專利名稱：：一種防治肝損傷疾病的蜈蚣多糖蛋白片劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及制藥領(lǐng)域，更具體涉及一種防治肝損傷疾病的蜈蚣多糖蛋白片劑。該蜈蚣多糖蛋白片劑可廣泛應(yīng)用于防治肝損傷疾病。
背景技術(shù)：
：1.當(dāng)前治療或預(yù)防肝損傷疾病的藥物都存在一定的局限性肝損傷作為各種肝臟疾病的病變結(jié)果，很多因素如酒精、藥物、病毒等都可以導(dǎo)致。在現(xiàn)代社會(huì)中，人們由于精神壓力過(guò)大、飲酒、吸煙以及環(huán)境污染等原因，更是面臨著各種肝病如灑精性肝硬變、脂肪肝、中毒性肝病以及急慢性病毒性肝炎等危險(xiǎn)。而乙型病毒性肝炎，除可誘發(fā)慢性肝炎、肝硬變以及肝癌等合并癥，更由于其傳染性已成為一個(gè)社會(huì)性問(wèn)題?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)已從多方面探討了肝損傷的發(fā)生機(jī)制，并研制開(kāi)發(fā)出了膜保護(hù)劑、抗脂質(zhì)過(guò)氧化劑、抗免疫反應(yīng)劑等保肝藥物，但療效尚難盡人意，而且還因其潛在的毒副作用限制了臨床應(yīng)用。因此，開(kāi)發(fā)出一種具有高效抗肝損傷活性、對(duì)包括乙肝在內(nèi)的各類(lèi)肝病有顯著治療效果的藥物已成為目前亟待解決的重大課題。2.多糖蛋白復(fù)合物(Polysaccharide-ProteinComplex)的特殊生物學(xué)活性有文獻(xiàn)報(bào)道，糖蛋白等多糖蛋白復(fù)合物具有抗氧化和清除機(jī)體有害自由基的生物學(xué)活性，并且其在細(xì)胞識(shí)別、信號(hào)傳導(dǎo)、免疫應(yīng)答、細(xì)胞轉(zhuǎn)化等許多生物學(xué)過(guò)程中也起著非常重要的作用。另外，考慮其活性可經(jīng)免疫系統(tǒng)傳遞，特別是通過(guò)對(duì)免疫系統(tǒng)的特異性或非特異性功能的激發(fā)實(shí)現(xiàn)，因此，該多糖蛋白復(fù)合物將具有毒副作用低等特點(diǎn)。這對(duì)于研制出一種療效高、基本無(wú)毒副作用的治療或預(yù)防肝損傷疾病的特效藥物，具有重要意義。3.蜈蚣提取物藥理作用的研究進(jìn)展祖國(guó)醫(yī)學(xué)中，蜈蚣入藥歷史悠久，素來(lái)有調(diào)達(dá)肝經(jīng)之功效。近年來(lái)，對(duì)蜈蚣及其提取物藥理作用的研究亦日趨深入。已有研究表明，蜈蚣水提取物能顯著降低大鼠血清中過(guò)氧化脂質(zhì)及肝、腦組織中脂褐質(zhì)含量，可使紅細(xì)胞中超氧化物歧化酶和血中谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活力明顯升高。并且其能使免疫器官胸腺和脾臟重量明顯增加，顯著提升機(jī)體吞噬細(xì)胞吞噬活性，特別對(duì)吞噬細(xì)胞Fc受體有顯著增強(qiáng)作用，從而發(fā)揮改善機(jī)體免疫功能的作用。(王玉芬.韓雙紅.曲樹(shù)明.等，蜈蚣抗衰老作用的研究，中國(guó)中藥雜志，1994，19(11):685)但是，經(jīng)檢索，迄今為止未有一種防治肝損傷疾病的蜈蚣多糖蛋白片劑或膠囊劑等口服制劑被公開(kāi)或使用。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是在于提供了一種防治肝損傷疾病的蜈蚣多糖蛋白片劑。配方合理，原料來(lái)源廣泛，用于防治肝損傷疾病，具有給藥方便，保肝活性高、無(wú)毒等優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明將蜈蚣多糖蛋白復(fù)合物用于制備防治肝損傷疾病的片劑。