專利名稱：巖藻聚糖在治療粘連、關(guān)節(jié)炎和牛皮癬中的用途的制作方法
本申請(qǐng)是中國(guó)專利申請(qǐng)02816693.0的分案申請(qǐng)，原申請(qǐng)的申請(qǐng)日是2002年8月29日，發(fā)明名稱是“巖藻聚糖在治療粘連、關(guān)節(jié)炎和牛皮癬中的用途”。
相關(guān)申請(qǐng)的交互參照本申請(qǐng)要求2001年8月29日提交的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)編號(hào)為60/315,362的優(yōu)先權(quán)。
背景技術(shù)：
手術(shù)粘連是一種瘢痕，其通常于手術(shù)后在身體的兩部分之間形成。粘連能引起嚴(yán)重的問題。例如，涉及女性生殖器官(卵巢、輸卵管)的粘連能引起不育、性交困難(性交痛苦)和嚴(yán)重的骨盆疼痛。腸中發(fā)生的粘連能夠引起腸梗阻或者堵塞，粘連還可以在其他地方如心臟、脊柱周圍和手形成。除了手術(shù)，其他原因如子宮內(nèi)膜異位癥、感染、化學(xué)治療、輻射和癌癥也可引起粘連。
粘連和其他血管生成相關(guān)疾病如關(guān)節(jié)炎和牛皮癬可以持續(xù)數(shù)周、數(shù)月或數(shù)年，需要長(zhǎng)期和高昂的照料。見Cotran，R.S.，Kumar，V.，Robbins，S.L.撰寫的Robbins Pathological Basis of Disease，第75頁(W.B.SaundersCo.，1989)。這些疾病和癥狀能夠發(fā)展成慢性炎癥，對(duì)病人的心理和生理健康造成可怕的后果。不幸的是，對(duì)于患有手術(shù)粘連、關(guān)節(jié)炎和牛皮癬的病人幾乎沒有治療選擇。通常對(duì)病人用藥物如類固醇或非類固醇消炎藥物治療以減輕疾病的癥狀。然而，這些治療不可能提供足夠的長(zhǎng)期的好處并且如果使用太頻繁可能還會(huì)導(dǎo)致嚴(yán)重的副作用(如非類固醇消炎藥物導(dǎo)致的胃潰瘍或者過度使用類固醇類導(dǎo)致的較嚴(yán)重毒性)。其他更強(qiáng)的抗增殖和/或抗血管生成藥物如抗癌藥物紫杉醇、氨甲蝶呤、阿霉素、喜樹堿和依托泊苷可以提供積極的治療形式，但是對(duì)不威脅生命的疾病使用這些藥物受到不希望有的毒性和副作用的限制。
這樣，對(duì)治療一種或多種這些疾病需要優(yōu)選地更有效且副作用更小的化合物、組合物和方法等(包括遞送方法)，該需要還未滿足。本發(fā)明的化合物、組合物、方法等提供了這些長(zhǎng)處中的一種或多種。
發(fā)明概述含有巖藻聚糖、尤其是巖藻依聚糖(fucoidan)的組合物和方法用于治療手術(shù)粘連、關(guān)節(jié)炎和牛皮癬。巖藻聚糖對(duì)這些疾病的每一種都提供了顯著的療效和低的副作用。
在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了治療動(dòng)物(可以是人或其他所需要的受試者)體內(nèi)粘連的方法，其包括對(duì)可能患有粘連的疾病位點(diǎn)施用治療有效量的巖藻聚糖(可以是巖藻依聚糖)。該疾病位點(diǎn)可以是手術(shù)位點(diǎn)，巖藻聚糖可以作為組合物直接施用于疾病位點(diǎn)。巖藻聚糖通過從聚合物劑型的控釋可基本上連續(xù)地施用于疾病位點(diǎn)，聚合物劑型可以是膜劑、貼劑、糊劑、微球體、植入物、凝膠劑、噴霧劑或液體制劑?？梢詫r藻聚糖作為藥物組合物施用，該藥物組合物為包含至少一種霜?jiǎng)?、糊劑、可注射賦形劑和聚合物的形式。(除非另外說明或者在上下文中很清楚，所有的實(shí)施方案、方面、特征等可以以任何想要的方式混合和匹配、組合和排列。)可以將巖藻聚糖作為含有巖藻聚糖和治療有效量的至少一種其他藥物的藥物組合物施用。該藥物可以是紫杉醇、阿霉素、喜樹堿、依托泊苷、米托蒽醌、氨甲蝶呤、甲萘醌、藍(lán)雪醌、胡桃醌、β-laperchone、環(huán)孢菌素、柳氮磺吡啶、類固醇、雷帕霉素、維甲類(retinoid)、多西他賽(docetaxel)和秋水仙堿、反義寡核苷酸、核酶中的至少一種。治療有效量的巖藻聚糖可以作為組合物的一部分遞送，并且?guī)r藻聚糖可以占組合物的約0.1％到35％、5％到50％、20-80％、80％-100％(w/v)。
該組合物還可以包含至少一種可藥用賦形劑，如普朗尼克(pluronic)、纖維素、藻酸鹽、丙烯酸鹽、透明質(zhì)酸、聚乙二醇、可注射賦形劑和脫乙酰殼多糖。巖藻聚糖可以口服施用、直接施用至疾病位點(diǎn)、通過眼內(nèi)、腹膜內(nèi)、肌內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、損傷內(nèi)、皮下、陰道內(nèi)、直腸或者局部注射至疾病位點(diǎn)、或者以其他希望的方式施用。
在另一方面，方法包括治療關(guān)節(jié)炎、牛皮癬或者血管生成性眼病，包括向疾病位點(diǎn)施用有療效量的巖藻聚糖。
在另一方面，本發(fā)明提供了包含巖藻聚糖的聚合物劑型的藥物組合物，所述巖藻聚糖的聚合物劑型包含治療有效量的巖藻聚糖和至少一種可藥用賦形劑，該賦形劑選自普朗尼克、藻酸鹽、丙烯酸鹽、透明質(zhì)酸、聚乙二醇、可注射的賦形劑和脫乙酰殼多糖。聚合物劑型可以是膜劑、糊劑、微球體、噴霧劑、洗劑、液體制劑或植入物或所希望的其他形式。該藥物組合物也可以包含治療有效量的至少一種其他藥物，如反義寡核苷酸、核酶和寡核苷酸RNA抑制劑。
該組合物可以如所希望的那樣用于制造治療粘連(如手術(shù)粘連)、關(guān)節(jié)炎、牛皮癬或其他疾病的藥物。還提供了生產(chǎn)能夠減輕與病人粘連、關(guān)節(jié)炎和牛皮癬中的至少一種相關(guān)的癥狀的藥物的方法，該生產(chǎn)方法包括組合藥學(xué)上有效量的巖藻聚糖如巖藻依聚糖、可藥用賦形劑或緩沖劑。
在本申請(qǐng)中提出了這些和其他方面、特征和實(shí)施方案，包括下面的“詳述”和附圖。而且，在此處包括在“相關(guān)申請(qǐng)的交互參照”中提出了討論某些系統(tǒng)、儀器、方法和其他信息的各種參考文獻(xiàn)；在此完整引入所有這些參考文獻(xiàn)和所有它們的教導(dǎo)和公開作為參考，不管參考文獻(xiàn)在本申請(qǐng)的何處出現(xiàn)。
