專利名稱：：含有雜質(zhì)人參皂苷Rd的人參皂苷Rb₁的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及中藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種標(biāo)準(zhǔn)的人參皂苷Rb,有效成分。本發(fā)明在于提供一種標(biāo)準(zhǔn)的中藥有效成分，即標(biāo)準(zhǔn)的人參皂苷R^。
背景技術(shù)：
：中藥有效成分是其發(fā)揮藥效作用的物質(zhì)基礎(chǔ)，療效物質(zhì)的清晰與系統(tǒng)全面的質(zhì)量控制是中藥現(xiàn)代化的關(guān)鍵和核心，人用藥物注冊(cè)技術(shù)國(guó)際協(xié)調(diào)會(huì)議規(guī)定凡是大于0.1%的雜質(zhì)都應(yīng)進(jìn)行控制，將中藥的療效物質(zhì)與雜質(zhì)研究清楚，才能保障其質(zhì)量均一、療效穩(wěn)定、安全可控，在藥物上市后，如發(fā)生不良反應(yīng)或副作用時(shí)，可進(jìn)行有效的追蹤根源，有效雜質(zhì)或協(xié)同作用雜質(zhì)應(yīng)該進(jìn)行定量控制，無(wú)效雜質(zhì)應(yīng)該進(jìn)行含量限定，有毒雜質(zhì)或有害雜質(zhì)應(yīng)該進(jìn)一步去除，或者含量限定到對(duì)人體無(wú)害的范圍(比如小于10PPM)，因此，對(duì)中藥有效成分中的雜質(zhì)進(jìn)行深入的研究，具有深遠(yuǎn)的意義，有助于中藥現(xiàn)代化、有助于中藥走向世界，更加有利于人類的身體健康。人參皂苷Rb,主要來源于五加科人參屬人參、三七、西洋參、越南人參、竹節(jié)參，葫蘆科絞股藍(lán)屬絞股藍(lán)、緣果絞股藍(lán)等植物的根、莖、葉、花蕾中；人參皂苷Rb,具有顯著且廣泛的藥理活性，除在心腦血管方面具有很好的藥理活性外，近年來進(jìn)一步研究表明人參皂苷能激活RNA多聚酶，促進(jìn)大腦細(xì)胞和神經(jīng)中樞細(xì)胞的RNA、DNA蛋白質(zhì)，可修復(fù)受損大腦細(xì)胞，使大腦細(xì)胞再生，對(duì)大腦皮層細(xì)胞具有保護(hù)作用，可提高思維能力，改善記憶力，提示人參皂苷Rb,具有促智、抗老年癡呆藥物開發(fā)價(jià)值；在腸內(nèi)某種厭氧菌的作用下，可產(chǎn)生CompandK，簡(jiǎn)稱Rck，而Rck具有明顯的抑癌作用，提示人參皂苷Rb,具有抗癌藥物開發(fā)價(jià)值；小鼠ig人參皂苷Rb,，通過提高雄激素水平，激活No/cGMP通路，而顯著改善小鼠性功能，提示人參皂苷Rb,具有開發(fā)改善性功能藥物價(jià)值。人參皂苷Rb,多采用實(shí)驗(yàn)室方法獲得少量(mg級(jí)至g級(jí))用于科學(xué)研究，比如制備高效液相色譜法、硅膠柱層析等方法，但無(wú)法獲得批量(kg級(jí)以上)人參皂苷Rb,用于成藥開發(fā)與工業(yè)化生產(chǎn)，因此這是人參皂苷Rb,至今難于成藥的原因和難點(diǎn)。申請(qǐng)?zhí)枮?3127664.4的專利文獻(xiàn)"環(huán)保型人參皂苷高獲取量產(chǎn)業(yè)化分離"，該文獻(xiàn)公開了可以得到含量大于95%的人參皂苷RbP采用硅膠柱層析方法，該方法造價(jià)昂貴，難于工業(yè)化生產(chǎn)；該文獻(xiàn)另一主要問題是沒有分析檢測(cè)的方法表明人參皂苷Rh的含量達(dá)到95%，其可信度值得懷疑；申請(qǐng)?zhí)枮?3148803.x的專利文獻(xiàn)"人參皂苷Rb,的制備工藝"，該文獻(xiàn)公開了采用大孔樹脂法+硅膠柱層析的方法+硅膠柱層析的方法得到人參皂苷Rb,，同樣該方法僅適用于實(shí)驗(yàn)室研究，難于實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)；該文獻(xiàn)另一主要問題是得到人參皂苷Rb,沒有純度，也沒有含量測(cè)定的方法；申請(qǐng)?zhí)?200610093610.6"的專利文獻(xiàn)"一種從人參葉中提取分離人參皂苷單體的方法"，該文獻(xiàn)公開了采用大孔樹脂法+硅膠柱層析的方法分離得到不同人參皂苷單體的方法，包括人參皂苷Rbn其主要問題還是沒有純度的要求，沒有含量測(cè)定方法，并且該工藝方法還是采用了柱層析這種復(fù)雜、造價(jià)高、無(wú)法工業(yè)化生產(chǎn)的方法。綜上所述，在得到人參皂苷Rb,有效成分的基礎(chǔ)上，針對(duì)其雜質(zhì)特別是含量較大的雜質(zhì)進(jìn)行研究，得到標(biāo)準(zhǔn)有效成分，具有深遠(yuǎn)的意義。
發(fā)明內(nèi)容基于上述原因，我們的科研人員在"含量大于90X的人參皂苷Rbi，總雜質(zhì)小于等于10%"的基礎(chǔ)上，對(duì)人參皂苷Rb,的有效成分又進(jìn)行了深入的研究，通過創(chuàng)造性的勞動(dòng)，確證了人參皂苷Rb,中含量較大的雜質(zhì)之一是人參皂苷Rd，進(jìn)一步研究，對(duì)人參皂苷Rd進(jìn)行定量控制，得到標(biāo)準(zhǔn)人參皂苷Rb,有效成分，可以直接作為藥物原料在市場(chǎng)銷售，也可以作為藥劑制備的制劑原料使用，這樣，有利于中藥原料的標(biāo)準(zhǔn)化，有利于中藥制劑生產(chǎn)的標(biāo)準(zhǔn)化；同時(shí)，我們科研人員還針對(duì)人參皂苷Rb,的提取純化工藝進(jìn)行研究采用大孔樹脂法，以總皂苷為原料，分離得到人參皂苷Rb,粗品，再通過重結(jié)晶法，得到人參皂苷Rbp該工藝方法簡(jiǎn)單、可以實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)，得到的人參皂苷Rb,成本較低，對(duì)其含量和雜質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)分析，人參皂苷Rb,含量大于等于90X,雜質(zhì)中人參皂苷Rd含量小于等于10%，符合標(biāo)準(zhǔn)人參皂苷Rl^有效成分的要求。本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的。本申請(qǐng)?jiān)谟谔峁┮环N標(biāo)準(zhǔn)的人參皂苷Rb,，即標(biāo)準(zhǔn)的中藥有效成分將有效成分進(jìn)行含量確定，對(duì)雜質(zhì)進(jìn)行物質(zhì)確定和含量確定；本申請(qǐng)的標(biāo)準(zhǔn)人參皂苷有效成分可以作為藥物制劑原料藥使用，在符合藥物制劑要求的基礎(chǔ)上，制備的人參皂苷Rb,藥物制劑可以用于治療人體疾病。本申請(qǐng)的標(biāo)準(zhǔn)的人參皂苷Rb,有效成分為(1)一種人參皂苷Rbp人參皂苷Rb!含量大于等于90X且小于100%，，其特征在于雜質(zhì)包括人參皂苷Rd，雜質(zhì)人參皂苷Rd含量大于O且小于等于10%。(2)—種人參皂苷Rb,，人參皂苷Rb!含量大于等于90X且小于100%,其中雜質(zhì)人參皂苷Rd的含量大于等于0.1%且小于等于10%。