為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明，采用以下技術(shù)方案該片劑由下述原料按重量百分比制成；原料％蜈蚣多糖蛋白復(fù)合物1015填充劑7185粘合劑l8崩解劑l8潤(rùn)濕劑l6潤(rùn)滑劑l2其制備步驟如下①加入輔料向蜈蚣多糖蛋白復(fù)合物中分別加入填充劑、粘合劑和崩解劑后加入潤(rùn)濕劑混勻制成軟材；②制粒將混勻的軟材過(guò)50-200目尼龍篩制粒，7080°C烘干30分鐘，過(guò)50-200目鐵篩整粒；③壓片加入潤(rùn)滑劑壓片制成片劑；所述的蜈蚣多糖蛋白復(fù)合物是從節(jié)肢動(dòng)物蜈蚣全蟲(chóng)中提取、分離、純化得到，其制備步驟為①以少棘蜈蚣作為原料母體，清洗35次，烘干24小時(shí)，烘干溫度控制在6080'C;②研磨第1步驟中干燥后的原料母體并過(guò)50200目篩得蜈蚣粉；③將第2步驟中的蜈蚣粉用5倍體積蒸餾水抽提13小時(shí)，溫度控制在809(TC，紗布過(guò)濾得一份提取液，取殘?jiān)儆?倍體積蒸餾水重復(fù)提取三次得三份提取液，合并以上四份提取液，2500r/min離心2030分鐘，獲取上清；④將第3步驟中的上清減壓濃縮至0.1MPa，溫度控制在在5070。C，加入5倍體積95%乙醇，于4。C靜置過(guò)夜，傾去上清，取沉淀，2500r/min離心10分鐘，收集沉淀；⑤將第4步驟中的沉淀用500ml蒸餾水溶解，計(jì)量40%飽和度所需要的固體硫酸銨量，于4'C緩慢加入，攪拌4h、10000r/min離心20分鐘后，收集上清并計(jì)量體積，重復(fù)此步驟的操作l次，收集60%飽和度的沉淀物；⑥將第5步驟中的沉淀物用30ml蒸餾水溶解后，上DEAE-50離子交換層析柱(2.6X40cm)純化，以蒸餾水平衡，用0.050.25moI/LNaCl溶液洗脫，收集洗脫液，用透析袋在雙蒸水中透析48小時(shí)脫鹽，再用聚乙二醇20000濃縮；⑦將第6歩驟中的濃縮液上SephadexG-200層析柱(2.6X60cm)純化，用0.02mol/LpH為7.2的Tris-HCl溶液洗脫后，經(jīng)真空冷凍干燥，預(yù)凍溫度控制在-45-15°C，加熱溫度控制在2040'C，干燥812小時(shí)后得蜈蚣多糖蛋白復(fù)合物純品。且經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明，蜈蚣多糖蛋白片劑的有效成分，即所述的蜈蚣多糖蛋白復(fù)合物在防治肝損傷疾病中具有以下特點(diǎn)①不僅能治療多種化學(xué)性肝損傷，如酒精性肝損傷、四氯化碳肝損傷、大劑量地塞米松肝損傷，而且對(duì)免疫性肝損傷也具有顯著療效；②上述抗肝損傷活性直接與其清除自由基、提高抗氧化物酶的活性、降低脂質(zhì)過(guò)氧化物水平以及免疫調(diào)節(jié)等一系列保肝降酶作用有關(guān)；③急性毒性試驗(yàn)表明其毒副作用低。所述的填充劑為淀粉、糊精、糖粉、預(yù)膠化淀粉、乳糖、葡萄糖、微晶纖維素、碳酸鈣、硫酸鈣、碳酸氫鈣或其他藥學(xué)上可接受的填充劑的其中一種或其中二到十種或任意組合；所述的粘合劑為液狀葡萄糖、阿拉伯膠、明膠、羥甲基纖維素、低取代羥丙基纖維素或其他藥學(xué)上可接受的粘合劑的其中一種或其中二到五種或任意組合；所述的崩解劑為交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、交聯(lián)聚維酮、羧甲基淀粉鈉、羥丙基淀粉、低取代羥丙基纖維素、檸檬酸、酒石酸、酸酐、碳酸氫鈉、碳酸鈉或其他藥學(xué)上可接受的崩解劑的其中一種或其中二到九種或任意組合；所述的潤(rùn)濕劑為水、乙醇或其組合；所述的潤(rùn)滑劑為硬脂酸鎂、滑石粉、液狀石蠟、聚乙二醇或其他藥學(xué)上可接受的潤(rùn)滑劑的其中一種或其中二到四種或任意組合。另外，本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)-1.本發(fā)明涉及的蜈蚣多糖蛋白復(fù)合物(SPPC)是以少棘蜈蚣作為原料母體經(jīng)水提和進(jìn)一步的分離純化得到，原料來(lái)源廣泛且品種質(zhì)量?jī)?yōu)良；2.蜈蚣多糖蛋白復(fù)合物(SPPC)的提取、分離、純化工藝簡(jiǎn)單易行，技術(shù)成熟；3.