專利名稱：一種黃芪注射液的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種黃芪注射液的制備方法，屬于中藥制劑領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
黃芪為中藥益氣藥，現(xiàn)已證實對機(jī)體的免疫功能有促進(jìn)作用。實驗表明，黃芪能顯著地增強(qiáng)網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的吞噬功能，其作用強(qiáng)度與卡介苗相近，黃芪與黨參合用，其增強(qiáng)網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬功能的作用尤為顯著，較卡介苗為強(qiáng)。又具有細(xì)胞免疫功能增強(qiáng)作用，能促進(jìn)健康人淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的功能，大多數(shù)乙型肝炎病人在獲得療效的同時SK—SD皮試轉(zhuǎn)陽和增強(qiáng)。服用黃芪可明顯提高人體白細(xì)胞誘生干擾素的功能，且見易感冒患者鼻分泌中IgA和lgG的含量上升。黃芪及其提取物可使小鼠血漿環(huán)磷腺苷(cAMP)水平提高，這可能與其提高干擾素的含量有關(guān)。動物試驗可見白細(xì)胞及多核白細(xì)胞明顯地增加。
臨床研究表明，黃芪注射液可用于各種類型的肝炎病人，尤適用于細(xì)胞免疫功能降低的慢性持續(xù)性肝炎(CPH)和慢性活動性肝炎(CAH)的病人，可增進(jìn)食欲，改善肝功能，增強(qiáng)細(xì)胞免疫，降低乙型肝炎表面抗原(HBsAg)滴度或使之轉(zhuǎn)陰。用于典型脾虛癥狀的慢性氣管炎患者，大部分病人20天內(nèi)脾虛癥狀改善。實驗研究表明，黃芪對小鼠I型副流感病毒感染有輕度保護(hù)作用，經(jīng)人群試驗確證黃芪有防治感冒的效果。與黨參配伍腎炎蛋白尿有治療作用。臨床上常用防已苓薈湯治療腎炎，這可能與其能抑制變態(tài)反應(yīng)，又能增強(qiáng)機(jī)體抵抗力有關(guān)。黃芪也常用于白細(xì)胞減少以及血小板減少性紫癜。
因此，有關(guān)黃芪提取工藝的報道有不少。比如，專利文獻(xiàn)99106225.6，發(fā)明名稱一種精制黃芪注射液制備工藝，其取黃芪通過煎煮、過濾、濃縮、然后醇沉3次，濃度為70％、80％、85％、每次醇沉后冷藏0℃放置數(shù)小時、回收乙醇并濃縮、用注射用水稀釋，冷藏至0-4℃，放置24小時、過濾、用20％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值、煮沸加入活性炭、再加20％氫氧化鈉溶液，調(diào)節(jié)pH值、最后過濾、灌封、滅菌、質(zhì)檢、包裝而成。該申請只采用了醇沉，使所得濃縮液純度低，制劑顏色深，雖然進(jìn)行多次醇沉處理，但也不能很好的大幅度地去除雜質(zhì)。
專利文獻(xiàn)03114789.5，發(fā)明名稱黃芪注射液及其制備方法，黃芪在水中煎煮，過濾，減壓濃縮濾液，加入乙醇靜置，過濾，減壓濃縮，加水稀釋，冷藏，過濾，減壓濃縮，用大孔樹脂進(jìn)行分離，收集洗脫液；用水稀釋，加入L-精氨酸，調(diào)節(jié)pH至7.0～7.5，加入活性炭，過濾脫炭，加水稀釋，即獲得黃芪注射液。并可加水稀釋至40g黃芪生藥/250ml，滲透壓為300mosm左右，黃芪甲甙量不低于8mg/250ml，灌裝于250ml輸液瓶中，加膜壓蓋，滅菌。該申請采用先醇沉后上樹脂柱洗脫的工藝，所得濃縮液因樹脂的降解物和致孔劑等可能污染提取物的物質(zhì)不能被有效除去，因而雜質(zhì)也多。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種黃芪注射液的制備方法，該方法獲得的提取物純度高，應(yīng)用安全。