(3)—種人參皂苷Rbp人參皂苷Rb,含量大于等于90X且小于100%，其中雜質(zhì)人參皂苷Rd的含量大于等于0.5%且小于等于8.0%。(4)一種人參皂苷Rb,，人參皂苷Rb,含量大于等于90X且小于100%，其中雜質(zhì)人參皂苷Rd的含量大于等于0.5%且小于等于5.0%。(5)—種人參皂苷Rb,，人參皂苷Rl^含量大于等于90X且小于100%，其中雜質(zhì)人參皂苷Rd的含量大于等于0.6%且小于等于3.0°%。(6)—種人參皂苷Rbi，人參皂苷Rb,含量大于等于90X且小于100%，其中雜質(zhì)人參皂苷Rd的含量大于等于1.0%且小于等于2.0%。上述標(biāo)準(zhǔn)有效成分中人參皂苷Rd為雜質(zhì)中含量較大之一，通過科學(xué)實(shí)驗(yàn)將其分離，再通過系列實(shí)驗(yàn)確定其結(jié)構(gòu)。上述標(biāo)準(zhǔn)有效成分可以由人參、三七、西洋參、越南人參、竹節(jié)參，葫蘆科絞股藍(lán)屬絞股藍(lán)、緣果絞股藍(lán)等植物的根、莖、葉、花蕾中得到總皂苷，再經(jīng)過高效液相色譜制備方法進(jìn)行純化得到，也可以由硅膠柱層析進(jìn)行單體分離，高效液相色譜法控制終點(diǎn)得到，等等；本申請(qǐng)上述標(biāo)準(zhǔn)人參皂苷Rb,有效成分也可以由下述方法得到(1)取三七、人參、西洋參或絞股藍(lán)提取得到的總皂苷；(2)總皂苷加水溶解，濾過，濾液通過非極性或弱極性大孔吸附樹脂柱，水洗、40%乙醇洗脫，洗脫液棄去，再用50。^乙醇洗脫，收集50°/。洗脫液，干燥；(3)干燥物用乙醇、95%乙醇、正丁醇或甲醇溶解，濾過，濾液加入或者不加入有機(jī)溶劑，放置析出，濾過、千燥，得到人參皂苷Rtv上述步驟(1)中的總皂苷可以直接由市場(chǎng)購(gòu)買或根據(jù)科技文獻(xiàn)制備；上述步驟(3)得到的人參皂苷Rb,可以重復(fù)步驟(3)的方法；所述三七總皂苷可以通過市售購(gòu)買，或者根據(jù)現(xiàn)有專利文獻(xiàn)或科技文獻(xiàn)制備得到(魏均嫻、陳業(yè)高、曹樹明，三七果梗皂甙成分的研究，中國(guó)中藥雜志，1992，17(外611-613;楊崇仁、王國(guó)燕、伍明珠、等，三七蘆頭的皂甙成分，藥學(xué)通報(bào)，1985，20(6):337-338;董阿玲、鄭俊華、果德安、等，從三七中分離微量成分三七皂苷的方法，中國(guó)中藥雜志，2002，27(10):793-794;歐來良、史作清、施榮富、等，強(qiáng)性大孔吸附樹脂對(duì)三七皂苷的分離純化研究，中草藥，2003，34(10):905-907;章觀德，吸附樹脂法測(cè)定三七及其制劑冠心寧總皂甙，中草藥，1981，12(11):23-25.)。所述大孔樹脂柱為HPD-100、HPD-100A、HPD-300、HPD-400、HPD-400A、HPD-450、DlOl、1300-1、1400或AB-8。所述有機(jī)溶劑為丙酮、乙酸乙酯中的一種或兩種。上述人參皂苷Rb,為活性物質(zhì)制備的單位劑量的藥物制劑。上述人參皂苷Rb,為活性物質(zhì)制備的藥物制劑，其中單位劑量為lmg—5000mg。上述人參皂苷Rb,為活性物質(zhì)制備的藥物制劑，其中單位劑量為5mg—2000mg。上述人參皂苷Rb,在制備治療和/或預(yù)防心腦血管疾病、腫瘤、衰老、記憶力減退藥物中的應(yīng)用。一、檢測(cè)方法實(shí)驗(yàn)方法采用高效液相色譜法進(jìn)行檢測(cè)分析；色譜柱C^反相色譜柱；色譜條件與系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流速1.0ml/min;柱溫25°C;檢測(cè)波長(zhǎng)203nm;理論板數(shù)按人參皂苷Rbt計(jì)應(yīng)不低于2500;以水乙腈體積比=33:67為流動(dòng)相；對(duì)照品溶液的配制精密稱取人參皂苷Rb,對(duì)照品到容量瓶中，加甲醇溶解搖勻，并稀釋至刻度；供試品溶液的配制精密稱取或量取樣品到容量瓶中加甲醇溶解搖勻，并稀釋至刻度；測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各，注入液相色譜儀，采用按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。注本申請(qǐng)人參皂苷Rb,對(duì)照品是法定標(biāo)準(zhǔn)品，購(gòu)買自中國(guó)藥品生物制品鑒定所購(gòu)買。本申請(qǐng)標(biāo)準(zhǔn)人參皂苷Rb,有效成分的檢測(cè)分析取本申請(qǐng)標(biāo)準(zhǔn)人參皂苷Rb,有效成分，按照上述實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行檢測(cè)分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表l:表l人參皂苷Rb,樣品測(cè)定結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>實(shí)驗(yàn)結(jié)論通過上述實(shí)驗(yàn)表明，本申請(qǐng)標(biāo)準(zhǔn)人參皂苷Rbi有效成分中，人參皂苷Rb,含量大于等于90X且小于100%，雜質(zhì)人參皂苷Rd的含量大于0且小于等于10%;人參皂苷Rb,含量大于等于90X且小于100Q/。，雜質(zhì)人參皂苷Rd的含量大于等于0.1%且小于等于10%;人參皂苷Rb,含量大于等于90X且小于100%，雜質(zhì)人參皂苷Rd的含量大于等于0.5%且小于等于8.0%;人參皂苷Rb,含量大于等于90%且小于100%，雜質(zhì)人參皂苷Rd的含量大于等于0.5%且小于等于5.0%;人參皂苷Rb!含量大于等于90%且小于100%，雜質(zhì)人參皂苷Rd的含量大于等于0.60%且小于等于3.0%;人參皂苷Rb!含量大于等于90X且小于100%，雜質(zhì)人參皂苷Rd的含量大于等于1.0%且小于等于2.0%。二、人參皂苷Rd結(jié)構(gòu)確證資料取本申請(qǐng)標(biāo)準(zhǔn)人參皂苷Rb,有效成分，經(jīng)過硅膠柱層析分離，結(jié)合高效液相色譜液法，將含量較大的雜質(zhì)、人參皂苷Rbi分別分離，得到雜質(zhì)單體，進(jìn)行結(jié)構(gòu)確證，確證資料如下白色無(wú)定形粉末，'HNMR(CD3OD):0.88(3H，s，H-19)0.95(6H，s，H-18，H-30)，1.09(3H，s，H-29)，1.36(3H，s，H畫28)，1.64(6H，s，H-26，H-27)，4.45(1H，d，J=7.2Hz，H畫l，)，4.62(1H,d，J=7.6Hz，H-l"，)4.69(1H,d，J=7.6Hz,H-l，，)，5.13(1H，t，J=6.8Hz，H-24)。