開(kāi)發(fā)蜈蚣多糖蛋白復(fù)合物(SPPC)作為防治肝損傷疾病的特效藥物，這不僅是對(duì)祖國(guó)醫(yī)學(xué)理論的豐富，而且也是對(duì)蜈蚣藥理活性部位研究的原創(chuàng)性開(kāi)拓，同時(shí)也為多糖蛋白復(fù)合物的應(yīng)用性研究提供了新的思路，具有重要的醫(yī)學(xué)價(jià)值和社會(huì)、經(jīng)濟(jì)效益。4.蜈蚣多糖蛋白片劑的有效成分蜈蚣多糖蛋白復(fù)合物(SPPC)不僅能有效治療多種化學(xué)性肝損傷，如酒精性肝損傷、四氯化碳肝損傷、大劑量地塞米松肝損傷，而且對(duì)免疫性肝損傷也呈顯著療效；5.蜈蚣多糖蛋白片劑的有效成分蜈蚣多糖蛋白復(fù)合物(SPPC)的高效抗肝損傷活性在于其具有清除自由基，提高抗氧化物酶活性，降低脂質(zhì)過(guò)氧化物水平以及免疫調(diào)節(jié)等多方面功效；6.蜈蚣多糖蛋白片劑的有效成分蜈蚣多糖蛋白復(fù)合物(SPPC)的急性毒性試驗(yàn)表明其毒副作用低；7.本發(fā)明采用常規(guī)口服劑型，技術(shù)成熟，生產(chǎn)工藝簡(jiǎn)單易行。8.發(fā)明釆用口服給藥方式，給藥方便，無(wú)痛苦，沒(méi)有后遺癥。具體實(shí)施例方式下面將描述本發(fā)明的實(shí)施例，但本發(fā)明的內(nèi)容不完全限于此。<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>其制備步驟如下:①加入輔料向蜈蚣多糖蛋白復(fù)合物中分別加入填充劑、粘合劑和崩解劑后加入潤(rùn)濕劑混勻制成軟材(輔料為填充劑、粘合劑、崩解劑和潤(rùn)濕劑)；②制粒將混勻的軟材過(guò)50-200目尼龍篩制粒，7080°C烘干30分鐘，過(guò)50-200目鐵篩整粒；③壓片加入潤(rùn)滑劑壓片制成片劑；所述的蜈蚣多糖蛋白復(fù)合物是從節(jié)肢動(dòng)物蜈蚣全蟲(chóng)中提取、分離、純化得到，其制備步驟為①以少棘蜈蚣作為原料母體，清洗3或4或5次，烘干2或3或4小時(shí)，烘干溫度控制在60或64或68或70或74或68或80°C;②研磨第1步驟中干燥后的原料母體并過(guò)50或100或200目篩得蜈蚣粉；③將第2步驟中的蜈蚣粉用5倍體積蒸餾水抽提1或2或3小時(shí)，溫度控制在80或82或84或86或88或卯°C，紗布過(guò)濾得一份提取液，取殘?jiān)儆?倍體積蒸餾水重復(fù)提取三次得三份提取液，合并以上四份提取液，2500r/min離心2030分鐘，獲取上清；④將第3步驟中的上清減壓濃縮至0.1MPa，溫度控制在在50或55或60或65或70。C，加入5倍體積95%乙醇，于4。C靜置過(guò)夜，傾去上清，取沉淀，2500r/min離心IO分鐘，收集沉淀；⑤將第4步驟中的沉淀用500ml蒸餾水溶解，計(jì)量40%飽和度所需要的固體硫酸銨量，于4'C緩慢加入，攪拌4h、10000r/min離心20分鐘后，收集上清并計(jì)量體積，重復(fù)此步驟的操作1次，收集60%飽和度的沉淀物；將第5步驟中的沉淀物用30ml蒸餾水溶解后，上DEAE-50離子交換層析柱(2.6X40cm)純化，以蒸餾水平衡，用0.05或0.15或0.25mol/LNaCl溶液洗脫，收集洗脫液，用透析袋在雙蒸水中透析48小時(shí)脫鹽，再用聚乙二醇20000濃縮；⑦將第6步驟中的濃縮液上SephadexG-200層析柱(2.6X60cm)純化，用0.02mol/LpH為7.2的Tris-HCl溶液洗脫后，經(jīng)真空冷凍干燥，預(yù)凍溫度控制在-45或-40或-35或-30或-25或-20或-15°C，加熱溫度控制在20或24或26或30或34或36或40°C，干燥8或9或10或11或12小時(shí)后得蜈蚣多糖蛋白復(fù)合物純品。所述的填充劑為淀粉、糊精、糖粉、預(yù)膠化淀粉、乳糖、葡萄糖、微晶纖維素、碳酸鈣、硫酸鈣、碳酸氫鈣或其他藥學(xué)上可接受的填充劑的其中一種或其中二到十種或任意組合；所述的粘合劑為液狀葡萄糖、阿拉伯膠、明膠、羥甲基纖維素、低取代羥丙基纖維素或其他藥學(xué)上可接受的粘合劑的其中一種或其中二到五種或任意組合；所述的崩解劑為交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、交聯(lián)聚維酮、羧甲基淀粉鈉、羥丙基淀粉、低取代羥丙基纖維素檸檬酸、酒石酸、酸酐、碳酸氫鈉、碳酸鈉或其他藥學(xué)上可接受的填充劑的其中一種或其中二到九種或任意組合；所述的潤(rùn)濕劑為水、乙醇或其組合；所述的潤(rùn)滑劑為硬脂酸鎂、滑石粉、液狀石蠟、聚乙二醇或其他藥學(xué)上可接受的填充劑的其中一種或其中二到四種或任意組合。