附圖簡(jiǎn)述

圖1是48小時(shí)接觸后在滑膜細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞中巖藻依聚糖對(duì)細(xì)胞增殖的抑制圖。
圖2是巖藻依聚糖對(duì)佛波肉豆蔻酸酯(PMA)誘導(dǎo)的中性粒細(xì)胞活化的抑制圖。
圖3是描述濃度為0.5％(w/v)的巖藻依聚糖對(duì)膠原酶和溶基質(zhì)素表達(dá)的抑制而不過分抑制蛋白聚糖表達(dá)的照片。
圖4是巖藻依聚糖從乙烯乙酸乙烯酯膜劑的釋放圖。
圖5是巖藻依聚糖從聚己酸內(nèi)酯糊劑的釋放圖。
發(fā)明詳述本發(fā)明包括組合物和方法，該方法包括用已知為巖藻聚糖的硫酸化多糖抑制細(xì)胞增殖、炎性反應(yīng)和血管生成的方法，并且可用于治療手術(shù)粘連、關(guān)節(jié)炎和牛皮癬。似乎巖藻聚糖如巖藻依聚糖可以抑制中性粒細(xì)胞活化、抑制炎性酶從關(guān)節(jié)炎相關(guān)細(xì)胞的釋放和抑制雞膜和手術(shù)粘連中血管生成。既然所有細(xì)胞都含有巖藻糖結(jié)合受體，在一些實(shí)施方案中，將巖藻聚糖直接遞送到疾病位點(diǎn)通過從聚合物劑型的控釋以提供目標(biāo)組織與巖藻聚糖(如巖藻依聚糖)的基本連續(xù)的接觸。由于巖藻聚糖有多種體內(nèi)效應(yīng)(尤其是影響血液凝血酶和補(bǔ)體)，巖藻聚糖的定點(diǎn)控釋是全身施用的備選方案，其可降低血液毒性。
下面將首先一般性地討論巖藻聚糖、粘連、關(guān)節(jié)炎和牛皮癬，然后討論本發(fā)明的一些實(shí)施方案，然后提供一些實(shí)施例。
對(duì)巖藻聚糖、粘連、關(guān)節(jié)炎和牛皮癬的一般性背景討論巖藻聚糖巖藻聚糖(包括巖藻依聚糖)是從褐海藻中提取的高分子量硫酸化多糖。已報(bào)道這些化合物具有多種體內(nèi)和體外抑制作用，包括抗凝血酶、抗增殖、抗補(bǔ)體、抗癌和抗中性粒細(xì)胞遷移效果。巖藻聚糖可以阻斷細(xì)胞表面的各種結(jié)合事件，所述結(jié)合事件包括通過整合蛋白-選擇蛋白分子的細(xì)胞-細(xì)胞結(jié)合，巖藻聚糖或者通過結(jié)合血液中凝血酶或者補(bǔ)體或者細(xì)胞表面的巖藻糖受體而阻斷細(xì)胞表面的結(jié)合事件。
認(rèn)為這些活性決定著消炎特性，因?yàn)檫@些活性通過(例如)抑制淋巴細(xì)胞或中性粒細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞的結(jié)合而可防止這些細(xì)胞在發(fā)炎后隨后侵入組織腔隙中。Patankar，M.S.等，J.Biol.Chem.26821770-21776(1993)；Brandley，B.K.，等，J.Cell Biol.105991-997(1987)。最近的研究也表明巖藻聚糖抑制血管平滑肌細(xì)胞的增殖，Logeart，D.等，Eur.J.Cell Biol.74376-384 & 385-390(1997)，指出(但沒證明)這些化合物可能的抗再狹窄的潛力。還表明巖藻聚糖在結(jié)合到內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞表面后，慢慢在細(xì)胞中內(nèi)化。Glabe，C.G.等，J.Cell Science 61475-490(1983)；Logeart，D.等，Eur.J.Cell Biol.74376-384(1997)。
Riou，D.等，Anticancer Res.，16(3A)1213-1218(1996)；Itoh，H.，Anticancer Res.，13(6A)2045-2052(1993)；Nishiro，T.等，Thromb.Res.，62765-773(1991)；Blondin，C.等，Mol.Immunol.，31247-253(1994)；Patankar，M.S.等，J.Biol.Chem.，26821770-21776(1993)。在日本，從各種海藻中提取的巖藻依聚糖被作為健康食品出售。還提出巖藻依聚糖可作為化妝品或者護(hù)膚品。JP 01031707和JP 01085905。據(jù)報(bào)道巖藻依聚糖是潛在的抗癌劑。Riou.D.，Anticancer Res.163a 1213-18(1996)；Itoh，H.，等，Anticancer Res.，155b 1937-47(1995)。據(jù)報(bào)道巖藻依聚糖在體外不抑制血管生成。Soeda，S.等，Biochim.Biophysica Acta(1)127-134(2000)。類似地，發(fā)現(xiàn)巖藻依聚糖刺激血清誘導(dǎo)的HUVE細(xì)胞增殖(體外)，表明可能的前生血管作用(盡管當(dāng)存在成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子時(shí)可能抑制)。Giraux，J.當(dāng)，Eur.J.Cell Biol.774352-9(1998)。研究還表明巖藻聚糖抑制內(nèi)皮細(xì)胞單層結(jié)合。Glabe，C.G.，J.Cell Science，61475-490(1983)。由于組成毛細(xì)管的細(xì)胞是內(nèi)皮細(xì)胞，該報(bào)道表明體外細(xì)胞粘連的某些方面可被抑制，但是這些數(shù)據(jù)不能證明巖藻依聚糖的任何體內(nèi)抗血管生成效果。據(jù)報(bào)道巖藻依聚糖抑制螺旋桿菌(helicobacter)與胃細(xì)胞的結(jié)合，暗示其抗胃潰瘍效果。Shibat，H.J.，Nutr.Sci.Vitaminol.45325-336(1999)。
其他包括支鏈和直鏈類型的硫酸化多糖被報(bào)道具有不同抗凝血活性。Pereira，M.S.，J.Biol.Chem.127656-67(1999)。已報(bào)道葡聚糖硫酸酯及其衍生物抑制癌細(xì)胞生長(zhǎng)(Bittoun，P.，Carbohydrate Res.(3-4)247-255(1999))并且具有抗凝血效果(Mauray，S.，J.Biomat. Sci.Poly ed.9373-87(1998))。已提出將硫酸化多糖作為抗病毒劑以用于抗例如AIDS。EP00293826；JP 01313433。
