專利名稱：：含有雜質(zhì)三七皂苷R₂的人參皂苷Rb₁的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及中藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種標(biāo)準(zhǔn)的、三七提取的人參皂苷有效成分o本發(fā)明在于提供一種標(biāo)準(zhǔn)的中藥有效成分，即含有雜質(zhì)三七皂苷R2的標(biāo)準(zhǔn)的人參皂苷Rb,。
背景技術(shù)：
：三七為五加科植物三七panaxnotoginseng(Burk.)F.H.Chen的干燥根，該藥首載于明代李時珍《本草綱目》，三七的性能，甘微苦平，施于血癥，既守且攻，出血者用之，止血而不留瘀；血瘀者投之，活血而不妄行；實證者用之，不傷正氣；虛證病人納之，補(bǔ)而不滯，因此，三七被稱之為"參中之王"。三七中皂苷成分是三七的主要有效成分之一，迄今為止，已從三七的不同部位分離得到60余種單體皂苷成分，這些單體皂苷成分大多數(shù)為達(dá)瑪烷型的20(S)-原人參二醇型[20(S)-protopanaxadiol]禾n20-(S)原人參三醇型[20(S)peotopanaxatrio1]，但未發(fā)現(xiàn)含有齊墩果酸型皂苷，這與同屬植物人參和西洋參有著顯著區(qū)別，這些單體皂苷中也有很多與人參和西洋參中所含皂苷成分相同，如人參皂苷(ginsenoside)Rbi、Rb2、Rb3、Rc、Rd、F2、七葉膽苷IX(gypenosidIX)、七葉膽苷XVH(gypenosideXVII)和人參皂苷Re、Rgl、Rg2、Rhp其中，尤以人參皂苷Rg,和Rh含量最高，除此以外，也有一些是三七所獨有的皂苷類成分，如三七皂苷(ntoginsenoside)R!、R2、R4、&、Fa等。三七中含有的人參皂苷Rb,具有很好的藥理作用(1)對腦缺血再灌注損傷的作用，能改善缺血神經(jīng)的傳導(dǎo)功能，減輕運(yùn)動功能障礙程度等；(2)對心肌損傷的保護(hù)作用，對豚鼠正常心臟乳頭肌動作電位(AP)各特征參數(shù)及收縮力(FC)的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，人參皂苷Rbi分別使APD20、APD90明顯縮短，F(xiàn)C顯著下降，并可降低高鉀誘發(fā)的豚鼠乳頭肌慢反應(yīng)動作電位的動作電位幅值(APA)及零相最大上升速率(Vmax)，但對靜息電位(RP)、APA、Vmax及AP的超射值(OS)無明顯影響。這些研究為三七中人參皂苷Rb,進(jìn)行藥物開發(fā)提供良好的基礎(chǔ)，但這些工作只是起始階段，將人參皂苷Rbl開發(fā)成用于人類醫(yī)療的藥物，還需要很多工作，例如將其有關(guān)雜質(zhì)進(jìn)行深入的分析，就是很多醫(yī)藥工作者的重點工作之一。綜上所述，在得到人參皂苷Rbi有效成分的基礎(chǔ)上，針對其雜質(zhì)特別是含量較大的雜質(zhì)進(jìn)行研究，得到標(biāo)準(zhǔn)有效成分，具有著深遠(yuǎn)的意義。
發(fā)明內(nèi)容基于上述原因，我們的科研人員對不同方法的得到三七中人參皂苷進(jìn)行深入的分析，在"含量大于卯^的人參皂苷R^，總雜質(zhì)小于等于10%"的基礎(chǔ)上，通過創(chuàng)造性的勞動，確證了人參皂苷Rb,中含量較大的的雜質(zhì)之一是三七皂苷P4，因為，三七皂苷R2具有很強(qiáng)的溶血作用，屬于即是有效成分又是有害成分，因此，我們對三七皂苷R2進(jìn)行限量控制，得到標(biāo)準(zhǔn)人參皂苷R1^有效成分，即保留了雜質(zhì)三七皂苷R2的藥理活性，又保證了其在一定范圍內(nèi)，溶血作用降至最低，這種標(biāo)準(zhǔn)化的人參皂苷Rbi有效成分，可以直接作為藥物原料在市場銷售，也可以作為藥劑制備的制劑原料使用，這樣，有利于中藥原料的標(biāo)準(zhǔn)化，有利于中藥制劑生產(chǎn)的標(biāo)準(zhǔn)化；同時，我們科研人員還針對人參皂苷Rbi的提取純化工藝進(jìn)行研究采用大孔樹脂法，以總皂苷為原料，分離得到人參皂苷Rh粗品，再通過重結(jié)晶法，得到人參皂苷Rb,，該工藝方法簡單、可以實現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)，得到的人參皂苷Rt^造價不高，對其含量和雜質(zhì)進(jìn)行分析，人參皂苷Rbi含量大于等于卯％，雜質(zhì)中三七皂苷R2含量小于1%，符合標(biāo)準(zhǔn)人參皂苷Rh有效成分的要求；本申請對含有雜質(zhì)三七皂苷R2的人參皂苷Rh進(jìn)行藥理活性實驗，發(fā)現(xiàn)其除具有很好的治療心血管疾病等作用外，還具有很好的腦血管的作用，與現(xiàn)有人參皂苷Rbi(不含有三七皂苷R2或含量極低)比較，在腦血管作用方面具有顯著性差異(P<0.05)。本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的。本申請在于提供一種標(biāo)準(zhǔn)的人參皂苷Rbp即標(biāo)準(zhǔn)的中藥有效成分將有效成分進(jìn)行含量確定，對雜質(zhì)進(jìn)行物質(zhì)確定和含量確定；本申請的標(biāo)準(zhǔn)人參皂苷有效成分可以作為藥物制劑原料藥使用，在符合藥物制劑要求的基礎(chǔ)上，制備的人參皂苷Rh藥物制劑可以用于治療人體疾病。本申請的標(biāo)準(zhǔn)的人參皂苷Rb,有效成分為(1)一種人參皂苷Rbp人參皂苷Rl^含量大于等于90X且小于100%,雜質(zhì)含量大于0且小于等于10%，其特征在于雜質(zhì)包括三七皂苷R2，R2的含量大于O且小于1%。(2)—種人參皂苷Rbp人參皂苷Rb!含量大于等于90%且小于100%，其中雜質(zhì)三七皂苷R2的含量大于等于0.01%且小于等于0.50%。上述標(biāo)準(zhǔn)有效成分中三七皂苷R2為雜質(zhì)中含量較大之一，通過科學(xué)實驗將其分離，再通過系列實驗確定其結(jié)構(gòu)。上述標(biāo)準(zhǔn)有效成分可以由三七根、莖、葉、花蕾中得到總皂苷，再經(jīng)過高效液相色譜制備方法進(jìn)行純化得到，也可以由硅膠柱層析進(jìn)行單體分離，高效液相色譜法控制終點得到，等等；本申請上述標(biāo)準(zhǔn)人參皂苷Rb,有效成分也可以由下述方法得到(1)取三七提取得到的總皂苷；(2)總皂苷加水溶解，濾過，濾液通過非極性或弱極性大孔吸附樹脂柱，水洗、40%乙醇洗脫，洗脫液棄去，再用50%乙醇洗脫，收集50%洗脫液，干燥；(3)干燥物用乙醇、95%乙醇、正丁醇或甲醇溶解，濾過，濾液加入或者不加入有機(jī)溶劑，放置析出，濾過、干燥，得到人參皂苷Rbi。