為了公開(kāi)本發(fā)明的實(shí)質(zhì)，特對(duì)制備得到的蜈蚣多糖蛋白復(fù)合物(SPPC)純品進(jìn)行了毒理學(xué)和藥效學(xué)試驗(yàn)，現(xiàn)將具體實(shí)驗(yàn)方法及結(jié)果說(shuō)明如下一、急性毒性試驗(yàn)為觀察本發(fā)明蜈蚣多糖蛋白復(fù)合物(SPPC)的急性毒性，對(duì)小鼠進(jìn)行了i.g.給藥途徑的試驗(yàn)，結(jié)果表明本品小鼠i.g.給藥未能測(cè)出半數(shù)致死量(LD50)，且測(cè)得最大耐受量(MTD)為14.15g/kg。二、主要藥效學(xué)試驗(yàn)1.蜈蚣多糖蛋白復(fù)合物(SPPC)對(duì)酒精性肝損傷模型的干預(yù)效應(yīng)1.1動(dòng)物試驗(yàn)雄性昆明種小鼠，體重18-24g，由武漢大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，用顆粒型普通鼠飼料喂養(yǎng)，飲用自來(lái)水，飼養(yǎng)2d后隨機(jī)分為4組空白對(duì)照組；酒精模型組(Ethanol);Ethanol+SPPC1(100mg.kg-1)組及Ethanol+SPPC2(200mg.kg")組。SPPC為i.g.給藥，qdX10d(—天一次，連續(xù)給藥10天)，其余動(dòng)物給予等容量生理鹽水，末次給藥后4h，各組均i.g.給予56y。酒精6.64g.kg",空白對(duì)照組給予等容量生理鹽水，禁食不禁水，l處后重復(fù)一次。6h后，動(dòng)物斷頭處死，取血制備血清并摘取肝臟，經(jīng)10%甲醛固定，石蠟包埋，切片，HE染色后光鏡觀察。1.2指標(biāo)及測(cè)定方法賴氏法測(cè)定sALT、sAST活性；DTNB比色法測(cè)定GSH含量；黃嘌呤氧化酶法測(cè)定SOD活力；TBA比色法測(cè)定丙二醛(MDA)含量。1.3實(shí)驗(yàn)結(jié)果各組小鼠肝臟病理組織學(xué)切片檢查，模型組可見(jiàn)肝小葉界限不清，肝細(xì)胞明顯腫脹，胞核增大，胞漿疏松、淡染，胞質(zhì)內(nèi)可見(jiàn)大小不等、數(shù)量不一的脂滴空泡，Kuffer氏細(xì)胞輕度增生。而EthanoHSPPC1組、Ethanol十SPPC2組的肝小葉正常結(jié)構(gòu)存在，肝細(xì)胞腫脹程度明顯減輕，氣球樣變及脂肪變性有所好轉(zhuǎn)。另外，各種指標(biāo)測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表l。表l.SPPC對(duì)酒精性肝損傷小鼠sALT,sAST,GSH、S0D和MDA含量的影響(i±s，"=/^<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>Ethanol+SPPG110023.44±2.4lAA42.<J8±3.38AA7.36±0.25AA4.02±0.14AA0.76±0.06AEthanol+SPPC220020.23±2.65M37.H6±3.29'i&7.64±0.10a4.39±0.35AA0.68±0.07A與Control組比較"P〈0.01;與Ethanol組比較AP<0.05,AAP<0.01表1結(jié)果表明酒精模型組小鼠sALT、sAST較空白對(duì)照組上升83.5%及133.7%(P均O.Ol)，反映了短期急性攝入乙醇所產(chǎn)生的肝臟損害。與模型組相比，SPPC兩劑量組均可顯著抑制酒精所致小鼠sALT(分別降低24.9%、35.2%)及sAST(分別降低31.8%、39.2%)的上升幅度。另外，模型組小鼠MDA含量顯著增高，GSH、SOD活性明顯下降。SPPC100mg.kg'1、200mg.kg"對(duì)上述指標(biāo)的改變均有一定程度的緩解，其中大劑量SPPC可使MDA含量接近正常。