粘連粘連形成是一個(gè)復(fù)雜的過程，其中在身體中正常分開的組織長(zhǎng)在一起。手術(shù)粘連(也叫做術(shù)后粘連)從組織的不正常傷口愈合應(yīng)答發(fā)展為創(chuàng)傷而來并且在大于2/3的所有腹部手術(shù)病人中發(fā)生。Ellis，H.，Surg.Gynecol.Obstet.133497(1971)；Wiebel，M-A.和Majno，G.，Am.J.Surg.126345(1973)。這些粘連的后果不同，取決于所涉及的手術(shù)部位。問題可包括疼痛、不育、腸梗阻，甚至是心臟手術(shù)后死亡危險(xiǎn)的增加。diZerega，G.S.，Prog.Clin.Biol.Res.3811-18(1993)；diZerega，G.S.，F(xiàn)ertil.Steril.61219-235(1994)；Dobell，A.R.，Jain，A.K.，Ann.Thorac.Surg.37273-278(1984)。
粘連形成的過程最初包括纖維蛋白構(gòu)架的建立和正常的組織修復(fù)。正常的修復(fù)過程允許纖維蛋白溶解與間皮修復(fù)。然而，在手術(shù)粘連形成中，隨著成纖維細(xì)胞增生成為網(wǎng)絡(luò)和發(fā)生血管生成，纖維蛋白基質(zhì)成熟，導(dǎo)致在3到5天內(nèi)有組織的粘連的建立。Buckman，R.F.等，J.Surg.Res.2167-76(1976)；Raferty，A.T.，J.Anat.129659-664(1979)。
炎癥過程包括受傷組織中中性粒細(xì)胞的活化、纖維蛋白沉積和鄰近組織的結(jié)合、巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)、成纖維細(xì)胞增生到該區(qū)域、膠原沉積、血管生成和永久粘連組織的建立。現(xiàn)今，預(yù)防性治療包括預(yù)防纖維蛋白的沉積、減輕炎癥(類固醇和非類固醇消炎藥物)和纖維蛋白沉積的去除。
預(yù)防術(shù)后粘連形成的干預(yù)性措施包括使用水漂浮(hydroflotation)技術(shù)或屏障設(shè)備。水漂浮法涉及到滴注大體積的聚合物溶液如葡聚糖(粘連研究小組，F(xiàn)ertil.Steril.40612-619(1983))或者羧甲基纖維素(Elkins，T.E.等，F(xiàn)ertil.Steril.41926-928(1984))到手術(shù)空間以使器官保持分開。由氧化再生纖維素(InterceedTM)制備的合成屏障膜、聚四氟乙烯(Gore-tex手術(shù)膜)和從經(jīng)修飾的透明質(zhì)酸/羧甲基纖維素(HA/CMC)組合物(SeprafilmTM)制備的完全再吸收膜也被用于降低動(dòng)物和人術(shù)后粘連的形成。Burns，J.W.等，Eur.J.Surg.Suppl.57740-48(1997)；Burns，J.W.等，F(xiàn)ertil.Steril.66814-821(1996)；Becket，J.M.等，J.Am.Coll.Surg.183297-306(1996)。這些HA/CMC膜的成功可能是因?yàn)樗鼈兡軌蛟诟鼓谛迯?fù)過程(此時(shí)粘連形成)使組織分開。發(fā)現(xiàn)應(yīng)用后3-5天(該時(shí)間期和術(shù)后粘連形成的時(shí)程相匹配)膜在受傷組織上形成清楚的粘性薄層。Ellis，H.，Br.J.Surg.5010-16(1963)。消炎劑如地塞米松或皮質(zhì)類甾醇的腹膜內(nèi)施用產(chǎn)生了對(duì)粘連形成勉強(qiáng)夠格的抑制。diZerega，G.S.Fertil.Steril.61219-235(1994)；Hocker，M.Ann.Chir.Gynecol.76306-313(1987)。
關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)炎(如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，RA)是一種使人衰弱的慢性炎性疾病，其影響世界人口的幾乎2％。該癥狀特征是疼痛、腫脹、滑膜細(xì)胞增殖(血管翳形成)、血管生成和關(guān)節(jié)組織的破壞。在晚期，該疾病通常損害關(guān)鍵器官并且可以是致命的。該疾病涉及到免疫系統(tǒng)的多個(gè)成員(巨噬細(xì)胞/單核細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、B細(xì)胞和T細(xì)胞)、復(fù)雜的細(xì)胞因子相互作用和滑膜細(xì)胞功能失常和增殖?，F(xiàn)在推薦用減輕疾病的抗風(fēng)濕藥物(DMARDS)如氨甲蝶呤和與環(huán)孢菌素或硫唑嘌呤的組合進(jìn)行早期積極治療。Arthritis andRheumatism，39(5)713-722(1996)。
晶體誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎侵襲約1％的人口，其特征是在關(guān)節(jié)中晶體誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞活化，然后是許多天的劇痛。該疾病的惡化導(dǎo)致陣痛的間隔縮短，病人的發(fā)病率增加到不可接受的水平。通常用NSAID治療該疾病的癥狀。對(duì)于該疾病和其他形式的炎癥性關(guān)節(jié)炎的病理生理的更詳細(xì)討論見，McCarty等人撰寫的關(guān)節(jié)炎及同類疾病(Arthritis and AlliedConditions)，Lea和Febiger，費(fèi)城1495(1985)。
牛皮癬牛皮癬是一種常見的慢性炎性皮膚病，其特征是增高的、變厚的有鱗的損傷，該損傷容易發(fā)癢、有灼燒感、刺痛和流血。大于2％的美國(guó)人患有牛皮癬，并且病人通常患有伴隨的關(guān)節(jié)炎癥狀。該疾病的病因還不清楚，現(xiàn)今還不能治愈該疾病。有證據(jù)支持其是自身免疫疾病。該疾病的其他特征是中性粒細(xì)胞活化、細(xì)胞增殖和血管形成。