13CNMR(CD3OD):38.87(C陽(yáng)l)，25.86(C-2)，89.86(C-3),39.18(C-4)，56.17(C-5)，17.85(C-6)，34.48(C國(guó)7)，39.62(C-8)，49.67(C-9)，36.52(C-IO)，30.24(C-ll)，69.85(C-12)，48.40(C-13)，51.10(C-14),29.65(C-15),25.86(C-16)，51.75(C-17)，14.88(C-18)，15.34(C-19)，83.55(C-20)，21.46(C-21)，35.28(C-22),22.83(C-23)，124.46(C-24)，130.89(C-25)，24.45(C-26)，16.54(C-27)，27.01(C-28),15.34(C-29),15.86(C-30),103.18(C-l，)，79.85(C-2，)76.28(C-3，),70.23(C-4，)，76.53(C-5，)，61.47(C-6，)，103.99(C-1")，74.94(C-2")，77.11(C-3"),70.53(C-4")，76.90(C-5，，)，61,17(C-6")，96》0(C-1"，),73.99(C-2，"),76.90(C陽(yáng)3，")，70.53(C-4",),76.50(C-5'"),61.72(C-6'")。各圖譜與文獻(xiàn)W記載的人參皂苷Rd數(shù)據(jù)基本一致。根據(jù)以上分析，結(jié)合文獻(xiàn)對(duì)照，確定該化合物為人參皂苷Rd。參考文獻(xiàn)[l]藤榮偉等，三七皂苷NMR研究II,波譜學(xué)雜志，2002,19(1)，25-32。實(shí)驗(yàn)結(jié)論通過上述實(shí)驗(yàn)表明，本申請(qǐng)含量較大雜質(zhì)之一是人參皂苷Rd。三、藥理實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)l對(duì)狗心肌缺血保護(hù)作用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物Beagle狗，體重7.5-10kg。實(shí)驗(yàn)藥物本申請(qǐng)標(biāo)準(zhǔn)人參皂苷Rb,有效成分；市售人參皂苷Rl^單體(中國(guó)藥品生物制品鑒定所)；血塞通注射液.實(shí)驗(yàn)方法取實(shí)驗(yàn)狗，分為生理鹽水組、血塞通注射液組、本申請(qǐng)標(biāo)準(zhǔn)人參皂苷Rb,有效成分組、市售人參皂苷Rb,單體組，給藥組分別在狗前肢皮下頭靜脈給藥，給藥量每次20mg/kg，生理鹽水組等容不等量，每天給藥1次，連續(xù)給藥3天，給藥第3天后用戊巴比妥鈉25mg/kg靜脈麻醉，氣管插管，接人工呼吸機(jī)加以正壓呼吸，從左側(cè)第五肋開胸，剪開心包，暴露心臟，將心包切開緣縫于胸壁，在左冠狀動(dòng)脈前降支分二期結(jié)扎，并緩慢iv利多卡因8mg/kg以防結(jié)扎前可能引起的心室顫動(dòng)，隨后縫合心包及胸壁。心梗后24h，狗經(jīng)戊巴比妥鈉麻醉后處死，迅速取出心臟，切除大血管和脂肪組織，核對(duì)前降支結(jié)扎點(diǎn)的位置，稱全心重，然后切除右心室和左右心房，留下室中隔及左心房，稱得左心室重，從心尖和開始與前降支垂直方向?qū)⒆笮氖仪谐?-3mm厚的肌片，浸于硝基四唑藍(lán)溶液(NBT)中染色30min，剪下缺血區(qū)心肌組織稱重，計(jì)算心肌梗塞范圍，S卩心梗范圍=缺血區(qū)重/左心室重x100。/。，結(jié)果見表4。表4對(duì)狗心室梗塞范圍的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>對(duì)大鼠腦梗塞的保護(hù)作用實(shí)驗(yàn)藥物本申請(qǐng)標(biāo)準(zhǔn)人參皂苷R^有效成分(符合本申請(qǐng)標(biāo)準(zhǔn)有效成分對(duì)雜質(zhì)人參皂苷Rd的限定)；市售人參皂苷Rb,單體(中國(guó)藥品生物制品鑒定所)；血栓通注射液。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SD大鼠，250—300g，雌雄各半。實(shí)驗(yàn)方法取大鼠，水合氯醛300mg/kgip麻醉，頸部切口，分離并結(jié)扎右側(cè)頸總動(dòng)脈，縫合肌肉皮膚后，右側(cè)位固定，在右耳和右眼外眥連線中點(diǎn)切開皮膚，分離顳肌，暴露顴突及顳骨,在顴突的頭端12mm處開一約3"mm的骨窗，暴露大腦中動(dòng)脈(MCA)，將MCA灼斷，縫合切口。參考Bederson法給藥，處死動(dòng)物，取右大腦半球，切成5片，置于2g/LNPT中37"C溫育15min染色,仔細(xì)挖取并稱重未被染成蘭色的白色梗塞腦組織，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表3。<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>實(shí)驗(yàn)3對(duì)大鼠肝腫瘤抑制的比較實(shí)驗(yàn)動(dòng)物大鼠，150g—180g，雌雄不分。實(shí)驗(yàn)藥物生理鹽水；本申請(qǐng)標(biāo)準(zhǔn)人參皂苷Rb,有效成分；市售人參皂苷Rb,單體(中國(guó)藥品生物制品鑒定所)；艾迪注射液(貴州益佰制藥股份有限公司)實(shí)驗(yàn)方法取大鼠分為生理鹽水組、市售艾迪注射液組、本申請(qǐng)標(biāo)準(zhǔn)人參皂苷Rb,有效成分組、市售人參皂苷Rb,單體組，作Ww的肝內(nèi)接種，接種7天后，用戊巴比妥鈉按35mg/kg的劑量腹腔注射麻醉，固定，剖腹暴露肝，測(cè)量肝上腫瘤表面最大徑(a)和最小徑(b)，按(a*b2)/2=V(腫瘤體積)。分離胃、十二指腸動(dòng)脈、肝總動(dòng)脈和肝固有動(dòng)脈，結(jié)扎胃、十二指腸動(dòng)脈遠(yuǎn)端，以銀夾阻斷肝總動(dòng)脈，于手術(shù)放大鏡下在胃十二指腸動(dòng)脈上切口并插入外徑0.3mm導(dǎo)管后再送入肝固有動(dòng)脈，然后按實(shí)驗(yàn)分組分別注入受試藥物(給藥量相同)，術(shù)后拔管結(jié)扎胃十二指腸動(dòng)脈，放開肝總動(dòng)脈銀夾，再縫合切口，將大鼠置于動(dòng)物室待蘇醒，繼續(xù)詞養(yǎng)觀察，手術(shù)后8天，按上法檢測(cè)腫瘤體積，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表4:表4各組制劑對(duì)腫瘤的抑制比較17^給藥前腫瘤體積給藥后腫瘤體積體積變化百分?jǐn)?shù)~~~組別mmmm%生理鹽水組4.3U0.576.15±0.79+42.65±3.28市售艾迪注射液4.24±0.613.14±0.32—25.92±3.02**市售人參皂苷Rb,組4.29±0.542.57±0.19—40.09±6.52**本申請(qǐng)標(biāo)準(zhǔn)人參皂苷Rb,組4.38土0.682.35±0.07—46.44±7.71**#注與生理鹽水組比較"PO.01;與陽(yáng)性對(duì)照組市售艾迪注射液組比較共P0.05實(shí)驗(yàn)4物理、化學(xué)和生物因素均能誘發(fā)癌癥，但人癌發(fā)病原因的80%-90%認(rèn)為是環(huán)境化學(xué)物質(zhì)引起的。對(duì)二乙基亞硝胺(DENA)誘發(fā)大鼠肝癌的抑制實(shí)驗(yàn)動(dòng)物大鼠，120g左右，雌雄不分，。