綜上所述，蜈蚣多糖蛋白復(fù)合物(SPPC)明顯抑制了乙醇所致的血清轉(zhuǎn)氨酶升高，并顯著減輕肝臟病理組織損傷，其抗氧化功能是SPPC對(duì)抗酒精性肝毒的原因之一。2.蜈蚣多糖蛋白復(fù)合物(SPPC)對(duì)四氯化碳肝損傷模型的干預(yù)效應(yīng)2.1動(dòng)物試驗(yàn)雄性昆明種小鼠，體重18-24g，由武漢大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，用顆粒型普通鼠飼料喂養(yǎng)，飲用自來(lái)水，飼養(yǎng)2d后隨機(jī)分為4組空白對(duì)照組；CCU模型組(Model);CC14+SPPC1(100mg.kg")組及CC14+SPPC2(200mg.kg")組。SPPC為i.g.給藥，qdX10d(—天一次，連續(xù)給藥10天)，其余動(dòng)物給予等容量生理鹽7jC，末次給藥后4h，各組均i.g.給予CCLt0.15mg.kg'1，空白對(duì)照組給予等容量生理鹽水，禁食不禁水。6h后，動(dòng)物斷頭處死，取血制備血清并摘取肝臟，經(jīng)10%甲醛固定，石蠟包埋，切片，HE染色后光鏡觀察。2.2指標(biāo)及測(cè)定方法賴氏法測(cè)定sALT、sAST活性；DTNB比色法測(cè)定GSH含量；黃嘌呤氧化酶法測(cè)定SOD活力；TBA比色法測(cè)定丙二醛(MDA)含量。2.3實(shí)驗(yàn)結(jié)果各組小鼠肝臟病理組織學(xué)切片檢査，CCU模型組可見(jiàn)肝小葉失去正常結(jié)構(gòu)，肝索排列紊亂，肝細(xì)胞腫脹，胞質(zhì)疏松化明顯，有空泡變性及氣球樣變，并且出現(xiàn)一中央靜脈周?chē)鸀橹鞯闹行男詨乃?，甚至帶狀壞死。而?:14+SPPC1組、CCl4十SPPC2組的肝小葉結(jié)構(gòu)恢復(fù)，壞死區(qū)明顯縮小，氣球樣變及脂滴空泡現(xiàn)象有所好轉(zhuǎn)。另外，各種指標(biāo)測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。表2.SPPC對(duì)四氯化碳肝損傷小鼠sALT,sAST、GSH、SODandMDA含量的影響(3f士s，m-j^<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>表2結(jié)果表明CCU模型組小鼠sALT、sAST上升至空白對(duì)照組的11.0倍及9.5倍(P均O.Ol)，表明肝臟嚴(yán)重受損。與模型組相比，蜈蚣PSPC兩劑量組均抑制了CC14所致小鼠sALT(分別降低14.4%、20.1%，P均<0.01)及sAST水平(分別降低11.1%、17.8%，P均〈0.01)的上升幅度。另外:，模型組小鼠GSH、SOD活性明顯下降，MDA含量則顯著增高。SPPC100mg.kg"、200mg.kg-1進(jìn)行干預(yù)后，GSH則恢復(fù)至對(duì)照組的83.2%禾卩90.0%(P均O.05);SOD活性較模型組分別上升了7.4%(PO.05)和16.2%(P<0.01)，呈現(xiàn)出一定程度的劑量關(guān)系；MDA的增高亦有部分逆轉(zhuǎn)，分別下降至模型組的95.0%及88.8%(P均<0.05)。綜上所述，蜈蚣多糖蛋白復(fù)合物(SPPC)能有效抑制ccu所致的血清酶漏出，顯著改善肝臟組織學(xué)變化，SPPC這種保肝機(jī)制可能是由于其抑制肝細(xì)胞脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，穩(wěn)定生物膜，從而降低膜的通透性，使肝細(xì)胞變性壞死減輕，并迅速恢復(fù)肝細(xì)胞的功能。3.蜈蚣多糖蛋白復(fù)合物(SPPC)對(duì)大劑量地塞米松肝損傷模型的干預(yù)效應(yīng)3.1動(dòng)物試驗(yàn)雄性昆明種小鼠，體重18-24g，由武漢大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，用顆粒型普通鼠飼料喂養(yǎng)，飲用自來(lái)水，飼養(yǎng)2d后隨機(jī)分為4組空白對(duì)照組；DEX模型組(Model);DEX+SPPC(100mg.kg")組及DEX+SPPC2(200mg.kg")組。