上述步驟1中的總皂苷可以直接由市場購買或根據(jù)科技文獻(xiàn)制備；上述步驟(3)得到的人參皂苷Rh可以重復(fù)步驟(3)的方法；所述三七總皂苷可以通過市售購買，或者根據(jù)現(xiàn)有專利文獻(xiàn)或科技文獻(xiàn)制備得到(魏均嫻、陳業(yè)高、曹樹明，三七果梗皂甙成分的研究，中國中藥雜志，1992，17(外611-613;楊崇仁、王國燕、伍明珠、等，三七蘆頭的皂甙成分，藥學(xué)通報，1985，20(6):337-338;董阿玲、鄭俊華、果德安等，從三七中分離微量成分三七皂苷的方法，中國中藥雜志，2002，27(10):793-794;歐來良、史作清、施榮富、等，強(qiáng)性大孔吸附樹脂對三七皂苷的分離純化研究，中草藥，2003，34(10):905-卯7;章觀德，吸附樹脂法測定三七及其制劑冠心寧總皂甙，中草藥，1981，12(11):23-25.)。所述大孔樹脂柱為HPD-100、HPD-100A、HPD-300、HPD-400、HPD-400A、HPD-450、DlOl、1300-1、1400或AB-8。所述有機(jī)溶劑為丙酮、乙酸乙酯中的一種或兩種。上述人參皂苷Rh為活性物質(zhì)制備的單位劑量的藥物制劑。上述人參皂苷Rb,為活性物質(zhì)制備的藥物制劑，其中單位劑量為lmg—4000mg。上述人參皂苷Rh為活性物質(zhì)制備的藥物制劑，其中單位劑量為5mg—2000mg。上述人參皂苷Rh在制備治療和/或預(yù)防心腦血管疾病、休克、腫瘤、休克、記憶力減退藥物中的應(yīng)用。一、檢測方法實驗方法采用高效液相色譜法進(jìn)行檢測分析；采用高效液相色譜法進(jìn)行檢測分析；色譜柱C^反相色譜柱；色譜條件與系統(tǒng)適用性實驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流速1.0ml/min;柱溫25'C;檢測波長203nm;理論板數(shù)按人參皂苷Rb,計應(yīng)不低于2500;以水乙腈為流動相，按下述梯度洗脫條件進(jìn)行梯度洗脫，運(yùn)行60分鐘；0_40分鐘時，水的比例由80%降至50%，已腈的比例由20%升至至50%;40—43分鐘時，水的比例由50%降至20%，已腈的比例由50%升至80%;43_48分鐘時，保持水的比例為20%，保持已腈的比例為80%;48—50分鐘時，水比例由20%升至80%，水的比例由80%降至20%;50—60分鐘保持水的比例為20%，已腈的比例80%;對照品溶液的配制精密稱取人參皂苷Rb,對照品到容量瓶中，加甲醇溶解搖勻，并稀釋至刻度；供試品溶液的配制精密稱取或量取樣品到容量瓶中加甲醇溶解搖勻，并稀釋至刻度；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各，注入液相色譜儀，采用按外標(biāo)法以峰面積計算，即得。注本申請人參皂苷Rl^對照品是法定標(biāo)準(zhǔn)品，購買自中國藥品生物制品鑒定所購買。本申請標(biāo)準(zhǔn)人參皂苷Rh有效成分的檢測分析取本申請標(biāo)準(zhǔn)人參皂苷Rb,有效成分，按照上述實驗方法進(jìn)行檢測分析實驗結(jié)果見表l:表l人參皂苷R1^樣品測定結(jié)果批號人參皂苷Rbi^"/。)三HiS苷R2含量(n/。)其^)^、量(％)197.100.991.91298.240.910.8596.370.882.75499.140.500.3699.270.440.29697.640.172.1999.940.010.05899.850細(xì)0.07實驗結(jié)論通過上述實驗表明，本申請標(biāo)準(zhǔn)人參皂苷Rbi有效成分中，人參皂苷Rbi含量大于等于90%且小于100%，雜質(zhì)三七皂苷R2的含量大于0且小于1%;人參皂苷Rb!含量大于等于90W且小于100%，雜質(zhì)二七皂苷R2的含量大于等于0.01%且小于等于0.50%。二、二七皂苷R2結(jié)構(gòu)確證資料取本申請標(biāo)準(zhǔn)人參皂苷Rh有效成分，經(jīng)過硅膠柱層析分離，結(jié)合高效液相色譜液法，將含量較大的雜質(zhì)、人參皂苷Rbi分別分離，得到雜質(zhì)單體，進(jìn)行結(jié)構(gòu)確證，確證資料如下13C-NMR:見表2表2三七皂苷R2結(jié)構(gòu)確證資料序')S~~~~i^~~~5"~^138.861530.56226.111626.0076.211753.72440.541816.1660.511915.65678.272073.02743.872125.12839.062234.87949.522321.881039.0524124.771130.5625130.571270.342624.481347.202716.291451.162830.00三七皂苷R2的氫譜歸屬:16.4415.12102.4678.6976.8869.8979.2861.55102.5174.1877.9970.6865.53123456123451、在30.958，1.002,1.002，1.096，1.167，1.333，1.635，1.698存在18，19，21，26，27，28，29，30位-CH3的信號峰。2、在S5.153，1H，t存在24位的-CHH言號峰。3、在S4.455，1H，d，J=7.2存在葡萄糖1位的-CH〈的信號峰。實驗結(jié)論通過上述實驗表明，本申請含量較大雜質(zhì)之一是三七皂苷R2。三、溶血性實驗研究實驗方案方案l:人參皂苷R^含方案2:人參皂苷Rb!含方案3:人參皂苷Rbi含方案4:人參皂苷R1^含方案5:人參皂苷Rbi含方案6:人參皂苷Rbi含方案7:人參皂苷R1^含方案8:人參皂苷R^含方案9:人參皂苷Rbi含方案10:生理鹽水。實驗方法取去纖維蛋白兔全血，加生理鹽水，搖勻，離心，傾去上清液，反復(fù)清滌至不成紅色為止，量取紅細(xì)胞，加生理鹽水稀釋成2%的混懸液，取上述不同方案的人參皂苷Rb,，加入2%紅細(xì)胞混懸液2.5ml，補(bǔ)加生理鹽水至5mh輕輕搖勻，置37"C恒溫水浴中，觀察1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時溶血情況，實驗結(jié)果見表3。表3不同方案的溶血情況10量96.10%，雜質(zhì)三七皂苷112含量3.03%。量97.26%，雜質(zhì)三七皂苷112含量2.50%。量98.44%，雜質(zhì)三七皇苷R2含量1.07%。量97.30%，雜質(zhì)三七皂苷R2含量1.00%。量98.49%，雜質(zhì)三七皂苷112含量0.99%。量97.25%，雜質(zhì)三七皂苷112含量0.86%。