為了實現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明的一種黃芪注射液的制備方法，其包括如下步驟1)黃芪切片，加入生藥4～12倍量的水，45～65℃浸30～60分鐘，煮沸1～3小時；濾出，加生藥2～10倍量的水，煮沸0.5～2小時；合并濾液，冷卻，靜置1～5小時，過濾，冷卻至30℃以下；2)然后上樹脂柱浸30～60分鐘，以18～21升/分鐘的流速過柱吸附，以樹脂3～5倍量的純化水沖柱，以樹脂1～3倍量的20～40％乙醇沖柱，再以樹脂1～3倍量的純化水沖柱，最后以樹脂4～5倍量的60～85％乙醇浸30～60分鐘，以15～16.5升/分鐘流速洗脫；
3)收集洗脫液，過濾，回收乙醇至無醇味，并濃縮至相對密度1.14～1.18(80℃±2測)；加入高醇使含醇量達(dá)到75～85％，室溫靜置12～24小時，濾膜過濾，回收乙醇至無醇味；加注射用水至每1ml含原生藥2～4g，攪拌溶解，調(diào)pH值至3.0～4.0，灌裝滅菌，冷凍至結(jié)冰，0～6℃冷藏5～9天；4)將冷藏液經(jīng)微孔濾膜過濾，調(diào)pH 7.5～9.5，加0.05～0.5％活性炭煮15～25分鐘，待溫度下降至50℃以下，過濾，灌裝滅菌；冷凍至結(jié)冰后，于陰涼干燥處或室溫放置15～30天；5)然后先粗濾，再經(jīng)微孔濾膜過濾，并超濾后得超濾液；將其與40℃以下的超濾后的注射用水合并，調(diào)pH值7.5～10.0，再補(bǔ)加超濾后的注射用水至每1ml含原生藥2g；待藥液冷卻至30℃以下精濾，灌裝滅菌即得。
優(yōu)選的步驟為1)黃芪切片，加入生藥4～8倍量的水，50～60℃浸30～50分鐘，煮沸1.5～2小時；濾出，加生藥2～6倍量的水，煮沸1～2小時；合并濾液，冷卻，靜置1～3小時，過濾，冷卻至30℃以下；2)然后上樹脂柱浸30～50分鐘，以18～21升/分鐘的流速過柱吸附，以樹脂3～4倍量的純化水沖柱，以樹脂1～2倍量的30～40％乙醇沖柱，再以樹脂1～2倍量的純化水沖柱，最后以樹脂4～5倍量的70～85％乙醇浸30～50分鐘，以15～16.5升/分鐘流速洗脫；3)收集洗脫液，過濾，回收乙醇至無醇味，并濃縮至相對密度1.14～1.18(80℃±2測)；加入高醇使含醇量達(dá)到80～85％，室溫靜置12～18小時，濾膜過濾，回收乙醇至無醇味；加注射用水至每1ml含原生藥2g，攪拌溶解，調(diào)pH值至3.0～3.5，灌裝滅菌，冷凍至結(jié)冰，0～6℃冷藏7～9天；4)將冷藏液經(jīng)微孔濾膜過濾，調(diào)pH 8.0～9.0，加0.1～0.3％活性炭煮15～20分鐘，待溫度下降至50℃以下，過濾，灌裝滅菌；冷凍至結(jié)冰后，于陰涼干燥處或室溫放置15～20天；5)然后先粗濾，再經(jīng)微孔濾膜過濾，并超濾后得超濾液；將其與4 0℃以下的超濾后的注射用水合并，調(diào)pH值7.5～9.5，再補(bǔ)加超濾后的注射用水至每1ml含原生藥2g；待藥液冷卻至30℃以下精濾，灌裝滅菌即得。
其中，步驟3)中濾膜采用0.45～0.65μm孔徑的濾膜。
步驟4)中微孔濾膜采用0.2～0.45μm孔徑的。
步驟5)中微孔濾膜采用0.2μm孔徑的；超濾采用6000～10000分子量的超濾器；精濾采用0.2μm微孔濾膜和筒式除菌濾器。
滅菌可采用在110～120℃高壓下處理20～40分鐘。
本發(fā)明黃芪注射液的制備方法采用先上柱洗脫再醇沉，能更好的去除鞣質(zhì)、蛋白質(zhì)等大分子雜質(zhì)，并通過醇沉將樹脂的降解物和致孔劑等可能污染提取物的樹脂殘留除去，所得濃縮液的純度更高，應(yīng)用更安全。
具體實施例方式
以下實施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。
實施例1黃芪切片(厚度為2-4mm)，加入生藥8倍量的水，60℃溫浸30分鐘，煮沸1.5小時。濾出，加生藥6倍量的水，煮沸1小時。