SPPC為i.g.給藥，qdXl(M(—天一次，連續(xù)給藥10天)，其余動(dòng)物給予等容量生理鹽水，從第四天起，給予SPPC的同時(shí)，各組i.g.給藥DEX12mg.kg",空白對(duì)照給予等容量生理鹽水，禁食不禁水。6h后，動(dòng)物斷頭處死，取血制備血清并摘取肝臟，經(jīng)10%甲醛固定，石蠟包埋，切片，HE染色后光鏡觀察。3.2指標(biāo)及測(cè)定方法賴氏法測(cè)定sALT、sAST活性；DTNB比色法測(cè)定GSH含量；黃嘌呤氧化酶法測(cè)定SOD活力；TBA比色法測(cè)定丙二醛(MDA)含量。3.3實(shí)驗(yàn)結(jié)果各組小鼠肝臟病理組織學(xué)切片檢查，模型組可見(jiàn)肝小葉界限不清，胞質(zhì)疏松化，氣球樣變明顯。而DEX+SPPC1組、DEX+SPPC2組的肝小葉正常結(jié)構(gòu)存在，肝細(xì)胞腫脹程度部分減輕，氣球樣變及脂滴空泡現(xiàn)象表現(xiàn)有所好轉(zhuǎn)。另外，各種指標(biāo)測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3。表3.SPPC對(duì)大劑量地塞米松肝損傷小鼠sALT,sAST，GSH,S0D和MDA含量的影響(i±^"=M_)GroupSPPC,sAST(;shSODMDA(mg-kg—')(u.i:1)(U.1」')(U.mg')Control—17.01±2.:i926.64±2.259.69±0.975.44±0.340.65±0.19DEXM47.69±7.54"9.41±0.885.02±0.14T0.84±0.l(TDEXM+SPPC100:39.7()±:).9.36±0.915.17±0.030.68±0.05厶阻M+SPPC218±4.51AA9.50±1.025.31±0.14A0.66±0.04AA與Control組比較"P<0.01;與DEXM組比較AP<0.05,AAP<0.01表3結(jié)果表明DEX模型組小鼠sALT、sAST較空白對(duì)照組上升180.4%及245.0%(P均O.Ol),反映了短期超大劑量使用地塞米松可產(chǎn)生明顯肝臟毒性。與模型組相比，SPPC兩劑量組均可顯著抑制DEX所致小鼠sALT(分別降低16.8%、27.4%)及sAST水平(分別降低18.9%、30.2%，P均O.Ol)的上升幅度。另外，模型組小鼠GSH、SOD活性明顯下降，MDA含量增高較為顯著(29.2%)。SPPC100mg.kg-1、200mg.kg"干預(yù)組分別使MDA含量降低了19.00/0(P0.05)和21.4o/o(P0.01)，表現(xiàn)出一定的劑量關(guān)系。而模型組SOD活性有所下降(7.7%)，SPPC低、高劑量組則使其上升了3.0。/。及5.8。/。(P0.05),恢復(fù)程度不及MDA。SPPC對(duì)GSH含量則無(wú)明顯影響。綜上所述，蜈蚣多糖蛋白復(fù)合物(SPPC)明顯降低超大劑量地塞米松所致血清轉(zhuǎn)氨酶的漏出，提示SPPC具有一定的生物膜穩(wěn)定作用，可通過(guò)降低膜的通透性而保護(hù)肝細(xì)胞。同時(shí)可見(jiàn)SPPC對(duì)肝臟內(nèi)MDA升高性肝損傷具有保護(hù)作用。4.蜈蚣多糖蛋白復(fù)合物(SPPC)對(duì)免疫性肝損傷模型的干預(yù)效應(yīng)4.1動(dòng)物試驗(yàn)雄性昆明種小鼠，體重18-24g,由武漢大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，用顆粒型普通鼠飼料喂養(yǎng)，飲用自來(lái)水，飼養(yǎng)2d后隨機(jī)分為4組空白對(duì)照組；模型組(Model),為一次i.p.給予BCG1.5mg.10g"，7d后i.g.給予LPS2ug.l0g—1;Model十SPPC1(100mg.kg-')、Model+SPPC2(200mg.kg-')，為給予BCG的同時(shí)，i.g.給予SPPC100mg.kg"、200mg.kg"，qdX7d(—天一次，連續(xù)給藥7天)。