量99.37%，雜質(zhì)三七皂苷R2含量0.50X。量99.91%，雜質(zhì)三七皂苷112含量0.01%。量99.74%，雜質(zhì)三七皂苷112含量0.24%。組別1小時2小時3小時4小時5小吋6小時注+表示溶血，-表示不溶血，+-表示有溶血現(xiàn)象但不完全實驗結(jié)果通過溶血性實驗研究表明，當(dāng)雜質(zhì)三七皂苷R2含量小于1%時，幾乎沒有溶血作用，說明含有的雜質(zhì)三七皂苷R2應(yīng)該限定在大于0且小于1%的范圍內(nèi)。四、通過血腦屏障實驗研究實驗藥物本申請標(biāo)準(zhǔn)人參皂苷R1^有效成分(符合本申請標(biāo)準(zhǔn)有效成分對雜質(zhì)三七皂苷R2的限定)；市售人參皂苷Rh單體(中國藥品生物制品鑒定所)；實驗動物雄性大鼠，休重0.22士0.018kg,用藥前禁食12—14小時，可自由飲水。實驗方法取大鼠，隨機(jī)分組，尾靜脈注射實驗藥物，給藥量為60mg/kg，用藥后1.5小時，立即處死動物，立即心臟取血1.5ml,肝素抗凝，制成血漿，同時迅速取出心、腦組織，濾紙吸干，稱取0.50g，加2.5ml的PH=8的磷酸鹽緩沖液制成組織勻漿，取血漿、勻漿各0.5ml再分別加入0.5ml緩沖液混勻，按照檢測分析實驗方法進(jìn)行檢測分析，得到數(shù)據(jù)，計算結(jié)果見表4:表4給藥后組織藥濃的情況<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>市售人參皂苷Rb!單體0.00540.0109--_本申請標(biāo)準(zhǔn)人參皂苷Rb,有效成分_0.0134_0.0149_0.0007_0,0010實驗結(jié)論通過上述實驗表明，含有雜質(zhì)三七皂苷R2的人參皂苷Rbp更易通過血腦屏障，經(jīng)過分析，是三七皂苷R2促進(jìn)了有效成分人參皂苷Rh的吸收，充分說明雜質(zhì)三七皂苷R2與有效成分人參皂苷Rb,具有很好的協(xié)同作用。五、藥理實驗實驗l對大鼠腦出血的影響實驗藥物本申請標(biāo)準(zhǔn)人參皂苷Rbi有效成分(符合本申請標(biāo)準(zhǔn)有效成分對雜質(zhì)三七皂苷R2的限定)；市售人參皂苷Rl^單體(中國藥品生物制品鑒定所，雜質(zhì)人參皂苷R2檢測不到)；血栓通注射液。實驗試劑伊文思藍(lán)(EB):西德SERVA產(chǎn)品。SOD活性測試盒由北京邦定生物醫(yī)學(xué)公司提供。其他試劑均為國產(chǎn)分析純級,所用試劑均用三蒸水配制。實驗儀器721型可見光分光光度計(上海分析儀器廠)；LKB1250生物發(fā)光儀瑞典LKB公司。實驗動物wistar大鼠，雄性,體重在250g左右。實驗方法將動物隨機(jī)分組，于術(shù)前3d開始給藥，腹腔注射，每日l次。參考王氏等王楠，賈筠生，曹棣芳，等。益氣化瘀法治療皮下和腦內(nèi)血腫的實驗研究。上海中醫(yī)藥雜志，1985，(1):4648腦內(nèi)注入血塊的方法復(fù)制大鼠腦血腫模型，大鼠尾尖取血0.5ml入無菌青霉素小瓶內(nèi)，置4"冰箱過夜。用電子天平稱取血凝塊7mg，裝入18號穿刺針內(nèi)。將大鼠以10%水合氯醛麻醉后，固定，頭頂剪毛，常規(guī)消毒，頭頂正中矢狀切口，暴露顱骨，在相當(dāng)于冠狀縫后lmm、矢狀縫右側(cè)2.5mm處，用顱骨鉆鉆開一直徑約3mm小？L，沿針孔將針頭垂直刺入腦組織5mm，將針芯復(fù)位，血塊即埋入腦組織中，緩慢出針，縫合切口。實驗結(jié)果腦系數(shù):動物稱重，斷頭處死后開顱取腦，沿橋腦上界水平切斷，取全腦稱重。按下式計算腦系數(shù)全腦重+休重xlOOM。腦組織含水量稱取0.1g濕重腦組織，置45"C烤箱中烘烤5d，至恒重后稱取干腦，根據(jù)下式計算腦組織含水量氣濕重-干重)+濕重xlO0M。血管通透性實驗動物于殺檢前24h尾靜脈緩注2.5。/。伊文思藍(lán)(EB)生理鹽水液2ml/kg體重。殺檢取腦后，將腦組織通過血腫作冠狀切面，靠血腫切取約0.1g薄片，稱取濕重后，分別浸泡于3ml甲酰胺中于45'C溫箱放置72h。取浸泡液在721型分光光度計620nm波長下測定OD值,然后根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出腦內(nèi)EB含量,以表示腦血管通透性的變化。腦組織MDA含量測定:參考文獻(xiàn)方法，稱取約0.1g皮層腦組織，加生理鹽水制成10%勻漿。取勻漿液0.5m，加入硫代巴比妥酸(TBA)溶液(稱取TBA加熱溶于10%高氯酸中，達(dá)過飽和濃度為0.67%，再用20%三氯乙酸以3:2體積稀釋即成)55ml，混勻后95"C水浴30min，自來水冷卻后離心3000r/min，10min，取上清液在532nm波長處比色，零管調(diào)零讀取OD值。用四乙氧基丙烷(TEP)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線計算MDA含量。腦組織SOD活性測定取皮層腦組織約O.lg，以生理鹽水制備10%腦組織勻漿,離心取上清液，用化學(xué)發(fā)光法,測定SOD活性。表5對實驗性腦出血大鼠腦系數(shù)和腦組織含水量的影響腦系數(shù)腦系數(shù)腦系數(shù)腦組織含水量腦組織含水量腦組織含水量l天3天7天l天3天7天0扁士0扁0.821±0.04#0.790±0.0310.769±0.020**0.733±0.0290.876±0.031#0.801±0.015**0.767±0.029**0.737±0.0270.839±0.029#0.792±0.039*0.754±0.041**77.97±0.2180.21±0.19#79.11±0.28**79.12±0.18**77.92±0.2981.54±0.46#79.50士0.37"79.42±0.3177.84±0.2180.94±0.39#79.29±0.19**78.94±0.32**手組理且塞注液且售假術(shù)病g血通射t市130.728±0.009**0.730土0.026"0.734土0.038"78.03±0.