合并濾液，冷卻，靜置1小時，過濾，冷卻至30℃以下，上大孔吸附樹脂柱浸30分鐘，以18升/分鐘的流速過柱吸附，以樹脂3倍量的純化水沖柱，然后以樹脂1倍量的30％乙醇沖柱，再以樹脂1倍量的純化水沖柱，最后以樹脂4倍量的70％乙醇浸30分鐘，以15升/分鐘流速洗脫。收集洗脫液，過濾，回收乙醇至無醇味，并濃縮至相對密度1.16±0.02(80℃±2測)。
加入高醇使含醇量達(dá)到85％，室溫靜置12小時，0.45μm濾膜過濾，回收乙醇至無醇味。加注射用水至每1ml含原生藥2g，攪拌溶解，調(diào)pH值至3.2，灌裝，115℃高壓滅菌40分鐘，冷凍至結(jié)冰，0℃冷藏7天。
將冷藏液經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾，用氫氧化鈉溶液調(diào)pH 9.0，加0.1％活性炭煮15分鐘，待溫度下降至50℃以下，過濾，經(jīng)115℃滅菌40分鐘。冷凍至結(jié)冰后及時取出緩化，于室溫放置半個月。
用200目絹布過濾，然后經(jīng)0.2μm微孔濾膜過濾，經(jīng)6000分子量超濾器超濾后得超濾液。再將其與40℃以下的超濾后的注射用水合并，用10％NaOH調(diào)pH值9.5，再補(bǔ)加超濾后的注射用水至每1ml含原生藥2g。待藥液冷卻至30℃以下經(jīng)0.2μm微孔濾膜、筒式除菌濾器精濾，灌裝滅菌即得。
實施例2黃芪切片(厚度為2-4mm)，加入生藥6倍量的水，50℃溫浸60分鐘，煮沸1小時。濾出，加生藥4倍量的水，煮沸2小時。
合并濾液，冷卻，靜置2小時，過濾，冷卻至30℃以下，上大孔吸附樹脂柱浸50分鐘，以20升/分鐘的流速過柱吸附，以樹脂3倍量的純化水沖柱，然后以樹脂2倍量的30％乙醇沖柱，再以樹脂2倍量的純化水沖柱，最后以樹脂5倍量的60％乙醇浸60分鐘，以16.5升/分鐘流速洗脫。收集洗脫液，過濾，回收乙醇至無醇味，并濃縮至相對密度1.16±0.01(80℃±2測)。
加入高醇使含醇量達(dá)到75％，室溫靜置16小時，0.65μm濾膜過濾，回收乙醇至無醇味。加注射用水至每1ml含原生藥4g，攪拌溶解，調(diào)pH值至3.5，灌裝，120℃高壓滅菌30分鐘，冷凍至結(jié)冰，6℃冷藏5天。
將冷藏液經(jīng)0.2μm微孔濾膜過濾，用氫氧化鈉溶液調(diào)pH 8.0，加0.3％活性炭煮20分鐘，待溫度下降至50℃以下，過濾，經(jīng)120℃滅菌20分鐘。冷凍至結(jié)冰后及時取出緩化，置陰涼干燥處半個月。
用200目絹布過濾，然后經(jīng)0.2μm微孔濾膜過濾，經(jīng)8000分子量卷膜式超濾器超濾后得超濾液。再將其與40℃以下的超濾后的注射用水合并，用10％NaOH調(diào)pH值7.7，定容。待藥液冷卻至30℃以下經(jīng)0.2μm微孔濾膜、筒式除菌濾器精濾，灌裝滅菌即得。
實施例3黃芪切片(厚度為2-4mm)，加入生藥4倍量的水，65℃溫浸40分鐘，煮沸2小時。濾出，加生藥2倍量的水，煮沸0.5小時。
合并濾液，冷卻，靜置5小時，過濾，冷卻至30℃以下，上大孔吸附樹脂柱浸40分鐘，以21升/分鐘的流速過柱吸附，以樹脂4倍量的純化水沖柱，然后以樹脂3倍量的20％乙醇沖柱，再以樹脂3倍量的純化水沖柱，最后以樹脂4倍量的85％乙醇浸40分鐘，以16升/分鐘流速洗脫。收集洗脫液，過濾，回收乙醇至無醇味，并濃縮至相對密度1.16±0.02(80℃±2測)。
加入高醇使含醇量達(dá)到80％，室溫靜置20小時，0.55μm濾膜過濾，回收乙醇至無醇味。加注射用水至每1ml含原生藥3g，攪拌溶解，調(diào)pH值至3.0，灌裝，110℃高壓滅菌30分鐘，冷凍至結(jié)冰，0℃冷藏9天。
將冷藏液經(jīng)0.35μm微孔濾膜過濾，用氫氧化鈉溶液調(diào)pH 9.5，加0.5％活性炭煮25分鐘，待溫度下降至50℃以下，過濾，經(jīng)115℃滅菌40分鐘。冷凍至結(jié)冰后及時取出緩化，室溫放置20天。