實(shí)驗(yàn)藥物生理鹽水；本申請(qǐng)標(biāo)準(zhǔn)人參皂苷Rb^有效成分；市售人參皂苷Rb,單體(中國(guó)藥品生物制品鑒定所)；艾迪注射液(貴州益佰制藥股份有限公司)實(shí)驗(yàn)方法用含二乙基亞硝胺(DENA)的飲水喂養(yǎng)大鼠，36周得原發(fā)性肝癌，按照實(shí)驗(yàn)3的方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，記錄大鼠存活天數(shù)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表5:<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>注與生理鹽水組比較"PO.01;與陽(yáng)性對(duì)照組市售艾迪注射液組比較弁P0.05注將本申請(qǐng)標(biāo)準(zhǔn)人參皂苷Rb,有效成分與市售人參皂苷Rbi單體進(jìn)行小鼠記憶功能的實(shí)驗(yàn)、抗癡呆實(shí)驗(yàn)、改善性功能實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，本申請(qǐng)標(biāo)準(zhǔn)人參皂苷Rb,有效成分比市售人參皂苷Rb,單體藥理活性好。討論通過上述藥理實(shí)驗(yàn)表明，本申請(qǐng)含有雜質(zhì)人參皂苷Rd的人參皂苷比含量接近100X的人參皂苷Rb,單體藥理活性要好，經(jīng)過我們研究，初步解釋為人參皂苷Rd也是活性成分，同時(shí)也是人參皂苷Rb,的降解產(chǎn)物，二者在進(jìn)入體內(nèi)，除具有相加作用外，還會(huì)具有協(xié)同作用，另外，含有一定量雜質(zhì)人參皂苷Rd的人參皂苷Rb,在藥物代謝方面，能夠促進(jìn)人參皂苷Rbl的吸收，而含量接近100%的人參皂苷Rb,可能是不含有人參皂苷Rd或含量微量，對(duì)人參皂苷Rb,的影響很小，不能產(chǎn)生協(xié)同作用(藥理和藥代等方面)，因此，其藥理活性要比本申請(qǐng)標(biāo)準(zhǔn)人參皂苷Rb,有效成分的藥理活性低。四、劑量篩選實(shí)驗(yàn)對(duì)麻醉大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用實(shí)驗(yàn)方法-取健康SD大鼠，體重240-260g，隨機(jī)分組空白對(duì)照組、假手術(shù)組、模型組、鹽酸地爾硫卓注射液對(duì)照組、人參皂苷Rb,不同劑量組。置于相同環(huán)境預(yù)飼養(yǎng)2天，自由飲食。預(yù)飼養(yǎng)結(jié)束后，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，動(dòng)物稱重，20%烏拉坦按0.6ml/100g腹腔注射，待麻醉滿意后，仰臥固定于鼠板上，氣管插管，接呼吸機(jī)，按1012ml潮氣量，70次/分的頻率給予呼氣，持續(xù)正壓呼吸，吸呼比為1:1。根據(jù)呼吸頻率及深度調(diào)整呼吸參數(shù)。隨后接心電圖機(jī)，測(cè)正常心電圖。剪去胸前手術(shù)區(qū)毛，碘酒消毒，剪開皮膚、皮下組織、胸前肌肉及筋膜34cm，用18#血管鉗沿第三肋間鈍性分離肋間肌3cm長(zhǎng)，打開胸腔及心包膜，記錄心電圖，撐開3、4肋骨，用左手四指托住大鼠右側(cè)胸腔，助手用眼科鑷將胸腺向上推，在左心耳與肺動(dòng)脈圓錐之間找到結(jié)扎標(biāo)志血管左冠狀靜脈，在左心耳下方2mm處用無(wú)創(chuàng)小圓針帶6-0絲線穿線，進(jìn)針深度為11.5mm，寬23mm，穿線后記錄心電圖，經(jīng)尾靜脈給予相應(yīng)藥液，給藥10min后記錄心電圖，并用一帶凹槽的小塑料管墊在結(jié)扎部位，兩端線頭在其上結(jié)扎。結(jié)扎后即刻記錄心電圖，以左室前壁呈紫紺或II導(dǎo)聯(lián)S-T段弓背向上抬高大于O.lmv并持續(xù)0.5h以上為結(jié)扎成功標(biāo)志(S-T段無(wú)改變者淘汰)。結(jié)扎后10min再次記錄心電圖，結(jié)扎30min后剪開結(jié)扎線，實(shí)現(xiàn)再灌注，并記錄再灌注即刻心電圖，清除胸腔內(nèi)積血后逐層縫合胸壁，撤呼吸機(jī)，動(dòng)物恢復(fù)自主呼吸，氣管切口不做處理。再灌即刻、10min、20min、40min、lh、2h、3h分別記錄心電圖。再灌3小時(shí)，經(jīng)腹主動(dòng)脈取血，4000rpm離心10min取血清，采用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)LDH、CK及CK-MB活性，并采用相應(yīng)試劑盒檢測(cè)血清SOD、MDA，解剖取心臟，冰生理鹽水洗去殘血，剪去心房及右心室，立即放入冰箱中冷凍。將心臟在冰箱中冷凍10min后，自心尖向心底平行房室溝方向?qū)⒆笫仪谐上嗟群穸鹊?片，放入1XTTC染液中，37。C染色10min，未壞死區(qū)為暗紅色，壞死區(qū)呈灰白色。數(shù)碼相機(jī)拍照。將壞死區(qū)和非壞死區(qū)分別稱重，計(jì)算壞死區(qū)占左心室重量的百分比，即梗死范圍。梗死范圍(％)=_壞死區(qū)心臟重量_xl00%_壞死區(qū)+非壞死區(qū)心臟重量—_檢測(cè)指標(biāo)分別為，心肌梗死范圍。實(shí)驗(yàn)結(jié)果詳見表6:表6對(duì)結(jié)扎/再通大鼠左冠狀動(dòng)脈前降支所致心肌缺血/再灌注損傷心肌梗死范圍(％)的影響(x±s)組別心肌梗死范圍(°/。)模型組本申請(qǐng)人參皂苷Rb,劑量l本申請(qǐng)人參皂苷Rb,劑量2本申請(qǐng)人參皂苷Rb,劑量3本申請(qǐng)人參皂苷Rl^劑量4鹽酸地爾硫卓注射液25.31±10.976.31±1.63**9.57±2.51**12.46±2.69**16.51±3.74*12.33士1.12"注:與模型組相比，*P<0.05,**P<0.01，***P<0.001。實(shí)驗(yàn)結(jié)論通過劑量篩選實(shí)驗(yàn)表明，本申請(qǐng)人參皂苷Rbl隨劑量增加藥理活性也加強(qiáng)，與很多藥物的藥理活性不同(大部分藥物隨劑量增加而藥理活性會(huì)到達(dá)一個(gè)平臺(tái)期，即劑量再增加而活性不增加)，隨著劑量增加活性一直增加，沒有平臺(tái)期，一直可以到出現(xiàn)毒性為止；經(jīng)過我們劑量篩選實(shí)驗(yàn)和毒性實(shí)驗(yàn)，確定本申請(qǐng)人參皂苷Rbl的單位劑量為lmg—5000mg;優(yōu)選單位劑量為5mg—2000mg(劑量大于5000mg出現(xiàn)毒性反應(yīng)，小于lmg與模型組沒有顯著性差異)。