皮膚細(xì)胞可遵循兩條生長(zhǎng)途徑正常生長(zhǎng)和傷口愈合。在正常生長(zhǎng)中，細(xì)胞在基底層產(chǎn)生并向上移動(dòng)穿過表皮，到達(dá)皮膚表面。死細(xì)胞以和下面新生細(xì)胞相同的速度從表面脫落。傷口愈合期間，引發(fā)加速的生長(zhǎng)和修復(fù)，導(dǎo)致皮膚細(xì)胞的快速更新、增加的血液供給和炎癥。在一些方面，牛皮癬是擴(kuò)大的傷口愈合過程。如果皮膚脫落皮膚細(xì)胞(角質(zhì)細(xì)胞)不像這些細(xì)胞產(chǎn)生的那么快，那么將發(fā)生集結(jié)。這可導(dǎo)致有鱗損傷和血管生成(以增加血液供給)。同時(shí)，淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞可引起疼痛、腫脹和炎癥。現(xiàn)今的藥物治療包括類固醇和非類固醇消炎劑的使用以治療炎性癥狀。也使用氨甲蝶呤和環(huán)孢菌素，它們具有勉強(qiáng)夠格的療效。在美國(guó)現(xiàn)今治療牛皮癬的費(fèi)用為每年超過30億美元。
一般性的討論本發(fā)明提供了巖藻聚糖(包括其衍生物和類似物)以治療或預(yù)防手術(shù)粘連、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和牛皮癬(其中此處所用治療包括治療現(xiàn)存的疾病和抑制潛在的疾病)。如下面的實(shí)施例闡明的，巖藻聚糖(尤其是巖藻依聚糖)抑制包括例如在手術(shù)粘連中的細(xì)胞增殖、炎性反應(yīng)/事件和血管生成。
在一個(gè)實(shí)施方案中，使用巖藻聚糖(如巖藻依聚糖)抑制或預(yù)防血管生成。在另一個(gè)實(shí)施方案中，巖藻聚糖(如巖藻依聚糖)被用于抑制或預(yù)防炎性細(xì)胞活化，這樣在疾病位點(diǎn)引發(fā)炎性反應(yīng)的細(xì)胞被抑制。這是重要的，例如，因?yàn)樵S多疾病如骨關(guān)節(jié)炎不一定和疾病位點(diǎn)的炎性細(xì)胞聚積有關(guān)。這樣，巖藻聚糖的使用可以抑制或預(yù)防定居巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和其他炎癥引發(fā)細(xì)胞的長(zhǎng)時(shí)間的活化，這種長(zhǎng)時(shí)間的活化導(dǎo)致該疾病的慢性有害影響。在本文中，這些巖藻聚糖的活性被應(yīng)用于手術(shù)粘連、關(guān)節(jié)炎和牛皮癬。
在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，可以將巖藻聚糖(包括其衍生物和類似物)制成控釋制劑以在疾病位點(diǎn)提供持續(xù)有效濃度的該藥物。在另一個(gè)實(shí)施方案中，巖藻依聚糖被用于治療手術(shù)粘連。本文提供了實(shí)施例。這些實(shí)施例證明了巖藻依聚糖針對(duì)來自新生軟骨的初級(jí)軟骨細(xì)胞(參與類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的細(xì)胞)的抑制性作用。這表明該藥物可能作為抗關(guān)節(jié)炎藥物。尤其是，當(dāng)膠原酶和溶基質(zhì)素和/或其他金屬蛋白酶的釋放導(dǎo)致醫(yī)療問題時(shí)巖藻依聚糖明顯的抑制膠原酶和溶基質(zhì)素產(chǎn)生的能力提供了治療方法。
在其他實(shí)施方案中，可以將巖藻依聚糖和其他治療藥物組合使用以得到抗該疾病過程的更好的療效和低的毒性。例如，在治療手術(shù)粘連時(shí)，強(qiáng)抗增殖藥物(如阿霉素、喜樹堿、依托泊苷、米托蒽醌、氨甲蝶呤、甲萘醌、藍(lán)雪醌、胡桃醌、β-laperchone、環(huán)孢菌素、柳氮磺吡啶、類固醇、雷帕霉素、維甲類、紫杉醇、多西他賽、秋水仙堿和其他微管抑制劑)及它們的其他類似物和衍生物在沒有巖藻聚糖存在時(shí)于抑制粘連過程所需的藥物濃度下可能具有有害的毒性，但是它們可以在低濃度下和巖藻聚糖(如巖藻依聚糖)組合得到所需效果。
在另一個(gè)實(shí)施方案中提出巖藻聚糖自身可以是藥物的劑型。例如，可以將巖藻聚糖制成可直接放在手術(shù)創(chuàng)傷區(qū)表面的薄膜劑，以便巖藻聚糖的緩慢溶解使組織暴露于持續(xù)而有效的藥物濃度。實(shí)際上，該制劑可以作為自身(作為活性劑)或者可以置于該制劑中的其他藥物(如紫杉醇)的控釋藥物遞送系統(tǒng)。還可以將巖藻聚糖制成片劑、膠囊劑、微球體、糊劑、凝膠劑、粉劑、氣霧劑的形式或者作為固體或溶液經(jīng)口或者經(jīng)直腸給藥。
通常，可以將巖藻聚糖單獨(dú)或者作為組合物的部分施用，可通過作為糊劑、凝膠劑、噴霧劑、微粒劑、膜劑、溶液、液體制劑、洗劑、霜?jiǎng)┗蛑踩胛飸?yīng)用或者注射。施用途徑和施用部位包括經(jīng)口施用、全身施用、眼內(nèi)、皮下、腹膜內(nèi)、肌內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、損傷內(nèi)、陰道內(nèi)、直腸或局部施用(如在貼劑中)。在某些情況下，這些途徑還可以是建議的巖藻聚糖或巖藻聚糖藥物組合劑型的作用位點(diǎn)。治療有效量的巖藻聚糖可以作為組合物的一部分遞送，并且可以占組合物的約5％到50％、20-80％、80％-100％(w/v)。巖藻聚糖可以在合適的容器中提供，接下來可以將其在藥盒中提供并提供一個(gè)標(biāo)簽，優(yōu)選地該標(biāo)簽是經(jīng)相應(yīng)的政府管理機(jī)構(gòu)如美國(guó)食品及藥品管理局的批準(zhǔn)。
為了治療粘連，可以將巖藻聚糖或含有巖藻聚糖的組合物作為溶液、微粒劑、懸浮劑、膜劑、糊劑、凝膠劑、噴霧劑、液體制劑、洗劑、植入物或其他想要的形式直接應(yīng)用于疾病或手術(shù)部位。還可以用靜脈內(nèi)、皮下、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、經(jīng)口的或其他想要的施用途徑通過全身遞送巖藻聚糖治療粘連。為了治療關(guān)節(jié)炎，可以將巖藻聚糖或含有巖藻聚糖的組合物作為糊劑、凝膠劑、噴霧劑、液體制劑、洗劑、溶液、懸浮劑或其他想要的形式直接注射入關(guān)節(jié)?？梢杂渺o脈內(nèi)、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、皮下或經(jīng)口施用途徑通過全身遞送巖藻聚糖治療或預(yù)防關(guān)節(jié)炎。