用200目絹布過濾，然后經(jīng)0.2μm微孔濾膜過濾，經(jīng)10000分子量超濾器超濾后得超濾液。再將其與40℃以下超濾后的注射用水合并，用10％NaOH調(diào)pH值7.5，定容。待藥液冷卻至30℃以下經(jīng)0.2μm微孔濾膜、筒式除菌濾器精濾，灌裝滅菌即得。
實施例4黃芪切片，加入生藥12倍量的水，45℃溫浸30分鐘，煮沸1小時；濾出，加生藥10倍量的水，煮沸2小時。
合并濾液，冷卻，靜置3小時，過濾，冷卻至30℃以下，上大孔吸附樹脂柱浸60分鐘，以18升/分鐘的流速過柱吸附，以樹脂5倍量的純化水沖柱，然后以樹脂2倍量的40％乙醇沖柱，再以樹脂1倍量的純化水沖柱，最后以樹脂5倍量的65％乙醇浸50分鐘，以15升/分鐘流速洗脫。收集洗脫液，過濾，回收乙醇至無醇味，并濃縮至相對密度1.16±0.01(80℃±2測)。
加入高醇使含醇量達(dá)到75％，室溫靜置24小時，0.45μm濾膜過濾，回收乙醇至無醇味。加注射用水至每1ml含原生藥2g，攪拌溶解，調(diào)pH值至4.0，灌裝，115℃高壓滅菌40分鐘，冷凍至結(jié)冰，2℃冷藏7天。
將冷藏液經(jīng)0.20μm微孔濾膜過濾，用氫氧化鈉溶液調(diào)pH 7.5，加0.05％活性炭煮15分鐘，待溫度下降至50℃以下，過濾，經(jīng)120℃滅菌30分鐘。冷凍至結(jié)冰后及時取出緩化，置陰涼干燥處30天。
用200目絹布過濾，然后經(jīng)0.2μm微孔濾膜過濾，經(jīng)80000分子量超濾器超濾后得超濾液。再將其與40℃以下的超濾后的注射用水合并，用10％NaOH調(diào)pH值10.0，定容。待藥液冷卻至30℃以下經(jīng)0.2μm微孔濾膜、筒式除菌濾器精濾，灌裝滅菌即得。
實驗例本試驗例在于研究黃芪注射液的純度與安全性。
1)鞣質(zhì)的檢查取黃芪注射液2ml，加新配制的含1％雞蛋清的生理氯化鈉溶液5ml，放置15分鐘，未出現(xiàn)混濁。
2)蛋白質(zhì)的檢查取黃芪注射液1ml，加新配制的30％磺基水楊酸溶液1ml，混勻，放置5分鐘，未出現(xiàn)混濁。
3)D-101大孔吸附樹脂有機(jī)溶劑殘留的檢查采用頂空氣相色譜法進(jìn)行檢測，未檢出正己烷、苯、甲苯、對二甲苯、鄰二甲苯、苯乙烯和二乙烯苯等殘留物。
4)異常毒性檢查取小鼠5只，每只小鼠靜脈注射黃芪注射液0.5ml。5只小鼠在給藥后48小時內(nèi)未死亡。
5)溶血與凝聚檢查依法檢查(中國藥典2005年版一部附錄XVIII B)，無溶血與凝聚現(xiàn)象發(fā)生。
采用本發(fā)明的制備方法得到的提取物純度更高，應(yīng)用更安全。
雖然，上文中已經(jīng)用一般性說明及具體實施方案對本發(fā)明作了詳盡的描述，但在本發(fā)明基礎(chǔ)上，可以對之作一些修改或改進(jìn)，這對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。因此，在不偏離本發(fā)明精神的基礎(chǔ)上所做的這些修改或改進(jìn)，均屬于本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。
權(quán)利要求
1.一種黃芪注射液的制備方法，其特征在于，其包括如下步驟1)黃芪切片，加入生藥4～12倍量的水，45～65℃浸30～60分鐘，煮沸1～3小時；濾出，加生藥2～10倍量的水，煮沸0.5～2小時；合并濾液，冷卻，靜置1～5小時，過濾，冷卻至30℃以下；2)然后上樹脂柱浸30～60分鐘，以18～21升/分鐘的流速過柱吸附，以樹脂3～5倍量的純化水沖柱，以樹脂1～3倍量的20～40％乙醇沖柱，再以樹脂1～3倍量的純化水沖柱，最后以樹脂4～5倍量的60～85％乙醇浸30～60分鐘，以15～16.5升/分鐘流速洗脫；3)收集洗脫液，過濾，回收乙醇至無醇味，并濃縮至相對密度1.14～1.18(80℃±2測)；加入高醇使含醇量達(dá)到75～85％，室溫靜置12～24小時，濾膜過濾，回收乙醇至無醇味；加注射用水至每1ml含原生藥2～4g，攪拌溶解，調(diào)pH值至3.0～4.0，灌裝滅菌，冷凍至結(jié)冰，0～6℃冷藏5～9天；4)將冷藏液經(jīng)微孔濾膜過濾，調(diào)pH 