本申請(qǐng)標(biāo)準(zhǔn)人參皂苷Rbt有效成分與現(xiàn)有技術(shù)人參皂苷Rb,("申請(qǐng)?zhí)枮?3127664.4的專利文獻(xiàn)<環(huán)保型人參皂苷Rb,高獲取量產(chǎn)業(yè)化分離>，該文獻(xiàn)公開了可以得到含量大于95X的人參皂苷Rbr等方法得到的)比較具有以下特點(diǎn)1、本申請(qǐng)將人參皂苷Rb,中含量較大的雜質(zhì)之一進(jìn)行的歸屬，確定了其是人參皂苷Rd，進(jìn)一步明確了物質(zhì)基礎(chǔ)，而現(xiàn)有技術(shù)中只是得到了一定含量的人參皂苷RbP沒有進(jìn)行深入的研究，物質(zhì)基礎(chǔ)模糊；2、本申請(qǐng)標(biāo)注人參皂苷Rb,有效成分可以作為藥物制劑的原料，在臨床應(yīng)用中，發(fā)生任何不良反應(yīng)或副作用，因?yàn)槲镔|(zhì)基礎(chǔ)較明確，特別是雜質(zhì)的明確可以在后續(xù)的藥物臨床研究中，明確出藥物本身成分引起的，還是藥物制劑制備過程中引入的無(wú)關(guān)物質(zhì)(比如熱源、污染等因素)造成的，有利于藥物的發(fā)展，而現(xiàn)有技術(shù)中的人參皂苷Rb,雖然是有效成分，但還存在著一定的暗箱，特別是發(fā)生不良反應(yīng)或副作用時(shí)，無(wú)法追索淵源，造成藥物發(fā)展的障礙(比如魚腥草注射液事件)；3、本申請(qǐng)?jiān)谘芯恐?，確定雜質(zhì)人參皂苷Rd屬于有效雜質(zhì)，在一定基礎(chǔ)上對(duì)有效成分人參皂苷Rb,具有協(xié)同作用，屬于有效雜質(zhì)，而現(xiàn)有技術(shù)只是明確了人參皂苷Rb,的含量，對(duì)其余物質(zhì)屬于有效雜質(zhì)、無(wú)效雜質(zhì)或有害雜質(zhì)一無(wú)所知，研究屬于起始階段。四、實(shí)施例實(shí)施例1一種人參皂苷Rh，人參皂苷Rb,含量90.01%，雜質(zhì)含量9.99%，雜質(zhì)包括人參皂苷Rd。匕述人參皂苷作為Rb,藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。實(shí)施例2一種人參皂苷R1^，人參皂苷Rb,含量99.9X，雜質(zhì)含量0.1%，雜質(zhì)包括人參皂苷Rd。上述人參皂苷作為Rb,藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。實(shí)施例3一種人參皂苷Rb,，人參皂苷Rb,含量95.4X，雜質(zhì)含量4.6%，雜質(zhì)包括人參皂苷Rd。上述人參皂苷作為Rb,藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。實(shí)施例4一種人參皂苷Rbp人參皂苷Rb,含量99.12%，雜質(zhì)人參皂苷Rd的含量0.10%。上述人參皂苷作為Rb,藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。實(shí)施例5一種人參皂苷Rbp人參皂苷Rt^含量98.31%，雜質(zhì)人參皂苷Rd的含量0.87%。上述人參皂苷作為Rb,藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。實(shí)施例6一種人參皂苷Rb，，人參皂苷Rl^含量97.35%，雜質(zhì)人參皂苷Rd的含量0.50%。上述人參皂苷作為Rb,藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。實(shí)施例7一種人參皂苷Rb。人參皂苷Rb,含量90.19%，雜質(zhì)人參皂苷Rd的含量8.0%。上述人參皂苷作為Rb,藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。實(shí)施例8一種人參皂苷Rb,，人參皂苷R^含量90.03%，雜質(zhì)人參皂苷Rd的含量8.6%。上述人參皂苷作為Rb,藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。實(shí)施例9一種人參皂苷Rb,，人參皂苷含量94.31%,雜質(zhì)人參皂苷Rd的含量5.0%。上述人參皂苷作為Rh藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。實(shí)施例10一種人參皂苷Rbp人參皂苷Rbi含量91.50%，雜質(zhì)人參皂苷Rd的含量7.17%。上述人參皂苷作為Rb,藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。實(shí)施例11一種人參皂苷Rb,,人參皂苷Rb,含量98.97%，雜質(zhì)人參皂苷Rd的含量0.60%。上述人參皂苷作為Rb,藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。實(shí)施例12一種人參皂苷Rb,,人參皂苷Rb,含量95.91%,雜質(zhì)人參皂苷Rd的含量3.0%。上述人參皂苷作為Rb,藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。實(shí)施例13一種人參皂苷Rbp人參皂苷Rb,含量94.29%，雜質(zhì)人參皂苷Rd的含量4.71%。上述人參皂苷作為Rb,藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。實(shí)施例14一種人參皂苷Rbp人參皂苷Rb,含量98.27%，雜質(zhì)人參皂苷Rd的含量1.0%。上述人參皂苷作為Rb!藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。實(shí)施例15一種人參皂苷Rbi,人參皂苷Rb,含量97.18%，雜質(zhì)人參皂苷Rd的含量2.0%。上述人參皂苷作為Rbi藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。實(shí)施例16一種人參皂苷Rb，，人參皂苷Rb,含量97.82%，雜質(zhì)人參皂苷Rd的含量1.54%。上述人參皂苷作為Rh藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。上述實(shí)施例1—16標(biāo)準(zhǔn)有效成分中人參皂苷Rd為雜質(zhì)中含量較大之一，通過科學(xué)實(shí)驗(yàn)將其分離，再通過系列實(shí)驗(yàn)確定其結(jié)構(gòu)。上述實(shí)施例1一16標(biāo)準(zhǔn)有效成分可以由人參、三七、西洋參、越南人參、竹節(jié)參，葫蘆科絞股藍(lán)屬絞股藍(lán)、緣果絞股藍(lán)等植物的根、莖、葉、花蕾中得到總皂苷，再經(jīng)過高效液相色譜制備方法進(jìn)行純化得到，也可以由硅膠柱層析進(jìn)行單體分離，高效液相色譜法控制終點(diǎn)得到，等等；實(shí)施例17取三七提取得到的三七總皂苷加水溶解，濾過，濾液通過HPD-100大孔吸附樹脂柱，水洗、40%乙醇洗脫，洗脫液棄去，再用50%乙醇洗脫，收集50%洗脫液，干燥，干燥物用乙醇溶解，濾過，濾液加入丙酮，放置析出，濾過、干燥，得到人參皂苷Rbp所述三七總皂苷通過市售購(gòu)買；上述人參皂苷作為Rb,藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。