，4.2血漿樣品測(cè)定的色譜條件色譜柱:discoverODS柱(250mmx6mm，5pm);流動(dòng)相:甲醇—0.1%H3PO4水溶液(30:70);流速1.0ml/min檢測(cè)波長:254nm柱溫:40。C。4.3結(jié)果表l芒果苷鹽與芒果苷的生物利用度比較<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>上述結(jié)果顯示口服芒果苷鹽血藥濃度(Ctnax)遠(yuǎn)高于口服芒果苷血藥濃度(Cmax)，表明芒果苷成鹽后生物利用度有較大提高。因?yàn)榕R床與動(dòng)物疾病模型中常常通過檢測(cè)血清或組織中的超氧化物歧化酶(SOD)、單胺氧化酶(MAO)、丙二醛(MDA)、還原型谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽過氧化物酶(GPx)等指標(biāo)來評(píng)價(jià)機(jī)體的氧化應(yīng)激狀態(tài)，且許多疾病皆表現(xiàn)出氧化損傷，故我們以肝癌作為疾病代表，以芒果苷精氨酸鹽作為芒果苷鹽的代表，以SOD、MAO、MDA作為抗氧化指標(biāo)代表，來闡明芒果苷鹽的體內(nèi)抗氧化作用。試驗(yàn)例3芒果苷精氨酸鹽體內(nèi)抗氧化作用與輔助治療肝癌的活性評(píng)價(jià)1.受試物按制備例9制備芒果苷精氨酸鹽注射液；芒果苷注射液制備稱取20g芒果苷，加入60%聚乙二醇400至lOOOml，攪拌使芒果苷完全溶解，用0.22pm微孔濾膜過濾，分裝，軋蓋，滅菌，貼簽，即得。2.動(dòng)物Wistar大鼠，SPF級(jí)，雌雄各半，150180g。3.實(shí)驗(yàn)方法-3.1造模按文獻(xiàn)方法，將Walker256細(xì)胞系在1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)，無菌下將細(xì)胞注射到剛斷奶的Wistar大鼠腹腔中長成腹水瘤。再將腹水瘤鼠處死，收集腹水于無菌小瓶中，取腹水細(xì)胞于消毒皮膚后行皮下注射到斷奶大鼠腋下制成實(shí)體瘤，無菌下取瘤組織并將其切成lmmS大小的瘤塊備用。將動(dòng)物于2%戊巴比妥鈉靜脈注射麻醉下切開腹腔，暴露肝臟，用眼科手術(shù)鑷輕輕在肝上打一遂道，將瘤塊植入，壓迫止血，關(guān)腹后靜脈注射lml生理鹽水放回籠中飼養(yǎng)。3.2分組將肝癌大鼠按體重隨機(jī)分為11組，每組10只。分別為模型組、順鉑組、芒果苷精氨酸注射液高中低劑量組、芒果苷精氨酸高中低劑量組與順鉑合用組、芒果苷注射液高中低劑量組與順鉑合用組。按表1所示劑量和給藥方式每閂給藥一次，連續(xù)給藥10天。4.檢測(cè)指標(biāo)末次給藥24小時(shí)后處死，取血，剝?nèi)×鼋M織。4.1瘤重與抑瘤率抑瘤率％=(1-給藥組平均瘤重/模型組平均瘤重)><100%根據(jù)各組抑瘤率，按Burgi修正公式對(duì)聯(lián)合用藥組進(jìn)行療效判斷。艮P:0=聯(lián)合用藥組抑瘤率Z(順鉑組抑瘤率+芒果苷精氨酸組抑瘤率一順鉑組抑瘤率x芒果苷精氨酸組抑瘤率)若q值為0.851.15為單純相加，q〉U5為增強(qiáng)，q<0.85為拮抗。4.2血清學(xué)檢測(cè)1)SOD:黃嘌呤氧化酶法測(cè)定，試劑盒購自南京建成生物工程研究所；2)MAO:化學(xué)比色法測(cè)定，試劑盒購自伊利康生物技術(shù)有限公司；3)MDA:硫代巴比妥酸法測(cè)定，試劑盒購自南京建成生物工程研究所；4)TNF-ot:TNF-a放免測(cè)定試劑盒購自解放軍總醫(yī)院科技開發(fā)中心放免所；5)NK、CD4+/CD8+:采用流式細(xì)胞儀測(cè)定。5.實(shí)驗(yàn)結(jié)果5.1芒果苷精氨酸鹽注射液對(duì)順鉑抑瘤的增效作用實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2。結(jié)果表明，較低劑量的順鉑(0.5mg/kg)肝癌的抑瘤活性較低，抑瘤率只達(dá)24.4%。