在一些方面，本發(fā)明提供了治療眼的血管生成性疾病。例如，糖尿病性視網(wǎng)膜病變是糖尿病的潛在致瞎性并發(fā)癥，其破壞視網(wǎng)膜的血管后長(zhǎng)出新的血管(血管生成)而導(dǎo)致視覺模糊或者視網(wǎng)膜破壞。黃斑變性由視網(wǎng)膜下面新血管的入侵導(dǎo)致，是美國(guó)和歐洲致瞎的主要原因，在美國(guó)每年有200,000個(gè)新病例，其中只有15％可用現(xiàn)今的激光療法治療。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了使用適用于眼的本文中所討論的方法和組合物治療這些疾病的藥學(xué)途徑。例如，巖藻聚糖可以直接應(yīng)用于眼表面或注射到眼中。這些系統(tǒng)的改進(jìn)包括化學(xué)交聯(lián)以減緩劑型的溶解速率或者和其他賦形劑如普朗尼克、藻酸鹽、丙烯酸鹽、纖維素、透明質(zhì)酸、聚乙二醇、脫乙酰殼多糖(包括它們的類似物和衍生物)以及多種其他可藥用制劑混合。
又在另一實(shí)施方案中，巖藻聚糖與帶正電荷的賦形劑(例如，脫乙酰殼多糖或者聚-l-賴氨酸)形成帶電荷的水性凝膠劑。藥物(例如，反義寡核苷酸、核酶和寡核苷酸RNA抑制劑)可以摻入這種凝膠劑中以應(yīng)用于疾病部位。備選地，可以將這種含有藥物的凝膠劑或者溶于巖藻聚糖溶液的藥物干燥并研磨成顆粒。這些顆粒可以應(yīng)用于疾病位點(diǎn)以作為控釋劑型，或者，該顆?？梢宰鳛檗D(zhuǎn)染劑，因?yàn)榻Y(jié)合巖藻聚糖的表面被攝入細(xì)胞中。通過使用可藥用賦形劑如普朗尼克、纖維素、藻酸鹽、丙烯酸鹽、透明質(zhì)酸、聚乙二醇、脫乙酰殼多糖、可注射賦形劑(包括它們的類似物和衍生物)的賦形劑和多種基于聚合物的載體進(jìn)一步有利于這些顆粒的應(yīng)用。
對(duì)于轉(zhuǎn)染和含有核酸序列的巖藻聚糖藥物的使用，已知為基因治療的藥物前沿受到藥物遞送問題的限制，因?yàn)榛蚱位蚝怂徭?，如寡核苷?包括核酶、反義核苷酸和寡核苷酸RNA抑制劑)的細(xì)胞攝取由于這些化合物的電荷和大分子量而受到抑制。最近，有人提出使用含有基因或核酸的微粒劑(如磷酸鈣)作為轉(zhuǎn)染劑以便它們結(jié)合到細(xì)胞表面并被胞吞或者內(nèi)陷作用攝入，導(dǎo)致該基因或核酸進(jìn)入細(xì)胞。大多數(shù)細(xì)胞在膜表面上含有巖藻糖受體。本發(fā)明提供了巖藻聚糖作為核酸鏈轉(zhuǎn)染劑的用途。在一個(gè)實(shí)施方案中，核酸鏈可以結(jié)合或包封于巖藻依聚糖微粒劑中，并且可以對(duì)顆粒進(jìn)行化學(xué)交聯(lián)以在應(yīng)用于目標(biāo)細(xì)胞位點(diǎn)前抑制其溶解。
巖藻聚糖不管是單獨(dú)地或者和其他藥物組合，都可以與其他植入身體的材料組合。這些材料包括，但不限于，各種醫(yī)療設(shè)備如導(dǎo)管、分流器、膜、斯坦特固定模、海綿、填充劑、人工替換的關(guān)節(jié)及其部分和其他整形外科相關(guān)植入物。這些植入物可以含有巖藻聚糖或者用巖藻聚糖包衣，其中所述的巖藻聚糖可以是單獨(dú)使用的或者與其他藥物和賦形劑組合的。
除非另外指出，除了在權(quán)利要求書中，“或”的用法包括“和”，反之亦然。除非特別指明或者上下文中清楚地指出，否則不將非限定性術(shù)語理解為限定。(例如，“包括”、“具有”和“包含”通常表示“包括但不局限于”。)除非特別指明或者上下文中清楚地指出，否則單數(shù)形式(包括在權(quán)利要求書中)，如“一個(gè)”和“這個(gè)”包括復(fù)數(shù)意思。
本系統(tǒng)和方法等的范圍包括方法加功能和步驟加功能的概念。然而，如果“方法”一詞沒有特別在權(quán)利要求書中陳述，本申請(qǐng)中提出的該術(shù)語在權(quán)利要求書中不應(yīng)解釋為表示“方法加功能”的關(guān)系，當(dāng)“方法”一詞在權(quán)利要求書中特別陳述時(shí)，應(yīng)該在權(quán)利要求書中將這些術(shù)語解釋為表示“方法加功能”的關(guān)系。類似地，如果“步驟”一詞沒有特別在權(quán)利要求書中陳述，本申請(qǐng)中提出的該術(shù)語在權(quán)利要求書中不應(yīng)在方法權(quán)利要求中解釋為表示“步驟加功能”的關(guān)系，當(dāng)“步驟”一詞在權(quán)利要求書中特別陳述時(shí)，應(yīng)該在權(quán)利要求書中將這些術(shù)語解釋為表示“步驟加功能”的關(guān)系。
實(shí)施例實(shí)施例1巖藻依聚糖對(duì)滑膜細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞體外增殖的影響用二甲基噻唑二苯基四唑溴化鹽(MTT)增殖/細(xì)胞毒性測(cè)定法測(cè)定增殖。
第一天，在96孔板上每孔鋪1500-2000個(gè)平滑肌細(xì)胞(A7r5大鼠胚胸主動(dòng)脈)或者滑膜細(xì)胞(HIG.82兔)，使第一列無細(xì)胞(空白)。將板置于37℃CO2培養(yǎng)箱中。第二天加入各種濃度的巖藻依聚糖。第一列(空白)和第二列(未處理的列)不加巖藻依聚糖用于對(duì)照。將細(xì)胞暴露48小時(shí)。在暴露期的后期，加入溶于培養(yǎng)基的50μl二甲基噻唑二苯基四唑溴化鹽(MTT)并在37℃下孵育4小時(shí)。然后，吸出培養(yǎng)基并加入200μl二甲基亞砜(DMSO)。搖動(dòng)平板30分鐘并在562nm讀吸光度。用已知細(xì)胞數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)光密度圖將所測(cè)光密度轉(zhuǎn)化成細(xì)胞數(shù)，細(xì)胞的存活力表達(dá)為％生長(zhǎng)(該值為與對(duì)照細(xì)胞比較的％)。
如圖1所示，48小時(shí)的暴露后，巖藻依聚糖對(duì)滑膜細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞都誘導(dǎo)了依賴于濃度的細(xì)胞增殖的抑制。對(duì)增殖具有50％影響的抑制濃度(IC50)分別為15μM和6μM。