〗2**77.99±0,24**78.05±0.17"注與假手術(shù)組比較弁PO.01，與病理組比較"PO.01,PO.05表6對實驗性腦出血大鼠腦組織內(nèi)伊文思藍(lán)(EB)含量的影響"~~》文思藍(lán)含量(ug/g~~"伊文思藍(lán)含量(ug/^""^文思藍(lán)含量(ug/g組別濕腦)濕腦)濕腦)1天3天7天假手術(shù)組2.039±0.0912.060±0.0382.057±0.047病理組5.821±0.231#14.243±0.619#5.701土1.029弁血塞通注射液組4.426±0.594**6.031±0.697*3.811±0,260*市售人參皂苷Rb,單體4.197±1.014**3.720士0.279**3.175±0.520**本申請標(biāo)準(zhǔn)人參皂苷Rbi有效成分3.903士0.990**3.094±0.108**2.897±0.311**注與假手術(shù)組比較#PO.01,與病理組比較**P<0.01,*P<0.05表7對實驗性腦出血大鼠腦組織MDA含量及SOD活性的影響組別MDA含量1天MDA含量3天MDA含量7天SOD活性l天SOD活性3天SOD活性7天17.79±0.4019.45±0,39#18.27±0.4617.98±0.24*17.60士0.19**17.74±0.7020.34±0.57#18.18±0.39*18.14±0.44*17.94±0.39**17.62±0.3820,03±033#17.92±0.3017.85±0.27*17.58±0.24**580.1士60.1383.9±23.1#570.3±36.7582.9±49.7**623.1±45.2**669.3±43.1521.6±37.1#479,3±45,6"525.9±78.2716.7±74.0**642.2±81.7429.7±28.9#604.8±58.2*744.9±69.5**948.2±61.9**注與假手術(shù)組比較弁PO.01,與病理組比較"PO.01,PO.05實驗2對狗心肌缺血保護(hù)作用參苷單本申標(biāo)人皂^效分人皂g付本請準(zhǔn)參J有成手組理且塞注液且售參苷^本申標(biāo)人皂,效分假術(shù)病組血通射組市人皂g併本請準(zhǔn)參哲有成1實驗動物Beagle狗，體重7.5-10kg。實驗藥物本申請標(biāo)準(zhǔn)人參皂苷Rb,有效成分；市售人參皂苷單體(中國藥品生物制品鑒定所，檢測不到雜質(zhì)三七皂苷R2);血塞通注射液。實驗方法取實驗狗，分為生理鹽水組、血塞通注射液組、本中請標(biāo)準(zhǔn)人參皂苷Rbi有效成分組、市售人參皂苷Rbi單體組，給藥組分別在狗前肢皮下頭靜脈給藥，給藥量每次20mg/kg,生理鹽水組等容不等量，每天給藥1次，連續(xù)給藥3天，給藥第3天后用戊巴比妥鈉25mg/kg靜脈麻醉，氣管插管，接人工呼吸機(jī)加以正壓呼吸，從左側(cè)第五肋開胸，剪開心包，暴露心臟，將心包切開緣縫于胸壁，在左冠狀動脈前降支分二期結(jié)扎，并緩慢iv利多卡因8mg/kg以防結(jié)扎前可能引起的心室顫動，隨后縫合心包及胸壁。心梗后24h，狗經(jīng)戊巴比妥鈉麻醉后處死，迅速取出心臟，切除大血管和脂肪組織，核對前降支結(jié)扎點的位置，稱全心重，然后切除右心室和左右心房，留下室中隔及左心房，稱得左心室重，從心尖和開始與前降支垂直方向?qū)⒆笮氖仪谐?-3mm厚的肌片，浸于硝基四唑藍(lán)溶液(NBT)中染色30min，剪卜』缺血區(qū)心肌組織稱重，計算心肌梗塞范圍，即心梗范圍=缺血區(qū)重/左心室重x100。/。，結(jié)果見表9。表9對狗心室梗塞范圍的影響仝心重左室重~~~'組別^，^嚴(yán)，缺血區(qū)重(g)心梗范圍(％)13.95±1,47;3.41士1.754.70±0.8711.23±0.97**2.67±0.596.35±0.61**1.87±0.654.38±0.37**#注與生理鹽水組比較，**P〈0.01;與陽性對照組血塞通注射液組比較#P<0.05實驗3對大鼠肝腫瘤抑制的比較生理鹽水組血塞通注射液組市售人參皂苷R^單體組本申請標(biāo)準(zhǔn)人參皂苷Rb，有效成分組66.72±7.8567.11±6,9467.39±6.5968.24±7.0341.75±5.7441,87±5,2742.03±5.8042.74±5.79實驗動物大鼠，150g—180g，雌雄不分。實驗藥物生理鹽水；本申請標(biāo)準(zhǔn)人參皂苷Rb有效成分(符合木申請標(biāo)準(zhǔn)有效成分對雜質(zhì)三七皂苷R2的限定)；市售人參皂苷Rbi單體(中國藥品生物制品鑒定所，檢測不到雜質(zhì)三七皂苷R2);斑蝥素鈉注射液(貴州神奇制藥有限公司)實驗方法取大鼠分為生理鹽水組、市售斑蝥素鈉注射液組、本申請標(biāo)準(zhǔn)人參皂苷R^有效成分組、市售人參皂苷Rb,單體組，作\￥256的肝內(nèi)接種，接種7天后，用戊巴比妥鈉按35mg/kg的劑量腹腔注射麻醉，固定，剖腹暴露肝，測量肝上腫瘤表面最大徑(a)和最小徑(b)，按(a*b2)/2=V(腫瘤體積)。分離胃、十二指腸動脈、肝總動脈和肝固有動脈，結(jié)扎胃、十二指腸動脈遠(yuǎn)端，以銀夾阻斷肝總動脈，于手術(shù)放大鏡下在胃十二指腸動脈上切口并插入外徑0.3mm導(dǎo)管后再送入肝固有動脈，然后按實驗分組分別注入受試藥物(給藥量相同)，術(shù)后拔管結(jié)扎胃十二指腸動脈，放開肝總動脈銀夾，再縫合切口，將大鼠置于動物室待蘇醒，繼續(xù)飼養(yǎng)觀察，手術(shù)后8天，按上法檢測腫瘤體積，實驗結(jié)果見表10:表IO各組制劑對腫瘤的抑制比較~"一~~~~一給藥前-腫瘤體積給藥/n腫瘤體積~~—體積變化百分?jǐn)?shù)組別3,mnvmm—%—生理鹽水組3.95±0.845.97±0.79—"THT士2.34—市售斑蝥素鈉注射液3'87±0'793'24±0'66—1628±2'95"市售人參皂苷Rb，組3"2±0.8Q274±(U5—3(U0±3.27"本申請標(biāo)準(zhǔn)人參皂苷Rh組4.03±0.821'87±0.21—53'60±5'77"#注與生理鹽水組比較"PO.01;與陽性對照組市售斑蝥素鈉注射液組比較WP0.05實驗4抗休克實驗實驗藥物生理鹽水；本申請標(biāo)準(zhǔn)人參皂苷Rb,有效成分(符合本申請標(biāo)準(zhǔn)有效成分對雜質(zhì)三七皂苷R2的限定)；市售人參皂苷Rb!單體(中國藥品生物制品鑒定所，檢測不到三七皂苷R2);參麥注射液(石家莊神威藥業(yè)有限公司)；實驗動物小鼠昆明種身體強(qiáng)壯小白鼠，體重18-22g，雌雄各半。實驗方法取小鼠隨機(jī)分組，分別尾靜脈注射給生理鹽水溶液、參麥注射液與市售人參皂苷Rb,單休、本申請標(biāo)準(zhǔn)人參皂苷Rt^有效成分(給藥量為0.09g/kg給藥)，每天一次，連續(xù)給藥2d，于末次給藥后15min，小鼠每20g體重腹腔注射戊巴比妥鈉生理鹽水溶液(3mg/ml)0.3ml，計錄小鼠翻正反射消失至恢復(fù)的時間，計算各組均值與標(biāo)準(zhǔn)差，進(jìn)行t檢驗，與空白對照組比較差異顯著性，結(jié)果見表11。表ll對小鼠促醒作用動物數(shù)小鼠淸醒時間組別(只)(min)生理鹽水1032.7±4.0參麥注射液1023.1±3.6**市售人參皂苷Rb,單體組1021.5±3.3**本申請標(biāo)準(zhǔn)人參皂苷有效成分組109.8±1.7**#注與生理鹽水組比較*叩<0.01;與陽性對照組市售人參皂苷Rbi單體組比較P0.05。