一種高效利用知母的提取精制方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于中藥及天然藥物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種從知母中同時提取精制高純 度知母黃酮苷（芒果苷、新芒果苷）、知母總皂苷及知母總多糖的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 知母為百合科植物知母（Anemarrhena asphodeloides)的根莖，具有滋陰降火，潤 燥滑腸的功效。作為一種常用的中藥，知母資源越來越寶貴，因此針對知母的高效綜合利用 是保護其資源的有效途徑之一。
[0003] 現(xiàn)代化學研究表明，知母中主要含有黃酮苷類成分（新芒果苷、芒果苷等）和甾體 皂苷類成分（知母皂苷A II、知母皂苷A III、知母皂苷B II、知母皂苷B III等），此外知母中 還含有多糖類成分。
[0005] 現(xiàn)代藥理研究表明，知母具有抗病原微生物、抗血小板聚集、降血糖、解熱、抗炎、 降低轉(zhuǎn)氨酶等多種藥理活性。其中，知母皂苷類成分具有降血糖、治療老年性癡呆、抗血 凝、抗動脈粥樣硬化及抗骨質(zhì)疏松等藥理作用，經(jīng)水解后還形成的菝葜皂苷元，亦是一種十 分重要天然藥物成分，可用于激素等藥物合成的原料藥。而知母中黃酮類成分芒果苷及新 芒果苷等具有降血糖的作用，可用于治療非胰島素依賴型糖尿病，其作用機制為：保護、修 復胰島內(nèi)分泌細胞而增加血清胰島素濃度，并競爭性地抑制小腸上皮a -葡萄糖苷酶的活 性，從而延緩腸道對糖的吸收，起到降糖的作用；還可能通過增加靶細胞胰島素受體數(shù)目， 改善靶細胞對胰島素敏感性，減輕胰島素抵抗，等途徑降低血糖；并且對白內(nèi)障、高血脂等 糖尿病并發(fā)癥有防治作用。而知母多糖有文獻報道，具有免疫調(diào)節(jié)、抗炎等多種活性。
[0006] 目前，已有專利"知母化學成分群提取物及其制備工藝"（【申請?zhí)枴?201310430996. 5)，公開了一種同時分離制備知母三種化學成分群提取物的制備工藝，采用 溶劑法提取后，再經(jīng)大孔樹脂富集、酸水解、有機溶劑萃取及醇沉等方法進行知母總皂苷、 知母阜苷元及知母多糖成分的分離制備。但該方案在實施時存在一個缺陷：由于知母中除 了知母皂苷、知母多糖外，還含有大量的黃酮苷（芒果苷、新芒果苷等），且這些黃酮苷的極 性和知母皂苷相近，都屬中等極性成分，因此，方案中采用75~95%乙醇加熱回流提取時， 極性相近的知母黃酮苷和知母皂苷均會被提取出來，在大孔樹脂上也能同時被吸附和解吸 附，因而采用這一方案分離制備獲得的知母總皂苷中必會含有大量的黃酮苷類成分，從而 影響知母總皂苷的純度。同時，在實施過程中還采用氯仿或乙酸乙酯萃取，有毒有機溶劑的 使用會帶來溶劑殘留而影響其品質(zhì)。
[0007] 專利"一種知母總黃酮提取物及其同時制備知母總黃酮提取物及總皂苷提取物的 方法"（申請?zhí)?01310332999. 5)也公開了一種知母綜合制備方法，與上述制備工藝類似， 采用溶劑回流提取，再通過大孔樹脂分離純化。但實際上，知母黃酮苷和知母皂苷的極性接 近，30%~90%乙醇提取后，采用單一樹脂大孔樹脂（或聚酰胺）為吸附劑，以一定濃度范 圍的乙醇溶液洗脫，獲得知母總黃酮或知母總皂苷或兩者的混合部位。這一方法主要存在 以下兩個問題，一是浪費了知母多糖活性部位，二是知母黃酮苷和知母總皂苷在單一樹脂 上的分離專屬性較差，不能夠獲得真正純度好的有效部位或成分。
[0008] 綜上，目前已有的報道或?qū)＠麑嵤┓桨钢?，均沒有解決高效綜合利用知母的提取 精制方法，方案僅針對其中的一類或兩類成分進行制備，或者分離方案未有考慮到其成分 結(jié)構(gòu)的特殊性，無法達到各部位（活性成分）的高效分離。因此，如何通過綠色、便捷、有效 的方案，綜合制備獲得知母藥材中主要活性部位或成分，是解決知母資源高效利用的關(guān)鍵。
[0009] 從成分極性上看，知母中的三類活性成分具有一定的差異，知母多糖為大極性類 成分，而知母黃酮苷（芒果苷、新芒果苷等）及知母皂苷類成分極性相似，均為中等極性成 分，因此僅從極性上來進行分離顯然是具有一定的困難。但這三類成分的結(jié)構(gòu)差異較大：黃 酮苷類成分含酚羥基，可以與聚酰胺形成氫鍵而被特異性吸附；黃酮苷和皂苷均為糖苷類 成分，可被大孔樹脂吸附；而多糖類成分不具有以上兩類特征，聚酰胺及大孔樹脂均無法將 其吸附。因此，考慮到知母中各類成分的特性及不同樹脂的性質(zhì)，若采用單一樹脂（大孔樹 脂）進行分離，其分離效果往往不太理想，因此可采用聚酰胺_大孔樹脂聯(lián)用分離技術(shù)對知 母中各類型成分進行精制分離，從而獲得不同的活性部位，實現(xiàn)知母資源的綜合利用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0010] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題，是提供一種綜合利用知母的提取精制方法。