實(shí)施例2巖藻依聚糖對(duì)佛波肉豆蔻酸酯(PMA)誘導(dǎo)的中性粒細(xì)胞化學(xué)發(fā)光的影響該實(shí)驗(yàn)將新鮮制備的人中性粒細(xì)胞與0.5％(w/v)巖藻依聚糖孵育后用PMA刺激細(xì)胞。細(xì)胞的刺激(或者活化)導(dǎo)致超氧化物陰離子的產(chǎn)生，其可通過光發(fā)射(化學(xué)發(fā)光)測(cè)量。這樣，通過化學(xué)發(fā)光的抑制測(cè)定中性粒細(xì)胞功能的抑制。在整個(gè)研究中使用pH7.4的Hanks緩沖的鹽溶液(HBSS)。除非另外說明，所有化學(xué)藥品都購(gòu)自Sigma Chemical Co.(St.Louis，MO)。所有實(shí)驗(yàn)都在37℃下進(jìn)行。中性粒細(xì)胞從新鮮收集的人檸檬酸緩沖的全血制備。簡(jiǎn)要地說，將400ml血與80ml溶于HBSS的4％的葡聚糖T500(Pharmacia LKB，Biotechnology AB Uppsala，Sweden)混合并靜置1小時(shí)。不斷收集血漿并取5ml加入15ml聚丙烯管(Corning，NY)中的5ml菲可帕克(Ficoll Paque)(Pharmacia)。500×g離心30分鐘后，洗滌中性粒細(xì)胞沉淀，通過20秒低滲休克使無紅血球。將中性粒細(xì)胞重懸于HBSS中，冰上保持并在3小時(shí)內(nèi)用于實(shí)驗(yàn)。中性粒細(xì)胞的存活力和純度總是大于90％。
在37℃下用各種濃度的巖藻依聚糖孵育細(xì)胞15分鐘后加入PMA。
在PMA為0.5μM、細(xì)胞濃度為5×106個(gè)細(xì)胞/ml的HBSS中進(jìn)行化學(xué)發(fā)光研究。向管中加入10μL溶于在HBSS中的25％DMSO的魯米諾使其終濃度為1mM，混合樣品以開始中性粒細(xì)胞的活化。在37℃下用LKB發(fā)光計(jì)(Model 1250)檢測(cè)化學(xué)發(fā)光，測(cè)量前立即搖動(dòng)。對(duì)照管含有細(xì)胞、巖藻依聚糖和魯米諾。
如圖2所示，巖藻依聚糖強(qiáng)烈抑制PMA誘導(dǎo)的中性粒細(xì)胞的活化。數(shù)據(jù)來自三次獨(dú)立的PMA-中性粒細(xì)胞孵育。這些數(shù)據(jù)證明了巖藻依聚糖的消炎效果。
實(shí)施例3巖藻依聚糖對(duì)IL-1誘導(dǎo)的軟骨細(xì)胞中膠原酶基因和溶基質(zhì)素基因表達(dá)的影響該分析中測(cè)量?jī)蓚€(gè)金屬蛋白酶——膠原酶和溶基質(zhì)素的RNA水平。這些基因的過表達(dá)導(dǎo)致這兩種酶從關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞中分泌出來并且這兩種基因的過表達(dá)可代表類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的部分病理生理。抑制膠原酶和溶基質(zhì)素過表達(dá)的藥物是潛在的抗關(guān)節(jié)炎藥物。如果該藥物還顯著抑制蛋白聚糖基因表達(dá)，那么其抗關(guān)節(jié)炎潛力就降低了。蛋白聚糖基因表達(dá)是軟骨細(xì)胞正常生理的一部分。原代軟骨細(xì)胞培養(yǎng)物為從小牛軟骨新鮮分離。將細(xì)胞鋪在100×20mm培養(yǎng)皿中(2.5×106/ml)并在含有5％胎牛血清(FBS)的Ham’s F12培養(yǎng)基中于37℃下孵育過夜。用無血清的培養(yǎng)基饑餓細(xì)胞過夜。用濃度為10-6M、10-7M和10-8M的喜樹堿預(yù)處理細(xì)胞6小時(shí)。然后向每個(gè)平板中加入IL-1(20ng/ml)并繼續(xù)孵育平板18小時(shí)。通過酸化的異硫氰酸胍法分離總RNA并在變性凝膠上進(jìn)行電泳。通過在1％的變性凝膠中的電泳分析變性RNA樣品(15μg)，將其轉(zhuǎn)移到尼龍膜上，并分別用32P標(biāo)記的膠原酶cDNA探針、32P標(biāo)記的溶基質(zhì)素cDNA探針、32P標(biāo)記的蛋白聚糖cDNA探針和32P標(biāo)記的甘油醛磷酸脫氫酶(PAGDH)cDNA雜交。PAGDH水平作為內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)以確保基本相等的加樣。掃描X光片上的實(shí)驗(yàn)結(jié)果并用HP ScanJet分析。
如圖3所示，巖藻依聚糖在濃度為0.5％(w/v)時(shí)完全抑制膠原酶和溶基質(zhì)素的表達(dá)而不過分抑制蛋白聚糖的表達(dá)。在濃度為0.1％(w/v)時(shí)，對(duì)膠原酶和溶基質(zhì)素的表達(dá)有強(qiáng)烈的抑制而對(duì)蛋白聚糖的表達(dá)無任何抑制作用。這些結(jié)果證明了巖藻依聚糖的消炎效果。
實(shí)施例4巖藻依聚糖對(duì)雞胚的尿囊絨膜中血管生成的影響(CAM測(cè)定法)從本地孵化場(chǎng)得到受精雞蛋，并將其置于帶有自動(dòng)旋轉(zhuǎn)器的孵化器中，37℃下保持3.5天后去殼或開窗。
將幾張無菌蠟紙放在在氣室產(chǎn)生的窗口上以防止污染和蛋內(nèi)容物的脫水。通過用70％的乙醇噴霧這些4cm×4cm的紙張對(duì)它們進(jìn)行消毒并將其在層流罩超靜臺(tái)上干燥。3天后在孵化器中手工旋轉(zhuǎn)這些雞蛋以便它們的尖端朝上5-10分鐘以使雞蛋內(nèi)容物從內(nèi)膜分離。用70％的乙醇和Kimwipe清掃整個(gè)蛋殼以清潔并消毒雞蛋的外面。在層流罩超靜臺(tái)中，使雞蛋鈍端向上并通過鑷子末端小心弄破蛋殼在蛋的鈍端弄一個(gè)孔。用鑷子輕輕除去蛋殼殘?jiān)员阍阝g端形成一個(gè)孔。該圓孔直徑為2到3cm并且不破壞內(nèi)膜。一旦在殼中產(chǎn)生了該孔，用鑷子輕輕撕下并除去內(nèi)部蛋殼膜(其容納蛋內(nèi)容物)，小心不要破壞尿囊絨膜(CAM)(其容納蛋黃并發(fā)育雞胚)。