注射LPS后6h小鼠斷頭處死，取血制備血清并摘取肝臟，經(jīng)10%甲醛固定，石蠟包埋，切片，HE染色后光鏡觀察。4.2指標(biāo)及測(cè)定方法賴氏法測(cè)定sALT活性；按Habing等方法以CDNB為底物測(cè)定血清谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶(glutathioneS-transferase,GST)活性；DTNB比色法測(cè)定GSH含量。4.3結(jié)果各組小鼠肝臟病理組織學(xué)切片檢查，見(jiàn)模型組肝細(xì)胞普遍腫大，有片狀變性壞死，中央小靜脈充血，肝竇內(nèi)見(jiàn)大量的紅細(xì)胞淤積；Model+SPPC1組、Model十SPPC2組的肝損傷都有不同程度減輕，僅見(jiàn)局部細(xì)胞腫脹、小面積變性，尤其未見(jiàn)到大量紅細(xì)胞淤積于肝竇。另外，各種指標(biāo)測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表4。表4結(jié)果表明模型組小鼠sALT、sGST較空白對(duì)照組上升211.6%及42.9%，說(shuō)明模型建立成功。與模型組相比，兩SPPC劑量組均可顯著抑制BCG+LPS所誘導(dǎo)小鼠sALT(分別降低25.4%、36.6%)及sGST(分別降低41.6%、48.8%)的上升幅度。另夕卜，模型組小鼠GSH含量明顯下降。SPPC100mg.kg"、200mg.kg^對(duì)上述指標(biāo)的改變有顯著緩解(分別上升69.9%、97.8%)。<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>表4.SPPC對(duì)免疫性肝損傷小鼠sALT、sGST、<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>與Control組比較"P<0,01;與Model組比較AP<0.05,AAP〈0.01綜上所述，蜈蚣多糖蛋白復(fù)合物(SPPC)明顯降低免疫性肝損傷所致血清轉(zhuǎn)氨酶的漏出，提示SPPC具有一定的生物膜穩(wěn)定作用，可通過(guò)降低膜的通透性而保護(hù)肝細(xì)胞。而其抗脂質(zhì)過(guò)氧化及免疫調(diào)節(jié)的功能也與其對(duì)免疫性肝損傷的保護(hù)作用有關(guān)。三、結(jié)論上述各項(xiàng)試驗(yàn)結(jié)果表明，該蜈蚣多糖蛋白復(fù)合物(SPPC)具有毒副作用低的特點(diǎn)，且因其能有效清除機(jī)體有害自由基、明顯提高抗氧化物酶活性、顯著降低脂質(zhì)過(guò)氧化物水平以及免疫調(diào)節(jié)等多方面保肝降酶功效而表現(xiàn)出高效抗肝損傷活性，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)酒精性肝損傷、四氯化碳肝損傷、大劑量地塞米松肝損傷以及免疫性肝損傷的保護(hù)作用。因此，該蜈蚣多糖蛋白復(fù)合物(SPPC)應(yīng)用于制備治療或預(yù)防肝損傷病的藥物中，將具有保肝活性高、毒副作用低的特點(diǎn)。權(quán)利要求1、一種防治肝損傷疾病的蜈蚣多糖蛋白片劑，它由下述原料按重量百分比制成原料％蜈蚣多糖蛋白復(fù)合物10～15填充劑71～85粘合劑1～8崩解劑1～8潤(rùn)濕劑1～6潤(rùn)滑劑1～2其制備步驟如下①加入輔料向蜈蚣多糖蛋白復(fù)合物中分別加入填充劑、粘合劑和崩解劑后加入潤(rùn)濕劑混勻制成軟材；②制粒將混勻的軟材過(guò)50-200目尼龍篩制粒，70～80℃烘干30分鐘，過(guò)50-200目鐵篩整粒；③壓片加入潤(rùn)滑劑壓片制成片劑；所述的填充劑為淀粉、糊精、糖粉、預(yù)膠化淀粉、乳糖、葡萄糖、微晶纖維素、碳酸鈣、硫酸鈣、碳酸氫鈣或其他藥學(xué)上可接受的填充劑的其中一種或其中二到十種或任意組合；所述的粘合劑為液狀葡萄糖、阿拉伯膠、明膠、羥甲基纖維素、低取代羥丙基纖維素或其他藥學(xué)上可接受的粘合劑的其中一種或其中二到五種或任意組合；所述的崩解劑為交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、交聯(lián)聚維酮、羧甲基淀粉鈉、羥丙基淀粉、低取代羥丙基纖維素、檸檬酸、酒石酸、酸酐、碳酸氫鈉、碳酸鈉或其他藥學(xué)上可接受的崩解劑的其中一種或其中二到九種或任意組合；所述的潤(rùn)濕劑為水、乙醇或其組合；所述的潤(rùn)滑劑為硬脂酸鎂、滑石粉、液狀石蠟、聚乙二醇或其他藥學(xué)上可接受的潤(rùn)滑劑的其中一種或其中二到四種或任意組合。