注將本申請標(biāo)準(zhǔn)人參皂苷R^有效成分與市售人參皂苷Rbi單體進(jìn)行小鼠記憶功能的實驗、抗癡呆實驗、改善性功能實驗，實驗結(jié)果顯示，本申請標(biāo)準(zhǔn)人參皂苷Rbi有效成分比市售人參皂苷Rb,單體藥理活性好。討論通過上述藥理實驗表明，本申請含有雜質(zhì)三七皂苷R2的人參皂苷Rb比含量接近100X的人參皂苷Rbi單體藥理活性要好，經(jīng)過我們研究，初歩解釋為三七皂苷R2也是活性成分，同時也是人參皂苷Rb!的降解產(chǎn)物，二者在進(jìn)入體內(nèi)，除具有相加作用外，還會具有協(xié)同作用，另外，含有一定量雜質(zhì)三七皂苷R2的人參皂苷R1^在藥物代謝方面，能夠促進(jìn)人參皂苷Rbl的吸收，而含量接近100%的人參皂苷Rbt可能是不含有三七皂苷R2或含量微量，對人參皂苷Rb,的影響很小，不能產(chǎn)生協(xié)同作用(藥理和藥代等方面)，因此，其藥理活性要比本申請標(biāo)準(zhǔn)人參皂苷Rh有效成分的藥理活性低。六、劑量篩選實驗對大鼠腦梗塞的保護(hù)作用實驗藥物本申請標(biāo)準(zhǔn)人參皂苷Rb,有效成分(符合本申請標(biāo)準(zhǔn)有效成分對雜質(zhì)三七皂苷R2的限定)。實驗動物SD大鼠，250—300g，雌雄各半。實驗方法取大鼠，水合氯醛300mg/kgip麻醉，頸部切口，分離并結(jié)扎右側(cè)頸總動脈，縫合肌肉皮膚后,右側(cè)位固定，在右耳和右眼外眥連線中點切開皮膚，分離顳肌，暴露顴突及顳骨,在顴突的頭端12mm處開一約3x3mm的骨窗，暴露大腦中動脈(MCA)，將MCA灼斷,縫合切口。參考Bederson法給藥，處死動物，取右大腦半球，切成5片，置于2g/LNPT中37'C溫育15min染色,仔細(xì)挖取并稱重未被染成蘭色的白色梗塞腦組織，實驗結(jié)果見表5。表5不同藥物對大鼠腦梗塞保護(hù)情況組別給藥劑量動物數(shù)腦梗塞組織重量只mg生理鹽水10124.97±36.87本申請標(biāo)準(zhǔn)人參皂苷Rbt有效成分劑量組10.061053.97±20.01**本申請標(biāo)準(zhǔn)人參皂苷Rh有效成分劑量組20.061049,22±15.84**本申請標(biāo)準(zhǔn)人參皂苷Rh有效成分劑量組30.061045.27±12,58"本申請標(biāo)準(zhǔn)人參皂苷Rh有效成分劑量組40.061039.74±9.87**注與生理鹽水組比較"PO.01;實驗結(jié)論通過劑量篩選實驗表明，本申請人參皂苷RbJ道劑量增加藥理活性也加強(qiáng)，與很多藥物的藥理活性不同(大部分藥物隨劑量增加而藥理活性會到達(dá)一個平臺期，即劑量再增加而活性不增加)，隨著劑量增加活性一直增加，沒有平臺期，一直可以到出現(xiàn)毒性為止；經(jīng)過我們劑量篩選實驗和毒性實驗，確定木申18請人參皂苷的單位劑量為lmg—4000mg;優(yōu)選單位劑量為5mg—2000mg(劑量大于4000mg出現(xiàn)毒性反應(yīng)，小于lmg與模型組沒有顯著性差異)。本申請標(biāo)準(zhǔn)人參皂苷Rh有效成分與現(xiàn)有技術(shù)人參皂苷Rh("申請?zhí)枮?3127664.4的專利文獻(xiàn)<環(huán)保型人參皂苷Rt^高獲取量產(chǎn)業(yè)化分離>，該文獻(xiàn)公開了可以得到含量大于95X的人參皂苷Rbr等方法得到的)比較具有以下特點1、本申請將人參皂苷Rbi中含量較大的雜質(zhì)之一進(jìn)行的歸屬，確定了其是三七皂苷R2，進(jìn)一步明確了物質(zhì)基礎(chǔ)，而現(xiàn)有技術(shù)屮只是得到了一定含量的人參皂苷Rbp沒有進(jìn)行深入的研究，物質(zhì)基礎(chǔ)模糊；2、本申請標(biāo)注人參皂苷Rb,有效成分可以作為藥物制劑的原料，在臨床應(yīng)用中，發(fā)生任何不良反應(yīng)或副作用，因為物質(zhì)基礎(chǔ)較明確，特別是雜質(zhì)的明確可以在后續(xù)的藥物臨床研究中，明確出藥物本身成分引起的，還是藥物制劑制備過程中引入的無關(guān)物質(zhì)(比如熱源、污染等因素)造成的，有利于藥物的發(fā)展，而現(xiàn)有技術(shù)中的人參皂苷Rb,雖然是有效成分，但還存在著一定的暗箱，特別是發(fā)生不良反應(yīng)或副作用時，無法追索淵源，造成藥物發(fā)展的障礙(比如魚腥草注射液事件)；3、本申請在研究中，確定雜質(zhì)三七皂苷R2屬于既是有效雜質(zhì)又是有毒雜質(zhì)，并且限定了其范圍，在一定基礎(chǔ)上對有效成分人參皂苷Rb,具有協(xié)同作用，屬于有效雜質(zhì)，而現(xiàn)有技術(shù)只是明確了人參皂苷Rb,的含量，對其余物質(zhì)屬于有效雜質(zhì)、無效雜質(zhì)或有害雜質(zhì)一無所知，研究屬于起始階段。七、實施例實施例1一種人參皂苷Rbp人參皂苷R^含量97.31%，雜質(zhì)三七皂苷112含量0.99%。上述人參皂苷Rb作為藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。實施例2一種人參皂苷Rbp人參皂苷Rb,含量99.85%，雜質(zhì)三七皂苷R2含量0.01%。上述人參皂苷Rb,作為藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。實施例3一種人參皂苷Rb!，人參皂苷Rb,含量98.37%，雜質(zhì)三七皂苷R2含量0.50%。上述人參皂苷Rbi作為藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。實施例4一種人參皂苷Rb,，人參皂苷R1^含量97.14%,雜質(zhì)三七皂苷R2的含量0.35%。上述人參皂苷Rb,作為藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。實施例5一種人參皂苷Rb,，人參皂苷Rbt含量97.87%，雜質(zhì)三七皂苷R2的含量0.76%。上述人參皂苷R^作為藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。上述實施例1—5標(biāo)準(zhǔn)有效成分中三七皂苷R2為雜質(zhì)中含量較大之一，通過科學(xué)實驗將其分離，再通過系列實驗確定其結(jié)構(gòu)。