然后通過輕輕拉伸parafilm并將其置于孔的周圍，用消毒的parafilm蠟紙將孔蓋住。然后將雞蛋放在孵化器(37℃)的蛋架上并以防止雞蛋轉(zhuǎn)動(dòng)的方式將其放置。6天后從孵化器(鈍邊向上)逐一取出每只雞蛋，并除去覆蓋窗口的parafilm以便直接接觸從胚的后腸產(chǎn)生的CAM。通過在60℃下溶化聚(ε-己內(nèi)酯)(PCL)并將巖藻依聚糖物理混合到PCL中并通過冷卻到室溫使球丸變硬來制備載有巖藻依聚糖的PCL球丸。將巖藻依聚糖球丸放在正在生長(zhǎng)的CAM毛細(xì)管床上。然后用parafilm重新密封雞蛋內(nèi)容物并放回37℃孵育器中。2天后，記錄對(duì)CAM維管結(jié)構(gòu)的分析(將藥物放在CAM毛細(xì)管床上48小時(shí)后)。用無血管等級(jí)評(píng)價(jià)藥物對(duì)CAM的影響，該等級(jí)將藥物作用分為0、1、2或3級(jí)。無血管等級(jí)的賦值描述如下0無抗血管生成活性1微管減少2藥物球丸大小(直徑2mm)的小的無血管區(qū)3直徑為4-5mm的無血管區(qū)如表1所示，巖藻依聚糖強(qiáng)烈抑制CAM中血管生成。PCL中的2％W/W的低濃度巖藻依聚糖分別對(duì)4個(gè)CAM部分抑制血管生成或?qū)?個(gè)CAM完全抑制血管生成。
表1巖藻依聚糖的抗血管生成活性。每列中的數(shù)字顯示了無、部分或最大抑制血管生成的雞蛋數(shù)(CAM數(shù))。
這些數(shù)據(jù)證明了巖藻依聚糖的抗血管生成活性，并表明巖藻依聚糖的聚合物緩釋制劑是釋放治療有效濃度的藥物而不引起過分毒性的有效方法。
實(shí)施例5在乙烯乙酸乙烯酯膜劑和聚己內(nèi)酯糊劑中包封巖藻依聚糖將5mg巖藻依聚糖(Sigma)和45mg乙烯乙酸乙烯酯(EVA，分子量約50k，Polysciences)溶解/懸浮于1ml二氯甲烷中。吸取200μl溶液到直徑為1cm的特氟隆圓盤上并干燥過夜(溶劑蒸發(fā))以形成彈性薄膜而得到厚度約100μm的約10mg膜劑。
將膜劑的部分5mg置于含有10ml磷酸緩沖液(PHS，pH 7.4)的20ml有蓋玻璃管中以測(cè)定藥物從這些膜劑的釋放速率。將管蓋上并置于定軌搖床(37℃)中。在特定時(shí)間取出管并通過吸收光譜法分析釋放的藥物量。巖藻依聚糖的釋放圖(圖4)的特征是最初為爆發(fā)性的藥物釋放，接著為緩慢的持續(xù)釋放。巖藻依聚糖的這種劑型代表了一種生物適合的、生物可降解的、可注射的藥物制劑，其以可控的方式釋放藥物。
PCL糊劑在60℃下用抹刀研磨將巖藻依聚糖混合進(jìn)聚己內(nèi)酯(PCL，Birmingham polymers，分子量54K)，所得濃度為10％(w/w)。將混合物吸取到1ml塑料注射器中并冷卻?？梢栽?6℃下通過18號(hào)注射針頭注射該制劑。
為了測(cè)量從PCL糊劑的藥物釋放，將10mg等分試樣的熔化糊劑注射到15ml玻璃管的底部，冷卻并固定。向每管中加入15ml PBS并將管子蓋上，并在37℃烘箱中上下翻轉(zhuǎn)。在特定時(shí)間取出管并通過吸收光譜法分析釋放的藥物量。巖藻依聚糖的釋放圖見圖5所示。巖藻依聚糖的釋放特征是最初為爆發(fā)性的藥物釋放，接著為緩慢的持續(xù)釋放。巖藻依聚糖的這種劑型代表了一種生物適合的、生物可降解的、可注射的藥物制劑，其以可控的方式釋放藥物。
實(shí)施例6用于治療大鼠手術(shù)粘連的載有巖藻依聚糖的膜劑用手術(shù)粘連的大鼠盲腸側(cè)壁模型研究巖藻依聚糖對(duì)手術(shù)粘連的效果。在該模型中，將16只大鼠分成兩組，每組8只。手術(shù)創(chuàng)傷后，立即將大鼠用含有巖藻依聚糖的交聯(lián)的透明質(zhì)酸(HA)膜劑處理或者不處理(對(duì)照組)。
材料和方法 醫(yī)藥級(jí)的透明質(zhì)酸鈉得自Lifecore Scientific。所有溶劑都是HPLC級(jí)且得自Fisher。塑料培養(yǎng)皿得自Fisher Scientific。乙基-3-(二甲氨基)碳二亞胺(EDAC)和巖藻依聚糖得自Sigma(St.Louis.Mo)。
膜劑的制備 通過制備0.6％w/v巖藻依聚糖、0.4％w/v透明質(zhì)酸鈉和0.15％w/v甘油的水溶液來制備載有巖藻依聚糖的膜劑。通過制備0.4％w/v透明質(zhì)酸鈉和0.15％w/v甘油在水中的溶液或混合物來制備對(duì)照膜劑(無巖藻依聚糖)。每種溶液吸取4g到單獨(dú)的直徑為2.5cm的塑料培養(yǎng)皿中并在60℃干燥24小時(shí)得到載有巖藻依聚糖的膜劑和對(duì)照膜劑。所含的交聯(lián)劑EDAC為4mM(終濃度)。然后用手術(shù)刀小心將每種干燥的膜劑從培養(yǎng)皿中移出。
消毒 將膜劑放在5cm×5cm稱量紙(Fisher scientific)中包好并在塑料包中熱封。然后，用鈷-60放射源的γ放射對(duì)膜劑進(jìn)行最后的消毒并將其暴露于2.5Mrad的輻射并在冰上冷卻密封管。
動(dòng)物研究 手術(shù)創(chuàng)傷誘導(dǎo)如下16只成熟Sprague Dawley大鼠(每只重量為225-350g)得自Charles River實(shí)驗(yàn)室，Wilmington，MA。只將總體上正常的動(dòng)物(即，皮毛干凈無皺、眼睛明亮清澈、姿態(tài)活躍)用于研究。將動(dòng)物隨機(jī)分配于兩組中的一組，稱重并用鹽酸氯胺酮(6mg/kg)在大腿的大肌肉中單次注射以將其麻醉。對(duì)腹部剃毛并用醇清洗。從白線尾部約2cm處開始在皮膚上切開4cm的切口，同時(shí)用鑷子夾住肌肉。用機(jī)械摩擦設(shè)備(其允許操作人員在固定區(qū)域上方獨(dú)立地、受控地摩擦)將盲腸在腹部和背部表面摩擦4次。估計(jì)盲腸的粘連并根據(jù)事先定義的打分系統(tǒng)打分0＝無粘連1＝具有容易鑒定的平面的薄的粘連2＝具有可自由分割的平面的輕微粘連3＝具有難以分割的平面的中等粘連4＝具有不可分割的平面的緊密粘連(1級(jí)粘連是最低水平的可識(shí)別粘連(具有可鑒定的平面的薄的粘連))。
盲腸摩擦后，組1中動(dòng)物沒有接受治療。組2中動(dòng)物接受上面所討論的巖藻依聚糖-HA膜劑。將膜劑圍繞盲腸包裹。然后用3.0Dexon縫合線將切開縫合。手術(shù)后第7天，對(duì)動(dòng)物執(zhí)行安樂死并估計(jì)2級(jí)(或更高)的術(shù)后粘連的存在。2級(jí)粘連定義為具有可自由分割的平面的輕微粘連。
結(jié)果
表2.