芒果苷精氨酸鹽注射液只在20mg/kg劑量下表現(xiàn)出較明顯的抑瘤活性，抑瘤率為32.6%。當(dāng)芒果苷精氨酸鹽注射液與順鉑聯(lián)合應(yīng)用時(shí)，抑瘤活性明顯提高，各組與模型組比較具有顯著性差異。芒果苷精氨酸鹽注射液10mg/kg和20mg/kg與順鉑合用時(shí)q值為1.42和1.39,大于1.15，表明芒果苷精氨酸鹽注射液對(duì)順鉑的抑瘤有一定的增效作用。芒果苷精氨酸注射液與芒果苷注射液同劑量組之間比較，前者療效優(yōu)于后者，活性至少提高l倍。5.2芒果苷精氨酸鹽注射液對(duì)肝癌大鼠血生化指標(biāo)的影響試驗(yàn)結(jié)果表明芒果苷精氨酸鹽注射液加順鉑中高劑量組明顯升高肝癌大鼠SOD、NK細(xì)胞、CD4十/CD8+水平，降低肝癌大鼠MAO、MDA、TNF-a水平。芒果苷精氨酸注射液與芒果苷注射液同劑量組之間比較，前者療效優(yōu)于后者，活性至少提高l倍。詳見表3。6結(jié)論芒果苷精氨酸鹽注射液與順鉑聯(lián)用可明顯增強(qiáng)順鉑的抑瘤活性，且芒果苷及其精氨酸鹽皆表現(xiàn)出明顯的抗氧化作用，優(yōu)于芒果苷注射液。試驗(yàn)4芒果苷鹽體外清除超氧陰離子(02、)的作用1材料與方法1.1試劑與儀器黃嘌呤、黃嘌呤氧化酶、氯化硝基四唑氮藍(lán)(NBT)均為Sigma產(chǎn)品。756MC型紫外可見分光光度計(jì)，石英比色皿。1.2樣品溶液配制芒果苷、芒果苷精氨酸鹽、芒果苷鈉鹽、芒果苷葡甲胺鹽皆用1%羧甲基纖維素鈉溶液配制。1.3方法0.1ml不同濃度的樣品溶液加到含有0.4mmoI/L黃嘌呤、0.24mmol/LNBT的pH=8.0的0.1mol/L磷酸鹽緩沖體系中，然后再加入黃嘌呤氧化酶溶液1ml混合均勻。反應(yīng)混合物在37C水浴中反應(yīng)20min。然后加入2ml69mmol/L的十二垸基苯磺酸鈉(SDS)溶液終止反應(yīng)，在560nm下測(cè)其吸光度Ai，以相應(yīng)溶劑代替樣品作為空白對(duì)照，吸光度為Ao。每個(gè)樣品做3次平行樣，取其平均值。02、清除活性按下式計(jì)算O2:Scavenging(%)=(Ai_A0)/Amaxxl00%半數(shù)抑制濃度(ICso)根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算。1.4結(jié)果黃嘌呤一黃嘌呤氧化酶是一組典型的釋放02:的酶反應(yīng)體系。02:可使NBT還原變成甲臢(藍(lán)紫色)，其最大吸收峰為560nm。自由基清除劑可以清除02—-而抑制甲臢的形成，因此通過測(cè)定吸光度減少來求得自由基清除劑對(duì)o、的清除能力。從表3可以看出，各芒果苷鹽及芒果苷皆具有顯著清除0、的能力，且前者優(yōu)于后，即芒果苷鹽活性較芒果苷提高至少1倍。詳見表4。表4芒果苷鹽及芒果苷對(duì)02—'的清除作用芒果苷芒果苷精氨酸鹽芒果苷鈉鹽芒果苷葡甲胺鹽IC50(nmol/L)9.783.784.124.09表2各受試物對(duì)肝癌大鼠抑瘤率的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>注與模型組比較*，P〈0.05;"，PO.Ol。與相應(yīng)化療藥組比較#，P〈。.05;##，PO.Ol。與相同劑量芒果苷精氨酸注射液組比較:A，PO.05;AA，PO.Ol。表3各受試物對(duì)肝癌大鼠血清生化指標(biāo)的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>與模型組比較*，PO.05;"，P<0.01。與相應(yīng)化療藥組比較#,PO.05;,PO.Ol。與相同劑量芒果苷精氨酸注射液組比較:PO.05:aa，p<o.Oi。200710129584.2轉(zhuǎn)溢也被14/14:K權(quán)利要求1、一種芒果苷鹽，其特征在于如下列結(jié)構(gòu)式表示的鹽或相應(yīng)的異構(gòu)體，其中結(jié)構(gòu)式中的R為堿性氨基酸或有機(jī)胺或無機(jī)堿性金屬離子。