上述實施例l一5標(biāo)準(zhǔn)有效成分可以由不同產(chǎn)地三七的根、莖、葉、花蕾中得到總皂苷，再經(jīng)過高效液相色譜制備方法進(jìn)行純化得到，也可以由硅膠柱層析進(jìn)行單體分離，高效液相色譜法控制終點得到，等等；實施例6取三七提取得到的三七總皂苷加水溶解，濾過，濾液通過HPD-400A大孔吸附樹脂柱，水洗、40%乙醇洗脫，洗脫液棄去，再用50%乙醇洗脫，收集50%洗脫液，干燥，干燥物用乙醇溶解，濾過，濾液加入丙酮，放置析出，濾過、干燥，得到人參皂苷Rbp三七提取總皂苷的方法根據(jù)現(xiàn)有專利文獻(xiàn)或科技文獻(xiàn)進(jìn)行制備。上述人參皂苷作為Rb,藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。實施例7取三七提取得到的三七總皂苷加水溶解，濾過，濾液通過HPD-400大孔吸附樹脂柱，水洗、40%乙醇洗脫，洗脫液棄去，再用50%乙醇洗脫，收集50%洗脫液，干燥，干燥物用95%乙醇溶解，濾過，濾液加入有機(jī)溶劑乙酸乙酯，放置析出，濾過、干燥，得到人參皂苷Rb,。所述三七總皂苷提取方法根據(jù)現(xiàn)有專利文獻(xiàn)或科技文獻(xiàn)進(jìn)行制備。上述人參皂苷Rb,作為藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。實施例8取三七提取得到總皂苷加水溶解，濾過，濾液通過HPD-300大孔吸附樹脂柱，水洗、40%乙醇洗脫，洗脫液棄去，再用50%乙醇洗脫，收集50%洗脫液，干燥，干燥物用正丁醇溶解，濾過，濾液加入有機(jī)溶劑丙酮、乙酸乙酯，放置析出，濾過、干燥，得到人參皂苷Rbi。所述三七總皂苷提取方法根據(jù)現(xiàn)有專利文獻(xiàn)或科技文獻(xiàn)進(jìn)行制備。上述人參皂苷作為藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。實施例9取三七提取得到的總皂苷加水溶解，濾過，濾液通過HPD-450大孔吸附樹脂柱，水洗、40%乙醇洗脫，洗脫液棄去，再用50%乙醇洗脫，收集50%洗脫液，干燥，千燥物用甲醇溶解，濾過，濾液加入有機(jī)溶劑丙酮，放置析出，濾過、干燥，得到人參皂苷Rb^所述三七總皂苷的提取方法可以通根據(jù)現(xiàn)有專利文獻(xiàn)或科技文獻(xiàn)進(jìn)行制備。上述人參皂苷Rt^作為藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。實施例10取三七總皂苷加水溶解，濾過，濾液通過HPD-100A大孔吸附樹脂柱，水洗、40%乙醇洗脫，洗脫液棄去，再用50%乙醇洗脫，收集50%洗脫液，干燥，干燥物用乙醇溶解，濾過，濾液加入有機(jī)溶劑乙酸乙酯，放置析出，濾過、干燥，得到人參皂苷R^。所述三七總皂苷根據(jù)現(xiàn)有專利文獻(xiàn)或科技文獻(xiàn)制備得到。上述人參皂苷Rb,作為藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。實施例11取三七總皂苷加水溶解，濾過，濾液通過D101大孔吸附樹脂柱，水洗、40%乙醇洗脫，洗脫液棄去，再用50%乙醇洗脫，收集50%洗脫液，干燥，干燥物用95%乙醇溶解，濾過，濾液加入有機(jī)溶劑丙酮，放置析出，濾過、干燥，得到人參皂苷Rb"所述三七總皂苷根據(jù)現(xiàn)有專利文獻(xiàn)或科技文獻(xiàn)制備得到。上述人參皂苷Rb,作為藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。實施例12取三七總皂苷加水溶解，濾過，濾液通過HPD-100A大孔吸附樹脂柱，水洗、40%乙醇洗脫，洗脫液棄去，再用50%乙醇洗脫，收集50%洗脫液，干燥，干燥物用正丁醇溶解，濾過，濾液加入有機(jī)溶劑丙酮、乙酸乙酯，放置析出，濾過、干燥，得到人參皂苷Rb,。所述三七總皂苷通過市售購買。上述人參皂苷Rb,作為藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。實施例13取三七總皂苷加水溶解，濾過，濾液通過1300-1大孔吸附樹脂柱，水洗、40%乙醇洗脫，洗脫液棄去，再用50Q^乙醇洗脫，收集50%洗脫液，干燥，干燥物用甲醇溶解，濾過，濾液加入有機(jī)溶劑乙酸乙酯，放置析出，濾過、干燥，得到人參皂昔Rbi。所述三七總皂苷根據(jù)現(xiàn)有專利文獻(xiàn)或科技文獻(xiàn)制備得到(楊崇仁、王國燕、伍明珠、等，三七蘆頭的皂甙成分，藥學(xué)通報，1985，20(6):337-338)。上述人參皂苷Rbi作為藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。實施例14取三七提取得到的總皂苷加水溶解，濾過，濾液通過HPD-100大孔吸附樹脂柱，水洗、40%乙醇洗脫，洗脫液棄去，再用50。％乙醇洗脫，收集50%洗脫液，干燥，干燥物用95%乙醇溶解，濾過，濾液加入有機(jī)溶劑乙酸乙酯，放置析出，濾過、干燥，得到人參皂苷Rb^所述三七總皂苷提取方法根據(jù)現(xiàn)有專利文獻(xiàn)或科技文獻(xiàn)制備得到。上述人參皂苷Rb,作為藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。實施例15取三七總皂苷加水溶解，濾過，濾液通過1400大孔吸附樹脂柱，水洗、40%乙醇洗脫，洗脫液棄去，再用50%乙醇洗脫，收集50%洗脫液，干燥，干燥物用95%乙醇溶解，濾過，濾液加入有機(jī)溶劑丙酮，放置析出，濾過、干燥，得到人參皂苷Rtu。所述三七總皂苷根據(jù)現(xiàn)有專利文獻(xiàn)或科技文獻(xiàn)制備得到。上述人參皂苷Rb,作為藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。實施例16取三七提取得到總皂苷加水溶解，濾過，濾液通過AB-8大孔吸附樹脂柱，水洗、40%乙醇洗脫，洗脫液棄去，再用50%乙醇洗脫，收集50%洗脫液，干燥，干燥物用JH丁醇溶解，濾過，濾液加入有機(jī)溶劑乙酸乙酯，放置析出，濾過、干燥，得到人參皂苷Rbp所述三七總皂苷提取方法根據(jù)現(xiàn)有專利文獻(xiàn)或科技文獻(xiàn)制備得到。上述人參皂苷R^作為藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。實施例17取三七提取得到總皂苷加水溶解，濾過，濾液通過AB-8大孔吸附樹脂柱，水洗、40%乙醇洗脫，洗脫液棄去，再用50%乙醇洗脫，收集50%洗脫液，干燥，干燥物用甲醇溶解，濾過，濾液加入有機(jī)溶劑乙酸乙酯，放置析出，濾過、干燥，得到人參皂苷Rbj。所述三七總皂苷根據(jù)現(xiàn)有專利文獻(xiàn)或科技文獻(xiàn)制備得到。