2、根據(jù)權(quán)利要求1所描述的一種防治肝損傷疾病的蜈蚣多糖蛋白片劑，它由下述原料按重量百分比制成蜈蚣多糖蛋白復(fù)合物10.0%，淀粉85.0%，阿拉伯膠2.0%,交聯(lián)羧甲基纖維素鈉1.0%，乙醇1.0%，硬脂酸鎂1.0%。3、根據(jù)權(quán)利要求1所描述的一種防治肝損傷疾病的蜈蚣多糖蛋白片劑，它由下述原料按重量百分比制成蜈蚣多糖蛋白復(fù)合物10.5%，糊精84.0%,羥甲基纖維素2.0%，羧甲基淀粉鈉1.5%，乙醇1.0%，聚乙二醇1.0%。4、根據(jù)權(quán)利要求1所描述的一種防治肝損傷疾病的蜈蚣多糖蛋白片劑，它由下述原料按重量百分比制成蜈蚣多糖蛋白復(fù)合物11.0%，淀粉83.0%，阿拉伯膠3.0%，羥丙基淀粉1.0%，乙醇1.0%，聚乙二醇1.0%。5、根據(jù)權(quán)利要求1所描述的一種防治肝損傷疾病的蜈蚣多糖蛋白片劑，它由下述原料按重量百分比制成蜈蚣多糖蛋白復(fù)合物11.5%，糊精81.0%，明膠1.0%，羧甲基淀粉鈉3.0%，乙醇2.5%,硬脂酸鎂1.0%。6、根據(jù)權(quán)利要求1所描述的一種防治肝損傷疾病的蜈蛇多糖蛋白片劑，它由下述原料按重量百分比制成蜈蚣多糖蛋白復(fù)合物12.0%，糊精78.0%，羥甲基纖維素2.0%，羥丙基淀粉4.0%,乙醇2.0%，聚乙二醇2.0%。7、根據(jù)權(quán)利要求1所描述的一種防治肝損傷疾病的蜈蚣多糖蛋白片劑，它由下述原料按重量百分比制成蜈蚣多糖蛋白復(fù)合物12.5%，淀粉77.0%，阿拉伯膠1.0%，羥丙基淀粉4.5%，乙醇3.0%，硬脂酸鎂2.0%。8、根據(jù)權(quán)利要求1所描述的一種防治肝損傷疾病的蜈蚣多糖蛋白片劑，它由下述原料按重量百分比制成蜈蚣多糖蛋白復(fù)合物13.0%，糊精76.0%，羥甲基纖維素3.0%，碳酸氫鈉3.0%,乙醇3.0%，滑石粉2.0%。9、根據(jù)權(quán)利要求1所描述的一種防治肝損傷疾病的蜈蚣多糖蛋白片劑，它由下述原料按重量百分比制成蜈蚣多糖蛋白復(fù)合物13.5%，糊精75.0%，明膠4.0%，碳酸氫鈉3.5%，乙醇2.0%，硬脂酸鎂2.0%。10、根據(jù)權(quán)利要求1所描述的一種防治肝損傷疾病的蜈蚣多糖蛋白片劑，它由下述原料按重量百分比制成蜈蚣多糖蛋白復(fù)合物14.0%，淀粉73.0%，羥甲基纖維素2.5%，碳酸氫鈉6.0%，乙醇2.5%，滑石粉2.0%。全文摘要本發(fā)明公開(kāi)了一種防治肝損傷疾病的蜈蚣多糖蛋白片劑。該片劑由蜈蚣多糖蛋白復(fù)合物(ScolopendraPolysaccharide-ProteinComplex，簡(jiǎn)稱SPPC)、填充劑、粘合劑、崩解劑、潤(rùn)濕劑、潤(rùn)滑劑按一定比例構(gòu)成，配方合理，使用方便。其制備步驟是①首先向SPPC中分別加入填充劑、粘合劑及崩解劑后加入潤(rùn)濕劑混勻制成軟材；②再將混勻的軟材過(guò)50-200目尼龍篩制粒，70～80℃烘干，過(guò)鐵篩整粒；③最后加入潤(rùn)滑劑壓片制成片劑。所得的藥用組合物具有高效抗肝損傷活性，證實(shí)對(duì)多種實(shí)驗(yàn)性肝損傷具有顯著的改善和恢復(fù)作用；且急性毒性試驗(yàn)表明其毒副作用低；因此，應(yīng)用于防治肝損傷疾病中，具有保肝活性高、無(wú)毒等特點(diǎn)。文檔編號(hào)A61K35/64GK101167756SQ200710053588公開(kāi)日2008年4月30日申請(qǐng)日期2007年10月18日優(yōu)先權(quán)日2007年10月18日發(fā)明者江樂(lè),洋劉,倩周,英敖,朱玲新,穎李,靜楊,剛陳申請(qǐng)人:武漢大學(xué)