2、權(quán)利要求1所述的一種芒果苷鹽的制備方法，其特征在于1)將芒果苷加入溶劑中溶解(簡(jiǎn)稱芒果苷溶液)；2)將堿性氨基酸或有機(jī)胺或無機(jī)堿性物質(zhì)中加入溶劑溶解(簡(jiǎn)稱堿性溶液)；3)將堿性溶液加入芒果苷溶液中，攪拌至反應(yīng)完全，獲得反應(yīng)液；4)向反應(yīng)液中加入適量溶劑做為沉淀劑，使產(chǎn)生大量淡黃色沉淀，過濾，沉淀物減壓干燥，得黃綠色或黃色固體。3、權(quán)利要求2所述的一種芒果苷鹽的制備方法，其特征在于，所述的芒果苷與堿性氮基酸或有機(jī)胺或無機(jī)堿性物質(zhì)的摩爾配比為1:0.5~4。4、權(quán)利要求2所述的一種芒果苷鹽的制備方法，其特征在于，所述的堿性氨基酸可以選自精氨酸、賴氨酸，其中精氨酸可以選自L-精氨酸、D-精氨酸、D、L-精氨酸，其中優(yōu)選L-精氨酸。5、權(quán)利要求2所述的一種芒果苷鹽的制備方法，其特征在于，所述的有機(jī)胺可以選自葡甲胺、叔丁胺；所述的無機(jī)堿性物質(zhì)可以選自堿金屬的氫氧化物、堿土金屬的氫氧化物，具體為氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸氫鈉、碳酸鈉、碳酸氫鉀、氫氧化鈣、氫氧化鎂。6、權(quán)利要求1所述的一種芒果苷鹽在制備抗氧化劑藥物中的用途。7、權(quán)利要求6所述的一種芒果苷鹽在制備抗氧化劑藥物中的用途，其特征在于，該抗氧化劑可以用于治療或輔助治療以下疾病動(dòng)脈粥樣硬化、冠狀動(dòng)脈硬化、心肌缺血、心絞痛、心肌梗死、心肌炎、腦梗死、腦缺血、腦水腫、顱腦損傷、高血壓腦出血、帕金森氏病、早老性癡呆、阿爾茨海默氏病、胃炎、消化性潰瘍、胃癌、病毒性肝炎、肝硬化、肝壞死、脂肪肝、酒精肝、肝纖維化、中毒性肝臟病變、原發(fā)性肝癌、急性胰腺炎、上呼吸道感染、支氣管哮喘、呼吸衰竭、成人呼吸窘迫綜合征、阻塞性肺氣腫、慢性肺源性心臟病、肺水腫、腎小球腎炎、腎中毒性病變、急性腎功能衰竭、慢性腎功能衰竭、腎移植后排斥反應(yīng)、巨幼細(xì)胞貧血、再生障礙性貧血、急性白血病、淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤、糖尿病、肝豆?fàn)詈俗冃?、慢性淋巴?xì)胞性甲狀腺炎、甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、白內(nèi)障、角膜炎、黃斑變性、視網(wǎng)膜色素變性、玻璃體渾濁；青光眼、視神經(jīng)蔞縮、光線性皮膚病、灼傷、新生兒窒息、新生兒缺血缺氧性腦病、新生兒肺炎、支氣管發(fā)育不良、流產(chǎn)、胎膜早破、子宮內(nèi)膜異位癥、妊娠高血壓綜合征、子宮頸癌、子宮內(nèi)膜癌、腫瘤、艾滋病。8、一種具有抗氧化作用的藥物，其特征在于該藥物是由權(quán)利要求1所述的芒果苷鹽與藥用輔料組成。9、權(quán)利要求8所述的藥物可以為注射劑型與口服劑型，具體為凍干粉針、粉針劑、片劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、顆粒劑、散劑、丸劑、滴丸劑、糖漿劑、口服溶液劑、口服混懸劑。10、權(quán)利要求8所述的藥物在制備抗氧化劑藥物中的用途。全文摘要本發(fā)明提供了一種芒果苷鹽。具體為芒果苷與醫(yī)學(xué)上可接受的堿性氨基酸或有機(jī)胺或無機(jī)堿性物質(zhì)中的一種所成的鹽。該鹽可以解決芒果苷的溶解性，提高其藥理活性、提高生物利用度，用以治療或輔助治療與氧化損傷密切相關(guān)的疾病。其結(jié)構(gòu)通式如圖，其中R為堿性氨基酸或有機(jī)胺或無機(jī)堿性金屬離子。文檔編號(hào)A61K31/7042GK101108869SQ20071012958公開日2008年1月23日申請(qǐng)日期2007年7月11日優(yōu)先權(quán)日2006年7月21日發(fā)明者徐廣愛申請(qǐng)人:徐廣愛