上述人參皂苷Rb，作為藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。實施例18取三七總皂苷加水溶解，濾過，濾液通過HPD-100大孔吸附樹脂柱，水洗、40%乙醇洗脫，洗脫液棄去，再用50%乙醇洗脫，收集50%洗脫液，干燥，干燥物用甲醇溶解，濾過，濾液加入有機(jī)溶劑丙酮，放置析出，濾過、干燥，得到人參皂苷Rbi。所述三七總皂苷根據(jù)現(xiàn)有專利文獻(xiàn)或科技文獻(xiàn)制備得到(楊崇仁、王國燕、伍明珠、等，三七蘆頭的皂甙成分，藥學(xué)通報，1985，20(6):337-338;)。上述人參皂苷Rb,作為藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。實施例19取三七總皂苷加水溶解，濾過，濾液通過AB-8大孔吸附樹脂柱，水洗、40%乙醇洗脫，洗脫液棄去，再用50%乙醇洗脫，收集50%洗脫液，干燥，干燥物用乙醇溶解，濾過，濾液加入有機(jī)溶劑乙酸乙酯，放置析出，濾過、干燥，得到人參皂苷Rbp所述三七總皂苷通過市售購買，上述人參皂苷Rbi作為藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。實施例20取三七提取得到的三七總皂苷加水溶解，濾過，濾液通過1400大孔吸附樹脂柱，水洗、40%乙醇洗脫，洗脫液棄去，再用50%乙醇洗脫，收集50%洗脫液，干燥，干燥物用乙醇溶解，濾過，濾液放置析出，濾過、干燥，得到人參皂苷Rbi。所述三七總皂苷制備方法根據(jù)現(xiàn)有專利文獻(xiàn)或科技文獻(xiàn)進(jìn)行制備；上述人參皂苷Rb,作為藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。實施例21取三七提取得到的三七總皂苷加水溶解，濾過，濾液通過HPD-100A大孔吸附樹脂柱，水洗、40%乙醇洗脫，洗脫液棄去，再用50%乙醇洗脫，收集50%洗脫液，干燥，干燥物用95%乙醇溶解，濾過，濾液放置析出，濾過、干燥，得到人參皂苷Rb,。所述人參總皂苷提取方法根據(jù)現(xiàn)有專利文獻(xiàn)或科技文獻(xiàn)制備得到。上述人參皂苷Rl^作為藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。實施例22取三七提取得到總皂苷加水溶解，濾過，濾液通過1300-1大孔吸附樹脂柱，水洗、40%乙醇洗脫，洗脫液棄去，再用50%乙醇洗脫，收集50%洗脫液，干燥，干燥物用正丁醇溶解，濾過，濾液放置析出，濾過、干燥，得到人參皂苷Rbp所述三七總皂苷提取方法根據(jù)現(xiàn)有專利文獻(xiàn)或科技文獻(xiàn)制備得到。上述人參皂苷RbJ乍為藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。實施例2325取三七提取得到的總皂苷加水溶解，濾過，濾液通過D101大孔吸附樹脂柱，水洗、40%乙醇洗脫，洗脫液棄去，再用50%乙醇洗脫，收集50%洗脫液，干燥，干燥物用甲醇溶解，濾過，濾液放置析出，濾過、干燥，得到人參皂苷Rbi。所述三七總皂苷的提取方法可以通根據(jù)現(xiàn)有專利文獻(xiàn)或科技文獻(xiàn)制備得到。上述人參皂苷Rb,作為藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。實施例24取三七總皂苷加水溶解，濾過，濾液通過HPD-300大孔吸附樹脂柱，水洗、40%乙醇洗脫，洗脫液棄去，再用50%乙醇洗脫，收集50%洗脫液，干燥，干燥物用乙醇溶解，濾過，濾液放置析出，濾過、干燥，得到人參皂苷Rbp所述三七總皂苷根據(jù)現(xiàn)有專利文獻(xiàn)或科技文獻(xiàn)制備得到。上述人參皂苷Rh作為藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。實施例25取三七總皂苷加水溶解，濾過，濾液通過HPD-450大孔吸附樹脂柱，水洗、40%乙醇洗脫，洗脫液棄去，再用50%乙醇洗脫，收集50%洗脫液，干燥，干燥物用95%乙醇溶解，濾過，濾液放置析出，濾過、干燥，得到人參皂苷Rbp所述三七總皂苷根據(jù)現(xiàn)有專利文獻(xiàn)或科技文獻(xiàn)制備得到。上述人參皂苷Rb，作為藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。實施例26取三七提取得到總皂苷加水溶解，濾過，濾液通過HPD-400大孔吸附樹脂柱，水洗、40%乙醇洗脫，洗脫液棄去，再用50%乙醇洗脫，收集50%洗脫液，干燥，干燥物用正丁醇溶解，濾過，濾液放置析出，濾過、干燥，得到人參皂苷Rbp所述三七總皂苷提取方法根據(jù)現(xiàn)有文獻(xiàn)制備得到。上述人參皂苷Rb,作為藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。實施例27取三七提取得到總皂苷加水溶解，濾過，濾液通過HPD-400大孔吸附樹脂柱，水洗、40%乙醇洗脫，洗脫液棄去，再用50%乙醇洗脫，收集50。/。洗脫液，干燥，干燥物用甲醇溶解，濾過，濾液放置析出，濾過、干燥，得到人參皂苷Rb,。所述三七總皂苷根據(jù)現(xiàn)有專利文獻(xiàn)或科技文獻(xiàn)制備得到。上述人參皂苷Rb,作為藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。實施例28取三七提取得到的總皂苷加水溶解，濾過，濾液通過HPD-100A大孔吸附樹脂柱，水洗、40%乙醇洗脫，洗脫液棄去，再用50%乙醇洗脫，收集50%洗脫液，干燥，干燥物用95%乙醇溶解，濾過，濾液放置析出，濾過、干燥，得到人參皂苷Rb丄。所述三七總皂苷提取方法根據(jù)現(xiàn)有專利文獻(xiàn)或科技文獻(xiàn)進(jìn)行制備。上述三七皂苷Rb,作為藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。實施例29取三七總皂苷加水溶解，濾過，濾液通過HPD-400大孔吸附樹脂柱，水洗、40%乙醇洗脫，洗脫液棄去，再用50%乙醇洗脫，收集50%洗脫液，干燥，干燥物用95%乙醇溶解，濾過，濾液放置析出，濾過、干燥，得到人參皂苷Rb,。所述三七總皂苷根據(jù)現(xiàn)有專利文獻(xiàn)或科技文獻(xiàn)制備得到。上述人參皂苷作為Rb，藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。實施例30取三七提取得到總皂苷加水溶解，濾過，濾液通過HPD-450大孔吸附樹脂柱，水洗、40%乙醇洗脫，洗脫液棄去，再用50%乙醇洗脫，收集50%洗脫液，干燥，干燥物用正丁醇溶解，濾過，濾液放置析出，濾過、干燥，得到人參皂苷Rbp所述三七總皂苷提取方法根據(jù)現(xiàn)有專利文獻(xiàn)或科技文獻(xiàn)進(jìn)行制備。