[0011] 為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：
[0012] -種高效利用知母的提取精制方法，它包括如下步驟：
[0013] a.取知母藥材，經(jīng)0~50%乙醇提取，減壓回收提取液，再加水使藥液中每毫升含 生藥量〇. 1~I. 〇g，調(diào)節(jié)藥液PH至2~6,依次通過聚酰胺色譜柱和大孔樹脂色譜柱；
[0014] b.知母總多糖制備：收集通過大孔樹脂后的流出液，減壓濃縮至50°C時相對密度 為1. 08~1. 22,加乙醇至醇濃度為50~90%，放置，析出沉淀，濾過，干燥，即得知母總多 糖；
[0015] c.芒果苷和新芒果苷的制備：聚酰胺色譜柱先以1~3倍柱體積去離子水洗脫， 再依次以1~3倍柱體積的10~30%乙醇和40~80%乙醇洗脫，收集10~30%乙醇洗 脫液，減壓回收乙醇，〇~l〇°C冷藏放置，析晶，即得新芒果苷；收集40~80%乙醇洗脫液， 減壓回收乙醇，0~KTC冷藏放置，析晶，即得芒果苷；
[0016] d.知母總皂苷制備：大孔樹脂色譜柱先以1~3倍柱體積去離子水洗脫，再以2~ 6倍柱體積的50~90%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，干燥，即得知母總皂苷。
[0017] 以上所述的高效利用知母的提取制備方法，所用聚酰胺的規(guī)格為30-100目，與知 母藥材的重量比為3 :1~4 ;所用大孔樹脂的類型為非極性或弱極性型大孔樹脂，與知母藥 材的重量比為2 :1~4。
[0018] 以上所述的高效利用知母的提取精制方法，芒果苷和新芒果苷的制備方法為：聚 酰胺色譜柱先以2倍柱體積去離子水洗脫，再依次以2倍柱體積20 %乙醇和60 %乙醇洗 脫，收集20%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮至洗脫液10%體積，4°C冷藏放置，析晶，即 得新芒果苷；收集60%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，4°C冷藏放置，析晶，即得芒果苷。
[0019] 以上所述的高效利用知母的提取制備方法，知母總皂苷的制備方法為：大孔樹脂 色譜柱先以2倍柱體積去離子水洗脫，再以4倍柱體積的70%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液， 減壓回收乙醇，干燥，即得知母總皂苷。
[0020] 以上所述的高效利用知母的提取制備方法，所述減壓回收乙醇的條件為：壓力 為-0? 01 ~-0? 12MPa，溫度為 60 ~80°C。
[0021] 以上所述的高效利用知母的提取制備方法，聚酰胺與知母藥材的重量比為2 :1 ; 大孔樹脂與知母藥材的重量比為1 :1。
[0022] 有益效果：本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下優(yōu)點：
[0023] (1)本發(fā)明的特點在于充分考慮了知母所含化學成分類型特征，并利用聚酰胺對 知母黃酮苷吸附的專屬性、大孔樹脂對知母皂苷的吸附特性以及各類樹脂對知母多糖均不 能吸附的性質(zhì)，建立了知母綜合利用提取分離和精制方案，工藝過程中避免了有毒試劑的 使用，與現(xiàn)有技術(shù)相比更為簡單、綠色和安全。
[0024] (2)本發(fā)明聚酰胺及大孔樹脂可重復使用，因此成本相對較低，適宜于規(guī)模化生 產(chǎn)，可大大提高知母的綜合利用度，節(jié)省中藥資源，產(chǎn)生良好的社會效益和經(jīng)濟效益。
[0025] (3)本發(fā)明工藝路線綠色、簡單，適宜于規(guī)模化生產(chǎn)，所制備的知母黃酮苷（芒果 苷、新芒果苷）、知母總皂苷和知母總多糖的含量較高。
[0026] (4)為了更好地理解本發(fā)明的有益效果，下面用聚酰胺和大孔樹脂吸附實驗作為 進一步的說明。
[0027] a.聚酰胺對不同pH知母提取液中知母黃酮苷、知母皂苷及知母多糖類成分的靜 態(tài)吸附實驗
[0028] 目的：聚酰胺吸附的原理主要是氫鍵吸附