實(shí)施例18取人參提取得到的人參總皂苷加水溶解，濾過，濾液通過HPD-100A大孔吸附樹脂柱，水洗、40%乙醇洗脫，洗脫液棄去，再用50%乙醇洗脫，收集50%洗脫液，干燥，干燥物用95%乙醇溶解，濾過，濾液加入有機(jī)溶劑乙酸乙酯，放置析出，濾過、干燥，得到人參皂苷Rb,。所述人參總皂苷提取方法根據(jù)現(xiàn)有專利文獻(xiàn)或科技文獻(xiàn)制備得到。上述人參皂苷作為Rb,藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。實(shí)施例19取西洋參提取得到總皂苷加水溶解，濾過，濾液通過HPD-300大孔吸附樹脂柱，水洗、40%乙醇洗脫，洗脫液棄去，再用50%乙醇洗脫，收集50%洗脫液，干燥，干燥物用正丁醇溶解，濾過，濾液加入有機(jī)溶劑丙酮、乙酸乙酯，放置析出，濾過、干燥，得到人參皂苷Rb,。所述西洋參總皂苷提取方法根據(jù)現(xiàn)有專利文獻(xiàn)或科技文獻(xiàn)制備得到。上述人參皂苷作為Rh藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。實(shí)施例20取絞股藍(lán)提取得到的總皂苷加水溶解，濾過，濾液通過HPD-400大孔吸附樹脂柱，水洗、40%乙醇洗脫，洗脫液棄去，再用50%乙醇洗脫，收集50%洗脫液，干燥，干燥物用甲醇溶解，濾過，濾液加入有機(jī)溶劑丙酮，放置析出，濾過、干燥，得到人參皂苷Rbp所述絞股藍(lán)總皂苷的提取方法可以通根據(jù)現(xiàn)有專利文獻(xiàn)或科技文獻(xiàn)制備得到。上述人參皂苷作為Rb,藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。實(shí)施例21取三七總皂苷加水溶解，濾過，濾液通過HPD-400A大孔吸附樹脂柱，水洗、40%乙醇洗脫，洗脫液棄去，再用50%乙醇洗脫，收集50%洗脫液，干燥，干燥物用乙醇溶解，濾過，濾液加入有機(jī)溶劑乙酸乙酯，放置析出，濾過、干燥，得到人參皂苷Rb,。所述三七總皂苷根據(jù)現(xiàn)有專利文獻(xiàn)或科技文獻(xiàn)制備得到(歐來良、史作清、施榮富、等，強(qiáng)性大孔吸附樹脂對(duì)三七皂苷的分離純化研究，中草藥，2003，34(10):卯5-907;。上述人參皂苷作為Rb,藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。實(shí)施例22取三七總皂苷加水溶解，濾過，濾液通過HPD-450大孔吸附樹脂柱，水洗、40%乙醇洗脫，洗脫液棄去，再用50%乙醇洗脫，收集50%洗脫液，干燥，干燥物用95%乙醇溶解，濾過，濾液加入有機(jī)溶劑丙酮，放置析出，濾過、干燥，得到人參皂苷Rb,。所述三七總皂苷根據(jù)現(xiàn)有專利文獻(xiàn)或科技文獻(xiàn)制備得到(章觀德，吸附樹脂法測(cè)定三七及其制劑冠心寧總皂甙，中草藥，1981，12(11):23-25.)。上述人參皂苷作為Rbi藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。實(shí)施例23取三七總皂苷加水溶解，濾過，濾液通過D101大孔吸附樹脂柱，水洗、40%乙醇洗脫，洗脫液棄去，再用50%乙醇洗脫，收集50%洗脫液，干燥，干燥物用正丁醇溶解，濾過，濾液加入有機(jī)溶劑丙酮、乙酸乙酯，放置析出，濾過、千燥，得到人參皂苷Rbp所述三七總皂苷通過市售購(gòu)買。上述人參皂苷作為Rb,藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。實(shí)施例24取三七總皂苷加水溶解，濾過，濾液通過1300-1大孔吸附樹脂柱，水洗、40%乙醇洗脫，洗脫液棄去，再用50%乙醇洗脫，收集50%洗脫液，干燥，干燥物用甲醇溶解，濾過，濾液加入有機(jī)溶劑乙酸乙酯，放置析出，濾過、干燥，得到人參皂苷Rb,。所述三七總皂苷根據(jù)現(xiàn)有專利文獻(xiàn)或科技文獻(xiàn)制備得到(楊崇仁、王國(guó)燕、伍明珠、等，三七蘆頭的皂甙成分，藥學(xué)通報(bào)，1985，20(6):337-338)。上述人參皂苷作為Rb,藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。實(shí)施例25取絞股藍(lán)提取得到的總皂苷加水溶解，濾過，濾液通過1400大孔吸附樹脂柱，水洗、40%乙醇洗脫，洗脫液棄去，再用50%乙醇洗脫，收集50%洗脫液，干燥，干燥物用95%乙醇溶解，濾過，濾液加入有機(jī)溶劑乙酸乙酯，放置析出，濾過、干燥，得到人參皂苷Rb,。所述絞股藍(lán)總皂苷提取方法根據(jù)現(xiàn)有專利文獻(xiàn)或科技文獻(xiàn)制備得到。上述人參皂苷作為Rbt藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。實(shí)施例26取三七總皂苷加水溶解，濾過，濾液通過AB-8大孔吸附樹脂柱，水洗、40%乙醇洗脫，洗脫液棄去，再用50%乙醇洗脫，收集50%洗脫液，干燥，干燥物用95%乙醇溶解，濾過，濾液加入有機(jī)溶劑丙酮，放置析出，濾過、干燥，得到人參皂苷R^。所述三七總皂苷根據(jù)現(xiàn)有專利文獻(xiàn)或科技文獻(xiàn)制備得到(歐來良、史作清、施榮富、等，強(qiáng)性大孔吸附樹脂對(duì)三七皂苷的分離純化研究，中草藥，2003，34(10):905-術(shù)；)。上述人參皂苷作為Rb,藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。實(shí)施例27取西洋參提取得到總皂苷加水溶解，濾過，濾液通過D101大孔吸附樹脂柱，水洗、40%乙醇洗脫，洗脫液棄去，再用50%乙醇洗脫，收集50%洗脫液，干燥，干燥物用正丁醇溶解，濾過，濾液加入有機(jī)溶劑乙酸乙酯，放置析出，濾過、干燥，得到人參皂苷Rbp所述西洋參總皂苷提取方法根據(jù)現(xiàn)有專利文獻(xiàn)或科技文獻(xiàn)制備得到。上述人參皂苷作為Rb,藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。實(shí)施例28取人參提取得到總皂苷加水溶解，濾過，濾液通過1400大孔吸附樹脂柱，水洗、40%乙醇洗脫，洗脫液棄去，再用50%乙醇洗脫，收集50%洗脫液，干燥，干燥物用甲醇溶解，濾過，濾液加入有機(jī)溶劑乙酸乙酯，放置析出，濾過、干燥，得到人參皂苷Rb,。所述人參總皂苷根據(jù)現(xiàn)有專利文獻(xiàn)或科技文獻(xiàn)制備得到。上述人參皂苷作為Rbt藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。實(shí)施例29取三七總皂苷加水溶解，濾過，濾液通過1300-1大孔吸附樹脂柱，水洗、40%乙醇洗脫，洗脫液棄去，再用50%乙醇洗脫，收集50%洗脫液，干燥，干燥物用甲醇溶解，濾過，濾液加入有機(jī)溶劑丙酮，放置析出，濾過、干燥，得到人參皂苷Rb,。所述三七總皂苷根據(jù)現(xiàn)有專利文獻(xiàn)或科技文獻(xiàn)制備得到(楊崇仁、王國(guó)燕、伍明珠、等，三七蘆頭的皂甙成分，藥學(xué)通報(bào)，1985，20(6):337-338;)。上述人參皂苷作為Rb,藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。