上述人參皂苷Rbi作為藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。實施例31取三七提取得到總皂苷加水溶解，濾過，濾液通過1300-1大孔吸附樹脂柱，水洗、40%乙醇洗脫，洗脫液棄去，再用50%乙醇洗脫，收集50%洗脫液，干燥，干燥物用甲醇溶解，濾過，濾液放置析出，濾過、干燥，得到人參皂苷Rb,。所述三七總皂苷根據(jù)現(xiàn)有專利文獻(xiàn)或科技文獻(xiàn)制備得到。上述人參皂苷Rb,作為藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。實施例32取三七總皂苷加水溶解，濾過，濾液通過AB-8大孔吸附樹脂柱，水洗、40%乙醇洗脫，洗脫液棄去，再用50%乙醇洗脫，收集50%洗脫液，干燥，干燥物用甲醇溶解，濾過，濾液放置析出，濾過、干燥，得到人參皂苷Rbp所述三七總皂苷根據(jù)現(xiàn)有專利文獻(xiàn)或科技文獻(xiàn)制備得到。上述人參皂苷作為藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。實施例33取三七總皂苷加水溶解，濾過，濾液通過D101大孔吸附樹脂柱，水洗、40%乙醇洗脫，洗脫液棄去，再用50%乙醇洗脫，收集50%洗脫液，干燥，干燥物用乙醇溶解，濾過，濾液放置析出，濾過、干燥，得到人參皂苷R^。所述三七總皂苷通過市售購買，上述人參皂苷作為Rb,藥物原料，可以制備成藥劑學(xué)上可以接受的藥物制劑。上述實施例5—33得到人參皂苷R^有效成分中，人參皂苷Rh含量大于等于卯％且小于100%，雜質(zhì)三七皂苷R2的含量大于0且小于1%;或者人參皂苷Rbj含量大于等于90%且小于100%，雜質(zhì)三七皂苷112的含量大于等于0.01%且小于等于0.50%;上述實施例1一33的人參皂苷Rb,為活性物質(zhì)制備的藥物制劑，其中單位劑量為lmg—4000mg。上述實施例1一33上述人參皂苷Rt^為活性物質(zhì)制備的藥物制劑，其中單位劑量為5mg—2000mg。上述人參皂苷Rb在制備治療和/或預(yù)防心腦血管疾病、休克、腫瘤、衰老、記憶力減退藥物中的應(yīng)用。上述三七可以為不同產(chǎn)地的三七根、莖、葉、花蕾。注:本發(fā)明所要求保護(hù)的具體技術(shù)方案，不限于上述實施例所表達(dá)的技術(shù)方案的具體組合。權(quán)利要求1、一種人參皂苷Rb1，人參皂苷Rb1含量大于等于90％且小于100％，雜質(zhì)含量大于0且小于等于10％，其特征在于雜質(zhì)包括三七皂苷R2，三七皂苷R2含量大于0且小于1％。2、根據(jù)權(quán)利要求l所述的一種人參皂苷Rbp其中雜質(zhì)二七皂苷R2的含量大于等于0.01%且小于等于0.50%。3、根據(jù)權(quán)利要求l一2任一項所述的一種人參皂苷Rbp其制備方法為取三七提取得到的總皂苷，總皂苷加水溶解，濾過，濾液通過非極性或弱極性大孔吸附樹脂柱，水洗、40%乙醇洗脫，洗脫液棄去，再用50。％乙醇洗脫，收集50%洗脫液，干燥，干燥物用乙醇、95%乙醇、正丁醇或甲醇溶解，濾過，濾液加入或者不加入有機(jī)溶劑，放置析出，濾過、干燥，得到人參皂苷Rh。4、根據(jù)權(quán)利要求l一2任一項所述的一種人參皂苷Rb,，其分析檢測方法為采用高效液相色譜法進(jìn)行檢測分析；色譜柱<:18反相色譜柱；色譜條件與系統(tǒng)適用性實驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流速1.0ml/min;柱溫25";檢測波長203nm;理論板數(shù)按人參皂苷Rb!計應(yīng)不低于2500;以水乙腈為流動相，按下述梯度洗脫條件進(jìn)行梯度洗脫，運(yùn)行60分鐘；0—40分鐘時，水的比例由80%降至50%，已腈的比例由20%升至50%;40_43分鐘時，水的比例由50%降至20%，已腈的比例由50%升至80%;43—48分鐘時，保持水的比例為20%，保持已腈的比例為80%;48—50分鐘時，水比例由20%升至80%，水的比例由80%降至20°/。；50_60分鐘保持水的比例為20%，已腈的比例80%;對照品溶液的配制精密稱取人參皂苷R^對照品到容量瓶中，加甲醇溶解搖勻，并稀釋至刻度；供試品溶液的配制精密稱取或量取樣品到容量瓶中加甲醇溶解搖勻，并稀釋至刻度；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各，注入液相色譜儀，采用按外標(biāo)法以峰面積計算，即得。5、根據(jù)權(quán)利要求1一2任一項所述的一種人參皂苷Rb,為活性物質(zhì)制備的單位劑量的藥物制劑。6、根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種人參皂苷Rbp其中制備方法中所述的非極性或弱極性大孔樹脂為HPD-100、HPD-100A、HPD-300、HPD-400、HPD-400A、HPD-450、DlOl、1300-1、1400或AB-8。7、根據(jù)權(quán)利耍求3所述的一種人參皂苷Rbi，其中制備方法中所述的有機(jī)溶劑為丙酮、乙酸乙酯中的一種或兩種。8、根據(jù)權(quán)利要求5所述的種人參皂苷Rh為活性物質(zhì)制備的藥物制劑，其中單位劑量為lmg—4000mg。9、根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種人參皂苷Rbi為活性物質(zhì)制備的藥物制劑，其中單位劑量為5mg—2000mg。10、根據(jù)權(quán)利要求l一2任一項所述的一種人參皂苷Rbi在制備治療和/或預(yù)防心腦血管疾病、腫瘤、休克、記憶力減退藥物中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明公開了一種標(biāo)準(zhǔn)人參皂苷Rb₁有效成分，包括含量大于等于90％且小于100％的人參皂苷Rb₁，其特征在于雜質(zhì)三七皂苷R₂含量大于0且小于1％；或者雜質(zhì)三七皂苷R₂的含量大于等于0.01％且小于等于0.5％；藥理實驗表明，本申請標(biāo)準(zhǔn)有效成分具有很好的藥理作用，可以制備成藥劑學(xué)上藥物制劑。文檔編號A61P9/00GK101422497SQ200710176668公開日2009年5月6日申請日期2007年11月1日優(yōu)先權(quán)日2007年11月1日發(fā)明者嚴(yán)劉,李志剛,渠守峰,米長江,丹許,郭小鵬,金治剛,阮愛華,群顧申請人:北京本草天源藥物研究院