·膜僅僅包圍約一半的盲腸·驗(yàn)尸時(shí)沒有發(fā)現(xiàn)不正常(在盲腸上或者切口中線上都無殘留物質(zhì)、無腹水、無不正常愈合現(xiàn)象)結(jié)果證明了載有巖藻依聚糖的膜劑有效抑制粘連的形成，因?yàn)檎尺B的平均發(fā)生率降低了并且在用巖藻依聚糖處理的大鼠中無粘連的大鼠百分?jǐn)?shù)增加了。完全包圍盲腸的載有巖藻依聚糖的膜劑可能在抑制粘連形成時(shí)更有效。
從前述可知，雖然在本文中討論了特定實(shí)施方案以進(jìn)行闡明，可以進(jìn)行各種修改而不背離其精神和本公開的范圍。所以，在本文中提出包括這些修改以及主題的所有排列與組合的系統(tǒng)和方法等是不受到限制而只受附加的權(quán)利要求的限制。
權(quán)利要求
1.巖藻聚糖的用途，用于制備治療動(dòng)物潛在疾病部位處的纖維性粘連的藥物。
2.權(quán)利要求1的用途，其中疾病部位是手術(shù)部位，并且?guī)r藻聚糖制備為組合物直接遞送到疾病部位。
3.巖藻聚糖的用途，用于制備治療動(dòng)物疾病部位處的關(guān)節(jié)炎的藥物。
4.權(quán)利要求3的用途，其中關(guān)節(jié)炎為類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任意一項(xiàng)所述的用途，其中所述藥物被制成口服給藥的形式。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任意一項(xiàng)所述的用途，其中所述藥物被制成注射劑的形式。
7.權(quán)利要求1-4中任意一項(xiàng)所述的用途，其中所述藥物被制成可眼內(nèi)、皮下、腹膜內(nèi)、肌內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、損傷內(nèi)、陰道內(nèi)、直腸或者局部施用的形式。
8.巖藻聚糖的用途，用于制備治療動(dòng)物疾病部位處的牛皮癬的藥物。
9.權(quán)利要求8的用途，其中所述藥物被制成局部給藥的形式。
10.權(quán)利要求8或9的用途，其中所述藥物被制成貼劑形式。
11.根據(jù)權(quán)利要求1、3、8中任意一項(xiàng)所述的用途，其中巖藻聚糖為巖藻依聚糖。
12.根據(jù)權(quán)利要求1、3、8中任意一項(xiàng)所述的用途，其中所述藥物被制成控釋的聚合物劑型。
13.權(quán)利要求12的用途，其中所述聚合物劑型包括膜劑、貼劑、糊劑、微球體、植入物、凝膠劑、噴霧劑或液體制劑。
14.根據(jù)權(quán)利要求1、3、8中任意一項(xiàng)所述的用途，其中所述藥物為包含至少一種霜、糊、可注射賦形劑和聚合物的藥物組合物形式。
15.根據(jù)權(quán)利要求1、3、8中任意一項(xiàng)所述的用途，其中所述藥物為包含巖藻聚糖和治療有效量的至少一種其他藥物的藥物組合物。
16.權(quán)利要求15的用途，其中所述其他藥物選自紫杉醇、阿霉素、喜樹堿和依托泊苷。
17.權(quán)利要求15的用途，其中所述其他藥物選自米托蒽醌、氨甲蝶呤、甲萘醌、藍(lán)雪醌、胡桃醌、β-lapachone、環(huán)孢菌素、柳氮磺吡啶、類固醇、雷帕霉素、維甲類、多西他賽和秋水仙堿。
18.權(quán)利要求15的用途，其中所述其他藥物選自反義寡核苷酸、核酶和寡核苷酸RNA抑制劑。
19.根據(jù)權(quán)利要求1、3、8中任意一項(xiàng)所述的用途，其中治療有效量的巖藻聚糖作為藥物組合物的一部分遞送并且?guī)r藻聚糖組成藥物組合物的約0.1％到35％w/v。
20.根據(jù)權(quán)利要求1、3、8中任意一項(xiàng)所述的用途，其中治療有效量的巖藻聚糖作為藥物組合物的一部分遞送并且?guī)r藻聚糖組成藥物組合物的約80％到100％w/v。
21.根據(jù)權(quán)利要求1、3、8中任意一項(xiàng)所述的用途，其中治療有效量的巖藻聚糖作為藥物組合物的一部分遞送并且?guī)r藻聚糖組成藥物組合物的約5％到50％w/v。
22.根據(jù)權(quán)利要求1、3、8中任意一項(xiàng)所述的用途，其中治療有效量的巖藻聚糖作為藥物組合物的一部分遞送并且?guī)r藻聚糖組成藥物組合物的約20％到80％w/v。
23.根據(jù)權(quán)利要求1、3、8中任意一項(xiàng)所述的用途，其中巖藻聚糖是還包含至少一種可藥用賦形劑的藥物組合物的一部分。
24.權(quán)利要求23的用途，其中可藥用賦形劑選自普朗尼克、纖維素、藻酸鹽、丙烯酸鹽、透明質(zhì)酸、聚乙二醇和脫乙酰殼多糖。
25.根據(jù)權(quán)利要求1、3、8中任意一項(xiàng)所述的用途，其中巖藻聚糖制備為用于直接遞送到疾病部位。
26.根據(jù)權(quán)利要求1、3、8中任意一項(xiàng)所述的用途，其中動(dòng)物為人。
27.包含巖藻聚糖聚合物劑型的藥物組合物，其包含治療有效量的巖藻聚糖和至少一種選自普朗尼克、纖維素、藻酸鹽、丙烯酸鹽、透明質(zhì)酸、聚乙二醇和脫乙酰殼多糖的可藥用賦形劑。
28.權(quán)利要求26的藥物組合物，其中聚合物劑型包括膜劑、貼劑、糊劑、微球體、植入物、凝膠劑、噴霧劑或液體制劑。
29.權(quán)利要求27的藥物組合物，其中巖藻聚糖為巖藻依聚糖。
30.包含治療有效量的巖藻聚糖和治療有效量的至少一種其他藥物的藥物組合物，其中所述的至少一種其他藥物包含至少一種反義寡核苷酸、核酶和寡核苷酸RNA抑制劑。
31.權(quán)利要求30的藥物組合物，其中巖藻聚糖為巖藻依聚糖。
32.根據(jù)權(quán)利要求27-31中任意一項(xiàng)所述的藥物組合物，其用于制備治療纖維性粘連的藥物。
33.權(quán)利要求32的藥物組合物，其中粘連為手術(shù)粘連。
34.根據(jù)權(quán)利要求27-31中任意一項(xiàng)所述的藥物組合物，其用于制備治療關(guān)節(jié)炎的藥物。
35.根據(jù)權(quán)利要求27-31中任意一項(xiàng)所述的藥物組合物，其用于制備治療牛皮癬的藥物。
36.生產(chǎn)能夠減輕與病人中纖維性粘連、關(guān)節(jié)炎和牛皮癬中的至少一種相關(guān)的癥狀的藥物的方法，其包括組合藥學(xué)有效量的巖藻依聚糖、可藥用賦形劑或緩沖劑。
37.權(quán)利要求36的方法，其中癥狀和手術(shù)粘連相關(guān)。
38.權(quán)利要求36的方法，其中癥狀和關(guān)節(jié)炎相關(guān)。
39.權(quán)利要求36的方法，其中癥狀和牛皮癬相關(guān)。
全文摘要
含有巖藻聚糖如巖藻依聚糖的組合物、方法等用于治療粘連、關(guān)節(jié)炎和牛皮癬。
文檔編號(hào)A61K31/715GK101028283SQ200710096370
公開日2007年9月5日 申請(qǐng)日期2002年8月29日 優(yōu)先權(quán)日2001年8月29日
發(fā)明者J·K·杰克遜, H·M·伯特 申請(qǐng)人:英屬哥倫比亞大學(xué)