7.5～9.5，加0.05～0.5％活性炭煮15～25分鐘，待溫度下降至50℃以下，過濾，灌裝滅菌；冷凍至結(jié)冰后，于陰涼干燥處或室溫放置15～30天；5)然后先粗濾，再經(jīng)微孔濾膜過濾，并超濾后得超濾液；將其與40℃以下的超濾后的注射用水合并，調(diào)pH值7.5～10.0，再補(bǔ)加超濾后的注射用水至每1ml含原生藥2g；待藥液冷卻至30℃以下精濾，灌裝滅菌即得。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的黃芪注射液的制備方法，其特征在于，其包括如下步驟1)黃芪切片，加入生藥4～8倍量的水，50～60℃浸30～50分鐘，煮沸1.5～2小時；濾出，加生藥2～6倍量的水，煮沸1～2小時；合并濾液，冷卻，靜置1～3小時，過濾，冷卻至30℃以下；2)然后上樹脂柱浸30～50分鐘，以18～21升/分鐘的流速過柱吸附，以樹脂3～4倍量的純化水沖柱，以樹脂1～2倍量的30～40％乙醇沖柱，再以樹脂1～2倍量的純化水沖柱，最后以樹脂4～5倍量的70～85％乙醇浸30～50分鐘，以15～16.5升/分鐘流速洗脫；3)收集洗脫液，過濾，回收乙醇至無醇味，并濃縮至相對密度1.14～1.18(80℃±2測)；加入高醇使含醇量達(dá)到80～85％，室溫靜置12～18小時，濾膜過濾，回收乙醇至無醇味；加注射用水至每1ml含原生藥2g，攪拌溶解，調(diào)pH值至3.0～3.5，灌裝滅菌，冷凍至結(jié)冰，0～6℃冷藏7～9天；4)將冷藏液經(jīng)微孔濾膜過濾，調(diào)pH 8.0～9.0，加0.1～0.3％活性炭煮15～20分鐘，待溫度下降至50℃以下，過濾，灌裝滅菌；冷凍至結(jié)冰后，于陰涼干燥處或室溫放置15～20天；5)然后先粗濾，再經(jīng)微孔濾膜過濾，并超濾后得超濾液；將其與40℃以下的超濾后的注射用水合并，調(diào)pH值7.5～9.5，再補(bǔ)加超濾后的注射用水至每1ml含原生藥2g；待藥液冷卻至30℃以下精濾，灌裝滅菌即得。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的黃芪注射液的制備方法，其特征在于，步驟3)中濾膜采用0.45～0.65μm孔徑的濾膜。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任意一項所述的黃芪注射液的制備方法，其特征在于，步驟4)中微孔濾膜采用0.2～0.45μm孔徑的。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任意一項所述的黃芪注射液的制備方法，其特征在于，步驟5)中微孔濾膜采用0.2μm孔徑的。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5任意一項所述的黃芪注射液的制備方法，其特征在于步驟5)中超濾采用6000～10000分子量的超濾器。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-6任意一項所述的黃芪注射液的制備方法，其特征在于，精濾采用0.2μm微孔濾膜和筒式除菌濾器。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種黃芪注射液的制備方法，其采用水煮、上柱洗脫和醇沉等步驟；該制備方法能更好的去除鞣質(zhì)、蛋白質(zhì)等雜質(zhì)，并通過醇沉將樹脂的降解物和致孔劑等可能污染提取物的樹脂殘留除去，所得濃縮液的純度更高，應(yīng)用更安全。
文檔編號A61P31/00GK101049339SQ20071009911
公開日2007年10月10日 申請日期2007年5月11日 優(yōu)先權(quán)日2007年5月11日
發(fā)明者方同華 申請人:黑龍江省珍寶島制藥有限公司