實(shí)施例30取人參總皂苷加水溶解，濾過，濾液通過HPD-100A大孔吸附樹脂柱，水洗、40%乙醇洗脫，洗脫液棄去，再用50%乙醇洗脫，收集50%洗脫液，干燥，干燥物用乙醇溶解，濾過，濾液加入有機(jī)溶劑乙酸乙酯，放置析出，濾過、干燥，得到人參皂苷Rbi。所述人參總皂苷通過市售購(gòu)買，上述人參皂苷作為Rbt藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。實(shí)施例31取三七提取得到的三七總皂苷加水溶解，濾過，濾液通過HPD-100大孔吸附樹脂柱，水洗、40%乙醇洗脫，洗脫液棄去，再用50%乙醇洗脫，收集50%洗脫液，干燥，干燥物用乙醇溶解，濾過，濾液放置析出，濾過、干燥，得到人參皂苷Rbj。所述三七總皂苷通過市售購(gòu)買；上述人參皂苷作為Rb,藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。實(shí)施例32取西洋參提取得到的西洋參總皂苷加水溶解，濾過，濾液通過HPD-100A大孔吸附樹脂柱，水洗、40%乙醇洗脫，洗脫液棄去，再用50%乙醇洗脫，收集50%洗脫液，干燥，干燥物用95%乙醇溶解，濾過，濾液放置析出，濾過、干燥，得到人參皂苷Rb,。所述西洋參總皂苷提取方法根據(jù)現(xiàn)有專利文獻(xiàn)或科技文獻(xiàn)制備得到。上述人參皂苷作為Rb,藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。實(shí)施例33取絞股藍(lán)提取得到總皂苷加水溶解，濾過，濾液通過HPD-300大孔吸附樹脂柱，水洗、40%乙醇洗脫，洗脫液棄去，再用50%乙醇洗脫，收集50%洗脫液，干燥，干燥物用正丁醇溶解，濾過，濾液放置析出，濾過、干燥，得到人參皂苷Rb,。所述絞股藍(lán)總皂苷提取方法根據(jù)現(xiàn)有專利文獻(xiàn)或科技文獻(xiàn)制備得到。上述人參皂苷作為Rb,藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。實(shí)施例34取三七提取得到的總皂苷加水溶解，濾過，濾液通過HPD-400大孔吸附樹脂柱，水洗、40%乙醇洗脫，洗脫液棄去，再用50%乙醇洗脫，收集50%洗脫液，干燥，干燥物用甲醇溶解，濾過，濾液放置析出，濾過、干燥，得到人參皂苷Rb,。所述三七總皂苷的提取方法可以通根據(jù)現(xiàn)有專利文獻(xiàn)或科技文獻(xiàn)制備得到。上述人參皂苷作為Rl^藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。實(shí)施例35取西洋參總皂苷加水溶解，濾過，濾液通過HPD-400A大孔吸附樹脂柱，水洗、40%乙醇洗脫，洗脫液棄去，再用50%乙醇洗脫，收集50%洗脫液，干燥，干燥物用乙醇溶解，濾過，濾液放置析出，濾過、干燥，得到人參皂苷Rb,。所述西洋參總皂苷根據(jù)現(xiàn)有專利文獻(xiàn)或科技文獻(xiàn)制備得到。上述人參皂苷作為Rb,藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。實(shí)施例36取人參總皂苷加水溶解，濾過，濾液通過HPD-450大孔吸附樹脂柱，水洗、40%乙醇洗脫，洗脫液棄去，再用50%乙醇洗脫，收集50%洗脫液，干燥，干燥物用95%乙醇溶解，濾過，濾液放置析出，濾過、干燥，得到人參皂苷Rb,。所述人參總皂苷根據(jù)現(xiàn)有專利文獻(xiàn)或科技文獻(xiàn)制備得到。上述人參皂苷作為Rb,藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。實(shí)施例37取人參提取得到總皂苷加水溶解，濾過，濾液通過D101大孔吸附樹脂柱，水洗、40%乙醇洗脫，洗脫液棄去，再用50%乙醇洗脫，收集50%洗脫液，干燥，干燥物用正丁醇溶解，濾過，濾液放置析出，濾過、干燥，得到人參皂苷Rbp所述人參總皂苷提取方法根據(jù)現(xiàn)有文獻(xiàn)制備得到。上述人參皂苷作為Rt^藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。實(shí)施例38取三七提取得到總皂苷加水溶解，濾過，濾液通過1300-1大孔吸附樹脂柱，水洗、40%乙醇洗脫，洗脫液棄去，再用50%乙醇洗脫，收集50%洗脫液，干燥，干燥物用甲醇溶解，濾過，濾液放置析出，濾過、干燥，得到人參皂苷Rbp所述三七總皂苷根據(jù)現(xiàn)有專利文獻(xiàn)或科技文獻(xiàn)制備得到(楊崇仁、王國(guó)燕、伍明珠、等，三七蘆頭的皂甙成分，藥學(xué)通報(bào)，1985，20(6):337-338)。上述人參皂苷作為Rb,藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。實(shí)施例39取西洋參提取得到的總皂苷加水溶解，濾過，濾液通過1400大孔吸附樹脂柱，水洗、40%乙醇洗脫，洗脫液棄去，再用50%乙醇洗脫，收集50%洗脫液，干燥，干燥物用95%乙醇溶解，濾過，濾液放置析出，濾過、干燥，得到人參皂苷Rb,。所述西洋參總皂苷提取方法根據(jù)現(xiàn)有專利文獻(xiàn)或科技文獻(xiàn)制備得到。上述人參皂苷作為Rb,藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。實(shí)施例40取絞股藍(lán)總皂苷加水溶解，濾過，濾液通過AB-8大孔吸附樹脂柱，水洗、40%乙醇洗脫，洗脫液棄去，再用50%乙醇洗脫，收集50%洗脫液，干燥，干燥物用95%乙醇溶解，濾過，濾液放置析出，濾過、干燥，得到人參皂苷Rb,。所述絞股藍(lán)總皂苷根據(jù)現(xiàn)有專利文獻(xiàn)或科技文獻(xiàn)制備得到(。上述人參皂苷作為Rb,藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。實(shí)施例41取人參提取得到總皂苷加水溶解，濾過，濾液通過D101大孔吸附樹脂柱，水洗、40%乙醇洗脫，洗脫液棄去，再用50%乙醇洗脫，收集50%洗脫液，干燥，干燥物用正丁醇溶解，濾過，濾液放置析出，濾過、干燥，得到人參皂苷Rb,。所述人參總皂苷提取方法根據(jù)現(xiàn)有專利文獻(xiàn)或科技文獻(xiàn)制備得到。上述人參皂苷作為Rb,藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。實(shí)施例42取三七提取得到總皂苷加水溶解，濾過，濾液通過1400大孔吸附樹脂柱，水洗、40%乙醇洗脫，洗脫液棄去，再用50%乙醇洗脫，收集50%洗脫液，干燥，干燥物用甲醇溶解，濾過，濾液放置析出，濾過、干燥，得到人參皂苷Rb,。所述三七總皂苷根據(jù)現(xiàn)有專利文獻(xiàn)或科技文獻(xiàn)制備得到。上述人參皂苷作為Rb藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。實(shí)施例43取絞股藍(lán)總皂苷加水溶解，濾過，濾液通過1300-1大孔吸附樹脂柱，水洗、40%乙醇洗脫，洗脫液棄去，再用50%乙醇洗脫，收集50%洗脫液，干燥，干燥物用甲醇溶解，濾過，濾液放置析出，濾過、干燥，得到人參皂苷Rb,。所述絞股藍(lán)總皂苷根據(jù)現(xiàn)有專利文獻(xiàn)或科技文獻(xiàn)制備得到。上述人參皂苷作為Rb,藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。實(shí)施例44取西洋參總皂苷加水溶解，濾過，濾液通過HPD-100A大孔吸附樹脂柱，水洗、40%乙醇洗脫，洗脫液棄去，再用50%乙醇洗脫，收集50%洗脫液，干燥，干燥物用乙醇溶解，濾過，濾液放置析出，濾過、干燥，得到人參皂苷Rb,。所述西洋參總皂苷通過市售購(gòu)買，上述人參皂苷作為Rbi藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。上述實(shí)施例17—44得到人參皂苷Rb,有效成分中，人參皂苷Rbi含量大于等于90%且小于100%，，雜質(zhì)人參皂苷Rd的含量大于等于0.1X且小于等于10%;或者人參皂苷Rb,含量大于等于90X且小于100%，雜質(zhì)人參皂苷Rd的含量大于等于0.5。％且小于等于8.0%;或者人參皂苷Rb!含量大于等于90X且小于100%，雜質(zhì)人參皂苷Rd的含量大于等于0.5%且小于等于5.0%;或者人參皂苷Rb,含量大于等于90%且小于100%，雜質(zhì)人參皂苷Rd的含量大于等于0.6%且小于等于3.0%;或者人參皂苷Rb!含量大于等于90X且小于100%，雜質(zhì)人參皂苷Rd的含量大于等于1.0%且小于等于2.0%。上述實(shí)施例1_44的人參皂苷Rb,為活性物質(zhì)制備的藥物制劑，其中單位劑量為lmg—5000mg。上述實(shí)施例1一44上述人參皂苷Rb,為活性物質(zhì)制備的藥物制劑，其中單位劑量為5mg—2000mg。上述人參皂苷在制備治療和/或預(yù)防心腦血管疾病、腫瘤、衰老、記憶力減退藥物中的應(yīng)用。注:本發(fā)明所要求保護(hù)的具體技術(shù)方案，不限于上述實(shí)施例所表達(dá)的技術(shù)方案的具體組合。權(quán)利要求1、一種人參皂苷Rb1，人參皂苷Rb1含量大于等于90％且小于100％，其特征在于雜質(zhì)包括人參皂苷Rd，雜質(zhì)人參皂苷Rd含量大于0且小于等于10％。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種人參皂苷Rb,，其中雜質(zhì)人參皂苷Rd的含量大于等于0.1%且小于等于10%。3、根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種人參皂苷Rb,，其中雜質(zhì)人參皂苷Rd的含量大于等于0.5%且小于等于8.0%。4、根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種人參皂苷Rbp其中雜質(zhì)人參皂苷Rd的含量大于等于0.5%且小于等于5.0%。5、根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種人參皂苷Rb,，其中雜質(zhì)人參皂苷Rd的含量大于等于0.6%且小于等于3.0%。6、根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種人參皂苷Rbp其中雜質(zhì)人參皂苷Rd的含量大于等于1.0%且小于等于2.0%。7、根據(jù)權(quán)利要求l一6任一項(xiàng)所述的一種人參皂苷Rbp其制備方法為取三七、人參、西洋參或絞股藍(lán)提取得到的總皂苷，總皂苷加水溶解，濾過，濾液通過非極性或弱極性大孔吸附樹脂柱，水洗、40%乙醇洗脫，洗脫液棄去，再用50%乙醇洗脫，收集50%洗脫液，干燥，干燥物用乙醇、95%乙醇、正丁醇或甲醇溶解，濾過，濾液加入或者不加入有機(jī)溶劑，放置析出，濾過、干燥，得到人參皂苷Rb,。8、根據(jù)權(quán)利要求l一6任一項(xiàng)所述的一種人參皂苷Rbi，其分析檢測(cè)方法為-采用高效液相色譜法進(jìn)行檢測(cè)分析；色譜柱Cw反相色譜柱；色譜條件與系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流速1.0ml/min;柱溫25。C;檢測(cè)波長(zhǎng)203nm;理論板數(shù)按人參皂苷Rb,計(jì)應(yīng)不低于2500;以水乙腈體積比=33:67為流動(dòng)相；對(duì)照品溶液的配制精密稱取人參皂苷Rb,對(duì)照品到容量瓶中，加甲醇溶解搖勻，并稀釋至刻度；供試品溶液的配制精密稱取或量取樣品到容量瓶中加甲醇溶解搖勻，并稀釋至刻度；測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各，注入液相色譜儀，采用按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。9、根據(jù)權(quán)利要求l一6任一項(xiàng)所述的一種人參皂苷為活性物質(zhì)制備的單位劑量的藥物制劑。10、根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種人參皂苷Rb"其中制備方法中所述的非極性或弱極性大孔樹脂為HPD-100、HPD-100A、HPD-300、HPD-400、HPD-400A、HPD-450、DlOl、1300-1、1400或AB-8。11、根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種人參皂苷Rbp其中制備方法中所述的有機(jī)溶劑為丙酮、乙酸乙酯中的一種或兩種。12、根據(jù)權(quán)利要求9所述的一種人參皂苷Rbi為活性物質(zhì)制備的藥物制劑，其中單位劑量為lmg—5000mg。13、根據(jù)權(quán)利要求9所述的一種人參皂苷Rb,為活性物質(zhì)制備的藥物制劑，其中單位劑量為5mg—2000mg。14、根據(jù)權(quán)利要求l一6任一項(xiàng)所述的一種人參皂苷Rb,在制備治療和/或預(yù)防心腦血管疾病、腫瘤、衰老、記憶力減退藥物中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明公開了一種標(biāo)準(zhǔn)人參皂苷Rb₁有效成分，包括含量大于等于90％且小于100％的人參皂苷Rb₁和含量小于等于10％的雜質(zhì)，其特征在于雜質(zhì)包括人參皂苷Rd；其中雜質(zhì)人參皂苷Rd的含量大于等于0.1％且小于等于10％；或者雜質(zhì)人參皂苷Rd的含量大于等于0.5％且小于等于8.0％；或者雜質(zhì)人參皂苷Rd的含量大于等于0.5％且小于等于5.0％；或者雜質(zhì)人參皂苷Rd的含量大于等于0.6％且小于等于3.0％；或者雜質(zhì)人參皂苷Rd的含量大于等于1.0％且小于等于2.0％；藥理實(shí)驗(yàn)表明，本申請(qǐng)標(biāo)準(zhǔn)有效成分具有很好的藥理作用，可以制備成藥劑學(xué)上藥物制劑。文檔編號(hào)A61K31/704GK101390871SQ20071012191公開日2009年3月25日申請(qǐng)日期2007年9月18日優(yōu)先權(quán)日2007年9月18日發(fā)明者嚴(yán)劉,李志剛,林治榮,渠守峰,米長(zhǎng)江,郭小鵬,金治剛,阮愛華,群顧申請(qǐng)人:北京本草天源藥物研究院